JPH0543593A - チモシンα１−フラグメント、及び該化合物を含有する免疫調節剤 - Google Patents
チモシンα１−フラグメント、及び該化合物を含有する免疫調節剤Info
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 免疫欠乏症、ヴィールス性感染、速い老化、
腫瘍形成の蓋然性及び特に癌の治療のために使用するこ
とのできる免疫調節作用を有する薬剤を提供する。 【構成】 Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕのチモシンα1−フ
ラグメント及びＮ−末端基に付加的なアミノ酸としてア
セチルセリン、アセチルデヒドロアラニン、アセチルリ
ジン又はＮ−末端がリジンでない場合リジンを有する該
化合物の誘導体並びに該化合物を含有する免疫調節作用
を有する薬剤。
腫瘍形成の蓋然性及び特に癌の治療のために使用するこ
とのできる免疫調節作用を有する薬剤を提供する。 【構成】 Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕのチモシンα1−フ
ラグメント及びＮ−末端基に付加的なアミノ酸としてア
セチルセリン、アセチルデヒドロアラニン、アセチルリ
ジン又はＮ−末端がリジンでない場合リジンを有する該
化合物の誘導体並びに該化合物を含有する免疫調節作用
を有する薬剤。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は免疫欠乏症、ヴィールス
性感染、速い老化、腫瘍形成の蓋然性及び特に癌の治療
のために使用することのできる免疫調節作用を有する薬
剤並びに作用物質として該薬剤中に含まれるチモシンα
1−フラグメントに関する。
性感染、速い老化、腫瘍形成の蓋然性及び特に癌の治療
のために使用することのできる免疫調節作用を有する薬
剤並びに作用物質として該薬剤中に含まれるチモシンα
1−フラグメントに関する。
【０００２】
【従来の技術】 チモシンα1は配列 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ− １０ １１ １２ １３ １４ １５ １６ １７ １８ Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ− １９ ２０ ２１ ２２ ２３ ２４ ２５ ２６ ２７ Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ− ２８ Ａｓｎ を有する胸腺の酸性ポリペプチドであり、ここで最初の
アミノ酸であるセリンはアセチル化されている。
アミノ酸であるセリンはアセチル化されている。
【０００３】チモシンα1−調剤は癌治療において及び
免疫学的防御装置の調節の範囲において臨床的に使用さ
れる（Ｐ．Ｂ．Ｃｈｒｅｔｉｅｎｎｅ等著、Ｊ．Ｄ．Ｃ
ａｎｃｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｒｅｐｏｒｔｓ、第６
２巻、第１７８７〜１７９０頁（１９７８年））。チモ
シンα1を胸腺から単離することは非常に困難であるの
で、すでにその全合成への方法が提示されている（Ｊ．
Ａ．Ｃ．Ｓ．第１０１巻、第２５２〜２５４頁（１９７
９年）、西ドイツ国特許出願Ｐ２９１９５９２．４号明
細書）。ヨーロッパ特許公開公報第８０１０７９９７．
１号明細書中に記載されているように、チモシンα1の
いくつかのフラグメントがより僅かな程度であるとして
もチモシンα1と同様な免疫調節作用をすでに有してい
る。わずかに弱い作用にもかかわらず、免疫治療におい
てチモシンα1のかわりにチモシンα1−フラグメントの
使用は次のような利点を提供する。
免疫学的防御装置の調節の範囲において臨床的に使用さ
れる（Ｐ．Ｂ．Ｃｈｒｅｔｉｅｎｎｅ等著、Ｊ．Ｄ．Ｃ
ａｎｃｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｒｅｐｏｒｔｓ、第６
２巻、第１７８７〜１７９０頁（１９７８年））。チモ
シンα1を胸腺から単離することは非常に困難であるの
で、すでにその全合成への方法が提示されている（Ｊ．
Ａ．Ｃ．Ｓ．第１０１巻、第２５２〜２５４頁（１９７
９年）、西ドイツ国特許出願Ｐ２９１９５９２．４号明
細書）。ヨーロッパ特許公開公報第８０１０７９９７．
１号明細書中に記載されているように、チモシンα1の
いくつかのフラグメントがより僅かな程度であるとして
もチモシンα1と同様な免疫調節作用をすでに有してい
る。わずかに弱い作用にもかかわらず、免疫治療におい
てチモシンα1のかわりにチモシンα1−フラグメントの
使用は次のような利点を提供する。
【０００４】１．チモシンα1は分子量３１０７でアミ
ノ酸２８個の比較的大きなポリペプチドであり、その合
成には困難が伴なう。それに反し本発明によるチモシン
α1−フラグメントは著しく小さいし、従って極めて容
易に、高収率でより良好な純度で製造される。
ノ酸２８個の比較的大きなポリペプチドであり、その合
成には困難が伴なう。それに反し本発明によるチモシン
α1−フラグメントは著しく小さいし、従って極めて容
易に、高収率でより良好な純度で製造される。
【０００５】２．チモシンα1−フラグメントの中には
免疫刺激作用を有するペプチドも免疫抑制作用を有する
ペプチドもある。免疫刺激作用を有するフラグメントは
主にＣ−末端フラグメントであり、一方免疫抑制作用は
Ｎ−末端フラグメントである。その異なる薬理学的特性
に相応して、これらフラグメントを個々に、又は組み合
わせて目的の免疫治療に使用することができる。
免疫刺激作用を有するペプチドも免疫抑制作用を有する
ペプチドもある。免疫刺激作用を有するフラグメントは
主にＣ−末端フラグメントであり、一方免疫抑制作用は
Ｎ−末端フラグメントである。その異なる薬理学的特性
に相応して、これらフラグメントを個々に、又は組み合
わせて目的の免疫治療に使用することができる。
【０００６】
【発明の構成】意外にも、すでに公知のフラグメントの
特性をも有するその他のチモシンα１のフラグメントも
見い出された。
特性をも有するその他のチモシンα１のフラグメントも
見い出された。
【０００７】従って、本発明の課題は免疫調節作用を有
する薬剤であり、これは式 Ｒ１−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｒ
2（Ｒ1はＨ−、Ｇｌｕ−、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−、
Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−、Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−又はＴｈｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ
−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕで
あり、Ｒ2は−Ｈ又は−Ｇｌｕである）により表わされ
るチモシンα1−フラグメント少なくとも１個及び／又
は該化合物の誘導体少なくとも１個を遊離の形で又は薬
理学的に認容性の塩の形で含有する。
する薬剤であり、これは式 Ｒ１−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｒ
2（Ｒ1はＨ−、Ｇｌｕ−、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−、
Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−、Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−又はＴｈｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ
−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕで
あり、Ｒ2は−Ｈ又は−Ｇｌｕである）により表わされ
るチモシンα1−フラグメント少なくとも１個及び／又
は該化合物の誘導体少なくとも１個を遊離の形で又は薬
理学的に認容性の塩の形で含有する。
【０００８】もう１つの本発明の課題はチモシンα1−
フラグメントとしてＲ3−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｒ4（ここ
で、Ｒ3はＨ−、Ｌｙｓ−、Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−、Ｌｙｓ
−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ
−、Ｌｅｕ−、Ａｓｐ−Ｌｅｕ−又はＬｙｓ−Ａｓｐ−
Ｌｅｕ−であり、Ｒ4は−Ｈ、−Ｖａｌ、−Ｖａｌ−Ｖ
ａｌ、−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、−Ｖａｌ−
Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ又は−Ｖａｌ−Ｖａｌ
−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕである）を含有する
薬剤。
フラグメントとしてＲ3−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｒ4（ここ
で、Ｒ3はＨ−、Ｌｙｓ−、Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−、Ｌｙｓ
−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ
−、Ｌｅｕ−、Ａｓｐ−Ｌｅｕ−又はＬｙｓ−Ａｓｐ−
Ｌｅｕ−であり、Ｒ4は−Ｈ、−Ｖａｌ、−Ｖａｌ−Ｖ
ａｌ、−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、−Ｖａｌ−
Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ又は−Ｖａｌ−Ｖａｌ
−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕである）を含有する
薬剤。
【０００９】本発明のもう１つの課題はチモシンα1−
フラグメントとしてＲ5−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｒ6（ここ
で、Ｒ5はＨ−、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−、Ａｓｐ−Ｌｅｕ−
Ｌｙｓ−、Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−、Ｔｈｒ
−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−であり、Ｒ6は−
Ｈである）を含有する薬剤。
フラグメントとしてＲ5−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｒ6（ここ
で、Ｒ5はＨ−、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−、Ａｓｐ−Ｌｅｕ−
Ｌｙｓ−、Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−、Ｔｈｒ
−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−であり、Ｒ6は−
Ｈである）を含有する薬剤。
【００１０】本発明のもう１つの課題はチモシンα1−
フラグメントとしてＲ7−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｒ8（ここ
で、Ｒ7はＨ−Ｇｌｕ−又はＶａｌ−Ｇｌｕ−であり、
Ｒ8は−Ｈ又は−Ｇｌｕである）を含有する薬剤。
フラグメントとしてＲ7−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｒ8（ここ
で、Ｒ7はＨ−Ｇｌｕ−又はＶａｌ−Ｇｌｕ−であり、
Ｒ8は−Ｈ又は−Ｇｌｕである）を含有する薬剤。
【００１１】本発明のもう１つの課題はチモシンα1−
フラグメントとしてＲ9−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ（こ
こで、Ｒ9はＨ−、Ｓｅｒ−又はＳｅｒ−Ｓｅｒ−であ
る）を含有する薬剤。
フラグメントとしてＲ9−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ（こ
こで、Ｒ9はＨ−、Ｓｅｒ−又はＳｅｒ−Ｓｅｒ−であ
る）を含有する薬剤。
【００１２】本発明のもう１つの課題は、チモシンα1
−フラグメントとしてＲ10−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｓｐ
（ここで、Ｒ10はＨ−、Ａｌａ−又はＡｓｐ−Ａｌａ−
である）を含有する薬剤。
−フラグメントとしてＲ10−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｓｐ
（ここで、Ｒ10はＨ−、Ａｌａ−又はＡｓｐ−Ａｌａ−
である）を含有する薬剤。
【００１３】本発明のもう１つの課題はチモシンα1−
フラグメントとしてＴｈｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｅｒ−
Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌ
ｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓを含有する薬剤。
フラグメントとしてＴｈｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｅｒ−
Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌ
ｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓを含有する薬剤。
【００１４】相応するチモシンα1−フラグメントも同
様に本発明の課題である。
様に本発明の課題である。
【００１５】本発明による薬剤は記載したチモシンα1
−フラグメント２個以上を含有していてもよい。本発明
によるチモシンα1−フラグメントの例は表１中に詳細
に記載した。これらのフラグメントは誘導体の形でも使
用することができる。チモシンα1−フラグメントのＮ
−の末端基が付加的なアミノ酸として、アセチルセリ
ン、アセチルデヒドロアラニン又はアセチルリジンを有
している誘導体が有利である。Ｎ−末端基にリジンが存
在しないチモシンα1−誘導体はＮ−末端基に付加的に
アミノ酸としてリジンを有することもできる。本発明に
よるチモシンα1−フラグメントも常法で有利に薬理学
的に認容性の酸又は塩基を使用して相応する塩に変換す
ることもできる。チモシンα1−フラグメント及び／又
はその誘導体の形の作用物質の他に、本発明による薬剤
は常用の、選択した投与法に好適な薬理学的に認容性の
結合剤、担持剤及びその他の助剤を含有していてよい。
−フラグメント２個以上を含有していてもよい。本発明
によるチモシンα1−フラグメントの例は表１中に詳細
に記載した。これらのフラグメントは誘導体の形でも使
用することができる。チモシンα1−フラグメントのＮ
−の末端基が付加的なアミノ酸として、アセチルセリ
ン、アセチルデヒドロアラニン又はアセチルリジンを有
している誘導体が有利である。Ｎ−末端基にリジンが存
在しないチモシンα1−誘導体はＮ−末端基に付加的に
アミノ酸としてリジンを有することもできる。本発明に
よるチモシンα1−フラグメントも常法で有利に薬理学
的に認容性の酸又は塩基を使用して相応する塩に変換す
ることもできる。チモシンα1−フラグメント及び／又
はその誘導体の形の作用物質の他に、本発明による薬剤
は常用の、選択した投与法に好適な薬理学的に認容性の
結合剤、担持剤及びその他の助剤を含有していてよい。
【００１６】本発明によるチモシンα1−フラグメント
は常用のペプチド合成法を使用して製造することができ
る。例えば側鎖の最大保護又は最少保護での従来の溶液
合成法により、又はポリマー担体上にペプチドを担持す
るメリーフィールドによる固相合成法又は鎖延長さのた
めにペプチドをポリマー結合活性アミノ酸を介して送達
するポリマー試薬法による固相合成法により製造され
る。
は常用のペプチド合成法を使用して製造することができ
る。例えば側鎖の最大保護又は最少保護での従来の溶液
合成法により、又はポリマー担体上にペプチドを担持す
るメリーフィールドによる固相合成法又は鎖延長さのた
めにペプチドをポリマー結合活性アミノ酸を介して送達
するポリマー試薬法による固相合成法により製造され
る。
【００１７】しかしながら、特に有利な方法は本発明に
よるチモシンα1−フラグメントを西ドイツ国特許出願
公開第ｐ２９１９５９２．４号公報の方法により形成す
る。この方法によれば、混合無水物法を用いてステップ
・バイ・ステップ式に配列延長により本発明のチモシン
α1−フラグメントを合成する。この際、特にウレタン
基中に３級炭素原子を有する保護基、例えば３級ブチロ
キシカルボニル基、α，α−ジメチル−３，５−ジメト
キシベンジルオキシ−カルボニル基及び２−(ｐ−ビフ
エニル）−プロピル−２−オキシ−カルボニル基を使用
し、副反応を立体妨害により押さえ、混合無水物の大過
剰を繰り返し使用することを可能とする。
よるチモシンα1−フラグメントを西ドイツ国特許出願
公開第ｐ２９１９５９２．４号公報の方法により形成す
る。この方法によれば、混合無水物法を用いてステップ
・バイ・ステップ式に配列延長により本発明のチモシン
α1−フラグメントを合成する。この際、特にウレタン
基中に３級炭素原子を有する保護基、例えば３級ブチロ
キシカルボニル基、α，α−ジメチル−３，５−ジメト
キシベンジルオキシ−カルボニル基及び２−(ｐ−ビフ
エニル）−プロピル−２−オキシ−カルボニル基を使用
し、副反応を立体妨害により押さえ、混合無水物の大過
剰を繰り返し使用することを可能とする。
【００１８】
【実施例】次の実施例は本発明によるチモシンα1−フ
ラグメントの製造及びその薬理学的効果を明らかにす
る。
ラグメントの製造及びその薬理学的効果を明らかにす
る。
【００１９】使用した短縮形はＩＵＰＡＣ−ＩＵＰ−
提案に一致させた（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２４７
巻（１９７２年）第９７７〜９８３頁）。この際、次の
意味を表わす： Ｄｄｚ：α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジ
ルオキシ−カルボニル、Ｚ：ベンジルオキシカルボニ
ル、Ａｃ：アセチル、ＯｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチルエス
テル、Ｍｂｈ：４，４′−ジメチルオキシベンズヒドリ
ル、Ｍｅ：メチル、ＯＢｚｌ：ベンジルエステル、及び
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチル。
提案に一致させた（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２４７
巻（１９７２年）第９７７〜９８３頁）。この際、次の
意味を表わす： Ｄｄｚ：α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジ
ルオキシ−カルボニル、Ｚ：ベンジルオキシカルボニ
ル、Ａｃ：アセチル、ＯｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチルエス
テル、Ｍｂｈ：４，４′−ジメチルオキシベンズヒドリ
ル、Ｍｅ：メチル、ＯＢｚｌ：ベンジルエステル、及び
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチル。
【００２０】次の実施例中に記載した製法は保護したチ
モシンα1−フラグメントにおいて終わり、その保護基
は次のように脱離することができる： ａ） Ｄｄｚ−保護基の脱離 Ｄｄｚ−保護したペプチドエステルを塩化メチレン（無
水）中の５％溶液の形の無水のトリフルオル酢酸８〜１
０倍過剰と混合し、室温で１５〜３０分間撹拌する。長
いペプチドにおいては時間を長くする。酸に不安定な
４，４′−ジメトキシベンズヒドリル基を配列中に有す
る場合、Ｄｄｚ−保護基を３０〜６０分の間２．５％又
は１％のトリフルオル酢酸で脱離させる。反応の中断の
ためには溶液を−１５℃に冷却し、計算量のＮ−メチル
モルホリン（＋１０％）で７．０〜７．５のｐＨ値とす
る。
モシンα1−フラグメントにおいて終わり、その保護基
は次のように脱離することができる： ａ） Ｄｄｚ−保護基の脱離 Ｄｄｚ−保護したペプチドエステルを塩化メチレン（無
水）中の５％溶液の形の無水のトリフルオル酢酸８〜１
０倍過剰と混合し、室温で１５〜３０分間撹拌する。長
いペプチドにおいては時間を長くする。酸に不安定な
４，４′−ジメトキシベンズヒドリル基を配列中に有す
る場合、Ｄｄｚ−保護基を３０〜６０分の間２．５％又
は１％のトリフルオル酢酸で脱離させる。反応の中断の
ためには溶液を−１５℃に冷却し、計算量のＮ−メチル
モルホリン（＋１０％）で７．０〜７．５のｐＨ値とす
る。
【００２１】最初にアニソールの添加下に塩化メチレン
中の５０％溶液の形のトリフルオル酢酸でｔｅｒｔ−ブ
チルエステル基並びにｔｅｒｔ−ブチルエーテル基を脱
離し、引き続き４，４′−ジメトキシベンズヒドリル保
護基を９５％トリフルオル酢酸／アニソールで脱離す
る。フラグメントがベンジルオキシカルボニル保護基及
び／又はベンジルエステルを有するならば、トリフルオ
ル酢酸処理の前にアルコール溶液中で炭素上のパラジウ
ムの存在で水素添加することにより常法で脱離する。
中の５０％溶液の形のトリフルオル酢酸でｔｅｒｔ−ブ
チルエステル基並びにｔｅｒｔ−ブチルエーテル基を脱
離し、引き続き４，４′−ジメトキシベンズヒドリル保
護基を９５％トリフルオル酢酸／アニソールで脱離す
る。フラグメントがベンジルオキシカルボニル保護基及
び／又はベンジルエステルを有するならば、トリフルオ
ル酢酸処理の前にアルコール溶液中で炭素上のパラジウ
ムの存在で水素添加することにより常法で脱離する。
【００２２】例１ 全面的に保護された（１９−２４）、Ｄｄｚ−Ｌｙｓ
（Ｚ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｖａｌ−
Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）ＯＭｅの製造 反応溶液Ａ：先ずＤｄｚ−（２０−２４）−ＯＭｅを製
造した。
（Ｚ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｖａｌ−
Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）ＯＭｅの製造 反応溶液Ａ：先ずＤｄｚ−（２０−２４）−ＯＭｅを製
造した。
【００２３】ａ） Ｄｄｚ−（２４）−ＯＭｅ、Ｄｄｚ
−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＭｅ−Ｄｄｚ−Ｇｌｕ（Ｏｔ
Ｂｕ）−ＯＨ ２０ミリモルをアセトン中に溶かし、当
量のジアゾメタン（エーテル溶液）を加えた。クロマト
グラフィーにより単一な帯黄色油状物質の収率１００
％。
−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＭｅ−Ｄｄｚ−Ｇｌｕ（Ｏｔ
Ｂｕ）−ＯＨ ２０ミリモルをアセトン中に溶かし、当
量のジアゾメタン（エーテル溶液）を加えた。クロマト
グラフィーにより単一な帯黄色油状物質の収率１００
％。
【００２４】ｂ） Ｄｄｚ−（２３−２４）−ＯＭｅ、
Ｄｄｚ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＭｅ Ｄｄｚ−Ｖａｌ−ＯＨ ７．５ミリモルをＤｄｚ−Ｇｌ
ｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＭｅ ５ミリモルと反応させ、ジペ
プチドとした。ＣＨＣｌ3／エタノール９３：７でシリ
カゲル上最終精製を行なう。このペプチドはこの先の合
成工程に影響を与えないＤｄｚ−脱離片を有した。
Ｄｄｚ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＭｅ Ｄｄｚ−Ｖａｌ−ＯＨ ７．５ミリモルをＤｄｚ−Ｇｌ
ｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＭｅ ５ミリモルと反応させ、ジペ
プチドとした。ＣＨＣｌ3／エタノール９３：７でシリ
カゲル上最終精製を行なう。このペプチドはこの先の合
成工程に影響を与えないＤｄｚ−脱離片を有した。
【００２５】ｃ） Ｄｄｚ−（２２−２４）−ＯＭｅ、
Ｄｄｚ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＭｅ このトリペプチドを常法でセフアデックスＬＨ２０上メ
アノールを用いてクロマトグラフィーにかけることによ
り純粋にした。メタノール及びＣＨＣｌ3中に良好に溶
けた。無色油状物質：収率６０％。
Ｄｄｚ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＭｅ このトリペプチドを常法でセフアデックスＬＨ２０上メ
アノールを用いてクロマトグラフィーにかけることによ
り純粋にした。メタノール及びＣＨＣｌ3中に良好に溶
けた。無色油状物質：収率６０％。
【００２６】ｄ） Ｄｄｚ−（２１−２４）−ＯＭｅ、
Ｄｄｚ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−ＯＭｅ Ｄｄｚ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ ６ミリモルをＤｄ
ｚ−（２２−２４）−ＯＭｅ ２．９８ミリモルと常法
で反応させテトラペプチドとした。セフアデックスＬＨ
２０／メタノールカラムに通すと、無色ガラス状物質と
して生成物が９４％の収率で得られた。テトラペプチド
はＣＨＣｌ3、メタノール、ジメチルホルムアミド及び
ジオキサン中に良好に溶けた。薄層クロマトグラフィー
において９３：７、７：１及び８５：１０：５で単一で
あり、ニンヒドリンで通常の紫色を示した。
Ｄｄｚ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−ＯＭｅ Ｄｄｚ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ ６ミリモルをＤｄ
ｚ−（２２−２４）−ＯＭｅ ２．９８ミリモルと常法
で反応させテトラペプチドとした。セフアデックスＬＨ
２０／メタノールカラムに通すと、無色ガラス状物質と
して生成物が９４％の収率で得られた。テトラペプチド
はＣＨＣｌ3、メタノール、ジメチルホルムアミド及び
ジオキサン中に良好に溶けた。薄層クロマトグラフィー
において９３：７、７：１及び８５：１０：５で単一で
あり、ニンヒドリンで通常の紫色を示した。
【００２７】ｅ） Ｄｄｚ−（２０−２４）−ＯＭｅ、
Ｄｄｚ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｖａｌ−
Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＭｅ Ｄｄｚ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＯＨ ９ミリモルをＤｄｚ−
（２１−２４）−ＯＭｅ２．４３ミリモルと常法で反応
させてペンタペプチドとした。振盪工程の後、メタノー
ル／セフアデックスＬＨ−２０カラムを介してクロマト
グラフィーにより精製すると、生成物が９９％の収率で
無色ガラス状物質として得られた。
Ｄｄｚ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｖａｌ−
Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＭｅ Ｄｄｚ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＯＨ ９ミリモルをＤｄｚ−
（２１−２４）−ＯＭｅ２．４３ミリモルと常法で反応
させてペンタペプチドとした。振盪工程の後、メタノー
ル／セフアデックスＬＨ−２０カラムを介してクロマト
グラフィーにより精製すると、生成物が９９％の収率で
無色ガラス状物質として得られた。
【００２８】Ｄｄｚ（２０−２４）−ＯＭｅ １．０ｇ
をジクロルメタン１４ｍｌ中に溶かし、トリフルオル酢
酸０．７ｍｌを添加し、Ｄｄｚ−保護基を脱離した。２
０℃で３０分後、Ｎ−メチルモルホリン１．０３ｍｌで
中和した。この際、生じたゲルをジメチルホルムアミド
５ｍｌを添加することにより再び溶かした。
をジクロルメタン１４ｍｌ中に溶かし、トリフルオル酢
酸０．７ｍｌを添加し、Ｄｄｚ−保護基を脱離した。２
０℃で３０分後、Ｎ−メチルモルホリン１．０３ｍｌで
中和した。この際、生じたゲルをジメチルホルムアミド
５ｍｌを添加することにより再び溶かした。
【００２９】反応溶液Ｂ Ｄｄｚ−Ｌｙｓ（Ｚ）ＯＨ ６９３ｍｇを無水の条件下
にジクロルメタン１５ｍｌ中に溶かし、−１５℃に冷却
し、Ｎ−メチルモルホリン１５２μｌ及びイソブチルオ
キシカルボニルクロリド１６２μｌと強力な撹拌下に混
合した。−１５℃で８分間反応させた後、上記溶液Ａを
添加し、冷却することなしに３時間撹拌した。
にジクロルメタン１５ｍｌ中に溶かし、−１５℃に冷却
し、Ｎ−メチルモルホリン１５２μｌ及びイソブチルオ
キシカルボニルクロリド１６２μｌと強力な撹拌下に混
合した。−１５℃で８分間反応させた後、上記溶液Ａを
添加し、冷却することなしに３時間撹拌した。
【００３０】処理のために、反応混合物をクロロホルム
１００ｍｌで希釈し、０℃で０．５モルＫＨＳＯ4−溶
液、５％ＫＨＣＯ3−溶液及び水で抽出し、真空中で３
０℃で濃縮した。
１００ｍｌで希釈し、０℃で０．５モルＫＨＳＯ4−溶
液、５％ＫＨＣＯ3−溶液及び水で抽出し、真空中で３
０℃で濃縮した。
【００３１】エチルアセテート／エーテルから結晶させ
た後、収率は１．１２５ｇ（理論値の９１％）、融点２
１６〜２１８℃（分解）であった。
た後、収率は１．１２５ｇ（理論値の９１％）、融点２
１６〜２１８℃（分解）であった。
【００３２】アミノ酸分析：Ｇｌｕ ２．２０（２）、
Ｖａｌ １．９４（２）、Ｌｙｓ２．００（２）、 薄層クロマトグラフィー（シリカゲルメルクＦ２５４、０．２５０ｍｍ） Ｒｆ×１００ 溶 離 剤 ７３ ＣＨＣｌ3／ＣＨ3ＯＨ／ＣＨ3ＣＯ2Ｈ 85:10:5（Ｖ／Ｖ） ６０ ＣＨＣｌ3／Ｃ2Ｈ5ＯＨ ９：１（Ｖ／Ｖ） 例２ 全面的に保護された［１８−２４］、Ｄｄｚ−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）Ｏ
Ｍｅの製造 例１により得られたＤｄｚ［１９−２４］ＯＭｅ７３５
ｍｇから前記方法Ａに相応してＤｄｚ−保護基を取り除
き、Ｄｄｚ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＣＨＡ（ＣＨＡ＝シ
クロヘキシルアンモニウム塩）７８７ｍｇ及びイソブチ
ルオキシ−カルボニルクロリド９７μｌからの反応溶液
と方法Ｂに相応して５時間反応させ、そこに記載されて
いるように処理した。
Ｖａｌ １．９４（２）、Ｌｙｓ２．００（２）、 薄層クロマトグラフィー（シリカゲルメルクＦ２５４、０．２５０ｍｍ） Ｒｆ×１００ 溶 離 剤 ７３ ＣＨＣｌ3／ＣＨ3ＯＨ／ＣＨ3ＣＯ2Ｈ 85:10:5（Ｖ／Ｖ） ６０ ＣＨＣｌ3／Ｃ2Ｈ5ＯＨ ９：１（Ｖ／Ｖ） 例２ 全面的に保護された［１８−２４］、Ｄｄｚ−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）Ｏ
Ｍｅの製造 例１により得られたＤｄｚ［１９−２４］ＯＭｅ７３５
ｍｇから前記方法Ａに相応してＤｄｚ−保護基を取り除
き、Ｄｄｚ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＣＨＡ（ＣＨＡ＝シ
クロヘキシルアンモニウム塩）７８７ｍｇ及びイソブチ
ルオキシ−カルボニルクロリド９７μｌからの反応溶液
と方法Ｂに相応して５時間反応させ、そこに記載されて
いるように処理した。
【００３３】酢酸エチルから結晶後、収率７３０ｍｇ
（理論値の８７％）、アミノ酸分析：Ｇｌｕ ２．９９
（３）、Ｖａｌ．２．００（２）、Ｌｙｓ １．９１
（２）。
（理論値の８７％）、アミノ酸分析：Ｇｌｕ ２．９９
（３）、Ｖａｌ．２．００（２）、Ｌｙｓ １．９１
（２）。
【００３４】 Ｒｆ×１００ 溶 離 剤 ６９ ＣＨＣｌ3／ＣＨ3ＯＨ／ＣＨ3ＣＯ2Ｈ 85:10:5（Ｖ／Ｖ） ５９ ＣＨＣｌ3／ＣＨ3ＯＨ ９：１（Ｖ／Ｖ） 例３ 全面的に保護された［１７−２４］、Ｄｄｚ−Ｌｙｓ
（Ｚ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）Ｏ
Ｍｅの製造。
（Ｚ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）Ｏ
Ｍｅの製造。
【００３５】例２により得られたＤｄｚ［１８−２４］
ＯＭｅ３５０ｍｇから方法Ａに相応してＤｄｚ−保護基
を取り去り、Ｄｄｚ−Ｌｙｓ（Ｚ）ＯＨ １８６ｍｇと
イソブチルオキシカルボニルクロリド４３．２μｌと方
法Ｂに相応して５時間反応させ、そこに記載されている
ように処理する。
ＯＭｅ３５０ｍｇから方法Ａに相応してＤｄｚ−保護基
を取り去り、Ｄｄｚ−Ｌｙｓ（Ｚ）ＯＨ １８６ｍｇと
イソブチルオキシカルボニルクロリド４３．２μｌと方
法Ｂに相応して５時間反応させ、そこに記載されている
ように処理する。
【００３６】煮沸メタノールから二回再結晶した後、収
率は２４５ｍｇ（論理値の６０％）である。アミノ酸分
析：Ｇｌｕ３．３８（３）、Ｖａｌ ２．００（２）、
Ｌｙｓ２．８０（３） Ｒｆ×１００ 溶 離 剤 ６７ ＣＨＣｌ3／ＣＨ3ＯＨ／ＣＨ3ＣＯ2Ｈ 85:10:5（Ｖ／Ｖ） 例４ 全面的に保護された［２５−２７］、Ｄｄｚ−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）ＯｔＢｕの
製造。
率は２４５ｍｇ（論理値の６０％）である。アミノ酸分
析：Ｇｌｕ３．３８（３）、Ｖａｌ ２．００（２）、
Ｌｙｓ２．８０（３） Ｒｆ×１００ 溶 離 剤 ６７ ＣＨＣｌ3／ＣＨ3ＯＨ／ＣＨ3ＣＯ2Ｈ 85:10:5（Ｖ／Ｖ） 例４ 全面的に保護された［２５−２７］、Ｄｄｚ−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）ＯｔＢｕの
製造。
【００３７】Ｄｄｚ−Ａｌａ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）Ｏｔ
Ｂｕ １．５ｇから方法ＡによりＤｄｚ−保護基を取り
去り、方法Ｂに相応してＤｄｚ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−
ＣＨＡ２．８４ｇ及びイソブチルオキシカルボニルクロ
リド０．６２ｍｌからの反応溶液と２時間反応させる。
そこに記載してあるように処理した後、セフアデックス
ＬＨ２０上メタノール中でクロマトグラフィーにより精
製し、エーテル／ベンジン（４０℃）から結晶化する。
Ｂｕ １．５ｇから方法ＡによりＤｄｚ−保護基を取り
去り、方法Ｂに相応してＤｄｚ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−
ＣＨＡ２．８４ｇ及びイソブチルオキシカルボニルクロ
リド０．６２ｍｌからの反応溶液と２時間反応させる。
そこに記載してあるように処理した後、セフアデックス
ＬＨ２０上メタノール中でクロマトグラフィーにより精
製し、エーテル／ベンジン（４０℃）から結晶化する。
【００３８】収率 １．７ｇ（論理値の８５％）、融点
８８〜９０℃ アミノ酸分析：Ｇｌｕ １．７０（２）、Ａｌａ．１．
００（１） Ｒｆ×１００ 溶 離 剤 ４５ ＣＨＣｌ3／ＣＨ3ＣＯＣＨ3 ８５：１５（Ｖ／Ｖ） 例５ 全面的に保護された［２０−２５］、Ｄｄｚ−Ｌｙｓ−
（Ｚ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）ＯｔＢｕの製造。
８８〜９０℃ アミノ酸分析：Ｇｌｕ １．７０（２）、Ａｌａ．１．
００（１） Ｒｆ×１００ 溶 離 剤 ４５ ＣＨＣｌ3／ＣＨ3ＣＯＣＨ3 ８５：１５（Ｖ／Ｖ） 例５ 全面的に保護された［２０−２５］、Ｄｄｚ−Ｌｙｓ−
（Ｚ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）ＯｔＢｕの製造。
【００３９】例１により製造したＤｄｚ−［２０−２
４］ＯＨ ２５０ｍｇ及び１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール（ＨＯＢＴ）７３．５ｍｇを無水テトラヒドロフ
ラン２０ｍｌ中に溶かし、０℃でジシクロヘキシルカル
ボジミド５０ｍｇと反応させ、次いでＨＧｌｕ（ＯｔＢ
ｕ）ＯｔＢｕ ６５ｍｇと反応させるが、この際、反応
時間２時間は０℃で、４時間は２０℃で行なう。真空中
３０℃で濃縮し、酢酸エチル５０ｍｌ中に取り込み、ジ
シクロヘキシル尿素を濾別し、この濾液を０．５Ｍ Ｋ
ＨＳＯ4−溶液、５％ＫＨＣＯ3溶液及び水で抽出する。
この有機相を塩基性Ａｌ2Ｏ3（カラム３×１０ｃｍ）を
介して濾過し、これを酢酸エチル２５０ｍｌで後洗浄す
る。この溶離液を真空中３０℃で濃縮し、最終生成物が
無色ガラス状物質として純粋な形で残留する。収量１６
０ｍｇ（論理値の５２％） アミノ酸分析：Ｇｌｕ ２．９０（３）、Ｖａｌ ２．
００（２）、Ｌｙｓ０．９９（１） Ｒｆ×１００ 溶 離 剤 ９１ ＣＨＣｌ3／ＣＨ3ＯＨ／ＣＨ3ＣＯ2Ｈ 85:10:5（Ｖ／Ｖ） ５８ ＣＨＣｌ3／Ｃ2Ｈ5ＯＨ ９：１（Ｖ／Ｖ） 例６ 全面的に保護された［２５−２６］、Ｄｄｚ−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−ＡｌａＯＢｚｌの製造。
４］ＯＨ ２５０ｍｇ及び１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール（ＨＯＢＴ）７３．５ｍｇを無水テトラヒドロフ
ラン２０ｍｌ中に溶かし、０℃でジシクロヘキシルカル
ボジミド５０ｍｇと反応させ、次いでＨＧｌｕ（ＯｔＢ
ｕ）ＯｔＢｕ ６５ｍｇと反応させるが、この際、反応
時間２時間は０℃で、４時間は２０℃で行なう。真空中
３０℃で濃縮し、酢酸エチル５０ｍｌ中に取り込み、ジ
シクロヘキシル尿素を濾別し、この濾液を０．５Ｍ Ｋ
ＨＳＯ4−溶液、５％ＫＨＣＯ3溶液及び水で抽出する。
この有機相を塩基性Ａｌ2Ｏ3（カラム３×１０ｃｍ）を
介して濾過し、これを酢酸エチル２５０ｍｌで後洗浄す
る。この溶離液を真空中３０℃で濃縮し、最終生成物が
無色ガラス状物質として純粋な形で残留する。収量１６
０ｍｇ（論理値の５２％） アミノ酸分析：Ｇｌｕ ２．９０（３）、Ｖａｌ ２．
００（２）、Ｌｙｓ０．９９（１） Ｒｆ×１００ 溶 離 剤 ９１ ＣＨＣｌ3／ＣＨ3ＯＨ／ＣＨ3ＣＯ2Ｈ 85:10:5（Ｖ／Ｖ） ５８ ＣＨＣｌ3／Ｃ2Ｈ5ＯＨ ９：１（Ｖ／Ｖ） 例６ 全面的に保護された［２５−２６］、Ｄｄｚ−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−ＡｌａＯＢｚｌの製造。
【００４０】方法Ｂに相応してＤｄｚ−Ｇｌｕ（ＯｔＢ
ｕ）ＣＨＡ ２．１ｇをイソブチルオキシカルボニルク
ロリド４６８μｌで活性化し、ＨＣｌ・ＡｌａＯＢｚｌ
５００ｍｇ及びＮ−メチルモルホリン４４３μｌと反
応させた。真空中３０℃で濃縮した後、油状残分を酢酸
エチル５ｍｌ中に取り込み、塩基性Ａｌ2Ｏ3のカラム
（３×１０ｃｍ）を介して濾過した。
ｕ）ＣＨＡ ２．１ｇをイソブチルオキシカルボニルク
ロリド４６８μｌで活性化し、ＨＣｌ・ＡｌａＯＢｚｌ
５００ｍｇ及びＮ−メチルモルホリン４４３μｌと反
応させた。真空中３０℃で濃縮した後、油状残分を酢酸
エチル５ｍｌ中に取り込み、塩基性Ａｌ2Ｏ3のカラム
（３×１０ｃｍ）を介して濾過した。
【００４１】酢酸エチル２５０ｍｌで溶離し、真空中３
０℃で濃縮した後、純粋な生成物が無色ガラス状物質と
して得られた。
０℃で濃縮した後、純粋な生成物が無色ガラス状物質と
して得られた。
【００４２】収量：１．３１ｇ（理論値の９６％） Ｒｆ×１００ 溶 離 剤 ８５ ＣＨＣｌ3／ＣＨ3ＯＨ／ＣＨ3ＣＯ2Ｈ 85:10:5（Ｖ／Ｖ） ５１ ＣＨＣｌ3／ＣＨ3ＣＯＣＨ3 85:15 （Ｖ／Ｖ） 例７ 全面的に保護された［２０−２６］、Ｄｄｚ−Ｌｙｓ
（Ｚ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＡｌａＯＢｚｌの
製造 方法Ａに相応して、例６により製造したＤｄｚ［２５−
２６］−ＯＢｚｌ １７６ｍｇからＤｄｚ−保護基を脱
離させ、３３０μｌで中和し、２０℃で真空中濃縮し
た。残分をジメチルホルムアミド２ｍｌ中に溶かし、次
に記載した配合物を加えた。
（Ｚ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＡｌａＯＢｚｌの
製造 方法Ａに相応して、例６により製造したＤｄｚ［２５−
２６］−ＯＢｚｌ １７６ｍｇからＤｄｚ−保護基を脱
離させ、３３０μｌで中和し、２０℃で真空中濃縮し
た。残分をジメチルホルムアミド２ｍｌ中に溶かし、次
に記載した配合物を加えた。
【００４３】Ｄｄｚ［２０−２４］ＯＨ ２５０ｍｇ及
びＨＯＢＴ ７３．５ｍｇをジメチルホルムアミド３ｍ
ｌ中に溶かし、０℃でジシクロヘキシルカルボジイミド
１００ｍｇで活性化し、前記のＨ［２５−２６］Ｂｚｌ
の溶液と混合した。０℃で１時間、２０℃で３日間反応
させた後、フラグメント［２０−２５］の合成に相応し
て後処理し、精製した。
びＨＯＢＴ ７３．５ｍｇをジメチルホルムアミド３ｍ
ｌ中に溶かし、０℃でジシクロヘキシルカルボジイミド
１００ｍｇで活性化し、前記のＨ［２５−２６］Ｂｚｌ
の溶液と混合した。０℃で１時間、２０℃で３日間反応
させた後、フラグメント［２０−２５］の合成に相応し
て後処理し、精製した。
【００４４】メタノールから再結晶させた後、収率は１
９０ｍｇ（理論値の５８％）であった。
９０ｍｇ（理論値の５８％）であった。
【００４５】アミノ酸分析：Ｇｌｕ ３．０６（３）、
Ａｌａ １．００（１）、Ｖａｌ１．７７（２）、Ｌｙ
ｓ １．０５（１） Ｒｆ×１００ 溶 離 剤 ７８ ＣＨＣｌ3／Ｃ2Ｈ5ＯＨ ９：１（Ｖ／Ｖ） いくつかの本発明によるチモシンα1−フラグメントに
ついて次の第２表中にＲｆ−値を記載した。これらはシ
リカゲル薄層プレート、０．２５ｍｍ、メルク６０Ｆ２
５４上で測定され、Ｒｆ×１００値として表わした。
Ａｌａ １．００（１）、Ｖａｌ１．７７（２）、Ｌｙ
ｓ １．０５（１） Ｒｆ×１００ 溶 離 剤 ７８ ＣＨＣｌ3／Ｃ2Ｈ5ＯＨ ９：１（Ｖ／Ｖ） いくつかの本発明によるチモシンα1−フラグメントに
ついて次の第２表中にＲｆ−値を記載した。これらはシ
リカゲル薄層プレート、０．２５ｍｍ、メルク６０Ｆ２
５４上で測定され、Ｒｆ×１００値として表わした。
【００４６】溶離剤１：ｎ−ブタノール／ピリジン／氷
酢酸／水 ５：５：１：４（Ｖ／Ｖ） 溶離剤２：酢酸エステル／ピリジン／氷酢酸／水 １５：２０：６：１１（Ｖ／Ｖ） 溶離剤３：ｎ−ペンタノール／ピリジン／２−ブタノン
／蟻酸／水 ４０：２８：１１：５：１５（Ｖ／Ｖ） フラグメントの記号は第１表のナンバリングによる。 第 １ 表 免疫調節作用を有するチモシンα1−フラグメント フラグメント Ｒ1−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｒ1のフラグメント Ｎｏ． １ 22-24 Val-Val-Glu ２ 21-23 Glu-Val-Val ３ 21-24 Glu-Val-Val-Glu ４ 19-24 Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu ５ 18-24 Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu ６ 17-24 Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu ７ 13-24 Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu Ｒ 1 −Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｒ 2 ８ 17-18 Lys-Glu ９ 20-22 Lys-Glu-Val １０ 20-23 Lys-Glu-Val-Val １１ 20-25 Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu １２ 20-26 Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala １３ 20-27 Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu １４ 19-22 Lys-Lys-Glu-Val １５ 18-22 Glu-Lys-Lys-Glu-Val １６ 17-22 Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val １７ 16-22 Leu-Lys-Glu-lys-Lys-Glu-Val １８ 16-18 Leu-Lys-Glu １９ 15-18 Asp-Leu-Lys-Glu ２０ 14-18 Lys-Asp-Leu-Lys-Glu Ｒ 1 −Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｒ 2 ２１ 18-19 Glu-Lys ２２ 17-19 Lys-Glu-Lys ２３ 16-19 Leu-Lys-Glu-Lys ２４ 15-19 Asp-Leu-Lys-Glu-Lys ２５ 14-19 Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys ２６ 7-19 Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp- Leu-Lys-Glu-Lys Ｒ 1 −Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｒ 2 ２７ 25-26 Glu-Ala ２８ 25-27 Glu-Ala-Glu ２９ 24-26 Glu-Glu-Ala ３０ 23-26 Val-Glu-Glu-Ala Ｒ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ ３１ 10-12 Glu-Ile-Thr ３２ 9-12 Ser-Glu-Ile-Thr ３３ 8-12 Ser-Ser-Glu-Ile-Thr Ｒ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｓｐ ３４ 4-6 Ala-Val-Asp ３５ 3-6 Ala-Ala-Val-Asp ３６ 2-6 Asp-Ala-Ala-Val-Asp 第 ２ 表 フラグメント Ｒｆ−値 溶 離 剤 Ｎｏ． １ ２ ３ １２ ４０ ６１ ２８ １３ １４ １７ ３ １４ １４ １８ ２ １５ ６ ９ ０ ２０ １９ ２９ ５ ２１ ２０ ３１ ５ ２２ １８ ２５ ３ ３７ ２１ ２９ ８．５ 例７ 本発明によるチモシンα1−フラグメントの薬理学的作
用を明らかにするために、薬理学的比較実験を実施した
が、ここで本発明によるフラグメントを一方で合成チモ
シンα1及び他方では公知のチモシンフラクションＮ
ｏ．５と対比させた。この薬理学的比較実験において一
方では混合リンパ細胞培養をそして他方ではＥ−ロゼッ
ト試験（Ｒｏｓｅｔｔｅｎ Ｔｅｓｔ）を実施し、この
際、α−アマニチンによる細胞のＲＮＳ−ポリメラーゼ
の付加的な抑制で両方の試験法を実施した。この際、詳
細には次の条件を使用した： １．混合リンパ細胞培養（ＭＬＣ）、α−アマニチン抑
制 リンパ細胞培養培地１００μｌ中に二人の健康な供与者
からの人抹消Ｔ−リンパ細胞（１０5Ｔ−細胞）を懸濁
させ、培地２０μｌ中にα−アマニチン２μｇを添加し
てこれを抑制する。引き続き、実験すべき資料０．００
４μｇを媒地２０μｌ中に加える（応答細胞−調剤）。
分離してマイトマイシン−Ｃで遮断した１０5Ｔ−細胞
を加え、媒地１００μｌ中の懸濁液とする（刺激細胞−
調剤、これは常法でＭＬＣにおいて使用されると同
様）。この培地（全容量２４０μｌ）を３７℃で１２０
時間培養する。培養時間の最後の８時間に3Ｈ−チミジ
ン１００μＣｉを培地に加える。細胞を単離した後、液
体シンチレーション測定により3Ｈ−チミジン取り込み
を測定する。全測定を少なくとも３回二重盲検で実施す
る。
酢酸／水 ５：５：１：４（Ｖ／Ｖ） 溶離剤２：酢酸エステル／ピリジン／氷酢酸／水 １５：２０：６：１１（Ｖ／Ｖ） 溶離剤３：ｎ−ペンタノール／ピリジン／２−ブタノン
／蟻酸／水 ４０：２８：１１：５：１５（Ｖ／Ｖ） フラグメントの記号は第１表のナンバリングによる。 第 １ 表 免疫調節作用を有するチモシンα1−フラグメント フラグメント Ｒ1−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｒ1のフラグメント Ｎｏ． １ 22-24 Val-Val-Glu ２ 21-23 Glu-Val-Val ３ 21-24 Glu-Val-Val-Glu ４ 19-24 Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu ５ 18-24 Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu ６ 17-24 Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu ７ 13-24 Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu Ｒ 1 −Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｒ 2 ８ 17-18 Lys-Glu ９ 20-22 Lys-Glu-Val １０ 20-23 Lys-Glu-Val-Val １１ 20-25 Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu １２ 20-26 Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala １３ 20-27 Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu １４ 19-22 Lys-Lys-Glu-Val １５ 18-22 Glu-Lys-Lys-Glu-Val １６ 17-22 Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val １７ 16-22 Leu-Lys-Glu-lys-Lys-Glu-Val １８ 16-18 Leu-Lys-Glu １９ 15-18 Asp-Leu-Lys-Glu ２０ 14-18 Lys-Asp-Leu-Lys-Glu Ｒ 1 −Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｒ 2 ２１ 18-19 Glu-Lys ２２ 17-19 Lys-Glu-Lys ２３ 16-19 Leu-Lys-Glu-Lys ２４ 15-19 Asp-Leu-Lys-Glu-Lys ２５ 14-19 Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys ２６ 7-19 Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp- Leu-Lys-Glu-Lys Ｒ 1 −Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｒ 2 ２７ 25-26 Glu-Ala ２８ 25-27 Glu-Ala-Glu ２９ 24-26 Glu-Glu-Ala ３０ 23-26 Val-Glu-Glu-Ala Ｒ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ ３１ 10-12 Glu-Ile-Thr ３２ 9-12 Ser-Glu-Ile-Thr ３３ 8-12 Ser-Ser-Glu-Ile-Thr Ｒ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｓｐ ３４ 4-6 Ala-Val-Asp ３５ 3-6 Ala-Ala-Val-Asp ３６ 2-6 Asp-Ala-Ala-Val-Asp 第 ２ 表 フラグメント Ｒｆ−値 溶 離 剤 Ｎｏ． １ ２ ３ １２ ４０ ６１ ２８ １３ １４ １７ ３ １４ １４ １８ ２ １５ ６ ９ ０ ２０ １９ ２９ ５ ２１ ２０ ３１ ５ ２２ １８ ２５ ３ ３７ ２１ ２９ ８．５ 例７ 本発明によるチモシンα1−フラグメントの薬理学的作
用を明らかにするために、薬理学的比較実験を実施した
が、ここで本発明によるフラグメントを一方で合成チモ
シンα1及び他方では公知のチモシンフラクションＮ
ｏ．５と対比させた。この薬理学的比較実験において一
方では混合リンパ細胞培養をそして他方ではＥ−ロゼッ
ト試験（Ｒｏｓｅｔｔｅｎ Ｔｅｓｔ）を実施し、この
際、α−アマニチンによる細胞のＲＮＳ−ポリメラーゼ
の付加的な抑制で両方の試験法を実施した。この際、詳
細には次の条件を使用した： １．混合リンパ細胞培養（ＭＬＣ）、α−アマニチン抑
制 リンパ細胞培養培地１００μｌ中に二人の健康な供与者
からの人抹消Ｔ−リンパ細胞（１０5Ｔ−細胞）を懸濁
させ、培地２０μｌ中にα−アマニチン２μｇを添加し
てこれを抑制する。引き続き、実験すべき資料０．００
４μｇを媒地２０μｌ中に加える（応答細胞−調剤）。
分離してマイトマイシン−Ｃで遮断した１０5Ｔ−細胞
を加え、媒地１００μｌ中の懸濁液とする（刺激細胞−
調剤、これは常法でＭＬＣにおいて使用されると同
様）。この培地（全容量２４０μｌ）を３７℃で１２０
時間培養する。培養時間の最後の８時間に3Ｈ−チミジ
ン１００μＣｉを培地に加える。細胞を単離した後、液
体シンチレーション測定により3Ｈ−チミジン取り込み
を測定する。全測定を少なくとも３回二重盲検で実施す
る。
【００４７】評価：全ＭＬＣ−培地において、α−アマ
ニチン−抑制盲検Ｂ1及びＢ2をあらかじめ又はあとから
実施し、その後平均値を出す：Ｂ＝（Ｂ1＋Ｂ2）／２、
全ＭＬＣ−測定を実施時間により三つのグループに分け
る。第１のグループの計算は盲検Ｂ1に対し、中間のグ
ループはＢに対し、最後のグループは盲検Ｂ2に対して
比較する。最も強い反応は合成チモシンα1で達せら
れ、この値を１００％とした。他の全結果をこれに対す
る相対百分率で記載した。
ニチン−抑制盲検Ｂ1及びＢ2をあらかじめ又はあとから
実施し、その後平均値を出す：Ｂ＝（Ｂ1＋Ｂ2）／２、
全ＭＬＣ−測定を実施時間により三つのグループに分け
る。第１のグループの計算は盲検Ｂ1に対し、中間のグ
ループはＢに対し、最後のグループは盲検Ｂ2に対して
比較する。最も強い反応は合成チモシンα1で達せら
れ、この値を１００％とした。他の全結果をこれに対す
る相対百分率で記載した。
【００４８】２．Ｅ−ロゼット試験、α−アマニチン−
抑制 ブロードナー（Ｏ．Ｂｒｏｄｎｅｒ）により実施される
Ｅ−ロゼット試験においては、健康な供与者１人の人抹
消Ｔ−リンパ細胞群の２０×１０6Ｔ−細胞をハンクス
溶液（Ｈａｎｋｓ−Ｌｏｅｓｕｍｇ）４ｍｌ中に懸濁さ
せ、その後ハンクス溶液１ ｍｌ中のα−アマニチン１
０μｇを加える。このプールを各１００μｌで５０個に
分割する。各１００μｌ配分に人間の（熱安定化した）
ＡＢ−血清を加える。この培地を１夜（１３．５時間）
２０℃で培養し、その後試験試料を加え（ハンクス−緩
衝溶液２μｇ／１００μｌ）、１時間２０℃で培養す
る。次いで、ハンクス緩衝溶液１００μｌ中に羊赤血球
５×１０7を加え、３７℃で５分間培養する。次いで氷
中で４℃に冷却し、４℃及び１００ｇで５分間遠心分離
する。更に３０分間、０℃で培養し、その後Ｅ−ロゼッ
トを数える（集合体−羊赤血球３／１Ｔ−細胞）。
抑制 ブロードナー（Ｏ．Ｂｒｏｄｎｅｒ）により実施される
Ｅ−ロゼット試験においては、健康な供与者１人の人抹
消Ｔ−リンパ細胞群の２０×１０6Ｔ−細胞をハンクス
溶液（Ｈａｎｋｓ−Ｌｏｅｓｕｍｇ）４ｍｌ中に懸濁さ
せ、その後ハンクス溶液１ ｍｌ中のα−アマニチン１
０μｇを加える。このプールを各１００μｌで５０個に
分割する。各１００μｌ配分に人間の（熱安定化した）
ＡＢ−血清を加える。この培地を１夜（１３．５時間）
２０℃で培養し、その後試験試料を加え（ハンクス−緩
衝溶液２μｇ／１００μｌ）、１時間２０℃で培養す
る。次いで、ハンクス緩衝溶液１００μｌ中に羊赤血球
５×１０7を加え、３７℃で５分間培養する。次いで氷
中で４℃に冷却し、４℃及び１００ｇで５分間遠心分離
する。更に３０分間、０℃で培養し、その後Ｅ−ロゼッ
トを数える（集合体−羊赤血球３／１Ｔ−細胞）。
【００４９】評価：α−アマニチン−抑制盲検試料６個
を実施し（全容量は同様に２１０μｌ）、これからわず
かな活性の平均値を調べ、これを相対尺度において０％
とする。相対尺度においてα−アマニチンでの抑制なし
で、かつ付加的な試料なしでのＥ−ロゼット試験の平均
活性を１００％とする。全測定は二重盲検技術により実
施した。
を実施し（全容量は同様に２１０μｌ）、これからわず
かな活性の平均値を調べ、これを相対尺度において０％
とする。相対尺度においてα−アマニチンでの抑制なし
で、かつ付加的な試料なしでのＥ−ロゼット試験の平均
活性を１００％とする。全測定は二重盲検技術により実
施した。
【００５０】この薬理学的実験で判明した結果を次表に
まとめる： 表 薬理学的比較実験の結果 試験試料 ＭＬＣ−試験 Ｅ−ロゼット試験 相対的な活性（％） 相対的な活性（％） Ｎｏ．３ （２１−２４） ４９ ３５ Ｎｏ．４ （１９−２４） ６４ １５ Ｎｏ．５ （１８−２４） ６０ ５３ Ｎｏ．６ （１７−２４） ５８ −− Ｎｏ．１１（２０−２５） ２８ ４２ Ｎｏ．１２（２０−２６） ９０ １２ Ｎｏ．１３（２０−２７） ３４ −− Ｎｏ．２８（２５−２７） ９４ ３５ Ｎｏ．１５（１８−２２） ５３ −− Ｎｏ．７ （１３−２４）β ７６ −− フラグメント（２０−２４） ５６ ３１ フラグメント（２０−２８） ５１ １５ チモシンα1 １００ チモシンフラクション５ ４０ １９ この結果はＴ−リンパ細胞混入が、添加したポリペプチ
ド−フラグメントにより与えられる刺激に応答すること
を示す。すなわち、これらのフラグメントはＴ−細胞の
免疫活性を刺激する。
まとめる： 表 薬理学的比較実験の結果 試験試料 ＭＬＣ−試験 Ｅ−ロゼット試験 相対的な活性（％） 相対的な活性（％） Ｎｏ．３ （２１−２４） ４９ ３５ Ｎｏ．４ （１９−２４） ６４ １５ Ｎｏ．５ （１８−２４） ６０ ５３ Ｎｏ．６ （１７−２４） ５８ −− Ｎｏ．１１（２０−２５） ２８ ４２ Ｎｏ．１２（２０−２６） ９０ １２ Ｎｏ．１３（２０−２７） ３４ −− Ｎｏ．２８（２５−２７） ９４ ３５ Ｎｏ．１５（１８−２２） ５３ −− Ｎｏ．７ （１３−２４）β ７６ −− フラグメント（２０−２４） ５６ ３１ フラグメント（２０−２８） ５１ １５ チモシンα1 １００ チモシンフラクション５ ４０ １９ この結果はＴ−リンパ細胞混入が、添加したポリペプチ
ド−フラグメントにより与えられる刺激に応答すること
を示す。すなわち、これらのフラグメントはＴ−細胞の
免疫活性を刺激する。
【００５１】例 ８ アザチオプリンＥ−ロゼット−抑制テスト このテスト
は成長した胸腺摘除術を行ったマウスと正常マウスの脾
臓細胞のアザチオプリン（ＡＺ）に対する異なる感度に
基づく、成長した胸腺摘除マウスの脾臓細胞はアザチオ
プリンの添加により再び取得することのできる、ＡＺに
対する感度が失われている。このテストの詳細はDarden
ne及びBachにより記載されている（Biological Activit
y of Thymic Hormones、１９７５年、第２３５頁、Kooyk
er Scientific Publication Institute Rotterdam）。
この親油性ペプチドを十分に滅菌した蒸留水中に溶か
し、濃度１０-3Ｍとした。ハンクス（Hanks）−溶液中
に１０-11Ｍまで１０倍希釈剤を製造し、各ペプチドに
関してテストした。各テスト希釈物（６０μl)をＡＺと
混合し（ハンクス溶液中２０μg／ml溶液６０μl）、成
長した胸腺摘除Ｃ５７Ｂ１／６−マウスの脾臓細胞（５
０μl）の懸濁液と共に、７５分間３７℃で恒温保持し
た。Ｅ−ロゼット形成及び評価を前記のように実施し
た。各測定を２回実施した。テストペプチド及び脾臓細
胞懸濁液からなるが、ＡＺは含有しない対照を各希釈に
関して実施した。結果を次の表にまとめたが、明らかな
活性を示す。
は成長した胸腺摘除術を行ったマウスと正常マウスの脾
臓細胞のアザチオプリン（ＡＺ）に対する異なる感度に
基づく、成長した胸腺摘除マウスの脾臓細胞はアザチオ
プリンの添加により再び取得することのできる、ＡＺに
対する感度が失われている。このテストの詳細はDarden
ne及びBachにより記載されている（Biological Activit
y of Thymic Hormones、１９７５年、第２３５頁、Kooyk
er Scientific Publication Institute Rotterdam）。
この親油性ペプチドを十分に滅菌した蒸留水中に溶か
し、濃度１０-3Ｍとした。ハンクス（Hanks）−溶液中
に１０-11Ｍまで１０倍希釈剤を製造し、各ペプチドに
関してテストした。各テスト希釈物（６０μl)をＡＺと
混合し（ハンクス溶液中２０μg／ml溶液６０μl）、成
長した胸腺摘除Ｃ５７Ｂ１／６−マウスの脾臓細胞（５
０μl）の懸濁液と共に、７５分間３７℃で恒温保持し
た。Ｅ−ロゼット形成及び評価を前記のように実施し
た。各測定を２回実施した。テストペプチド及び脾臓細
胞懸濁液からなるが、ＡＺは含有しない対照を各希釈に
関して実施した。結果を次の表にまとめたが、明らかな
活性を示す。
【００５２】
【表１】
【００５３】この活性は未熟なマウス−脾臓細胞中にア
ザチオプリン−抑制に敏感である、Ｅ−ロゼット形性能
を誘発することのできる、ペプチドの最低濃度として表
わされる。
ザチオプリン−抑制に敏感である、Ｅ−ロゼット形性能
を誘発することのできる、ペプチドの最低濃度として表
わされる。
【００５４】例 ９ 免疫システムの生体内回復に対するチモシン−α1−フ
ラグメントの作用の検査法 次の実験において、“回復活性”を測定した。“回復活
性”とは抑圧された免疫システムを有する試料中の免疫
学的機能の回復に関する。
ラグメントの作用の検査法 次の実験において、“回復活性”を測定した。“回復活
性”とは抑圧された免疫システムを有する試料中の免疫
学的機能の回復に関する。
【００５５】このシステムを抑圧するために、雌のBDF1
−マウス（ｃ５７ＢＬ／６×ＤＢＡ／２）、生後１２週
間を使用した。マウス７〜８匹のグループを０日目に体
重１kgあたり５−フルオルウラシル１００mgで処理し
た。ペプチドフラグメントを１、３及び６日目に投与し
た。対照は５−フルオルウラシル（５−ＦＵ）又はペプ
チドフラグメントのかわりに塩溶液を含有する。この処
理に関する免疫応答はニワトリ−赤血球（ＣＲＢＣ）の
注入に対する応答としてＤＴＨの製造の測定により測定
される。細胞１０8個を３日目に動物に腹腔内注射し、
７日目に足パッドを介して皮下注射した。チモシン−α
1を参照として使用した。
−マウス（ｃ５７ＢＬ／６×ＤＢＡ／２）、生後１２週
間を使用した。マウス７〜８匹のグループを０日目に体
重１kgあたり５−フルオルウラシル１００mgで処理し
た。ペプチドフラグメントを１、３及び６日目に投与し
た。対照は５−フルオルウラシル（５−ＦＵ）又はペプ
チドフラグメントのかわりに塩溶液を含有する。この処
理に関する免疫応答はニワトリ−赤血球（ＣＲＢＣ）の
注入に対する応答としてＤＴＨの製造の測定により測定
される。細胞１０8個を３日目に動物に腹腔内注射し、
７日目に足パッドを介して皮下注射した。チモシン−α
1を参照として使用した。
【００５６】回復活性（ＲＡ）を次の式を使用して測定
した： ＲＡ（％）＝テスト−５−ＦＵ／対照 ５−ＦＵ×１００ ここで“テスト”とは５−ＦＵ並びにペプチドを含有す
る群の応答である。
した： ＲＡ（％）＝テスト−５−ＦＵ／対照 ５−ＦＵ×１００ ここで“テスト”とは５−ＦＵ並びにペプチドを含有す
る群の応答である。
【００５７】次の第４〜１１表は、フラグメント１９〜
２４、２０〜２４、２０〜２８及び１８〜２４すべてが
免疫−回復活性を示すことを示す。
２４、２０〜２４、２０〜２８及び１８〜２４すべてが
免疫−回復活性を示すことを示す。
【００５８】表中には次の記号を使用した：ヘキサ−α
1（１９〜２４）、ヘプタ−α1（１８〜２４）、ノナ−
α1（２０〜２８）、ペンタ−α1（２０〜２４）。
1（１９〜２４）、ヘプタ−α1（１８〜２４）、ノナ−
α1（２０〜２８）、ペンタ−α1（２０〜２４）。
【００５９】 第 ４ 表 α1（１９〜２４）の免疫回復活性 マ ウ ス 投 与 量 ＤＴＨ応答 処 理 剤 μg／kg 投与法 平均値±S.E.(0.1mm) ％ RA(％) 対照(塩溶液) − 11.9±1.1* 100 − 5-FU単独 − 7.4±1.0 62 − 5-FU＋チモシンα1 0.5 腹腔内 11.5±1.7※ 96 90.6 5-FU＋α1(19〜24) 0.05 腹腔内 8.2±1.0 69 17.3 0.5 腹腔内 11.4±0.2** 96 88.3 5.0 腹腔内 9.3±1.3 78 40.8 ※：p＜0.1、 *：p＜0.05、 **：p＜0.01、 S.E.＝標準誤差 第 ５ 表 α1（２１〜２４）の免疫回復活性 マ ウ ス 投 与 量 ＤＴＨ応答 処 理 剤 μg／kg 投与法 平均値±S.E.(0.1mm) ％ RA(％) 対照(塩溶液) − 13.8±0.7** 100 − 5-FU単独 − 9.9±0.7 72.1 − 5-FU＋チモシンα1 0.5 腹腔内 12.8±1.1* 92.5 73.1 5.0 腹腔内 10.6±1.2 76.3 15.0 5-FU＋α1(19〜24) 0.005 経口 10.2＋1.2 73.6 5.4 0.05 経口 11.1±1.1 80.5 30.1 0.5 経口 11.2±0.8※ 81.1 32.4 ※：p＜0.2、 *：p＜0.05、 **：p＜0.01、 S.E.＝標準誤差 第 ６ 表 α1（１９〜２４）の免疫回復活性 マ ウ ス 投 与 量 ＤＴＨ応答 処 理 剤 μg／kg 投与法 平均値±S.E.(0.1mm) ％ RA(％) 対照(塩溶液) − 12.3±1.4* 100 − 5-FU単独 − 8.4±1.0 68.6 − 5-FU＋チモシンα1 0.5 腹腔内 13.6±1.0** 110.4 133.2 5.0 腹腔内 11.8±1.1* 96.3 88.1 5-FU＋α1(19〜24) 0.005 経口 15.1±1.0*** 122.7 172.3 0.05 経口 15.2±1.7** 123.8 175.9 0.5 経口 12.3±1.3* 100.3 101.0 5.0 経口 10.9±1.0 88.9 64.5 *：p＜0.05、 **：p＜0.01、 ***：p＜0.001、 S.E.＝標準誤差 第 ７ 表 α1（２０〜２４）、α1（２０〜２８）の免疫回復活性 マ ウ ス 投 与 量 ＤＴＨ応答 処 理 剤 μg／kg 投与法 平均値±S.E.(0.1mm) ％ RA(％) 対照(塩溶液) − 9.7±0.8* 100 − 5-FU単独 − 6.7±0.7 68.7 − 5-FU＋チモシンα1 0.5 腹腔内 8.6±0.8※ 89.1 65.0 5.0 腹腔内 8.0±0.6 82.0 42.6 5-FU＋α1(20〜24) 0.005 経口 8.3±0.3※ 85.1 52.5 0.05 経口 9.6±1.0※ 93.0 77.6 0.5 経口 9.0±0.9※ 93.2 78.2 5-FU＋α1(20〜28) 0.005 経口 7.7±0.5 79.5 34.3 0.05 経口 6.8±0.8 70.0 4.0 0.5 経口 8.7±0.6* 89.7 67.0 ※：p＜0.1 *：p＜0.05、 **：p＜0.01、 S.E.＝標準誤差 第 ８ 表 α1（２０〜２４）、α1（２０〜２８）の免疫回復活性 マ ウ ス 投 与 量 ＤＴＨ応答 処 理 剤 μg／kg 投与法 平均値±S.E.(0.1mm) ％ RA(％) 対照(塩溶液) − 8.4±0.4* 100 − 5-FU単独 − 6.1±0.8 73.1 − 5-FU＋チモシンα1 0.5 腹腔内 8.9±0.5* 106.9 125.8 5.0 腹腔内 7.0±0.4 84.1 40.9 5-FU＋α1(20〜24) 0.005 経口 9.3±0.3** 111.0 140.9 0.05 経口 7.7±0.8 92.2 71.1 0.5 経口 8.2±1.2 98.1 92.9 5-FU＋α1(20〜28) 0.005 経口 9.5±0.7** 113.2 148.9 0.05 経口 7.9±0.6※ 94.5 79.6 0.5 経口 6.6±0.6 79.1 22.2 ※：p＜0.1 *：p＜0.05、 **：p＜0.01、 S.E.＝標準誤差 第 ９ 表 α1（１９〜２４）の免疫回復活性 マ ウ ス 投 与 量 ＤＴＨ応答 処 理 剤 μg／kg 投与法 平均値±S.E.(0.1mm) ％ RA(％) 対照(塩溶液) − 9.3±0.7*** 100 − 5-FU単独 − 4.7±0.5 50.3 − 5-FU＋チモシンα1 0.5 腹腔内 6.2±0.7※ 66.5 32.6 5.0 腹腔内 5.9±1.2 63.4 26.3 5-FU＋α1(19〜24) 0.005 経口 7.5±1.3※ 81.4 62.6 0.05 経口 6.4±0.9 69.4 38.5 0.5 経口 6.9±0.8* 74.6 48.9 5.0 経口 5.5±0.8 59.1 17.6 ※：p＜0.1 *：p＜0.05、 **：p＜0.01、 ***：p＜0.001、 S.E.＝標準誤差 第 １０ 表 α1（１８〜２４）の免疫回復活性 マ ウ ス 投 与 量 ＤＴＨ応答 処 理 剤 μg／kg 投与法 平均値±S.E.(0.1mm) ％ RA(％) 対照(塩溶液) − 9.9±0.7** 100 − 5-FU単独 − 7.1±0.6 71.0 − 5-FU＋チモシンα1 0.5 腹腔内 8.1±0.7 81.4 35.8 5.0 腹腔内 10.1±1.0 101.5 105.2 5-FU＋α1(19〜24) 0.005 経口 10.0±0.8* 100.2 100.7 0.05 経口 10.4±0.9** 104.2 114.6 0.5 経口 8.7±1.0 87.0 55.2 *：p＜0.05、 **：p＜0.01、 S.E.＝標準誤差 第 １１ 表 α1（２０〜２４）、α1（２０〜２８）の免疫回復活性 マ ウ ス 投 与 量 ＤＴＨ応答 処 理 剤 μg／kg 投与法 平均値±S.E.(0.1mm) ％ RA(％) 対照(塩溶液) − 8.4±0.4* 100 − 5-FU単独 − 6.1±0.8 73.1 − 5-FU＋チモシンα1 0.5 腹腔内 8.9±0.5* 106.9 125.8 5.0 腹腔内 7.0±0.4 84.1 40.9 5-FU＋α1(20〜24) 0.005 経口 9.3＋0.3** 111.0 140.9 0.05 経口 7.7±0.8 92.2 71.1 0.5 経口 8.2±1.2 98.1 92.9 5-FU＋α1(20〜28) 0.005 経口 9.5±0.7** 113.2 148.9 0.05 経口 7.9±0.6※ 94.5 79.6 0.5 経口 6.6±0.6 79.1 22.2 ※：p＜0.1 *：p＜0.05、 **：p＜0.01、 S.E.＝標準誤差 例 １０ カンジダ・アルビカンス(Candida Albicans)での死に到
る感染に対するチモシン−α1のペプチドフラグメント
の作用 この実験においては雄のＣ５Ｆ７Ｂ１／６、ＣＤＦ
1（ＢＡＬＢ／ｃ×ＤＢＡ／２）Ｆ1及びＤＢＡ／２マウ
ス及び雌のｄｄｙ−マウス（生後６週間）を使用した。
カンジダ・アルビカンスＡＴＣＣ１０２３１を使用し
た。マウスの免疫応答を５−ＦＵ（２５mg／kg体重、腹
腔内投与）で８〜１０日間毎日処置することにより抑圧
した。最後の５−ＦＵ−注射の後Ｃ．アルビカンス０.
２mlを投与した。
る感染に対するチモシン−α1のペプチドフラグメント
の作用 この実験においては雄のＣ５Ｆ７Ｂ１／６、ＣＤＦ
1（ＢＡＬＢ／ｃ×ＤＢＡ／２）Ｆ1及びＤＢＡ／２マウ
ス及び雌のｄｄｙ−マウス（生後６週間）を使用した。
カンジダ・アルビカンスＡＴＣＣ１０２３１を使用し
た。マウスの免疫応答を５−ＦＵ（２５mg／kg体重、腹
腔内投与）で８〜１０日間毎日処置することにより抑圧
した。最後の５−ＦＵ−注射の後Ｃ．アルビカンス０.
２mlを投与した。
【００６０】前記の条件、すなわち５−ＦＵ−投与下に
は低い投与量での感染が一般に死に到らしめる。この実
験の結果をまとめた第１２表から明らかなように、引き
続くチモシン−α1−フラグメントの投与が対照に対す
る生存率を改良している。フラグメント１９〜２４、２
０〜２４、２０〜２８及び２１〜２４はすべてプラスの
結果を示す。
は低い投与量での感染が一般に死に到らしめる。この実
験の結果をまとめた第１２表から明らかなように、引き
続くチモシン−α1−フラグメントの投与が対照に対す
る生存率を改良している。フラグメント１９〜２４、２
０〜２４、２０〜２８及び２１〜２４はすべてプラスの
結果を示す。
【００６１】
【表２】
【００６２】
【表３】
【００６３】
【表４】
【００６４】
【表５】
【００６５】例 １１ 転移−増大の抑圧に対するフラグメントの作用 この実験においてはマウスに黒色腫細胞を接種し、黒色
腫細胞注入の前又は後にチモシン−α1−フラグメント
で処理した。Ｂ１６Ｆ１−黒色腫細胞はＮＣＩ（Bethes
da、 Maryland）から入手した。この腫瘍細胞を試験管
中で５日間培養した。投与前日にＥＤＴＡ−トリプシン
の使用下に個々の細胞における層を崩壊することによ
り、細胞を同期化し、全量を新しい培地の使用下に同じ
容器中に広げる。投与のためには、この層をＥＤＴＡ−
トリプシンの使用下に開き、この細胞を数え、１０6／m
l培地に調節する。細胞懸濁液０.１ml（１０5細胞）を
雌のＢ6Ｄ2Ｆ1マウスの尻尾に静脈内注射した。腫瘍投
与２１日後、マウスを殺し、肺中の腫瘍の数を数えた。
腫細胞注入の前又は後にチモシン−α1−フラグメント
で処理した。Ｂ１６Ｆ１−黒色腫細胞はＮＣＩ（Bethes
da、 Maryland）から入手した。この腫瘍細胞を試験管
中で５日間培養した。投与前日にＥＤＴＡ−トリプシン
の使用下に個々の細胞における層を崩壊することによ
り、細胞を同期化し、全量を新しい培地の使用下に同じ
容器中に広げる。投与のためには、この層をＥＤＴＡ−
トリプシンの使用下に開き、この細胞を数え、１０6／m
l培地に調節する。細胞懸濁液０.１ml（１０5細胞）を
雌のＢ6Ｄ2Ｆ1マウスの尻尾に静脈内注射した。腫瘍投
与２１日後、マウスを殺し、肺中の腫瘍の数を数えた。
【００６６】体重２０gの雌のＢ6Ｄ2Ｆ1マウスをこの転
移モデルに使用した。マウス１０匹のグループを各薬剤
濃度に使用し、腫瘍−対照グループに２０匹を使用し
た。
移モデルに使用した。マウス１０匹のグループを各薬剤
濃度に使用し、腫瘍−対照グループに２０匹を使用し
た。
【００６７】チモシン−α1−フラクションを溶かし、
塩溶液中に希釈した。１０又１００μg／kgを−６、−
４、−１日に腹腔内注射した。この処置の適用におい
て、チモシンフラクションは実験的に誘発された転移に
対して免疫学的予防に働くことができる。ＮＫ−細胞活
性能を有する化合物は、肺中のＢ１６Ｆ１−黒色腫の数
を減少することができる。
塩溶液中に希釈した。１０又１００μg／kgを−６、−
４、−１日に腹腔内注射した。この処置の適用におい
て、チモシンフラクションは実験的に誘発された転移に
対して免疫学的予防に働くことができる。ＮＫ−細胞活
性能を有する化合物は、肺中のＢ１６Ｆ１−黒色腫の数
を減少することができる。
【００６８】後処理は＋３、＋６、＋８、＋１０、＋１
３及び＋１５日（腫瘍細胞接種０日目に関して）に行っ
た。このようにして生理学的応答変性体が微小転移の処
置に関して評価された。結果は次の表に示す。
３及び＋１５日（腫瘍細胞接種０日目に関して）に行っ
た。このようにして生理学的応答変性体が微小転移の処
置に関して評価された。結果は次の表に示す。
【００６９】
【表６】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 トーマス サイアドリイ アメリカ合衆国 ニユー ハンプシヤー ミルフオードナスフア ストリート 159
Claims (2)
- 【請求項１】 Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕのチモシンα1
−フラグメント及びＮ−末端基に付加的なアミノ酸とし
てアセチルセリン、アセチルデヒドロアラニン、アセチ
ルリジン又はＮ−末端がリジンでない場合リジンを有す
る該化合物の誘導体。 - 【請求項２】 Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕのチモシンα1
−フラグメント又はＮ−末端基に付加的なアミノ酸とし
てアセチルセリン、アセチルデヒドロアラニン、アセチ
ルリジン又はＮ−末端がリジンでない場合リジンを有す
るこれらチモシンα1−フラグメントの誘導体を遊離の
形で、又は薬理学的に認容性の塩の形で含有する免疫調
節作用を有する薬剤。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3100974.3 | 1981-01-14 | ||
| DE19813100974 DE3100974A1 (de) | 1980-01-18 | 1981-01-14 | Thymosin(alpha)(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)-fragmente enthaltende arzneimittel mit immunregulierender wirkung, und thymosin(alpha)(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)-fragmente |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57002917A Division JPH0672152B2 (ja) | 1981-01-14 | 1982-01-13 | チモシンα１―フラグメント及び該化合物を含有する免疫調節剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0543593A true JPH0543593A (ja) | 1993-02-23 |
Family
ID=6122608
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57002917A Expired - Lifetime JPH0672152B2 (ja) | 1981-01-14 | 1982-01-13 | チモシンα１―フラグメント及び該化合物を含有する免疫調節剤 |
| JP4002179A Pending JPH0543593A (ja) | 1981-01-14 | 1992-01-09 | チモシンα１−フラグメント、及び該化合物を含有する免疫調節剤 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57002917A Expired - Lifetime JPH0672152B2 (ja) | 1981-01-14 | 1982-01-13 | チモシンα１―フラグメント及び該化合物を含有する免疫調節剤 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0056594B1 (ja) |
| JP (2) | JPH0672152B2 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0215805A1 (en) * | 1985-01-18 | 1987-04-01 | MERCK PATENT GmbH | Immunoregulatory peptides |
| IT1256925B (it) * | 1992-08-05 | 1995-12-27 | Impiego di frammenti o/e di derivati della timosina alfa 1. | |
| TW234692B (ja) * | 1992-11-17 | 1994-11-21 | Albert Enstein College Of Medicine | |
| CN1058500C (zh) * | 1993-02-03 | 2000-11-15 | 施塞克龙药品公司 | 胸腺素α－1衍生物 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5677248A (en) * | 1979-09-28 | 1981-06-25 | Hoffmann La Roche | Peptides |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH641152A5 (en) * | 1977-04-22 | 1984-02-15 | Hoffmann La Roche | Process for preparing thymosin alpha-1 and an analogue |
| DE2938420A1 (de) * | 1979-09-22 | 1981-04-09 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Neue peptide und verfahren zu ihrer herstellung |
| US4426324A (en) * | 1979-09-28 | 1984-01-17 | Hoffmann-La Roche Inc. | Immunopotentiating peptides |
| EP0033384B1 (de) * | 1980-01-18 | 1984-02-15 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Thymosin-alpha-1-Fragmente enthaltende Arzneimittel mit immunstimulierender Wirkung, und Thymosin-alpha-1-Fragmente |
| JPS56138154A (en) * | 1980-02-28 | 1981-10-28 | Genentech Inc | Desacetylthymosin-alpha-1 and manufacture |
| ZA816445B (en) * | 1980-09-19 | 1983-04-27 | American Home Prod | Polypeptides |
| US4361673A (en) * | 1980-09-19 | 1982-11-30 | American Home Products Corporation | Polypeptide compositions |
-
1982
- 1982-01-08 EP EP82100127A patent/EP0056594B1/de not_active Expired
- 1982-01-13 JP JP57002917A patent/JPH0672152B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-01-09 JP JP4002179A patent/JPH0543593A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5677248A (en) * | 1979-09-28 | 1981-06-25 | Hoffmann La Roche | Peptides |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS57139049A (en) | 1982-08-27 |
| EP0056594A1 (de) | 1982-07-28 |
| EP0056594B1 (de) | 1984-09-12 |
| JPH0672152B2 (ja) | 1994-09-14 |
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