JPH0536033B2 - - Google Patents
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- JPH0536033B2 JPH0536033B2 JP59132156A JP13215684A JPH0536033B2 JP H0536033 B2 JPH0536033 B2 JP H0536033B2 JP 59132156 A JP59132156 A JP 59132156A JP 13215684 A JP13215684 A JP 13215684A JP H0536033 B2 JPH0536033 B2 JP H0536033B2
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- xanthomonas campestris
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
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Description
本発明は、或るキサントモナス種を発酵させる
ことにより、キサントモナスヘテロ多糖類を製造
する方法に関する。 炭水化物源を有機体キサントモナス・カムペス
トリス（Xanthomonas campestris）NRRL Ｂ
−1459による発酵に付すことにより、ヘテロ多糖
類が製造され得る、ということは米国特許第
3485719号から知られる。この特許明細書には、
キサントモナス・カムペストリスNRRL Ｂ−
1459から生産されたヘテロ多糖類が、副生油の回
収操作に用いられる場合の格別効果的な剤である
こと、並びに、食品、化粧品等の増粘剤として、
食用フイルム形成剤として、乳化剤（例えば、印
刷インキ用）として、及び捺染ペーストの増粘剤
としての利用性があること、がわかつたと述べら
れている。 今般、キサントモナス・カムペストリス種の新
規な継代菌株（substrain）を単離し、アバデイ
ーンにあるナシヨナル・コレクシヨン・オブ・イ
ンダストリアル・バクテリア、トリー・リサー
チ・ステーシヨン（National Collection of
Industrial Bacteria，Torry Research Station）
に、受け入れ番号（accession number）11854で
寄託（ブタペスト条約に基づく国際寄託（受託番
号NCIB11854））した。微生物キサントモナス・
カムペストリスNRRL Ｂ−1459と比べて、本微
生物NCIB11854は、規定培地においてはるかに
高い比生育速度、顕著に高い比ポリマー生成速度
を示すと認められ、また、ポリマー生成能の低下
を伴なうことなくかなり長期間、連続培養又は反
復される充填−取出し培養（fill−and−draw
culture）において維持され得る。 さらに、油の高回収操作に対して、
NCIB11854の微生物により生産されたヘテロ多
糖類の潜在的注入性（potential injectivity）（潜
在的注入性は、過試験により測定される。）は、
キサントモナス・カムペストリスNRRL Ｂ−
1459により生産されたヘテロ多糖類の潜在的注入
性と同じぐらいかあるいはそれより良好であり、
特に、高塩分ブライン中に溶かした場合そうであ
る。 本発明は、有機体キサントモナス・カムペスト
リスNCIB11854を水性栄養培地において、同化
可能な炭水化物及び窒素源の好気性発酵により生
育し、そしてヘテロ多糖類を回収する、ことを特
徴とするキサントモナスヘテロ多糖類の製造法を
提供する。本製造法は、適当には、連続法とし
て、充填及び取出しを伴なう又は伴なわない供給
回分法又は回分法として行なわれ得る。 生産性の観点から、連続法又は充填−取出し法
が好ましい。普通に入手できる多くのキサントモ
ナス株と異なり、キサントモナス・カムペストリ
スNCIB11854有機体は、液体培養において満足
な生育速度及びポリマー生成速度を達成するため
に、複雑な生育因子又はビタミンを必要とすると
は認められない。単純な窒素源例えばグルタミン
酸ナトリウム、あるいはアンモニウム塩又は硝酸
塩を含有するところの、単純な化学的に規定され
る培地において該有機体を生育する場合、非常に
良好な結果が得られ得る。それ故、かかる生育培
地を用いることが好ましい。グルタミン酸ナトリ
ウムが好ましい窒素源である。 さらに、化学的に規定される生育培地を用いる
ことにより、微生物生育条件の一層良好な制御が
可能になり、制御されたポリマー合成並びに品質
にばらつきのない生成物を生じる再現性のある製
造法がもたらされる。ヘテロ多糖類の生成及び品
質についてのこのタイプの制御は、例えば、キサ
ントモナス・カムペストリスNRRL Ｂ−1459を
用い、一層可変性で複雑な窒素源例えば酵母のエ
キス又は蒸留乾燥可溶物を含有する生育培地にお
いて生育する場合、一般に可能でない。本発明は
さらに、水性溶液中での粘度改質剤としての該ヘ
テロ多糖類の使用を提供する。 水及び0.06〜1.5重量％の上記ヘテロ多糖類か
らなる掘削泥水（drilling fluid）も、本発明に
より提供される。本発明はまた、水及び0.05〜
1.5重量％の上記ヘテロ多糖類からなる水性媒体
を井戸中に導入することからなる井戸の処理法、
並びに、上記ヘテロ多糖類を含む水性溶液を井戸
中に注入することにより、井戸及び／又は井戸と
連通している浸透性の地下層を通じて流体を排出
する方法も提供する。 本発明を下記の例によりさらに説明する。 例 キサントモナス・カムペストリス種
NCIB11854の培養によるヘテロ多糖類の製造、
並びにキサントモナス・カムペストリスNRRL
Ｂ−1459との性能比較 キサントモナス・カムペストリスNCIB11854
を、７リツトルの発酵槽（Chemap GF）中で、
３つの異なる化学的に規定される塩の培地（表１
に示す通りである。）にて、表２に要約した回分
条件下で生育した。 第１の実験では、微生物の生育のための唯一の
窒素源はアンモニウムイオン（24mM）であり、
細胞の指数的生育は最大濃度３ｇ-1であつた。
第２及び第３の実験では、アンモニウムをそれぞ
れ硝酸塩（24mM）及びグルタミン酸塩
（24mM）で置き換えた。結果を第１〜３図に示
す。 これらの図の比較から明きらかなように、窒素
源としてグルタミン酸塩が好ましく、何故なら、
0.12h-1のμmax即ち最大の細胞生育速度、0.36
ｇ．（ｇ-1）h-1のqp値即ち比ポリマー生成速度及
び0.59ｇ．ｇ-1のYp即ち最終的ポリマー収率を
生じるからである。この高いμmaxと高いqpとの
組合わせにより、0.49ｇ．（-1）h-1の最終的ポ
リマー生成率がもたらされ、しかしてこの最終的
ポリマー生成率は、キサントモナス・カムペスト
リスNRRL Ｂ−1459を用いるヘテロ多糖類発酵
の正常な生成率の２倍より大である。表３には、
上記に規定された塩の生育培地におけるキサント
モナス・カムペストリスNCIB11854について、
μmax，qp，qg即ち比グルコース資化速度、Yp
即ちグルコースに関するポリマーの収率及びＰ即
ちポリマー生成物の値がＡにおいて、並びにキサ
ントモナス・カムペストリスNRRL Ｂ−1459に
ついてのそれぞれの値がＢにおいて記載されてい
る。
ことにより、キサントモナスヘテロ多糖類を製造
する方法に関する。 炭水化物源を有機体キサントモナス・カムペス
トリス（Xanthomonas campestris）NRRL Ｂ
−1459による発酵に付すことにより、ヘテロ多糖
類が製造され得る、ということは米国特許第
3485719号から知られる。この特許明細書には、
キサントモナス・カムペストリスNRRL Ｂ−
1459から生産されたヘテロ多糖類が、副生油の回
収操作に用いられる場合の格別効果的な剤である
こと、並びに、食品、化粧品等の増粘剤として、
食用フイルム形成剤として、乳化剤（例えば、印
刷インキ用）として、及び捺染ペーストの増粘剤
としての利用性があること、がわかつたと述べら
れている。 今般、キサントモナス・カムペストリス種の新
規な継代菌株（substrain）を単離し、アバデイ
ーンにあるナシヨナル・コレクシヨン・オブ・イ
ンダストリアル・バクテリア、トリー・リサー
チ・ステーシヨン（National Collection of
Industrial Bacteria，Torry Research Station）
に、受け入れ番号（accession number）11854で
寄託（ブタペスト条約に基づく国際寄託（受託番
号NCIB11854））した。微生物キサントモナス・
カムペストリスNRRL Ｂ−1459と比べて、本微
生物NCIB11854は、規定培地においてはるかに
高い比生育速度、顕著に高い比ポリマー生成速度
を示すと認められ、また、ポリマー生成能の低下
を伴なうことなくかなり長期間、連続培養又は反
復される充填−取出し培養（fill−and−draw
culture）において維持され得る。 さらに、油の高回収操作に対して、
NCIB11854の微生物により生産されたヘテロ多
糖類の潜在的注入性（potential injectivity）（潜
在的注入性は、過試験により測定される。）は、
キサントモナス・カムペストリスNRRL Ｂ−
1459により生産されたヘテロ多糖類の潜在的注入
性と同じぐらいかあるいはそれより良好であり、
特に、高塩分ブライン中に溶かした場合そうであ
る。 本発明は、有機体キサントモナス・カムペスト
リスNCIB11854を水性栄養培地において、同化
可能な炭水化物及び窒素源の好気性発酵により生
育し、そしてヘテロ多糖類を回収する、ことを特
徴とするキサントモナスヘテロ多糖類の製造法を
提供する。本製造法は、適当には、連続法とし
て、充填及び取出しを伴なう又は伴なわない供給
回分法又は回分法として行なわれ得る。 生産性の観点から、連続法又は充填−取出し法
が好ましい。普通に入手できる多くのキサントモ
ナス株と異なり、キサントモナス・カムペストリ
スNCIB11854有機体は、液体培養において満足
な生育速度及びポリマー生成速度を達成するため
に、複雑な生育因子又はビタミンを必要とすると
は認められない。単純な窒素源例えばグルタミン
酸ナトリウム、あるいはアンモニウム塩又は硝酸
塩を含有するところの、単純な化学的に規定され
る培地において該有機体を生育する場合、非常に
良好な結果が得られ得る。それ故、かかる生育培
地を用いることが好ましい。グルタミン酸ナトリ
ウムが好ましい窒素源である。 さらに、化学的に規定される生育培地を用いる
ことにより、微生物生育条件の一層良好な制御が
可能になり、制御されたポリマー合成並びに品質
にばらつきのない生成物を生じる再現性のある製
造法がもたらされる。ヘテロ多糖類の生成及び品
質についてのこのタイプの制御は、例えば、キサ
ントモナス・カムペストリスNRRL Ｂ−1459を
用い、一層可変性で複雑な窒素源例えば酵母のエ
キス又は蒸留乾燥可溶物を含有する生育培地にお
いて生育する場合、一般に可能でない。本発明は
さらに、水性溶液中での粘度改質剤としての該ヘ
テロ多糖類の使用を提供する。 水及び0.06〜1.5重量％の上記ヘテロ多糖類か
らなる掘削泥水（drilling fluid）も、本発明に
より提供される。本発明はまた、水及び0.05〜
1.5重量％の上記ヘテロ多糖類からなる水性媒体
を井戸中に導入することからなる井戸の処理法、
並びに、上記ヘテロ多糖類を含む水性溶液を井戸
中に注入することにより、井戸及び／又は井戸と
連通している浸透性の地下層を通じて流体を排出
する方法も提供する。 本発明を下記の例によりさらに説明する。 例 キサントモナス・カムペストリス種
NCIB11854の培養によるヘテロ多糖類の製造、
並びにキサントモナス・カムペストリスNRRL
Ｂ−1459との性能比較 キサントモナス・カムペストリスNCIB11854
を、７リツトルの発酵槽（Chemap GF）中で、
３つの異なる化学的に規定される塩の培地（表１
に示す通りである。）にて、表２に要約した回分
条件下で生育した。 第１の実験では、微生物の生育のための唯一の
窒素源はアンモニウムイオン（24mM）であり、
細胞の指数的生育は最大濃度３ｇ-1であつた。
第２及び第３の実験では、アンモニウムをそれぞ
れ硝酸塩（24mM）及びグルタミン酸塩
（24mM）で置き換えた。結果を第１〜３図に示
す。 これらの図の比較から明きらかなように、窒素
源としてグルタミン酸塩が好ましく、何故なら、
0.12h-1のμmax即ち最大の細胞生育速度、0.36
ｇ．（ｇ-1）h-1のqp値即ち比ポリマー生成速度及
び0.59ｇ．ｇ-1のYp即ち最終的ポリマー収率を
生じるからである。この高いμmaxと高いqpとの
組合わせにより、0.49ｇ．（-1）h-1の最終的ポ
リマー生成率がもたらされ、しかしてこの最終的
ポリマー生成率は、キサントモナス・カムペスト
リスNRRL Ｂ−1459を用いるヘテロ多糖類発酵
の正常な生成率の２倍より大である。表３には、
上記に規定された塩の生育培地におけるキサント
モナス・カムペストリスNCIB11854について、
μmax，qp，qg即ち比グルコース資化速度、Yp
即ちグルコースに関するポリマーの収率及びＰ即
ちポリマー生成物の値がＡにおいて、並びにキサ
ントモナス・カムペストリスNRRL Ｂ−1459に
ついてのそれぞれの値がＢにおいて記載されてい
る。
【表】
【表】
【表】
【表】
この表は明きらかに、キサントモナス・カムペ
ストリスNCIB11854が、キサントモナス・カム
ペストリスNRRL Ｂ−1459よりも良好な性能を
有していることを示している。 表４には、希釈して種々の塩分の溶液中におけ
る一定の粘度にした場合の、キサントモナス・カ
ムペストリスNCIB11854の肉汁の過性とキサ
ントモナス・カムペストリスNRRL Ｂ−1459の
肉汁の過性とが比較されている。
ストリスNCIB11854が、キサントモナス・カム
ペストリスNRRL Ｂ−1459よりも良好な性能を
有していることを示している。 表４には、希釈して種々の塩分の溶液中におけ
る一定の粘度にした場合の、キサントモナス・カ
ムペストリスNCIB11854の肉汁の過性とキサ
ントモナス・カムペストリスNRRL Ｂ−1459の
肉汁の過性とが比較されている。
【表】
【表】
【表】
【表】
実際に過するのに、47mmの直径を有する、ミ
リポア（Millipore）フイルター（（Milliporeは
商標）を用いた。これらのフイルターの孔の大き
さは、5μ及び1.2μである。 上記の表から明きらかなように、キサントモナ
ス・カムペストリスNCIB11854の肉汁の過性
は、キサントモナス・カムペストリスNRRL Ｂ
−1459の肉汁の過性よりも、酵素処理の前及び
後において顕著に良好である。 キサントモナス・カムペストリスNCIB11854
及びキサントモナス・カムペストリス
NCIB11803＝NRRL Ｂ−1459（以下、それぞれ
「NCIB11854」及び「NCIB11803」と記載する。）
のナシヨナル・コレクシヨン・オブ・インダスト
リアル・バクテリア（National Collection of
Industrial Bacteria）による特徴決定。それら
の結果は、下記に述べることを除いて、
NCIB11803とNCIB11854について同様であつた。 細胞形態学 Ａ 栄養肉汁（Oxoid CMI）に0.75％寒天
（Difco）を加えた寒天平板に、若い生育体
（young growth）を接種し、そして25℃で７
１／２時間培養した。生育体の約0.2mmの塊 （patches）の縁の細胞を調べ、カバーグラス下
にて、位相差によるその場での写真撮影を行な
つた。運動性及び他の特徴は、生育体の別の塊
上にばらまかれた0.1mmのガラスビーズの取り
囲む培養液（pool）中において求められた。生
育体の縁において細胞は単一で及び対になつて
発生し、細胞の大きさはNCIB11803について
は幅0.4〜0.5μm×長さ1.2〜2.5μmであり、
NCIB11854については0.5〜0.6μm×1.2〜
2.5μmであつた。培養液中の生育体の縁におい
ては、百ないし数千の細胞の集合体
（「symplasmata」，Graham ＆ Hodgkiss，
1967参照）がNCIB11803について普通見られ
るが、しばしばNCIB11854についてははるか
に少なかつた。運動性は陽性であつた。 Ｂ 上記Ａに記載の条件を用い、しかし培地に
0.5％グルコースを添加しかつ７時間培養とし
たところ、細胞が0.1μm大きく、集合体が
NCIB11854については見られなかつた以上、
同様な結果であつた。 コロニー形態学 Ａ 栄養寒天（Oxoid CM3）平板上、30℃にお
ける48時間の生育後、生育体は良好であり、単
離されたコロニーは、黄色、環状、全縁
（entire）、粘液様（mucoid）、平滑、糸状
（string）、凸状であつた。コロニーの直径は
NCIB11803については１〜1.5mmであり、
NCIB11854については1.5mmであつた。 Ｂ 上記Ａに記載の培地上でしかし１％グルコー
スを添加し、30℃にて72時間生育させた後、生
育体は良好であり、単離されたコロニーは、薄
いクリーム色、環状、全縁、非常に粘液様、平
滑、凸状であり、全面生育体は薄いクリーム色
ないし黄色であつた。コロニーの直径は
NCIB11803については２mmであり、
NCIB11854については２〜2.5mmであつた。 選択された形態学 無機物基材 パレロニ６ドウドロフ1972
改良品（Palleroni ６
Doudoroff1972Modified） （PD）（A.Rev.Phytophethol.10，73） Na2HPO4．12H2Ｏ 6.0ｇ KH2PO4 2.4ｇ NH4Cl 1.0ｇ MgSO4．7H2Ｏ 0.5ｇ FeCl36H2Ｏ 0.01ｇ CaCl2．6H2Ｏ 0.01ｇ 脱イオン水 １リツトル pttは6.8になろう。 PD無機物基材＋0.1％の過滅菌済グルコース
（PDG） ゼラチン穿刺 栄養肉汁（OxoidNo.２） 2.5％ ゼラチン（Difco） 12.0％ ゼラチン平板 栄養寒天（Oxoid CM3） 2.8％ ゼラチン 1.0％ ミルク平板 個々に滅菌された、脱脂乳（Difco）
３％ ペプトン（Difco） 0.1％ 牛肉エキス（Lab−Lemco） 0.1％ NaCl 0.5％ 寒天 1.5％ オートクレーブにかける前PH7.4 生化学的特徴：指摘がなければ30℃にて CM3平板上での生育 温度（℃） 5° 30° 37° 生育（非定量的） ＋ ＋ − CMI肉汁上での生育PH範囲（調整PH） PH ３ ５ 7.2 ８ ９ 10 生育 − ３＋ ３＋ ３＋ ３＋ ３＋ 塩の存在下での生育 NaClを２，３，４及び５％の濃度で含有する
基礎培地を、ヘイワード＆ホジキス（Hayward
＆ Hodgkiss）（1961）の方法に従い調製し
た。培養は３日間行なつた。下記に示すように、
NCIB11854はNCIB11803よりも塩寛容性が小さ
い。 NaCl％ ２ ３ ４ ５ NCIB11803の生育 ３＋ ３＋ ３＋ − NCIB11854の生育 ３＋ ３＋ ＋ − ゼラチン及びカゼインの加水分解 培養は７日間行なつた。ゼラチン穿刺は20℃に
て行なつた。下記に示すように、NCIB11854は
NCIB11803よりもタンパク質加水分解活性が小
さい。 ゼラチン穿刺 ゼラチン平板 NCIB11803 ＋ ＋ NCIB11854 − ＋ ミルク平板 NCIB11803 ＋ NCIB11854 弱い＋ 生育因子要求性試験 ガラス蒸留水を用いて作つたPDG培地におい
て、まつすぐな針金を用い、３回継代培養した。
約４日で満足な生育体が得られ、生育因子に絶対
的要求性はないことが示された。 メチオニン刺激試験 ガラス蒸留水を用いて作つたPDG培地におい
てかすかに濁つた若い生育培養物の各１滴を、16
mm管中で、10μｇ／mlのＬ−メチオニンを添加し
たPDG及び添加しなかつたPDG1mlに接種した。
Ｌ−メチオニンによる生育速度の刺激は起こらな
かつた。 炭素源の資化 表１に示した、0.1％の過滅菌済の唯一の炭
素源を添加したPD培地に接種し、そして14日間
培養した。外観上わずかな生育的差違が３点、菌
株間で認められた。 炭水化物からの酸の生成 ヘイワード＆ホジキス（1961）の酸化発酵培地
に、表１に示した１％の過滅菌済の炭素源を添
加した。それらを入れた管に接種し、そして14日
間培養した。NCIB11854ではガラクトース及び
メリビオースから酸がつくられたが、
NCIB11803ではつくられなかつた。このことは
有意である、とすることは疑問であり、何故な
ら、特に、NCIB11854及びNCIB11803の両方と
も、両化合化物を唯一の炭素源として資化したか
らである。
リポア（Millipore）フイルター（（Milliporeは
商標）を用いた。これらのフイルターの孔の大き
さは、5μ及び1.2μである。 上記の表から明きらかなように、キサントモナ
ス・カムペストリスNCIB11854の肉汁の過性
は、キサントモナス・カムペストリスNRRL Ｂ
−1459の肉汁の過性よりも、酵素処理の前及び
後において顕著に良好である。 キサントモナス・カムペストリスNCIB11854
及びキサントモナス・カムペストリス
NCIB11803＝NRRL Ｂ−1459（以下、それぞれ
「NCIB11854」及び「NCIB11803」と記載する。）
のナシヨナル・コレクシヨン・オブ・インダスト
リアル・バクテリア（National Collection of
Industrial Bacteria）による特徴決定。それら
の結果は、下記に述べることを除いて、
NCIB11803とNCIB11854について同様であつた。 細胞形態学 Ａ 栄養肉汁（Oxoid CMI）に0.75％寒天
（Difco）を加えた寒天平板に、若い生育体
（young growth）を接種し、そして25℃で７
１／２時間培養した。生育体の約0.2mmの塊 （patches）の縁の細胞を調べ、カバーグラス下
にて、位相差によるその場での写真撮影を行な
つた。運動性及び他の特徴は、生育体の別の塊
上にばらまかれた0.1mmのガラスビーズの取り
囲む培養液（pool）中において求められた。生
育体の縁において細胞は単一で及び対になつて
発生し、細胞の大きさはNCIB11803について
は幅0.4〜0.5μm×長さ1.2〜2.5μmであり、
NCIB11854については0.5〜0.6μm×1.2〜
2.5μmであつた。培養液中の生育体の縁におい
ては、百ないし数千の細胞の集合体
（「symplasmata」，Graham ＆ Hodgkiss，
1967参照）がNCIB11803について普通見られ
るが、しばしばNCIB11854についてははるか
に少なかつた。運動性は陽性であつた。 Ｂ 上記Ａに記載の条件を用い、しかし培地に
0.5％グルコースを添加しかつ７時間培養とし
たところ、細胞が0.1μm大きく、集合体が
NCIB11854については見られなかつた以上、
同様な結果であつた。 コロニー形態学 Ａ 栄養寒天（Oxoid CM3）平板上、30℃にお
ける48時間の生育後、生育体は良好であり、単
離されたコロニーは、黄色、環状、全縁
（entire）、粘液様（mucoid）、平滑、糸状
（string）、凸状であつた。コロニーの直径は
NCIB11803については１〜1.5mmであり、
NCIB11854については1.5mmであつた。 Ｂ 上記Ａに記載の培地上でしかし１％グルコー
スを添加し、30℃にて72時間生育させた後、生
育体は良好であり、単離されたコロニーは、薄
いクリーム色、環状、全縁、非常に粘液様、平
滑、凸状であり、全面生育体は薄いクリーム色
ないし黄色であつた。コロニーの直径は
NCIB11803については２mmであり、
NCIB11854については２〜2.5mmであつた。 選択された形態学 無機物基材 パレロニ６ドウドロフ1972
改良品（Palleroni ６
Doudoroff1972Modified） （PD）（A.Rev.Phytophethol.10，73） Na2HPO4．12H2Ｏ 6.0ｇ KH2PO4 2.4ｇ NH4Cl 1.0ｇ MgSO4．7H2Ｏ 0.5ｇ FeCl36H2Ｏ 0.01ｇ CaCl2．6H2Ｏ 0.01ｇ 脱イオン水 １リツトル pttは6.8になろう。 PD無機物基材＋0.1％の過滅菌済グルコース
（PDG） ゼラチン穿刺 栄養肉汁（OxoidNo.２） 2.5％ ゼラチン（Difco） 12.0％ ゼラチン平板 栄養寒天（Oxoid CM3） 2.8％ ゼラチン 1.0％ ミルク平板 個々に滅菌された、脱脂乳（Difco）
３％ ペプトン（Difco） 0.1％ 牛肉エキス（Lab−Lemco） 0.1％ NaCl 0.5％ 寒天 1.5％ オートクレーブにかける前PH7.4 生化学的特徴：指摘がなければ30℃にて CM3平板上での生育 温度（℃） 5° 30° 37° 生育（非定量的） ＋ ＋ − CMI肉汁上での生育PH範囲（調整PH） PH ３ ５ 7.2 ８ ９ 10 生育 − ３＋ ３＋ ３＋ ３＋ ３＋ 塩の存在下での生育 NaClを２，３，４及び５％の濃度で含有する
基礎培地を、ヘイワード＆ホジキス（Hayward
＆ Hodgkiss）（1961）の方法に従い調製し
た。培養は３日間行なつた。下記に示すように、
NCIB11854はNCIB11803よりも塩寛容性が小さ
い。 NaCl％ ２ ３ ４ ５ NCIB11803の生育 ３＋ ３＋ ３＋ − NCIB11854の生育 ３＋ ３＋ ＋ − ゼラチン及びカゼインの加水分解 培養は７日間行なつた。ゼラチン穿刺は20℃に
て行なつた。下記に示すように、NCIB11854は
NCIB11803よりもタンパク質加水分解活性が小
さい。 ゼラチン穿刺 ゼラチン平板 NCIB11803 ＋ ＋ NCIB11854 − ＋ ミルク平板 NCIB11803 ＋ NCIB11854 弱い＋ 生育因子要求性試験 ガラス蒸留水を用いて作つたPDG培地におい
て、まつすぐな針金を用い、３回継代培養した。
約４日で満足な生育体が得られ、生育因子に絶対
的要求性はないことが示された。 メチオニン刺激試験 ガラス蒸留水を用いて作つたPDG培地におい
てかすかに濁つた若い生育培養物の各１滴を、16
mm管中で、10μｇ／mlのＬ−メチオニンを添加し
たPDG及び添加しなかつたPDG1mlに接種した。
Ｌ−メチオニンによる生育速度の刺激は起こらな
かつた。 炭素源の資化 表１に示した、0.1％の過滅菌済の唯一の炭
素源を添加したPD培地に接種し、そして14日間
培養した。外観上わずかな生育的差違が３点、菌
株間で認められた。 炭水化物からの酸の生成 ヘイワード＆ホジキス（1961）の酸化発酵培地
に、表１に示した１％の過滅菌済の炭素源を添
加した。それらを入れた管に接種し、そして14日
間培養した。NCIB11854ではガラクトース及び
メリビオースから酸がつくられたが、
NCIB11803ではつくられなかつた。このことは
有意である、とすることは疑問であり、何故な
ら、特に、NCIB11854及びNCIB11803の両方と
も、両化合化物を唯一の炭素源として資化したか
らである。
【表】
【表】
【表】
【表】
これらの試験は限られた差異を示すものであ
り、主な差異は次のことである。即ち、T.1188
は、規定培地においてポリマー生産の反応速度が
一層良好であり、無機窒素特にNH4 +で一層良好
に生育し、規定培地中での連続培養において安定
である。 参照文献 １ Bergey′s Manual of Determinative
Bacteri−ology，第８片（1974）（R.E.
Buchanan及びN.E.Gibbons 共編），
Baltimore：Williams ＆ Wilkins」 ２ 「Cowan，S.T.及びSteel，K.J.（1974）
“Manual for the Identification of Medical
Bacteria”Cambridge University Press」
り、主な差異は次のことである。即ち、T.1188
は、規定培地においてポリマー生産の反応速度が
一層良好であり、無機窒素特にNH4 +で一層良好
に生育し、規定培地中での連続培養において安定
である。 参照文献 １ Bergey′s Manual of Determinative
Bacteri−ology，第８片（1974）（R.E.
Buchanan及びN.E.Gibbons 共編），
Baltimore：Williams ＆ Wilkins」 ２ 「Cowan，S.T.及びSteel，K.J.（1974）
“Manual for the Identification of Medical
Bacteria”Cambridge University Press」
第１図は、窒素源がアンモニアである規定塩培
地（培地１）における、キサントモナス・カムペ
ストリスNCIB11854（実線）及びキサントモナ
ス・カムペストリスNRRL Ｂ−1459（点線：上
の点線はポリマー、下の点線は細胞）による生育
及びポリマーの生成を示し、第２図は、窒素源が
硝酸塩である規定塩培地（培地２）における、キ
サントモナス・カムペストリスNCIB11854によ
る生育及びポリマーの生成を示し、第３図は、窒
素源がグルタミン酸塩である規定塩培地（培地
３）における、キサントモナス・カムペストリス
NCIB11854（実線）及びキサントモナス・カムペ
ストリスNRRL Ｂ−1459（点線：上の点線はポ
リマー、下の点線は細胞）による生育及びポリマ
ーの生成を示す。
地（培地１）における、キサントモナス・カムペ
ストリスNCIB11854（実線）及びキサントモナ
ス・カムペストリスNRRL Ｂ−1459（点線：上
の点線はポリマー、下の点線は細胞）による生育
及びポリマーの生成を示し、第２図は、窒素源が
硝酸塩である規定塩培地（培地２）における、キ
サントモナス・カムペストリスNCIB11854によ
る生育及びポリマーの生成を示し、第３図は、窒
素源がグルタミン酸塩である規定塩培地（培地
３）における、キサントモナス・カムペストリス
NCIB11854（実線）及びキサントモナス・カムペ
ストリスNRRL Ｂ−1459（点線：上の点線はポ
リマー、下の点線は細胞）による生育及びポリマ
ーの生成を示す。
１ 式（）
【表】
（ＹはLysまたはArgを意味し、R1は水素、Ｌ
−アミノ酸残基またはシグナル配列として役立て
られるペプチド残基を意味する） を有するプレプロインシユリン類似体を、水と酢
酸からなる溶媒系中でインシユリンの等電点以下
のPHでトリプシンまたはトリプシン類似のエンド
ペプチターゼの存在下に、Ala−OtBu、Thr−
OMe、Thr−OtBuおよびThr（tBu）OtBuから
なる群から選択されたアミノ酸誘導体と反応さ
せ、そして次にエステル基および場合により存在
する他の保護基を除去することを特徴とする、前
記プレプロインシユリン類似体からのインシユリ
−アミノ酸残基またはシグナル配列として役立て
られるペプチド残基を意味する） を有するプレプロインシユリン類似体を、水と酢
酸からなる溶媒系中でインシユリンの等電点以下
のPHでトリプシンまたはトリプシン類似のエンド
ペプチターゼの存在下に、Ala−OtBu、Thr−
OMe、Thr−OtBuおよびThr（tBu）OtBuから
なる群から選択されたアミノ酸誘導体と反応さ
せ、そして次にエステル基および場合により存在
する他の保護基を除去することを特徴とする、前
記プレプロインシユリン類似体からのインシユリ
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8317696 | 1983-06-29 | ||
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6047694A JPS6047694A (ja) | 1985-03-15 |
| JPH0536033B2 true JPH0536033B2 (ja) | 1993-05-28 |
Family
ID=10545004
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59132156A Granted JPS6047694A (ja) | 1983-06-29 | 1984-06-28 | キサントモナスヘテロ多糖類の製造法 |
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| Country | Link |
|---|---|
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| JP (1) | JPS6047694A (ja) |
| KR (1) | KR850000531A (ja) |
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| AU (1) | AU577534B2 (ja) |
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| CA (1) | CA1223224A (ja) |
| DE (1) | DE3477204D1 (ja) |
| DK (1) | DK316884A (ja) |
| EG (1) | EG17121A (ja) |
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| MX (1) | MX7682E (ja) |
| NO (1) | NO160790C (ja) |
| NZ (1) | NZ208700A (ja) |
| RO (1) | RO89428A (ja) |
| SG (1) | SG41890G (ja) |
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