JPH05500221A - 潰瘍を治癒させる方法およびそのための組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 潰瘍を治癒させる方法およびそのための組成物技術分野 本発明は、一般に潰瘍の治癒および／または予防に関し、より詳しくはグリシル ーし−ヒスチジルーＬ−リジン、Ｌ−リジルーＬ−ヒスチジルーグリシン、グリ シルーＬ−ヒスチジルーし−リジン：銅（１１）、Ｌ−リジルーＬ−ヒスチジル ーグリシン：銅（１０およびこれらの誘導体の活性治療物質としての使用、並び に温血動物の潰瘍の治癒および／または予防のための医薬の製造における該化合 物の使用に関するものである。

発明の背景 胃潰瘍の治療は、多数の抗潰瘍剤が開発されているにもかかわらず主要な健康上 の問題として残されている。伝統的には、消化器系の潰瘍は過剰の胃酸を中和す ることにより、あるいは食事療法および行動上のまたは情動の改善により治療さ れていた。周知の胃酸中和剤は重炭酸ナトリウム、水酸化マグネシウム、炭酸カ ルシウム、水酸化アルミニウム、燐酸アルミニウム、マグネシウムトリシリケー トおよび三塩基性燐酸カルシウムを含む。いくつかのポリアミンメチレン樹脂も 試みられている。また、胃酸の流出を阻害する方法も試みられているが、これら の試みは重度の副作用により特徴づけられる。より詳しく言えば、シメチジンと 呼ばれる化合物はヒスタミン部位を遮断することにより胃酸の分泌を停止させる 効果を有するが、これは腎機能を損なうことおよび精神錯乱を生ずることを含む いくつかの望ましからぬ特性をもつことが分かっている。

いくつかの低分子量組成物、例えばジイソプ口ピルサリチレートー銅などのサリ チレートー鋼は胃潰瘍の生成を阻害するものとして報告されているが、これらの 錯体は胃において容易に溶解して遊離の銅とサリチレートとに分離する傾向があ り、このことはその実際上の使用を制限してしまう。更に、これらの小さな銅錯 体は水性条件下では低い溶解性をもつ傾向があり、しかも組織−刺激性の可溶化 剤と共に投与する必要がある。このような薬剤のもう一つの例はベニシラミン− 銅錯体であり、しばしば皮膚の発疹およびパーソナリティ−の変化（「ペニシラ ミン精神病（ｐｅｎｉｃｉｌｌａｍｉｎｅ　ｐｓｙｃｈｏｓｉｓ）　Ｊ　）を引 き起こす。

極最近の医学的治療はシメチジンなどの■２−受容体遮断剤の使用、または成長 因子、例えばエビデルマングルーＸ７７クタ（Ｅｐｉｄｅｒｍａｎ　Ｇｒｏｗｔ ｈ　Ｆａｃｔｏｒ：　ＥＧＦ、ウロガストロン（口ｒｏｇａｓｔｒｏｎｅ）　） またはＥＧＦのペプチドフラグメントの使用を包含する。しかし、これらによる 治療は、不安定性、合成および投与の困難さ、並びに高い製造コストなどを含む 多数の欠点を有する。

従って、当分野には潰瘍を治癒せしめおよび／またはその形成を防止するための 改良された組成物に対する需要がある。本発明はかかる組成物を提供し、また更 に他の関連する利点を提供する。

発明の開示 簡単に言えば、本発明は活性治療物質として使用する種々の医薬組成物を開示す る。更に、以下の方法、即ち（ａ）温血動物における胃潰瘍の形成を減じ、（ｂ ）温血動物における胃酸の分泌を低下し、（ｃ）温血動物の胃内に細胞保護性の 粘液の分泌を増進し、また（ｄ）温血動物の胃（腹部）または十二指腸（腸）で 発生した潰瘍を治癒する各方法で使用するのに適した医薬の製造において使用す る化合物が開示される。

ここに記載される化合物はグリシル−し−ヒスデジル−し−リジン（ＧＨＬ）　 、Ｌ−リジル−し−ヒスチジル−グリシン（ＬＨＧ）　、グリシル−し−ヒスチ ジル−し−リジン：銅（１１）　（ＧｔｌＬ−Ｃｕ）、Ｌ−リジル−し−ヒスチ ジル−グリシン：銅（Ｉ　Ｉ）化ｔｌＧ−Ｃｕ）およびＧ）ＩＬ−ＣｕおよびＬ ＯＧ−Ｃｕの種々の誘導体を包含する。

ＧＨＬ−Ｃｕの誘導体は以下の一般式で示される。

〔グリシル−し−ヒスチジル−し−リジン−ＣＤ−Ｒ〕：銅（１１）、ここでＲ は炭素原子数１〜１８のアルキル基、炭素原子数６〜１２のアリール基、炭素原 子数１〜１８のアルコキシ基および炭素原子数６〜１２のアリールオキシ基から なる群から選ばれる基であり、あるいはＲはし一プロリルーし一バリルーし一フ ェニルアラニルーし一バリンまたはし一バリルーＬ−フェニルアラニルーＬ−バ リンである。

上記の誘導体の他に、Ｇｌ（ＬおよびＧＨＬ−Ｃｕ誘導体の生物学的活性を変え るために他の化学的修飾を施すことができる。例えば、グリシンはアラニン、セ リンおよびバリンを包含する種々の他の小さなアミノ酸で置換できる。更に、該 分子の銅（ＩＩ）結合アフィニティーは、ト末端アミノ酸、例えばグリシンを付 加して、グリシル−し−ヒスチジル−し−リジンをグリシル−Ｌ−グリシル〜Ｌ −ヒスチジル−し一リジンに転化することにより高めることができる。更に、グ リシンを上記の誘導体に付加して、対応するテトラペプチドを生成できる。ヒス チジル残基中のイミダゾール基の銅（１１）に対する結合アフィニティーは、ヒ スチジンを３−メチルヒスチジンで置換するか、あるいは該リジル側鎖に追加の 炭素原子を加えることにより重鎮を延長することにより改良できる。

ＬＩＩＧ−Ｃｕの誘導体は以下の一般式を有する。

〔Ｌ−リジル−し−ヒスチジル−グリシン−ＣＤ−Ｒ］　：銅（ＩＩ）ここでＲ は炭素原子数１〜１８のアルキル基、炭素原子数６〜１２のアリール基、炭素原 子数１〜１８のアルコキシ基および炭素原子数６〜１２のアリールオキシ基から なる群から選ばれる基であり、あるいはＲはＬ−プロリル−し−バリル−Ｌ−フ ェニルアラニル−１−ｔ＜リンまたはし一バリルーＬ−フェニルアラニルーＬ− バリンである。

上記の誘導体の他に、ＬＨＧおよびＬＨＧ−Ｃｕ誘導体の生物学的活性を変える ために他の化学的修飾を施すことができる。例えば、リジンはアラニン、セリン およびバリンを包含する種々の他の小さなアミノ酸で置換できる。更に、該分子 の銅（１１）Ｍ合アフィニティーは、Ｎ−末端アミノ酸、例えばグリシンを付加 し、Ｌ−リジル−し−ヒスチジル−グリシンをグリシル−し−リジル−し−ヒス チジル−グリシンに転化することにより高めることができる。更に、グリシンを 上記の誘導体に付加して、対応するテトラペプチドを生成できる。ヒスチジル残 基中のイミダゾール基の銅（ＩＩ）に対する結合アフィニティーは、ヒスチジン を３−メチルヒスチジンで置換するか、あるいは該刃ジル側鎖に追加の炭素原子 を加えることにより重鎮を延長することにより改良できる。

および添付図を参照することにより明らかとなろう。

図面の簡単な説明 第１図は、ラットの胃の写真であり、治療した動物と比較するための対照動物に おける潰瘍形成を示す。該胃壁における円形の黒い点が胃潰瘍である。

第２図は、ＧＨＬ−Ｃｕの投与量の増大に伴う胃のｐＨ（胃酸の分泌を示す）の 増加を示す。

第３図は、ＧｔｌＬ−Ｃｕの投与量の増大に伴う肉眼的に観察可能な潰瘍形成の 減少を示す。

第４図は、飲料水療法後に観察された十二指腸潰瘍の治癒を示す。

第５図は、ラットの胃の写真であり、ＧＩＩＬ−Ｃｕを使用した前処理による胃 の潰瘍形成の阻害を示す。

第６図は、エタノールで誘発された胃潰瘍の治癒を示す。

本発明を実施するための最良の態様 ここに記載したように、ＧＨＬ　、　Ｌｌ（Ｇ　、ＧＨＬ−ＣｕＳＬ）ＩＧ−Ｃ ｕおよびこれらの様々な誘導体は活性な治療物質として利用でき、しかも（ａ） 温血動物における胃酸の分泌を減じ、（ｂ）温血動物の胃内での細胞保護性の粘 液の分泌を増進し、（ｃ）温血動物における胃潰瘍の形成を減じ、また（ｄ）温 血動物の胃または腸で発生した潰瘍を治癒する際に使用するのに適した医薬の製 造で使用することができる。本発明の誘導体は米国特許第４．６６５．０５４号 および米国特許出願第３１２．２９５号に詳細に記載されている。これらを本発 明の参考文献とする。本発明の誘導体はエステル化により、水分子の除去により 、あるいはＧＨＬまたはＬＨＧのカルボン酸末端により親油性の誘導体の形成を 結果する基（アルコール、例えばオクタツール、メタノール、ベンジルアルコー ルまたはＮＨｓの何れか）を付加することにより調製できる。

ＧＨＬ　、　ＩＪＩＧ　、　ＧＨＬ−Ｃｕ、　ＬＨＧ−Ｃｕおよび幾つかの類似 体を胃および十二指腸潰瘍両者の動物モデル内でテストした。ＧＨＬ−Ｃｕ、　 ＬＨＧ−Ｃｕおよびその類似体は、過度の酸の分泌および９５％エタノール摂取 両者により引き起こされた胃潰瘍形成を防止すの対照と比較した場合に目に見え る病巣を殆ど消失させた。ＧＨＬ−Ｃｕ、　ＬＨＧ−Ｃｕおよびその類似体によ る前処理は、９５％エタノール摂取により発現した胃の刺激状態および潰瘍形成 を防止することが分かった。ＧＨＬ−Ｃｕ、　ＬＯＧ−Ｃｕおよびその類似体の 飲料水溶液としての投与も、該エタノールにより発現した潰瘍の治癒を促進する 。

ＧＨＬ−Ｃｕ、　ＬＨＧ−Ｃｕおよびその類似体は、また既に形成された十二指 腸潰瘍の治癒を促進する。このモデル系において、潰瘍はシステアミンの注射に より誘発させた。簡単に言えば、外科的にｍ認された潰瘍を有するラットを飲料 水中に分散させたＧＨＬ−ＣｕまたはＬＨＧ−Ｃｕで治療した。この研究の終了 時点で、治療されたラットは潰瘍数が少なく、かつ対照群と比較してより軽度の 潰瘍を示した。

ＧＨＬ−Ｃｕ、　１．１（Ｇ−Ｃｕおよびその類似体は、また胃潰瘍形成の防止 および既に発現している胃並びに十二指腸潰瘍の治癒両者において有効である。

ＧＨＬ誘導体の合成における全化学反応は以下の式により特徴ずけられる。

Ｇ）ＩＬ−ＤＨ＋　Ｒ−Ｈ−＞　ＧＨＬ−Ｒ＋　ＨＪ実際に、この反応は、リジ ンと他の２種のアミノ酸とを結合してＧＨＬとする前に、該アミノ酸リジンにＲ 基を付加することにより最も容易に実施される。ＧＨＬ−Ｒの形成および単離後 、銅（１１）を該分子にキレート化して生物活性錯体を形成する。

ＧＨＬ−Ｃｕのより親油性の誘導体を形成するための全反応は以下の諸反応によ り特徴ずけられる。

１）　リジン−ＤＨ＋　Ｒ−Ｈ−＞　リジン−Ｒ＋　８２０２）　リジン−Ｒ十 　保護Ｌ−ヒスチジン□〉保護し一ヒスチジンーし一リジンーＲ３）保護Ｌ−ヒ スチジン−し一すジンーＲ−＞部分的に保護されたし一ヒスチジンーし一リジン ーＲ４）　部分的に保護されたし一ヒスチジンーし一すジンーＲ４護グリシン□ 〉保護グリシル−し−ヒスチジン−Ｌ−リジン−Ｒ５）　保護グリシル−Ｌ−ヒ スチジン−し−リジン−Ｒ−＞グリシル−し−ヒスチジン−し−リジン−Ｒ６） 　グリシル−し−ヒスチジン−し−リジン−Ｒ半胴（ＩＩ）　−＞グリシル−し −ヒスチジン−し−リジン−Ｒ：銅（ＩＩ）ＬＨＧ−Ｃｕの高親油性誘導体を形 成するための全反応はＧ１１Ｌ−Ｃｕについて上記したものと同様であるが、リ ジン−ＤＨの代わりにグリシン−ＤＨを初期反応成分として使用し、上記工程４ ）における保護グリシンの代わりに保護リジンを使用する。

ここに開示する結果は、ＧＨＬ　、　ＬＯＧ　、’　ＧＨＬ−Ｃｕ、　ＬＨＧ− Ｃｕおよびその誘導体が種々１　の胃腸管の疾患、例えば吻合後の結腸の癒合、 腸管虚血後に生ずる病巣、壊死性の全腸炎、口腔、咽喉および食道の創傷などに 治癒作用を及ぼすであろうことを示唆している。ＧＨＬ−Ｃｕの一般的な治癒特 性は米国特許第４．８１０．６９３号および同第４、７６０．０５１号に記載さ れている。これらを本発明の参考文献とする。

好ましい態様において、ＧＨＬまたはＬＨＧあるいはＧＨＬ−ＣｕもしくはＬＨ Ｇ−Ｃｕの誘導ｌ　体はＣ１〜２：１の比率で存在する。本発明の範囲内におい て、ここに記載の組成物を経口でおよびカプセル剤として投与することが一般に は好ましい。経口投与のために組成物をカプセル化（例えば、硬質ゼラチンの被 膜中に）する方法は当分野で周知である（ベーカー、リチャード（Ｂａｋｅｒ、 　Ｒｉｃｈａｒｄ）、生物学的に活性な薬剤の制御放出（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ 　Ｒｅ１ｅａｓｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　Ａｃｔｉｖｅ　Ａｇｅｎ ｔｓ）、ジョンウィリー＆サンズ社、　１９８６）。また、一般に宿主体重１ｋ ｇにつき約０．１〜１００　ｍｇの用量で該組成物を投与することが好ましいが 、該用量は該患者の状態により変動する。更に、初めにＧＨＬ−ＣｕまたはＬＨ Ｇ−Ｃｕを使用した治療から開始し、次いで少量の銅（ＩＩ）を含むまたは含ま ない遊離ペプチド（ＧＨＬまたはＬ）ＩＧ）を使用して治療を継続することが好 ましい。

以下の実施例を概説すると、実施例１はグリシル−し−ヒスチジル−し−リジン ベンジルエステル：１ｉ（ＩＩ）の合成を説明する。実施例２はグリシル−Ｌ− ヒスチジル−し−リジンｎ−オクチルエステル：銅（ＩＩ）の合成を説明する。

実施例３では、（Ａ）グリシル−し−ヒスチジル−し−リジン叶ステアリルエス テル：１ｉ（ＩＩ）の合成および（Ｂ）その別法による合成を説明する。いずれ かの方法に基づいて、当業者は叶ステアリルアルコール（１８個の炭素原子）を ｎ−バルミチルアルコール（１６個の炭素原子）に代えてグリシル−Ｌ−ヒスチ ジル−し−リジンｎ−ステアリルエステル：銅（１１）を得ることができる。実 施例４は（＾）グリシル−し−ヒスチジル−し−リジル−し−プロリル−し一バ リルーＬ−フェニルアラニルーし一バリン：銅（ＩＩ）およびグリシル−し−ヒ スチジルーし一リジルーし一バリルーＬ−フェニルアラニルーＬ−バリン：銅（ ＩＩ）ノ固相合成および（Ｂ）グリシル−Ｌ〜ヒスチジル−し−リジル−し−バ リル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンの溶液合成による調製を例示する。実 施例７は胃酸蓄積の阻害、細胞保護性粘液分泌の刺激、および温血動物における 胃潰瘍形成の減少を立証する。実施例８は既に形成された胃潰瘍のＧＨＬ−Ｃｕ 、　ＬＨＧ−Ｃｕおよびその誘導体による治癒を証明する。実施例９は本発明の 化合物の経口投与による十二指腸潰瘍の治癒を立証する。実施例１０はエタノー ル誘発性潰瘍の治癒並びに予防を明らかにする。

以下の実施例は例示の目的で与えられるのであり、本発明を何等制限するもので はない。

実施例 動物に使用するＧＨＬ　、　ＬＨＧ　５ＧＨＬ−ＣｕおよびＬＨＧ−Ｃｕの調製 Ｇ）ＩＬおよびＬＨＧはガラス容器内で蒸留水中に溶解（５０ｍｇｊｉｌ）　Ｌ 、次いで３℃にて１時間２０．０００　ｘ　ｇにて遠心分離処理することにより 精製した。この処理により合成中に残された水−難溶性の物質を除去する。得ら れた上澄を凍結乾燥し、０．５％酢酸溶液として３℃にてセファデックスＧ−１ ０カラムに通す。溶媒前端部の通過後に溶出（２５４ｎ−にあける吸収により監 視）する主ピーク画分を凍結乾燥する。

ＧＨＬ−ＣｕおよびＬＨＧ−Ｃｕは、精製したＧＨＬまたはＬ）ＩＧを等モル量 の酢酸第２銅および水酸化ナトリウムと混合し、次いでエタノールを添加し、公 知の方法（バーキンス（Ｐｅｒ’ｋ　１ｎｓ）等、　［ｎｏｒｇ、Ｃｈｉｎ、Ａ ｃｔａ、　１９８４．６７、　ＰＰ、　９３−９９）で低温処理して沈澱させる ことにより調製した。

化学試薬の入手源二以下の実施例で使用する化学試薬およびペプチド中間体は以 下の製造業者から入手した。シグマケミカル社＜Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ 　Ｃｏ、）　（ミズーリー州、セントルイス）、ベニンシュララボラトリーズ（ Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）（カリフォルニア州、サンカ ルロス）、アルドリッジケミカル社（ＡｌｄｒｉｄｇｅＣｈｅａ＋１ｃａｌ　Ｃ ｏ、Ｈウィスコンシン州、ミルウォーキー）、ベガバイオケミカルズ（Ｖｅｇａ 　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）　（アリシナ州、ツーソン）、ピアースケミカル 社（ｐｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）（イリノイ州、ロックフォード） 、リサーチバイオケミカルズ（Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ） 　（オハイオ州、クリーブランド）、ファンウォーター＆ロジャース（Ｖａｎ　 Ｗａｔｅｒｓ　ａｎｄ　Ｒｏｇｅｒｓ）　（カリフォルニア州、サウスサンフラ ンシスコ）およびバケム社（Ｂａｃｈｅｒｎ、Ｉｎｃ、）　（カリフォルニア州 、トーランス）。

実施例１ニゲリシル−し−ヒスチジル−し−リジンベンジルエステル：銅（ＩＩ ）の合成Ｎ＃−ベンジルオキシカルボニル−し−リジンベンジルエステルを１： １へ牛サンーエタノールに溶解し、カップリング剤としてジシクロへキシルカル ボジイミドを使用してＮ′″−ｔ−ブチルオキシカルボニル−ＮＬＩＩ−ベンジ ルオキシカルボニル−し−ヒスチジンとカップリングした。重炭酸ナトリウム（ １０％）を添加し、生成物を有機相に抽出した。生成物、Ｎ　’−ｔ−ブチルオ キシカルボニルーＮ′−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジル−Ｎｏ−ベ ンジルオキシカルボニル−し−リジンベンジルエステルを溶液から再結晶化した 。保護したジペプチドのＮ−末端をトリフルオロ酢酸の５０％ジクロロメタン溶 液中で３０分撹拌し、次いで真空蒸発することにより除去した。この生成物　Ｎ 　ｌ＋＊−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジル−Ｎｏ−ベンツ′イルカ ルボニルーＬ−リジンベンジルエステルをカップリング剤としてジシクロへキシ ルカルボジイミドを使用してリジンとカップリングした。保護基を、氷酢酸中で １０％パラジウム炭素を使用した接触水添により除去した。凍結乾燥後、生成物 、グリシル−し−ヒスチジル−し−リジンベンジルエステルを水に溶解し、ダウ エックス（Ｄｏｗｅｘ）５０　Ｘ−４カチオン交換樹脂上で、０．１Ｍの水酸化 アンモニウムにより溶出するイオン−交換クロマトグラフィーにより精製し、該 溶出液は即座に酢酸で中和した。更に、中性ｐＨでのバイオレックス（Ｂｉｏｒ ｅ＋ｃ）６３によるアニオン交換によって遊離のカルボキシル基を有する分解さ れた生成物を除去した。

該グリシル−し一ヒスチジルーし一リジンベンジルエステルを、添加された等モ ル量の酢酸鋼を含む水に溶解した。該溶液のｐＨを水酸化す１−ＩＪウムにより 中性にした。この溶液を３℃にて１時間２０．０００　ｘ　ｇにて遠心分離して 、水−難溶性の物質を除去した。得られた上澄を凍結乾燥して、グリシル−１， −ヒスチジル−し−リジンベンジルエステル：銅（ＩＩ）を得た。

Ｎ＠−ベンジルオキシカルボニル−し−リジン、ｎ−オクタツール、ベンゼンお よびｐ−）ルエンスルフォン酸−水和物の混合物をディーンシュターク（Ｄｅａ ｎ−Ｓｔａｒｋ）トラップを使用して一夜還流し、水を除去した。冷却後乾燥エ チルエーテルを添加した。次に、この溶液を０℃にて一夜放置して沈澱させた。

沈澱固体の一部を５０ｍ１の炭酸カリウム溶液および５０ｍ　ｌのジクロロメタ ンに添加した。抽出後、相を分離し、有機相を水および塩水で洗浄し、次いで無 水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、蒸発しかつフラッシュカラムクロマト グラフィーで精製することによりＣ−オクチルＮ１−ベンジルオキシカルボニル −し−リジネートを得た。この生成物をテトラヒドロフランに溶解し、Ｎ　’− ｔ−ブチルオキシカルボニルーＮ１″−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチ ジン、イソブチルクロロホルメートおよびＮ−メチルモルホリンと混合した。蒸 発後、水および酢酸エチルを添加した。この生成物を有機相に抽出し、該有機相 を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、蒸発しかつフラッシュカラムクロ マトグラフィーで精製することによりｎ−オクチルＮ　’−ｔ−ブチルオキシカ ルボニルーＮ１″−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジル−Ｎ＠−ベンジ ルオキシカルボニル−し−リジンを得た。

この生成物を３０分間トリフルオロ酢酸の５０％ジクロロメタン溶液に溶解し、 次いで蒸発させて、ｎ〜オクチル−Ｎｌｓ−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒ スチジル−Ｎ−−ベンジルオキシカルボニル−し−リジンエステルを形成した。

これをテトラヒドロフランに溶解し、インブチルクロロホルメート、Ｎ−メチル モルホリンおよびベンジルオキシカルボニルグリシンを添加してｎ−オクチルベ ンジルオキシカルボニル−グリシン−Ｎ１″−ベンジルオキシカルボニル−し− ヒスチジル−Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル−し−リジネートを形成した。こ れを氷酢酸に溶解し、−夜に渡り水添した。

得られたグリシル−し−ヒスチジル−し−リジンのｎ−オクチルエステルを、等 モル量の銅ジアセテートを添加することにより銅錯体に転化した。ＰＨを水酸化 ナトリウムにより中性とした。この溶液を３℃にて１時間２０．０００　ｘ　ｇ にて遠心分離し、水難溶性の物質を除去した。得られた上澄を凍結乾燥して、グ リシル−し−ヒスチジル−し−リジンｎ−オクチルエステル：銅（ＩＩ）を得た 。

実施例３： Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル＝し一リジン、ｎ−ステアリルアルコール、ベ ンゼンおよびｐ−トルエンスルフォン酸−水和物の混合物をディーンシュターク （Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ）　）ラップを使用して一夜還流して、水を除去した。

冷却後乾燥プロピルエーテルを添加して、全容積を６倍に増大した。この生成物 を０℃にて一夜沈澱させ、濾過した。濾液の一部を５０ｍ１の炭酸カリウム溶液 および５０ｍ１のジクロロメタンに添加した。抽出後、相を分離し、有機相を水 および塩水で洗浄し、次いで無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、蒸発し かつフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製することによりｎ−ステアリル Ｎ＠−ベンジルオキシカルボニル−し−リジネートを得た。この生成物をテトラ ヒドロフランに溶解し、Ｎ　”　−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎｌ−ベンジ ルオキシカルボニル−し−ヒスチジン、イソブチルクロロホルメートおよびＮ− メチルモルホリンと混合した。蒸発後、水およびプロピル酢酸を添加し、この生 成物を有機相に抽出し、該有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、 蒸発しかつフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製することによりｎ−ステ アリルＮ′″−ｔ−ブチルオキシカルボニル−１１１ｍ−ベンジルオキシカルボ ニル−し−ヒスチジル−Ｎ＠−ベンジルオキシカルボニル−し−リジネートを得 た。

この生成物を３０分間トリフルオロ酢酸の５０％ジクロロメタノ溶液に溶解し、 次いで蒸発させて、ｎ−ステアリル−１７１ｍ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ −ヒスチジル−Ｎ″−ベンジルオキシカルボニル−し−リジネートを形成した。

これをテトラヒドロフラン、イソブチルクロロホルメート、Ｎ−メチルモルポリ ンおよびベンジルオキシカルボニルグリシンに溶解してローステアリルベンジル オキシカルボニル−グリシル−１７１ｍ−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒス チジル−Ｎｏ−ベンジルオキシカルボニル−１，−リジネートを形成した。これ を３０分間トリフルオロ酢酸の５０％ジクロロメタン溶液に溶解し、次いで蒸発 させてグリシル−し−ヒスチジル−し−リジンのｎ−ステアリルエステルを形成 した。

生成した分子、グリシル−し−ヒスチジル−し−リジンのｎ−ステアリルエステ ルを、等モル量の銅ジアセテートを添加することにより銅錯体に転化した。ｐｕ を水酸化ナトリウムにより中性として、動物実験に有用な生成物を得た。

該ｎ−ステアリルアルコールをｎ−バルミチルアルコールに代えることによりグ リシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジンのｎ−バノ呟チルエステルが同様に合成で きる。

Ｂ、グリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジンのｎ−ステアリルエステル鋼（Ｉｆ ）の別法による合成 Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−リジン、ｎ−ステアリルアルコール、ｐ −トルエンスルフォン酸−水和物およびベンゼンの混合物をディーンシュターク （Ｄｅａｎ−３ｔａｒｋ）　）ラップを使用して一緒に還流して、発生する水を 共沸的に除去した。

室温まで冷却し、次いで乾燥エチルエーテルを添加した後、ｎ−ステアリルＮ＠ −ベンジルオキシカルボニル−し−リジネートのｐ−トルエンスルフォン酸塩を 濾過により回収し、２Ｍの水性重炭酸カリウム溶液で処理し、ジクロロメタンで 抽出した。

蒸発することにより遊離アミンが得られ、これを乾燥テトラヒドロフランに再度 溶解し、−１５℃にて撹拌したＮ　’−ｔ−ブチルオキシカルボニルーＮ′″− ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジン、Ｎ−メチルモルホリンおよびイソ ブチルクロロホルメートの乾燥Ｔ）ＩＰ溶液に添加した。生成する十分に保護さ れたジペプチドエステルを室温にて１＝１トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンで 処理し、水性飽和重炭酸ナトリウム溶液で中和し、酢酸エチルで抽出した。蒸発 により、部分的に脱保護されたジペプチドが得られ、これを乾燥ＴＨＦに再度溶 解し、−１５℃にて撹拌したベンジルオキシカルボニル−グリシン、Ｎ−メチル モルホリンおよびイソブチルクロロホルメートの乾燥ＴＨＦ溶液に添加した。生 成する十分に保護されたトリペプチドを、氷酢酸中で、室温にて、Ｐｄ−Ｃ触媒 の存在下で水素により処理して完全に脱保護した。濾過し、蒸発し、マイクロク リスタリンセルロースカラム上で精製し、次いで凍結乾燥することにより三酢酸 塩として所定のトリペプチドのエステルを得た。

生成した分子、グリシル−し−ヒスチジル−し−リジンのｎ−ステアリルエステ ルを、等モル量の銅ジアセテートを添加することにより銅錯体に転化した。ｐＨ を水酸化ナトリウムにより中性として、動物実験に有用な生成物を得た。

該ｎ−ステアリルアルコールをｎ−パルミチルアルコールに代えることによりグ リシル−し−ヒスチジル−し−リジンのｎ−バルミチルエステルが同様に合成で きる。

実施例４ これらのペプチドを、ペプチドの分野では一般的な標準的低温−相法（Ｊ、スチ ュアート（Ｓｔｅｗａｒｔ）およびＪ、ヤング（Ｙｏｕｎｇ）、　５ｏｌｉｄ　 Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ。

１９８４、ピアースケミカル社（Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、　） ）により合成した。簡単に説明すれば、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−０−Ｒｅｓｉｎを、反 応試薬としてジシクロへキシルカルボジイミドを使用して他の保護されたアミノ 酸と周期的にカップリングした。保護アミノ酸、固相合成用の樹脂およびカップ リング試薬はベニンシュララボラトリーズ（Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ　Ｌａｂｏｒａ ｔｏｒｉｅｓ；カリフォルニア州、サンカルロス）から得た。保護アミノ酸を周 期的な順序で添加して、所定のペプチドを得る。最終のペプチドは弗化水素を使 用して脱保護される。この最終のペプチドを、０．５％酢酸溶液に溶解し、セフ ァデックスＧ−１５カラム（ファルマシア（Ｐｈａｒａ＋ａｃｉａ）社）に通し て精製する。等モル量の銅酢酸を添加し、凍結乾燥することにより活性分子を得 る。

多量（ｍｕｌｔｉ−ｇｒａｎ＋　ｑｕａｎｔｉｔｙ）のグリシル−し−ヒスチジ ル−し−リジル−し−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンを、側鎖保護 のためにｔ−ブチルオキシカルボニル保護基を使用しおよびカップリングのため に混合無水物法を使用して、標準的な液相法により合成した。簡単に説明すれば 、Ｌ−バリンベンジルエステルｐ−トルエンスルフォン酸塩を、カップリング剤 としてインブチルクロロホルメートおよびＮ−メチルモルフォリンを使用して、 ｔ−ブチルオキシカルボニル−し−フェニルアラニンとカップリング（−２０℃ にて２時間、次いで周囲温度にて１時間）した。

このジペプチドのｔ−ブチルオキシカルボニル保護基を、次いでトリフルオロ酢 酸の３０％ジクロロメタン溶液を使用し、室温にて３０分処理して除去した。保 護アミノ酸（ｔ−ブチルオキシカルボニル−し−バリン、Ｎ　”−ｔ−ブチルオ キシカルボニル−Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル−し−リジン、’Ｎ”−ｔ− ブチルオキシカルボニル−Ｎｌ″−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジン 、ベンジルオキシカルボニルグリシン）を周期的順序で添加して所定のペプチド を得た。この最終のペプチドを水から凍結乾燥し、Ｃ−１８逆相カラム上での液 体クロマトグラフィーにより精製し、多量の所定のへキサペプチドを得た。

実施例５：Ｌ−リジル−し−ヒスチジルーグリシンの合成Ｎ　”−ｔ−ブチルオ キシカルボニル−Ｎｌｌｌ−ベンジルオキシカルボニル−し＝ヒスチジンをテト ラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶解し、１当量のＮ−メチルモルフォリンにより中 和した。次いで、これをイソブチルクロロホルメートおよびＮ−メチルモルフォ リンを使用してベンジルグリシネートのＰ−）ルエンスルフォン酸塩とカップリ ングした。−２０℃にて２時間、周囲温度にて更に１時間放置した後、該反応を 、２Ｎの重炭酸カリウム水性溶液の添加により停止した。この生成物を酢酸エチ ルで抽出しまずＩＭの水性クエン酸溶液で、次いで飽和重炭酸ナトリウム溶液で 洗浄した。得られた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。濾過し、蒸発す ることによりベンジルＮ　”−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎｕｌｌ−ベンジ ルオキシカルボニル−し−ヒスチジル−グリシンを得た。

この生成物を５分で塩化水素の無水メタノール（０℃で飽和）に溶解し、減圧下 で溶媒を除去して、ベンジルＮｌ″−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジ ル−グリシネートを形成した。これをテトラヒドロフランに溶解し、イソブチル クロロホルメート、Ｎ−メチルモルフォリンおよびＮ”、Ｎ”−ジベンジルオキ シカルボニル−し−リジンを添加して、ベンジルＮ’、Ｎ”−ジベンジルオキシ カルボニル−し−リジル−し−ヒスチジル−グリシネートを形成（−２０℃にて ３時間、周囲温度にて更に１時間放置）した。次いで、この生成物をメタノール ／酢酸（１：１　（ｖ／ｖ））に溶解し、１０％Ｐｄ−Ｃ触媒の存在下で一夜水 添した。生成したＬ−ＩＪリジルＬ−ヒスチジル−グリシンを水から数回凍結乾 燥し、次いでＣ−１８逆相カラム上での液体クロマトグラフィーにより精製し、 泡状の白色固体として所定のトリペプチドの三酢酸塩を得た。

多量のし一リジルーし一ヒスチジルーグリシルーし一バリルーＬ−フェニルアラ ニルーし−バリンを、α−（化合町名では肩付のａで表示）窒素用にｔ−ブチル オキシカルボニル保護基を使用し、側鎖保護のためにベンジルオキシカルボニル 基を使用し、かつカップリングのために混合無水物法を使用して、標準的な液相 法により合成シタ。簡単にいえば、Ｌ−バリンベンジルエステルのＰ−）ルエン スルホン酸塩を、インブチルクロロホルメートおよびＮ−メチルモルフォリンを カップリング剤として使用してｔ−ブチルオキシカルボニル−し−フェニルアラ ニンとカップリング（−２０℃にて２時間、周囲温度にて更に１時間放置）した 。次いで、このジペプチドのｔ−ブチルオキシカルボニル保護基を、トリフルオ ロ酢酸の３０％ジクロロメタン溶液で室温にて３０分処理することにより除去し た。保護アミノ酸（ｔ−ブチルオキシカルボニル−し−バリン、ｔ−ブチルオキ シカルボニル−グリシン、Ｎ　”　−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎｌｌｌ− ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジン、Ｎ’、Ｎ”−ジベンジルオキシカ ルボニル−し−リジン）を周期的な順序で添加して、所定のペプチドを得た。こ の最終のペプチドを、１０％Ｐｄ−Ｃ触媒の存在下で、５日間氷酢酸中で水素ガ スを使用して完全に脱保護した。この最終ペプチドを水から凍結乾燥し、次いで Ｃ−１８逆相カラム上での液体クロマトグラフィーにより精製して、多量の所定 のへキサペプチドを得た。

多量の所定のペプチドを、最小の精製操作で高純度で生成するためには、上記の 系統的な合成が幾つかの固相合成法よりも優れていることがわかった。

実施例７：シエイ（Ｓｈａｙ）モデルの研究シェイ（Ｓｈａｙ）の方法により、 ラット中に胃潰瘍を発生させた。即ち、ラットの胃と腸との間の通路を縛り、胃 酸を蓄積させ、潰瘍形成した。治療のために、該ラットにはｌＱｍｇのＧＨＬ　 、　ＧＨＬ−Ｃｕまたはその誘導体を含む０．２５ｍ１の塩水溶液を挿管療法に より胃に投与した。対照用のラットには塩水のみを投与した。２４時間後に、胃 の写真撮影を行い、かつ胃の酸度を測定した。

この実験の結果を表１に示す。表１には、ラット中の胃酸蓄積の阻害および細胞 保護性の粘液の分泌の刺激を示した。該粘液産生は肉眼で０〜→＋＋十までラン ク付けし、ここで０は実質的に粘液の分泌がないことを意味し、＋＋＋＋は著し く粘液が分泌されることを示す。

対照　２．Ｏ１±０．２７　観測不能 ＧＨＬ　３．２６±０．４７　＋＋ ＧＨＬ　＋　ＧＨＬ−Ｃｕ　６．５２±０．７０　＋＋＋＋ＧＨＬ−Ｃｕ　６． ９４±０．２５　＋十＋＋実施例８ニジエイ（Ｓｈａｙ）モデルの研究シェイ（ Ｓｈａｙ）の方法により、ラット中に胃潰瘍を発生させた。即ち、ラットの胃と 腸との間の通路を縛り、胃酸を蓄積させた。潰瘍形成は結紮後１８〜２４時間で 肉眼的に観察された。

治療のために、該ラットにはＧＨＬ−Ｃｕまたはその誘導体を含む０．２５ｍ１ の塩水溶液を、外科的処置後即座に胃供給管を介して該胃に投与した。対照用の ラットには塩水のみを投与した。２４時間後に、ラットを殺し、胃を取り出しそ の写真撮影を行った。胃の内容物の酸度をも測定した。

ここに報告する実験において、ラットは種々の用量のグリシル−し−ヒスチジル −Ｌ−リジン（ＧＨＬ）　、ＧＨＩ、−Ｃｕ　（２：　１）またはＣＩの銅錯体 としてのＧＨＬの種々の類似体であるＧＨＬ−Ｃｕ　（１：１）錯体で治療した 。

胃潰瘍を上記の如くラット群に誘発させた。これらの動物に増大する量のＧＨＬ −Ｃｕ、即ち２モルのＧＨＬと１モルのＣｕ（２：１）　、等モル量錯体（１： １）または銅を含まないＧＩＩＬのいずれかを投与した。２４時間後に、胃を取 り出し、ｐＨを測定し、かつ肉眼観察可能な潰瘍を有する胃の割合を決定した。

この一連の実験の結果を表２に示す。表２は、胃酸蓄積の阻害（対照と比較した 際の胃液のより高いｐＨにより示される）および肉眼観察により潰瘍であること が明らかとなった胃の割合を示す。潰瘍の存在は、その寸法とは無関係に単一の 病巣が見つかった場合に正と計測する。塩水で処理した胃は多数の大きな病巣を 有していたが、治療した動物では、存在したさしても数が少なくしかもより小さ な潰瘍を有するにすぎなかった。グリシル−し−ヒスチジル−し−リジン：　Ｃ ｕ（２：１）およびグリシル−し−ヒスチジル−１７−リジン：　Ｃｕ（Ｃ１） は両者ともに潰瘍形成を阻害し、かつ投与量に応じた胃の内容物のｐＨ上昇を示 した。

塩水　２５　２．０６±０．６１　７２ＧＨＩ、　１０　５　２．８４±０．９ ０　４０ＧＩＩＬ−Ｃｕ　（２：１）　３　２　２．７２±１．０３　５０ＧＨ Ｌ−Ｃｕ　（２：１）　１０　２　６．３８±１．０１　１１Ｇ）ＩＬ−Ｃｕ　 （１：１）　１　７　３．８０±１．３４　３３ＧＨＬ−Ｃｕ　（Ｃ１）　３　 ８　４８５±１．１７　０ＧＨＬ−Ｃｕ　（Ｃ１）　１０　１３　７．２３±０ ．６４　０典型的な実験のラットの胃の代表的な写真を第１図に示す。上の写真 は２４時間後の塩水で処理した胃を示し、多数の潰瘍性病巣の存在を示している 。下の写真はＧｌｔＬ−Ｃｕ　（１：１）１０Ｉｌ＋ｇで治療した例を示し、病 巣形成が完全に阻害されていることを示している。Ｇ）ＩＬ−Ｃｕ　（１：１） の量の増大に伴う胃のｐＨの上昇（胃酸分泌の減少を意味する）が第２図に示さ れている。ＧＨＬ−Ｃｕの対応する投与量に伴う肉眼観察可能な潰瘍形成におけ る減少は第３図に示されている。

グリシル−し−ヒスチジル−し−リジンの類似体もラットモデル中で潰瘍形成を 阻害することがわかっている。テストしたいくつかの該類似体の結果の概要を以 下の表３に示す。該化合物全てはＣ１銅錯体としてテストした。

塩水　−２５２，０６±０．６１　７２ＧＨＬオクチルエステル：Ｃｕ　、３　 ８　３．５０±１．１８　２５ＧＨＬオクチルエステルニＣｕ　１０　８　６． １８±０．９８　０ＬＧＨ−Ｃｕ　３　９　３．６１　±１．００　１１ＧＨ（ １−メチル）Ｌ：Ｃｕ　１　６　２．１７±０．８２　１７ＧＩＩＬペンタデシ ルエステル：Ｃｕ３　６　３．２７±０．８２　０実施例９：十二指腸潰瘍の治 癒 システアミンは、皮下注射した場合にラット中に慢性的な十二指腸潰瘍を誘発す る（オルセン（Ｏｌｓｅｎ）　Ｐ、　Ｓ、　、ボールセン（Ｐｏｕｌｓｅｎ）Ｓ 、Ｓ、、サーケルセン（Ｔｈｅｒｋｅｌｓｅｎ）Ｋ、、およびネキソ（ｌｉｅｘ ｏ）　Ｅ、、の、「合成ヒトガストロンの経口投与はラット中の慢性十二指腸潰 瘍の治癒を促進する」と題する論文、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、　１ ９ｇ６゜９０、　ｐｐ、　９１．１−９１７）。

十二指腸潰瘍は、６時間間隔でシステアミン（３５０ｍｇ／ｋｇおよび１７５　 ｍｇ／ｋｇ）を一群の４０Ｓ、　Ｄ、ラット（雄および雌）に皮下投与すること により誘発させた。塩水（５ｃｃ＞を皮下注射して流体を与えた。７日後に生存 していた動物（ｎ　＝　３４）を開腹した。該十二指腸を外部から観察して肝臓 および他の周辺組織の癒着の程度を調べた。十二指腸潰瘍を有する動物を（性別 に基づいて）無作為抽出し、蒸溜水中に溶解したＧｆｌＬ−Ｃｕ　（２：１）ま たは単なる蒸留水を与えた。これらの動物を２５日間飼育し、鎮静剤を投与し、 胃および十二指腸を取り出し、内部の検査のために解剖した。結果を得、これら を記録し、検体を立体顕微鏡で観察するために１０％の緩衝ホルマリンに浸漬し た。

以下のランク付けを使用して潰瘍形成のひどさを表した。

０・・・潰瘍形成の徴候なし。

１・・・僅かな潰瘍形成、十二指腸全体に及ぶ広がりはない。

２・・・中程度の潰瘍形成、周辺組織の固定あり。

３・・・十二指腸全体に及ぶ重度の潰瘍形成あり。

開腹を実施した日に、２８匹（６匹の雌、１２匹の雄）のラットが、十二指腸の 周辺組織への著しい癒着を示すことがわかった。これらの動物を性別に基づいて 無作為抽出し、ＧＨＬ−Ｃｕ投与群または対照群の何れかに分けた。２５日間の 飲料水による治療（１日当たりの前投与量は０．６　ｍｇ／ｋｇ）の後、ラット を鎮静剤処理し、解剖のために準備した。胃および十二指腸を取り出し、残留す る癒着の程度に関して調べた。検体を１０％ホルマリンに浸漬する前に十二指腸 の内部を検査した。大まかな検査時点での結果は、１４匹の対照中１１匹が主と して肝臓にまで及ぶ著しい残留潰瘍を有することを示した。ＧＨＬ−Ｃｕ投与群 の動物は１４匹の動物中７匹という、幾分僅かな潰瘍形成を示した。

顕微鏡検査結果および潰瘍のひどさの程度は以下の通りであった。

潰瘍の程度を第４図に図式的に示した。

）　概して、対照群と比較した場合、ＧＨＬ−Ｃｕ　（２：ｌ）投与群の動物は 治療の利益を受けていることがわかる。潰瘍が殆どのＧ）ＩＬ−［：ｕ投与ラッ トに存在するが、その程度は軽減されている。顕微鏡観察の時点において、４匹 の動物は確認し得る潰瘍をもたなかった。潰瘍貫入の深さはＧＨＬ−Ｃｕ投与群 において減じられていた。

実施例１０：エタノール誘発胃潰瘍 一連のエタノール誘発胃潰瘍の研究を実施した。潰瘍は９５％エチルアルコール の経口投与により誘発させた（Ｓｃａｎ、　Ｊ、　Ｇａ５ｔｒｏｅｎｔｅｒｏ１ ．、１９８８．２３．　ｐ９．６６５−６７１）。この研究は、グリシル−し− ヒスチジル−し−リジン二Ｃｕの予防並びに治癒効果両者を決定するために行っ た。

るために実施した。１２時間の絶食後、３００〜４００　ｇ　ＳＤフラット群増 大する量のエタノールを胃供給管を介して注入した。以下の用量を使用した。

１、２５　ｍｌ／ｋｇ　（ｎ　＝　３）２．５　ｍｌ／ｋｇ　（ｎ　＝　３） ５．０　ｍｌ／ｋｇ　（ｎ　＝　３） １時間後、これらのラットにベンドパルビタールを過剰投与し、胃を取り出した 。胃粘膜を検査したところ、血管の麿爛を含む多数の大きな表層潰瘍が見られた 。投与群全てに重度の「孔のある（ｐｉｔｔｉｎｇ）　Ｊ型の潰瘍が見られた。

５．０　ｍｌ／ｋｇ投与群は投与層に最も重度の損傷を受け、１．２５　ｌｉｌ ／ｋｇ投与群は最も軽度の損傷を９５％エタノールの投与！Ｌ２．　Ｏｍｌ／ｋ ｇを選び、ラット内に胃潰瘍を誘発させた。

エタノールの摂取前に、３群のラットを以下の如く銭のグリシル−し−ヒスチジ ル−し−リジン：　Ｃｕ（１：１）溶液０．５ｍｌで前処理した。

群１：エタノール投与の２時間前 群２：エタノール投与の４時間前 ２０一 群３：エタノール投与の６時間前 更に、４匹のラットを前処理しない対照として使用した。エタノールの投与１時 間後に、胃を取り出し、上記のように潰瘍の存在について検査した。全ての対照 は上記の用量応答研究で見られたものと同様な潰瘍を、即ち胃壁の血管を含む赤 色の表層潰瘍を有していた。

グリシル−し−ヒスチジル−し−リジン：　（：ｕ（１：１）による前処理は以 下の結果を与えた。

群１：エタノール投与の２時間前の前処理−潰瘍形成の証拠なし。

群２：エタノール投与の４時間前の前処理一対照よりも大幅に良好であるが、小 さな潰瘍が見られた。

群３：エタノール投与の６時間前の前処理一種々の結果を含む。１匹のラットは 対照と殆ど同じように多数の病巣を有していた。１匹のラットは目に見える潰瘍 をもたず、１匹のラットは４時間前の前処理群と同様な小さな潰瘍を有していた 。

対照群の胃、即ち前処理なしの動物群の胃の写真（上の写真）およびエタノール 投与の２時間前にＧＨＬ−Ｃｕで前処理した動物群の胃の写真（下の写真）を第 ５図に示す。

グリシル−し−ヒスチジル−し−リジン：　Ｃｕ（１：１）による前処理は、９ ５％エタノールの投与の２時間前に投与した場合には、胃の潰瘍形成を首尾良く 阻害した。

このような結果は、例えば本発明の化合物でアルコール中毒患者の治療がかかる 対象において一般にみられるアルコール誘発性の胃または十二指腸潰瘍を予防で きることを示している。更に、前処理は血流中に吸収されるアルコールの量を低 減し、その結果として種々のアルコール関連副作用の発生を軽減する可能性があ る。

胃潰瘍の治癒 グリシル−し−ヒスチジル−し−リジン：　Ｃｕ（２：１＞の９５％エタノール により誘発される潰瘍の治癒能力も検討した。この研究において、潰瘍は４　ｍ ｌ／ｋｇの９５％エタノールの投与により誘発させた。次いで、ラットを、（１ ０１ｍｇ／ｍｌおよび０．１　ｍｇ／ｍ１（１日当たりの全投与量はそれぞれ１ ．６　ｍｇ／ｋｇおよび１６　ｍｇ／ｋｇ）の用量のグリシル−し−ヒスチジル −１、−リジン：　Ｃｕ（２：ｌ）の飲料水溶液で治療した。潰瘍形成後７日目 に殺し、その胃を潰瘍の存在について検査した。

以下のランク付けを使用して潰瘍形成の程度を表示した。

０・・・潰瘍形成の徴候なし。

１・・・幾分かの刺激状態あり。

２・・・小さな潰瘍が存在。

３・・・大きな潰瘍が存在。

この検査の結果および咳潰瘍のひどさのランクを以下に示す。

潰瘍の程度を第６図に図式的に示した。

何れの投与量においても、ＧＨＬ−Ｃｕで治療した動物は対照と比較した場合に 該治療の利益を受けた。潰瘍が存在してもＧＨＬ−Ｃｕで治療したラット中には より少ない潰瘍しか存在せず、また既に存在していた潰瘍の程度も軽減された。

動物の大多数が検査の段階では確認し得る潰瘍をもたなかった。

上記のことから、本発明の特定の態様を例示の目的でここに記載してきたが、本 発明の精神並びに範囲を逸脱することなしに種々の改良が可能であると理解すべ きである。従って、本発明は請求の範囲を除き、何等制限されない。

浄書（内容に変更なし） 第２図 投与量（ａｌｌ） ＧＨＬ：Ｃｔｌ　（１：ｌ）の投与量 第３図 浄書（内容に変更なし） 第４図 潰瘍の程度 平成　年　月　日

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. １．以下の化合物： Ｌ−リジル−Ｌ−ヒスチジル−グリシンＬ−リジル−Ｌ−ヒスチジル−グリシン ：Ｃｕ（ＩＩ）Ｌ−リジル−Ｌ−ヒスチジル（１−メチル）−グリシン：Ｃｕ（ ＩＩ）以下の一般式で表されるＬＨＧ−Ｃｕの誘導体：〔Ｌ−リジル−Ｌ−レヒ スチジル−グリシン−ＣＯ−Ｒ〕：Ｃｕ（ＩＩ）ここで、Ｒは炭素原子数１〜１ ８のアルキル基、炭素原子数６〜１２のアリール基、炭素原子数１〜１８のアル コキシ基および炭素原子数６〜１２のアリールオキシ基からなる群から選はれる 基であり、あるいはＲはＬ−プロリル−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ −バリンまたはＬ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンである、および 以下の一般式で表されるＬＨＧ−Ｃｕの誘導体：〔Ｌ−リジル−Ｌ−ヒスチジル −グリシン−ＣＯ−Ｒ〕：Ｃｕ（ＩＩ）ここでＸはグリシル−Ｌ−アラニル、グ リシル−Ｌ−セリルまたはグリシル−Ｌ−バリルであり、Ｒは炭素原子数１〜１ ８のアルキル基、炭素原子数６〜１２のアリール基、炭素原子数１〜１８のアル コキシ基および炭素原子数６〜１２のアリールオキシ基からなる群から選ばれる 基であり、またはＲはしープロリル−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ− バリンまたはＬ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンである、からなる 群から選ばれる化合物を含む活性な治療物質として使用する組成物。
2. ２．温血動物における胃酸の分泌を減じるための医薬の製造に使用する化合物で あって、該化合物が、以下の化合物： Ｌ−リジル−Ｌ−ヒスチジル−グリシンＬ−リジル−Ｌ−ヒスチジル−グリシン ：Ｃｕ（ＩＩ）グリシル−Ｌ−ヒスチジル（１−メチル）−Ｌ−リジン：Ｃｕ（ ＩＩ）レリジル−Ｌ−レヒスチジル（１−メチル）−グリシン：Ｃｕ（ＩＩ）以 下の一般式で表されるＬＨＧ−Ｃｕの誘導体：〔Ｌ−リジル−Ｌ−ヒスチジル− グリシン−ＣＯ−Ｒ〕：Ｃｕ（Ｉｌ）ここで、Ｒは炭素原子数１〜１８のアルキ ル基、炭素原子数６〜１２のアリール基、炭素原子数１〜１８のアルコキシ基お よび炭素原子数６〜１２のアリールオキシ基からなる群から選ばれる基であり、 あるいはＲはし−プロリル−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンま たはしーバリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンである、および以下の一般 式で表されるＬＨＧ−Ｃｕの誘導体：〔Ｘ−Ｌ−ヒスチジル−グリシン−ＣＯ− Ｒ〕：Ｃｕ（ＩＩ）ここでＸはグリシル−Ｌ−アラニル、グリシル−Ｌ−セリル またはグリシル−Ｌ−バリルであり、Ｒは炭素原子数１〜１８のアルキル基、炭 素原子数６〜１２のアリール基、炭素原子数１〜１８のアルコキシ基および炭素 原子数６〜１２のアリールオキシ基からなる群から選はれる基であり、またはＲ はＬ−プロリル−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンまたはＬ−バ リル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンである、からなる群から選ばれる化合 物であることを特徴とする上記化合物。
3. ３．温血動物の胃における細胞保護性の粘液の分泌を増すための医薬の製造に使 用する化合物であって、該化合物が、以下の化合物：Ｌ−リジル−Ｌ−ヒスチジ ル−グリシンＬ−リジル−Ｌ−レヒスチジル−グリシン：Ｃｕ（ＩＩ）グリシル −Ｌ−ヒスチジル（１−メチル）−Ｌ−リジン：Ｃｕ（ＩＩ）Ｌ−リジル−Ｌ− ヒスチジル（１−メチル）−グリシン：Ｃｕ（ＩＩ）以下の一般式で表されるＬ ＨＧ−Ｃｕの誘導体：〔Ｌ−リジル−Ｌ−ヒスチジル−グリシン−ＣＯ−Ｒ〕： Ｃｕ（ＩＩ）ここで、Ｒは炭素原子数１〜１８のアルキル基、炭素原子数６〜１ ２のアリール基、炭素原子数１〜１８のアルコキシ基および炭素原子数６〜１２ のアリールオキシ基からなる群から選ばれる基であり、あるいはＲはＬ−プロリ ル−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンまたはし−バリル−Ｌ−フ ェニルアラニル−Ｌ−バリンである、および以下の一般式で表されるＬＨＧ−Ｃ ｕの誘導体：〔Ｘ−Ｌ−ヒスチジル−グリシン−ＣＯ−Ｒ〕：Ｃｕ（ＩＩ）ここ でＸはグリシル−Ｌ−アラニル、グワシル−Ｌ−セリルまたはグリシル−Ｌ−バ リルであり、Ｒは炭素原子数１〜１８のアルキル基、炭素原子数６〜１２のアリ ール基、炭素原子数１〜１８のアルコキシ基および炭素原子数６〜１２のアリー ルオキシ基からなる群から選ばれる基であり、またはＲはし−プロリル−Ｌ−バ リル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−レバリンまたはし−バリル−Ｌ−フェニルア ラニル−Ｌ−バリンである、からなる群から選ばれる化合物であることを特徴と する上記化合物。
4. ４．温血動物における胃潰瘍の形成を軽減するための医薬の製造に使用する化合 物であって、核化合物が、以下の化合物：Ｌ−リジル−Ｌ−ヒスチジル−グリシ ンＬ−リジル−Ｌ−ヒスチジル−グリシン：Ｃｕ（ＩＩ）グリシル−Ｌ−ヒスチ ジル（１−メチル）−Ｌ−リジン：Ｃｕ（ＩＩ）Ｌ−リジル−Ｌ−ヒスチジル（ １−メチル）−グリシン：Ｃｕ（ＩＩ）以下の一段式で表されるＬＨＧ−Ｃｕの 誘導体：〔Ｌ−リジル−Ｌ−ヒスチジル−グリシン−ＣＯ−Ｒ〕：Ｃｕ（ＩＩ） ここで、Ｒは炭素原子数１〜１８のアルキル基、炭素原子数６〜１２のアリール 基、炭素原子数１〜１８のアルコキシ基および炭素原子数６〜１２のアリールオ キシ基からなる群から選ばれる基であり、あるいはＲはＬ−プロリル−Ｌ−バリ ル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンまたはＬ−バリル−Ｌ−フェニルアラニ ル−Ｌ−バリンである、および以下の一般式で表されるＬＨＧ−Ｃｕの誘導体： 〔Ｘ−Ｌ−ヒスチジル−グリシン−ＣＯ−Ｒ〕：Ｃｕ（ＩＩ）ここでＸはグリシ ル−Ｌ−アラニル、グリシル−Ｌ−セリルまたはグリシル−Ｌ−バリルであり、 Ｒは炭素原子数１〜１８のアルキル基、炭素原子数６〜１２のアリール基、炭素 原子数１〜１８のアルコキシ基および炭素原子数６〜１２のアリールオキシ基か らなる群から選ばれる基であり、またはＲはし−プロリル−Ｌ−バリル−Ｌ−フ ェニルアラニル−Ｌ−バリンまたはし−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バ リンである、からなる群から選はれる化合物であることを特徴とする上記化合物 。
5. ５．温血動物における胃または腸潰瘍を治癒するための医薬の製造に使用する化 合物であって、該化合物が、以下の化合物：グリシル−Ｌ−レヒスチジル−Ｌ− リジングリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リジン：Ｃｕ（ＩＩ）グリシル−Ｌ−ヒ スチジル（１−メチル）−Ｌ−リジン：Ｃｕ（ＩＩ）以下の一段式で表されるＧ ＨＬ−Ｃｕの誘導体：〔グリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リジン−ＣＯ−Ｒ〕： Ｃｕ（ＩＩ）ここで、Ｒは炭素原子数１〜１８のアルキル基、炭素原子数６〜１ ２のアリール基、炭素原子数１〜１８のアルコキシ基および炭素原子数６〜１２ のアリールオキシ基からなる群から選ばれる基であり、あるいはＲはＬ−プロリ ル−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンまたはし−バリル−Ｌ−フ ェニルアラニル−Ｌ−バリンである、および以下の一般式で表されるＧＨＬ−Ｃ ｕの誘導体：〔Ｘ−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リジン−ＣＯ−Ｒ〕：Ｃｕ（ＩＩ）こ こでＸはグリシル−Ｌ−アラニル、グリシル−Ｌ−セリルまたはグリシル−Ｌ− バリルであり、Ｒは炭素原子数１〜１８のアルキル基、炭素原子数６〜１２のア リール基、炭素原子数１〜１８のアルコキシ基および炭素原子数６〜１２のアリ ールオキシ基からなる群から選ばれる基であり、またはＲはレブロリル−Ｌ−バ リル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンまたは−バリル−Ｌ−フェニルアラニ ル−Ｌ−バリンである、からなる群から選ばれる化合物であることを特徴とする 上記化合物。
6. ６．温血動物における胃または腸潰瘍を治癒するための医薬の製造に使用する化 合物であって、核化合物が、以下の化合物：Ｌ−リジル−Ｌ−ヒスチジル−グリ シンＬ−リジル−Ｌ−ヒスチジル−グリシン：Ｃｕ（ＩＩ）Ｌ−リジル−Ｌ−ヒ スチジル（１−メチル）−グリシン：Ｃｕ（ＩＩ）以下の一般式で表されるＬＨ Ｇ−Ｃｕの誘導体：〔Ｌ−リジル−Ｌ−レヒスチジル−グリシン−ＣＯ−Ｒ〕： Ｃｕ（ＩＩ）ここで、Ｒは炭素原子数１〜１８のアルキル基、炭素原子数６〜１ ２のアリール基、炭素原子数１〜１８のアルコキシ基および炭素原子数６〜１２ のアリールオキシ基からなる群から選ばれる基であり、あるいはＲはＬ−プロリ ル−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンまたはＬ−バリル−Ｌ−フ ェニルアラニル−Ｌ−バリンである、および以下の一般式で表されるＬＨＧ−Ｃ ｕの誘導体：〔Ｘ−Ｌ−ヒスチジル−グリシン−ＣＯ−Ｒ〕：Ｃｕ（ＩＩ）ここ でＸはグリシル−Ｌ−アラニル、グリシル−Ｌ−セリルまたはグリシル−Ｌ−バ リルであり、Ｒは炭素原子数１〜１８のアルキル基、炭素原子数６〜１２のアリ ール基、炭素原子数１〜１８のアルコキシ基および炭素原子数６〜１２のアリー ルオキシ基からなる群から選はれる基であり、またはＲはＬ−プロリル−Ｌ−バ リル−Ｌ−フエニルアラニル−Ｌ−バリンまたはＬ−バリル−Ｌ−フェニルアラ ニル−Ｌ−バリンである、からなる群から選ばれる化合物であることを特徴とす る上記化合物。