JPH053792A

JPH053792A - ３−メチル−ｎ−（２−フエニルエチル）−ブタン酸アミドの製造方法及びそれに用いる微生物

Info

Publication number: JPH053792A
Application number: JP18167591A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Shima; 浩志嶋
Original assignee: Idemitsu Petrochemical Co Ltd
Current assignee: Idemitsu Petrochemical Co Ltd
Priority date: 1991-06-27
Filing date: 1991-06-27
Publication date: 1993-01-14

Abstract

(57)【要約】【構成】バチルス属に属し、３−メチル−Ｎ−（２−
フェニルエチル）−ブタン酸アミドを生産する能力を有
する微生物を培養し、培養物から３−メチル−Ｎ−（２
−フェニルエチル）−ブタン酸アミドを採取することを
特徴とする３−メチル−Ｎ−（２−フェニルエチル）−
ブタン酸アミドの製造方法及び３−メチル−Ｎ−（２−
フェニルエチル）−ブタン酸アミドを生産する能力を有
するバチルス属細菌ＢＮ−１株。【効果】本発明によれば、イソキノリン誘導体や各種
医薬，農薬の合成原料として有用な３−メチル−Ｎ−
（２−フェニルエチル）−ブタン酸アミドを発酵法によ
り効率よく、かつ安価に製造することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、３−メチル−Ｎ−（２
−フェニルエチル）−ブタン酸アミドの製造方法、特に
微生物を用いて該化合物を製造する方法及びそれに用い
る微生物に関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】３−メ
チル−Ｎ−（２−フェニルエチル）−ブタン酸アミド
（通俗名：Ｎ−フェネチルイソバレロアミド）は、医
薬，農薬等の合成原料として有用な化合物である。従
来、この化合物は、合成法により製造されており、例え
ばアミン部分（フェネチルアミン）と酸部分（イソ吉草
酸）とから公知の方法により容易に合成されるが、この
反応に用いる上記原料はいずれも稀少で、入手が困難、
かつ高価であるという欠点がある。しかも、合成途中に
有害なハロゲン化合物や脱水試薬を要するという問題も
ある。また、縮合による合成反応は、複雑な工程を要
し、実用的でない。

【０００３】これに対し、発酵法による有用物質の製造
は、一般的に上記のような欠点はないが、３−メチル−
Ｎ−（２−フェニルエチル）−ブタン酸アミドを発酵法
で製造する方法については、これまでに全く報告されて
いなない。本発明の目的は、該化合物を発酵法により簡
便、かつ効率よく製造する方法を提供することである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明は、バチルス属に
属し、３−メチル−Ｎ−（２−フェニルエチル）−ブタ
ン酸アミドを生産する能力を有する微生物を培養し、培
養物から３−メチル−Ｎ−（２−フェニルエチル）−ブ
タン酸アミドを採取することを特徴とする３−メチル−
Ｎ−（２−フェニルエチル）−ブタン酸アミドの製造方
法並びに該化合物を生産する能力を有するバチルス属細
菌ＢＮ−１株に関する。

【０００５】本発明において使用するバチルス属に属
し、３−メチル−Ｎ−（２−フェニルエチル）−ブタン
酸アミドを生産する能力を有する微生物としては、本発
明者らが新たに土壌から分離したバチルス属細菌、バチ
ルス・エスピーＢＮ−１株がある。本菌は、工業技術院
微生物工業技術研究所に寄託されており、その受託番号
はＦＥＲＭＰ−１２２９９である。本菌の菌学的性質
は以下の通りである。

【０００６】１）形態学的特徴グラム陽性桿菌（0.７〜1.２×３〜５μｍ）で、内生胞
子を形成する。２）各種培地における生育状態肉汁寒天平板培養では、不透明で白色乃至淡黄色のコロ
ニーを形成する。サブロー寒天平板上で良好な生育を示
し、食塩濃度７％での生育は認められない。

【０００７】３）生理学的特徴硝酸塩を唯一の窒素源とする培地での生育 − アンモニウム塩を唯一の窒素源とする培地での生育
− カタラーゼ＋Ｏ−Ｆテスト発酵的ＶＰテスト＋生育温度５〜４５℃ 生育ｐＨ４．５〜９．５酸素に対する態度通性嫌気的硝酸塩の還元＋尿素分解 − インドールの生成 − 糖類からの酸及びガスの生成酸の生成ガスの生成 ──────────────────────────── キシロース − − アラビノース − − グルコース＋ − フルクトース＋ − マンノース − − ガラクトース − − スクロース＋ − ラクトース − − マルトース＋ − トレハロース＋ − マンニトール − − ソルビトール − − イノシトール − − ────────────────────────────

【０００８】炭素源の利用性デンプン＋グルコース＋フルクトース＋ガラクトース − スクロース＋ラクトース − マルトース＋ソルビトール − マンニトール − グリセロール＋コハク酸 − グルタミン酸＋クエン酸 −

【０００９】以上の菌学的性質から、本菌はバチルス属
に属するものと認められ、公知のバチルス・コアギュラ
ンスと性質が似ている。しかし、バチルス・コアギュラ
ンスは５５〜６０℃までの比較的高温度条件で生育可能
であるのに対し、本菌は４５℃までの温度条件で生育可
能である点が相違することから、本菌を新菌株と認め、
本発明者らはバチルス・エスピーＢＮ−１株と命名し
た。

【００１０】本発明では、上記菌株の他、バチルス属に
属し、３−メチル−Ｎ−（２−フェニルエチル）−ブタ
ン酸アミドを生産する能力を有する微生物も使用するこ
とができる。

【００１１】３−メチル−Ｎ−（２−フェニルエチル）
−ブタン酸アミドは、バチルス属に属し、３−メチル−
Ｎ−（２−フェニルエチル）−ブタン酸アミドを生産す
る能力を有する微生物を培養することにより製造するこ
とができる。該微生物を培養するために用いる培地とし
ては、上記微生物が生育し得る培地、例えばペプトン，
肉エキス，酵母エキス等の有機態窒素を含む培地などが
ある。培地には、炭素源としてグルコース，デンプン等
を添加してもよく、窒素源としてアミノ酸，カゼイン加
水分解物等を添加してもい。その他、必要に応じて無機
塩類，ビタミンなどを適宜添加することができる。

【００１２】培養は、通常の振盪式培養装置，攪拌式培
養槽，エアリフト式培養槽などを用いて好気的条件下で
５〜４５℃、好ましくは３０〜４０℃にて１〜５日間、
好ましくは２〜４日間行い、目的物の生成が最大になっ
たことを確認した段階で終了する。

【００１３】培養物からの３−メチル−Ｎ−（２−フェ
ニルエチル）−ブタン酸アミドの回収は、既知の手法に
よればよく、例えば全培養物，その乾燥物あるいは培養
中に生じた凝集物や微生物菌体を分離して得た固形物お
よび適当な有機溶媒（酢酸エチル，ヘキサン，イソオク
タン，石油エーテル，クロロホルム，ジエチルエーテル
等）にて抽出し、抽出液から溶媒を留去することによっ
て、粗抽出物が得られる。次いで、所望により、再結晶
法，シリカゲルカラムクロマトグラフィー等を適用して
精製することができる。

【００１４】

【実施例】以下に、本発明を実施例により詳しく説明す
る。実施例１３００ｍｌ容三角フラスコにＬ−培地（ペプトン１０ｇ
／ｌ，酵母エキス５ｇ／ｌ，NaCl ５ｇ／ｌ）を５０ｍ
ｌ入れて滅菌処理を行い、これに寒天平板上に生育した
バチルス・エスピーＢＮ−１株（FERM P-12299) を１白
金耳植菌し、３７℃で一晩振盪培養した。このものを種
培養液とする。

【００１５】２リットル容攪拌式培養槽にＬ培地１．２
リットルを入れて滅菌処理を行い、これに上記種培養液
５０ｍｌを植菌し、通気，攪拌しながら３７℃で３０時
間培養して前培養液を得た。この培養液を遠心分離（５
０００rpm,１０分間) して湿菌体を得た。

【００１６】２リットル容攪拌式培養槽にＹＧ培地（酵
母エキス５ｇ／ｌ，グルコース２ｇ／ｌ，MgSO₄・7H₂O
0.２５ｇ／ｌ）１．２リットルを入れて滅菌処理を行
い、これに前培養の湿菌体を２．０ｇ／ｌ加え、分散さ
せた後、通気，攪拌しながら３７℃で５０時間培養して
目的物を生成、蓄積させた。なお、５０時間培養後の菌
体量は７．０ｇ／ｌであった。

【００１７】上記培養液１００ｍｌを取り、酢酸エチル
５０ｍｌずつ用いて３回抽出して得た粗抽出液を気液ク
ロマトグラフィー（ＯＶ−１７カラム）により分析し、
定量した結果、収量は0.８２ｇ／ｌであった。なお、生
成物を合成標品（３−メチル−Ｎ−（２−フェニルエチ
ル）−ブタン酸アミド）と比較したところ、ＧＣ保持時
間，¹H-NMRスペクトル,¹³C-NMRスペクトル，ＩＲスペク
トル，ＭＳスペクトルのすべてが同一であった。

【００１８】実施例２表１に示した種々の培地５０ｍｌを３００ｍｌ容三角フ
ラスコに入れ、滅菌処理後、バチルス・エスピーＢＮ−
１株（FERM P-12299) を１白金耳接種し、３７℃で２４
時間振盪培養した後、培養物５０ｍｌに３５％塩酸0.５
ｍｌを加え、次いで酢酸エチル５０ｍｌずつ用いて３回
抽出し、抽出物中の３−メチル−Ｎ−（２−フェニルエ
チル）−ブタン酸アミドの量をガスクロマトグラフィー
により定量した。また、それぞれの培養物から高速遠心
分離機を用い、５０００ rpm,１０分間の遠心分離を行
って上清液を除去して得た湿菌体および湿菌体を１０５
℃で１０時間乾燥して得た乾燥菌体の重量を測定した。
これらの結果を表２に示す。

【００１９】

【表１】表１ ──────────────────────────────────── 培地１トリプトン１0.０ｇ／ｌ酵母エキス 5.０ｇ／ｌ塩化ナトリウム 5.０ｇ／ｌ培地２酵母エキス１0.０ｇ／ｌグルコース 2.５ｇ／ｌ硫酸マグネシウム七水塩 0.２ｇ／ｌ培地３グルコース 2.０ｇ／ｌグルタミン酸ナトリウム 2.０ｇ／ｌリン酸水素二カリウム 0.５ｇ／ｌ硫酸マグネシウム七水塩 0.２ｇ／ｌ硫酸鉄（II）七水塩 0.０１ｇ／ｌ培地４デンプン２0.０ｇ／ｌ酵母エキス 5.０ｇ／ｌリン酸水素二カリウム 1.０ｇ／ｌ培地５グルタミン酸ナトリウム 5.０ｇ／ｌグリセロール 5.０ｇ／ｌ酵母エキス 1.０ｇ／ｌ ────────────────────────────────────

【００２０】

【表２】表２ ──────────────────────────────────── 培地湿菌体収量(g/l) 乾燥菌体収量(g/l) 生成物量(mg/l) ──────────────────────────────────── 培地１１６．８２．４１７培地２１３．８２．１２１０培地３４．３０．５８培地４２３．１３．４３０培地５３．２０．４２８ ────────────────────────────────────

【００２１】

【発明の効果】本発明によれば、イソキノリン誘導体や
各種医薬，農薬の合成原料として有用な３−メチル−Ｎ
−（２−フェニルエチル）−ブタン酸アミドを発酵法に
より効率よく、かつ安価に製造することができる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】バチルス属に属し、３−メチル−Ｎ−
（２−フェニルエチル）−ブタン酸アミドを生産する能
力を有する微生物を培養し、培養物から３−メチル−Ｎ
−（２−フェニルエチル）−ブタン酸アミドを採取する
ことを特徴とする３−メチル−Ｎ−（２−フェニルエチ
ル）−ブタン酸アミドの製造方法。
【請求項２】３−メチル−Ｎ−（２−フェニルエチ
ル）−ブタン酸アミドを生産する能力を有するバチルス
属細菌ＢＮ−１株。