JPH054030B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕 本発明は合成バインダーを少くとも一層に含む
乾式分析要素に関し、さらに詳しくは水性液体中
の蛋白質例えばアルブミンあるいは総蛋白の定量
分析用の乾式操作可能な一体型多層分析要素に関
するものである。 〔従来の技術〕 水性液体中のアルブミンや総蛋白のように蛋白
質を定量分析するときに用いられる乾式一体型多
層分析要素では試薬を安定にしたり、他の蛋白質
との競合反応を避けるため、非蛋白性親水性ポリ
マーバインダーとしてポリアクリルアミド、ポリ
−Ｎ−ビニル−２−ピロリドン、アクリルアミド
−Ｎ−ビニル−２−ビロリドン共重合体あるいは
アガロースを用いることが特開昭58−77664号公
報及び同57−50660号公報に提案されている。こ
れらの要素はポリエチレンテレフタレート支持体
上に試薬及び緩衝剤を上記の非蛋白性親水性ポリ
マーバインダーに分散した試薬層と多孔性展開層
をこの順に塗布積層したものである。展開層にヒ
ト血清を点着すると展開層から試薬層に水分が供
給されて両層が液体接触状態になり、試薬層から
試薬等が供給され展開層に拡散移行して展開層で
アルブミン又は総蛋白が試薬と反応して発色する
ので、色濃度を測定して比色測定の原理により
各々の含有量を求める乾式操作の要素である。 〔発明が解決しようとする問題点〕 しかしながらこれらの要素は用いられている非
蛋白性親水性ポリマーバインダーが通常は硬化し
難いため、製造される乾式分析要素の品質、特に
膜質が弱いという問題があつた。またアルブミン
分析要素では測定時間が長引くとグロブリンの妨
害が無視できない程度に現われることを判明し
た。 本発明の目的は非蛋白性親水性ポリマーバイン
ダーが架橋硬化可能で硬化により膜質が強化さ
れ、安定製造可能な乾式分析要素を提供すること
にある。 本発明の他の目的は簡単な層構成でグロブリ
ン、その他の蛋白質の妨害による誤差を低減した
アルブミン分析用乾式分析要素を提供することに
ある。 本発明の他の目的は硬化可能な非蛋白性親水性
ポリマーバインダーの使用により膜質の強化され
た総蛋白分析用乾式分析要素を提供することにあ
る。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明のこのような目的は、メタリルアルコー
ルとアクリルアミドもしくはその誘導体、アクリ
ル酸もしくはその誘導体又はＮ−ビニル−２−ピ
ロリドンとの共重合体を非蛋白性親水性ポリマー
バインダーとして少なくとも一層に含む乾式の一
体型多層分析要素によつて達成される。 メタリルアルコールは、２−メチルアリルアル
コールとも呼ばれ、重合単位（構成繰り返し単
位）としては、下記の構造をとると考えられる。 メタリルアルコールと共重合されるコモノマー
としてはアクリルアミドおよびその誘導体（例え
ばメタクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリル
アミド、ジアセトンアクリルアミド、Ｎ−（tert
−ブチル）アクリルアミド、Ｎ−（イソプロピル）
アクリルアミド、２−アクリルアミド−２−メチ
ルプロパンスルホン酸、Ｎ−〔３−（ジメチルアミ
ノ）プロピル〕アクリルアミド等）、アクリル酸
およびその誘導体（例えば、ヒドロキシエチルア
クリレート等がある。これらの中でアクリルアミ
ド、Ｎ−ビニル−２−ピロリドン及びアクリル酸
が好ましく、特にアクリルアミド及びＮ−ビニル
−２−ピロリドンが好ましい。これらのコモノマ
ーは二つ以上併用することもできる。 共重合比はメタリルアルコール単位が0.5〜50
モル％程度、好ましくは３〜30モル％程度であ
り、従つてアクリルアミド等の他のビニル化合物
単位が50〜99.5モル％程度、好ましくは70〜97モ
ル％程度である。 これらのメタリルアルコールを含む共重合体は
「高分子合成法」（C.G.Overberger編、湊宏訳、
東京化学同人、1969年発行）あるいは「高分子合
成の実験法」（大津降行、木下雅悦共著、化学同
人、1972年発行）を参考に触媒、反応溶媒を適当
にえらべば容易に合成することができる。共重合
体の中ではアクリルアミドメタリルアルコール共
重合体、アクリルアミドＮ−ビニル−２−ピロリ
ドン−メタリルアルコール共重合体、アクリルア
ミドアクリル酸−メタリルアルコール共重合体が
好ましい。 合成された共重合体は架橋剤を添加すれば容易
に架橋して硬化する。架橋剤にはホルマリン、グ
ルタルアルデヒドのようなアルデヒド、テトラエ
チレングリコール、エチレングリコールジグリシ
ジルエーテルのような少くとも二個以上のグリシ
ジル基を含むエポキシ化合物及びジビニルスルホ
ン、エチレンビスビニルスルホニルアセトアミ
ド、ビス（ビニルスルホニルメチル）エーテルの
ような少くとも二個の電子吸引性ビニル基を含む
化合物を用いることができる、架橋剤の添加量は
メタリル共重合体に対し、1.25重量％以上、好ま
しくは２〜20重量％の範囲から選択される。架橋
は一般には加熱により行うが、その温度は共重合
体の組成及び架橋剤の種類によつて異り約20℃か
ら約200℃の温度範囲で架橋できるが、乾式分析
要素においては約20℃から約80℃、好ましくは約
30℃から約60℃の温度範囲から選択される。 本発明の乾式分析要素は通常は光透過性水不透
過性支持体の上に少くとも一層の前記親水性ポリ
マーバインダー層とその上に設けられて試料を均
一に拡散せしめる多孔性展開層とからなつてい
る。このような水性液体測定用の多層分析要素の
典型的な例は米国特許第3992158号及び同第
4042335号に開示されている。場合によつては米
国特許3485587号の如く単一ゾーンからなる要素
であつてもよい。 多孔性展開層としては、特開昭55−164356号公
報、特開昭57−66359号公報等に記載の織物展開
層（例、ブロード、ポプリン等の平織等）、特開
昭60−222769号公報等に記載の編物展開層（例、
トリコツト編、ダブルトリコツト編、ミラニーズ
編等）、特開昭57−148250号公報に記載の有機ポ
リマー繊維パルプ含有妙造紙からなる展開層、特
公昭53−21677号公報、USP3992158等に記載の
メンブランフイルター（ブラツシユポリマー層）、
ポリマーミクロビーズ、ガラスミクロビーズ、珪
藻土が親水性ポリマーバインダーに保持されてな
る連続微空隙含有多孔性層等の非繊維等方的多孔
性展開層、特開昭55−90859号公報に記載のポリ
マーミクロビーズが水で膨潤しないポリマー接着
剤で点接触状に接着されてなる連続微空隙含有多
孔性層（三次元格子状粒状構造物等）からなる非
繊維等方的多孔性展開層、その他特開昭57−
148250号公報に記載のポリエチレンパルプ含有抄
造紙からなる展開層、特開昭56−24576号公報、
特開昭57−94658号公報に記載の紙からなる展
開層、特開昭57−125847号公報に記載されている
繊維分散液を塗布した繊維質展開層等を用いるこ
とができる。これらの多孔性展開層のうちで指示
薬を含有保持させやすい点で織物展開層、編物展
開層に代表される繊維質展開層が好ましい。この
ような多好性の展開層を設けることにより血清、
尿のような水性液体試料を均一に拡散せしめて分
析精度及び分析の再現性を高めることができる。 親水性ポリマーバインダー層は前記メタリルア
ルコール共重合体の未架橋物、部分架橋物または
架橋物を主成分とする吸水性の層で水に接触して
膨潤し水を吸収できる層である。 水吸収時の膨潤率は30℃で約150％から約2000
％、好ましくは約250％から約1500％の範囲が適
当である。 親水性ポリマーバインダー層に用いられる前記
の親水性ポリマーバインダーの含有量は１m²当り
約７ｇから約70ｇ、好ましくは約10ｇから約50ｇ
の範囲である。親水性ポリマーバインダーは必要
により他の親水性バインダーと併用して用いるこ
ともできる。 この親水性ポリマーバインダー層の乾燥時の厚
さは約1μｍから約100μｍ、好ましくは約3μｍか
ら約30μｍの範囲、被覆量では約１ｇ／m²から約
100ｇ／m²、好ましくは約３ｇ／m²から約30ｇ／
m²の範囲が適当である。 この親水性ポリマーバインダー層には液体試料
を適用しての分析操作実施時のPH値を2.0から
10.0の範囲の所望の値に緩衝できる公知の緩衝剤
から適宜選択して含有させることができる。 用いうる緩衝剤としては、日本化学会編「化学
便覧基礎編」（東京、丸善(株)、1966年発行）1312
−1320頁、Ｒ、Ｍ、Ｃ、Dawson et、al編
「Data for Biochemical Research」第２版
Oxford at thc Clarendon Press、1969年発行）
476−508頁、「Biochemistry」５、467頁以降
（1966年）、「Ana−lytical Biochemistry」104、
300〜310頁（1980年）等に記載のPH緩衝剤系があ
る。 PH2.0〜10.0の範囲のPH緩衝剤の具体例として、
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
（Tris）を含む緩衝剤；燐酸塩を含む緩衝剤；硼
酸塩を含む緩衝剤；酢酸または酢酸塩を含む緩衝
剤；枸櫞酸または枸櫞酸塩を含む緩衝剤；グリシ
ンを含む緩衝剤；リンゴ酸；コハク酸；マロン
酸；酒石酸；グルタル酸；３，３ジメチルグルタ
ル酸；Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グ
リシン（Bicine）；Ｎ−２−ヒドロキシエチルピ
ペラジン−N′−２−ヒドロキシプロパン−３−
スルホン酸（HEPPS）Na塩またはＫ塩等；Ｎ−
２−ヒドロキシエチルピペラジン−N′−３−ス
ルホン酸（EPPS）Na塩またはＫ塩等；Ｎ−〔ト
リス（ヒドロキシメチル）メチル〕−３−アミノ
プロパンスルホン酸（TAPS）Na塩またはＫ塩
等；Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−
N′−２−エタンスルホン酸（HEPES）Na塩ま
たはＫ塩等；およびこれらのいずれかと必要によ
り組合せられる酸、アルカリまたは塩がある。好
ましい緩衝剤の具体例として、燐酸二水素カリウ
ム−燐酸水素二ナトリウム；Tris−硼酸ナトリ
ウム；Tris−硼酸ナトリウム−EDTA・2Na
塩；Tris−枸櫞酸；酢酸−酢酸ナトリウム；枸
櫞酸−燐酸二水素ナトリウム；Bicine；
HEPPS；HEPPSナトリウム塩；EPPS；EPPS
ナトリウム塩；TAPS；TAPSナトリウム塩；
HEPES；リンゴ酸；コハク酸；マロン酸；酒石
酸；グルタル酸；３，３−ジメチルグルタル酸等
がある。 PH緩衝剤または酸の要素中における含有量は１
m²当り約30ミリ当量から約500ミリ当量、好まし
くは約50ミリ当量から約300ミリ当量の範囲であ
る。 親水性ポリマーバインダー層には被検体あるい
は試薬等に悪影響を及ぼさない諸種の成分を含有
させることができる。その例としてノニオン性界
面活性剤がある。ノニオン性界面活性剤の具体例
として、ｐ−オクチルフエノキシポリエトキシエ
タノール、ｐ−ノニルフエノキシポリエトキシエ
タノール、ポリオキシエチレンオレイルエーテ
ル、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレー
ト、ｐ−ノニルフエノキシポリグリシドール、オ
クチルグルコシド等がある。ノニオン性界面活性
剤を親水性ポリマーバインダー層に含有させるこ
とにより分析操作時に水性液体試料中の水が親水
性ポリマーバインダー層に実質的に一様に吸収さ
れやすくなり、また多孔性展開層との液体接触が
迅速にかつ実質的に一様になる。 親水性ポリマーバインダー層は必要に応じて２
層以上設けることができる。２層以上の親水性ポ
リマーバインダー層を設ける場合には、多孔性展
開層に近い層に低分子量のPH緩衝剤組成物または
低分子量の酸を含有させ、多孔性展開層から遠い
層に高分子量のPH緩衝剤または高分子量の酸を含
有させることが好ましい。用いることができる高
分子量の酸の例として、公知のカルボキシル基含
有ポリマー、スルホン酸基含有ポリマーがある。
親水性ポリマーバインダー層にはそのほか公知の
媒染剤、ポリマー媒染剤等を含有させることがで
きる。親水性ポリマーバインダー層は実質的に透
明であることが好ましいが、必要に応じて吸水層
中に二酸化チタン微粒子、硫酸バリウム微粒子、
カーボンブラツク等を小量分散含有させて光学的
性能を調節することができる。 親水性ポリマーバインダー層に後記の試薬組成
物を含有させて試薬層としての機能をもたせるこ
とができる。この場合には親水性ポリマーバイン
ダー層と支持体との間にさらに吸水層を設けるこ
ともできる。 吸水層は水を吸収して膨潤する親水性ポリマー
を主成分とする層で、吸水層の界面に到達または
浸透した水性液体試料の水を吸収できる層であ
り、全血試料を用いる場合には水性液体成分であ
る血漿の試薬層または試薬組成物含有展開層への
浸透を促進する作用を有している。吸水層に用い
られる親水性ポリマーは水吸収時の膨潤率が30℃
で約150％から約2000％、好ましくは約250％から
約1500％の範囲のポリマーである。親水性ポリマ
ーの具体例として前記メタリルアルコール共重合
体の架橋していないもの特開昭59−171864、特開
昭60−115850等に開示の酸処理ゼラチン、脱イオ
ンゼラチン等のゼラチン、メタル化ゼラチン、ヒ
ドロキシアクリレートグラフトゼラチン等のゼラ
チン誘導体、特開昭59−171864、特開昭60−
115859等に開示のアガロース、ブルラン、ブルラ
ン誘導体、ポリアクリルアミド、ポリビニルアル
コール、ポリビニルピロリドン等がある。これら
の親水性ポリマーは単独で、あるいは２種以上を
組合せて用いることができる。 吸水層の乾燥時の厚さは約1μｍから約100μｍ、
好ましくは約3μｍから約30μｍの範囲、被覆量で
は約１ｇ／m²から約100ｇ／m²、好ましくは約３
ｇ／m²から約30ｇ／m²の範囲である。吸水層には
公知のPH緩衝剤、有機カルボン酸、酸性ポリマ
ー、塩基性ポリマー等を含有させて使用時（分析
操作実施時）のPHを調節することができる。さら
に吸水層には公知の媒染剤、ポリマー媒染剤等を
含有させることができる。吸水層は実質的に透明
であることが好ましいが、必要に応じて吸水層中
に二酸化チタン微粒子、硫酸バリウム微粒子、カ
ーボンブラツク等を少量分散含有させて光学的性
能を調節することができる。 親水性ポリマーバインダー層あるいは多孔性展
開層等に水性液体試料中の予め定められた成分と
反応して検出可能な変化を生じさせる少なくとも
１種の酵素を含む試薬組成物を一層にあるいは適
宜分散させて実質的に一様に含有せしめる。検出
可能な変化とは主として光学的測定方法により検
出できる変化を意味し、例えば色変化、発色（呈
色）、螢光発生、紫外線領域における吸収波長の
変化、混濁発生等である。 この試薬組成物は水性液体試料中の被検成分と
この成分を分析するために選択した酵素が関与す
る（触媒する）生化学反応または化学反応によつ
て決り、選択した反応が２種以上の酵素が関与す
る反応の場合にはそれらの酵素を含む試薬組成物
を一つの試薬層に混合して含有させることもでき
るし、必要に応じて試薬組成物を２種以上の別個
の層に分けて含有させることもできる。 酵素を少なくとも１種含む試薬組成物の例とし
ては、米国特許3992158、特公昭53−21677、特開
昭54−26793、特開昭55−164356、特開昭59−
20853、特開昭59−46854、特開昭59−54962、特
公昭55−25840等に記載のグルコースオキシダー
ゼとペルオキシダーゼを含むグルコース分析用改
良トラインダー（Trinder）試薬組成物、特公昭
56−45599、特開昭59−193352等に記載のコレス
テロールオキシダーゼ、ペルオキシダーゼと必要
により配合されるコレステロールエステラーゼを
含むコレステロール分析用試薬組成物、特開昭52
−3488、特開昭58−77661、特開昭56−70460等に
記載のウレアーゼを含む尿素態窒素（BUN）分
析用試薬組成物、特開昭53−24893等に記載のリ
ポプロテインリパーゼ、グリセロールキナーゼ、
α−グリセロール−３−燐酸オキシダーゼ、ペル
オキシダーゼを含むトリグリセリドまたはグリセ
ロール分析用試薬組成物、特開昭54−151193、特
開昭60−78580に記載のビリルビン特異的酸化酵
素とペルオキシダーゼを含むビリルビン分析用試
薬組成物、特開昭53−26188、特開昭59−193352
等に記載のウリカーゼとペルオキシダーゼを含む
尿酸分析用試薬組成物、特開昭55−124499、特開
昭58−86457等に記載のペルオキシダーゼを含む
過酸化水素検出用呈色試薬組成物等がある。 本発明の一実施態様であるアルブミン分析用乾
式分析要素の場合にはアルブミンと結合して色変
化する指示薬として、コルトホフ（I.M.
Kolthoff）著「酸−塩基指示薬」（Acid−Base
Indicators）」（Mac Millan社、1937年発行）350
−353頁等に記載の蛋白誤差（proteinerror）を
示す酸塩基指示薬色素を含有させることが好まし
い。蛋白誤差を示す酸塩基指示薬色素の例として
ブロムクレゾールグリーン、ブロムクレゾールパ
ープル、ブロムクレゾールブルー、ブロムフエノ
ールブルー、クロルフエノールレツド、フエノー
ルレツド、クレゾールレツド、チモールブルー、
クレゾールフタレイン等のスルホンフタレイン指
示薬色素、インジゴカルミン等のインジゴイド色
素、メチルレツド、メチルオレンジ等のアゾ色素
系指示薬がある。これらの指示薬のうちで、スル
ホンフタレイン指示薬色素が好ましく、ブロムク
レゾールグリーン（BCG）とブロムクレゾール
パープル（BCP）が最も好ましい。 この指示薬は通常は前記の多孔性展開層に含有
させる。その場合、酸塩基指示薬色素の量は１m²
当り約0.2ｇから約3.0ｇ、好ましくは約0.5ｇから
約1.5ｇの範囲である。指示薬は他の層、例えば
親水性ポリマーバインダー層に含有させてもよ
い。 PH緩衝剤は分析操作時に液体接触領域の多孔性
展開層のPH値を約2.0から約4.0、好ましくは約3.2
から約3.4の範囲に維持できる低分子量のPH緩衝
剤組成物または低分子量の酸を用いる。このよう
なPH緩衝剤の例としては、リンゴ酸、乳酸、コハ
ク酸、マロン酸、枸櫞酸、酒石酸等の低分子量カ
ルボン酸およびそれらの塩、USP3438737、日本
化学会編「化学便覧基礎編」（東京、丸善、1966
年発行）1312−1320頁等に記載のその他の低分子
量のPH緩衝剤組成物を挙げることができる。これ
らのうちでリンゴ酸が好ましい。 やはり本発明の一実施態様である総蛋白分析用
乾式分析要素の場合には、例えばビウレツト試薬
が利用される。すなわち、水溶性第二銅塩、例え
ば硫酸銅、硝酸銅等、キレート化剤、例えば酒石
酸塩、クエン酸塩、エチレンジアミン等、及びア
ルカリ、例えば水酸化リチウム、水酸化カルシウ
ム等が含有せしめられる。ビウレツト試薬を用い
た総蛋白分析用乾式分析要素の例は特開昭54−
101398号公報、特開昭58−77664号公報、特開昭
59−51356号公報、特願昭60−132057号明細書な
どに開示されている。このビウレツト試薬はメタ
リルアルコール共重合体を架橋した親水性ポリマ
ーバインダー層に含有せしめるのがよい。 他のものを分析する場合には分析対象物に応じ
た試薬を多孔性展開層あるいは親水性ポリマーバ
インダー層等に含有させる。 光透過性不透過性支持体は従来の一体型多層分
析要素に用いられる公知のものを用いることがで
きる。その具体例としては、ポリエチレンテレフ
タレート、ビスフエノールＡのポリカルボネー
ト、ポリスチレン、セルロースエステル（例、セ
ルロースジアセテート、セルローストリアセテー
ト、セルロースアセテートプロピオネート等）の
ポリマーからなる厚さ約50μｍから約１mm、好ま
しくは約80μｍから約300μｍの範囲の透明な、す
なわち波長約200nｍから約900nｍの範囲の少な
くとも一部の波長範囲の電磁輻射線を透過させ
る、平滑平面状の支持体を用いることができる。
支持体の表面には公知の下塗層または接着層を設
けて親水性ポリマーバインダー層または吸水層と
の接着を強固にすることができる。 このようなメタリルアルコール共重合体の架橋
物の親水性ポリマーバインダー層を含む一体型多
層分析要素は、例えばまず透明支持体上に、メタ
リルアルコール共重合体、架橋剤及び該層に含有
せしめる試薬等を含む溶液を塗布し、この塗布物
を硬化温度範囲のなかから適宜選ばれた温度にお
いて加熱処理することにより親水性ポリマーバイ
ンダー層を形成する。そしてその上に多孔性展開
層を積層すればよい。 本発明の乾式分析要素は一辺約15mmから約30mm
の正方形またはほぼ同サイズの円形等の小片に截
断し、特開昭54−156079号公報、実開昭56−
142454号公報、特開昭57−63452号公報、実開昭
58−32350号公報、特開昭58−501144号公報等に
記載のスライド枠に収めてアルブミン分析用化学
分析スライドとして用いることが、製造、包装、
輸送、保存、測定操作等全ての観点で好ましい。
使用目的によつては、長いテープ状でカセツトま
たはマガジンに収めて用いること、または小片を
開口のあるカードに貼付または収めて用いること
などもできる。 本発明の乾式分析要素は前述の特許性明細書等
に記載の操作により液体試料中の分析を実施でき
る。例えば、6μから15μの範囲の血漿、血清
等の水性液体試料滴を多孔性展開層に点着し、１
分から10分の範囲で、好ましくは37℃近傍の温度
でインクベーシヨンし、光透過性支持体側から発
色の吸収極大波長またはその近傍の波長の光を用
いて試薬展開層の光学濃度を反射測光し、予め作
成した検量線を用いて比色測定法の原理により液
体試料中の分析対象物の量を求めることができ
る。点着する水性液体試料の量、インクベーシヨ
ン時間と温度は一定にすることにより定量分析を
高精度で実施できる。この測定操作は特開昭56−
77746号公報、特開昭58−21566号公報、特開昭58
−161867号公報等に記載の化学分析装置により極
めて容易な操作で高精度の測定をすることができ
る。 〔作用〕 メタリルアルコールを共重合させることによつ
て親水性を付与するとともにその水酸基に架橋剤
を反応させて硬化させることができる。コモノマ
ーであるアクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリドン
等も共重合体に親水性を付与している。 このようなメタリルアルコール共重合体の架橋
物を親水性ポリマーバインダー層に使用するとPH
緩衝剤を含む親水性ポリマーバインダー層はPH緩
衝剤と水に接触して膨潤し水を吸収する。この親
水性ポリマーバインダー層は分析操作時に多孔性
展開層に点着された水性液体試料中の水がこの層
に到達し両層が液体接触状態になつた時に低分子
量のPH緩衝剤を多孔性展開層に拡散により供給し
て多孔性展開層の液体試料の存在領域を予め定め
られた一定のPH値またはその近傍の値に維持する
機能を有する。 〔実施例〕 実施例 １ 本発明のアクリルアミド・Ｎ−ビニル−２−ピ
ロリドン・メタリルアルコール三元共重合体
（A.NV.Mと略称）、モル比58：38：４、粘度
400cp〔20％溶液、40℃、Ｂ型粘度計〕）に試薬と
してりんご酸及び共重合体に対し１重量％のホル
マリン、6N−塩酸数滴を添加して塗布液をつく
り、180μｍの透明ポリエチレンテレフタレート
（PET）支持体上に乾燥厚さ35μｍとなるように
塗布した。比較例として特開昭57−50660で使用
されているアクリルアミド−Ｎ−ビニル−２−ピ
ロリドン共重合体（Ａ・NVと略称、モル比60：
40、粘度400cp〔20％溶液40℃、Ｂ型粘度計〕）を
使用して同じように塗布した。次に厚さ約140μ
ｍのブロムクレゾールグリーン約0.7ｇ／m²を含
む綿紡績糸（100S）製ブロード布地をラミネー
トし多孔性展開層とした。このように作成したサ
ンプルの試薬の塗布量は次の通りである。

【表】 このようにして作成した二つの塗布物を70℃の
温水に浸漬したところ、本発明のサンプルは溶け
なかつたが、比較サンプルは溶け出して、膜質に
差のあることが示された。 次に濃度の異る人アルブミン溶液を点着し発色
濃度を640nｍで測定した。その結果いずれの濃
度でも本発明の架橋硬化可能な非蛋白性バインダ
ーを用いた分析素子の発色光学濃度の高いことが
示された。これは顕微鏡観察の結果本発明のサン
プルは試薬層と展開層がはつきり分離状態を示し
ているのに対し、比較例のサンプルは展開層が試
薬層に陥没しているためと分つた。

【表】 実施例 ２ 本発明の共重合体と特開昭58−77664に記載の
アクリルアミド−Ｎ−ビニル−２−ピロリドン共
重合体（実施例１と同じ）を使用して表２の１の
ようなビウレツト試薬を塗布し、厚さ140μｍの
PET紡績糸（100S相当）製平織布地をラミネー
トした。作成した総蛋白分析要素を40℃の温水に
浸漬したところ本発明のサンプルの試薬層は溶け
ないが、比較例のサンプルの試薬層は溶け出すこ
とが分つた。

【表】 次に濃度の異る牛アルブミン（BSA）含有生
理食塩水を作成したサンプル上に10μ点着し
540nｍで発色濃度を測定した。実施例１と同様、
比較サンプルと比較し本発明のサンプルの濃度が
高かつたが、これは試薬層が硬化されたため膜質
が強く、展開層が試薬層に陥没していないことに
よるものであることが分つた。 次にメタリルアルコール共重合体の合成例を示
す。 合成例 １ 反応容器の中にメタノール220ml、蒸留水80ml、
アクリルアミド30ｇ、Ｎ−ビニル−２−ピロリド
ン30ｇ及びメタリルアルコール５ｇを入れ撹拌し
ながら十分窒素置換する。アゾビスイソブチロニ
トリル0.5ｇを加え60℃で２時間撹拌する。次い
で、アセトン中に反応物を投下し生成物を沈殿せ
しめる。十分乾燥したのち20％（重量）の浴液を
調整し、Ｂ型粘度計で粘度を測定した結果420cp
（40℃）であつた。また、元素分析値はＣ：57.85
％、Ｈ：7.70％、Ｎ：15.64％であつた。 この共重合体溶液にホルマリン、ドデシルベン
ゼンスルホン酸ナトリウム（SDS）、触媒とし塩
酸を添加し、170μのポリエチレンテレフタレー
ト支持体上に厚み26μとなるように塗布、60℃で
20分間乾燥した。各々のサンプルを膨潤計を用
い、37℃で平衡膨潤膜厚を測定し、元の膜厚に対
する膨潤倍率を求めた。硬化剤としてホルマリン
を添加したサンプルはホルマリン添加量の多いほ
ど膨潤率が低く、硬化が進んでいることを示して
いるのに対し、ホルマリンを添加しないサンプル
は37℃の蒸留水に浸すと直ちに溶解した。したが
つて、本発明の硬化性樹脂を用いると温和な条件
で硬化ができる（メタリルアルコールの水酸基が
含まれている。）ことが示された。

〔発明の効果〕

本発明の乾式分析要素は非蛋白性親水性ポリマ
ーバインダーが架橋硬化可能なため架橋硬化によ
つて該層に充分な強度を与えることができる。そ
の結果、製造、保存、使用が容易になる。また、
総蛋白あるいはアルブミン分析用に使用した場合
に発色光学濃度が高く、測定精度、感度ともに向
上することが認められた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ メタリルアルコールとアクリルアミドもしく
   はその誘導体、アクリル酸もしくはその誘導体又
   はＮ−ビニル−２−ピロリドンとの共重合体を親
   水性ポリマーバインダーとして少なくとも一層に
   含む乾式の一体型多層分析要素。 ２ 親水性ポリマーバインダーが架橋された前記
   共重合体である特許請求の範囲１に記載の多層分
   析要素。 ３ 親水性ポリマーバインダーが架橋されていな
   い前記共重合体である特許請求の範囲１に記載の
   多層分析要素。 ４ 共重合体がメタリルアルコールとアクリルア
   ミド又はＮ−ビニル−２−ピロリドンとを共重合
   して得られたものである特許請求の範囲１に記載
   の多層分析要素。 ５ 分析対象物がアルブミンである特許請求の範
   囲１に記載の多層分析要素。 ６ 分析対象物が総蛋白である特許請求の範囲１
   に記載の多層分析要素。