JPH05317076A - 発酵法によるアデノシンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 バチルス属に属し、生育のためにグアニンを
要求し、チオアデニルサルフェート耐性及びアデノシン
生産能を有する変異株を液体培地中に培養し、培養液中
にアデノシンを生成蓄積せしめ、これを採取することを
特徴とする発酵法によるアデノシンの製造法。 【効果】 本発明の方法により、従来法より工業的に有
利にアデノシンを製造することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は発酵法によるアデノシン
の製造法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】従来、発酵法によるアデノシン製造法に
関しては、通常の炭素源や窒素源から直接アデノシンを
生産する方法として、イソロイシン要求性を有するバチ
ルス・ズブチリスを用いる方法（昭和３９年度日本農芸
化学会大会）、キサンチン、ヒスチジン及びスレオニン
要求性を有し、かつ８−アザキサンチン耐性を有するバ
チルス・ズブチリスを用いる方法（Agric. Biol. Che
m., 35, 1906 (1971)）、あるいはバチルス属に属し、
生育のためにグアニンを要求し、８−アザアデニン及び
／又は６−メチルアミノプリンに耐性を有する変異株を
用いる方法（特開昭６０−７８５９３号公報）等が知ら
れている。しかしながら、これらの製造法は、いずれも
アデノシンの生産性が低く、工業生産においてより有利
なアデノシンの製造法の開発が望まれていた。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、従来
法より安価かつ効率的な発酵法によるアデノシンの製造
法を提供することである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、従来法よ
り工業的に有利な発酵法によるアデノシンの製造法を開
発するために鋭意研究を重ねた結果、バチルス属に属す
るグアニン要求性のアデノシン生産菌にチオアデニルサ
ルフェート耐性を付与することにより、アデノシンの生
産能が飛躍的に向上することを見いだし、この知見に基
づいて本発明を完成するに至った。

【０００５】すなわち、本発明は、バチルス属に属し、
生育のためにグアニンを要求し、チオアデニルサルフェ
ート耐性及びアデノシン生産能を有する変異株を液体培
地中に培養し、培養液中にアデノシンを生成蓄積せし
め、これを採取することを特徴とする発酵法によるアデ
ノシンの製造法を提供するものである。

【０００６】本発明において用いられる変異株は、バチ
ルス属に属し、生育のためにグアニンを要求し、チオア
デニルサルフェート耐性及びアデノシン生産能を有する
ものであり、具体的に例示すると以下のような菌株が挙
げられる。バチルス・ズブチリス ＡＪ１２７０８（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１２９５２）

【０００７】また、上記菌株にイソロイシン要求性、８
−アザキサンチン耐性、８−アザアデニン耐性及び６−
メチルアミノプリン耐性等の性質を付与することによ
り、更にアデノシン生産能の高い菌株を得ることができ
るが、そのような菌株の本発明の変異株に含まれる。

【０００８】このような本発明の変異株は、バチルス属
に属するグアニン要求性のアデノシン生産菌を親株と
し、これに通常の変異誘導操作、例えば紫外線、Ｘ線等
の照射、あるいはＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニト
ロソグアニジン（以下、ＮＧと略す）、亜硝酸等の化学
薬剤処理を施し、変異処理した菌体を親株が生育できな
いような濃度のチオアデニルサルフェートを含有する寒
天平板培地で培養し、該平板培地上に生育するコロニー
を分離することによって得ることができる。

【０００９】バチルス属に属するグアニン要求性のアデ
ノシン生産菌は公知のものを使用すればよいが、具体例
としては以下のような菌株が使用される。バチルス・ズ
ブチリス ＡＪ１２７０７（ＦＥＲＭ Ｐ−１２９５
１）

【００１０】次に本発明で使用する変異株の取得法及び
チオアデニルサルフェートに対する耐性度を以下の実験
例にて示す。

【００１１】実験例 バチルス・ズブチリス ＡＴＣＣ６６４３より誘導した
グアニン要求性のアデノシン生産菌ＡＪ１２７０７を天
然斜面培地で培養し、生育した菌体を１００ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁し（１ｍｌ当り１０⁹〜１
０¹⁰個の菌体を含む）、これに２５０μｇ／ｍｌ濃度と
なるようにＮＧを加えて３４℃で３０分間保持した。こ
のようにしてＮＧ処理した菌体を同緩衝液で充分洗浄し
た後、５００μｇ／ｍｌのチオアデニルサルフェートを
含む表１に示す組成の最少寒天平板培地に塗布し、３４
℃で４日間培養した。平板上に生育したコロニーのうち
大きなものをチオアデニルサルフェート耐性株として採
取した。このようにして得られた耐性株の内には親株よ
りアデノシン生産能の優れたものが多く見いだされ、そ
の１株としてＡＪ１２７０８を取得した。

【００１２】

【表１】

【００１３】かくして得られた本発明の変異株並びにそ
の親株のチオアデニルサルフェートに対する耐性度を次
の方法により調べた。表２に示す組成の最少培地に表３
の各濃度のチオアデニルサルフェートを添加して試験管
に４ｍｌずつ分注し加熱殺菌した後、表２に示した最少
培地でよく洗浄した各菌株の菌体を接種し、３４℃で２
０時間振盪培養を行った。培養終了後、培養液の５６０
ｎｍにおける吸光度を測定した。表３には各培地での生
育度を相対値で示した。

【００１４】

【表２】

【００１５】

【表３】

【００１６】本発明で使用する液体培地は、炭素源、窒
素源、無機塩類、グアニン及びその他必要に応じてアミ
ノ酸、ビタミン、核酸等の有機微量栄養素を含有する通
常の栄養培地である。炭素源としては、使用する変異株
が利用可能なものであればよく、グルコース、シュクロ
ース、フラクトース、マルトース等の糖類、これら糖類
を含有する澱粉糖化液、甘藷糖蜜、甜菜糖蜜、ハイテス
トモラセス等が使用され、更には酢酸等の有機酸類、エ
タノール、グリセリン等のアルコール類も使用される。
窒素源としては、アンモニアガス、アンモニア水、アン
モニウム塩類、尿素、硝酸塩類等が使用され、その他補
助的に使用される有機窒素源として、油粕類、大豆加水
分解液、コーンスティープリカー、酵母エキス、ペプト
ン等が挙げられる。無機塩類としては、リン酸塩、マグ
ネシウム塩、カルシウム塩、鉄塩、マンガン塩等が適宜
使用される。又、栄養要求物質としてのグアニンは、グ
アニン、グアニン鉱酸塩、グアノシン、グアニル酸、リ
ポ核酸等のいずれも使用できる。また本発明の変異株に
アミノ酸等の要求性を付与することにより更にアデノシ
ンの収量が向上することもあるが、その場合にはその要
求物質を補添することが必要である。

【００１７】微生物の培養は通常ｐＨ４ないし１０、温
度２０ないし４０℃の範囲で好気的条件下で行われる。
培養液のｐＨ調整は、無機あるいは有機の酸、アルカリ
性物質、更には尿素、炭酸カルシウム、アンモニアガス
などによって行う。かくして２ないし５日間培養するこ
とにより、培養液中に著量のアデノシンが生成蓄積され
る。

【００１８】培養液からアデノシンを採取する方法は公
知の方法に従って行えばよく、例えば菌体を分離除去
し、イオン交換樹脂処理法あるいは濃縮冷却晶析法、膜
分離法、その他の方法を組み合わせることにより行なわ
れる。不純物を除くためには常法の活性炭吸着法及び再
結法を用いて精製してもよい。

【００１９】

【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
する。

【００２０】実施例１ 表４に示す組成の培地２０ｍｌを５００ｍｌ振盪フラス
コに分注し、加熱殺菌した。これに予め天然寒天斜面培
地上で生育させたバチルス・ズブチリス ＡＪ１２７０
７及びＡＪ１２７０８を一白金耳量接種し、３４℃にて
７２時間振盪培養を行った。培養終了後、培養液中に生
成蓄積したアデノシンの量を高速液体クロマトグラフィ
ーにより定量した結果は表５に示す通りであった。

【００２１】

【表４】

【００２２】

【表５】

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 バチルス属に属し、生育のためにグアニ
   ンを要求し、チオアデニルサルフェート耐性及びアデノ
   シン生産能を有する変異株を液体培地中に培養し、培養
   液中にアデノシンを生成蓄積せしめ、これを採取するこ
   とを特徴とする発酵法によるアデノシンの製造法。