JPS62293A - Ｌ−ラムノ−スの製造法 - Google Patents
Ｌ−ラムノ−スの製造法Info
- Publication number
- JPS62293A JPS62293A JP13969485A JP13969485A JPS62293A JP S62293 A JPS62293 A JP S62293A JP 13969485 A JP13969485 A JP 13969485A JP 13969485 A JP13969485 A JP 13969485A JP S62293 A JPS62293 A JP S62293A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- rhamnose
- flavonoid
- enzyme
- solution
- purity
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
ド配糖体にラムノシド結合を選択的に開裂する酵素を作
用させ、［一ラムノースのみを該フラボノイド配糖休か
ら遊離したのち、反応液からラムノシド結合の切断され
たフラボノイド化合物を沈澱させ除去して、残存する溶
液から高純度の［一ラムノースをうろことを特徴とする
［−ラムノースの製造法に関する。
用させ、［一ラムノースのみを該フラボノイド配糖休か
ら遊離したのち、反応液からラムノシド結合の切断され
たフラボノイド化合物を沈澱させ除去して、残存する溶
液から高純度の［一ラムノースをうろことを特徴とする
［−ラムノースの製造法に関する。
［一ラムノースは化学合成の困難な単糖であるが、近年
種々の用途が開発され需要が拡大しつつある化合物であ
る。し−ラムノースは、天然には微生物の細胞壁やフラ
ボノイド配糖体の中に存在している。特にわが国の特産
品である温州ミカン中に大量に含まれているヘスベリジ
ン、グレープフルーツおよびザポンなどに含まれている
ナリンジン、ナラミカンおよびへ朔中に含まれるネオヘ
スベリジンなどの中にグルコシド結合をなして結合して
いる。これらのフラボノイド配糖体は用途が乏しいため
その利用が一般的に行なわれていなかったが、本発明者
はこれらが有用なし−ラムノースを含むことに注目し、
し−ラムノースのすぐれた原料源として該フラボノイド
配糖体から新規なプロセスにより高純度のＬ−ラムノー
スを高収率で取得する製法を開発し、本発明を完成する
にいたった。
種々の用途が開発され需要が拡大しつつある化合物であ
る。し−ラムノースは、天然には微生物の細胞壁やフラ
ボノイド配糖体の中に存在している。特にわが国の特産
品である温州ミカン中に大量に含まれているヘスベリジ
ン、グレープフルーツおよびザポンなどに含まれている
ナリンジン、ナラミカンおよびへ朔中に含まれるネオヘ
スベリジンなどの中にグルコシド結合をなして結合して
いる。これらのフラボノイド配糖体は用途が乏しいため
その利用が一般的に行なわれていなかったが、本発明者
はこれらが有用なし−ラムノースを含むことに注目し、
し−ラムノースのすぐれた原料源として該フラボノイド
配糖体から新規なプロセスにより高純度のＬ−ラムノー
スを高収率で取得する製法を開発し、本発明を完成する
にいたった。
本発明の方法はヘスベリジン、ナリンジン、ボンシリン
、リナリンおよびネオヘスベリジンなどのラムノースを
有するフラボノイド配糖体を、菌体が産生ずるヘスベリ
ジナーゼおよびナリンジナーゼなどのラムノシド結合部
分を選択的に開裂する酵素で処理し、ラムノースを１ｌ
ａｌｔさせ、しかるのちに沈澱析出するフラボノイド化
合物の大部分を濾別して除去したのち、溶解している微
量のフラボノイド化合物を吸着クロマトグラフまたは有
機溶媒での処理によって反応液から除去し、高純度の［
−ラムノースをうろことを特徴とする。
、リナリンおよびネオヘスベリジンなどのラムノースを
有するフラボノイド配糖体を、菌体が産生ずるヘスベリ
ジナーゼおよびナリンジナーゼなどのラムノシド結合部
分を選択的に開裂する酵素で処理し、ラムノースを１ｌ
ａｌｔさせ、しかるのちに沈澱析出するフラボノイド化
合物の大部分を濾別して除去したのち、溶解している微
量のフラボノイド化合物を吸着クロマトグラフまたは有
機溶媒での処理によって反応液から除去し、高純度の［
−ラムノースをうろことを特徴とする。
本発明の方法によれば、し−ラムノースを有するフラボ
ノイド配糖体からＬ−ラムノースを高収量でうることが
できる。
ノイド配糖体からＬ−ラムノースを高収量でうることが
できる。
し−ラムノースを有するフラボノイド配糖体の基質から
Ｌ−ラムノースのみを選択的に遊離させるために、基質
のラムノシド結合を開裂する酵素を使用する。酵素は、
純品ばかりでなく種々の精製段階の酵素を使用すること
ができ、たとえば同酊素を産生する菌体の培養液を使用
してもよい。
Ｌ−ラムノースのみを選択的に遊離させるために、基質
のラムノシド結合を開裂する酵素を使用する。酵素は、
純品ばかりでなく種々の精製段階の酵素を使用すること
ができ、たとえば同酊素を産生する菌体の培養液を使用
してもよい。
使用する酵素としては、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒ
ｇ ｔ ｌ Ｉｕｓ）に属する菌たとえばアスペルギル
ス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）Ｊ
ＡＮ ２５３１が産生ずる酵素（ナリンジナーゼとして
市販されている）、ペニシリウムｎ （Ｐｅｎｉｃｉｌ
ｌｉｕｍ）に属する菌たとえばペニシリウム・プルブロ
ゲヌム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｕｒｐｕｒｏｇｅ
ｎｕｍ）ＩＦＯ７７５６が産生する酵素（ヘスベリジナ
ーゼとして市販されている）、ハンゼニュラ属（Ｈａｎ
ｓｅｎｕｌａ）が産生する酵素など、ペニシリウム属、
アスペルギルス属の酵素またはその類似の反応を有する
ものが用いられる。
ｇ ｔ ｌ Ｉｕｓ）に属する菌たとえばアスペルギル
ス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）Ｊ
ＡＮ ２５３１が産生ずる酵素（ナリンジナーゼとして
市販されている）、ペニシリウムｎ （Ｐｅｎｉｃｉｌ
ｌｉｕｍ）に属する菌たとえばペニシリウム・プルブロ
ゲヌム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｕｒｐｕｒｏｇｅ
ｎｕｍ）ＩＦＯ７７５６が産生する酵素（ヘスベリジナ
ーゼとして市販されている）、ハンゼニュラ属（Ｈａｎ
ｓｅｎｕｌａ）が産生する酵素など、ペニシリウム属、
アスペルギルス属の酵素またはその類似の反応を有する
ものが用いられる。
酵素または菌体１８養液によるラムノシド結合の開裂後
、反応液を、たとえば氷冷することにより、し−ラムノ
ースの切断されたフラボノイド化合物の大部分が沈澱析
出し濾別により反応液から除去することができる。
、反応液を、たとえば氷冷することにより、し−ラムノ
ースの切断されたフラボノイド化合物の大部分が沈澱析
出し濾別により反応液から除去することができる。
ｙｌｍのフラボノイド化合物が反応液中に溶解している
が、これを除去するために、酸性状態にし水に難溶性の
極性有機溶媒を用いてフラボノイド化合物゛を完全に抽
出除去する方法、またはフラボノイド化合物を吸着する
吸着剤たとえばスチレンｏＶＢ系吸着剤カラム中に反応
液を通過させる方法が用いられる。つぎにアニオン交換
樹脂カラム中に水溶液を通し脱温し濃縮したのち、メタ
ノールの添加により高純度の［−ラムノースを収率よく
結晶として単離することができる。
が、これを除去するために、酸性状態にし水に難溶性の
極性有機溶媒を用いてフラボノイド化合物゛を完全に抽
出除去する方法、またはフラボノイド化合物を吸着する
吸着剤たとえばスチレンｏＶＢ系吸着剤カラム中に反応
液を通過させる方法が用いられる。つぎにアニオン交換
樹脂カラム中に水溶液を通し脱温し濃縮したのち、メタ
ノールの添加により高純度の［−ラムノースを収率よく
結晶として単離することができる。
反応条件としては、使用する酵素の至適ｐＨにおいて反
応が行なわれ、酵素の種類によって異なるが、通常ｐＨ
３〜７が適している。フラボノイド化合物の除去は、酸
性条件下、好ましくはｐＨ３以下で、イソ−ブタノール
、シクロヘキサノン、イソ −アミルアルコールまたは
ｎ−ブタノールのような極性有機溶媒で抽出するか、ま
たは三菱化成工業■製の５Ｐ−２０７、ＨＰ−２０、Ｓ
−８ｆ３１、Ｓ−８６２またはＸＡＤ−４のようなスチ
レンＰＶＢ系吸着剤（約３％）を用いて吸着除去するこ
とによって行なう。
応が行なわれ、酵素の種類によって異なるが、通常ｐＨ
３〜７が適している。フラボノイド化合物の除去は、酸
性条件下、好ましくはｐＨ３以下で、イソ−ブタノール
、シクロヘキサノン、イソ −アミルアルコールまたは
ｎ−ブタノールのような極性有機溶媒で抽出するか、ま
たは三菱化成工業■製の５Ｐ−２０７、ＨＰ−２０、Ｓ
−８ｆ３１、Ｓ−８６２またはＸＡＤ−４のようなスチ
レンＰＶＢ系吸着剤（約３％）を用いて吸着除去するこ
とによって行なう。
つぎに実°施例を用いて本発明をさらに詳しく説明する
が、本発明はもとよりこれらに限られるものではない。
が、本発明はもとよりこれらに限られるものではない。
実施例１
ヘスベリジン２５ｇを０．０５８ 水酸化す１−リウ
ム溶液２ｇに溶解し、塩酸でＯＨを３．５に調整し、こ
れに市販のへスペリジナーゼ１００りを添加し、５０℃
にて４間抜振とうして反応させた。ラムノシド結合の開
裂は、はぼ理論値の１００％であった。反応終了後、氷
冷し、大部分のへスベレチン−７−グルコシドを沈澱さ
せ除去した。つぎにｌａ酸の添加によりｐＨを１とした
のち、シクロへキサノン５００−によって水溶液中に存
在する微量のへスペレチン−７−グルコシドを２回抽出
除去した。水相はアニオン交換樹脂ＩＲ−１２０でｆｌ
Ｒ塩、濃縮し、つづいてメタノールを加え冷却しＬ−ラ
ムノース・１水和物５．５ｇを白色結晶としてえた（収
率ニア５％、ＨＰ：９３．５℃、［α］ｏ＋９．１）。
ム溶液２ｇに溶解し、塩酸でＯＨを３．５に調整し、こ
れに市販のへスペリジナーゼ１００りを添加し、５０℃
にて４間抜振とうして反応させた。ラムノシド結合の開
裂は、はぼ理論値の１００％であった。反応終了後、氷
冷し、大部分のへスベレチン−７−グルコシドを沈澱さ
せ除去した。つぎにｌａ酸の添加によりｐＨを１とした
のち、シクロへキサノン５００−によって水溶液中に存
在する微量のへスペレチン−７−グルコシドを２回抽出
除去した。水相はアニオン交換樹脂ＩＲ−１２０でｆｌ
Ｒ塩、濃縮し、つづいてメタノールを加え冷却しＬ−ラ
ムノース・１水和物５．５ｇを白色結晶としてえた（収
率ニア５％、ＨＰ：９３．５℃、［α］ｏ＋９．１）。
実施例２
太リンジン２５ｇを０．０５Ｎ 水酸化ナトリウム溶
液２ｇに溶解したのち、塩酸によりＤＨを４．５に調整
し、これに市販のナリンジナーゼ８０ｑを添加し、４０
℃にて４間抜娠とうじて反応させた。
液２ｇに溶解したのち、塩酸によりＤＨを４．５に調整
し、これに市販のナリンジナーゼ８０ｑを添加し、４０
℃にて４間抜娠とうじて反応させた。
反応液を実！Ｖ１４１と同じ操作にしたがって処理して
Ｌ−ラムノース・１水和物６．０ｇを白色結晶としてえ
た（収率ニア６％、ＨＰ：９３．０℃、［α］Ｄ＋９．
０）。
Ｌ−ラムノース・１水和物６．０ｇを白色結晶としてえ
た（収率ニア６％、ＨＰ：９３．０℃、［α］Ｄ＋９．
０）。
実施例３
実施例１にしたがってヘスベリジン２５ｇを加水分解し
たのち、析出させたヘスベレチン−７−グルコシドの大
部分を冷却除去し、塩酸の添加によりＩ）Ｈを３．に調
整した。一方、内径が２ ｃｍで長さが３０ＣＩＲのカ
ラムにスチレンＤＶＢ系吸着剤５ｐ−２０７を充填し、
イオン交換水およびｐＨが３の塩ｌｉ！！酸性液により
充分に洗浄したのち、上記の調整溶液をカラム中に通し
残存するヘスベレチンー１−グルコシドを吸着除去した
。つづいてアニオン交換樹脂ｌ１ｌ−１２０カラムによ
り脱塩、濃縮し、メタノールを加え冷却してＬ−ラムノ
ース・１水和物５、Ｏｇを白色結晶としてえた（収率：
６７％、ＨＰ：９３．０℃、［α］。＋ ９，０）。
たのち、析出させたヘスベレチン−７−グルコシドの大
部分を冷却除去し、塩酸の添加によりＩ）Ｈを３．に調
整した。一方、内径が２ ｃｍで長さが３０ＣＩＲのカ
ラムにスチレンＤＶＢ系吸着剤５ｐ−２０７を充填し、
イオン交換水およびｐＨが３の塩ｌｉ！！酸性液により
充分に洗浄したのち、上記の調整溶液をカラム中に通し
残存するヘスベレチンー１−グルコシドを吸着除去した
。つづいてアニオン交換樹脂ｌ１ｌ−１２０カラムによ
り脱塩、濃縮し、メタノールを加え冷却してＬ−ラムノ
ース・１水和物５、Ｏｇを白色結晶としてえた（収率：
６７％、ＨＰ：９３．０℃、［α］。＋ ９，０）。
実施例４
ペプトン０．５部、イーストエキス０．３部およびグル
コース０．１部を有しｐＨを５．０に調整した培地にハ
ンゼニウラ属ＳＰ株を植菌して４０℃にて４８時間抜ど
う培養した培養液１００ｄを、０．２％のヘスベリジン
を有する水溶液１００−に加え酢酸バッファーによりＩ
ＩＨを４に調整した。これを４０℃にて２間抜撮とうし
て反応させた。この反応によりヘスベリジンに結合した
Ｌ−ラムノースの約５０％が選択的に切断された。反応
の進行状況については薄層クロマトグラム（展開液：酢
酸エチル／イソプロピルアルコール／水の系）により確
認を行なった。
コース０．１部を有しｐＨを５．０に調整した培地にハ
ンゼニウラ属ＳＰ株を植菌して４０℃にて４８時間抜ど
う培養した培養液１００ｄを、０．２％のヘスベリジン
を有する水溶液１００−に加え酢酸バッファーによりＩ
ＩＨを４に調整した。これを４０℃にて２間抜撮とうし
て反応させた。この反応によりヘスベリジンに結合した
Ｌ−ラムノースの約５０％が選択的に切断された。反応
の進行状況については薄層クロマトグラム（展開液：酢
酸エチル／イソプロピルアルコール／水の系）により確
認を行なった。
以下実施例５〜８を実施例１〜４と同様にして行なった
結果を第１表に示す。
結果を第１表に示す。
［以下余白］
第 １ 表
特許出願人 鐘淵化学工業株式会社
代理人弁理士 朝日奈宗太 ほか１名１（：：ｌ：
、（＋’ｌ゛・；、：！干、Ｉ、−１：
、（＋’ｌ゛・；、：！干、Ｉ、−１：
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ Ｌ−ラムノースを有するフラボノイド配糖体のラム
ノシド結合を選択的に開裂する酵素を作用させ、Ｌ−ラ
ムノースのみを該フラボノイド配糖体から遊離したのち
、反応液からラムノシド結合の切断されたフラボノイド
化合物を沈澱させ除去して、残存する溶液から高純度の
Ｌ−ラムノースをうることを特徴とするＬ−ラムノース
の製造法。 ２ 前記高純度のＬ−ラムノースを含む水溶液中に残存
する微量のフラボノイド化合物を酸性状態において水と
混和しがたい極性有機溶媒で抽出除去することによって
さらに高純度のＬ−ラムノースをうる特許請求の範囲第
１項記載の製造法。 ３ 前記高純度のＬ−ラムノースを含む水溶液中に残存
する微量のフラボノイド化合物を酸性状態において吸着
クロマトグラフにより吸着除去することによってさらに
高純度のＬ−ラムノースをうる特許請求の範囲第１項記
載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13969485A JPS62293A (ja) | 1985-06-26 | 1985-06-26 | Ｌ−ラムノ−スの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13969485A JPS62293A (ja) | 1985-06-26 | 1985-06-26 | Ｌ−ラムノ−スの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62293A true JPS62293A (ja) | 1987-01-06 |
| JPH053280B2 JPH053280B2 (ja) | 1993-01-14 |
Family
ID=15251239
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13969485A Granted JPS62293A (ja) | 1985-06-26 | 1985-06-26 | Ｌ−ラムノ−スの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62293A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0599159A2 (de) | 1992-11-27 | 1994-06-01 | Hoechst Aktiengesellschaft | a-L-Rhamnosidase zur Gewinnung von Rhamnose, ein Verfahren zur Herstellung und ihre Verwendung |
| US5501966A (en) * | 1992-06-25 | 1996-03-26 | Hoechst Aktiengesellschaft | Pseudomonas aeruginosa and its use in a process for the biotechnological preparation of L-rhamnose |
| WO2000026400A1 (de) * | 1998-10-30 | 2000-05-11 | Merck Patent Gmbh | Verfahren zur enzymatischen spaltung von rutinosiden |
-
1985
- 1985-06-26 JP JP13969485A patent/JPS62293A/ja active Granted
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5501966A (en) * | 1992-06-25 | 1996-03-26 | Hoechst Aktiengesellschaft | Pseudomonas aeruginosa and its use in a process for the biotechnological preparation of L-rhamnose |
| US5658793A (en) * | 1992-06-25 | 1997-08-19 | Hoechst Aktiengesellschaft | Pseudomonas aeruginosa and its use in a process for the biotechnological preparation of L-rhamnose |
| EP0599159A2 (de) | 1992-11-27 | 1994-06-01 | Hoechst Aktiengesellschaft | a-L-Rhamnosidase zur Gewinnung von Rhamnose, ein Verfahren zur Herstellung und ihre Verwendung |
| WO2000026400A1 (de) * | 1998-10-30 | 2000-05-11 | Merck Patent Gmbh | Verfahren zur enzymatischen spaltung von rutinosiden |
| US6420142B1 (en) | 1998-10-30 | 2002-07-16 | Merck Patent Gesellschaft | Method for enzymatic splitting of rutinosides |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH053280B2 (ja) | 1993-01-14 |
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