JPH0726959B2 - 全血分析要素 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、生物体液中、たとえば血液中の特定物質の定
量に用いる乾式化学分析要素に関する。

［従来技術とその欠点］ 体液中に存在する各種代謝成分、例えばグルコース、ビ
リルビン、尿素窒素、尿酸、コレステロール、乳酸脱水
素酵素、クレアチンキナーゼ、AST、ALT等の定量分析
は、臨床医学上重要で、疾患の診断、治療経過の追跡、
予後の判定などに不可欠である。血液等を試料とする臨
床化学検査では、微量の液体試料で、精度の高い検査を
行うことができることが望ましい。従来、溶液試薬を用
いる湿式法が広く用いられているが、迅速性に欠ける。

乾式化学分析、すなわち実質的に乾燥状態の分析要素、
例えば、試験片や多層分析要素中に、分析試薬系を導入
した臨床分析法が知られている。乾式化学分析は湿式法
による化学分析（即ち、溶液中に試薬を用いる方法）よ
り、例えば使用上の簡易性、経済上の節約及び分析の迅
速さなどの点で優れている。乾式多層分析要素は、微量
の液体試料で、精度の高い検査を迅速に行うことができ
る分析手段として、開発された。乾式多層分析要素は例
えば、特公昭53−21677号、特開昭55−164356号、特開
昭60−222769号等で知られている。乾式多層分析要素の
一例を挙げれば、透明支持体、試薬層、反射層、展開層
から構成されている。透明支持体は、例えば下塗り処理
を施した薄いプラスチックフィルムである。透明支持体
の上に塗布された試薬層には、液体試料中に含まれる被
検成分と反応し、その成分量に応じた光学濃度に発色す
る試薬が含まれる。反射層は、試薬層に入射した光が展
開層に達するのを防ぎ、試薬層の光学測定の際展開層に
点着した液体試料の影響を受けないようにする役割を持
つ。展開層は、点着された液体試料を均一に、液の量に
ほぼ比例する面積に広げる。このような乾式分析要素を
用いて定量分析するには、液体試料、例えば全血を展開
層の表面に一定量滴下する。展開層で展開された血液
は、反射層を通って試薬層に達し、ここで試薬と反応
し、発色する。点着後、化学分析スライドを適当な時
間、一定温度に保って発色反応を充分に進行させた後、
透明支持体側から照明光を試薬層に照射し、特定波長域
で反射光量を測定して反射濃度を求め、予め求めておい
た検量線に基づいて定量分析を行う。

従来、湿式法、乾式化学分析いずれにおいても、赤血球
を除去した血清または血漿を試料として分析が行なわれ
ることが多かった。しかし血液の他の成分から赤血球を
分離する操作には多くの労力と装置のコストを伴うの
で、未希釈の全血で分析できることが望ましい。

全血を試料として乾式化学分析を行うには、血球（赤血
球及び白血球）及び全血の他の高分子量成分を、分析要
素中で何らかの手段で分離しなければならない。特公昭
53−21677号には、血球および全血の高分子量成分を、
分析要素中で分離するために、ろ過層を設けることを開
示している。しかし、特公昭60−111960号に記載されて
いるように、乾式分析要素に設けたろ過層により血清ま
たは血漿から血球成分を除去する場合には非常に時間が
かかり、また血漿または血清中の分析物質の一部がろ過
層中で失われて、分析が不正確になるおそれがあった。

赤血球による妨害を回避するために、全血中の赤血球を
分析要素中で血漿から分離除去し、しかも血漿中の被検
成分の試薬層への拡散が速やかに行なわれる、全血試料
中の特定成分の分析に有用な乾式分析要素が、特願昭60
−279860号で提案された。この分析要素は、第１の非繊
維質多孔性層、第２の非繊維質多孔性層、繊維質多孔性
層がこの順に一体に積層されており、前記３層の多孔性
層がそれぞれ隣接する面の間で、液体の均一透過が実質
的に妨げられないような微少貫通部を形成するように部
分的に配置された接着剤により実質的に密着して接着さ
れて一体化されている、多層分析要素であり、発色を生
ずる試薬組成物は前記３層の多孔性層のいずれに含ま
れ、第２の非繊維多孔性層の平均有効孔径を0.8μｍか
ら30μｍとしたものである。

しかし、この多層分析要素を用いて全血の分析を行うと
き、試薬組成物から生ずる色素の分光吸収、特に検出に
利用される波長が血液中のヘモグロビンの分光吸収に接
近しているとき、試料血の点着量や展開層での分布によ
って、分析結果が影響され易い。また血液のヘマトクリ
ット値（血液中に占める血球の容積百分率）の大小によ
り、血漿中の成分含量が同じ血液でも、分析結果に差が
出ることが経験された。

［解決しようとする技術的課題］ 本発明は、分析要素中で全血中の赤血球を血漿から分離
除去して赤血球による妨害を回避し、しかも血漿中の被
検成分の試薬層への拡散が速やかに行なわれ、全血試料
中の特定成分を血液のヘマトクリック値に拘わらず高い
精度で分析することができる乾式分析要素の提供を、技
術的課題とする。

［技術的課題の解決手段］ 上記技術的課題は、水不透過性、光透過性支持体の上
に、第１の非繊維質多孔性層、第２の非繊維質多孔性
層、繊維質多孔性層がこの順に一体に積層されており、
前記３層の多孔性層が互いに、液体の均一透過が実質的
に妨げられない程度に微少貫通部を形成するよう部分的
に配置された接着剤により、接着されており、被検成分
の存在下に検出し得る光学的変化を生ずる試薬組成物が
前記非繊維質多孔性層の少なくとも１つに含まれ、前記
光学的変化は前記第１の非繊維質多孔性層において検出
し得る多層分析要素であって、第１の非繊維質多孔性層
がポリスルホンから成ることを特徴とする一体型多層分
析要素により、解決された。

前記分析要素において、前記試薬組成物が第１の非繊維
質多孔性層に含まれるとき、上記技術的課題は、より好
ましく達成された。

上記技術的課題はまた、水不透過性、光透過性支持体の
上に、水浸透性層、第１の非繊維質多孔性層、第２の非
繊維質多孔性層、繊維質多孔性層がこの順に一体に積層
されており、前記３層の多孔性層が互いに、液体の均一
透過が実質的に妨げられない程度に、微少貫通部を形成
するよう部分的に配置された接着剤により接着されてお
り、被検成分の存在下に検出し得る光学的変化を生ずる
試薬組成物が前記水浸透性層および非繊維質多孔性層の
少なくとも１つに含まれ、前記光学的変化は少なくとも
前記水浸透性層において検出し得る多層分析要素であっ
て、前記第１の非繊維質多孔性層がポリスルホンから成
ることを特徴とする一体型多層分析要素により、解決さ
れた。支持体と第１の非繊維質多孔性層の間にある上記
水浸透性層は、多孔性層であってもよいが、無孔性層で
あることが好ましい。

上記分析要素（後者の）において、前記試薬組成物が水
浸透性層および第１の非繊維質多孔性層の少なくとも一
つに含まれるとき、上記技術的課題は、より好ましく達
接された。

［発明の具体的構成の詳細］ 本発明の一体型多層分析要素は水不浸透性支持体と第２
の非繊維質多孔性層の間に設けられた第１の非繊維質多
孔性層がポリスルホンから成ることを特徴とする。

ポリスルホンはポリサルホン、ポリサルホン樹脂とも呼
ばれて、よく知られている（例えば化学工業日報社刊
「9285の化学商品」、第665ページ）。本発明に用いる
ポリスルホンは、芳香族系ポリスルホン、オレフィン系
ポリスルホン、いずれでもよいが、前者が好ましい。芳
香族ポリスルホンには、4,4′−ジヒドロキシジフェニ
ルスルホンの縮重合体、すなわち４−（４′−オキシフ
ェニレンスルホニル）フェニル基の連結体（下記構造式
Ｉ）、4,4′−ジオキシジフェニルスルホンとジフェニ
ルメタンの連結体の重合体（下記構造式II）、4,4′−
ジオキシジフェニルスルホンとビフェニルの連結体の重
合体（下記構造式III）等が知られている。

例えば、ユニオンカーバイド社（米国）または日産化学
（株）の「ユーデルポリサルホン」、アイシーアイ ジ
ャパン（株）の「ポリエーテルサルホン」、カーボラン
ダム社（米国）の“Astrel"（アストレル）等が知られ
ており、これらを用いことができる。

ポリスルホンから成る微多孔性膜は、例えば特開昭62−
27006号に記載された方法で形成することができる。

第２の非繊維多孔性層としては、特公昭53−21677号、
米国特許1,421,341号等に記載されたセルロースエステ
ル類、例えば、セルロースアセテート、セルロースアセ
テート／ブチレート、硝酸セルロースからなるブラッシ
ュ・ポリマーの層が好ましい。６−ナイロン、6,6−ナ
イロン等のポリアミド、ポリエチレン、ポリプロピレン
等の微多孔性膜でもよい。特開昭62−27006号に記載さ
れたポリスルホンから成る微孔性膜でもよい。その他、
特公昭53−21677号、特開昭55−90859号等に記載され
た、ポリマー小粒子、ガラス粒子、けい藻土等が親水性
または非吸水性ポリマーで結合された連続空隙をもつ多
孔性層も利用できる。しかし上記のうち溶血を起こす材
料は、試料血液中の赤血球を破壊し、ヘモグロビンの試
薬層への透過を許すので、好ましくない。

第１と第２の非繊維多孔性層の厚さは同じでも、異なっ
てもよく、50ないし500μｍ、好ましくは80ないし200μ
ｍである。

第１と第２の非繊維多孔性層の孔径は同じでも、異なっ
てもよい。しかし第１の非繊維多孔性層の有効孔径は、
大きくても第２の非繊維多孔性層の有効孔径の３倍を越
えないことが好ましい。また第２の非繊維多孔性層の有
効孔径は0.8μｍから30μｍであることが好ましい。

本明細書で非繊維多孔性層の有効孔径は、ASTM F316−
70に準拠した限界泡圧法（バブルポイント法）により測
定した孔径で示す。非繊維多孔性層が相分離法により作
られたいわゆるブラッシュ・ポリマーから成るメンブラ
ンフィルターである場合、厚さ方向の液体通過経路は、
膜の製造の際の自由表面側（即ち光沢面）で最も狭くな
っているのが普通で、液体通過経路の断面を円に近似し
たときの孔径は、自由表面の近くで最も小さくなってい
る。単位の通過経路における厚さ方向に関する最小孔径
は、さらにフィルターの面方向について分布を持ってお
り、その最大値が粒子に対するろ（瀘）過性能を決定す
る。通常、それは限界泡圧法で測定される。

前に述べたように、相分離法により作られたいわゆるブ
ラッシュ・ポリマーから成るメンブランフィルターで
は、厚さ方向の液体通過経路は膜の製造の際の自由表面
側（即ち光沢面）で最も狭くなっており、本発明の分析
要素においてこの種の膜を用いる場合には、第１の非繊
維多孔性層の支持体に近い側にメンブランフィルターの
光沢面を向けることが好ましい。第２の非繊維多孔性層
も、支持体に近い側にメンブランフィルターの光沢面を
向けることが好ましい。

第２の非繊維質多孔性層を第１の非繊維質多孔性層の上
に固定するには、接着剤を用いることができるが、液体
の均一透過が実質的に妨げられないようにする必要があ
る。そのためには、接着剤を部分的に配置し、接着剤が
存在しない部分に微少貫通部が形成されるようにする。
その方法として特開昭62−138756号（特願昭60−279859
号）に記載された方法が有用である。繊維質多孔性層を
第２の非繊維質多孔性層の上に固定するにも同様の方法
を用いることができる。

第１の非繊維多孔性層の空隙体積（単位面積当たり。以
下同じ）は、第２の非繊維多孔性層の空隙体積より小さ
くすることが好ましく、それには両者の空隙率を同じに
して、前者の厚さを後者より小さくしてもよいし、両者
の厚さを同じとして、前者の空隙率を小さくしてもよ
い。厚さと空隙率の組み合わせで、両者の空隙体積の関
係を規制してもよい。第２の繊維質多孔性層に用いるも
のと同じ膜を、適当な溶剤で処理することによって、空
隙率を必要なだけ小さくすることもできる。

本発明の分析要素は種々の構成を有することができる。
例えば、米国特許3,992,158号、特開昭55−164356号、
特開昭62−138756号、同−138757号、同−138758号（特
願昭60−279859号、同−279860号，同−279861号）の記
載を参考にできる。実用的には例えば、 （１）支持体の上に、第１非繊維多孔性層、第２非繊維
多孔性層、繊維質多孔性層をこの順に、 （２）支持体の上に、接着層（または吸水層）、第１非
繊維多孔性層、第２非繊維多孔性層、繊維質多孔性層
を、この順に、 （３）支持体の上に、検出層、第１非繊維多孔性層、第
２非繊維多孔性層、繊維質多孔性層を、この順に、 （３）支持体の上に、試薬層（試薬組成物の一部を含
む）、第１非繊維多孔性層、第２非繊維多孔性層、繊維
質多孔性層を、この順に、 それぞれ有するものが、有用である（支持体は下塗り層
を含んでいてもよい）。検出層は一般に、被検成分の存
在下で生成した色素等が拡散し、光透過性支持体を通し
て光学的に検出され得る層で、親水性ポリマーにより構
成することができる。検出層は、本発明の分析要素にお
ける水浸透性層が試薬の少なくとも一部を含まない場合
に相当する。媒染劑、例えばアニオン性色素に対してカ
チオン性ポリマーを、含んでもよい。吸水層は一般に、
被検成分の存在下で生成する色素が実質的に拡散しない
ような層を言い、膨潤しやすい親水性ポリマーにより構
成することができる。

第１非繊維多孔性層と第２非繊維多孔性層の間には、さ
らに他の非繊維または繊維質多孔性層、あるいは無孔性
層を設けることができる。

試薬層と第１非繊維多孔性層との間に、妨害物除去層、
気体透過層、光反射層等を設けてもよい。また検出層と
第１非繊維多孔性層との間に、妨害物除去層、光反射層
等を設けてもよい。

光透過性水不透過性支持体の材料として好ましいものは
ポリエチレンテレフタレートである。セルローストリア
セテート等のセルロースエステル類でもよい。親水性層
を強固に接着させるため通常、下塗り層を設けるか、親
水化処理を施す。

試薬組成物は、被検成分の存在下に、光学的に検出し得
る物質、例えば染料を、生成し得る組成物であって、被
検成分と直接に反応して、あるいは被検成分と他の試薬
との反応により生成する中間体との反応の結果、光学的
に検出し得る物質、例えば染料を、生成し得る組成物
（指示薬）を含む。ロイコ色素の酸化によって染料を生
成する組成物（例として、米国特許4,089,747号、特開
昭59−193352号等に記載されたようなアリールイミダゾ
ールロイコ色素）、ジアゾニウム塩、酸化されたときに
他の化合物とカップリングにより染料を生成する化合物
を含む組成物（例えば４−アミノアンチピリン類と、フ
ェノール類またはナフトール類）、還元型補酵素と電子
伝達剤の存在下で染料を生成することのできる化合物か
ら成るもの等を、用いることができる。また、酵素活性
を測定する分析要素の場合には、例えばｐ−ニトロフェ
ノールのような有色物質を遊離しうる自己顕色性基質
を、試薬層や展開層に含むことができる。

被検成分の存在下に発色を生ずる試薬組成物を前記の非
繊維質多孔性層の少なくとも１つに含有させるには、試
薬組成物の適当な溶液または分散液を予め含浸または塗
布した多孔性展開層を、他の水浸透性層、例えば試薬層
の上に特開昭55−164356号のような方法で接着させる方
法も有用である。

多孔性層を、他の水浸透性層（例えば下塗り層、接着
層、吸水層）の上に前記特開昭55−164356号のような方
法で接着させた後、試薬組成物の溶液または分散液を多
孔性層に塗布してもよい。

多孔性層への含浸または塗布には公知の方法を利用でき
る。塗布には例えばディップ塗布、ドクター塗布、ホッ
パー塗布、カーテン塗布等を適宜選択して用いる。

試薬組成物は、総てを第１の非繊維質多孔性層を含んで
もよく、別の多孔性または無孔性層（例えば試薬層）に
分けて含有させてもよい。例えば被検成分と試薬との反
応により中間体を生成する組成物を第２の非繊維多孔性
層に、生成した中間体と反応して染料等を与える組成物
（指示薬）を第１の非繊維多孔性層に含んでもよい。

試薬組成物は、その一部を親水性ポリマーを結合剤とす
る無孔性層（例えば試薬層）に含ませてもよい。親水性
ポリマーとして例えば、ゼラチンおよびこれらの誘導体
（例えばフタル化ゼラチン）、セルロース誘導体（例え
ばヒドロキシエチルセルロース）、アガロース、アクリ
ルアミド重合体、メタアクリルアミド重合体、アクリル
アミドまたはメタアクリルアミドと各種ビニル性モノマ
ーとの共重合体等が利用できる。

親水性ポリマーを結合剤とし試薬組成物を含む均一層を
塗布した後、試薬組成物を含まない非繊維多孔性層を特
開昭55−164356号のような方法で接着させることによっ
て、試薬組成物を第１の非繊維多孔性層に実質的に含有
させることができる。

試薬組成物には必要に応じ、活性化剤、緩衝剤、硬膜
剤、界面活性剤等を含有させることができる。本発明の
分析要素の試薬層に含有させることができる緩衝剤の例
としては、炭酸塩、ホウ酸塩、燐酸塩やBiochemistry誌
第５巻第２号、467ページより477ページ（1966年）に
記載されているグッド（Good）の緩衝剤などを挙げるこ
とができる。これらの緩衝剤は『蛋白質・酵素の基礎実
験法』（堀尾武一ほか著、南江堂、1981年）、前記Bioc
hemistry誌第５巻等の文献を参考にして選択することが
できる。

試薬組成物は酵素を含むものでもよく、特願昭60−2798
59号明細書第18ページから第20ページに記載されたもの
を用いることができる。

繊維質多孔性層は、液体試料の展開層として利用される
ので、液体計量作用を有する層であることが好ましい。
液体計量作用とは、その表面に点着供給された液体試料
を、その中に含有している成分を実質的に偏在させるこ
となく、面の方向に単位面積当りほぼ一定量の割合で広
げる作用である。繊維質多孔性層を構成する材料として
は、紙、不織布、織物生地（例えば平織生地）、編物
生地（例えば、トリコット編）、ガラス繊維紙等を用
いることができる。これらのうち織物、編物等が好まし
い。織物等は特開昭57−66359号に記載されたようなグ
ロー放電処理をしてもよい。展開層には、展開面積、展
開速度等を調節するため、特開昭60−222770号、特願昭
61−122875号、61−122876号、61−143754号に記載した
ような親水性高分子あるいは界面活性剤を含有してもよ
い。繊維質多孔性層を非繊維質多孔性層の上に固定する
には、接着剤を用いることができるが、液体の均一透過
が実質的に妨げられないようにする必要がある。そのた
めには、接着剤を部分的に配置し、接着剤が存在しない
部分に微少貫通部が形成されるようにする。その方法と
して特願昭60−279859号に記載された方法が有用であ
る。

非繊維多孔性層を接着し積層するための接着層を、支持
体、下塗り層、吸水層、検出層等の層の上に設けてもよ
い。接着層は水で膨潤したときに多孔性層を接着するこ
とができるような親水性ポリマー例えば、ゼラチン、ゼ
ラチン誘導体、ポリアクリルアミド、澱粉等からなるこ
とが好ましい。第２の非繊維多孔性層は、検出層、試薬
層等に生じた検出可能な変化（色変化、発色等）を光透
過性の支持体側から反射測光する際に、全血中の赤血球
のヘモグロビンの赤色を遮蔽するとともに、光反射層ま
たは背景層として機能する。第２の非繊維多孔性層に親
水性ポリマーをバインダーとして分散された酸化チタ
ン、硫酸バリウム等の光反射性粒子を含有させてもよ
い。バインダーとしてはゼラチン、ゼラチン誘導体、ポ
リアクリルアミド等が好ましい。さらに、第１の非繊維
多孔性層、繊維質多孔性層のいずれかまたは両方にも、
光反射性粒子を含ませてもよい。

本発明は、全血中のグルコース、尿素、尿酸、クレアチ
ニン等の低分子成分の定量は勿論、総蛋白、アルブミ
ン、各種酵素等の高分子成分、ビルビン等の蛋白質と結
合した成分、コレステロール、グリセリド等の疎水性成
分の定量に特に有用である。

多孔性層に抗原、抗体の少なくとも一方を含有させて、
免疫学的方法による抗原または抗体の定量に用いること
もできる。

［実施例１］ ゼラチン下塗りしてある厚さ180μｍのポリエチレンテ
レフタレート無色透明平滑フィルム上に、乾燥後の膜厚
が７μｍになるようにゼラチン水溶液を塗布、乾燥し
て、吸水層を形成した。

吸水層表面を約25℃の水でほぼ一様に濡らした後、特開
昭62−27006号の実施例２に記載された方法で作られた
有効孔径0.4μｍ、厚さ180μｍのポリスルホンメンブレ
ンフィルター（ポリスルホンは前記構造式II、ｎ＝50〜
80）を重ね合わせ、乾燥させて、吸水層にメンブレンフ
ィルターを接着させた。

次にこのメンブレンフィルターの上から、下記組成物１
および組成物２を表示の割合で順次塗布し、乾燥して、
多孔質試薬層とした。

組成物1: ゼラチン 0.64g/m² 界面活性剤 2.5g/m² （ポリオキシエチレンノニルフェニル） トリスヒドロキシメチル アミノメタン 0.46g/m² リン酸１カリウム 0.46g/m² α−ケトグルタール酸 0.5g/m² Ｌ−アスパラギン酸ナトリウム 2.5g/m² オキザロ酢酸デカルボキシラーゼ 12600IU/m² 塩化マグネシウム（無水） 0.3g/m² FAD 28mg/m² チアミンピロりん酸 118mg/m² ピルビン酸オキシダーゼ 35,000IU/m² ペルオキシダーゼ 6,400IU/m² 溶媒：水 （希NaOH溶液でpHを7.5に調整して塗布した） 組成物2: ロイコ色素（下記構造） 1.8g/m² 界面活性剤 0.6g/m² （ポリオキシエチレン（ｎ＝40）ノニルフェニルエーテ
ル） 溶媒：エタノール ロイコ色素： ２−（3,5−dimethoxy−４−hydroxypheny）−４−phen
ethyl−５−（４−dimethylaminophenyl）imidazole 次に有効孔径3.0μｍ、厚さ140μｍ、空隙率約80％のセ
ルロースアセテートメンブレンフィルタ（富士写真フイ
ルム（株）製ミクロフィルターFM300）の表面に、100メ
ッシュの網（面積率約20％）を通してスクリーン印刷法
で澱粉糊を固形成分3g/m²の割合で付着させたものをラ
ミネートし、乾燥して第２非繊維多孔質層とした。

次に100S相当のPET紡績糸からなる厚さ約250μｍのトリ
コット編物生地、第２非繊維多孔質層上に上記と同じ網
点接着法により接着し、一体化させ、AST活性測定用多
層分析要素を完成した。

［実施例２］ ゼラチン下塗りしてある厚さ180μｍのポリエチレンテ
レフタレート無色透明平滑フィルム上に、下記組成物を
水溶液として塗布、乾燥して、第１試薬層を形成した。

組成物3: ［］内は各成分の被覆量 ゼラチン ［8.2g/m²］ 界面活性剤 ［0.41g/m²］ （ポリオキシエチレン（40）ノニルフェニルエーテル） FAD ［22mg/m²］ チアミンピロりん酸 ［93mg/m²］ ピルビン酸オキシダーゼ ［12,300IU/m²］ ペルオキシダーゼ ［6,520IU/m²］ ビス［（ビニルスルホニルメチルカルボニル）アミノ］
メタン ［180mg/m²］ 以上溶媒：水 ロイコ色素（下記構造） ［280mg/m²］ 溶媒：エタノール ロイコ色素:2−（3,5−dimethoxy−４−hydroxypheny
l）−４−phenethyl−５−（４−dimethylaminopheny
l）imidazole （希NaOH溶液でpHを7.5に調整して塗布した） 試薬層を約25℃の水でほぼ一層に濡らした後、有効孔径
0.4μｍ、厚さ180μｍの前記構造式IIのポリスルホンか
ら成るメンブレンフィルターを重ね合わせ、乾燥させ
て、第１試薬層にメンブレンフィルターを接着させた。

次にこのメンブレンフィルターの上から、下記組成物４
を表示の被覆量になるよう塗布、乾燥して、多孔質試薬
層とした。

組成物4: トリスヒドロキシメチル アミノメタン 0.30g/m² リン酸１カリウム 0.36g/m² α−ケトグルタール酸 0.32g/m² Ｌ−アスパラギン酸ナトリウム 1.92g/m² オキザロ酢酸デカルボキシラーゼ 12600IU/m² 塩化マグネシウム（無水）18.7g/m² ヒドロキシプロピル メチルセルロース 3.2g/m² （希NaOH溶液でpHを7.5に調整） 次に有効孔径3.0μｍ、厚さ140μｍ、空隙率約80％のセ
ルロースアセテートメンブレンフィルタ（富士写真フイ
ルム（株）製ミクロフィルターFM300）の表面に、100メ
ッシュの網（面積率約20％）を通してスクリーン印刷法
で澱粉糊を固形成分3g/m²の割合で付着させたものをラ
ミネートし、乾燥して第２非繊維多孔質層とした。

次に100S相当のPET紡績糸からなる厚さ約250μｍのトリ
コット編物生地を、第２非繊維多孔質層上に上記と同じ
網点接着法により接着し、一体化させ、AST活性測定用
多層分析要素を完成した。

［比較例１］ 実施例１で、ポリスルホンメンブレンフィルターの代わ
りに有効孔径3.0μｍ、厚さ140μｍ、空隙率約80％のセ
ルロースアセテートメンブレンフィルター（富士写真フ
イルム（株）製ミクロフィルターFM300）を用いた他
は、実施例１と同様に作製した。

［測定例２］ マトリット値43％の新鮮全血（ヘパリン採血）に、遠心
分離して得た血漿、血球、ブタ由来のAST（SIGMA社製）
を加え、ヘマトクリット値が25％,40％,55％、AST活性
が220および856unit/の合計６種類の血液を調製し
た。

実施例１および実施例２の分析要素を1.5×1.5cm角に切
断し、点着孔と測定孔を備えたプラスチックマウントに
挿入し、これに上記６種類の血液をそれぞれ点着した。
点着後37℃にて反応させ、640nmの吸収を支持体側より
2.5分後と４分後に反射測光し、ODt（透過光学濃度）に
換算した値（Clinical Chemistry,Vol.24,1335（1978）
の原理による）を用いてAST活性値を算出した。結果を
第１表に示す。

第１表の結果から明らかなように、比較例は血液のヘマ
トクリット値によるAST活性測定値の変化が大きいのに
対し、本実施例の分析要素は血液のヘマトクリット値に
よるAST活性測定値の変化が小さい。すなわち本発明の
分析要素は、全血の酵素活性測定において、すぐれてい
る。

［実施例３］ ゼラチン下塗りしてある厚さ180μｍのポリエチレンテ
レフタレート無色透明平滑フィルム上に、平均重合度10
00、けん化度約88％のポリビニルアルコール水溶液を、
乾燥後の膜厚が25μｍになるように塗布、乾燥して、吸
水層を形成した。

吸水層表面を約25℃の水でほぼ一様に濡らした後、有効
孔径0.4μｍ、厚さ180μｍの前記構造式IIのポリスルホ
ンから成るメンブレンフィルターをラミネート（重ね合
わせ）し、乾燥させて、吸水層にメンブレンフィルター
を一体化させた。

次ぎにこのメンブレンフィルターの上から、下記組成物
５を表示の被覆量になるように水溶液として塗布し、乾
燥して、多孔質試薬層とした。

組成物5: Dyphiline 8.0g/m² （Merck Index,10th Ed.,p.503,item 3465.） スルホサリチル酸 1.6g/m² 2,4−ジクロロベンゼンジアゾニウム スルホサリチル酸塩 0.16g/m² 次に富士写真フイルム（株）製ミクロフィルターFM300
（有効孔径3.0μｍ、厚さ140μｍ、空隙率約80％のセル
ロースアセテートメンブレンフィルタ）の表面に、100
メッシュの網（面積率約20％）を通してスクリーン印刷
法で澱粉糊を固形成分3g/m²の割合で付着させたものを
ラミネートし、乾燥して第２非繊維多孔質層とした。

さらに100S相当のPET紡績糸からなる厚さ約250μｍのト
リコット編物生地を、第２非繊維多孔質層上に上記と同
じ網点接着法により接着し、一体化させ、ビリルビン定
量用乾式分析要素を完成した。

［比較例３］（都合上、比較例２は省略） 実施例３でポリスルホンメンブレンフィルターの代わり
に、有効孔径3.0μｍ、厚さ140μｍ、空隙率約80％のセ
ルロースアセテートメンブレンフィルター（富士写真フ
イルム（株）製ミクロフィルターFM300）を用いた他
は、実施例３と同様に作製した。

［測定例３］ 新鮮ヒト全血（ヘパリン採血管使用）から分離した血球
をDade社製管理用血清Moni−Trol IX、または社製管理
用血清「オメガビリルビン」に加えて、ビリルビンをそ
れぞれ0.5,4.5,10.6,18.6mg/含むヘマトクリット40％
の人工血を調製した。

実施例３および比較例３の分析要素に、上記の人工血を
各10μ点着し、分析要素を密閉容器中で37℃に保っ
て、６分後の反射濃度を波長540nmで測定した。結果を
第３表に示す。

第３表から明らかなように、実施例３の乾式分析要素は
総コレステロールをすぐれた正確度で測定できた。

実施例３および比較例３の分析要素を用いて、4.5mg/dl
および10.6mg/dlで、同じ測定を各10回反復し、同時再
現性を評価した。その結果は第４表に示すごとくであっ
た。

［参考例］ ポリスルホンメンブレンフィルターと従来用いられたセ
ルロースアセテート メンブレン フィルターの光遮蔽
効果を比べるため、次の様な測定を行った。

実施例１で用いたポリスルホンメンブレンフィルター
（Ａとする）と、有効孔径0.8μｍ、厚さ180μｍのセル
ロースアセテートメンブレンフィルター（富士写真フイ
ルム（株）製ミクロフィルターFM80、Ｂとする）にそれ
ぞれ水を含ませる。

この状態で支持対側より、拝啓に黒板を置いた場合と
白板を置いた場合の反射光学濃度（OD）の差を、波長45
0ないし800μｍで測定する。

第２表に示した様に、フィルターＢではその背景が白の
場合と黒の場合で0.57〜0.63の光学濃度の差を生じた
が、フィルターＡでは0.16〜0.22となりその差が約1/3
に減少した。

［発明の効果］ 本発明の分析効果は、第１非繊維多孔質層の光遮蔽効果
が高いため、血液等が構成する展開層側の背景が低くな
り、分析精度、特に同時再現性が改良される。

それだけでなく、驚くべきことには試料血のヘマトクリ
ット値の影響が著しく軽減される。すなわち本発明の分
析要素は、全血を試料として、血液のヘマトクリット値
が25％から55％の広い範囲にわたり、ヘマトクリット値
にほとんど左右されない分析値を得ることができる。従
って検体のヘマトクリット値に対する考慮が不要とな
り、臨床検査の精度が向上し、所要時間が短縮される利
点がある。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１の多層分析要素の断面図である。図面
中の記号の意味は次のとおり。 10……支持体 20……試薬層（第１非繊維多孔質層） 30……血球ろ過層（第２非繊維多孔質層） 50……展開層（繊維質多孔層） 60……吸水層

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】水不透過性、光透過性支持体の上に、第１
   の非繊維質多孔性層、第２の非繊維質多孔性層、繊維質
   多孔性層がこの順に一体に積層されており、前記３層の
   多孔性層が互いに、液体の均一透過が実質的に妨げられ
   ない程度に微少貫通部を形成するよう、部分的に配置さ
   れた接着剤により接着されており、被検成分の存在下に
   検出し得る光学的変化を生ずる試薬組成物が前記非繊維
   質多孔性層の少なくとも１つに含まれ、前記光学的変化
   は前記第１の非繊維質多孔性層において検出し得る多層
   分析要素であって、前記第１の非繊維質多孔性層がポリ
   スルホンから成ることを特徴とする一体型多層分析要
   素。
2. 【請求項２】前記試薬組成物が前記第１の非繊維質多孔
   性層に含まれる特許請求の範囲（１）の分析要素。
3. 【請求項３】前記３層の多孔性層が、それぞれ隣接する
   面の間で実質的に密着して、部分的に配置された接着剤
   により接着されている特許請求の範囲（１）の分析要
   素。
4. 【請求項４】第２の非繊維多孔性層の有効孔径が0.8μ
   ｍから30μｍである特許請求の範囲（１）の分析要素。
5. 【請求項５】水不透過性、光透過性支持体の上に、水浸
   透性層、第１の非繊維質多孔性層、第２の非繊維質多孔
   性層、繊維質多孔性層がこの順に一体に積層されてお
   り、前記３層の多孔性層が互いに、液体の均一透過が実
   質的に妨げられない程度に、微少貫通部を形成するよう
   部分的に配置された接着剤により接着されており、被検
   成分の存在下に検出し得る光学的変化を生ずる試薬組成
   物が前記水浸透性層および被繊維質多孔性層の少なくと
   も１つに含まれ、前記光学的変化は少なくとも前記水浸
   透性層において検出し得る多層分析要素であって、前記
   第１の非繊維質多孔性層がポリスルホンから成ることを
   特徴とする一体型多層分析要素。
6. 【請求項６】前記３層の多孔性層が、それぞれ隣接する
   面の間で実質的に密着して、部分的に配置された接着剤
   により接着されている特許請求の範囲（５）の分析要
   素。