JPH053280B2 - - Google Patents
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- JPH053280B2 JPH053280B2 JP13969485A JP13969485A JPH053280B2 JP H053280 B2 JPH053280 B2 JP H053280B2 JP 13969485 A JP13969485 A JP 13969485A JP 13969485 A JP13969485 A JP 13969485A JP H053280 B2 JPH053280 B2 JP H053280B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- rhamnose
- flavonoid
- highly purified
- enzyme
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、Ｌ−ラムノースを有するフラボノイ
ド配糖体にラムノシド結合を選択的に開裂する酵
素を作用させ、Ｌ−ラムノースのみを該フラボノ
イド配糖体から遊離したのち、反応液からラムノ
シド結合の切断されたフラボノイド化合物を沈澱
させ除去して、残存する溶液から高純度のＬ−ラ
ムノースをうることを特徴とするＬ−ラムノース
の製造法に関する。 Ｌ−ラムノースは化学合成の困難な単糖である
が、近年種々の用途が開発され需要が拡大しつつ
ある化合物である。Ｌ−ラムノースは、天然には
微生物の細胞壁やフラボノイド配糖体の中に存在
している。特にわが国の特産品である温州ミカン
中に大量に含まれているヘスペリジン、グレープ
フルーツおよびザボンなどに含まれているナリン
ジン、ナツミカンおよび八朔中に含まれるネオヘ
スペリジンなどのフラボノイド配糖体において
は、Ｌ−ラムノースは、グルコースとアグリコン
とがグルコシド結合してできているフラボノイド
化合物（たとえば、ヘスペレチン−７−グルコシ
ド）のグルコースと、ラムノシド結合している。
これらのフラボノイド配糖体は用途が乏しいため
その利用が一般的に行なわれていなかつたが、本
発明者はこれらが有用なＬ−ラムノースを含むこ
とに注目し、Ｌ−ラムノースのすぐれた原料源と
して該フラボノイド配糖体から新規なプロセスに
より高純度のＬ−ラムノースを高収率で取得する
製法を開発し、本発明を完成するにいたつた。 本発明の方法はヘスペリジン、ナリンジン、ポ
ンシリン、リナリンおよびネオヘスペリジンなど
のラムノースを有するフラボノイド配糖体を、菌
体が産生するヘスペリジナーゼおよびナリンジナ
ーゼなどのアグリコンとグルコースとのグルコシ
ド結合部には作用せず、ラムノシド結合部のみを
選択的に開裂する酵素（ラムノシド結合を選択的
に開裂する酵素と称する）で処理し、ラムノース
を遊離させ、しかるのちに沈澱析出するフラボノ
イド化合物の大部分を濾別して除去したのち、溶
解している微量のフラボノイド化合物を吸着クロ
マトグラフまたは有機溶媒での処理によつて反応
液から除去し、高純度のＬ−ラムノースをうるこ
とを特徴とする。 本発明の方法によれば、Ｌ−ラムノースを有す
るフラボノイド配糖体からＬ−ラムノースを高収
量でうることができる。 Ｌ−ラムノースを有するフラボノイド配糖体の
基質からＬ−ラムノースのみを選択的に遊離させ
るために、基質のラムノシド結合を開裂する酵素
を使用する。酵素は、純品ばかりでなく種々の精
製段階の酵素を使用することができ、たとえば同
酵素を産生する菌体の培養液を使用してもよい。 使用する酵素としては、アスペルギルス属
（Aspergillus）に属する菌たとえばアスベルギル
ス・ニガー（Aspergillus niger）IAM2531が産
生する酵素（ナリンジナーゼとして市販されてい
る）、ペニシリウム属（Penicillium）に属する菌
たとえばペニシリウム・プルプロゲヌム
（Penicillium purpurogenum）IFO7756が産生す
る酵素（ヘスペリジナーゼとして市販されてい
る）、ハンゼニユラ属（Hansenula）が産生する
酵素など、ペニシリウム属、アスペルギルス属の
酵素またはその類似の反応を有するものが用いら
れる。 酵素または菌体培養液によるラムノシド結合の
開裂後、反応液を、たとえば氷冷することによ
り、Ｌ−ラムノースに切断されたフラボノイド化
合物の大部分が沈澱析出し濾別により反応液から
除去することができる。 微量のフラボノイド化合物が反応液中に溶解し
ているが、これを除去するために、酸性状態にし
水に難溶性の極性有機溶媒を用いてフラボノイド
化合物を完全に抽出除去する方法、またはフラボ
ノイド化合物を吸着する吸着剤たとえばスチレン
DVB系吸着剤カラム中に反応液を通過させる方
法が用いられる。つぎにアニオン交換樹脂カラム
中に水溶液を通し脱塩し濃縮したのち、メタノー
ルの添加により高純度のＬ−ラムノースを収率よ
く結晶として単離することができる。 反応条件としては、使用する酵素の至適PHにお
いて反応が行なわれ、酵素を種類によつて異なる
が、通常PH３〜７が適している。フラボノイド化
合物の除去は、酸性条件下、好ましくはPH３以下
で、イソ−ブタノール、シクロヘキサノン、イソ
−アミルアルコールまたはｎ−ブタノールのよう
な極性有機溶媒で抽出するか、または三菱化成工
業(株)製のSP−207、HP−20、Ｓ−861、Ｓ−862
またはXAD−４のようなスチレンPVB系吸着剤
（約３％）を用いて吸着除去することによつて行
なう。 つぎに実施例を用いて本発明をさらに詳しく説
明するが、本発明はもとよりこれらに限られるも
のではない。 実施例 １ ヘスペリジン25ｇを0.05N水酸化ナトリウム溶
液２に溶解し、塩酸でPHを3.5に調整し、これ
に市販のヘスペリジナーゼ100mgを添加し、50℃
にて４時間振とうして反応させた。ラムノシド結
合の開裂は、ほぼ理論値の100％であつた。反応
終了後、氷冷し、大部分のヘスペレチン−７−グ
ルコシドを沈澱させ除去した。つぎに硫酸の添加
によりPHを１としたのち、シクロヘキサノン50ml
によつて水溶液中に存在する微量のヘスペレチン
−７−グルコシドを２回抽出除去した。水相はア
ニオン交換樹脂IR−120で脱塩、濃縮し、つづい
てメタノールを加え冷却しＬ−ラムノース・１水
和物5.5ｇを白色結晶としてえた（収率：75％、
m.p.：93.5℃、［α］20 D＋9.1）。 実施例 ２ ナリンジン25ｇを0.05N水酸化ナトリウム溶液
２に溶解したのち、塩酸によりPHを4.5に調整
し、これに市販のナリンジナーゼ80mgを添加し、
40℃にて４時間振とうして反応させた。反応液を
実施例１と同じ操作にしたがつて処理してＬ−ラ
ムノース・１水和物6.0ｇを白色結晶としてえた
（収率：76％、m.p.：93.0℃、［α］20 D＋9.0）。 実施例 ３ 実施例１にしたがつてヘスペリジン25ｇを加水
分解したのち、析出させたヘスペレチン−７−グ
ルコシドの大部分を冷却除去し、塩酸の添加によ
りPH３に調整した。一方、内径が２cmで長さが30
cmのカラムにスチレンDVB系吸着剤Sp−207を
充填し、イオン交換水およびPHが３の塩酸酸性液
により充分に洗浄したのち、上記の調整溶液をカ
ラム中に通し残存するヘスペレチン−７−グルコ
シドを吸着除去した。つづいてアニオン交換樹脂
IR−120カラムにより脱塩、濃縮し、メタノール
を加え冷却してＬ−ラムノース・１水和物5.0ｇ
を白色結晶としてえた（収率：67％、m.p.：93.0
℃、［α］20 D＋9.0）。 実施例 ４ ペブトン0.5部、イーストエキス0.3部およびグ
ルコース0.1部を有しPHを5.0に調整した培地にハ
ンゼニウラ属SP株を植菌して40℃にて48時間振
とう培養した培養液100mlを、0.2％のヘスペリジ
ンを有する水溶液100mlに加え酢酸バツフアーに
よりPH４に調整した。これを40℃にて２時間振と
うして反応させた。この反応によりヘスペリジン
に結合したＬ−ラムノースの約50％が選択的に切
断された。反応の進行状況については薄層クロマ
トグラム（展開液：酢酸エチル／イソプロピルア
ルコール／水の系）により確認を行なつた。 以下実施例５〜８を実施例１〜４と同様にして
行なつた結果を第１表に示す。 【表】
ド配糖体にラムノシド結合を選択的に開裂する酵
素を作用させ、Ｌ−ラムノースのみを該フラボノ
イド配糖体から遊離したのち、反応液からラムノ
シド結合の切断されたフラボノイド化合物を沈澱
させ除去して、残存する溶液から高純度のＬ−ラ
ムノースをうることを特徴とするＬ−ラムノース
の製造法に関する。 Ｌ−ラムノースは化学合成の困難な単糖である
が、近年種々の用途が開発され需要が拡大しつつ
ある化合物である。Ｌ−ラムノースは、天然には
微生物の細胞壁やフラボノイド配糖体の中に存在
している。特にわが国の特産品である温州ミカン
中に大量に含まれているヘスペリジン、グレープ
フルーツおよびザボンなどに含まれているナリン
ジン、ナツミカンおよび八朔中に含まれるネオヘ
スペリジンなどのフラボノイド配糖体において
は、Ｌ−ラムノースは、グルコースとアグリコン
とがグルコシド結合してできているフラボノイド
化合物（たとえば、ヘスペレチン−７−グルコシ
ド）のグルコースと、ラムノシド結合している。
これらのフラボノイド配糖体は用途が乏しいため
その利用が一般的に行なわれていなかつたが、本
発明者はこれらが有用なＬ−ラムノースを含むこ
とに注目し、Ｌ−ラムノースのすぐれた原料源と
して該フラボノイド配糖体から新規なプロセスに
より高純度のＬ−ラムノースを高収率で取得する
製法を開発し、本発明を完成するにいたつた。 本発明の方法はヘスペリジン、ナリンジン、ポ
ンシリン、リナリンおよびネオヘスペリジンなど
のラムノースを有するフラボノイド配糖体を、菌
体が産生するヘスペリジナーゼおよびナリンジナ
ーゼなどのアグリコンとグルコースとのグルコシ
ド結合部には作用せず、ラムノシド結合部のみを
選択的に開裂する酵素（ラムノシド結合を選択的
に開裂する酵素と称する）で処理し、ラムノース
を遊離させ、しかるのちに沈澱析出するフラボノ
イド化合物の大部分を濾別して除去したのち、溶
解している微量のフラボノイド化合物を吸着クロ
マトグラフまたは有機溶媒での処理によつて反応
液から除去し、高純度のＬ−ラムノースをうるこ
とを特徴とする。 本発明の方法によれば、Ｌ−ラムノースを有す
るフラボノイド配糖体からＬ−ラムノースを高収
量でうることができる。 Ｌ−ラムノースを有するフラボノイド配糖体の
基質からＬ−ラムノースのみを選択的に遊離させ
るために、基質のラムノシド結合を開裂する酵素
を使用する。酵素は、純品ばかりでなく種々の精
製段階の酵素を使用することができ、たとえば同
酵素を産生する菌体の培養液を使用してもよい。 使用する酵素としては、アスペルギルス属
（Aspergillus）に属する菌たとえばアスベルギル
ス・ニガー（Aspergillus niger）IAM2531が産
生する酵素（ナリンジナーゼとして市販されてい
る）、ペニシリウム属（Penicillium）に属する菌
たとえばペニシリウム・プルプロゲヌム
（Penicillium purpurogenum）IFO7756が産生す
る酵素（ヘスペリジナーゼとして市販されてい
る）、ハンゼニユラ属（Hansenula）が産生する
酵素など、ペニシリウム属、アスペルギルス属の
酵素またはその類似の反応を有するものが用いら
れる。 酵素または菌体培養液によるラムノシド結合の
開裂後、反応液を、たとえば氷冷することによ
り、Ｌ−ラムノースに切断されたフラボノイド化
合物の大部分が沈澱析出し濾別により反応液から
除去することができる。 微量のフラボノイド化合物が反応液中に溶解し
ているが、これを除去するために、酸性状態にし
水に難溶性の極性有機溶媒を用いてフラボノイド
化合物を完全に抽出除去する方法、またはフラボ
ノイド化合物を吸着する吸着剤たとえばスチレン
DVB系吸着剤カラム中に反応液を通過させる方
法が用いられる。つぎにアニオン交換樹脂カラム
中に水溶液を通し脱塩し濃縮したのち、メタノー
ルの添加により高純度のＬ−ラムノースを収率よ
く結晶として単離することができる。 反応条件としては、使用する酵素の至適PHにお
いて反応が行なわれ、酵素を種類によつて異なる
が、通常PH３〜７が適している。フラボノイド化
合物の除去は、酸性条件下、好ましくはPH３以下
で、イソ−ブタノール、シクロヘキサノン、イソ
−アミルアルコールまたはｎ−ブタノールのよう
な極性有機溶媒で抽出するか、または三菱化成工
業(株)製のSP−207、HP−20、Ｓ−861、Ｓ−862
またはXAD−４のようなスチレンPVB系吸着剤
（約３％）を用いて吸着除去することによつて行
なう。 つぎに実施例を用いて本発明をさらに詳しく説
明するが、本発明はもとよりこれらに限られるも
のではない。 実施例 １ ヘスペリジン25ｇを0.05N水酸化ナトリウム溶
液２に溶解し、塩酸でPHを3.5に調整し、これ
に市販のヘスペリジナーゼ100mgを添加し、50℃
にて４時間振とうして反応させた。ラムノシド結
合の開裂は、ほぼ理論値の100％であつた。反応
終了後、氷冷し、大部分のヘスペレチン−７−グ
ルコシドを沈澱させ除去した。つぎに硫酸の添加
によりPHを１としたのち、シクロヘキサノン50ml
によつて水溶液中に存在する微量のヘスペレチン
−７−グルコシドを２回抽出除去した。水相はア
ニオン交換樹脂IR−120で脱塩、濃縮し、つづい
てメタノールを加え冷却しＬ−ラムノース・１水
和物5.5ｇを白色結晶としてえた（収率：75％、
m.p.：93.5℃、［α］20 D＋9.1）。 実施例 ２ ナリンジン25ｇを0.05N水酸化ナトリウム溶液
２に溶解したのち、塩酸によりPHを4.5に調整
し、これに市販のナリンジナーゼ80mgを添加し、
40℃にて４時間振とうして反応させた。反応液を
実施例１と同じ操作にしたがつて処理してＬ−ラ
ムノース・１水和物6.0ｇを白色結晶としてえた
（収率：76％、m.p.：93.0℃、［α］20 D＋9.0）。 実施例 ３ 実施例１にしたがつてヘスペリジン25ｇを加水
分解したのち、析出させたヘスペレチン−７−グ
ルコシドの大部分を冷却除去し、塩酸の添加によ
りPH３に調整した。一方、内径が２cmで長さが30
cmのカラムにスチレンDVB系吸着剤Sp−207を
充填し、イオン交換水およびPHが３の塩酸酸性液
により充分に洗浄したのち、上記の調整溶液をカ
ラム中に通し残存するヘスペレチン−７−グルコ
シドを吸着除去した。つづいてアニオン交換樹脂
IR−120カラムにより脱塩、濃縮し、メタノール
を加え冷却してＬ−ラムノース・１水和物5.0ｇ
を白色結晶としてえた（収率：67％、m.p.：93.0
℃、［α］20 D＋9.0）。 実施例 ４ ペブトン0.5部、イーストエキス0.3部およびグ
ルコース0.1部を有しPHを5.0に調整した培地にハ
ンゼニウラ属SP株を植菌して40℃にて48時間振
とう培養した培養液100mlを、0.2％のヘスペリジ
ンを有する水溶液100mlに加え酢酸バツフアーに
よりPH４に調整した。これを40℃にて２時間振と
うして反応させた。この反応によりヘスペリジン
に結合したＬ−ラムノースの約50％が選択的に切
断された。反応の進行状況については薄層クロマ
トグラム（展開液：酢酸エチル／イソプロピルア
ルコール／水の系）により確認を行なつた。 以下実施例５〜８を実施例１〜４と同様にして
行なつた結果を第１表に示す。 【表】
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ Ｌ−ラムノースを有するフラボノイド配糖体
のラムノシド結合を選択的に開裂する酵素を作用
させ、Ｌ−ラムノースのみを該フラボノイド配糖
体から遊離したのち、反応液からラムノシド結合
の切断されたフラボノイド化合物を沈澱させ除去
して、残存する溶液から高純度のＬ−ラムノース
をうることを特徴とするＬ−ラムノースの製造
法。 ２ 前記高純度のＬ−ラムノースを含む水溶液中
に残存する微量のフラボノイド化合物を酸性状態
において水と混和しがたい極性有機溶媒で抽出除
去することによつてさらに高純度のＬ−ラムノー
スをうる特許請求の範囲第１項記載の製造法。 ３ 前記高純度のＬ−ラムノースを含む水溶液中
に残存する微量のフラボノイド化合物を酸性状態
において吸着クロマトグラフにより吸着除去する
ことによつてさらに高純度のＬ−ラムノースをう
る特許請求の範囲第１項記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13969485A JPS62293A (ja) | 1985-06-26 | 1985-06-26 | Ｌ−ラムノ−スの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13969485A JPS62293A (ja) | 1985-06-26 | 1985-06-26 | Ｌ−ラムノ−スの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62293A JPS62293A (ja) | 1987-01-06 |
| JPH053280B2 true JPH053280B2 (ja) | 1993-01-14 |
Family
ID=15251239
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13969485A Granted JPS62293A (ja) | 1985-06-26 | 1985-06-26 | Ｌ−ラムノ−スの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62293A (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK0575908T3 (da) * | 1992-06-25 | 2000-07-24 | Aventis Res & Tech Gmbh & Co | Pseudomonas aeroginosa og dens anvendelse til fremstilling af L-rhamnose |
| EP0599159B1 (de) | 1992-11-27 | 2001-09-19 | Aventis Research & Technologies GmbH & Co. KG | Heterogenes Proteingemisch mit alpha-L-rhamnosidase Aktivität, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung. |
| DE19850029A1 (de) * | 1998-10-30 | 2000-05-04 | Merck Patent Gmbh | Verfahren zur enzymatischen Spaltung von Rutinosiden |
-
1985
- 1985-06-26 JP JP13969485A patent/JPS62293A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62293A (ja) | 1987-01-06 |
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