JPH05308970A - 円石の分離方法 - Google Patents
円石の分離方法Info
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- JPH05308970A JPH05308970A JP4055187A JP5518792A JPH05308970A JP H05308970 A JPH05308970 A JP H05308970A JP 4055187 A JP4055187 A JP 4055187A JP 5518792 A JP5518792 A JP 5518792A JP H05308970 A JPH05308970 A JP H05308970A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 円石藻類の培養物を重炭酸塩水溶液中で超音
波処理することによって円石藻類より円石を分離する方
法、及びこのようにして得られた円石を担体として使用
することによる酵素又は抗体の固定化方法。 【効果】 この方法によって分離された円石は、約０．
５〜約１．０μｍの分節が約２０〜約４０個リング状に
連なった径１〜５μｍの微細構造物であり、空隙の多い
特異な構造をしているため種々の担体等幅広い分野で利
用できるものである。特に、固定化酵素又は固定化抗体
の担体として用いれば、多くの酵素又は抗体を固定化す
ることができるため、より反応効率の良好な固定化酵素
又は固定化抗体が得られる。
波処理することによって円石藻類より円石を分離する方
法、及びこのようにして得られた円石を担体として使用
することによる酵素又は抗体の固定化方法。 【効果】 この方法によって分離された円石は、約０．
５〜約１．０μｍの分節が約２０〜約４０個リング状に
連なった径１〜５μｍの微細構造物であり、空隙の多い
特異な構造をしているため種々の担体等幅広い分野で利
用できるものである。特に、固定化酵素又は固定化抗体
の担体として用いれば、多くの酵素又は抗体を固定化す
ることができるため、より反応効率の良好な固定化酵素
又は固定化抗体が得られる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、円石藻類から円石を分
離する方法、及び分離された円石を担体として用いて酵
素又は抗体を固定化する方法に関する。
離する方法、及び分離された円石を担体として用いて酵
素又は抗体を固定化する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ハプト植物門に属する円石藻類は、その
細胞表面に円石（コッコリス）と呼ばれる鱗片状の殻を
形成する。この円石は炭酸カルシウムを主成分とする径
１〜５μｍのリング状のもので、空隙の多い複雑な形態
をとっている。この円石藻類については、円石形成のメ
カニズムを究明せんとする研究は、これまで多くなされ
ているものの、その他の研究、特に円石を分離して利用
しようとする試みについては、ほとんどなされていない
のが現状である。
細胞表面に円石（コッコリス）と呼ばれる鱗片状の殻を
形成する。この円石は炭酸カルシウムを主成分とする径
１〜５μｍのリング状のもので、空隙の多い複雑な形態
をとっている。この円石藻類については、円石形成のメ
カニズムを究明せんとする研究は、これまで多くなされ
ているものの、その他の研究、特に円石を分離して利用
しようとする試みについては、ほとんどなされていない
のが現状である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、円石は、上記
の如く炭酸カルシウムを主成分とする空隙の多い構造を
有しており、細胞から分離して採取できれば、種々の物
質の担体として利用できる可能性がある。従って、本発
明の目的は、円石を円石藻類の細胞から分離する方法、
及び円石を担体として酵素又は抗体を固定化する方法を
提供しようとするものである。
の如く炭酸カルシウムを主成分とする空隙の多い構造を
有しており、細胞から分離して採取できれば、種々の物
質の担体として利用できる可能性がある。従って、本発
明の目的は、円石を円石藻類の細胞から分離する方法、
及び円石を担体として酵素又は抗体を固定化する方法を
提供しようとするものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】かかる実情において、本
発明者等は鋭意研究した結果、円石藻類の培養物を重炭
酸塩水溶液中で超音波処理すれば、細胞と円石とを効率
よく分離できること、さらにはかくして得られた円石は
空隙率の高い微細構造を有しており固定化酵素及び固定
化抗体の担体として有用であることを見いだし本発明を
完成した。
発明者等は鋭意研究した結果、円石藻類の培養物を重炭
酸塩水溶液中で超音波処理すれば、細胞と円石とを効率
よく分離できること、さらにはかくして得られた円石は
空隙率の高い微細構造を有しており固定化酵素及び固定
化抗体の担体として有用であることを見いだし本発明を
完成した。
【０００５】すなわち、本発明は、円石藻類の培養物を
重炭酸塩水溶液中で超音波処理することを特徴とする円
石藻類より円石を分離する方法に係るものである。ま
た、本発明は、担体に酵素又は抗体を固定化する方法に
おいて、担体として円石藻類の培養物を重炭酸塩水溶液
中で超音波処理することにより円石藻類から分離された
円石を使用することを特徴とする酵素又は抗体の固定化
方法に係るものである。
重炭酸塩水溶液中で超音波処理することを特徴とする円
石藻類より円石を分離する方法に係るものである。ま
た、本発明は、担体に酵素又は抗体を固定化する方法に
おいて、担体として円石藻類の培養物を重炭酸塩水溶液
中で超音波処理することにより円石藻類から分離された
円石を使用することを特徴とする酵素又は抗体の固定化
方法に係るものである。
【０００６】本発明の分離方法に使用される円石藻類
は、エミリアニア属（Emiliania）、プレウロクリシス
属（Pleurochrysis）、ゲフィロカプサ属（Gephyrocaps
a）、ヒメノモナス属（Hymenomonas）、オクロスフェラ
属（Ochrosphaera）などのハプト藻である。
は、エミリアニア属（Emiliania）、プレウロクリシス
属（Pleurochrysis）、ゲフィロカプサ属（Gephyrocaps
a）、ヒメノモナス属（Hymenomonas）、オクロスフェラ
属（Ochrosphaera）などのハプト藻である。
【０００７】これらの円石藻類の培養に用いられる培地
としては、一般的な海産藻類の培養のための培地であれ
ば特に制限されず、例えば海水に硝酸塩やリン酸塩等の
無機塩類及び種々の微量金属を補足した液体培地、代表
的なものとしてはエプレイ（Eppley's）の培地等を挙げ
ることができる。培養は、常法により、例えば通気しつ
つ攪拌し、光照射下に１５〜２５℃の温度で行なうのが
好ましい。培養条件にもよるが、通常７〜１０日の培養
で円石藻の増殖は定常期に入る。
としては、一般的な海産藻類の培養のための培地であれ
ば特に制限されず、例えば海水に硝酸塩やリン酸塩等の
無機塩類及び種々の微量金属を補足した液体培地、代表
的なものとしてはエプレイ（Eppley's）の培地等を挙げ
ることができる。培養は、常法により、例えば通気しつ
つ攪拌し、光照射下に１５〜２５℃の温度で行なうのが
好ましい。培養条件にもよるが、通常７〜１０日の培養
で円石藻の増殖は定常期に入る。
【０００８】かくして得られた培養物より遠心分離によ
って固形分を集め、重炭酸水溶液に再懸濁する。用いら
れる重炭酸塩としては、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリ
ウム等の重炭酸アルカリ金属塩、重炭酸アンモニウム等
を使用することができるが、重炭酸アルカリ金属塩が好
ましい。重炭酸塩の濃度は、１０mM以上が好ましく、１
０mM未満では、円石の分離の効率が悪くなり、夾雑物混
入のおそれがある。かかる重炭酸塩水溶液に懸濁した培
養物を超音波処理することによって、これに振動を与
え、細胞と円石とを分離する。用いる超音波発生機は、
市販されているものを用いることができ、周波数は、超
音波洗浄機や超音波破砕機に一般的な２０〜５０KHzが
適当であり、この範囲外では分離効率が低下するおそれ
がある。また超音波処理は１分以上行なうのが好まし
い。１分未満では円石が十分に細胞から分離されないお
それがある。
って固形分を集め、重炭酸水溶液に再懸濁する。用いら
れる重炭酸塩としては、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリ
ウム等の重炭酸アルカリ金属塩、重炭酸アンモニウム等
を使用することができるが、重炭酸アルカリ金属塩が好
ましい。重炭酸塩の濃度は、１０mM以上が好ましく、１
０mM未満では、円石の分離の効率が悪くなり、夾雑物混
入のおそれがある。かかる重炭酸塩水溶液に懸濁した培
養物を超音波処理することによって、これに振動を与
え、細胞と円石とを分離する。用いる超音波発生機は、
市販されているものを用いることができ、周波数は、超
音波洗浄機や超音波破砕機に一般的な２０〜５０KHzが
適当であり、この範囲外では分離効率が低下するおそれ
がある。また超音波処理は１分以上行なうのが好まし
い。１分未満では円石が十分に細胞から分離されないお
それがある。
【０００９】超音波処理後の懸濁液から円石を採取する
には、室温下に懸濁液を攪拌しながら放置して細胞成分
を水に溶解せしめ、次いで懸濁液を遠心分離すればよ
い。ここで、懸濁液を放置する時間は、細胞成分が溶解
するのに十分な時間であれば特に制限されないが、通常
２時間以上が好ましい。さらに好ましくは、得られた沈
殿を重炭酸塩水溶液に再懸濁して洗浄し、再度遠心分離
により沈殿を集める。通常、これらの超音波処理、細胞
溶解、洗浄の操作により種々の担体等として十分利用可
能な円石が得られるが、さらに純度の高い円石を所望す
る場合には、前記超音波処理、細胞溶解、洗浄の一連の
操作を上澄が透明になるまで２〜５回繰り返せばよい。
その後、かくして得られる沈殿は、減圧乾燥等の常法に
よって乾燥する。
には、室温下に懸濁液を攪拌しながら放置して細胞成分
を水に溶解せしめ、次いで懸濁液を遠心分離すればよ
い。ここで、懸濁液を放置する時間は、細胞成分が溶解
するのに十分な時間であれば特に制限されないが、通常
２時間以上が好ましい。さらに好ましくは、得られた沈
殿を重炭酸塩水溶液に再懸濁して洗浄し、再度遠心分離
により沈殿を集める。通常、これらの超音波処理、細胞
溶解、洗浄の操作により種々の担体等として十分利用可
能な円石が得られるが、さらに純度の高い円石を所望す
る場合には、前記超音波処理、細胞溶解、洗浄の一連の
操作を上澄が透明になるまで２〜５回繰り返せばよい。
その後、かくして得られる沈殿は、減圧乾燥等の常法に
よって乾燥する。
【００１０】上記のごとくして得られた円石に酵素又は
抗体を固定化するには、通常の酵素又は抗体の固定化手
段によればよい。酵素を固定するには、例えば、円石を
酵素溶液中に懸濁し、一定時間放置して円石に酵素を吸
着、固定化せしめたのち、遠心分離等により酵素固定化
円石を採取することにより行なわれる。用いる酵素溶液
のpHは７．５以上、特に８．０以上とするのが好まし
い。pH７．５以下では、円石が溶解するおそれがある。
酵素の吸着、固定化は、懸濁液を酵素の変性、失活が起
こらない温度、好ましくは０〜１０℃で、数時間、好ま
しくは８時間以上放置することにより行なわれる。酵素
の固定化に際して、固定化をより促進させる目的でグル
タルアルデヒド等の架橋剤を用いることもできる。な
お、得られた固定化酵素は、pH７．５以上、より好まし
くは、pH８．０以上に調整された緩衝液に再懸濁し、洗
浄し、再度遠心分離するのが好ましい。
抗体を固定化するには、通常の酵素又は抗体の固定化手
段によればよい。酵素を固定するには、例えば、円石を
酵素溶液中に懸濁し、一定時間放置して円石に酵素を吸
着、固定化せしめたのち、遠心分離等により酵素固定化
円石を採取することにより行なわれる。用いる酵素溶液
のpHは７．５以上、特に８．０以上とするのが好まし
い。pH７．５以下では、円石が溶解するおそれがある。
酵素の吸着、固定化は、懸濁液を酵素の変性、失活が起
こらない温度、好ましくは０〜１０℃で、数時間、好ま
しくは８時間以上放置することにより行なわれる。酵素
の固定化に際して、固定化をより促進させる目的でグル
タルアルデヒド等の架橋剤を用いることもできる。な
お、得られた固定化酵素は、pH７．５以上、より好まし
くは、pH８．０以上に調整された緩衝液に再懸濁し、洗
浄し、再度遠心分離するのが好ましい。
【００１１】
【効果】本発明によって分離された円石は、約０．５〜
約１．０μｍの分節が約２０〜約４０個リング状に連な
った径１〜５μｍの微細構造物であり、空隙の多い特異
な構造をしているため種々の担体等幅広い分野で利用で
きるものである。特に、固定化酵素又は固定化抗体の担
体として用いれば、多くの酵素又は抗体を固定化するこ
とができるため、より反応効率の良好な固定化酵素又は
固定化抗体が得られる。
約１．０μｍの分節が約２０〜約４０個リング状に連な
った径１〜５μｍの微細構造物であり、空隙の多い特異
な構造をしているため種々の担体等幅広い分野で利用で
きるものである。特に、固定化酵素又は固定化抗体の担
体として用いれば、多くの酵素又は抗体を固定化するこ
とができるため、より反応効率の良好な固定化酵素又は
固定化抗体が得られる。
【００１２】
【実施例】次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する
が、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
が、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００１３】実施例１ 海水９００mlに対し、ＫＮＯ3 ５０５mg/l、Ｋ2ＨＰＯ
4 ８７mg/lを含む水溶液を１００ml、ＣｕＳＯ4・５Ｈ
2Ｏ １９．６mg/l、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ４４mg/l、
ＣｏＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ２０mg/l、ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2Ｏ
３６０mg/l、ＮａＭｎＯ3・２Ｈ2Ｏ １２．６mg/l、
Ｆｅ −ＥＤＴＡ １０g/lを含む微量元素混液を１ml、
チアミン２００mg/l、ビオチン１mg/l、コバミド０．２
mg/lを含むビタミン混液を１mlの割合でそれぞれ添加し
たエプレイの培地を調製し、これにプレウロクリシス・
カルテレ（Pleurochrysis carterae）を約５０mg乾重量
/lとなるように接種し、容量１０リットルの円筒形ガラ
ス容器に入れた。ガラス容器のまわりに蛍光灯を配し、
ガラス容器の表面の照度が約３０００ルクスとなるよう
にした。光の照射は、明期１６時間、暗期８時間の間欠
照射とした。空気の通気により、二酸化炭素の供給と培
地の攪拌を行ないつつ、２０℃で７日間培養した。これ
によって約４００mg乾重量/lのプレウロクリシス培養物
を得た。遠心分離（３０００rpm，５分）によって集め
た６．６ｇ乾重量の藻体を１リットルの海水に懸濁し、
５分間超音波（周波数２７KHz，出力１００Ｗ）処理を
行なった。この懸濁液を遠心分離し、沈殿を５０ｍＭの
重炭酸ナトリウム水溶液１リットルに再懸濁した。次い
で２分間上記と同様の超音波処理をしたのち、攪拌しな
がら室温に１２時間放置した。この懸濁液を遠心分離
し、沈殿を５０mM重炭酸ナトリウム水溶液１リットルに
再懸濁し、洗浄して再度遠心分離した。沈殿を５０mM重
炭酸ナトリウム水溶液１リットルに再懸濁し、上記超音
波処理から洗浄までの一連の操作をさらに２回繰り返し
た。最後に、遠心分離によって得た白色沈殿を減圧下に
乾燥し、１．０ｇの粉末を得た。この粉末の走査型電子
顕微鏡写真を図１に示す。写真中のスケールは１０μｍ
である。図１からわかるように円石は長径１．５〜２．
０μｍ、短径２．３〜２．８μｍの楕円状であった。ま
た、図２に１個の円石の走査型電子顕微鏡写真（スケー
ルは１μｍ）を示す。図２からわかるように円石は約
０．５μｍの分節が２０〜３０個リング状に連なってい
た。
4 ８７mg/lを含む水溶液を１００ml、ＣｕＳＯ4・５Ｈ
2Ｏ １９．６mg/l、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ４４mg/l、
ＣｏＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ２０mg/l、ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2Ｏ
３６０mg/l、ＮａＭｎＯ3・２Ｈ2Ｏ １２．６mg/l、
Ｆｅ −ＥＤＴＡ １０g/lを含む微量元素混液を１ml、
チアミン２００mg/l、ビオチン１mg/l、コバミド０．２
mg/lを含むビタミン混液を１mlの割合でそれぞれ添加し
たエプレイの培地を調製し、これにプレウロクリシス・
カルテレ（Pleurochrysis carterae）を約５０mg乾重量
/lとなるように接種し、容量１０リットルの円筒形ガラ
ス容器に入れた。ガラス容器のまわりに蛍光灯を配し、
ガラス容器の表面の照度が約３０００ルクスとなるよう
にした。光の照射は、明期１６時間、暗期８時間の間欠
照射とした。空気の通気により、二酸化炭素の供給と培
地の攪拌を行ないつつ、２０℃で７日間培養した。これ
によって約４００mg乾重量/lのプレウロクリシス培養物
を得た。遠心分離（３０００rpm，５分）によって集め
た６．６ｇ乾重量の藻体を１リットルの海水に懸濁し、
５分間超音波（周波数２７KHz，出力１００Ｗ）処理を
行なった。この懸濁液を遠心分離し、沈殿を５０ｍＭの
重炭酸ナトリウム水溶液１リットルに再懸濁した。次い
で２分間上記と同様の超音波処理をしたのち、攪拌しな
がら室温に１２時間放置した。この懸濁液を遠心分離
し、沈殿を５０mM重炭酸ナトリウム水溶液１リットルに
再懸濁し、洗浄して再度遠心分離した。沈殿を５０mM重
炭酸ナトリウム水溶液１リットルに再懸濁し、上記超音
波処理から洗浄までの一連の操作をさらに２回繰り返し
た。最後に、遠心分離によって得た白色沈殿を減圧下に
乾燥し、１．０ｇの粉末を得た。この粉末の走査型電子
顕微鏡写真を図１に示す。写真中のスケールは１０μｍ
である。図１からわかるように円石は長径１．５〜２．
０μｍ、短径２．３〜２．８μｍの楕円状であった。ま
た、図２に１個の円石の走査型電子顕微鏡写真（スケー
ルは１μｍ）を示す。図２からわかるように円石は約
０．５μｍの分節が２０〜３０個リング状に連なってい
た。
【００１４】実施例２ ０．１Ｍホウ酸、０．１Ｍ ＫＣｌ緩衝液（pH９．５）
１mlに酵素ウリカーゼ１mgを溶解し、これに実施例１で
得られたプレウロクリシス・カルテレの円石１０mgを懸
濁した。これを振盪攪拌しつつ、４℃にて１２時間放置
し酵素を円石に吸着、固定化せしめた。これを微量卓上
遠心機にて１５０００rpmで５分間遠心分離した。沈殿
を酵素を含まない上記緩衝液１mlに再懸濁し、洗浄して
再度遠心分離した。固定化酵素量は、固定化前の緩衝液
中の酵素量と固定化後の緩衝液中の酵素量の差により求
めた。なお、固定化後、洗浄によって円石から遊離する
酵素は認められなかった。結果を表１に示す。なお、比
較例として円石の代わりに平均粒径２〜３μｍの市販の
コート紙用の炭酸カルシウム粉末を担体として用い、上
記と同様にして酵素の固定化を行なった場合の結果を表
１に併せ示した。
１mlに酵素ウリカーゼ１mgを溶解し、これに実施例１で
得られたプレウロクリシス・カルテレの円石１０mgを懸
濁した。これを振盪攪拌しつつ、４℃にて１２時間放置
し酵素を円石に吸着、固定化せしめた。これを微量卓上
遠心機にて１５０００rpmで５分間遠心分離した。沈殿
を酵素を含まない上記緩衝液１mlに再懸濁し、洗浄して
再度遠心分離した。固定化酵素量は、固定化前の緩衝液
中の酵素量と固定化後の緩衝液中の酵素量の差により求
めた。なお、固定化後、洗浄によって円石から遊離する
酵素は認められなかった。結果を表１に示す。なお、比
較例として円石の代わりに平均粒径２〜３μｍの市販の
コート紙用の炭酸カルシウム粉末を担体として用い、上
記と同様にして酵素の固定化を行なった場合の結果を表
１に併せ示した。
【００１５】実施例３ プレウロクリシス・カルテレの代わりに、エミリアニア
・ハクスレイ（Emiliania huxleyi）を用いた以外は実
施例１と同様にして１．５ｇの白色粉末を得た。この粉
末の走査型電子顕微鏡写真（スケールは１０μｍ）を図
３に示す。図３からわかるように円石は長径３．５〜
５．０μｍ、短径３．０〜４．０μｍの楕円状であっ
た。図４に１個の円石の走査型電子顕微鏡写真（スケー
ルは１μｍ）を示す。
・ハクスレイ（Emiliania huxleyi）を用いた以外は実
施例１と同様にして１．５ｇの白色粉末を得た。この粉
末の走査型電子顕微鏡写真（スケールは１０μｍ）を図
３に示す。図３からわかるように円石は長径３．５〜
５．０μｍ、短径３．０〜４．０μｍの楕円状であっ
た。図４に１個の円石の走査型電子顕微鏡写真（スケー
ルは１μｍ）を示す。
【００１６】
【表１】
【００１７】実施例４ 実施例３で得られた円石を用い、実施例２と同様の手段
によりＦＩＴＣ標識抗マウスＩｇＧ抗体を円石に固定化
した。その結果、円石１mgに対し８μｇの抗体が固定化
された。得られた固定化抗体を用いて、マウスＩｇＧ標
準液のフルオロイムノアッセイを行なった。その結果を
図５に示す。なお、測定条件は次の通りである。 固定化抗体量（円石含む）：１mg サンプル量 ：５０μｌ インキュベーション ：３７℃，１５分 励起波長 ４９０nm 測定波長 ５１３nm
によりＦＩＴＣ標識抗マウスＩｇＧ抗体を円石に固定化
した。その結果、円石１mgに対し８μｇの抗体が固定化
された。得られた固定化抗体を用いて、マウスＩｇＧ標
準液のフルオロイムノアッセイを行なった。その結果を
図５に示す。なお、測定条件は次の通りである。 固定化抗体量（円石含む）：１mg サンプル量 ：５０μｌ インキュベーション ：３７℃，１５分 励起波長 ４９０nm 測定波長 ５１３nm
【図１】プレウロクリシス・カルテレの培養物から分離
した円石の走査型電子顕微鏡写真である。写真中のスケ
ールは１０μｍを示す。
した円石の走査型電子顕微鏡写真である。写真中のスケ
ールは１０μｍを示す。
【図２】プレウロクリシス・カルテレの１個の円石の走
査型電子顕微鏡写真である。写真中のスケールは１μｍ
を示す。
査型電子顕微鏡写真である。写真中のスケールは１μｍ
を示す。
【図３】エミリアニア・ハクスレイの培養物から分離し
た円石の走査型電子顕微鏡写真である。写真中のスケー
ルは１０μｍを示す。
た円石の走査型電子顕微鏡写真である。写真中のスケー
ルは１０μｍを示す。
【図４】エミリアニア・ハクスレイの１個の円石の走査
型電子顕微鏡写真である。写真中のスケールは１μｍを
示す。
型電子顕微鏡写真である。写真中のスケールは１μｍを
示す。
【図５】ＦＩＴＣ標識抗マウスＩｇＧ抗体を固定化した
円石を用いたフルオロイムノアッセイの結果を示す。
円石を用いたフルオロイムノアッセイの結果を示す。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年４月８日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１３】実施例１ 海水９００ｍｌに対し、ＫＮＯ３ ５０５ｍｇ／ｌ、Ｋ
２ＨＰＯ４ ８７ｍｇ／ｌを含む水溶液を１００ｍｌ、
ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ １９．６ｍｇ／ｌ、ＺｎＳＯ４
・７Ｈ２Ｏ ４４ｍｇ／ｌ、ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ ２
０ｍｇ／ｌ、ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ ３６０ｍｇ／ｌ、
ＮａＭｎＯ３・２Ｈ２Ｏ １２．６ｍｇ／ｌ、Ｆｅ−Ｅ
ＤＴＡ １０ｇ／ｌを含む微量元素混液を１ｍｌ、チア
ミン２００ｍｇ／ｌ、ビオチン１ｍｇ／ｌ、コバミド
０．２ｍｇ／ｌを含むビタミン混液を１ｍｌの割合でそ
れぞれ添加したエプレイの培地を調製し、これにプレウ
ロクリシス・カルテレ（Ｐｌｅｕｒｏｃｈｒｙｓｉｓ
ｃａｒｔｅｒａｅ）を約５０ｍｇ乾重量／ｌとなるよう
に接種し、容量１０リットルの円筒形ガラス容器に入れ
た。ガラス容器のまわりに蛍光灯を配し、ガラス容器の
表面の照度が約３０００ルクスとなるようにした。光の
照射は、明期１６時間、暗期８時間の間欠照射とした。
空気の通気により、二酸化炭素の供給と培地の攪拌を行
ないつつ、２０℃で７日間培養した。これによって約４
００ｍｇ乾重量／ｌのプレウロクリシス培養物を得た。
遠心分離（３０００ｒｐｍ，５分）によって集めた６．
６ｇ乾重量の藻体を１リットルの海水に懸濁し、５分間
超音波（周波数２７ＫＨｚ，出力１００Ｗ）処理を行な
った。この懸濁液を遠心分離し、沈殿を５０ｍＭの重炭
酸ナトリウム水溶液１リットルに再懸濁した。次いで２
分間上記と同様の超音波処理をしたのち、攪拌しながら
室温に１２時間放置した。この懸濁液を遠心分離し、沈
殿を５０ｍＭ重炭酸ナトリウム水溶液１リットルに再懸
濁し、洗浄して再度遠心分離した。沈殿を５０ｍＭ重炭
酸ナトリウム水溶液１リットルに再懸濁し、上記超音波
処理から洗浄までの一連の操作をさらに２回繰り返し
た。最後に、遠心分離によって得た白色沈殿を減圧下に
乾燥し、１．０ｇの粉末を得た。この粉末を走査型電子
顕微鏡で観察したところ、約０．５μｍの分節が２０〜
３０個リング状に連なった長径１．５〜２．０μｍ、短
径２．３〜２．８μｍの楕円状であった。
２ＨＰＯ４ ８７ｍｇ／ｌを含む水溶液を１００ｍｌ、
ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ １９．６ｍｇ／ｌ、ＺｎＳＯ４
・７Ｈ２Ｏ ４４ｍｇ／ｌ、ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ ２
０ｍｇ／ｌ、ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ ３６０ｍｇ／ｌ、
ＮａＭｎＯ３・２Ｈ２Ｏ １２．６ｍｇ／ｌ、Ｆｅ−Ｅ
ＤＴＡ １０ｇ／ｌを含む微量元素混液を１ｍｌ、チア
ミン２００ｍｇ／ｌ、ビオチン１ｍｇ／ｌ、コバミド
０．２ｍｇ／ｌを含むビタミン混液を１ｍｌの割合でそ
れぞれ添加したエプレイの培地を調製し、これにプレウ
ロクリシス・カルテレ（Ｐｌｅｕｒｏｃｈｒｙｓｉｓ
ｃａｒｔｅｒａｅ）を約５０ｍｇ乾重量／ｌとなるよう
に接種し、容量１０リットルの円筒形ガラス容器に入れ
た。ガラス容器のまわりに蛍光灯を配し、ガラス容器の
表面の照度が約３０００ルクスとなるようにした。光の
照射は、明期１６時間、暗期８時間の間欠照射とした。
空気の通気により、二酸化炭素の供給と培地の攪拌を行
ないつつ、２０℃で７日間培養した。これによって約４
００ｍｇ乾重量／ｌのプレウロクリシス培養物を得た。
遠心分離（３０００ｒｐｍ，５分）によって集めた６．
６ｇ乾重量の藻体を１リットルの海水に懸濁し、５分間
超音波（周波数２７ＫＨｚ，出力１００Ｗ）処理を行な
った。この懸濁液を遠心分離し、沈殿を５０ｍＭの重炭
酸ナトリウム水溶液１リットルに再懸濁した。次いで２
分間上記と同様の超音波処理をしたのち、攪拌しながら
室温に１２時間放置した。この懸濁液を遠心分離し、沈
殿を５０ｍＭ重炭酸ナトリウム水溶液１リットルに再懸
濁し、洗浄して再度遠心分離した。沈殿を５０ｍＭ重炭
酸ナトリウム水溶液１リットルに再懸濁し、上記超音波
処理から洗浄までの一連の操作をさらに２回繰り返し
た。最後に、遠心分離によって得た白色沈殿を減圧下に
乾燥し、１．０ｇの粉末を得た。この粉末を走査型電子
顕微鏡で観察したところ、約０．５μｍの分節が２０〜
３０個リング状に連なった長径１．５〜２．０μｍ、短
径２．３〜２．８μｍの楕円状であった。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１５】実施例３ プレウロクリシス・カルテレの代わりに、エミリアニア
・ハクスレイ（Ｅｍｉｌｉａｎｉａ ｈｕｘｌｅｙｉ）
を用いた以外は実施例１と同様にして１．５ｇの白色粉
末を得た。この粉末を走査型電子顕微鏡で観察したとこ
ろ、約１μｍの分節が３５〜４５個リング状に連なった
長径３．５〜５．０μｍ、短径３．０〜４．０μｍの楕
円状であった。
・ハクスレイ（Ｅｍｉｌｉａｎｉａ ｈｕｘｌｅｙｉ）
を用いた以外は実施例１と同様にして１．５ｇの白色粉
末を得た。この粉末を走査型電子顕微鏡で観察したとこ
ろ、約１μｍの分節が３５〜４５個リング状に連なった
長径３．５〜５．０μｍ、短径３．０〜４．０μｍの楕
円状であった。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１７】実施例４ 実施例３で得られた円石を用い、実施例２と同様の手段
によりＦＩＴＣ標識抗マウスＩｇＧ抗体を円石に固定化
した。その結果、円石１ｍｇに対し８μｇの抗体が固定
化された。得られた固定化抗体を用いて、マウスＩｇＧ
標準液のフルオロイムノアッセイを行なった。その結果
を図１に示す。なお、測定条件は次の通りである。 固定化抗体量（円石含む）：１ｍｇ サンプル量 ：５０μｌ インキュベーション ：３７℃，１５分 励起波長 ４９０ｎｍ 測定波長 ５１３ｎｍ
によりＦＩＴＣ標識抗マウスＩｇＧ抗体を円石に固定化
した。その結果、円石１ｍｇに対し８μｇの抗体が固定
化された。得られた固定化抗体を用いて、マウスＩｇＧ
標準液のフルオロイムノアッセイを行なった。その結果
を図１に示す。なお、測定条件は次の通りである。 固定化抗体量（円石含む）：１ｍｇ サンプル量 ：５０μｌ インキュベーション ：３７℃，１５分 励起波長 ４９０ｎｍ 測定波長 ５１３ｎｍ
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】ＦＩＴＣ標識抗マウスＩｇＧ抗体を固定化した
円石を用いたフルオロイムノアッセイの結果を示す。
円石を用いたフルオロイムノアッセイの結果を示す。
【手続補正５】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正内容】
【図１】
フロントページの続き (72)発明者 松永 是 東京都府中市幸町２の41の13 府中第三住 宅２の304
Claims (2)
- 【請求項１】 円石藻類の培養物を重炭酸塩水溶液中で
超音波処理することを特徴とする円石藻類より円石を分
離する方法。 - 【請求項２】 担体に酵素又は抗体を固定化する方法に
おいて、担体として円石藻類の培養物を重炭酸塩水溶液
中で超音波処理することにより円石藻類から分離された
円石を使用することを特徴とする酵素又は抗体の固定化
方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24779191 | 1991-09-26 | ||
| JP3-247791 | 1991-09-26 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05308970A true JPH05308970A (ja) | 1993-11-22 |
Family
ID=17168705
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4055187A Pending JPH05308970A (ja) | 1991-09-26 | 1992-03-13 | 円石の分離方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05308970A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9090881B2 (en) | 2008-10-21 | 2015-07-28 | Canadian Pacific Algae Inc. | Method for the efficient and continuous growth and harvesting of nutrient-rich phytoplankton and methods of using the same |
-
1992
- 1992-03-13 JP JP4055187A patent/JPH05308970A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9090881B2 (en) | 2008-10-21 | 2015-07-28 | Canadian Pacific Algae Inc. | Method for the efficient and continuous growth and harvesting of nutrient-rich phytoplankton and methods of using the same |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |