JPH0538295A - ウロポルフイリンｉｉｉ の製造方法 - Google Patents
ウロポルフイリンｉｉｉ の製造方法Info
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- JPH0538295A JPH0538295A JP19953191A JP19953191A JPH0538295A JP H0538295 A JPH0538295 A JP H0538295A JP 19953191 A JP19953191 A JP 19953191A JP 19953191 A JP19953191 A JP 19953191A JP H0538295 A JPH0538295 A JP H0538295A
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- Japan
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- uroporphyrin
- iii
- uroporphyrin iii
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- producing
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 アースロバクター属微生物を用いるウロポル
フィリンIII の製造において、ウロポルフィリンIII の
発酵生産効率を上昇せしめる。 【構成】 アースロバクター（Arthrobacter) 属に属し
ウロポルフィリンIII を生産する能力を有する微生物
を、５−アミノレブリン酸を含有する培地において培養
し、得られた培養物からウロポルフィリンを採取するこ
とを特徴とするウロポルフィリンIII の製造方法。 【効果】 本発明の方法によれば、同じ条件下の従来技
術の方法に比べて、ウロポルフィリンIII の生産速度が
２〜１０倍上昇し、目的物であるウロポルフィリンIII
に対する副産物であるウロポルフィリンＩの生成率が１
５〜１８％から４％未満に減少する。
フィリンIII の製造において、ウロポルフィリンIII の
発酵生産効率を上昇せしめる。 【構成】 アースロバクター（Arthrobacter) 属に属し
ウロポルフィリンIII を生産する能力を有する微生物
を、５−アミノレブリン酸を含有する培地において培養
し、得られた培養物からウロポルフィリンを採取するこ
とを特徴とするウロポルフィリンIII の製造方法。 【効果】 本発明の方法によれば、同じ条件下の従来技
術の方法に比べて、ウロポルフィリンIII の生産速度が
２〜１０倍上昇し、目的物であるウロポルフィリンIII
に対する副産物であるウロポルフィリンＩの生成率が１
５〜１８％から４％未満に減少する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はウロポルフィリンIII の
改良された製造方法に関する。ウロポルフィリンはポル
フィリン構造を有する化合物であって、医薬の活性成分
及びその合成中間体、ビタミンＢ12の合成中間体、飲食
物着色用赤色系色素、等種々の用途が期待される。
改良された製造方法に関する。ウロポルフィリンはポル
フィリン構造を有する化合物であって、医薬の活性成分
及びその合成中間体、ビタミンＢ12の合成中間体、飲食
物着色用赤色系色素、等種々の用途が期待される。
【０００２】
【従来の技術】ウロポルフィリンIII は既知化合物であ
り、これを生産する微生物として、アクロモバクター・
メタルカリゲネス（Achromobacter metalcaligene
s）、プロピオニバクテリウム・グラヌロスム（Propion
ibacterium granulosum）、プロピオニバクテリウム
・アクネス（Propionibacterium acnes )(V.Ya.Bykho
vskii ら、Biokhim.Mikrobiol.23(6), 725-739, 1987）
等が知られている。
り、これを生産する微生物として、アクロモバクター・
メタルカリゲネス（Achromobacter metalcaligene
s）、プロピオニバクテリウム・グラヌロスム（Propion
ibacterium granulosum）、プロピオニバクテリウム
・アクネス（Propionibacterium acnes )(V.Ya.Bykho
vskii ら、Biokhim.Mikrobiol.23(6), 725-739, 1987）
等が知られている。
【０００３】さらに、特公昭６２−２１５２０には、ア
ースロバクター属微生物を用いてウロポルフィリンIII
を製造する方法が記載されている。しかしながら、ウロ
ポルフィリンIII の工業的製造の見地から、より効率的
に、すなわち短期間により多くのウロポルフィリンを培
養液中に蓄積せしめることができる、ウロポルフィリン
III の微生物的製方法が強く望まれる。
ースロバクター属微生物を用いてウロポルフィリンIII
を製造する方法が記載されている。しかしながら、ウロ
ポルフィリンIII の工業的製造の見地から、より効率的
に、すなわち短期間により多くのウロポルフィリンを培
養液中に蓄積せしめることができる、ウロポルフィリン
III の微生物的製方法が強く望まれる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明は、アー
スロバクター属微生物を用いてウロポルフィリンIII を
製造するための、改良された新規な方法を提供しようと
するものである。
スロバクター属微生物を用いてウロポルフィリンIII を
製造するための、改良された新規な方法を提供しようと
するものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決するため種々検討した結果、アースロバクター
属に属するウロポルフィリンIII 生産菌を培養してウロ
ポルフィリンIII を生産・蓄積せしめるに当り、培地中
に５−アミノレブリン酸を存在せしめることにより、該
５−アミノレブリン酸を存在せしめない場合に比べて、
培養液中のウロポルフィリンの蓄積速度が著しく高くな
り、短期間に高濃度のウロポルフィリンを蓄積させるこ
とができるという驚くべき、全く新しい知見を得た。
題を解決するため種々検討した結果、アースロバクター
属に属するウロポルフィリンIII 生産菌を培養してウロ
ポルフィリンIII を生産・蓄積せしめるに当り、培地中
に５−アミノレブリン酸を存在せしめることにより、該
５−アミノレブリン酸を存在せしめない場合に比べて、
培養液中のウロポルフィリンの蓄積速度が著しく高くな
り、短期間に高濃度のウロポルフィリンを蓄積させるこ
とができるという驚くべき、全く新しい知見を得た。
【０００６】本発明者はさらに、上記の方法において、
ウロポルフィリンIII に対する副生成物としてのウロポ
ルフィリンＩの生産割合が５％未満となることを見出し
た。
ウロポルフィリンIII に対する副生成物としてのウロポ
ルフィリンＩの生産割合が５％未満となることを見出し
た。
【０００７】本発明は、上記のような新しい知見に基い
て完成したものであり、アースロバクター属に属しウロ
ポルフィリンIII を生産する能力を有する微生物を５−
アミノレブリン酸を含有する培地において培養し、得ら
れた培養物からウロポルフィリンIII を採取することを
特徴とするウロポルフィリンIII の製造方法を提供する
ものである。
て完成したものであり、アースロバクター属に属しウロ
ポルフィリンIII を生産する能力を有する微生物を５−
アミノレブリン酸を含有する培地において培養し、得ら
れた培養物からウロポルフィリンIII を採取することを
特徴とするウロポルフィリンIII の製造方法を提供する
ものである。
【０００８】
【具体的な説明】ウロポルフィリンIII は次の構造：
【化１】 を有する既知化合物である。
【０００９】本発明において使用する微生物はアースロ
バクターに属し、且つウロポルフィリンを生産する能力
を有するものであればなんでもよく、その種（species)
は限定されない。また、天然から単離した株、すでに保
有されている株、これらの株に基いて得られた突然変異
株等いずれも使用することができる。
バクターに属し、且つウロポルフィリンを生産する能力
を有するものであればなんでもよく、その種（species)
は限定されない。また、天然から単離した株、すでに保
有されている株、これらの株に基いて得られた突然変異
株等いずれも使用することができる。
【００１０】本発明において使用できるウロポルフィリ
ンIII 生産株の具体例として、アースロバクター・ヒア
リナス（Arthrobacter hyalinus) 及びアースロバクタ
ー・パセンス（Arthrobacter pascens ) 並びにこれら
の変異株を挙げることができる。
ンIII 生産株の具体例として、アースロバクター・ヒア
リナス（Arthrobacter hyalinus) 及びアースロバクタ
ー・パセンス（Arthrobacter pascens ) 並びにこれら
の変異株を挙げることができる。
【００１１】該アースロバクター・ヒアリナスは、工業
技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）に微工研菌寄第
３１２５号として、又、アメリカン・タイプ・カルチャ
ー・コレクションＡＴＣＣ３１２６３として寄託された
公知自由分譲菌株である。その菌学的性質の詳細は例え
ば、特公昭５２−９４４９８号に記載されている。又、
該アースロバクター・ヒアリナスの変異株５メチル−Ｄ
Ｌ−トリプトファン抵抗株は、工業技術院微生物工業技
術研究所（ＦＲＩ）に寄託されている（微工研菌寄受理
第５２５６号）。又、アースロバクター・ヒアリナスの
変異株コプロポルフィリンIII 抵抗株は工業技術院微生
物工業技術研究所（ＦＲＩ）に寄託されている（微工研
菌寄第５２５９号）。
技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）に微工研菌寄第
３１２５号として、又、アメリカン・タイプ・カルチャ
ー・コレクションＡＴＣＣ３１２６３として寄託された
公知自由分譲菌株である。その菌学的性質の詳細は例え
ば、特公昭５２−９４４９８号に記載されている。又、
該アースロバクター・ヒアリナスの変異株５メチル−Ｄ
Ｌ−トリプトファン抵抗株は、工業技術院微生物工業技
術研究所（ＦＲＩ）に寄託されている（微工研菌寄受理
第５２５６号）。又、アースロバクター・ヒアリナスの
変異株コプロポルフィリンIII 抵抗株は工業技術院微生
物工業技術研究所（ＦＲＩ）に寄託されている（微工研
菌寄第５２５９号）。
【００１２】更に、上記アースロバクター・パセンス
は、（財）発酵研究所にＩＦＯ１２１３９号として、
又、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに
ＡＴＣＣ１３３４６号として寄託された自由分譲可能な
公知菌株であって、その菌学的性質の詳細は例えば、Be
rgey's Manual of Determinative Bacteriology ８版に
記載されている。又、該アースロバクター・パセンスの
変異株Ｌ−トリプトファン抵抗株は、ＦＲＩ，Japan に
寄託されている（微工研菌寄第５２５７号）。
は、（財）発酵研究所にＩＦＯ１２１３９号として、
又、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに
ＡＴＣＣ１３３４６号として寄託された自由分譲可能な
公知菌株であって、その菌学的性質の詳細は例えば、Be
rgey's Manual of Determinative Bacteriology ８版に
記載されている。又、該アースロバクター・パセンスの
変異株Ｌ−トリプトファン抵抗株は、ＦＲＩ，Japan に
寄託されている（微工研菌寄第５２５７号）。
【００１３】上記変異もしくは変種株は、親株から例え
ば紫外線照射、コバルト６０放射線照射の如き公知の手
段で得ることができる。例えば、照射処理株を、ウロポ
ルフィリンIII 生産阻害剤含有ミネラル−寒天培地に培
養し、必要に応じ、照射処理及び培養をくり返して、ウ
ロポルフィリンIII 生産能の増大した菌株を採取するこ
とにより得ることができる。
ば紫外線照射、コバルト６０放射線照射の如き公知の手
段で得ることができる。例えば、照射処理株を、ウロポ
ルフィリンIII 生産阻害剤含有ミネラル−寒天培地に培
養し、必要に応じ、照射処理及び培養をくり返して、ウ
ロポルフィリンIII 生産能の増大した菌株を採取するこ
とにより得ることができる。
【００１４】培養は親菌株に公知の培養条件で行うこと
ができ、又阻害剤としては、たとえばウロポルフィリン
III 、コプロポルフィリンIII 、Ｌ−トリプトファン、
５−メチル−ＤＬ−トリプトファン、その他各種の阻害
剤を利用することができる。得られる変異もしくは変種
株の菌学的性質は親菌株のそれと実質的に同じであり、
ウロポルフィリンIII 生産能が親菌株より向上している
点で異なる。
ができ、又阻害剤としては、たとえばウロポルフィリン
III 、コプロポルフィリンIII 、Ｌ−トリプトファン、
５−メチル−ＤＬ−トリプトファン、その他各種の阻害
剤を利用することができる。得られる変異もしくは変種
株の菌学的性質は親菌株のそれと実質的に同じであり、
ウロポルフィリンIII 生産能が親菌株より向上している
点で異なる。
【００１５】上記ウロポルフィリンIII 生産菌株を表１
にまとめて示す。 表１ ウロポルフィリンIII 生産菌株の保存機関 ──────────────────────────────────── 微工研菌寄 ATCC寄託番号 発酵研究所 菌株名 番号 ATCC IFO ──────────────────────────────────── アースロバクター・ヒアリナス 3125 31263 アースロバクター・ヒアリナス変異株 5256 31736 アースロバクター・ヒアリナス変異株 5259 31739 アースロバクター・パセンス 13346 12139 アースロバクター・パセンス変異株 5257 31737 ────────────────────────────────────
にまとめて示す。 表１ ウロポルフィリンIII 生産菌株の保存機関 ──────────────────────────────────── 微工研菌寄 ATCC寄託番号 発酵研究所 菌株名 番号 ATCC IFO ──────────────────────────────────── アースロバクター・ヒアリナス 3125 31263 アースロバクター・ヒアリナス変異株 5256 31736 アースロバクター・ヒアリナス変異株 5259 31739 アースロバクター・パセンス 13346 12139 アースロバクター・パセンス変異株 5257 31737 ────────────────────────────────────
【００１６】本発明によれば、上述の如きアースロバク
ター属に属するウロポルフィリンIII 生産菌を培地に培
養して、得られた培養物からウロポルフィリンIII を直
接もしくは間接的に、例えばエステル中間体を介して、
採取することによりウロポルフィリンIII を製造するこ
とができる。更に又、Ｌ−シスチン含有培地もしくはＭ
ｇ++含有培地の利用により、さらにウロポルフィリンII
I 生産量を更に向上させることができる。
ター属に属するウロポルフィリンIII 生産菌を培地に培
養して、得られた培養物からウロポルフィリンIII を直
接もしくは間接的に、例えばエステル中間体を介して、
採取することによりウロポルフィリンIII を製造するこ
とができる。更に又、Ｌ−シスチン含有培地もしくはＭ
ｇ++含有培地の利用により、さらにウロポルフィリンII
I 生産量を更に向上させることができる。
【００１７】本発明方法の実施に際して、上記培地とし
ては、炭素源、窒素源、無機塩類などを含有する培地が
使用できる。該培地はまた、Ｌ−シスチン、Ｍｇ++、消
泡剤その他の成分を含有することができる。
ては、炭素源、窒素源、無機塩類などを含有する培地が
使用できる。該培地はまた、Ｌ−シスチン、Ｍｇ++、消
泡剤その他の成分を含有することができる。
【００１８】斯かる炭素源の例としては、たとえば、糖
質、アルコール類、炭化水素類、ふすまなどの如き炭素
源をあげることができる。また、窒素源としては、たと
えば、コーンスチーブ・リカー、酵母エキス、肉エキ
ス、ペプトン、フィッシュミール、アンモニウム塩類、
硝酸塩類、尿素など窒素源をあげることができ、更に、
無機塩類としては、例えば、燐酸塩類、マグネシウム塩
類、亜鉛塩類、カルシウム塩類、マンガン塩類、モリブ
デン塩類、銅塩類などを挙げることができる。
質、アルコール類、炭化水素類、ふすまなどの如き炭素
源をあげることができる。また、窒素源としては、たと
えば、コーンスチーブ・リカー、酵母エキス、肉エキ
ス、ペプトン、フィッシュミール、アンモニウム塩類、
硝酸塩類、尿素など窒素源をあげることができ、更に、
無機塩類としては、例えば、燐酸塩類、マグネシウム塩
類、亜鉛塩類、カルシウム塩類、マンガン塩類、モリブ
デン塩類、銅塩類などを挙げることができる。
【００１９】培地組成は適宜に変更でき、また培養中に
適宜に追加添加することもできる。例えば、炭素源とし
てのアルコール類を利用するに際して、アルコールの残
存濃度が少なくなったとき、あるいはウロポルフィリン
III の生産開始の時期またはその前後でアルコールを追
加することによってウロポルフィリンIII の生産を増加
できる。培養に際しては、培地中に鉄塩類が実質的に存
在しないことが好ましい。
適宜に追加添加することもできる。例えば、炭素源とし
てのアルコール類を利用するに際して、アルコールの残
存濃度が少なくなったとき、あるいはウロポルフィリン
III の生産開始の時期またはその前後でアルコールを追
加することによってウロポルフィリンIII の生産を増加
できる。培養に際しては、培地中に鉄塩類が実質的に存
在しないことが好ましい。
【００２０】本発明においては、ポルフィリン生産菌の
日常の保存にはスラント培地が適し、そして生産培養の
ためには液体培地が好ましい。これらの好ましい、グル
コースやイソプロパノール等の炭素源を除く培地組成の
例を表２に示す。
日常の保存にはスラント培地が適し、そして生産培養の
ためには液体培地が好ましい。これらの好ましい、グル
コースやイソプロパノール等の炭素源を除く培地組成の
例を表２に示す。
【００２１】
【００２２】本発明は、ウロポルフィリンIII 生産菌の
培養に当って培地中に５−アミノレブリン酸を存在せし
めることを特徴としている。この５−アミノレブリン酸
は次の式：
培養に当って培地中に５−アミノレブリン酸を存在せし
めることを特徴としている。この５−アミノレブリン酸
は次の式：
【００２３】
【化２】
【００２４】により表わされる化合物であり、本発明に
おいて５−アミノレブリン酸という場合、遊離の５−ア
ミノレブリン酸のみならず、その塩のごとき誘導体をも
意味する。
おいて５−アミノレブリン酸という場合、遊離の５−ア
ミノレブリン酸のみならず、その塩のごとき誘導体をも
意味する。
【００２５】５−アミノレブリン酸の添加量は、使用す
る菌株、培養条件、培地組成等により異るが、一般に
０．０１９／Ｌ〜３ｇ／Ｌの範囲であり、好ましくは
０．０３ｇ／Ｌ〜０．６ｇ／Ｌの範囲であり、さらに好
ましくは０．０５ｇ／Ｌ〜０．２ｇ／Ｌの範囲であり、
そして例えば０．１ｇ／Ｌである。５−アミノレブリン
酸の添加量は、種々の条件においてその条件に最も適す
るように実験的に容易に決定することができる。
る菌株、培養条件、培地組成等により異るが、一般に
０．０１９／Ｌ〜３ｇ／Ｌの範囲であり、好ましくは
０．０３ｇ／Ｌ〜０．６ｇ／Ｌの範囲であり、さらに好
ましくは０．０５ｇ／Ｌ〜０．２ｇ／Ｌの範囲であり、
そして例えば０．１ｇ／Ｌである。５−アミノレブリン
酸の添加量は、種々の条件においてその条件に最も適す
るように実験的に容易に決定することができる。
【００２６】５−アミノレブリン酸は、生産培養の最初
から培地に添加しておくことが好ましいが、培養開始後
の適当な時期、例えば生産菌がある程度増殖した時点で
添加することもできる。また５−アミノレブリン酸は、
培地に一時に加えることもでき、あるいは培養中に連続
的又は間欠的に添加することもできる。
から培地に添加しておくことが好ましいが、培養開始後
の適当な時期、例えば生産菌がある程度増殖した時点で
添加することもできる。また５−アミノレブリン酸は、
培地に一時に加えることもでき、あるいは培養中に連続
的又は間欠的に添加することもできる。
【００２７】培養は振盪もしくは通気攪拌などの好気条
件下に行われるが、比較的低通気条件を採用するのがよ
い。培養温度としては一般に約２０℃〜約４０℃程度の
温度が利用され、pH約４〜約９．５程度のpH条件が採用
できる。培養時間は、通常、約２〜８日程度がよく、他
の培養条件の選択に応じて適当に変更可能である。
件下に行われるが、比較的低通気条件を採用するのがよ
い。培養温度としては一般に約２０℃〜約４０℃程度の
温度が利用され、pH約４〜約９．５程度のpH条件が採用
できる。培養時間は、通常、約２〜８日程度がよく、他
の培養条件の選択に応じて適当に変更可能である。
【００２８】本発明方法の実施に際しては、培地中にＬ
−シスチン及び／又はＭｇ++を含有させることによっ
て、ウロポルフィリンIII 生産量を一層増大せしめるこ
とができる。上記Ｍｇ++を与える化合物としては、各種
の水可溶性マグネシウム化合物を利用でき、例えば、硫
酸マグネシウム、塩化マグネシウム、硝酸マグネシウ
ム、酢酸マグネシウムの如きマグネシウム化合物を例示
できる。
−シスチン及び／又はＭｇ++を含有させることによっ
て、ウロポルフィリンIII 生産量を一層増大せしめるこ
とができる。上記Ｍｇ++を与える化合物としては、各種
の水可溶性マグネシウム化合物を利用でき、例えば、硫
酸マグネシウム、塩化マグネシウム、硝酸マグネシウ
ム、酢酸マグネシウムの如きマグネシウム化合物を例示
できる。
【００２９】Ｌ−シスチン及び／又はＭｇ++の量は適宜
に選択できるが、例えば、１Ｌの培地に０．１ｇから５
ｇの如きＬ−シスチンの使用量、例えば、０．１ｇから
１０ｇの如きＭｇ++の使用量を例示することができる。
に選択できるが、例えば、１Ｌの培地に０．１ｇから５
ｇの如きＬ−シスチンの使用量、例えば、０．１ｇから
１０ｇの如きＭｇ++の使用量を例示することができる。
【００３０】得られた培養物、たとえば培養液中には、
５−アミノレブリン酸を添加しない従来の方法に比して
格段に増大した量で、ウロポルフィリンIIIが蓄積す
る。培養物から生成したウロポルフィリンIII の採取
は、種々の手段で行うことができる。
５−アミノレブリン酸を添加しない従来の方法に比して
格段に増大した量で、ウロポルフィリンIIIが蓄積す
る。培養物から生成したウロポルフィリンIII の採取
は、種々の手段で行うことができる。
【００３１】例えば、酢酸酸性酢酸エチルその他適当な
有機溶媒を用いて、好収率でウロポルフィリンIII を培
養物から抽出採取することができる。抽出に際しては、
菌体その他の固形分を分離除去した培養液から抽出する
のが普通である。
有機溶媒を用いて、好収率でウロポルフィリンIII を培
養物から抽出採取することができる。抽出に際しては、
菌体その他の固形分を分離除去した培養液から抽出する
のが普通である。
【００３２】又、例えば、菌体その他の固形分と分離さ
れた培養液のpHを、１．６〜３．６程度に調節してウロ
ポルフィリンIII を等電点沈殿させ、適宜な固−液分離
手段たとえば濾過、遠心分離などの手段でウロポルフィ
リン濃縮物を得ることができる。
れた培養液のpHを、１．６〜３．６程度に調節してウロ
ポルフィリンIII を等電点沈殿させ、適宜な固−液分離
手段たとえば濾過、遠心分離などの手段でウロポルフィ
リン濃縮物を得ることができる。
【００３３】上記例示の如くして得られる濃縮物や抽出
液を、例えば、硫酸メタノールを用いて含有されるウロ
ポルフィリンIII をメチルエステル化し、必要に応じ、
アルミナを用いてカラムクロマト方式により精製して、
メチルエステルの形でウロポルフィリンIII を採取する
ことができる。
液を、例えば、硫酸メタノールを用いて含有されるウロ
ポルフィリンIII をメチルエステル化し、必要に応じ、
アルミナを用いてカラムクロマト方式により精製して、
メチルエステルの形でウロポルフィリンIII を採取する
ことができる。
【００３４】或は又、該濃縮物や抽出液を、液体クロマ
ト処理たとえばスチレン−ジビニルベンゼン系ゲルのカ
ラムを用いる高速液体クロマトグラフィーにより処理し
て、ウロポルフィリンIII を採取することができる。
又、上記ウロポルフィリンIIIのエステルの形で採取し
た場合には、所望により、加水分解処理して塩類に変え
ることができる。
ト処理たとえばスチレン−ジビニルベンゼン系ゲルのカ
ラムを用いる高速液体クロマトグラフィーにより処理し
て、ウロポルフィリンIII を採取することができる。
又、上記ウロポルフィリンIIIのエステルの形で採取し
た場合には、所望により、加水分解処理して塩類に変え
ることができる。
【００３５】例えば、ウロポルフィリンIII のエステル
を、例えば、トルエン．ピリジン、ジクロルエタン、ト
リクロロエタン、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホ
キシドなどの有機溶媒に溶解し、少量のアルカリを加え
て加熱するとウロポルフィリンIII のアルカリ塩が析出
してくるので、この析出物を例えば濾別して塩の形で回
収することができる。
を、例えば、トルエン．ピリジン、ジクロルエタン、ト
リクロロエタン、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホ
キシドなどの有機溶媒に溶解し、少量のアルカリを加え
て加熱するとウロポルフィリンIII のアルカリ塩が析出
してくるので、この析出物を例えば濾別して塩の形で回
収することができる。
【００３６】更に又、鉱酸類を用いてエステルを加水分
解したのち、適当なアルカリで中和して、析出するウロ
ポルフィリンIII のアルカリ塩を回収することもでき
る。
解したのち、適当なアルカリで中和して、析出するウロ
ポルフィリンIII のアルカリ塩を回収することもでき
る。
【００３７】本発明方法で得られるウロポルフィリンII
I は、例えば、ＮａＨｇで処理してウロポルフィノーゲ
ンIII に容易に転化でき、該ウロポルフィノーゲンIII
は、例えば、Bioorg.Chem., ６, ３９７,(１９７７）や
J.Am.Chcm.Scc., ９４, ８２６９,(１９７２）に記載さ
れているように、Cobyrinic acidを経由してビタミンＢ
12に転化できる。更に、医薬用途、その合成中間体、飲
食着色用赤色系色素その他の用途にも有用である。
I は、例えば、ＮａＨｇで処理してウロポルフィノーゲ
ンIII に容易に転化でき、該ウロポルフィノーゲンIII
は、例えば、Bioorg.Chem., ６, ３９７,(１９７７）や
J.Am.Chcm.Scc., ９４, ８２６９,(１９７２）に記載さ
れているように、Cobyrinic acidを経由してビタミンＢ
12に転化できる。更に、医薬用途、その合成中間体、飲
食着色用赤色系色素その他の用途にも有用である。
【００３８】ウロポルフィリンIII の分析法は例えば次
のとおりである。おもに異性体のＩ型と III型を分離で
きる高速液体クロマトグラフィで分析を行う。検出には
波長４０４ｎｍの励起光で発生する、波長６２０ｎｍの
蛍光の強度を測定する。移動相としては次に示すＡ液と
Ｂ液からなる溶液を用いて３０分間に、Ａ／Ｂ＝２／８
からＡ／Ｂ＝９／１に組成を変える勾配法を用いる。 Ａ液；８０％アセトニトリル／７％酢酸／５０ｍＭ酢酸
アンモニウム水溶液 Ｂ液；１０％アセトニトリル／４％酢酸／５０ｍＭ酢酸
アンモニウム水溶液
のとおりである。おもに異性体のＩ型と III型を分離で
きる高速液体クロマトグラフィで分析を行う。検出には
波長４０４ｎｍの励起光で発生する、波長６２０ｎｍの
蛍光の強度を測定する。移動相としては次に示すＡ液と
Ｂ液からなる溶液を用いて３０分間に、Ａ／Ｂ＝２／８
からＡ／Ｂ＝９／１に組成を変える勾配法を用いる。 Ａ液；８０％アセトニトリル／７％酢酸／５０ｍＭ酢酸
アンモニウム水溶液 Ｂ液；１０％アセトニトリル／４％酢酸／５０ｍＭ酢酸
アンモニウム水溶液
【００３９】
【実施例】次に、実施例により本発明をさらに具体的に
説明する。
説明する。
【００４０】実施例１．イソプロパノールを１滴加えた
スラント上に培養したアースロバクター・ヒアリナス
（微工研菌寄第５２５９号）を、イオン交換純水１Ｌあ
たり、イソプロパノール１０mL、酵母エキス１．０ｇ、
ペプトン３．０ｇ、硝酸アンモニウム３．０ｇ、燐酸一
カリウム０．４ｇ、リン酸二ナトリウム１．５ｇ、硫酸
マグネシウム５．０ｇ、硫酸マンガン１０mg、硫酸亜鉛
１０mg、硫酸銅２００μｇ、三酸化モリブデン１０μ
ｇ、炭酸カルシウム５．０ｇ、Ｌ−シスチン０．６ｇ、
および５−アミノレブリン酸０．１ｇを含有する殺菌さ
れた培地２００mLを収容した５００mLの三角フラスコに
接種し、３０℃で１週間振とう培養を行なった。
スラント上に培養したアースロバクター・ヒアリナス
（微工研菌寄第５２５９号）を、イオン交換純水１Ｌあ
たり、イソプロパノール１０mL、酵母エキス１．０ｇ、
ペプトン３．０ｇ、硝酸アンモニウム３．０ｇ、燐酸一
カリウム０．４ｇ、リン酸二ナトリウム１．５ｇ、硫酸
マグネシウム５．０ｇ、硫酸マンガン１０mg、硫酸亜鉛
１０mg、硫酸銅２００μｇ、三酸化モリブデン１０μ
ｇ、炭酸カルシウム５．０ｇ、Ｌ−シスチン０．６ｇ、
および５−アミノレブリン酸０．１ｇを含有する殺菌さ
れた培地２００mLを収容した５００mLの三角フラスコに
接種し、３０℃で１週間振とう培養を行なった。
【００４１】このときの培養液に蓄積したウロポルフィ
リンIII の濃度は３１０mg／Ｌであり、そしてウロポル
フィリンＩの濃度は１１．２mg／Ｌであった。ウロポル
フィリンＩ／III の比は３．６％であった。
リンIII の濃度は３１０mg／Ｌであり、そしてウロポル
フィリンＩの濃度は１１．２mg／Ｌであった。ウロポル
フィリンＩ／III の比は３．６％であった。
【００４２】比較例１．殺菌された培地１Ｌあたりに５
−アミノレブリン酸０．１ｇを含まない培地を用いるほ
かは実施例１と全く同様に１週間培養した。このときの
培養液に蓄積したウロポルフィリンIII の濃度は３４．
１mg／Ｌであり、そしてウロポルフィリンＩの濃度は
５．１mg／Ｌであった。ウロポルフィリンＩ／III の比
は１５％であった。
−アミノレブリン酸０．１ｇを含まない培地を用いるほ
かは実施例１と全く同様に１週間培養した。このときの
培養液に蓄積したウロポルフィリンIII の濃度は３４．
１mg／Ｌであり、そしてウロポルフィリンＩの濃度は
５．１mg／Ｌであった。ウロポルフィリンＩ／III の比
は１５％であった。
【００４３】実施例２．アースロバクター・ヒアリナス
（微工研菌寄第５２５９号）の代りにアースロバクター
・パセンス（ＩＦＯ１２１３９）を使い、イソプロパノ
ールを加える代りにグルコースを１０ｇ／Ｌ含むスラン
トを用い、そして殺菌された培地１Ｌにおいてイソプロ
パノールの代りにグルコースを１０ｇ加えるほかは、実
施例１と全く同様に１週間培養を行なった。このときの
培養液に蓄積したウロポルフィリンIII の濃度は２６mg
／Ｌであり、そしてウロポルフィリンＩの濃度は１．０
mg／Ｌであった。ウロポルフィリンＩ／III の比は３．
８％であった。
（微工研菌寄第５２５９号）の代りにアースロバクター
・パセンス（ＩＦＯ１２１３９）を使い、イソプロパノ
ールを加える代りにグルコースを１０ｇ／Ｌ含むスラン
トを用い、そして殺菌された培地１Ｌにおいてイソプロ
パノールの代りにグルコースを１０ｇ加えるほかは、実
施例１と全く同様に１週間培養を行なった。このときの
培養液に蓄積したウロポルフィリンIII の濃度は２６mg
／Ｌであり、そしてウロポルフィリンＩの濃度は１．０
mg／Ｌであった。ウロポルフィリンＩ／III の比は３．
８％であった。
【００４４】比較例２．殺菌された培地１Ｌあたりに５
−アミノレブリン酸０．１ｇを含まない培地を用いるほ
かは実施例２と全く同様に１週間培養した。このときの
培養液に蓄積したウロポルフィリンIII の濃度は１２．
０mg／Ｌであり、そしてウロポルフィリンＩの濃度は
２．２mg／Ｌであった。ウロポルフィリンＩ／III の比
は１８．３％であった。
−アミノレブリン酸０．１ｇを含まない培地を用いるほ
かは実施例２と全く同様に１週間培養した。このときの
培養液に蓄積したウロポルフィリンIII の濃度は１２．
０mg／Ｌであり、そしてウロポルフィリンＩの濃度は
２．２mg／Ｌであった。ウロポルフィリンＩ／III の比
は１８．３％であった。
【００４５】実施例３．実施例１に記載したのと同様に
して３００mg／ＬのウロポルフィリンIII を含有する培
養液を得、これを用いて次の様にしてウロポルフィリン
エステルを得た。
して３００mg／ＬのウロポルフィリンIII を含有する培
養液を得、これを用いて次の様にしてウロポルフィリン
エステルを得た。
【００４６】培養液（１５００mL）を遠心分離し上澄み
（１４３０mL）を回収した。上澄みにイオン交換樹脂を
加えてポルフィリンを吸着させた。これを濾過しイオン
交換樹脂を回収し、凍結乾燥した。これを氷浴中のメタ
ノールに浸けて濃硫酸を少量加えて、約１２時間暗所に
保存しポルフィリンのメチル化を行なった。これを濾過
し、濾液にポルフィリンメチルエステルを確認し、氷浴
中アンモニア水を加え、pHを７．０に調整した。
（１４３０mL）を回収した。上澄みにイオン交換樹脂を
加えてポルフィリンを吸着させた。これを濾過しイオン
交換樹脂を回収し、凍結乾燥した。これを氷浴中のメタ
ノールに浸けて濃硫酸を少量加えて、約１２時間暗所に
保存しポルフィリンのメチル化を行なった。これを濾過
し、濾液にポルフィリンメチルエステルを確認し、氷浴
中アンモニア水を加え、pHを７．０に調整した。
【００４７】これを分液ロートに移し、塩化メチレンを
加え有機層を分離した。次に有機層を無水硫酸マグネシ
ウムで乾燥させて塩化メチレンを減圧留去した。抽出物
を、シリカゲルカラムクロマトにより精製し、クロロホ
ルムとメタノールを用いて再結晶法によりウロポルフィ
リンIII オクタメチルエステルの結晶４２８mgを得た。
加え有機層を分離した。次に有機層を無水硫酸マグネシ
ウムで乾燥させて塩化メチレンを減圧留去した。抽出物
を、シリカゲルカラムクロマトにより精製し、クロロホ
ルムとメタノールを用いて再結晶法によりウロポルフィ
リンIII オクタメチルエステルの結晶４２８mgを得た。
【００４８】精製したウロポルフィリンIII のオクタメ
チルエステルのＦＡＢ−ＭＡＳＳスペクトル、および核
磁気共鳴スペクトル（13ＣＮＭＲ、および 1Ｈ ＮＭ
Ｒ）を各々図１、図２、及び図３に示す。
チルエステルのＦＡＢ−ＭＡＳＳスペクトル、および核
磁気共鳴スペクトル（13ＣＮＭＲ、および 1Ｈ ＮＭ
Ｒ）を各々図１、図２、及び図３に示す。
【００４９】
【効果】本発明によれば、アースロバクター属微生物を
培養してウロポルフィリンIIIを生産せしめることによ
るウロポルフィリンIII の製造方法において、培地に５
−アミノレブリン酸を添加することによりウロポルフィ
リンIII の生産速度を上昇せしめ、短期間に高濃度のウ
ロポルフィリンIII を蓄積せしめることができる。例え
ば、従来法において１週間にウロポルフィリンIII が３
４mg／Ｌ蓄積する場合、同じ条件下で５−アミノレブリ
ン酸を添加することにより１週間のウロポルフィリン蓄
積量が１０倍近い３１０mg／Ｌとなる。また、副産物で
あるウロポルフィリンＩに対する目的物であるウロポル
フィリンIII の比率を上げることができ、これによりウ
ロポルフィリンIII の分離精製が容易となる。例えば、
従来法においてウロポルフィリンＩ／III の比が１５〜
１８％であるのに対して、５−アミノレブリン酸を添加
した場合、その比が４％未満となる。
培養してウロポルフィリンIIIを生産せしめることによ
るウロポルフィリンIII の製造方法において、培地に５
−アミノレブリン酸を添加することによりウロポルフィ
リンIII の生産速度を上昇せしめ、短期間に高濃度のウ
ロポルフィリンIII を蓄積せしめることができる。例え
ば、従来法において１週間にウロポルフィリンIII が３
４mg／Ｌ蓄積する場合、同じ条件下で５−アミノレブリ
ン酸を添加することにより１週間のウロポルフィリン蓄
積量が１０倍近い３１０mg／Ｌとなる。また、副産物で
あるウロポルフィリンＩに対する目的物であるウロポル
フィリンIII の比率を上げることができ、これによりウ
ロポルフィリンIII の分離精製が容易となる。例えば、
従来法においてウロポルフィリンＩ／III の比が１５〜
１８％であるのに対して、５−アミノレブリン酸を添加
した場合、その比が４％未満となる。
【図１】図１は、ウロポルフィリンIII オクタメチルエ
ステルのＦＡＢ−ＭＡＳＳスペクトルを示す。
ステルのＦＡＢ−ＭＡＳＳスペクトルを示す。
【図２】図２は、ウロポルフィリンIII オクタメチルエ
ステルの13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
ステルの13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３】図３は、ウロポルフィリンIII オクタメチルエ
ステルの1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。この図中、Ｂ
はＡのＢ′部分を拡大したものである。
ステルの1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。この図中、Ｂ
はＡのＢ′部分を拡大したものである。
Claims (1)
- 【請求項１】 アースロバクター（Arthrobacter) 属に
属しウロポルフィリンIII を生産する能力を有する微生
物を５−アミノレブリン酸を含有する培地において培養
し、得られた培養物からウロポルフィリンを採取するこ
とを特徴とするウロポルフィリンIII の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19953191A JPH0538295A (ja) | 1991-08-08 | 1991-08-08 | ウロポルフイリンｉｉｉ の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19953191A JPH0538295A (ja) | 1991-08-08 | 1991-08-08 | ウロポルフイリンｉｉｉ の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0538295A true JPH0538295A (ja) | 1993-02-19 |
Family
ID=16409382
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19953191A Pending JPH0538295A (ja) | 1991-08-08 | 1991-08-08 | ウロポルフイリンｉｉｉ の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0538295A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009069806A1 (ja) | 2007-11-30 | 2009-06-04 | Fukutome, Hirofumi | テトラピロール化合物の製造方法およびテトラピロール化合物 |
-
1991
- 1991-08-08 JP JP19953191A patent/JPH0538295A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009069806A1 (ja) | 2007-11-30 | 2009-06-04 | Fukutome, Hirofumi | テトラピロール化合物の製造方法およびテトラピロール化合物 |
| KR20100102118A (ko) | 2007-11-30 | 2010-09-20 | 후쿠토메 히로후미 | 테트라피롤 화합물의 제조 방법 및 테트라피롤 화합물 |
| US8628942B2 (en) | 2007-11-30 | 2014-01-14 | Hirofumi Fukutome | Method for preparing tetrapyrrole compounds and tetrapyrrole compounds |
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