JPH05294993A - レトロウイルスプロテアーゼ阻害物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】レトロウイルス性疾患の治療剤として有用なレ
トロウイルスプロテアーゼ阻害物質を提供する。 【構成】式（Ｉ） ［Ｒ¹，Ｒ²は結合手、アミノ酸残基を；Ｙ_NはＨ、アミ
ノ基の保護基を；Ｙ_CはＯＨまたはカルボキシル基の保
護基を；Ｘは−ＣＯ−，−ＣＨ（ＯＨ）−を示す］化合
物、キタサトスポリア属に属する菌を培養し、得られた
化合物を採取し、所望により、さらにエドマン分解、ア
ミノ酸付加、アシル化反応等に付すことからなる式
（Ｉ）の化合物の製法、並びに当該化合物を含有するレ
トロウイルス性疾患治療剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、キタサトスポリア属に
属する菌の生産するレトロウイルスプロテアーゼ阻害活
性を有する新規なペプチド性化合物（ＲＰＩ−８５６、
ＲＰＩ−８５７、ＲＰＩ−８５８もしくはＲＰＩ−８５
９）およびその誘導体もしくはその塩またはそれらの混
合物、それらの製造法ならびに用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】レトロウイルスは、レトロウイルス科に
属するウイルスであって、遺伝子としてＲＮＡを持ち、
自身の有する逆転写酵素（ＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラ
ーゼ）の働きによりＲＮＡを鋳型としてＤＮＡを合成す
る段階を自己複製の第１段階とするウイルスの総称であ
る。レトロウイルス科は３つの亜科（オンコウイルス、
レンチウイルス、スプマウイルス）からなる。レトロウ
イルスは、鳥類や哺乳類の種々の動物を宿主として感
染、増殖し、肉腫、白血病、癌などを引き起こすものの
あることが知られている。ヒトを宿主とするレトロウイ
ルスとしては、成人Ｔ細胞白血病ウイルス(adultＴ−ce
ll leukemia virus, ＡＴＬＶ)、ヒトＴ細胞白血病ウイ
ルスＩ型(human Ｔ−cell leukemia virus typeＩ、Ｈ
ＴＬＶ−Ｉ）およびヒト免疫不全ウイルス（human immu
nodeficiency virus，ＨＩＶ）などが報告されている
が、ＡＴＬＶは、ＨＴＬＶ−Ｉと同一のウイルスである
ことが証明された。ＨＴＬＶにはこの他に、Ｔ細胞系の
ヘアリーセル白血病（hairy cellleukemia ）を誘導す
るII型が存在する。ＨＩＶはＨＩＶ−１およびＨＩＶ−
２に分類され、ＨＩＶ−１は重篤な免疫不全症である後
天性免疫不全症候群（aquired immunodeficiency syndr
ome, ＡＩＤＳ）の原因ウイルスであることが分かって
いる。また、ＨＩＶ−２もＡＩＤＳの原因ウイルスとさ
れているが、ＨＩＶ−１ほどはっきりとは解明されてい
ない。

【０００３】ＡＴＬＶによって引き起こされる成人Ｔ細
胞白血病は、日本の南西地域特に九州地方に多く見られ
る白血病であり、１９７７年にはじめて報告された。成
人Ｔ細胞白血病患者では、Ｔ４陽性Ｔ細胞が癌化して、
皮膚病変、リンパ節腫大、肝脾腫等を招来する。成人Ｔ
細胞白血病に対しては有効な治療法はなく、発病すると
ほとんどが１年以内に死亡する。ＨＩＶ−１によって引
き起こされるＡＩＤＳは、予後不良の免疫不全症として
最近注目を集めている疾病であって、カリニ肺炎やカポ
シ肉腫などの臨床像を特徴とする。ＨＩＶ−１は、Ｔ４
陽性細胞に感染して細胞内に侵入、増殖し、これを破壊
することにより免疫不全を招来する。現在ＡＩＤＳの治
療薬としてアジトチミジン（ＡＺＴ）が使用されてお
り、症状の改善および延命効果が認められている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】上記のように抗レトロ
ウイルス剤としてＡＺＴが使用されているものの、この
物質は副作用として骨髄抑制を起こすなどの欠点を有し
ており、さらに効果が高く副作用の少ない治療薬の出現
が期待されている。

【０００５】

【課題を解決するための手段】レトロウイルスのゲノム
にコードされているプロテアーゼは感染性成熟ウイルス
粒子の形成に際して重要な役割を果たしており、このプ
ロテアーゼ機能を欠損すると感染性粒子の形成の起こら
ないことが知られている〔I. Katoh ら、ウィロロジー
（Virology) 第145巻, 280頁（1985年)〕。したがっ
て、該プロテアーゼの阻害剤はレトロウイルス性疾患の
予防および治療薬に成り得るものと考えられ、最近にな
ってペプスタチンＡ〔フェブス レターズ(FEBS Lett.),
247, 349(1989)〕、ペプチド誘導体〔ネイチャー(Natu
re),343, 90(1990)、ジャーナル・オブ・バイオロジカ
ル・ケミストリー(J. Biol. Chem.)，265, 14675(199
0)、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー
(J.Med. Chem.) 33, 1285(1990)、サイエンス(Scienc
e), 248, 358(1990)、特開平２−209854号〕や非ペプチ
ド性化合物〔サイエンス(Science), 249, 527(1990)〕
等のプロテアーゼ阻害剤が該治療剤として提案されてい
る。本発明者らは広く自然界に該プロテアーゼ阻害物質
を検索し、その結果、土壌中から分離した１菌株が該プ
ロテアーゼ阻害物質を産生すること、該菌株が放線菌の
中のキタサトスポリア属に属すること、該微生物の培養
液から精製取得したペプチド性の新規な化合物たるＲＰ
Ｉ−８５６、ＲＰＩ−８５７、ＲＰＩ−８５８、ＲＰＩ
−８５９が試験管内で該プロテアーゼを強く阻害するこ
とを見出し、さらに鋭意研究を重ね、それらの誘導体も
同様の効果を有することを見出し、本発明を完成するに
至った。

【０００６】すなわち、本発明は （１）式Ｉ

【０００７】

【化３】

【０００８】［式中、Ｒ¹およびＲ²はそれぞれ結合手ま
たはアミノ酸残基を示し、Ｙ_NはＨまたはアミノ基の保
護基を示し、Ｙ_CはＯＨまたはカルボキシル基の保護基
を示し、 で表わされるペプチド性化合物（Ｉ）もしくはその塩ま
たはそれらの混合物； （２）キタサトスポリア属に属し、ペプチド性化合物
（II）（ＲＰＩ−８５６、ＲＰＩ−８５７、ＲＰＩ−８
５８もしくはＲＰＩ−８５９；式〔II〕（配列番号：
２）

【０００９】

【化４】

【００１０】〔式中、ＲはＡｓｐ残基またはＯＨを示
す〕で表わされるペプチド性化合物）もしくはその塩ま
たはそれらの２種以上の混合物を生産する菌を培地に培
養し、培養物中に上記ペプチド性化合物（II）もしくは
その塩またはそれらの２種以上の混合物を生成蓄積せし
め、これを採取し、所望により、さらにエドマン分解、
アミノ酸付加、アシル化、エステル化、アミド化および
／または還元反応に付すことを特徴とする上記（１）記
載の化合物（Ｉ）もしくはその塩またはそれらの混合物
の製造法；（３）上記（１）記載の化合物（Ｉ）もしく
はその塩またはそれらの混合物を含有するレトロウイル
ス性疾患の治療剤を提供するものである。

【００１１】なお後出の分析から、上記式（Ｉ）中、Ｒ
¹がＶａｌ、Ｒ²がＡｓｐ、Ｙ_NがＨ 相当し、両者は式（Ｉ）中の不斉炭素に基く立体異性体
と考えられ、また上記式 ＲＰＩ−８５８およびＲＰＩ−８５９に相当し、両者は
式（Ｉ）中の不斉炭素に基く立体異性体と考えられる。
本発明のレトロウイルスとしては、前述のものも含め
て、遺伝子としてＲＮＡを持つ全てのウイルスをいう。
本発明製剤の対象疾患は、前述のものも含めて、レトロ
ウイルスによって引き起こされる全ての疾患を含む。

【００１２】本発明の方法において用いうる微生物とし
ては、キタサトスポリア属に属し、ＲＰＩ−８５６、Ｒ
ＰＩ−８５７、ＲＰＩ−８５８もしくはＲＰＩ−８５９
またはそれらの塩またはそれらの２種以上を生産する能
力を有するものであればいずれのものでもよい。その例
としては、滋賀県で採取した土壌より分離されたＡＬ−
３２２株が挙げられる。ＡＬ−３２２株について、イン
ターナショナル・ジャーナル・オブ・システマティック
・バクテリオロジー(International Journal of System
atic Bacteriology)、第16巻、313-340頁（1966年）に
記載の方法に準じて検討した菌学的性状は下記のとおり
である。なお、培地上の所見は特に記載のないかぎり、
２８℃において１４日間培養し、観察したものである。 （Ｉ）形態的特徴 気菌糸は、よく伸長分岐した基生菌糸から単純分枝状に
伸長しており、その先端には、長い胞子連鎖（通常１０
〜５０個以上）が認められるが、輸生糸及び運動性の胞
子は、認められない。胞子は円筒形（φ０．６×１．７
〜２．０μｍ）を示し、その表面は平滑である。

【００１３】（II）各種培地上での生育状態 各種培地における生育の程度（Ｇ)、気菌糸(ＡＭ）の生
育および色調、裏面の色調（Ｒ）および可溶性色素（Ｓ
Ｐ）の有無および色調などについて以下に列記する。色
の記載について（ ）で示す標準色調記号は、コンティ
ナー・コーポレーション・オブ・アメリカ（Container
Corporation of America）のザ・カラー・ハーモニー・
マニュアル（The Color Harmony Manual）第４版、１９
５８年によった。 (a）シュークロース・ Ｇ ： 貧弱、象牙色（2ca）
うすい 硝酸塩寒天培地 ＡＭ： なし Ｒ ： 淡象牙色（2ca) ＳＰ： なし (b）グルコース・アスパラギンＧ ： 中程度、淡象牙
色（2ca）拡散性 寒天培地 ＡＭ： 貧弱、白色ないし白灰色
（3ba) Ｒ ： 淡黄灰色ないし淡黄褐色（2ca-2ic) ＳＰ： なし (c）グリセリン・アスパラギン Ｇ ： 中程度、淡
象牙色（2ca）拡散性 寒天培地 ＡＭ： 貧弱、白色ないし白灰色
（3ba) Ｒ ： 淡黄灰色（2ca-2ic) ＳＰ： なし (d）スターチ・無機塩 Ｇ ： 中程度、象牙色（２ｃ
ａ） 寒天培地 ＡＭ： 豊富、白色ないし灰色（２
ｂａ−２ｃｂ） Ｒ ： 淡黄灰色ないし淡黄褐色（2ea-2ic) ＳＰ： なし (e）チロジン寒天培地 Ｇ ： 中程度、淡黄灰色（2g
c) ＡＭ： なし Ｒ ： 淡黄灰色ないし淡黄褐色（2la-2ic) ＳＰ： なし (f）栄養寒天培地 Ｇ ： 貧弱、象牙色（2ca) ＡＭ： なし Ｒ ： 象牙色（2ca) ＳＰ： なし (g）イースト・麦芽 Ｇ ： 中程度、灰黄色（2gc-
2ic）しわ状 寒天培地 ＡＭ： なし Ｒ ： 淡黄灰色（2ea) ＳＰ： なし (h）オートミール Ｇ ： 中程度、象牙色ないし
暗褐色（2ca-4ic） 寒天培地 拡散性 ＡＭ： 貧弱、白色ないし淡灰色（2ba) Ｒ ： 淡象牙色ないし暗褐色（2ca-4ic) ＳＰ： なし (i）ペプトン・イースト・鉄 Ｇ ： 貧弱、淡黄
灰色（2ea）光沢あり 寒天培地 ＡＭ： なし Ｒ ： 淡黄灰色（2ea） ＳＰ： なし （III）生理的性質 （ａ）生育温度範囲 ： ８〜３５℃ 最適生育温度範囲 ： ２５〜２９℃ （ｂ）硝酸の還元 ： 陰性 （ｃ）ゼラチンの液化 ： 陰性 （グルコース・ペプトン・ゼラチン培地） （ｄ）澱粉の加水分解 ： 陽性 （ｅ）脱脂乳の凝固 ： 陰性 脱脂乳のペプトン化 ： 弱い陽性 （ｆ）メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地 ： 陰性 ペプトン・イースト・ 鉄寒天培地 ： 陰性 （IV）炭素源の資化性（プリードハム・ゴットリープ寒
天培地） Ｌ−アラビノース ： ＋＋ Ｄ−キシロース ： ＋ Ｄ−グルコース ： ＋＋ Ｄ−フラクトース ： ＋− シュークロース ： ＋ イノシトール ： − Ｌ−ラムノース ： − ラフィノース ： ＋ Ｄ−マンニット ： − 対 照 ： − （注）＋＋：比較的良好な生育 ＋ ：生育を認める ＋−：＋又は−の判定が困難 − ：生育せず （Ｖ）化学分類学的性質 １．細胞壁成分の分析 グルコース１％ トリプトン１％ 酵母エキス０．６％
ｐＨ７．０からなる培地を用いて、２８℃３日間培養
後「放線菌の同定実験法」日本放線菌学会編（昭和６３
年）記載の方法に準じて、生菌体及び細胞壁画分を調製
した。以下の分析は、上記文献記載の方法に準じて行っ
た。

【００１４】ａ）アミノ酸の分析 細胞壁画分を６Ｎ塩酸を用いて１２０℃ １８時間加水
分解して得られた加水分解物を、二次元薄層クロマトグ
ラフィー（セルローススポットフイルム、展開溶媒：一
次元、イソプロパノール−酢酸−水（75：10：15 v／v)
二次元、メタノール−ピリジン−１０Ｎ塩酸−水(64：
8：2：14 v／v) 及び高速液体クロマトグラフィー（和
光、ＰＴＣアミノ酸分析システム 島津 LC-6AD）を用い
て分析した。さらに、ジアミノピメリン酸の光学異性体
は、二村らの方法に従って、高速液体クロマトグラフィ
ー（島津 LC-6A、カラム：コスモシル，5C-18)で分析し
た。細胞壁アミノ酸組成として、グリシン、アラニン、
グルタミン酸に加えて、ＬＬ−ジアミノピメリン酸及び
ｍｅｓｏ−ジアミノピメリン酸（LL：meso=64：36）が
検出された。同時に、グルコサミン及びムラミン酸など
のアミノ糖の存在を確認した。

【００１５】ｂ）還元糖の分析 細胞壁画分を、２Ｎ塩酸で、１０５℃ ３時間加水分解
し、得られた加水分解物を、高速液体クロマトグラフィ
ー(島津の還元糖分析システム 島津 LC-5A）で分析し
た。その結果、細胞壁画分の糖組成としては、ガラクト
ース及びマンノースの存在が認められ、アラビノース、
キシロース及びマジュロースの存在は、認められなかっ
た。

【００１６】２．全菌体の糖組成 全菌体を用いた糖組成の分析は、乾燥菌体を、２Ｎ塩酸
で、１０５℃３時間加水分解し、得られた加水分解物
を、薄層クロマトグラフィー（セルローススポットフイ
ルム 展開溶媒：ブタノール−水−ピリジン−トルエン
（10：65：6：1，v／v)）で分析した。その結果、全菌
体の糖組成は、ガラクトース及びマンノースの存在が認
められ、アラビノース、キシロース及びマジュロースの
存在は、認められなかった。

【００１７】３．メナキノンの分析 乾燥菌体を、クロロホルム−メタノール混液（2：1）
で、室温１８時間抽出、濃縮し、得られた濃縮物を、高
速液体クロマトグラフィー（島津 LC-6AD カラム：Zorb
ax ODS 4.6x150mm 移動相：メタノール：イソプロピル
エーテル=7：2）で分析した。その結果、メナキノンの
組成は、ＭＫ−９(Ｈ₈）及びＭＫ−９（Ｈ₆）であっ
た。

【００１８】４．ミコール酸の分析 乾燥菌体を、５０℃１６時間メタノリシスし、ヘキサン
で抽出、濃縮し、得られた濃縮物を、薄層クロマトグラ
フィー（シリカゲルプレート 展開溶媒：石油エーテ
ル：ジエチルエーテル＝85：15）で分析した。その結
果、ミコール酸の存在は、認められなかった。

【００１９】（VI）その他の菌学的特徴 液体培養を行うと、長い菌糸と共に短棹菌様の小さい菌
体とが観察された。又、寒天培養上では、基生菌糸の分
断は観察されなかった。液体培養の菌体の化学分析か
ら、細胞壁組成としてＬＬ−ジアミノピメリン酸、ｍｅ
ｓｏ−ジアミノピメリン酸、グリシン、ガラクトースを
有しており、本菌株は、Lechevalierらによる細胞壁タ
イプＩ〜IV型のどのタイプにもあてはまらない。全菌体
の糖組成としては、ガラクトースを有し、アラビノー
ス、キシロースを持たない。本菌株のメナキノン組成
は、MK-9(H₈)，MK-9(H₆）であって、ミコール酸は存在
しなかった。

【００２０】以上の菌学的性状及び菌体成分の分析結果
を、バージーズ・マニュアル・オブ・システマティック
・バクテリオロジー（BERGY'S MANUAL of Systematec B
acteriology）第４版（1989年）に基づき検索すると、
本菌株は、全菌体糖パターンＣ、細胞壁タイプＸで、キ
タサトスポリア属に属することが明かであり、キタサト
スポリア・エスピー ＡＬ−３２２（Kitasatosporia s
p. AL-322）と称することができる。なお、ＡＬ−３２
２株は平成２年９月４日に財団法人発酵研究所（ＩＦ
Ｏ）に寄託番号ＩＦＯ−１５０８８として、また本株は
平成２年１０月１１日に通商産業省工業技術院微生物工
業技術研究所（ＦＲＩ）に寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−３
１２９としてそれぞれ寄託されている。

【００２１】キタサトスポリア属に属するＲＰＩ−８５
６、ＲＰＩ−８５７、ＲＰＩ−８５８もしくはＲＰＩ−
８５９、またはそれらの塩またはそれら２種以上の生産
菌は、他の放線菌の場合と同様に、その性状が変化しや
すく、たとえば紫外線、エックス線、放射線等の照射、
単胞子分離、種々の変異処理、その他の手段で変異させ
て得られる多くの変異株あるいは自然に得られる突然変
異株であっても、上記した分類学的性状との比較におい
て実質的に別種とするに足らず、しかも当該物質を生産
する性質を有するものはすべて本発明方法に利用し得
る。

【００２２】当該物質生産菌の培養に用いられる培地は
該菌が利用し得る栄養源を含むものなら、液状でも固状
でも良いが、大量に処理するときには液体培地を用いる
のがより適当である。培地には、当該物質生産菌が同化
し得る炭素源、同化し得る窒素源、無機物質、微量栄養
素が適宜配合される。炭素源としては、たとえばブドウ
糖、乳糖、ショ糖、麦芽等、デキストリン、澱粉、グリ
セリン、マンニトール、ソルビトール、油脂類（例、大
豆油、ラード油、チキン油など)、ｎ−パラフィンその
他が、窒素源としては、たとえば肉エキス、酵母エキ
ス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・スティープ・リカー、
ペプトン、棉実粉、廃糖蜜、尿素、アンモニウム、塩類
（例、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アン
モニウム、酢酸アンモニウムなど）その他が用いられ
る。さらにナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネ
シウムなどを含む塩類、鉄、マンガン、亜鉛、コバル
ト、ニッケルなどの金属塩類、リン酸、ホウ酸などの無
機酸の塩類や酢酸、プロピオン酸などの有機酸の塩類が
適宜用いられる。その他、アミノ酸（例、グルタミン
酸、アスパラギン酸、アラニン、リジン、メチオニン、
プロリンなど)、ペプチド（例、ジペプチド、トリペプ
チドなど)、ビタミン類（例、Ｂ₁、Ｂ₂、ニコチン酸、
Ｂ₁₂、Ｃなど)、核酸類（例、プリン、ピリミジン、そ
の誘導体など）等を含有させてもよい。もちろん培地の
ｐＨを調節する目的で無機または有機の酸、アルカリ
類、緩衝剤等を加え、あるいは消泡の目的で油脂類、界
面活性剤等の適量を添加してさしつかえない。液体培養
に際しては、培地のｐＨは中性付近、特にｐＨ約６〜８
が好ましい。培養温度は約１８℃〜３７℃、培養時間は
約４８時間〜１７０時間が好ましい。

【００２３】本発明の生産菌を培養して得られる培養物
中には、ＲＰＩ−８５６、ＲＰＩ−８５７、ＲＰＩ−８
５８、ＲＰＩ−８５９またはそれらの２種以上が生成蓄
積される。液体培地を用いて培養した場合、主としてそ
の液状部分に該化合物が生成蓄積されるので、培養液を
一旦濾過あるいは遠心して菌体を除去したあとの濾液あ
るいは上清液からこれらを分離するのがよいが、菌体を
除去することなく培養液から直接該化合物を分離するよ
うにしてもよい。培養物からの該化合物の分離・精製は
ＲＰＩ−８５６、ＲＰＩ−８５７、ＲＰＩ−８５８およ
びＲＰＩ−８５９の物理化学的特性にもとづいて種々の
方法を組み合わせることにより容易に行ない得る。すな
わち、吸着性樹脂たとえばアンバーライトＸＡＤ−II
（ローム・アンド・ハース社製、米国)、ダイアイオン
ＨＰ−２０（三菱化成社製、日本）またはアンバーライ
トＳＰ−２０７（三菱化成社製、日本）などを用いたク
ロマトグラフィー法に付す方法が有利に用いられる。な
お吸着性樹脂を用いたカラムから目的の活性物質を溶出
するには水または含水溶媒たとえば含水メタノール、含
水ブタノールなどが有利に用いられる。かくして得られ
た溶出液を減圧下濃縮すると、ＲＰＩ−８５６、ＲＰＩ
−８５７、ＲＰＩ−８５８またはＲＰＩ−８５９を含有
する粗物質が得られる。

【００２４】粗物質をさらに精製し、純粋なＲＰＩ−８
５６、ＲＰＩ−８５７、ＲＰＩ−８５８またはＲＰＩ−
８５９を得るには種々のクロマトグラフィー法が有利に
用いられる。担体としてはシリカゲル、セファデックス
ＬＨ−２０（ファルマシア社製、スウェーデン）などが
用いられ、これらは、通常カラムクロマトグラフィー法
で行われる。カラムから活性物質を溶出するには適当な
有機溶媒たとえばブタノール、メタノールなどの単独あ
るいは混合溶媒が用いられる。さらに、ＯＤＳカラム
（東ソー社、日本）を用いた逆相高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）や、ＳＰ−５ＰＷ（東ソー社）やＳ
Ｐ−２ＳＷ（東ソー社）を用いたイオン交換クロマトグ
ラフィーなどが有効に用いられる。これらの手段を適当
に組み合わせて使用することにより、ＲＰＩ−８５６、
ＲＰＩ−８５７、ＲＰＩ−８５８、ＲＰＩ−８５９また
はそれらの２種以上の混合物を培養物中から得ることが
できる。

【００２５】上記で得られるペプチドＲＰＩ−８５６，
ＲＰＩ−８５７，ＲＰＩ−８５８およびＲＰＩ−８５９
はエドマン分解、アミノ酸付加反応、アシル化反応、エ
ステル化反応、アミド化反応および還元反応などの１種
または２種以上の反応に付し、各種誘導体に導くことが
できる。

【００２６】例えば、フェニルイソチオシアナートを上
記ペプチドのＮ末端アミノ酸（Ｖａｌ）のα−アミノ基
と反応させた後、生成したフェニルチオカルバミルペプ
チドの末端ペプチド結合を強酸性下で切断するエドマン
分解により、Ｎ末端アミノ酸（Ｖａｌ）を除去すること
ができ、さらに所望によりＮ末端またはＣ末端に１個の
アミノ酸を付加してもよい。また、Ｎ末端アミノ基は、
例えば無水低級脂肪酸（例、酢酸、プロピオン酸、酪
酸、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、ピバル酸などの炭
素数２〜５程度の低級脂肪酸の酸無水物など）、ハロゲ
ン化高級脂肪酸（例、パルミチン酸、ステアリン酸、オ
レイン酸、リノール酸、リノレン酸などの高級脂肪酸の
ハロゲン化物など）および塩化ベンジルオキシカルボニ
ル（Ｚ−Ｃｌ）などを塩基性触媒の存在下、有機溶媒ま
たはこれらの含水溶媒中、反応させるアシル化反応によ
り、保護することができる。また、Ｃ末端カルボキシル
基は、例えば上記ペプチドを無水メタノールおよびエー
テルなどに溶解し、トリメチルシリルジアゾメタンのヘ
キサン溶液、ジアゾメタンのエーテル溶液またはジアゾ
メタンを直接添加するメチル化反応などのエステル化反
応により、あるいは酸性条件下で種々のアミノ化合物存
在下、水溶性カルボジイミドを添加するアミド化反応な
どにより、保護することができる。さらに、上記式
（Ｉ）中Ｘが−ＣＯ−である化合物の還元反応は、エタ
ノール、アセトニトリルまたはこれらの含水溶媒中、シ
アノ水素化ほう素ナトリウムまたは水素化ほう素ナトリ
ウムなどを添加することにより行うことができる。この
ようにして得られる各種誘導体は通常の分離・精製手段
（抽出・クロマトグラフィー・再結晶など）により分離
することができる。

【００２７】上記式（Ｉ）中、Ｒ¹またはＲ²で示される
アミノ酸残基としては、例えばタンパク質を構成する主
要Ｌ−アミノ酸などが挙げられるが、なかでも、Ｒ¹と
しては中性アミノ酸（とりわけＶａｌ）、Ｒ²としては
結合手または酸性アミノ酸（とりわけ結合手またはＡｓ
ｐ）が好ましい。

【００２８】Ｙ_Nで示されるＮ末端アミノ基の保護基と
しては、例えばアシル基（例、炭素数２〜２０程度の脂
肪酸由来のアシル基、ベンジルオキシカルボニルなど）
が挙げられるが、なかでも炭素数２〜５程度の低級アル
カノイル（例、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イ
ソブチリル、バレリル、イソバレリル、ピバロイルな
ど）またはベンジルオキシカルボニルが好ましい。

【００２９】Ｙ_Cで示されるＣ末端カルボキシル基の保
護基としては、例えば置換されていてもよいアルコキシ
またはアミノ基など、すなわち、保護されたカルボキシ
ル基としては、エステル化またはアミド化されたカルボ
キシル基などが挙げられる。また、置換されていてもよ
いアルコキシ基としては、例えば１〜２個のフェニル基
で置換されていてもよい炭素数１〜４程度の低級アルコ
キシ基（例、ベンジルオキシ、ジフェニルメチルオキ
シ、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキ
シ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅ
ｒｔ−ブトキシなど）などが挙げられ、一方置換されて
いてもよいアミノ基としては、例えばアミノ、Ｎ−低級
（Ｃ_1-4）アルキルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジ低級（Ｃ_1-4）ア
ルキルアミノなどの１〜２個の低級（Ｃ_1-4）アルキル
で置換されていてもよいアミノ基などが挙げられるが、
なかでも置換されていてもよいアルコキシ基が好まし
く、さらに低級（Ｃ_1-4）アルコキシ（とりわけ、メト
キシ）が好ましい。

【００３０】 ましい。

【００３１】後述の実施例３および４で得られたＲＰＩ
−８５６、ＲＰＩ−８５７、ＲＰＩ−８５８およびＲＰ
Ｉ−８５９の理化学的性質およびレトロウイルスプロテ
アーゼ阻害作用については次のとおりである。本発明の
ペプチド性化合物ＲＰＩ−８５６、ＲＰＩ−８５７、Ｒ
ＰＩ−８５８もしくはＲＰＩ−８５９の塩としては、酢
酸、クエン酸、酒石酸などの有機酸もしくは塩酸、硫酸
などの無機酸との塩、あるいはナトリウム塩、カリウム
塩などのアルカリ塩のようなものが挙げられる。

【００３２】なお、本発明明細書において、塩基やアミ
ノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ C
ommision on Biochemical Nomenclature による略号あ
るいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、
その例を次に挙げる。 ＤＮＡ ：デオキシリボ核酸 ｃＤＮＡ：相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン Ｇｌｙ ：グリシン（Ｇ） Ａｌａ ：アラニン（Ａ） Ｖａｌ ：バリン（Ｖ） Ｌｅｕ ：ロイシン（Ｌ） Ｉｌｅ ：イソロイシン（Ｉ） Ｓｅｒ ：セリン（Ｓ） Ｔｈｒ ：スレオニン（Ｔ） Ｃｙｓ ：システイン（Ｃ） Ｍｅｔ ：メチオニン（Ｍ） Ｇｌｕ ：グルタミン酸（Ｅ） Ａｓｐ ：アスパラギン酸（Ｄ） Ｌｙｓ ：リジン（Ｋ） Ａｒｇ ：アルギニン（Ｒ） Ｈｉｓ ：ヒスチジン（Ｈ） Ｐｈｅ ：フェニールアラニン（Ｆ） Ｔｙｒ ：チロシン（Ｙ） Ｔｒｐ ：トリプトファン（Ｗ） Ｐｒｏ ：プロリン（Ｐ） Ａｓｎ ：アスパラギン（Ｎ） Ｇｌｎ ：グルタミン（Ｑ）。

【００３３】〔１〕理化学的性質 １．ＲＰＩ−８５６ （１）性 状 白色粉末 （２）元素分析値（％） Ｃ ４６．９５±３．０ Ｈ ６．２６±０．５ Ｎ ８．３９±０．５ （３）紫外線吸収（ＵＶ）スペクトル：蒸留水中、図１
に示す如く、本物質は２７８nm付近に吸収極大を持ち、
２５３nm付近に吸収極小を持つ吸収スペクトルを示す。 （４）赤外線吸収（ＩＲ）スペクトル：ＫＢｒ中 図２に示す如く、主な吸収帯（νmax／cm)を示す。３４
２０、２９８０、１６４５、１５２０、１３９０、１２
１０〜１１４０、８４０、８０５、７３０ （５）アミノ酸組成 ７残基のアミノ酸から構成され、１残基のアスパラギン
酸、３残基のバリンおよび１残基のロイシンが検出され
る。 （６）アミノ末端アミノ酸 バリン （７）カルボキシ末端アミノ酸 アスパラギン酸 （８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）： 担体；シリカゲル６０Ｆ₂₅₄（メルク社製、西独）展開
溶媒；ｎ−ブタノール：酢酸：水：酢酸ブチル（４：
１：１：４） Ｒｆ＝０．３１ （９）呈色反応 陽性：ヨウ素、ペプチド反応（ハイポクロライド試
薬)、ニンヒドリン反応 （10）マススペクトル測定値：ｍ／ｚ 884（Ｍ＋Ｈ)+
（ＳＩ−ＭＳ法） （11）¹Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：３００Ｍ
Ｈｚ（２４℃，ＤＭＳＯ−ｄ₆中で測定，δｐｐｍ，Ｊ
（Ｈｚ）） 9.25（２Ｈ，ｂｒ ｓ），8.77（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝7.
6），8.31（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝8.5），8.28（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝6.5），8.26（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝7.0），8.18（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝9.0），8.09（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝8.7），8.04（２
Ｈ，ｂｒ），7.10−7.25（５Ｈ，ｍ），6.31（２Ｈ，
ｄ，Ｊ＝2.1），6.17（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝2.1），5.36（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝7.6），5.22（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝5.5，6.
5，8.4），4.52（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝5.8，7.0），4.46
（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝8.5，7.1），4.24（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝6.7，9.0），4.21（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝6.6，8.7），3.
74（１Ｈ，ｂｒ），3.02（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝5.5，14.
1），2.84（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝8.4，14.1），2.68（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝5.8，16.7），2.56（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
7.0，16.7），2.00（３Ｈ，ｍ），1.61（１Ｈ，ｍ），
1.42（２Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝7.1），0.94（３Ｈ，ｄ，
Ｊ＝6.8），0.93（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.8），0.87（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝6.6），0.86（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.0），0.84（６
Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.5），0.80（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.8），0.75
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.7），（ただし、ｓ：ｓｉｎｇｌｅ
ｔ，ｄ：ｄｏｕｂｌｅｔ，ｔ：ｔｒｉｐｌｅｔ，ｍ：ｍ
ｕｌｔｉｐｌｅｔを表わす）。

【００３４】（12）¹³Ｃ ＮＭＲスペクトル：７５ＭＨ
ｚ（２４℃，ＤＭＳＯ−ｄ₆中で測定，δｐｐｍ） 195.8（Ｑ），172.2（Ｑ），171.7（Ｑ），171.5
（Ｑ），170.3（Ｑ），169.7（Ｑ），168.9（Ｑ），16
7.1（Ｑ），159.7（Ｑ），158.2（Ｑ×２），139.1
（Ｑ），136.6（Ｑ），128.8（ＣＨ×２），128.2（Ｃ
Ｈ×２），126.5（ＣＨ），105.8（ＣＨ×２），101.9
（ＣＨ），57.6（ＣＨ），57.4（ＣＨ），56.8（Ｃ
Ｈ），56.1（ＣＨ），54.7（ＣＨ），50.3（ＣＨ），4
8.5（ＣＨ），41.4（ＣＨ₂），36.2（ＣＨ₂），35.2
（ＣＨ₂），30.8（ＣＨ），30.5（ＣＨ），30.0（Ｃ
Ｈ），23.9（ＣＨ），23.0（ＣＨ₃），21.5（ＣＨ₃），
19.1（ＣＨ₃），19.0（ＣＨ₃），17.9（ＣＨ₃×３），1
7.6（ＣＨ₃），（ただし、Ｑ：４級炭素，ＣＨ：メチン
炭素，ＣＨ₂：メチレン炭素，ＣＨ₃：メチル炭素を表わ
す） ２．ＲＰＩ−８５７ （１）性 状 白色粉末 （２）元素分析値（％） Ｃ ５０．３７±３．０ Ｈ ６．８２±０．５ Ｎ ９．１５±０．５ （３）紫外線吸収（ＵＶ）スペクトル：蒸留水中 図３に示す如く、本物質は２７８nm付近に吸収極大を持
ち、２５３nm付近に吸収極小を持つ吸収スペクトルを示
す。 （４）赤外線吸収（ＩＲ）スペクトル：ＫＢｒ中 図４に示す如く、主な吸収帯（νmax／cm)を示す。３４
２０、２９７０、１６５０、１５２０、１２００〜１１
４０、８４０、８００、７２０、７００ （５）アミノ酸組成 ７残基のアミノ酸から構成され、１残基のアスパラギン
酸、３残基のバリンおよび１残基のロイシンが検出され
る。 （６）アミノ末端アミノ酸 バリン （７）カルボキシ末端アミノ酸 アスパラギン酸 （８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）： 担体；シリカゲル６０Ｆ₂₅₄（メルク社製、西独）展開
溶媒；ｎ−ブタノール： 酢酸：水：酢酸ブチル（４：
１：１：４） Ｒｆ＝０．３１ （９）呈色反応 陽性：ヨウ素、ペプチド反応（ハイポクロライド試
薬)、ニンヒドリン反応 （10）マススペクトル測定値：ｍ／ｚ 884（Ｍ＋Ｈ)+
（ＳＩ−ＭＳ法） （11）¹Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：３００Ｍ
Ｈｚ（５０℃，微量のＴＦＡを含むＤＭＳＯ−ｄ₆中で
測定，δｐｐｍ，Ｊ（Ｈｚ）） 8.68（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝7.7），8.16（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝8.
9），8.10（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝8.0），8.07（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝9.0），8.06（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝7.8），8.00（２Ｈ，ｂ
ｒ），7.91（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝8.9），7.09−7.25（５
Ｈ，ｍ），6.34（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝2.1），6.19（１Ｈ，
ｔ，Ｊ＝2.1），5.36（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝7.7），5.17（１
Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝3.9，8.0，10.0），4.54（１Ｈ，ｄｄ
ｄ，Ｊ＝5.9，6.7，7.8），4.38（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝5.
3，9.0），4.25（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝6.9，8.9），4.22
（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝6.1，8.9），3.76（１Ｈ，ｂｒ），
3.08（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝3.9，13.8），2.67（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝5.9，16.6），2.66（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝10.0，1
3.8），2.57（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝6.7，16.6），2.08（１
Ｈ，ｍ），2.06（１Ｈ，ｍ），2.02（１Ｈ，ｍ），1.44
（１Ｈ，ｍ），1.26（２Ｈ，ｍ），0.95（３Ｈ，ｄ，Ｊ
＝6.8），0.95（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.8），0.87（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝6.5），0.87（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.5），0.85（３
Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.5），0.83（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.7），0.77
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.5），0.76（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.4），
（ただし、ｓ：ｓｉｎｇｌｅｔ，ｄ：ｄｏｕｂｌｅｔ，
ｔ：ｔｒｉｐｌｅｔ，ｍ：ｍｕｌｔｉｐｌｅｔを表わ
す） （12）¹³Ｃ ＮＭＲスペクトル：７５ＭＨｚ（５０℃，
微量のＴＦＡを含むＤＭＳＯ−ｄ₆中で測定，δｐｐ
ｍ） 195.6（Ｑ），171.9（Ｑ），171.5（Ｑ），171.3
（Ｑ），170.4（Ｑ），169.8（Ｑ），168.9（Ｑ），16
7.2（Ｑ），160.4（Ｑ），158.3（Ｑ×２），139.1
（Ｑ），137.2（Ｑ），129.0（ＣＨ×２），128.1（Ｃ
Ｈ×２），126.3（ＣＨ），106.1（ＣＨ×２），102.3
（ＣＨ），58.2（ＣＨ），57.6（ＣＨ），57.1（Ｃ
Ｈ），56.5（ＣＨ），55.3（ＣＨ），51.0（ＣＨ），4
8.6（ＣＨ），41.7（ＣＨ₂），36.0（ＣＨ₂），35.5
（ＣＨ₂），30.6（ＣＨ×２），30.0（ＣＨ），23.9
（ＣＨ），22.8（ＣＨ₃），21.6（ＣＨ₃），19.1（ＣＨ
₃），19.0（ＣＨ₃），18.2（ＣＨ₃），18.0（ＣＨ₃），
17.9（ＣＨ₃），17.5（ＣＨ₃），（ただし、Ｑ：４級炭
素，ＣＨ：メチン炭素，ＣＨ₂：メチレン炭素，ＣＨ₃：
メチル炭素を表わす） 以上述べた物理化学的性状およびＮＭＲスペクトルの種
々の解析（¹Ｈ−¹ＨＣＯＳＹ法、¹Ｈ−¹³Ｃ ＣＯＳＹ
法、ＣＯＬＯＣ法およびＮＯＥＳＹ法）によって、ＲＰ
Ｉ−８５６およびＲＰＩ−８５７の化学構造は下記式と
推定される。なおＲＰＩ−８５６とＲＰＩ−８５７は＊
印の不斉炭素に関する立体異性体と推定される。

【００３５】

【化５】（配列番号：２，存在位置７のＸａａ＝Ａｓ
ｐ）

【００３６】３．ＲＰＩ−８５８ （１）性状 白色粉末 （２）元素分析値（％） Ｃ ５１．０８±３．０ Ｈ ６．０９±０．５ Ｎ ８．０５±０．５ （３）紫外線吸収（ＵＶ）スペクトル：蒸留水中 図５に示す如く、本物質は２７８nm付近に吸収極大を持
ち、２５３nm付近に吸収極小を持つ吸収スペクトルを示
す。 （４）赤外線吸収（ＩＲ）スペクトル：ＫＢｒ中 図６に示す如く、主な吸収帯（νmax／cm)を示す。３４
２０、２９７０、１６７０、１５１５、１２０５〜１１
４５、１００５、８３５、８００、７２０、７００ （５）アミノ酸組成 ６残基のアミノ酸から構成され、３残基のバリンおよび
１残基のロイシンが検出される。

【００３７】（６）アミノ末端アミノ酸 バリン （７）カルボキシ末端アミノ酸 バリン （８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）： 担体；シリカゲル６０Ｆ₂₅₄（メルク社製、西独）展開
溶媒；ｎ−ブタノール：酢酸：水：酢酸ブチル（４：
１：１：４） Ｒｆ＝０．５５ （９）呈色反応 陽性：ヨウ素、ペプチド反応（ハイポクロライド試
薬)、ニンヒドリン反応 （10）マススペクトル測定値：ｍ／ｚ 769（Ｍ＋Ｈ)+
（Ｓ１−ＭＳ法） （11）¹Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：３００Ｍ
Ｈｚ（２４℃，ＤＭＳＯ−ｄ₆中で測定，δｐｐｍ，Ｊ
（Ｈｚ）） 9.27（２Ｈ，ｂｒ ｓ），8.77（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝7.
5），8.31（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝8.5），8.30（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝6.3），8.21（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝8.0），8.12（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝8.8），7.10−7.25（５Ｈ，ｍ），6.31（２
Ｈ，ｄ，Ｊ＝2.0），6.17（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝2.0），5.35
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝7.5），5.23（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝5.
5，6.3，8.4），4.45（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝8.5，7.3），
4.28（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝6.9，8.8），4.11（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝5.8，8.0），3.73（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝5.4），3.0
1（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝5.5，14.0），2.84（１Ｈ，ｄｄ，
Ｊ＝8.4，14.0），2.04（３Ｈ，ｍ），1.61（１Ｈ，
ｍ），1.41（２Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝7.3），0.94（３
Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.8），0.93（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.5），0.90
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝7.0），0.88（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.5），
0.87（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝7.0），0.83（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.
6），0.78（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.7），（ただし、ｓ：ｓｉ
ｎｇｌｅｔ，ｄ：ｄｏｕｂｌｅｔ，ｔ：ｔｒｉｐｌｅ
ｔ，ｍ：ｍｕｌｔｉｐｌｅｔを表わす） （12）¹³Ｃ ＮＭＲスペクトル：７５ＭＨｚ（２４℃，
ＤＭＳＯ−ｄ₆中で測定，δｐｐｍ） 195.8（Ｑ），172.5（Ｑ），171.7（Ｑ），170.1
（Ｑ），168.9（Ｑ），167.1（Ｑ），159.7（Ｑ），15
8.2（Ｑ×２），139.1（Ｑ），136.5（Ｑ），128.8（Ｃ
Ｈ×２），128.2（ＣＨ×２），126.5（ＣＨ），105.8
（ＣＨ×２），101.9（ＣＨ），57.3（ＣＨ），57.3
（ＣＨ），56.8（ＣＨ），56.1（ＣＨ），54.6（Ｃ
Ｈ），50.3（ＣＨ），41.3（ＣＨ₂），35.2（ＣＨ₂），
30.9（ＣＨ），30.0（ＣＨ），29.6（ＣＨ），23.8（Ｃ
Ｈ），23.0（ＣＨ₃），21.5（ＣＨ₃），19.0（Ｃ
Ｈ₃），18.9（ＣＨ₃），18.0（ＣＨ₃），17.9（Ｃ
Ｈ₃），17.9（ＣＨ₃），17.6（ＣＨ₃），（ただし、
Ｑ：４級炭素，ＣＨ：メチン炭素，ＣＨ₂：メチレン炭
素，ＣＨ₃：メチル炭素を表わす）。

【００３８】４．ＲＰＩ−８５９ （１）性 状 白色粉末 （２）元素分析値（％） Ｃ ５２．３０±３．０ Ｈ ６．３３±０．５ Ｎ ８．４５±０．５ （３）紫外線吸収（ＵＶ）スペクトル：蒸留水中図７に
示す如く、本物質は２７８nm付近に吸収極大を持ち、２
５３nm付近に吸収極小を持つ吸収スペクトルを示す。 （４）赤外線吸収（ＩＲ）スペクトル：ＫＢｒ中 図８に示す如く、主な吸収帯（νmax／cm)を示す。３４
２０、３０８０、２９８０、１６７０、１５２０、１３
４５、１２０５〜１１４５、１０１０、８４０、８０
５、７３０、７００ （５）アミノ酸組成 ６残基のアミノ酸から構成され、３残基のバリンおよび
１残基のロイシンが検出される。 （６）アミノ末端アミノ酸 バリン （７）カルボキシ末端アミノ酸 バリン （８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）： 担体；シリカゲル６０Ｆ₂₅₄（メルク社製、西独）展開
溶媒；ｎ−ブタノール：酢酸：水：酢酸ブチル（４：
１：１：４） Ｒｆ＝０．５１ （９）呈色反応 陽性：ヨウ素、ペプチド反応（ハイポクロライド試
薬)、ニンヒドリン反応 （10）マススペクトル測定値：ｍ／ｚ 769（Ｍ＋Ｈ)+
（Ｓ１−ＭＳ法） （11）¹Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：３００Ｍ
Ｈｚ（２４℃，ＤＭＳＯ−ｄ₆中で測定，δｐｐｍ，Ｊ
（Ｈｚ）） 9.26（２Ｈ，ｂｒ ｓ），8.76（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝7.
2），8.37（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝8.0），8.27（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝8.8），8.26（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝8.5），8.15（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝8.3），7.09−7.25（５Ｈ，ｍ），6.31（２
Ｈ，ｄ，Ｊ＝2.1），6.16（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝2.1），5.35
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝7.2），5.14（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝3.
5，8.0，10.4），4.39（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝5.1，8.5，
9.5），4.26（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝7.5，8.8），4.14（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝5.7，8.3），3.69（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝5.
4），3.08（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝3.5，13.5），2.60（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝10.4，13.5），2.05（３Ｈ，ｍ），1.39
（１Ｈ，ｍ），1.23（１Ｈ，ｍ），1.14（１Ｈ，ｍ），
0.92（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.5），0.90（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.
5），0.89（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.5），0.84（３Ｈ，ｄ，Ｊ
＝6.7），0.75（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.5），0.74（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝6.4），（ただし、ｓ：ｓｉｎｇｌｅｔ，ｄ：
ｄｏｕｂｌｅｔ，ｔ：ｔｒｉｐｌｅｔ，ｍ：ｍｕｌｔｉ
ｐｌｅｔを表わす） （12）¹³Ｃ ＮＭＲスペクトル：７５ＭＨｚ（２４℃，
ＤＭＳＯ−ｄ₆中で測定，δｐｐｍ） 195.6（Ｑ），172.6（Ｑ），171.5（Ｑ），170.1
（Ｑ），168.8（Ｑ），167.3（Ｑ），160.1（Ｑ），15
8.1（Ｑ×２），139.1（Ｑ），137.2（Ｑ），129.0（Ｃ
Ｈ×２），128.1（ＣＨ×２），126.3（ＣＨ），105.8
（ＣＨ×２），101.9（ＣＨ），58.0（ＣＨ），57.2
（ＣＨ），56.8（ＣＨ），56.2（ＣＨ），55.4（Ｃ
Ｈ），50.6（ＣＨ），41.6（ＣＨ₂），35.3（ＣＨ₂），
30.6（ＣＨ），30.0（ＣＨ），29.7（ＣＨ），23.8（Ｃ
Ｈ），22.9（ＣＨ₃），21.5（ＣＨ₃），19.0（Ｃ
Ｈ₃），１９．０（ＣＨ₃），18.2（ＣＨ₃），18.0（Ｃ
Ｈ₃），17.9（ＣＨ₃），17.5（ＣＨ₃），（ただし、
Ｑ：４級炭素，ＣＨ：メチン炭素，ＣＨ₂：メチレン炭
素，ＣＨ₃：メチル炭素を表わす） 以上述べた物理化学的性状およびＮＭＲスペクトルの種
々の解析（¹Ｈ−¹ＨＣＯＳＹ法、¹Ｈ−¹³Ｃ ＣＯＳＹ
法、ＣＯＬＯＣ法およびＮＯＥＳＹ法）によって、ＲＰ
Ｉ−８５８およびＲＰＩ−８５９の化学構造は下記式と
推定される。なおＲＰＩ−８５８とＲＰＩ−８５９は＊
印の不斉炭素に関する立体異性体と推定される。

【００３９】

【化６】（配列番号：２，存在位置７のＸａａ＝ＯＨ）

【００４０】以上、ＲＰＩ−８５６、ＲＰＩ−８５７、
ＲＰＩ−８５８およびＲＰＩ−８５９の理化学的性質を
述べたが、次にそれらのレトロウイルスプロテアーゼに
対する抑制作用について詳述する。

【００４１】〔２〕レトロウイルスプロテアーゼ阻害作
用 以下参考例および試験例においてＨＴＬＶ−ＩおよびＨ
ＩＶ−１プロテアーゼの調製法およびそれらに対するＲ
ＰＩ−８５６、ＲＰＩ−８５７、ＲＰＩ−８５８および
ＲＰＩ−８５９の阻害作用についてそれぞれ述べる。

【００４２】参考例１ 組換え型ＨＴＬＶ−Ｉプロテア
ーゼの調製 ＨＴＬＶ−Ｉのプロテアーゼは、特願平２−１６１４４
７号明細書に記載の組換え型ＨＴＬＶ−Ｉプロテアーゼ
を使用した。すなわちフレームを合わせたｇａｇ−ｐｒ
ｔ遺伝子をλＰＬプロモーターの下流に挿入したプラス
ミドｐＨＴＩ７０３を有するエシェリキア・コリ（Esch
erichia coli）形質転換体（Ｎ４８３０−１／ｐＨＴＩ
７０３）〔IFO 14883，FERM BP-2476〕を培養し、その
菌体抽出液からＤＥＡＥ−トヨパール（東ソー社）カラ
ムクロマトグラフィー、Ｓ−セファロースファーストフ
ローカラム（ファルマシア社）クロマトグラフィー、さ
らにセファクリルＳ１００ＨＲカラム（ファルマシア
社）クロマトグラフィーによりＨＴＬＶ−Ｉプロテアー
ゼの部分精製標品を得た。

【００４３】参考例２ ＨＩＶ−１プロテアーゼ遺伝子
の発現プラスミドの構築 ＨＩＶ−１プロテアーゼはｐｏｌ遺伝子にコードされた
蛋白質の１つであり、感染細胞内においてはｇａｇ−ｐ
ｏｌのポリプロテインとして合成されたものが、プロテ
アーゼ自身の作用によりプロセシングされることにより
生成されると考えられている〔J. M. Mc Cune ら、セル
(Cell) 第53巻, 55頁 (1988年)〕。一方、プロテアー
ゼ領域を含むｐｏｌ遺伝子の一部を大腸菌で発現させる
ことにより、分子量１１キロダルトンの活性型ＨＩＶ−
１プロテアーゼが自身のオートプロセシング作用により
生成されることが既に知られている〔M. C. Graves
ら、プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンス（Proc. Natl. Acad. Sci. U
SA) 第85巻, 2449頁 (1988年)〕。

【００４４】そこで、まずＨＩＶ−１の全遺伝子を含有
するプラスミドｐＮＬ４−３〔A.Adachi ら、ジャーナ
ル オブ ウイロロジー(J.Virol.) 第59巻, 284頁(1986
年)〕からプロテアーゼ領域を含有する１.５kbのＢｇｌ
II−ＢａｌＩ断片を取得した。次に、この断片にリンカ
ー ５’−ＡＡＴＴＣＴＡＴＧＣＣＡ−３’ （配列番号：３） ３’−ＧＡＴＡＣＧＧＴＣＴＡＧ−５’（配列番号：４） を接続した後、ＥｃｏＲＩで消化し、さらにリンカー
〔５’−ＣＴＡＧＣＴＡＧＣＴＡＧＡＡＴＴＣＴＡＧＣ
ＴＡＧＣＴＡＧ−３’〕（配列番号：５）を接続した
後、ＥｃｏＲＩで消化した。次に、この断片の切断点を
クレノーフラグメントで埋めて平滑末端にした。一方、
Ｔ７プロモーターを含む大腸菌用発現ベクターｐＥＴ−
３ｃ〔A. H. Rosenberg ら、ジーン（Gene) 第56巻, 12
5頁 (1987年)〕をＮｄｅＩで消化し、その切断点をＴ４
ＤＮＡポリメラーゼで埋めて平滑末端にした。次に、こ
れら両ＤＮＡ断片をＴ４ＤＮＡリガーゼを用いて接続
し、Ｔ７プロモーターとプロテアーゼ遺伝子の向きが同
方向となったものをｐＨＩＶ７００４とした。

【００４５】参考例３ 組換え型ＨＩＶ−１プロテアー
ゼの調製 Escherichia coli ＭＭ２９４ 株にＴ７ファージのＲＮ
Ａポリメラーゼ遺伝子を組み込んだλファージＤＥ３
〔F. W. Studier ら、ジャーナル・オブ・モレキュラー
・バイオロジー(J. Mol. Biol.)第189巻, 113頁 (1986
年)〕を溶原化させてEscherichia coli ＭＭ２９４ (Ｄ
Ｅ３)を作製した。参考例２で得られたｐＨＩＶ７００
４を、Escherichia coli ＭＭ２９４（ＤＥ３）に導入
して、形質転換体Escherichia coli ＭＭ２９４(ＤＥ
３)／ｐＨＩＶ７００４を得た。本形質転換体をアンピ
シリン５０μｇ／mｌを含むＬＢ培地に接種し、３７℃
で一晩振盪培養した。この培養液０．２mｌを２０mｌの
同じ培地に接種し、３７℃で対数増殖期（180-200 Klet
t unit）まで培養した。次に、最終濃度が０．４mMにな
るようにイソプロピル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトシ
ド(ＩＰＴＧ)を加え、さらに３７℃で２時間培養した。
培養液２００mｌから、菌体を５０００rpmで５分間遠心
することにより集め、これを表１に記載した組成を持つ
緩衝液Ａ２０mｌに懸濁した。懸濁液にニワトリ卵白リ
ゾチーム ２mgを加え、氷冷下で１０分間放置後、ノニ
デットＰ４０（ＮＰ４０）を終濃度１％になるように加
え、超音波破砕装置を用いて菌体を破砕した。上記処理
を行った溶菌液を、日立工機社製のＲＲ−２４Ａロータ
ーを用いて１６０００rpmで１０分間遠心分離し、ＨＩ
Ｖ−１プロテアーゼを含む粗抽出液２０mｌを得た。

【００４６】表１ 緩衝液Ａの組成 50 mM トリス塩酸緩衝液ｐＨ８．０ 5 mM エチレンジアミン４酢酸（ＥＤＴＡ） 0.1％ ノニデットＰ４０（ＮＰ４０） 0.02％ ２−メルカプトエタノール（２−ＭＥ） 10％ グリセリン 1 mM フェニルメチルスルフォニルフルオリド（ＰＭ
ＳＦ） 0.1 mM パラアミジノフェニルメタンスルフォニルフル
オリド（ＡＰＭＳＦ）。

【００４７】試験例−１ ＨＴＬＶ−Ｉプロテアーゼ阻
害作用 ＨＴＬＶ−Ｉ ｇａｇＰ１９とＰ２４の解裂部位を含む
合成ペプチドｇａｇ−１（ＹＶＥＰＴＡＰＱＶＬＰＶＭ
ＨＰ）（配列番号：６）を基質とし、反応産物ｇａｇ−
４（ＹＶＥＰＴＡＰＱＶＬ）（配列番号：７）の生成を
指標としてＨＴＬＶ−Ｉプロテアーゼ阻害活性を測定し
た。即ち基質ｇａｇ−１ ２．５μｇ、試料およびＨＴ
ＬＶ−１プロテアーゼを含む１００mMクエン酸緩衝液ｐ
Ｈ５．０−１mMＥＤＴＡ（３０μｌ)中で３７℃で２０
時間反応させた。０．１３Ｍトリクロロ酢酸−０.２６
Ｍ酢酸ナトリウム−０.４Ｍ酢酸１５０μｌを加えるこ
とにより反応を停止した。室温で１０分間放置した後、
遠心上清を得た。上記の上清のうち４８μｌを０．１％
トリフロロ酢酸−１０％アセトニトリルで平衡化したＹ
ＭＣ−パック−ＦＬ−ＯＤＳカラム（０．４６×３cm、
ワイエムシィ社）に負荷し、アセトニトリルの濃度勾配
で溶出した。本条件下において、ｇａｇ−４の生成量を
５０％阻害するために必要な反応液中の試料濃度をＩＣ
₅₀値として表わした。実施例３および４で得られたＲＰ
Ｉ−８５６、ＲＰＩ−８５７、ＲＰＩ−８５８およびＲ
ＰＩ−８５９のＨＴＬＶ−Ｉプロテアーゼ阻害活性を表
２に示した。

【００４８】 表２の結果から、ＲＰＩ−８５６、ＲＰＩ−８５７、Ｒ
ＰＩ−８５８およびＲＰＩ−８５９は非常に強いＨＴＬ
Ｖ−Ｉプロテアーゼ阻害物質であることが明らかであ
る。

【００４９】試験例−２ ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害
作用 ＨＩＶ−１ ｇａｇ Ｐ１７とＰ２４の解裂部位を含む合
成ペプチドｇａｇ−１１（ＳＱＶＳＱＮＹＰＩＶＱＮ
Ｌ）（配列番号：８）を基質とし、反応産物ｇａｇ−１
２（ＳＱＶＳＱＮＹ）（配列番号：９）の生成を指標と
してＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害活性を測定した。即
ち、基質ｇａｇ−１１ ３μｇ、種々の濃度の試料、Ｈ
ＩＶ−１プロテアーゼを含む５％グリセロール−１ＭＮ
ａＣｌ−０．２５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．
２）(３０μｌ）中で３〜５時間反応させた。０．１３
Ｍトリクロロ酢酸−０．２６Ｍ酢酸ナトリウム−０．４
Ｍ酢酸１５０μｌを加えることにより反応を停止した。
室温で１０分間放置した後遠心上清を得た。上記の上清
のうち４８μｌを０．１％トリフロロ酢酸で平衡化した
ＹＭＣ−パックＦＬ−ＯＤＳカラム（０．４６×３cm、
ワイエムシィ社）に負荷し、アセトニトリルの濃度勾配
で溶出した。本条件下において、ｇａｇ−１２の生成量
を５０％阻害するために必要な反応液中の試料濃度をＩ
Ｃ₅₀値として表わした。実施例３および４で得られたＲ
ＰＩ−８５６、ＲＰＩ−８５７、ＲＰＩ−８５８および
ＲＰＩ−８５９のＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害活性を表
３に示した。

【００５０】 表３の結果から、ＲＰＩ−８５６、ＲＰＩ−８５７、Ｒ
ＰＩ−８５８およびＲＰＩ−８５９は非常に強いＨＩＶ
−１プロテアーゼ阻害物質であることが明らかである。
さらに実施例５〜１３で得られた各種誘導体のＨＩＶ−
１プロテアーゼ阻害活性を表４に示した。

【００５１】 表 ４ 試 料 ＩＣ₅₀（μｇ／ｍｌ） ───────────────────────────── ＲＰＩ−８５６−Ａ （実施例５） ０．０１５ ＲＰＩ−８５６−Ｂ （実施例６） ０．０６５ ＲＰＩ−８５６−Ｚ （実施例７） ０．０３９ ＲＰＩ−８５６−ＡＭ（実施例８） ０．０７５ ＲＰＩ−８５６−Ｄ （実施例１０） ０．０１２ ＲＰＩ−８５８−Ｄ （実施例１１） ０．０４２ ＲＰＩ−８５６−ＤＡ（実施例１２） ０．０５９ ＲＰＩ−８５８−ＤＡ（実施例１３） ０．０３６ ───────────────────────────── 表４の結果から、いずれの誘導体も強いＨＩＶ−１プロ
テアーゼ阻害物質であることが明らかである。

【００５２】以上のように、ＲＰＩ−８５６，ＲＰＩ−
８５７，ＲＰＩ−８５８，ＲＰＩ−８５９およびそれら
の誘導体はレトロウイルスのプロテアーゼ阻害活性を有
しており、また毒性も低いので、レトロウイルス性疾患
治療剤として有用な物質である。

【００５３】ＲＰＩ−８５６，ＲＰＩ−８５７，ＲＰＩ
−８５８またはＲＰＩ−８５９を抗レトロウイルス剤と
して用いる場合、希釈剤、賦形剤、担体などと混合し
て、薬剤学的に許容される製剤とし、経口的または非径
口的に投与する。

【００５４】例えば、注射剤として用いる場合は、ＲＰ
Ｉ−８５６，ＲＰＩ−８５７，ＲＰＩ−８５８またはＲ
ＰＩ−８５９を水溶液剤として、成人１日当り０．１〜
１０ｍｇ／ｋｇを静脈内投与する。

【００５５】

【実施例】以下に実施例を挙げて、本発明をさらに具体
的に説明するが、これによって本発明が限定されるもの
ではない。なお、培地におけるパーセント（％）は、と
くにことわりのない限り重量／容量パーセントを表わ
す。

【００５６】実施例１ キタサトスポリア・エスピーＡＬ−３２２株を２００ｍ
ｌ容三角フラスコ内のグルコース２％、可溶性澱粉３
％、生大豆粉１％、コーン・スティープ・リカー１％、
ペプトン０．５％、ＮａＣｌ０．３％、ＣａＣＯ₃０．
５％を含む４０ｍｌの種培地（ｐＨ７．０）に接種し、
２４℃、７２時間回転振盪機上で培養し、前培養液を得
た。得られた前培養液を２０００ｍｌ容坂口フラスコ内
の５００ｍｌの種培地４本に各１０ｍｌずつ移植し、２
４℃、７２時間往復振盪機上で培養し種培養液を得た。
この種培養液２０００ｍｌを２００リットル容ステンレ
ス・スチール・タンク内のグルコース０．５％、デキス
トリン５％、脱脂大豆粉３．５％、ＣａＣＯ₃０．７％
を含む１２０リットルの種培地（ｐＨ７．０）に移植
し、２４℃、通気１００１／分、撹拌９６回転／分、内
圧１ｋｇ／ｃｍ²の条件で１１４時間培養した。

【００５７】実施例２ 実施例１のようにして得られた培養液を濾過し、１００
リットルの培養濾液を得た。培養濾液に２５リットルの
メタノールを添加し、混合溶液を１０リットルのＨＰ−
２０カラムにＳＶ０．５の流速で通し、プロテアーゼ阻
害物質を吸着させた。吸着後、カラムを４０リットルの
３０％メタノール水で洗浄し、次いで５０リットルの９
０％メタノール水で阻害物質を溶出し、６００ｍｌにま
で濃縮した。濃縮液を遠心し、その上清を、９０％メタ
ノールで平衡化した３リットルのセファデックスＬＨ−
２０カラム（６×１０７ｃｍ）を用いて５回に分けてゲ
ル濾過した。活性画分９４０ｍｌを約５０ｍｌまで濃縮
し、１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）で
４倍に希釈したのち、１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液
−１８％アセトニトリルで平衡化したＴＳＫ−ＧＥＬ
ＯＤＳ−１２０ＴＨＰＬＣ用カラム（東ソー社、２１．
５×３００ｍｍ）に２０ｍｌずつ、１０回に分けて負荷
した。次いでアセトニトリルの直線濃度勾配溶出法によ
り阻害物質を溶出した。阻害物質はこのＯＤＳ−１２０
Ｔカラムにより２つの活性画分に分かれて溶出された。
カラムからの溶出順にそれぞれＰ−２（ＲＰＩ−８５
６，−８５７を含む）およびＰ−３（ＲＰＩ−８５８，
−８５９を含む）とした。Ｐ−２およびＰ−３はそれぞ
れ２９％と３３％のアセトニトリル濃度で溶出された。
Ｐ−２およびＰ−３画分を０．１％ＴＦＡ溶液で２倍に
希釈した後、０．１％ＴＦＡ−３０％アセトニトリルで
平衡化した同じＯＤＳ−１２０Ｔカラムにそれぞれ吸着
させ、アセトニトリルの直線濃度勾配溶出法により溶出
脱塩した。活性画分を凍結乾燥して、Ｐ−２粉末（８０
ｍｇ）およびＰ−３粉末（１８０ｍｇ）を得た。

【００５８】実施例３ 実施例２で得られたＰ−２の凍乾標品を２０ｍＭ酢酸溶
液（ｐＨ２．５，ＨＣｌでｐＨを補正）に溶解し、２０
ｍＭ酢酸−３ｍＭ硫酸ナトリウム（ｐＨ２．５）で平衡
化したＴＳＫ−ＧＥＬ ＳＰ−２ＳＷカラム（東ソー
社、０．４６×２５ｃｍ）に負荷し、硫酸ナトリウムの
直線濃度勾配溶出法により活性物質を溶出した。Ｐ−２
はこのＳＰ−２ＳＷカラムでさらに２つの活性画分に分
かれて溶出された。カラムの溶出順序に従ってそれぞれ
ＲＰＩ−８５６およびＲＰＩ−８５７と呼称した。ＲＰ
Ｉ−８５６およびＲＰＩ−８５７はそれぞれ５０ｍＭと
５９ｍＭの硫酸ナトリウム濃度で溶出された。活性画分
を０．１％ＴＦＡ溶液で２倍に希釈したのち、実施例２
の場合と同様に、ＯＤＳ−１２０Ｔカラムを用いて脱塩
した。活性画分を凍結乾燥して、ＲＰＩ−８５６粉末
（７ｍｇ）およびＲＰＩ−８５７粉末（１８ｍｇ）を得
た。

【００５９】実施例４ 実施例２で得られたＰ−３の凍乾標品を２０ｍＭ酢酸緩
衝液（ｐＨ４．０）に溶解し、２０ｍＭ酢酸緩衝液−８
ｍＭ硫酸ナトリウム（ｐＨ４．０）で平衡化したＴＳＫ
−ＧＥＬ ＳＰ−２ＳＷカラムに負荷し、硫酸ナトリウ
ムの直線濃度勾配溶出法により活性物質を溶出した。Ｐ
−３はこのＳＰ−２ＳＷカラムでさらに２つの活性画分
に分かれて溶出された。カラムの溶出順序に従ってそれ
ぞれＲＰＩ−８５８およびＲＰＩ−８５９と呼称した。
ＲＰＩ−８５８およびＲＰＩ−８５９はそれぞれ５３ｍ
Ｍと５９ｍＭの硫酸ナトリウム濃度で溶出された。活性
画分を０．１％ＴＦＡ溶液で２倍に希釈したのち、実施
例２の場合と同様ＯＤＳ−１２０Ｔカラムを用いて脱塩
した。活性画分を凍結乾燥して、ＲＰＩ−８５８粉末
（２０ｍｇ）およびＲＰＩ−８５９粉末（４９ｍｇ）を
得た。

【００６０】実施例５ ＲＰＩ−８５６の粉末３０ｍｇを１５ｍｌの０．２％炭
酸水素ナトリウム／８０％メタノール水に溶解後、氷冷
下７．５μｌの無水酢酸を添加し、１２０分間反応させ
た。反応液を蒸留水で２．５倍に希釈し、０．１％ＴＦ
Ａ−３０％アセトニトリルで平衡化したＴＳＫ−ＧＥＬ
ＯＤＳ−１２０Ｔ ＨＰＬＣ用カラム（東ソー社、２
１．５×３００ｍｍ）に２回に分けて負荷した。次いで
アセトニトリルの直線濃度勾配溶出法により溶出し、活
性画分を凍結乾燥して、ＲＰＩ−８５６のアセチル誘導
体（ＲＰＩ−８５６−Ａ）２０ｍｇを得た。 薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体；シリカゲル
６０、展開溶媒；ｎ−ブタノール：酢酸：水：酢酸ブチ
ル（４：１：１：４）、検出；リドン−スミス法Ｒｆ
０．６４ マススペクトル測定値：ｍ／ｚ ９２６（Ｍ＋Ｈ)+（Ｓ
Ｉ−ＭＳ法）¹ Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：３００ＭＨｚ
（２４℃、ＤＭＳＯ−ｄ₆中で測定、δｐｐｍ，Ｊ（Ｈ
ｚ）） ９．１８（２Ｈ，Ｓ），８．２７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
９） ８．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７），８．１８（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．３） ８．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０），８．１０（１Ｈ，
ｄ．Ｊ＝９．２） ７．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８），７．１０−７．２
５（５Ｈ，ｍ） ６．２６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０），６．１２（１Ｈ，
ｔ，Ｊ＝２．０） ５．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８），５．２２（１Ｈ，
ｍ） ４．５１（１Ｈ，ｍ），４．４０（１Ｈ，ｍ），４．２
７（１Ｈ，ｍ） ４．２４（１Ｈ，ｍ），４．２１（１Ｈ，ｍ） ３．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．５，１４．３） ２．８４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．５，１４．３） ２．６７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．７，１６．８） ２．５５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．０，１６．８） １．８７−２．０５（３Ｈ，ｍ），１．８４（３Ｈ，
ｓ） １．６０（１Ｈ，ｍ），１．４０（２Ｈ，ｍ） ０．７２−０．９０（２４Ｈ，ｍ）。

【００６１】実施例６ ＲＰＩ−８５６の粉末３０ｍｇを１５ｍｌの０．２％炭
酸水素ナトリウム／８０％メタノール水に溶解後、氷冷
下で９．４８μｌの無水イソ酪酸を添加し、１２０分間
反応させた。反応液を蒸留水で２．５倍に希釈し、０．
１％ＴＦＡ−３５％アセトニトリルで平衡化したＯＤＳ
−１２０Ｔカラムに２回に分けて負荷した。次いでアセ
トニトリルの直線濃度勾配溶出法により溶出し、活性画
分を凍結乾燥して、ＲＰＩ−８５６のイソブチリル体
（ＲＰＩ−８５６−Ｂ）１４ｍｇを得た。 ＴＬＣ（ｎ−ブタノール：酢酸：水：酢酸ブチル（４：
１：１：４））；Ｒｆ０．６９ ＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ ９５４（Ｍ＋Ｉ)+¹ Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆中） ９．１８（２Ｈ，ｂｒ），８．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
７．８） ８．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４），８．１９（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８．８） ８．１６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９），８．１０（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８．６） ７．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９），７．１０−７．２
５（５Ｈ，ｍ） ６．２７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１），６．１２（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝２．１） ５．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９），５．２２（１Ｈ，
ｍ） ４．５１（１Ｈ，ｍ），４．４１（１Ｈ，ｍ） ４．１７−４．２８（３Ｈ，ｍ） ３．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．５，１４．０） ２．８４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，１４．０） ２．６８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．８，１６．５） ２．５６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．０，１６．５） ２．５２（１Ｈ，ｍ），１．９０−２．０６（３Ｈ，
ｍ） １．５９（１Ｈ，ｍ），１．４０（２Ｈ，ｍ） ０．９９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０），０．９６（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．０） ０．７７−０．８９（２１Ｈ，ｍ），０．７５（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．７）。

【００６２】実施例７ ＲＰＩ−８５６の粉末５０ｍｇを３０ｍｌの０．２％炭
酸水素ナトリウム／８０％メタノール水に溶解後、氷冷
下で１５μｌの塩化ベンジルオキシカルボニル（Ｚ−Ｃ
ｌ）を添加し、１８０分間反応させた。反応液を蒸留水
で２倍に希釈し、０．１％ＴＦＡ−４０％アセトニトリ
ルで平衡化したＯＤＳ−１２０Ｔカラムに３回に分けて
負荷した。次いでアセトニトリルの直線濃度勾配溶出法
により溶出し、活性画分を凍結乾燥して、ＲＰＩ−８５
６のカルボベンゾキシ誘導体（ＲＰＩ−８５６−Ｚ）３
１ｍｇを得た。 ＴＬＣ（ｎ−ブタノール：酢酸：水：酢酸ブチル（４：
１：１：４））；Ｒｆ０．７７ ＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ １０１８（Ｍ＋Ｉ)+。

【００６３】実施例８ 実施例５で得られたＲＰＩ−８５６のアセチル誘導体１
２．５ｍｇを１２．５ｍｌの無水メタノールに溶解し、
０．５６４ｍｌのトリメチルシリルジアゾメタン・ヘキ
サン溶液を１０分間隔で４回添加し、メチル化反応を行
った。反応液をスピード・バック・コンセントレーター
で８ｍｌにまで濃縮し、水で３倍に希釈して、０．１％
ＴＦＡ−３０％アセトニトリルで平衡化したＯＤＳ−１
２０Ｔカラムに負荷した。次いでアセトニトリルの直線
濃度勾配溶出法により溶出し、活性画分を凍結乾燥し
て、ＲＰＩ−８５６のアセチル誘導体のメチルエステル
（ＲＰＩ−８５６−ＡＭ）７ｍｇを得た。 ＴＬＣ（ｎ−ブタノール：酢酸：水：酢酸ブチル（４：
１：１：４））；Ｒｆ０．９６ ＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ ９６８（Ｍ＋Ｉ)+。

【００６４】実施例９ ＲＰＩ−８５６の粉末３７．５ｍｇを１５ｍｌの０．１
％ＴＦＡ−４９．９５％アセトニトリル水に溶解後、氷
冷下３７．５ｍｇのシアノ水素化ほう素ナトリウムを３
０分間隔で４回添加し、還元反応を行った。反応液を蒸
留水で２倍に希釈し、０．１％ＴＦＡ−２７．５％アセ
トニトリルで平衡化したＯＤＳ−１２０Ｔカラムに２回
に分けて負荷した。次いでアセトニトリルの直線濃度勾
配溶出法により溶出した結果、２種類の活性画分（Ｈ−
１，Ｈ−２）に分離して溶出された。活性画分を凍結乾
燥して、ＲＰＩ−８５６の還元体Ｈ−１ ５．４ｍｇと
Ｈ−２ １２．８ｍｇ（Ｈ−１およびＨ−２はジアステ
レオマー）を得た。 ＴＬＣ（ｎ−ブタノール：酢酸：水：酢酸ブチル（４：
１：１：４））；ＲｆＨ−１ ０．２８，Ｈ−２ ０．
２２ ＳＩ−ＭＳ；Ｈ−１ ｍ／ｚ ８８６（Ｍ＋Ｉ)+，Ｈ−
２ ｍ／ｚ ８８６（Ｍ＋Ｉ)+。

【００６５】実施例１０ ＲＰＩ−８５６の粉末２５ｍｇを１．１３ｍｌの蒸留
水、１．１３ｍｌのメタノールおよび０．５５７ｍｌの
トリエチルアミンに溶解し、スピード・バック・コンセ
ントレーターで濃縮乾固する。次いで３．９８ｍｌのメ
タノール、０．５６８ｍｌの蒸留水、０．２８４ｍｌの
トリエチルアミンに溶解後０．２１３ｍｌのフェニルイ
ソチオシアナートを添加し、室温で１時間、時々撹拌し
ながら反応させた。反応液をスピード・バック・コンセ
ントレーターで濃縮乾固し、乾固物を４．０ｍｌのエタ
ノールに溶解し、再度濃縮乾固した。乾固物を０．５ｍ
ｌのＴＦＡに溶解し、４０℃、２０分間反応させた。反
応液に４．５ｍｌのアセトニトリルを添加し、さらに蒸
留水を１０ｍｌ添加した後、０．１％ＴＦＡ−３０％ア
セトニトリルで平衡化したＯＤＳ−１２０Ｔカラムに２
回に分けて負荷した。次いでアセトニトリルの直線濃度
勾配溶出法により溶出し、活性画分を凍結乾燥して、Ｒ
ＰＩ−８５６のＮ末端のＶａｌを除去した誘導体（ＲＰ
Ｉ−８５６−Ｄ）１３ｍｇを得た。 ＴＬＣ（ｎ−ブタノール：酢酸：水：酢酸ブチル（４：
１：１：４））；Ｒｆ０．３１ ＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ ７８５（Ｍ＋Ｉ)+。

【００６６】実施例１１ ＲＰＩ−８５８の粉末２５ｍｇを実施例１０と同様に、
フェニルイソチオシアナートと反応させ、ＴＦＡで切断
後、ＯＤＳ−１２０Ｔカラムで精製した。活性画分を凍
結乾燥してＲＰＩ−８５８のＮ末端のＶａｌを除去した
誘導体（ＲＰＩ−８５８−Ｄ）１４ｍｇを得た。 ＴＬＣ（ｎ−ブタノール：酢酸：水：酢酸ブチル（４：
１：１：４））；Ｒｆ０．６３ ＳＩ−ＭＳ；ｍ／ｚ ６７０（Ｍ＋Ｉ)+。

【００６７】実施例１２ 実施例１０で得られたＲＰＩ−８５６−Ｄ １０mgを実
施例５と同様に無水酢酸と反応させたのち、ＯＤＳ−１
２０Ｔカラムで精製した。活性画分を凍結乾燥してＲＰ
Ｉ−８５６−Ｄのアセチル誘導体（ＲＰＩ−８５６−Ｄ
Ａ）６．５ｍｇを得た。 ＴＬＣ（ｎ−ブタノール：酢酸：水：酢酸ブチル（４：
１：１：４））；Ｒｆ０．５９。

【００６８】実施例１３ 実施例１１で得られたＲＰＩ−８５８−Ｄ １０mgを実
施例５と同様に無水酢酸と反応させたのち、ＯＤＳ−１
２０Ｔカラムで精製した。活性画分を凍結乾燥してＲＰ
Ｉ−８５８−Ｄのアセチル誘導体（ＲＰＩ−８５８−Ｄ
Ａ）８．１ｍｇを得た。 ＴＬＣ（ｎ−ブタノール：酢酸：水：酢酸ブチル（４：
１：１：４））；Ｒｆ０．８８。

【００６９】実施例１４ 実施例３で得られたＲＰＩ−８５６ ５mg、ＮａＣｌ
９００mgおよびベンジルアルコール９００mgを注射用蒸
留水に溶解して全量を１００mｌとする。この溶液を孔
径０．２μmのメンブランフィルターを用いて無菌濾過
し、無菌操作で内容量５０mｌのバイヤルに充てんして
ゴム施栓を行ないアルミキャップで巻きじめをして注射
剤を作製する。

【００７０】実施例１５ 実施例４で得られたＲＰＩ−８５８ ２０mg、乳糖３９
０mgおよびステアリン酸マグネシウム１０mgを常法によ
り混合してゼラチン硬カプセルに充填し、カプセル剤を
作製する。

【００７１】

【発明の効果】本発明のＲＰＩ−８５６、ＲＰＩ−８５
７、ＲＰＩ−８５８およびＲＰＩ−８５９およびそれら
の各種誘導体は強力なレトロウイルスプロテアーゼ抑制
作用を持つ新規な化合物であり、レトロウイルス感染症
の予防および治療に用いることができる。

【００７２】

【００７３】

【配列表】

配列番号：1 配列の長さ：7 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 存在位置：2 Xaa=2-アミノ-2-(3,5-ジハイドロオキシフェニル）酢酸 存在位置：4 Xaa=3-アミノ-2-オキソ-4-フェニル酪酸

【００７４】配列番号：2 配列の長さ：7 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 存在位置：2 Xaa=2-アミノ-2-(3,5-ジハイドロオキシフェニル）酢酸 存在位置：4 Xaa=3-アミノ-2-オキソ-4-フェニル酪酸 存在位置：7 Xaa=OH 又は Asp

【００７５】配列番号：3 配列の長さ：12 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 配列 AATTCTATGC CA 12。

【００７６】配列番号：4 配列の長さ：12 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 配列 GATACGGTCT AG 12。

【００７７】配列番号：5 配列の長さ：28 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 配列 CTAGCTAGCT AGAATTCTAG CTAGCTAG 28。

【００７８】配列番号：6 配列の長さ：15 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Tyr Val Glu Pro Thr Ala Pro Gln Val Leu Pro Val Met His Pro 1 5 10 15。

【００７９】配列番号：7 配列の長さ：10 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００８０】配列番号：8 配列の長さ：13 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ser Gln Val Ser Gln Asn Tyr Pro Ile Val Gln Asn Leu 1 5 10。

【００８１】配列番号：９ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【図面の簡単な説明】

【図１】ＲＰＩ−８５６の紫外線吸収スペクトルを示
す。

【図２】ＲＰＩ−８５６の赤外線吸収スペクトル（ＫＢ
ｒ法）を示す。

【図３】ＲＰＩ−８５７の紫外線吸収スペクトルを示
す。

【図４】ＲＰＩ−８５７の赤外線吸収スペクトル（ＫＢ
ｒ法）を示す。

【図５】ＲＰＩ−８５８の紫外線吸収スペクトルを示
す。

【図６】ＲＰＩ−８５８の赤外線吸収スペクトル（ＫＢ
ｒ法）を示す。

【図７】ＲＰＩ−８５９の紫外線吸収スペクトルを示
す。

【図８】ＲＰＩ−８５９の赤外線吸収スペクトル（ＫＢ
ｒ法）を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:01）

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】式Ｉ 【化１】 ［式中、Ｒ¹およびＲ²はそれぞれ結合手またはアミノ酸
   残基を示し、 Ｙ_NはＨまたはアミノ基の保護基を示し、 Ｙ_CはＯＨまたはカルボキシル基の保護基を示し、 で表わされるペプチド性化合物もしくはその塩またはそ
   れらの混合物。
2. 【請求項２】 Ｒ¹がＶａｌ残基である請求項１記載の
   化合物。
3. 【請求項３】 Ｒ²が結合手またはＡｓｐ残基である請
   求項１記載の化合物。
4. 【請求項４】 Ｘが−Ｃ−である請求項１記載の化合
   物。
5. 【請求項５】 Ｙ_NがＨである請求項１記載の化合物。
6. 【請求項６】 Ｙ_Nがアシル基である請求項１記載の化
   合物。
7. 【請求項７】 Ｙ_CがＯＨである請求項１記載の化合
   物。
8. 【請求項８】 Ｙ_Cが置換されていてもよいアルコキシ
   またはアミノ基である請求項１記載の化合物。
9. 【請求項９】式II 【化２】 〔式中、ＲはＡｓｐ残基またはＯＨを示す〕で表わされ
   るペプチド性化合物もしくはその塩またはそれらの混合
   物。
10. 【請求項１０】キタサトスポリア属に属し、請求項９記
    載のペプチド性化合物もしくはその塩またはそれらの混
    合物を生産する菌を培地に培養し、培養物中に請求項９
    記載の化合物もしくはその塩またはそれらの２種以上の
    混合物を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴と
    する請求項９記載の化合物もしくはその塩またはそれら
    の混合物の製造法。
11. 【請求項１１】請求項１記載の化合物もしくはその塩ま
    たはそれらの混合物を含有するレトロウイルス性疾患治
    療剤。