JPH05500655A - 異化性腸管関連疾患および宿主防衛機構障害の治療用医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 異化性腸管関連疾患および 宿主防衛機構障害の治療法 本発明は、アメリカ合衆国公衆衛生研究所外傷センター助成金第ＧＭ２９３２７ −０５号および合衆国陸軍省契約第ＤＡＭＤ−１７−８１−Ｃ−１２０１から研 究助成金を受けて成されたものであり、本発明については何らかの権利が合衆国 政府に付与される。

、への参照 本出願は、１９８５年９月１２日に出願された出願第７７５、２１４号（現在は 放棄されている）の一部継続出願である出願第９０６，５３０　（出願日：　１ ９８６年９月１２日）の一部継続出願である。

ｌ豆立且１ に二丘１ 本発明は、腸粘膜・膵萎縮、その他の腸管透過性増強に関連する障害を含む異化 性腸管関連疾患、宿主防衛機構障害、および免疫能低下を治療する方法に関する 。さらに、本発明は、骨髄移植患者の回復を促進する方法に関する。

１及１±辺ｌｊ 異化作用（または機能障害）は、解剖学的構造の分解が起る生理学的状態である 。このような状態は骨格筋だけでなく、腸管内層にも影響を及ぼすのが特徴であ る。組織損傷をもたらす異化作用は、手術２敗血症、火傷、癌化学療法、放射線 療法／傷害、または糖質コルチコイド療法に続発することが多（、しばしば不十 分な食物摂取に伴なって発現する。かかる傷害。

疾患、治療は免疫能低下にも繋がることを特徴とする。

例えば骨髄移植を受けた患者では、移植前後の放射線および／または化学療法は 移植片対宿主疾患の頻発と協同して異化性で重篤な栄養傷害を惹起する。このよ うな患者では、口腔・食道粘膜炎、下痢、悪心、嘔吐１ロ腔乾燥症、味覚傷害を 含む多（の要因に起因して中心静脈栄養法（ＴＰＮ）が必要となる（Ｃｕｎｎｉ ｎｈｇａｍら、Ｎｕｒｓ、　Ｃ１１ｎ、　Ｎ、　Ａｍｅｒ、　、１８：５８５− ５９６（１９８３）　；Ｃｈｅｎｅｙら、Ｃａｎｃｅｒ　５９：１５１５−１５ １９（１９８７））。ＴＰＮは骨髄移植患者では必要かつ有益と思われるが、移 植後の最初の１ケ月以内に実施した分枝鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ）に富む特殊処方 の静脈内輸液を用いた治験では、窒素平衡は改善されなかったｆＬｅｎｓｓｅｎ ら、Ｊ、Ｐａｒｅｎｔ、　Ｅｎｔ。

Ｎｕｔｒ、１１：１１２−１１８（１９８７））　。

上記した様々な原因に起因する異化反応、胃腸障害、免疫能低下は、死亡および 身体傷害の主因となる可能性がある。これらの臨床的状態は、非必須アミノ酸で あるグルタミン（ＧＬＮ）の代謝異常と関連することが多い。ＧＬＮは大部分の 組織である程度合成可能である。はとんどのアミノ酸と異なり、ＧＬＮは２つの アミン部分を有する。すなわち、αアミノ基とアミド基である。アミド基を持つ ので、ＧＬＮは体内の末梢組織からアンモニアを除去し、窒素を内蔵器官に運ぶ ことができる。さらに、血中からＧＬＮを除去する組織は炭素骨格をエネルギー 産生に利用することが多い。

グルタミナーゼとグルタミン合成酵素は、ＧＬＮ代謝の調節に関与する２種の主 な酵素である。グルタミナーゼはＧＬＮのグルタミン酸塩とアンモニアへの加水 分解を触媒し、グルタミン合成酵素はグルタミン酸塩とアンモニアからＧＬＮの 合成を触媒する。はとん□どの組織はこれらの酵素を両方とも有するが、特定の 組織によっては一方が他方より活性が高いのが普通である。

ＧＬＮの合成と輸送は主として骨格筋と脳で起こる。

次に、ＧＬＮは線維芽細胞、造血細胞、リンパ球、腸上皮、腫瘍細胞のような増 殖性細胞により消費される。

これらの細胞は、グルタミナーゼ活性が高（、細胞内ＧＬＮ濃度が低いのが特徴 である。この事実は、大きな創傷、感染に伴なう炎症、通常の経腸栄養を妨げる 胃腸障害を持つ患者では臨床的に重要であると思われる。何故なら、これらの状 況下で細胞型が望ましい増殖を示すかいなかは、充分なＧＬＮ濃度が有るかどう かに依存すると思われるからである。

胃腸においてはＧＬＮは呼吸の燃料として用いられる。ＧＬＮの腸内投与は腸粘 膜による内腔ＧＬＮ取込みの増大をもらたし、同時に血中からのＧＬＮ取込みの 低下をもたらす。したがって、腸によるＧＬＮの消費は、これら２つのＧＬＮ供 給源で平衡を保っている。

胃腸によるＧＬＮ取込みのほとんどは、小腸の絨毛を覆っている上皮細胞を経由 して発現する。小腸で起こるＧＬＮ代謝は腸の主要なエネルギー源であり、他の 組織からの窒素と炭素を処理することにより、肝での尿素生成と糖新生のための 前駆物質を産生ずる。

Ｂａ５ｋｅｒｖｉｌｌｅら（Ｂｒｉｔ、　Ｊ、ユｘ　、　Ｐａｔｈｏｌ、旦＝１ ３２（１９８０））は、アカゲザル、マーモセット、家兎、マウスに精製グルタ ミナーゼを注入することにより血漿中ＧＬＮを検出不能な濃度まで低下させ、嘔 吐、下痢、絨毛萎縮、粘膜潰瘍、腸壊死を惹起させた。

Ｍａｒｔｉｎら（米国特許第２，２８３，８１７号）は、食事補助剤でな（、解 毒剤として用いられるＧＬＮ含有組成物を開示している。この特許においては、 ＧＬＮが他のアミノ酸と相乗作用を期待して組み合わされ、毒素に直接作用して 有害作用を阻害する。

５ｈｉｖｅら（米国特許第２，８６８，６９３号）では、消化性潰瘍治療用のＧ ＬＮ含有組成物が開示されている。

ＧＬＮの保護作用についての証拠は、さらに０ｋａｂｅら、肚江旦亘二里とと二 、陳：６６（１９７５）にも見られる。０ｋａｂｅらは、ＧＬＮが人のアスピリ ン誘発胃潰瘍を予防することを認めている。これらの作用は、ＧＬＮをチューブ により腸に投与して胃粘膜とＧＬＮとの直接の接触を防いだ場合には認められな かった。この知見は、胃潰瘍に対するＧＬＮへの作用は局所的であり、全身での 栄養状態の改善に伴なうものではなかったことを示している。

非必須アミノ酸であるＧＬＮは標準的な非経口栄養溶液中には存在しないが、小 腸にとっては好ましい酸化燃料であり（Ｗｉｎｄｍｅｕｌｌｅｒ、　Ｈ，Ｇ、、 　Ａｄｖ、　Ｅｎｚ　ｍｌ、　５３＋２０１、−２３７　（１９８２）　）、静 脈内（ｉ、ｖ、）に投与された唱歯類動物の腸粘膜に対しては滋養作用を有する （Ｈｗａｎｇ、　Ｔ、Ｌ。

ら、Ｓｕｒ　１ｃａｌ　Ｆｏｒｕｍ　３７：５Ｂ−５８（１９８６）　；　Ｏｏ Ｄｗｙｅｒ。

Ｓ、　Ｔ、ら、Ｃｌ１ｎ、　Ｒｅｓ、　３５＋３６９Ａ（１９８７）：ｌ　、こ の内臓でのＧＬＮの必要性は、ノ」＼腸によるＧＬＮ代謝が増大することが知ら れている（Ｓｏｕｂａら、堕と」旦二り工９４　（２）　：　３４２（１９８３ ）　）決定的な疾患では、一層大きいと思われる。

ＧＬＮは膵臓により速やかに消費されることが判っており、腺の外分泌部に集中 するようであるが（Ｃａｓｓａｎｏ。

Ｇ、　Ｂ、ら、ユし一違匹二鱈上シＩユｊ１１２：８５１−８５５（１９６５） ）　、無損傷の動物の膵臓外分泌部に対する投与したＧＬＮの影響はまだ報告さ れていない。

現在では、十分に摂食できない患者に必要な栄養は経腸または非経口食の投与で 得られる。経腸食は通常、鼻腔を経て胃または十二指腸領域に挿入するか、また は例えば胃癲造設術や空腸１造設術におけるように外科的に植込んだ小口腔のチ ューブを用いて与えられる。現在利用可能な腸栄養処方は４種類に区分できる。

すなわち、成分アミノ酸、ポリマーアミノ酸、モジュラ−アミノ酸、変質アミノ 酸である。これらの処方にはＧＬＮが含有されている。しかしながら、これらの 腸栄養食中の栄養分の含量は一般的に健常人の必要栄養に基づいており、異化性 疾患患者の必要栄養には基づいていない。

成分処方は最低限の消化作用を必要とし、主として小さいペプチドおよび／また はアミノ酸、ブドウ糖オリゴ糖類、植物油または中鎖脂肪から成る。

ポリマー処方では、例えば大豆蛋白、ラクトアルブミン、カゼインのような複合 栄養素が蛋白源として、アルドデキストリンやコーンシロップ固形物が炭水化物 源として、植物油や乳脂肪が脂肪源として用いられている。

モジュール食は、蛋白、炭水化物または脂肪をモノマーあるいはポリマー処方と 組み合わせることにより調製でき、特殊な栄養要求に応えることができる。

変質アミノ酸組成物から成る処方は主として、窒素代謝の遺伝的欠陥や窒素蓄積 の後天的傷害を持つ患者に使用される。この目的は、有害と思われるある種のア ミノ酸の取込みを制限することが多い。

非経口食は普通静脈内投与（ｉ、　ｖ、　）される。これらの静注液は、容易に 同化できる糖類、アミノ酸、電解質のような単純物質から成る無菌溶液である。

“中心静脈栄養法”（ＴＰＮ）という用語は、総ての必要栄養量を静脈経路から 得る患者に用いられる処方を表わす。ＴＰＮ用の処方は経腸栄養処分と異なり、 通常はＧＬＮを含有しない。非経口処方にＧＬＮが存在しない理由は、室温でそ れが不安定であること、アンモニアとピログルタミン酸が投与後に生成されるこ と、についての懸念にもある。ＧＬＮからのグルタミン酸生成についても懸念が あった。その理由は、グルタミン酸が神経伝達物質として毒性を有する可能性が あるからである。実際には、経腸および非経口栄養溶液のｐＨ値では、それらの 懸念に充分な理由があるとは考えられない。

ＴＰＮは絨毛萎縮をもたらすが、この現象は一般には経口による摂食に戻れば正 常化する。ＴＰＮ処方はＧＬＮを欠いているので、このアミノ酸に対する体内の 要求は体内組織の合成経路により満たされなければならない。

臨界的な疾患の患者では、正味の蛋白異化は著明な筋ＧＬＮ貯蔵の減少、血漿中 ＧＬＮの低下（Ａｓｋａｎａｚｉら、Ａｎｎ、Ｓｕｒ　、１９２ニアｇ（１９８ ０）　ＨＡｓｋａｎａｚｉら、Ａｎｎ。

銃ゴユユ狙：４６５（１９８０））　、そして腸ＧＬＮ利用率の増大（Ｓｏｕｂ ａら、Ａｒｃｈ、Ｓｕｒ　、１２０：６６（１９８５）　；　５ｏｕｂａ　ら、 江坦肛ム」お旦：　３４２　（１９８３）　）と関係がある。糖質コルチコイド も小腸によるＧＬＮ消費を増大することが知られている（Ｓｏｕｂａら、Ｓｕｒ 　１ｃａｌ　Ｆｏｒｕｍ、　３４ニア４（１９８３））。

ＴＰＮは、胃腸粘膜萎縮に加え膵臓重量減少と膵外分泌低下と関係がある（Ｈｕ ｇｈｅｓ、　Ｃ，Ａ、ら、Ｃｌ１ｎ。

５ｃｉｅｎｃｅ　５９：３２９−３３６（１９８０）　；　Ｊｏｈｎｓｏｎ、　 Ｌ、Ｒ，ら、Ｇａ５ｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏ　６８：１１７７−１１８３（１９ ７５）　；　Ｊｏｈｎｓｏｎ。

Ｌ、Ｒ，ら、Ａｍ、　Ｊ、　Ｐｈ　５ｉｏ１．２３３：Ｅ５２４−Ｅ５２９（１ ９７７）　；Ｔｏｗｎｅ、　Ｊ、Ｂ、ら、Ａｍ、　Ｊ、　Ｓｕｒ　、　１２６： ７１４−７１６（１９７３））発育を維持するのに充分な静脈内栄養を与えられ た動物は、飢餓中に起こる程度の膵臓萎縮を起こす（Ｊｏｈｎｓｏｎ、　Ｌ、Ｒ ，ら、（１９７５）、上記参照）。膵萎縮の病態はあまり分かっておらず、通常 は経口栄養摂取に伴なう次のような各種要因に続発するものと思われる。すなわ ち、（１）内腔基室の不在（Ｃ１ａｒｋ、　Ｒ，Ｍ、。

Ｃ１１ｎ、　Ｓｃｉ、　５０：１３９（１９７６））　；　（２）食餌中アミン の欠除（Ｓｅｉｄｅｌ、　Ｅ、Ｒ，ら、Ａｍ、　Ｊ、　Ｐｈ　５ｉｏ１．２４９ ：Ｇ４３４−４３８（１９８５））　；　（３）発酵静線維の不在（Ｊａｃｏｂ ｓ、　Ｌ、Ｒ，ら、Ａｍ、　Ｊ、　Ｐｈ　５ｉｏ１．２４６：Ｇ３７８−Ｇ３８ ５（１９８４））　；　（４）神経液性過程の変化（Ｊｏｈｎｓｏｎ、　Ｌ、Ｒ ，、Ｐｈ　５ｉｏｌｏ　ｏｆ　ｔｈｅＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　Ｔｒ ａｃｔ、２ｄ　Ｅｄ、、ｐｐ、３０１−３１９゜Ｒａｖｅｎ　Ｐｒｅｓｓ、罫（ １９８７））　；または（５）膵胆汁分泌の変化（Ｆｉｎｅ、　Ｈ，ら、Ａｍ、 　Ｊ、　Ｐｈ　５ｉｏ１．２４５：Ｇ３５８−Ｇ３６３（１９８３）　）。以上 の要因に加え、またはそれらに起因せず、膵萎縮は現在利用されている非経口栄 養溶液中に特定の栄養素が無いことから影響を受けると思われる（Ｗｉｌｍｏｒ ｅ、　Ｗ、Ｗ、ら、ｍ旦旦５）　：９１７−９２３（１９８８）　）。

骨格筋の衰弱、腸絨毛・膵臓の萎縮、透過性亢進をもたらす腸壁の衰弱、免疫能 低下、またはＴＰＮ下に発現するその他の異化機能不全は、高濃度はＧＬＮの投 与により防止できることを示した従来の研究はない。

免豆旦Ｉ上 本発明においては、腸粘膜・膵臓萎縮を含む異化性腸管関連疾患（異化機能不全 ）、腸透過性光道、宿主防衛能傷害、免疫能低下（各々癌放射線療法・化学療法 または静脈内栄養法に関連する）を示すか、示す危険のある動物、または骨髄移 植下の動物に治療有効量のＧＬＮが投与される。このＧＬＮ量は健常人の食事に 通常存在している量より多い。この増加量のＧＬＮは、ある種の異化機能不全で 必要とされる多量のＧＬＮを補うのに必要である。外からの供給源が無い場合、 ＧＬＮは上記の異化傷害下の筋組織の分解により得られると思われる。異化機能 不全下で筋肉からのＧＬＮ放出が光道するにも拘らず血漿中ＧＬＮ濃度が低下す るのは、全身性のＧＬＮ欠乏があることを示している。筋肉からのＧＬＮ放出の 光道にも拘らず、腸粘膜細胞の需要は供給を上回っている。このため、腸絨毛萎 縮と腸壁関門の分解が起きやす（なる。この関門の喪失は、腸管関連組織や他の リンパ様組織における免疫能低下と共に感染の重量な素因となる。腸損傷に加え 、膵萎縮は同様の状況下でも発症する。

したがって、本発明は、動物における腸粘膜・膵萎縮を含む異化性腸管関連疾患 、腸透過性光道、宿主防衛能傷害、免疫能低下を治療し、骨髄移植からの回復を 促進する方法を提供する。水洗は、上記動物に治療有効量のＧＬＮまたはＧＬＮ の機能性同族体を投与することから成る。

ストレスを受けている患者に外因性ＧＬＮを与えると、小腸の代謝要求と免疫系 が一層良好に支持され、全身的な蛋白異化の速度が低下する。骨髄移植を受けた 患者へのＧＬＮ投与は、放射線／化学療法、移植片対宿主疾患、およびＴＰＮに 引続く胃腸障害や免疫能低下を改善するのに特に有益である。炎症性腸疾患の患 者へのＧＬＮ投与も有益である。

炎症性腸疾患における糖質コルチコイドの治療効果は、その抗炎症作用だけでな く、腸を覆う腸細胞内部での基質代謝を増大する作用にも関連がある。腸細胞に 対し一層多量の基質を供給することによる外因性ＧＬＮの投与はまた、血漿およ び骨格筋のＧＬＮ欠乏を予防することにも貢献する。同様に、ＧＬＮは腸未熟の 幼時における移植小腸の生着を促進するか、腸代謝を補助すると思われる。

［Ｌ尖五互 第１図は、窒素取込みの関数としての窒素平衡をプロットした図である。

第２図は、動脈血中の総分鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ）濃度をＢＣＡＡ投与速度と比 較した実施例５のデータのグラフを示す。データは平均値±ＳＥＭを示す。生理 食塩水を投与した動物でのデータは含まれていない。

第３図は、ＢＣＡＡ流出（後四分体）とＢＣＡＡ注入との関係を示す実施例５の データのグラフを示す。

第４図は、術後６時間目のＢＣＡＡ流出（後四分体）と動脈血中ＢＣＡＡ濃度の 増加を比較した実施例５のデータのグラフを示す。

第５図は、術後６時間目の窒素流出（後四分体）とＢＣＡＡ流出（後四分体）を 比較した実施例５のデータのグラフを示す。

第６図は、術後６時間目の窒素流出（後四分体）と術後２４時間目に測定した筋 細胞内アミノ酸窒素の変化を比較した実施例５のデータのグラフを示す。

第７図は、同種骨髄移植後の累積窒素平衡に対する高用量ＧＬＮ−ＴＰＮの影響 を証明するデータのグラフを示す。

（以下余白） 々゛　な　態　の　単なテロ 本発明者らは、腸粘膜・膵萎縮を含む異化性腸管関連疾患（異化機能不全）、腸 透過性光道、宿主防衛機構傷害、免疫能低下を治療する新規な方法を考案した。

本発明は、上記の疾患のいずれかに罹患しているか、それを発症する可能性のあ る動物に治療有効量のＧ　Ｌ　Ｎまたはその機能性同族体を投与することから成 る。この治療有効量は、通常の食事に含まれている量より大きい。ヒトでの通常 の食事からの取込み量は、はぼ２〜４ｇ／日である。

異化機能不全は、解ｇｌ学的構造の分解が起こる正味の異化反応を惹起する状態 である。ＧＬＮの食餌による投与により、身体がＧＬＮを合成する必要がないか 、骨格筋の分解によりＧＬＮを得る必要がないように、異化異常下での生化学的 必要量を満たすようである、本発明は、ＧＬＮの必要性が増大している全ての異 化機能不全に用いることを意図している。このような異化機能不全は、消化管の 臓器や細胞、または他の細胞や臓器系と関連がある可能性がある。非経口食投与 中の小腸絨毛の萎縮は通常は、腸細胞に対する直接的な異化作用に起因して発現 するのではな（、むしろ患者の食事中にＧＬＮが欠けていることに起因する。

“経腸°°とは、胃と肛門の間の消化管の部分に栄養を投与する方法を指す。

“非経口゛とは、消化管外の領域に栄養分を投与する方法を宿す。

ＧＬＮ要求の増大を示す非経口的異化機能不全は、敗血症を含む多（の臨床的異 常、術中・術後、火傷、カワり一欠乏、制御不能の糖尿病において発現する。

本発明が有効な動物は通常、人を含む哨乳類に分類される動物である。

゛病的腸透過性”とは、病的状態に伴なう腸壁透過性の亢進を指す。例えば胃に 導入したラクツロースの吸収や尿中排泄等の各種手段により検出できるそのよう な腸透過性は、癌化学療法剤の投与、　ＴＰＮ　、その他の損傷や病的状態と関 係がある。

°゛治療とは、病的状態を構成する症状または症候群の予防５改善または治療を 意味する。

゛膵臓萎縮”とは、膵臓組織または膵臓機能の喪失を指す。

゛°免疫能低下”とは、免疫学的機能の減弱を指し、これは試験管内（ｉｎ　ｖ ｉｔｒｏ）か生体内（ｉｎ　ｖｉｖｏ）で測定できる。このような機能には、光 源または分裂刺激物質に応答したリンパ球増殖、抗体反応、細胞性免疫反応（遅 発性過敏性反応等）が含まれるが、これらには限定されない。免疫能低下の様々 な形態（この用語で意図されたもの全て）は、病原性微生物のような種々の病原 体に対する宿主防衛機能の低下をもたらす恐れがある。免疫能低下は化学療法剤 による治療から派生する良く知られた結果であり、ある形態の物理的外傷、火傷 、栄養不良、糖尿病、その他の病的状態から起こる結果でもある。

“宿主防衛機構障害”とは、細菌、ウィルス、真菌な含む（但し、これらに限定 されない）各種病原微生物による感染に対する感受性の増大を表わす。このよう な障害は腸壁関門の衰弱から発現し、通常は病原体が粘膜関門を経由し腸内腔か ら進入するのを防ぐことを可能にする。そのような障害は免疫能低下から起こる と思われる（この低下状態では、免疫系の細胞が有する病原体の抗原構造に応答 する能力が抑制される）。宿主防衛機構障害は、他の細胞が有する機能の異常（ 白血球遊走能、食作用、細菌作用等の低下、マクロファージ機能の変質、その他 の先天的宿主抵抗機能の異常−これらは従来良く知られている）にも由来する（ Ｍｉｍｓ、　Ｃ，Ａ、、　Ｔｈｅ　Ｐａｔｈｏ　ｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　Ｉｎｆｅ ｃｔｉｏｎｓＤｉｓｅａｓｅｓ　（２ｎｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）、　１９ｇ２．　 Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ。

Ｎ、Ｙ、；参考のために記載した）。

様々な細胞型の生存または増殖のために組織培養の培地中にＧＬＮが必要である ことは、従来から良く知られている（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、、　ＣＵＬＴＵＲＥ　 ＯＦ　ＡＮＩＭＡＬ　ＣＥＬＬＳ、　ＡＭａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｂａ５ｉｃ　Ｔｅ ｃｈｎｉ　ｕｅ、　Ａｌａｎ　Ｒ，Ｌｉ５ｓ、　Ｉｎｃ、。

Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９８３）　、参考のため記載）。例えば、節ｖｉｔｒｏ でのリンパ球増殖と分化は：１地中の高濃度のＧＬＮに大いに依存していること が良く知られている。

例えばＧＬＮが添加されていないＴＰＮ実施後において、ｉｎ　ｖｉｖｏでのＧ ＬＮ欠乏は、リンパ球機能抑制をもたらすことが示され得る。この機能喪失は、 ＴＰＮ処方へのＧＬＮ添加により一部防止されるか、一部回復される。

本発明の方法が有効な機能不全または症状に適用される“実質的に関係する”と いう用語は、機能不全中・不全後に生化学的なＧＬＮ要求が起こるような場合を 指す。

ＧＬＮの投与は経腸と非経口の両方法により行うことができる。

ＧＬＮの経腸投与法の具体例は、経鼻的に胃または十二指腸領域に挿入するか、 または胃痩造設術や空腸痩造設術のような場合に外科的に植込んだ小径のチュー ブの使用である。

非経口投与法の具体例は、皮下、部内内または静脈内注射、および鼻咽頭、粘膜 または経皮吸収を含むが、これらには限定されない。はとんどの症例ではＧＬＮ は静脈内投与される。静脈内投与では、液状の治療有効量のＧＬＮを容器から直 接投与する。すなわち、容器からチューブが伸びており、これが注射針に接続さ れ、この注射針が患者の大静脈に刺入されるのである。

どの投与経路を用いるにせよ、ＧＬＮは単独または食事補助剤として投与できる 。食事補助剤として用いられる場合、患者に投与する前にＧＬＮを既存の経腸ま たは非経口食と混合できる。ＧＬＮを食餌の他の成分と直接混合せずに投与する ことも可能である。例えば、ＧＬＮを主な静注用ビンに直接添加せず、ピギーバ ックビンを用いた通常の容器に添加するような静注法である。

ＧＬＮの機能性類縁体、誘導体、置換体、異性体、同族体等のＧＬＮの特性を有 するものは、ＧＬＮと同等と考えられる。好適なのは、アミノ基を供与でき、ク レブス回路で代謝可能な類縁体である。最も好適なのは、炭素鎖の一末端にアミ ノ酸残基を、他の末端にアミン部分を持つ化合物である。

ＧＬＮ投与の治療有効容量範囲は、代謝のホメオスタシスを維持するために体内 組織の異化または萎縮を防止するのに充分な量である。経腸食では、ＧＬＮは０ ．３ｇ／体重ｋｇ／日以上で投与されるであろう。このような投与速度は、０． ３〜２．０ｇ、好ましくは０．３〜１．５ｇ、より好ましくは０．４〜１．ｏｇ ／体重ｋｇ／日にできるであろう。静脈内投与時のＧＬＮ投与速度は０．１ｇ／ 体重ｋｇ／日以上であろう。すなわち、０．２〜３．０、好ましくは０．３〜２ ．５、より好ましくは０．４〜２．０ｇ／体重ｋｇ／日であろう。

本発明の方法によれば、ＧＬＮは、単に既存の食餌処方を適切な濃度のＧＬＮを 含有するように変えることにより投与できると思われる。最も好適には、ＧＬＮ を無菌の乾燥凍結粉末のような乾燥形状にしておき、投与時に無菌的に水に溶解 した後に食餌組成物の他の成分と適切な濃度で混合させる。あるいは、ＧＬＮを 乾燥処方物の他の成分と予備混合し、投与時に無菌的に水に溶解するか；または 凍結乾燥濃縮界として保存しておき、これを使用的に溶解し、適当な濃度で混合 する。

本発明に従う方法によるＧＬＮの使用は、理想的には組成物の調製に適している 。これらの組成物はＧＬＮ　。

ＧＬＮ含有ジペプチド、　ＧＬＮ塩から成り、これらの成分を単独、または他の 化学物質と混合して用いればよい。このその他の化学物質とは、薬学的に許容で きる担体や、他の食餌の有効成分（例えば遊離アミノ酸。

蛋白水和物、またはオイル）でよい。

非経口的投与用の薬剤は、無菌の水性または非水性溶液、懸濁液、乳濁液を含む 。担体または密封包帯は皮膚透過性を増大し、皮膚からの吸収を高めるのに使用 できる。

本発明はさらに、本発明の成分から成る薬剤または医薬組成物にも関する。この 薬剤は、異化機能不全。

腸管関連疾患（腸粘膜・膵萎縮を含む）、腸透過性光進、宿主防衛機構障害、免 疫能低下を治療し、骨髄移植からの回復を促進するのに用いられる。

本発明は、異化機能不全を予防または改善するＧＬＮに富む組成物にも関する。

ＧＬＮに富む組成物は、治療に有効であり通常食中の量より多い濃度のＧＬＮを 含有する。

本発明の組成物を入れる容器は、本発明の方法に従うＧＬＮの投与を容易にする ために用いることができる。これらの容器は、例えば患者に投与されるＧＬＮの 日用量を入れるように考えられている。

Ｇ　Ｌ　Ｎ単独で、または他のアミノ酸と併用して静注するのに適した容器は特 に有用である。このような容器は、液状のＧＬＮ含有組成物の容器と、注射針に 接続できる液体輸送手段から成る。

液体輸送手段は、容器中の液状組成物をプラスチックチューブのような注射針に 輸送できるものなら何でもよい。

上記輸送手段に接続された注射針は、直接患者の血管または静注用カテーテルに 刺入できるが、または患者に投与する前に他の溶液と混合できるよう輸注ビンに 刺入できる。

上述の開示は一般的に本発明を説明したものである。本発明をより完全に理解す るには、以下の特定の実施例を参照されたい。但し、これらの実施例は単に例示 のために設Ｇづられたものであり、特記しない限り本発明に限定を加えるための ものではない。

実」Ｅ例」２ の　テ　と 体重２０から４０ｋｇの２２匹の雑種犬を農場から手に入ゎた。その農場では雑 種犬を規則的に運動させ、そして寄生虫（ｐａｒａｓｉｔｅｓ）の有無をスクリ ーニングしてあった。すべての雌犬は妊娠してぃなかった。一方犬舎においては 、これらの動物なバーバート医学校の動物に関する委員会および実験動物資源研 究所の実験動物の世話と利用に関するガイドライン、国立研究評議会（ＤＨＥＷ 発行、＃ＮＩＨ７ｇ−２３，１９７８年改討）のガイドラインに従って飼養した 。これらの動物は２４時間光が照射され、２０℃の一定温度の個別の犬舎に飼っ た。これらの動物を毎朝２時間運動させ、任意量（ａｄ　ｌｉｂｉｔｕｍ）の水 を与え、モして（蛋白質を少なくとも２５％、脂肪ｌＯ％、かつ残りのカロリー 源は炭水化物として含む）アラグラエイ・レスボンド（Ａｇｗａｙ　Ｒｅ５ｐｏ ｎｄＪ２０００　ドライ・ドッグ・チャウ（Ｄｒｙ　Ｄｏｇ　Ｃｈａｗ：登録商 標）を食料として午後１時から３時の間に与えた。５日から７日間、犬小屋の状 態に順応させて、この期間内においてこれらの動物をパブロフ台（Ｐａｖｌｏｖ 　５ｔａｎｄ）に静かに休むように訓練した。基礎サンプルを入手する前日の午 後５時にすべての食物を犬小屋から除去した。−晩食物を断った後、犬を少なく とも２０分間歩かせパブロフ台に乗せ、前肢静脈にカニユーレを挿入した。犬を 少な（とも２０分間パブロフ台で休ませた後、静脈血サンプルをアミノ酸の定量 のために採取した。チオベンタール・ナトリウム（アボット研究所（Ａｂｂｏｔ ｔＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）　、５ｍｇ／ｋｇ体重）の静脈注射を用いて麻酔 を急速に誘発させた後、外側広部の生検を、ベルゲストローム（Ｂｅｒｇｓｔｒ ｏｍ）　ら、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＡｐｐｌｉｅｄＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、　 ｖｏｌ、３６　：ｐｐ６９３〜６９７（１９７４）の方法によって得た。その後 、この動物を台から下引し５＋＋ｌ動脈血サンプルを、経皮的穿刺（ｐｅｒｃｕ ｔａｎｅｏｕｓｐｕｎｃｔｕｒｅ）により大腿動脈から採取した。

標準的手術手順の前に、この動物を最低２日間かけて生検から回復させた。外科 手術の前の日に、再びすべての食餅を午後５時に犬小屋から取り除いた。午後７ 時に、犬を２０分間歩かせ手術室に運び、そこでベンドパルビタール・ナトリウ ム（アボット研究所、３０ｍｇ／ｋｇ体重）を静脈内に注射して麻酔をかけた。

気管内チューブを置いて、犬に酸素および部屋の空気との混合物を自発呼吸させ た。この犬を仰臥位の手術台上に置いてカニューラを経皮的穿刺によって外頚静 脈に入れ、上大静脈内に注入した。開始時間を記録した後、注入液を４ｍｊ２　 ／ｈｒ／ｋｇの一定の注入量（ＩＭＥＤポンプ（登録商標）、カルフォルニア州 すンディエゴ市でこのカニューラを介して投入した。ペニシリンＧ（Ｅ、Ｒスク ウィップ（Ｓｑｕｉ、ｂｂ）、プリンストン、ＮＹ；　６００ｍｇＪとケフリン （登録商標）（イーライ・リリイー（ＥｌｉＬｉｌｌｙ）、インディアナポリス 、　ＩＮ；　Ｉｇｒａｍ）を静脈内に注入した。膀胱にカテーテルを挿入し、初 期の尿サンプルを捨て、カテーテルを２４時間採取できうように密閉尿バックに 接続した。この犬の腹部と横腹の毛をそり、皮膚を石鹸と水とで洗浄し、ポビド ンヨウ素ブレツブ（ｐｒｅｐ）溶液（クリニパッド（Ｃ１ｉｎｉ、ｐａｄ）　Ｃ ｏｒｐ、。

ギルフォード（Ｇｕｉｌｆｏｒｄ）、　ＣＴ）を用いて支度を整えた。この犬を 滅菌シートで覆って、腹腔を雌の場合垂直１１Ｌｔ下切開し、雄の場合、右正中 傍（ｐａｒａｍｅｄｉａｌ）切開した。腸を上腹部の方へ後退させ、露出した腹 膜後膣を切開した。右の探信の弓状湾曲腸骨動脈および静脈と中央仙骨動脈を鋭 （切開して分離した。シラスティック（ｓｉｌａｓｔｉｃ）で被覆して２．８ｍ ｍ０Ｄボ１ノエチレン・カテーテルに接続したポリエチレン管（２，０８ｍｍ０ Ｄ）の６ｃｍの断片からなる特別に調整したカテーテルを、右の探信の弓状湾曲 腸骨動脈を介して大動脈に頭蓋から６ｃｍ挿入した。先端が大動脈分岐に１ｃｍ 近位にあるが、下腸間膜動脈の遠位に位置する中間仙骨動脈を介して大動脈に同 様のカテーテルを、頭蓋から挿入した。第３番目のカテーテルを、右探信にあっ て腎静脈の遠位に位置する弓状湾曲腸骨静脈を介して、挿入した。すべてのカテ ーテルを、動かないようにして横腹の刺傷を介して体外に取り出した。その後、 腹部をふさぎこの動物を左側に向きを変えた。外側のカテーテルを適宜な長さに 切断し、間欠性注射ボート（ｐｏｒｔｓ）　（ジエルコ（Ｊｅｌｃｏ：登録商標 ）、クリチコン（Ｃｒｉｔｉｋｏｎ１社、タンパ（Ｔａｍｐａ）　ＦＬ）に接続 された鋭い注射針でプラグをして、食塩水を用いて洗い流して、ヘパリン（１， ０００ユニット／ｍｊ２）で満たし皮下に外側のカテーテルを埋め込んだ。注射 ボート（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｐｏｒｔｓ）は、この動物の横腹上に高（、皮膚下 で骨を柱の近傍に位置している。これにより、カテーテルの注射ボート（ｉｎｊ ｅｃｔｉｏｎ　ｐｏｒｔｓ）の経皮穿刺によって大動脈および大静脈への接近を 容易にした。ケフリン（Ｋｅｆｌｉｎ：登録商標、１グラム）を、静脈カテーテ ルを介して手術後８時間後と２４時間後に２回さらに投与した。

手術手順に続いて、この動物を横たえ、麻酔からの回復の間中、熱ランプと毛布 で体温を維持した。注入を開始して後約５時間経てから、この動物をパブロフ台 に置いて、ｐ−アミノ馬尿酸溶液（ＰＡＨ１食塩中０．５％ｗ／ｖ）を、バーバ ート・ポンプ（Ｈａｒｖａｒｄ　ｐｕｍｐ）を用いて０．７６ｍ　ｊ２／分の速 度で、医用仙骨動脈カテーテルを介して遠位大動脈中に注入した。色素を注入し てから４０分後、同時に動脈サンプルおよび静脈サンプルを、アミノ酸濃度およ びＰＡＨ濃度の測定のために採取した。

３組のサンプルを２０分の期間にわたって１０分間隔で吸い出した。その後、カ テーテルを水で洗浄し、ヘパリンで満たして、この動物をパブロフ吊り包帯にく るんだ。実験開始後２３時間を経てから、後回分体流出（ｈｉｎｄｑｕａｒｔｅ ｒ　ｆｌｕｘ）実験を繰り返した。２４時間後、尿の採取を止めた。この動物は 静脈経由でにチオベンタール・ナトリウムを前記のように投与されて、前に生検 しなかった足の外側広部の生検を行った。静脈内注入をやめて、この動物を続＜ ２４時間代謝ケージの中に入れた。同ケージでは、この動物に任意量の水を与え たが、食物は与えなかった。

友１五ユ ニ天裁 すべての動物に４ｍρ／ｈｒ／ｋｇの速度で注入した。５匹の対照動物を０．９ ％の食塩水に入れた。他の動物は、約０．３１２　（Ｎ＝、２）または０．６２ ４　（Ｎ＝６）グラムの窒素／２４ｈｒ／ｋｇ体重を与えるように予定した２つ の異なった濃度の市販アミノ酸溶液（フレアミン（ＦｒｅＡｍｉｎｅ　ｍ（登録 商標）、アメリカン・マツフグロウ（ＡｍｅｒｉｃａｎＭｃｇｒａｗ）　）を与 えた。高投与量は４グラム当量の蛋白質／２４ｈｒ／ｋｇ体重を与えるような意 図で行った。３匹の動物を０．３１２グラムの窒素／２４ｈｒ／ｋｇにあるＧＬ Ｎを含有する溶液に入れた。最後の群（Ｎ＝６）は、ＧＬＮとフレアミンの等量 混合物に入れ、窒素として０．６２４グラム／２４ｈｒ／ｋｇ与えた。ＧＬＮ溶 液を、蒸留水中でＬ−ＧＬＮ　（シグマ（Ｓｉｇｍａ）　、セント・ルイス、Ｍ Ｏ）によって溶解し、０、１５７モル溶液を調整し、その後、水酸化ナトリウム でｐＨ＝６．８に調整した。この溶液を０．２２μＭの膜を通して濾過によって 滅菌し、４℃で２４時間未満貯蔵した。利用する際の朝に、これらの溶液を、２ リツトル・バッグ中で必要とする濃度で配合し、使用するまで４℃に維持した。

注入の最後にそれぞれのバッグから１０ｍｊ２の溶液を取り出して、窒素含有量 の分析のために一２０℃で貯蔵した。さらに１０ｍβのサンプルを、前記のよう にｐＨ＝　４．７５に調整して、ＧＬＮ含有量の分析のために冷凍貯蔵した。

見立型ユ サンプルの＝　と 全ての血サンプルと血漿サンプルを水冷１０％（ｗ／ｖ）過塩素酸の等体積を配 合することによって脱蛋白し、その後、２０分間４０℃において３．０００ｒｐ ｍで遠心分離した。上澄み液のアリコート（ａｌｉｑｕｏｔ）　２＋ｎｊ２を、 ０．２Ｍの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝　４．９０）を用いて緩衝して、５Ｎ の水酸化ナトリウムを用いてｐＨ＝　４．７５〜４．９０に調整し、蒸留水で最 終的な体積を４ｍｇにした。これらのサンプルを、ルンド（Ｌｕｎｄ）　（ベル グマイヤ（Ｂｅｒｇｍｅｙｅｒ）　ｍ集、Ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍａｔ ｉｃ　Ａｎａｌｙｓｉｓ。

第４巻、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　１９７４．　ｐｐ、１７１９〜１ ７２２）の方法を変形した酵素ミクロ蛍光分析を用いてＧＬＮ濃度およびグルタ ミン酸塩濃度を後でバッチ分析するために一２０℃に貯蔵した。

筋肉生検手順の間、組織を除去した時、ストップ・ウォッチをすぐに始動させた 。脂肪と結合組織のない筋肉を切り裂いて、２片の不等量部分に分けた。

両者のサンプルの重量を、その後の２分間にわたって少なくとも４回計り、生検 に続く重量と時間とを記録した。実際の時間ゼロにおける筋肉の湿重量（ｗｅｔ ｗｅｉｇｈｔ）を、時間に対してプロットした重量の最適直線回帰推定から計算 した。小さなサンプル（約１５ｍｇ）を９０℃のオーブンにおいて恒量に乾燥し て、乾燥した脂肪のない固形物の重量を、石油エーテル中で抽出後採取した。そ の後、このサンプルを２５０μ℃のＩＮ硝酸中に温浸し、塩素含有量を半自動式 滴定器（ラジオメータ（Ｒａｄｉｏｍｅｔｅｒ）、コペンハーゲン）を用い硝酸 銀で測定した。血漿の塩素もまた定量し、細胞内水および細胞外水を、同上のベ ルブマンの方法を用いて計算した。第２番目の筋肉サンプル（約１００ｍｇ）を 、ポリトロン（Ｐｏｌｙｔｒｏｎ）ホモシネ−ター（ブリンクマン（Ｂｒｉｎｋ ｍａｎ）、ウェストベリ（Ｗｅｓｔｂｕｒｙ）、ＮＹ）を用いて、氷冷した０゜ ５ｎｌの過塩素酸（１０％ｗ／ｖ）でホモジネートした。このホモジネートを遠 心分離して、上澄み液を酵素性ＧＬＮおよびグルタミン酸塩の分析のために調整 した。

本実験の始めに、血漿濃度と細胞内ＧＬＮ濃度とグルタミン酸塩濃度を、前に記 載した酵素的方法（Ｍｕｈｌｂａｃｈｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　Ａｍｅｒｉｃａｎ 　Ｊｏｕｒａｎｌ　ｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、　ｖｏｌ、２４７：　Ｅ７５〜 Ｅ８３（１９８４））を用いて定量した。他のアミノ酸の濃度を、０−フタルア ルデヒドを用いてカラム前誘導した後、自動高速運転液体クロマトグラフィー（ ＨＰＬＣ）を用いて定量した。ＧＬＮ　、グルタミン酸塩、プロリン、システィ ン、およびリジンを除いて、蛋白質に通常見いだされる全アミノ酸を定量した。

研究が進むにつれて、ＨＰＬＣを用いてＧＬＮ−グルタミン酸塩測定のために技 術を発揮させた。２つの技術（酵素分析とＨＰＬＣ）によって測定したサンプル は、匹敵するグルタミン−グルタミン酸塩濃度を与えた。従って、ＨＰＬＣ分析 だけを、研究の後の箇所で用いた。動脈中および静脈中のサンプルにおけるＰＡ Ｈの濃度を５％のトリクロロ酢酸（Ｍｕｈｌｂａｃｈｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、同上 ）を用いて脱蛋白後、分光光度分析によりした。

２４時間の注入の間に排出された尿を、密閉尿採取系に採出して、酸性化した冷 凍容器中において貯蔵した。アリーコトを、バッチ分析のために一２０°Ｃに冷 凍した。注入溶液および尿の窒素含有量を、マクロ・キエルダール法（Ｐｅｔｅ ｒｓ　ｅｔ　ａｌ、、　ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＣｌｊｎｉｃａｌ　Ｃｈｅｍ ｉｓｔｒｙ、　ｖｏｌ、２．　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　＆　Ｗｉｌｋｉｎｓ。

Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、　ＭＤ、、１９３２年、　ｐｐ、５１６〜５３８）によっ て、同じバッチ内において定量した。

統計的計算を、標準統計パッケージ（Ｍｉｎｉｔａｂ。

Ｐｅｎｎ５ｙｌｖａｎｉａ　５ｔａｔｅ　Ｕｎｊｖｅｒｓｉｔｙ、　５ｔａｔｅ 　ＣｏＣｏ１１ｅ、　ＰＡ、　］、９９ｇ３を用いてＩＢＭ　４３４１コンピユ ータで実行した。

その結果を平均±ＳＥＭで表現した。対別（ｐａｉｒｅｄ）および非対別（ｕｎ ｐａｉｒｅｄ）のスチューデントのし一検定を適切なものとして用いた。分散の 解析を多重群対照（ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｇｒｏｕｐ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ）用 に用いた。回帰分析を最小２乗法を用いて実行した。０．３１．２グラムの窒素 ／２４ｈｒ／ｋｇを摂取する群においてサンプルの大きさが小さいために、はと んどの統計的比較は他の群間に実行するだけであった。

後四分体（ｈｉｎｄｑｕａｒｔｅｒ）の血流量を前記のように計算しくＭｕｈｌ ｂａｃｈｅｒ　ｅｔ　ａＬ、同上）、流速を動物の大きさの変動を説明するため に体重（ｋｇ）当たりで表わした。アミノ酸の流出速度を血流量と動脈と静脈の 濃度差との積として計算した。サンプルの３つの組を抜き取り、流出量は各々の 組について計算し、３個の値の平均を決定した（Ｍｕｈｌｂａｃｈｔｅｒ　ｅｔ 　ａｌ、、同上）。全住血、血漿、細胞内水における全アミノ酸窒素を各々のア ミノ酸の窒素含有量を考慮に入れ、合計することによって計算した。

！１目糺亘 血漿および１．ｌＢ　アミン光　庁 血漿アミノ酸濃度を、手術前および標準的手術後２４時間経過してから測定した 。食塩水で措置した動物においては、血漿の全窒素含有量は手術手順によって変 化しなかった（表Ｉ）。ＧＬＮ濃度は一定で留まったが、ＢＣＡＡの濃度は上昇 し、それらの濃度の合計は、３６２±２１から５０１±９　ｕ、　ｍｏｌ＃２　 （ｐ＜　０．０１）に上昇した。０．６２４グラムのＮ／２４ｈｒ／ｋｇを摂取 する動物においては、血漿窒素濃度が上昇する傾向にあった。このことはアミノ 酸およびＧＬＮの混合物を摂取する群においてのみ統計的に有意であった。血漿 ＧＬＮ濃度はこの群においても上昇した。ＢＣＡＡの濃度はアミノ酸注入を受け る全ての動物において上昇した。

骨格筋内の窒素濃度は、食塩水の注入の間減少した（表■）。全アミノ酸窒素の この減少は、ＧＬＮが２１．４８±３．２１　μｍｏｌ／　１２細胞内水から１ ５．８６±３．８０（ｐ＜　ｏ、　０５）へ減少することにより直接的に反映さ れている。細胞内プール（ｐｏｏｌ）における非必須アミノ酸の全量は減少した が、細胞内プールの全必須アミノ酸の合計は変化しなかった。０．６２４グラム のアミノ酸窒素／２４ｈｒ／ｋｇを受ける動物においては、細胞内窒素およびＧ ＬＮの変化は生じなかった（表■）。統計的な有意性はアミノ酸およびＧＬＮの 混合物を摂取する動物においてのみ達成されるけれども、より高いアミノ酸負荷 を注入することで、ＢＣＡＡの細胞内？震度は上昇する傾向にある。手術後のこ れらの２つの群においては、必須アミノ酸および非必須アミノ酸の全濃度は有意 的に変化しなかった。窒素の高投与を受ける動物と比較して、０．３１２ｇｍ　 Ｎ／２４ｈｒ／ｋｇ注入された５匹の動物は、注入された溶液にも拘らず、骨格 筋肉細胞内窒素プール（ｐｏｏｌ）を−貫して存続しなかった。細胞内ＧＬＮは ３匹の動物において減少し、１匹においては変化せず、１匹については増加した （データは示さない）。

このように、ＧＬＮを有するか、またはＧＬＮを有しないアミノ酸混合物として のアミノ酸を０．６２４ｇｍ　Ｎ／２４ｈｒ／ｋｇを与え、骨格筋細胞内アミノ 酸プールを維持した。細Ｂ包内のＧＬＮの減少によって特徴付けられる細胞内プ ールにおける減少は、食塩水を摂取する動物において一貫して発生し、低投与量 のアミノ酸を摂取する動物においては変動した。個々のアミノ酸窒素流出（ｆｌ ｕｘ）の合計として計算される正味の後四分体アミノ酸の流出（ｆｌｕｘ）は、 食塩水を受け入れる物質における手術後６時間で測定した時、平均して−１９゜ ０５±４．０６１ｔ　ｍｏｌ　Ｎ／ｍｉｎ／ｋｇとなる。これは、０．６２４ｇ ｍのアミノ酸／２４ｈｒ／ｋｇを受け入れる２群の動物において観測される−７ ．７０±５．９および−６，５０±１．１８ｇｍｏｌ　Ｎ／ｍｉｎ／ｋｇの流出 速度よりも著しく大きい。しかしながら、後四分体からのＧＬＮの流出は、３群 について変化しなかった。

これに対して、ＢＣＡＡは、食塩水のみ摂取する犬において放出されるが、高投 与量のアミノ酸を摂取する２つの群の動物においては吸収される。ＢＣＡＡの後 回分体輸血はＢＣＡＡの投与速度と関係しているように思える。すなわち、後四 分体は、食塩水で措置した群におけるＢＣＡＡの放出、アミノ酸およびＧＬＮを 含有する溶液との平衡および最高のＢＣＡＡ投与を受け入れる群における摂取を 証明している。０．３１２ｇｍ／２４ｈｒ／ｋｇを受け入れる５匹の動物におい て、食塩で措置した犬に匹敵する後四分体の窒素の流出においては著しく変化し なかった。

しかしながら、これらの流出（ｆｌｕｘ）のデータにおいてかなりの変動があり 、研究している動物の数は少ない。手術後２４時間の実験の後四分体アミノ酸流 出は群間に相違がない（表■）。

食塩水と共に浸出される５匹の動物中の窒素排出は、０．４９２±０．２２ｇｍ 　Ｎ／２４ｈｒ／ｋｇであった。市販のアミノ酸混合物の高投与量を受けた６匹 の動物では、測定窒素摂取量は０．６３２±０．００１ｇｍ　Ｎ／２４ｈｒ／ｋ ｇであり、窒素排出は平均０．６８４　＋０．０３１（表ＩＶ）テあった。１／ ２量の市販アミノ酸溶液と１／２　ＧＬＮからなる溶液を摂取した６匹の動物で は、窒素摂取量は排出に匹敵するが、排出の方が多く、平均０．７７５±０．０ １９ｇｍ　Ｎ／２４ｈｒ／ｋｇ（ｐ＜　ｏ、　０５）であった。これらの２グル ープにおける窒素平衡は、食塩水を受けた動物において、それぞれ平均−０，０ ５２±０．０３１および−０，１４０±０．０２２ｇｍ　Ｎ／２４ｈｒ／ｋｇ未 漢のマイナス値であった。はぼ０．３１２ｇｍ　Ｎ／２４ｈｒ／ｋｇを受けた５ 匹の動物では、平均窒素排出は食塩水対照で観察された値と、大量の注入窒素を 摂取した動物で観察された値との中間であった。総合すれば、これらの研究によ れば、窒素平衡は、投与された窒素増加量として、平衡に近付くことが示された （第１図）。

ＧＬＮが市販のＧＬＮフリーのアミノ酸溶液と混合されると、窒素平衡における 効果は付加的であった。合計すると、窒素は市販アミノ酸の注入に対応して保持 されるか、または溶液が混合された場合は、保持窒素の代わりにＧＬＮ単独が計 算された。

これらの研究によれば、犬における手術ストレスは、負の窒素平衡と、骨格筋肉 の細胞内の遊離アミノ酸プールの落ち込みと協同して後四分体からのアミノ酸流 出増加によって証明されるように、骨格筋肉の正味蛋白質崩壊を促進することが 示される。先行研究によれば、蛋白質消費は、偏食や麻酔に関係しないが、明ら かに手術ストレスに対する応答であることが示されていた（１＜ａｐａｄｉａ等 、サージカル　フォーラム３３　：１９−２１　（１９８２）　）。食塩水措置 グループにおける手術後６時間の後四分体からのアミノ酸放出量は、慣性的にカ テーテル注入で吸収させた後の、基礎的条件下で研究された犬において観察され た値のほぼ６ないし８倍であった（Ｍｕｌｈｂａｃｈｅｒ等、アメリカン　ジャ ーナル　オブ　フィジオロジ−２４７：　Ｅ７５−Ｅ８３　（１９８４）　）。

この後四分体の窒素放出速度は、細胞内遊離アミノ酸プールの不足によって説明 することができず、それ故、骨格筋の正味蛋白質分解量を表している筈である。

手術前の期間アミノ酸を与えると窒素の損失を補い、血漿アミノ酸濃度を維持ま たは増加させ、かつ骨格筋細胞内の遊離アミノ酸プールの低下を減少させる。こ れらの効果は注入されたアミノ酸窒素の量に関係すると思われる。アミノ酸を最 大量投与したときに身体全体、および後四半部の窒素損失が著しく減少し、また 細胞内のＧＬＮおよび他のアミノ酸のプールも維持された。これらの結果は、Ａ ｎｎａｌｓ　ｏｆＳｕｒｇｅｒｙ　１９１：４６５　（１９８０）においてＡｓ ｋａｎａｚｉらにより報告された研究結果とは異なっている。彼らは、ｈｉｐ− ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ後において患者の細胞内のＧＬＮおよび他のアミノ酸濃 度の低下は、ぶどう糖およびアミノ酸の注入によっては戻らなかったと報告して いるのである。本発明の方法を用いて得られた結果は、この以前の知見が注入さ れたアミノ酸の量および／または注入物（ｉ　ｎｆｕｓａｔｅ）中におけるＧＬ Ｎの欠乏に関連していると思われることを示している。ＧＬＮのようなものを単 独で用いた場合であり、またフレアミンＦｒｅＡｍｉｎｅ　（登録商標）を用い た場合であれ、注入したアミノ酸濃度が低ければ（０，３１２ｇｍ　Ｎ／２４　 Ｈｒ／Ｋｇ）、動物実験では３１５が細胞内にアミノ酸プールを維持することが できなかった。これに対して、アミノ酸の注入速度を高くずれば、細胞内プール を安定化または増大できた。従って、窒素の投与量を適切に定めれば、手術後に 骨格筋細胞内のアミノ酸プールを維持することができることと思われる。

食塩水摂取動物における細胞内遊離アミノ酸プールの変化はＧＬＮの急激な減少 に起因すること大である。

食塩を注入した動物における細胞内遊離アミノ酸の変化は、適当量の窒素を用意 することによって妨げられた。これは、ＧＬＮが商業的に入手できる溶液中に存 在しなかった場合ですら起こった。これら環境下で細胞内ＧＬＮが維持されるメ カニズムは、ＧＬＮ合成のＧＬＮ基質がアミノ酸転移を介したＢＣＡＡから派生 したことによると思われるが、明らかではない。理由は説明できないが、正味の ＧＬＮ流出量はすべての群で同様であった。ＧＬＮの後回分体放出はＢＣＡＡに よっては促進されず、アミノ酸溶液中にＧＬＮ等を用意しておくことによっては 減少しなかった。この手術後のモデルの結果は、ＢＣＡＡの健常人について報告 された効果とは異なっている。健常人では、ロイシンの経口投与に続＜　ＢＣＡ Ａの上腕摂取は促進されたＧＬＮの開放と関係していた（Ａｏｋｉらによる。Ｊ ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃ１ｉｎｉｃＣ１１ｎｉｃａｌＩｎｖｅｓｔｉ　６５：１ ５２２（１９８１））。

０．６２４ｇｍ　Ｎ／２４　ｈｒ／Ｋｇの速度で投与した２つのアミノ酸溶液の 組成には明らかに違いはあるが、２つの動物群において後四分体の窒素放出は同 等であった。これは、バランスされた溶液中の必須アミノ酸およびＢＣＡＡの量 をＧＬＮ含有溶液中のそれの２倍としたときでも、同じであった。従って、手術 ストレスの実験モデルにおいては、バランスされたアミノ酸の処方にＧ１．、Ｎ を補充することは、後口分体損失を減少させる上で、少なくとも、標準的にバラ ンスされた処方の少な（とも２倍の濃度と同程度に効果的であった。

食塩を投与した犬では、ＢＣＡＡが骨格筋から放出された。これらのデータから 計算される定量的輸送速度は、ＢＣＡＡの目立った吸収は、術後の早期を通じ、 特に肝臓においてと思われるが、内蔵の組織において生じる。ＢＣＡＡを用意す ることでは、おそら（内蔵の必要量を満たし、骨格筋流出を逆転させることによ って、かかる転流が補われると考えられる。後四分体の窒素平衡と細胞内窒素プ ール量との間にも量的な関連がある。細胞内プールが維持されたときには、後四 分体は窒素平衡状態に近かった。食塩を投与したときには、細胞内プールにおけ るアミノ酸１度は明らかに枯渇し、後口分体窒素は明らかに失われた。骨格筋の たん白質分解と遊離アミノ酸プールにおける窒素濃度との関係は未知であるが、 これらのデータは、骨格筋窒素平衡が細胞内アミノ酸濃度に関連していること、 および、ＧＬＮが体内のホメオスタシスのバランスを維持する上で重要な役目を 演じていることを示している。

浄書（内官に変更なし） 食塩水　−１９，０５裳−２，６９ｔ〜１．４１重ｃ、０６＋　ＬＯ７０，２６ ”　＋２４０　０．７０　１．５＋’ｌ　ｐ＜ｏ、ｏｓＨ食塩水は０．６２４ｇ ｍＮ／２４ｈｒ／ｋｇを摂取したすべての動物と異なる。

費脅　ρ＜０．０１；食塩水＜アミノ酸＋グルタミン〈アミノ酸−・放出 十−取り込み 浄：（内容に変更なし） 一−−−−−−−−−−−窒　素ｇｍ／２４　ｈｒ／ｋＱ−−−−−−−−−− −−食塩水　０　５　０　０．４９２ｚＯ−０２２”　−０−４９２＊０−００ ２”アミノ酸＊”　０Ｊ１２　２　０−３０４ｔＯ，ＱＯ２０−６１７ｔＯ，０ ５６−０，３’３２ｚ０．０５Ｂグルタミン　０．３＋２　３　０−３２３ｔ０ ．００３　０．７Ｑ９ｔＯ，Ｑａ５　−０．３ａ６ｔＯ，Ｑ８６アミノ酸…　０ ．６２４　Ｉｓ　Ｏ，６３２±０．００１　０．６１Ｓ４ｔＯ，ｌＩ　−０−Ｏ ５２ｔ０．０３＋アミノ酸士　””　０．６２４　６　０−６３５ｔＯ，ＯＱ４ 　０．７？’ＳｔＯ，Ｏ１２−０−１４０ｔ０．０２２”　ｐ＜０．０５７食塩 水＜　０．６２４　ｇ＋ｎ　Ｎ／２４　ｈｒ／ｋｇアミノ酸＜　０．６２４アミ ノ酸◆グルタミン・・ｐ＜　０．０５；食塩水＜　０．６２４　ｇ＋ａ　Ｎ／２ ４　ｈｒ／ｋｇアミノ酸・グルタミン＜　０．６２４アミノ酸會會会　フレアミ ンＩＩ＋ ・・・・窒素の半分はフレアミンにより半分はグルタミンにより提供される。

夾１１乳互 ＢＣＡＡの　リ゛入みおよび　アミノ５゛庁は′２、″のい　の窒、″−を　゛ 貝１する 骨格筋および全身の蛋白の異化作用を減らすためのＢＣＡＡの注入の有効性を研 究するために、種々の濃度のＢＣＡＡを含むアミノ酸処方を、標準的な開腹およ び腹膜後の解剖を行っている犬の３グループに対してこの研究では術前に与えた 。第４のグループは食塩水のみ与えられた。犬の後四分体の流出技術を用いて、 個々の、および全のアミノ酸−窒素変換率が測定され、かつ骨格筋の蛋白の異化 作用を評価するのに用いられた。細胞内の遊離アミノ酸濃度は経皮的な筋バイオ プシーサンプルにおいて測定された。その作業は、標準化された外科的処置を行 った後に、骨格筋アミノ酸代謝過程の規制に対して種々の濃度を変えたＢＣＡＡ を含む静注アミノ酸溶液が有する効果に焦点をあてている。

後四分体のアミノ酸の流出と、術後の最初の２４時間中の血漿および骨格筋中の 遊離アミノ酸の濃度を測定することによって、ＢＣＡＡおよび他のアミノ酸の注 入に対する抗異化的な応答を評価することが可能であった。

Ａ、材料および方法 １、重　の　および　穴の　１ ２７頭の雄および非妊娠の雌の雑種犬は、これらの調子が整えられ、かつ寄生虫 に対してスクリーニングを行った牧場から得られた。これらの犬は１８キログラ ムと４０キログラムとの間の体重であり、ハーヴアードメディカルスクール動物 保護施設に研究前の少なくとも１週間収容された。全ての手順は、ハーヴアード メディカルスクールの動物委員会および既出の国立研究審議会の実験動物資源研 究所の実験動物の保護および利用に関する委員会のガイドラインに従った。動物 は２４時間露光状態の犬舎内に個体ごとに収容され、毎朝運動させられた。水は 任意に与えられ、プロベットレスボンド２００の乾燥ドッグフード（少なくとも ２５重量％の蛋白含有、米国ニューヨーク州シラキュース）の食餌は、旧に１回 、午後１時と３時の間に与えられた。動物は研究前にパブロフのつり革（ｓｌｉ ｎｇ）で完全に休めるように訓練された。

全ての食餌は、基礎研究または施術前の夜、午後５時に犬舎から取り除かれた。

基礎研究は、動物が運動をさせられつり革に配置された後の午後８時に行われた 。これらの研究は、血漿アミノ酸決定のための、カニユーレが挿入された前脚の 静脈からの血液サンプルの採集と、細胞内の遊離アミノ酸を定量するためにチオ ベンタールナトリウム塩（米国イリノイ州北シカゴ、アボット社：　５　ｍｇ／ ｋｇ、　工Ｖ）で全身麻酔された個体の外側広部への経皮針バイオプシーとから なる。バイオプシーをした後に、まだ犬が麻酔状態にある場合に、５ｍρの動脈 血サンプルが全血アミノ酸分析のための大腿部動脈への経皮穿刺によって得られ た。

動物は、さらに研究が行われる前の３日間で回復させられた。施術日の午前７時 に、−晩断食した後、再び動物は運動させられ、かつチオペンクールナトリウム 塩（米国イリノイ州北シカゴ、アボット社：　３０ｍｇ／ｋｇ、　ＩＶ）で前脚 カニユーレを介する麻酔処置された施術室に連れていかれた。気管チューブが通 され、動物は室内空気と毎分５リツトルで供給される酸素との混合ガスを自発的 に吸い込まさせられた。犬は仰向けの姿勢で手術テーブルの上に載せられ、１６ 番手針のカテーテルを経皮的に外側の頚静脈を介して上部大静脈内に配した。開 始時刻を書き留めた後に、食塩水または適当な供試アミノ酸溶液の注入はこの中 心のカテーテルを介してＩＭＥＤポンプ（米国カリフォルニア州すンディエゴ） で開始された。セファロチン（米国インディアナ州インディアナポリス、リリー 社）がこの手術の終了直前および終了時に投与された。膀胱にはカテーテルが挿 入され、残尿を廃棄した後、閉鎖系廃液収集が上記注入の開始時に開始され、２ ４時間行われた。静脈注射の注入終了後の代謝ケージ中の動物に対する尿も第２ 度目の２４時間の間、収集された。

犬の腹部および脇腹は剃られ、石鹸および水で洗浄され、ポビドンヨード溶液で 準備された。動物は滅菌した布で覆われ、雌では腹部に膝下中心線の切り込みを 介して、および雄では右側のパラメディカルな切り込みを介して入れられた。腸 の一部は片側に収縮させられ、末端の大動脈および下部大静脈の周囲の完全な解 剖のため、腹膜部分が露出させられた。右側の内部の腸骨近傍の動脈と同様に、 右側の曲折的な深遠部の腸骨近傍の動脈および静脈が分離された。２本の動脈は 、特別に準備されたカテーテルでカニユーレされた。このカテーテルは外径２． ８ｍｍのポリエチレンチューブに連結されたポリエチレンチューブ（外径２．０ ８ｎ＋ｍ）の６ｃｍのセグメントからなる。一方の動脈カテーテルは上記曲折的 な腸骨近傍の動脈を介して大動脈中に約６ｃｍの位置まで挿入され、他方の動脈 カテーテルは内部の腸骨近傍の動脈を介して、尾部の中腸動脈までは離れている が大動脈の分岐点まで１　ｃｍの位置まで挿入された。第３のカテーテルは深部 の曲折した腸骨近傍の動脈を介して下部大静脈中に挿入され、腎臓部の動脈まで は遠く位置された。全てのカテーテルは動かないようにされ、右側の脇腹の刺し 傷を介して体外に出された。腹部は数層で重ねて閉じられ、動物はその左側に向 けられた。外部に出されたカテーテルは適当な長さに切断され、短い大針で栓を され、間欠的なインジェクションボート（米国フロリダ州タンパ、クリチコン、 ジェリコ社）でキャップされ、食塩水で洗い流され、ヘパリン（１００μＵ／ｍ ρ）で満たされ、皮下に埋め込まれた。インジェクションボートは、経皮突き刺 しによって動脈（大動脈）血および静脈（大静脈）血に容易にアクセスできるよ うに脇腹の高い位置に配された。

環２時間を要した、これらの手順に続けて、動物は傍らに置かれ、麻酔からの回 復中、ブランケットで体温が維持された。上記の注入および手術の開始後５時間 経過してから、動物はパブロフのスリングに配され、バラ−アミノ馬尿酸塩（Ｐ ＡＨ）の０Ｏ５５％溶液がハーヴアードボンブで０．７ｎｌ　７分の速度で末端 の大動脈カテーテルに注入された。色素注入の４０分後、アミノ酸およびＰＡＨ 測定のための１０分間隔で動脈および静脈の同時採取サンプルの３セツトが得ら れた。その後、カテーテルはヘパリンで洗浄されてから満たされた。動物は、注 入の開始後２４時間、後四分体の流出研究が繰り返されるまで一定の監視の下、 スリングに保持された。この点において、最初の２４時間の尿の採集は終了し、 かつ経皮的な後脚のバイオプシーが、再び簡単な一般的な麻酔状態下で、先にバ イオプシーを受けていない後脚に対して繰り返し行われた。注入はその後終了し 、第２度目の２４時間の期間に代謝ケージ内に置かれた。

２、注１」１逮 全ての溶液は４ｍρ／分／ｋｇの速度で注入された。５匹の対照動物は０．９％ 食塩水を受け入れた。３つの異なる濃度（全アミノ酸濃度が１１％、２２％また は４４％）でＢＣＡＡを含むアミノ酸溶液（表■）はアミノ酸を８．５％の標準 アミノ酸処方、すなわちフレアミンＩＩＩ　（米国カリフォルニア州アーヴイン 、アメリカンマツフグロー社）に添加することによって調製された。全ＢＣＡＡ の注入速度は、それぞれ０．４６．０，９２および８４ｇ７２４時間／ｋｇであ った。３つ全てのアミノ酸溶液は等窒素であり、約０．６２４ｇ／２４時間／ｋ ｇの窒素をバリン：ロイシン：イソロイシン（１：　１　、３８：　１．０５） の一定割合で供するものである。９匹の動物は１１％の食塩水を受け入れ、窒素 が０．６２４ｇ／２４時間／ｋｇの溶液を得る。上記の食塩水は２．１３％のフ レアミンＩＩＩに非必須アミノ酸（Ｎ　Ｅ　、Ａ　Ａ　）の混合物を溶解させて 得られた。６匹の動物において、ＮＥＡＡはＬ−ＧＬＮ単独からなり、そのうち ３つについてはフ１／アミン丁ＩＩに見出された全てのＮＥＡＡ　（アラニン、 グリシン、アルギニン、ヒスチジン、セリンおよびプロリン）の混合物からなり 、その組成比もフレアミンＩＩＩと同様である。６匹の動物は４．２５％のフレ アミンＩＩＩ単独（２％ＢＣＡＡ）を受け入れた。最後の７匹の動物は４４％溶 液を得るのに十分なりＣＡＡで補われた２、１３％のフレアミンＩＩＩを受け入 れた。この最終処方はＬ−ＧＬＮ単独（ｎ＝４）としてＮＥＡＡあるいはフレア ミンエ■■（ｎ＝３）に見出されたＮＥＡＡの混合物を添加することによって等 窒素とされた。全ての溶液は０．２μＭのフィルター（ＭＡ、ミリス、ミリポア 社）に通すことによって滅菌され、施与前に一晩４℃で保存された。各溶液のサ ンプル１０　ｍｊ２は注入時期の最後に採取され、マクロキエルダール法による 窒素分析のために一２０℃で保全血およびプラズマのサンプルは等量の水冷１０ ％過塩素酸（ＰＣＡ）の添加、およびその後の４℃、７０００ｒｐｍ　、２０分 間の遠心分離操作によって脱蛋白された。

上清のアリコツト２ｍｎは０．２Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝４．９０）　 ０．３ｍ℃で処理され、再び遠心分離された。

上記緩衝液は５Ｎの水酸化カリウムでｐＨ４，７５〜４．９０に調整され、蒸留 水で最終容量の４ｍ℃としたものである。その結果得られた上清はその後のバッ チ分析のために一２０℃で保存された。

筋バイオプシーの処理中、ストップウォッチの進行を組織除去の際に開始した。

筋肉は脂肪および連結した組織から切り離され、不等の２つの部分に分割された 。各サンプルの多数の重量は１分間に１５秒のインターバルで記録され、時間が 零の初期の筋肉湿重量は、時間に対してプロットされた重量の最も適した線型減 少から算出された。少量サンプル（約１５〜２０ｍｇ）は９０℃のオーブンで衡 量になるまで乾燥させられ、脂肪遊離固形物の乾燥重量は石油エーテルによる抽 出後に得られた。サンプルはその後ＩＮの硝酸２５０ｎｌ中に浸漬され、塩化物 量はセミオートマチック滴定器（コペンハーゲン、ラジオメーター）を用いた硝 酸銀との滴定によって測定された。プラズマ塩化物はまた類似の方法によって決 定された。細胞内および外の水分は前述したように塩化物の技術を用いて算出さ れた。第２の筋肉サンプル（８０〜１００ｍｇ　）は重量測定され、ポリトロン ホモジェナイザ−（米国ニューヨーク州ウェストバリー、ブリックマン社）を用 いて氷冷ＰＣＡＯ，５＋ｎｊ２中でホモジェネートされた。ホモジエネートは遠 心分離され、上清は、血液およびプラズマサンプルに関して記述したように緩衝 液の添加およびｐＨ４，７５〜４．９０へのｐＨ調整によって分析のため調製さ れた。

全血、プラズマおよび筋肉細胞内ＧＬＮおよびグルタミン酸塩の濃度はルンド（ ｔ、ｔ＋ｍｏ、既出）の方法からの酵素的なマイクロ蛍光定量法によって、ある いはプレカラムで０−フタルアルデヒドとの誘導体化を行った後の自動化された 高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ；Ｓｍ１ｔｈ　ｅｔ　ａｌ、、Ｊ、　Ｌ ｉｑ、Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ、８：１７ｇ３−１７９５（１９８５））によって決 定された。上記２つの技術は比較可能な結果を出した。プロリン、シスチンおよ びリジンを除（他のアミノ酸は類似のＨＰＬＣ法で決定された。動脈血および静 脈血中のＰＡＨの濃度は、５％のトワクロロ酢酸での脱蛋白の後、分光光度的に 決定された（Ｍｕｈｌｂａｃｈｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、Ａｍ、Ｊ、Ｐｈｙｓｉｏｌ 、２４７：Ｅ７５　〜Ｅ８３（１９８４）。

注入の２４時間中に排出された尿は閉じられた排尿システム内で収集され、酸性 化された冷蔵庫内に保存された。アリコツトはマクロキエルダール法による窒素 の後述のバッチ分析のために一２０℃で冷凍保存された（Ｐｅｔｅｒｓ　ｅｔ　 ａｌ、、　Ｉｎ、Ｑｕａｎｔｉｒａｔｉｖｅ　Ｃ１ｉｎｉｃａｌＣＣ１１ｎｉｃ ａｌＣｈｅ、Ｖｏｌ、１１，５１６〜５３ｇ、Ｗｉ１１３ｍｓ　＆　Ｗｉｌｌｉ ａｍｓ（１９３２）。他の部分は２０００ｒｐｍで１０分間、遠心分離され、テ クニコン自動分析器（米国Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ州テリータウン）で尿およびクレア チニンの後述の分析のために冷凍された。

４、テ　および、う 後四分体は前述したように算出された （Ｍｕｈｌｂａｃｈｅｒ、Ｆ、、ｅｔ　ａｌ、、既出）。個々のアミノ酸に関す る流出率は血流の生成物および動静脈の濃度差として算出された。サンプルの３ セツトは各時点ごとに線引され、その流出は各セットごとに算出され、３つの値 の意味が決定された。プラズマ、全血および細胞内の窒素濃度と同様に全アミノ 酸窒素流出は、測定された全てのアミノ酸の窒素基の総ミリモル数として算出さ れた。骨格筋の遊離細胞内アミノ酸濃度は、細胞内の水分のリットル当たりで表 された。

統計計算は標準統計パッケージ（ペンシルバニア州立大学、同州立単科大学、ミ ニタブ）を用いて行われた。その結果は±ＳＥＭの意味として表記された。対お よび不対の学生のｔ試験は適当なものとして用いられた。変化の分析には複合グ ループ比較が用いられた。

減少分析は逓少二乗法を用いて行われた。

Ｂ、結果 静注による注入の開始前で、ベントパルビタールナトリウム塩の管理後に短期間 に死亡した１頭の犬を除き、全ての動物は手術の手順にもかかわらず生き延びた 。この死亡した動物は研究に含まれなかった。手順中の失血は均一で最少のもの であった。全てのカテーテルサンプルは、２２％ＢＣＡＡグループにおける動物 において開始から時２４間の時点で１つの静脈カテーテルを除いて、開始から６ 時間および２４時間の時点で特許された。

開始から６時間の時点における後四分体の血流は食塩水の対照グループにおいて ３３６．１±６．８ｍβ／　分／　ｋｇテアリ、処理（１１％ＢＣＡＡ　、　３ ３．３−！＝４．９，２２％ＢＣＡＡ４２．４±８．８．４４％ＢＣＡＡ　２ｇ 、７±３．５；有意の差異なし）によって影響されなかった。開始から２４時間 の時点における血流に変化はなかった（それぞれ５７．９±１０．２゜３８、・ ６±８．２　；５４．９±６．５．４９．７±１３．２）。血流速度の上昇傾向 および開始から２４時間の時点での可変性の増加傾向は、麻酔状態からの回復後 に増大する動物の動的活動に帰することとしてもよい。

１、　とじて、′される窒、−および窒、゛″−手術後、排泄された尿の量は、 食塩水のみを摂取する犬が少ない量の尿を排泄する傾向があるが、４つの処理グ ループにおいて比較可能であった（表ＶＩ）。処理された動物は初めは尿素の形 態で、食塩水グループよりも３５〜６５％多い窒素を排泄した。２２％ＢＣＡＡ 溶液を注入された犬は、１１％ＢＣＡＡグループあるいは４４％ＢＣＡＡグルー プよりも尿素窒素量および総窒素量で有意に少な（排泄した。クレアチニンおよ びアンモニアの排泄は全てのグループにおいて比較可能であった。

血液尿素窒素および血漿クレアチニンは全てのグループから選択された動物にお いて手術前および手術後２４時間測定された。これらの濃度は手術前に全ての動 物において正常であり、手術後でも僅かに下がったかあるいは変化はなかった。

従って、尿素の排尿速度は尿素生成速度に近かった。１１％および４４％ＢＣＡ Ａ溶液を摂取する動物においては観察された速い尿素生成は、平衡とされたアミ ノ酸混合物へのＢＣＡＡあるいはＮＥＡＡの添加によって提供された余分の窒素 に有意に関連された（ｐ＜０．０５）。

窒素平衡はアミノ酸投与と否定されなかった。すなわち、注入されたアミノ酸窒 素の約５０％は残留した。

窒素摂取がアミノ酸を摂取している全ての動物において同様であったので、既に 議論した窒素排泄における反復は窒素平衡において影響された（表ＶＩ）。従っ て、２２％平衡アミノ酸溶液を摂取している動物は、１１％または４４％ＢＣＡ Ａを含む溶液を摂取している犬よりも窒素保持を有意に大きく達成した。

２、金１．−−且り酸」」 食塩水処理動物においては、全血アミノ酸窒素は手術後６時間の時点で減少した が、２４時間までには手術前の正常の水準に回復した（表ＶＩＩ　）。この一時 的な低アミノ酸血症は、ある必須アミノ酸（スレオニンおよびチロシン）の有意 の減少が起こるが、大部分において非必須アミノ酸（グルタミン、アラニン、ア ルギニン、セリンおよびアスパラギン）の濃度の減少によって説明された。対照 的に、注入されたアミノ酸を摂取している動物は手術後６時間の時点において全 血アミノ酸窒素濃度を維持した。これらの濃度水準は２４時間まで上記手術前の 対照の濃度水準を増加させた（ｐ＜ｏ、　０５）。注入されたアミノ酸を摂取し ている動物の血液中の特定のアミノ酸の濃度は注入された溶液の組成を反映した 。例えば、Ｂ　ＣＡ　Ａ　濃度は６時間および２４時間の両時点においてＢＣＡ Ａ投与速度に関連した（第２図）。概して、６時間の時点での全血ＧＬＮ濃度は 手術前の濃度水準を下回った（表ＶＩＩ　）。例外はＧＬＮを強化した１１％Ｂ ＣＡＡ溶液を摂取しているグループであった。この溶液は血ＧＬＮ濃度が維持さ れたものであった。これらの動物においては、ＧＬＮが非必須の窒素の半分を越 えるものを含み、窒素が引き渡された全アミノ酸の４０％を越えるとの説明であ った。２４時間まではＧＬＮ含有注入液を摂取している動物は正常の全血ＧＬＮ 濃度よりも高い傾向にあった。

３、　アミノ 食塩水処理された動物においては、細胞内遊離アミノ酸窒素が手術前の水準と比 較した場合に、手術後２４時間までは有意に減少しだ（表ＶＩＩＩ）。この変化 は大部分（６５％）において、全細胞内遊離アミノ酸プールの主要部分を含む細 胞内ＧＬＮ中の特徴づけられた効果によって説明された。アミノ酸注入液を摂取 している動物では、細胞ＧＬＮがＧＬＮ遊離１１％ＢＣＡＡ溶液を摂取した動物 に利用できるようになったが、細胞内窒素は維持された。細胞内ＧＬＮはＧＬＮ 強化溶液を摂取している動物において増加する傾向があり、ＢＣＡＡ濃度はＢＣ ＡＡ注大速慶大速度して増加した。

４、′四　のアミノ７ｊ 食塩水処理された動物においては、手術後６時間の時点で後四分体からアミノ酸 窒素の正味の放出があった（表ＩＸ）。この増加したアミノ酸放出は、ＢＣＡＡ を含む、測定された殆ど全てのアミノ酸の放出を反映し加速した。この期間に、 グルタミン酸塩およびアスパラギン酸塩は後四分体を交差しての平衡を維持した アミノ酸のみであった。手術後２４時間の時点において、後四分体のアミノ酸窒 素の放出速度は減少し、大いに可変であるが、殆ど全てのアミノ酸に関する動静 脈の差異は零と区別できなかった。ＧＬＮ放出はこの時点で持続した。

アミノ酸注入液を摂取している全てのグループの動物において、６時間の時点で 後四分体のアミノ酸窒素の放出は類似しており、食塩水処理された動物の場合よ り明白に少なかった（　ｐ＜０．０５）。６時間の時点でのＧ　１．Ｎおよびア ラニンの放出は食塩水の対照においてよりもアミノ酸を摂取している動物におい ての方が少ない傾向にあった。ＢＣＡＡは食塩水の注入された動物において６時 間の時点で放出されたが、これらのアミノ酸はアミノ酸注入液を摂取している犬 において吸収されな。ＢＣＡＡの後四分体における摂取はＢＣＡＡの投与速度（ 第３図）およびＢＣＡＡＩ度（第４図）に関連づけられた。

２４時間の時点で、後四分体のアミノ酸窒素の放出は、全てのアミノ酸注入グル ープに類似し、６時間の場合に比較して変化がなかった。２４時間の時点で、Ｂ ＣＡＡの後四分体の交換は僅かに陽性であり、２２％および４４％ＢＣＡＡグル ープにおいて高い傾向にあった。この時点で、ＢＣＡＡの摂取は血液濃度および ＢＣＡＡ投与速度に関連がなかった。

５、ＢＣＡＡ’　、ＢＣＡＡ’四　体の耳　および後口　体のアミノ５　、の　 馬の　′ ６時間の時点での食塩水注入された犬においては、後四分体ＢＣＡＡの放出は加 速されたアミノ酸放出と連動していた。アミノ酸注入液を摂取している動物にお いては、後四分体の窒素平衡はＢＣＡＡ摂取と相互に関連していた（第５図）。

食塩水を摂取している対照は窒素を摂取していなかったので、この分析には含ま れなかった。対照の動物の細胞内の含有物は、よりプラスの傾きを有する減衰線 に帰結していた。その相互依存関係はＢＣＡＡ流出が後四分体のアミノ酸窒素流 出の刺激の加重に包含されなかったとしても維持された（ｐ＜０．０２．ｒ＝０ ．４９）　、従って、ＢＣＡＡ流出を除いて窒素流部はまたＢＣＡＡ摂取に関連 していた。窒素流出は血液中の総ＢＣＡＡ濃度あるいはＢＣＡＡ投与速度とは相 互に関連性がなかった。これらの関係のないものは２４時間の時点においては存 在しなかった。

６時間の時点で後四分体のアミノ酸窒素の放出はまた細胞内の遊離アミノ酸窒素 プール内での変化を相互関連があった（第６図）。細胞内のＧＬＮでの反復は総 遊離アミノ酸窒素プール内での変化と緊密に関連性があり（ｐｒｏ、　００１　 ；ｒ＝０．９０）、従ってＧＬＮブール内の変化はまた後口分体窒素放出（ｐ＜ ０．０５　；ｒ＝０．６６）と明白に関連性があった。これらの数学的関係は後 四分体のアミノ酸窒素の放出が細胞内の窒素プールにおける変化に関して訂正さ れた場合に、維持された。流出およびプールの測定は異なる時点でなされたので 、細胞内アミン酸プールにおける２つの異なる変化率を仮定することによってこ の訂正がなされた。細胞内プール内の変化が手術後の最初の６時間で発生したも のと仮定した。

代わりに、その変化が２４時間以上、一定の速度で発生したものと仮定した。細 胞内窒素プールの変化とアミノ酸窒素放出との間の関係を変える訂正はなかった 。

ＢＣＡＡ摂取は、６時間あるいは２４時間の各点で後四分体から離れている増加 したＧＬＮには関連性がなかった。ＢＣＡＡ摂取は、また骨格筋細胞内の遊離ア ミノ酸プールで発生した変化にも関連性がなかった（ｒ・０．１１　、不明瞭） 。後四分体の窒素流出は予想されることが可能であり、そのデータの可変性の殆 どはＢＣＡＡの６時間流出と遊離アミノ酸窒素プールとが共に用いられた場合に 、説明されることが可能であった。

その関係式は ｙ＝　−９，５８＋０．２７ｘ＋＋３．０２ｘｚここで、ｙは６時間の時点でア ミノ酸窒素流出（μｍｏｌ／分／ｋｇ）であり、Ｘｌは６時間の時点でＢＣＡＡ 流出＋（μｍｏｌ／分／ｋｇ）であり、Ｘ２は骨格筋細胞内の遊離アミノ酸窒素 における変化（手術の前後、ｍｍｏｌ／Ｌ／２４時間）であり、ｎは２２　（ｐ ｒｏ、　０５．　ｒ＝０．８６）であった。

Ｃ１議論 麻酔状態とされた犬における標準化された開腹術は重病人で観察された胃化的な 応答の多（を開始するために示された。尿として排泄される窒素によって測定さ れたように、トータルの体プロティンの胃化作用は増えている。食塩水を摂取し ている対照の動物は手術後の最初の２４時間内に約１２〜１５ｇの窒素を排泄し た。

このモデルでの先の研究は、窒素平衡が食物の摂取にもかかわらず手術手順後の ３８間酸性のままであるということを示した（Ｋａｐａｄｉａ　ｅｔ　ａｌ、、 Ｓｕｒｇ、Ｆｏｒｕｍ　３３：１９−２１　（１９８２）　）。対照的に、対で 食餌が与えられた偽装手術（ｓｈａｍｏｐｅｒａｔｅｄ）がなされた動物は術後 の初日に窒素平衡に達成した。増加した尿窒素の損失と矛盾せず、かつこれに貢 献することに関し、後四分体の、手術後の６時間の時点でトータルのアミノ酸窒 素の放出は、−晩の断食後の対照動物で観察された場合の６〜８倍であった（Ｍ ｕｈｌｂａｃｋｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、既出）。血液および骨格筋アミノ酸濃度の 低下など、食塩水処理された犬での他の変化は、ヒトでの異化作用状態中に報告 された反復に類似している（Ａｓｋａｎａｚｉ　ｅｔ　ａｌ、、Ａｎｎ、Ｓｕｒ ｇ。

１９２ニア８−８５（１９８０））。このように、大斜のモデルは重病人での反 復に類似している術後の応答を示し、従って窒素代謝および骨格筋アミノ酸交換 上の外来アミノ酸の効果を調べるのに適している。

食塩水処理された動物においては、後四分体の、アミノ酸窒素の放出が術後６時 間、顕著に増加していた。これは正味の骨格筋の全ＢＣＡＡの放出と連動してい た。同時に、全血ＢＣＡＡ濃度は変化がな（、内臓器官のＢＣＡＡの消費骨格筋 の放出の加速度とおおよそ等価であった。アミノ酸を摂取している動物において は、後四分体の総アミノ酸放出が弱められ、全血および骨格筋窒素プールが維持 され、後四分体はＢＣＡＡ放出の器官からＢＣＡＡ摂取の器官へ変換された。Ｂ ＣＡＡおよびさらに詳しくはロイシン摂取は骨格筋の増加したＧＬＮの放出と連 動していなかった。

この研究は骨格筋アミノ酸放出および筋プロティンの正味の変化が２つの独立し た測定から予期され得るということを示している。これらは骨格筋の血管ベッド を交差するＢＣＡＡ流出の速度および骨格筋の遊離アミノ酸プールにおける窒素 濃度である。ＧＬＮは上記遊離プール中で最も豊富なアミノ酸であるので、その ＧＬＮの濃度の変化はプール全体の変化を主として決定する。事実、遊離のＧＬ Ｎにおける変化は全遊離アミノ酸における変化と同様に筋肉の窒素平衡を予測す る。

」」１　＋μヒＬ巳μ穂−−−ツ巳ｌ−１ゎ表　ＩＸ後ｌｑ分体７ミ／１１１流 出ＩＪＭＯＵＭ１ＮｆＫＧ、平　均＊５９ｉ１１叉１０性屋 の　升　′！′のグルタミンを　官に　んだ１、予口　餌Δ玉監Δ立盈ｊ Ａ、導入 部分的な手術後の小腸の代償的成長は、腸壁のすべての層を含むが、柔突起増生 により支配される。

成長する柔突起の高さと陰窩の深さは、腸の残遺物の拡張と伸長に影響をうける （Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ、　Ｒ，Ｃ，Ｎ、　。

Ｎ、　Ｅｎｇｌ、Ｊ、Ｍｅｄ、　、　２９８；ページ１３９３−１４４４　（１ ９７８年））。小腸の切開術後、適切な形態学的また機能的な変化がおこる。経 口摂取は腸の切除手術後粘膜の増生の規制に重要な刺激になることが証明されて いる（Ｌｅｖｉｎｅ　ｅｔａｌ。

Ｄｉｇ、　Ｄｉｓ、　２１　：ページ５４２−５４５　（１９７６年））。経口 の栄養素は通常の粘膜の成長を維持するのに重要であり、もし小腸の手術後経口 摂取が維持されなくては、残りの腸は、重量を失い、形成不全になる。腸の切除 手術後、腸の短い（ｓｈｏｒｔ　ｂｏｗｅｌ）患者は非経口的な栄養で（生命を ）維持され、その生存は残余の腸組織の適応性に左右される。基本的な食餌と非 経口的な栄養で、腸の適応性の発達や完全な経口摂取へのゆつ（つとした回復に 十分な時間が与えられる（Ｗｅｓｅｒ、　Ｅ、　。

Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ　７１：ページ１４６−１５０　（１９７６ 年））。

ＧＬＮは腸はう種（ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｅｓ）に重要な燃料であり、外科的な緊 張のあとに、その使用が増加する（Ｓｏｕｂａ、　Ｗ、　Ｗ、　、　ｅｔ　ａｌ 、　、　鉢」阻■９４　：ページ３４２　（１９８３年））。ＧＬＮは局部的な 栄養素として働き、腸が増生をおこなう時粘膜の成長をうながす。

本研究の目的は、組織の緊張と腸の粘膜の増生への刺激をもたらす準総合的（ｓ ｕｂｔｏｔａｌ）な切開術、生体実験的モデル組織の小腸の粘膜細胞の成長に与 えるＧＬＮを含んだ栄養の効果を調べることである。

Ｂ、材料と方法 １．１艷ユＪ１ チャールズ・リバー・ブリーディング・ラボラトリ−から購入した重さ１７５− ２００グラムの雄のウィスター（Ｗｉｓｔａｒ）ネズミを５日間ラボラトリ−で 馴化させる。ネズミには、水を自由に与え、ブリナ（Ｐｕｒｉｕａ）のチャウ（ ｃｈｏｗ）を与える。ネズミは一匹ずつかごに入れ、毎日体重を増やしてゆ（。

馴化後、通常の体重をえたネズミを、ランダムに４つのグループに分ける。

研究の初日には、ネズミはベンドパルビタール（５０ｍｇ／Ｋｇ）の腹腔内（■ 、Ｐ。）注射で麻酔される。腹部を中線切開術で開き、トライッ筋の靭帯から、 回盲腸部までの小腸の全長を外へ取り出し、長い黒糸で延ばさずに、２回測定す る。２回目の測定の平均値をめる。

トライツ筋の靭帯へ５ｃｍの所からはじまる小腸の２７３の切開術をランバート （Ｌａｍｂｅｒｔ）法でおこなう（Ｓｕｒｇｅｒｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｄｉｇｅｓ ｔ；ｖｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｒａｔ、Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｃ，Ｔｈｏ ｍａｓ、Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄｓ　１１１ｉｎｏｉｓ、ページ３２−３５゜４ １３−４１６　（１９６５年））。切開術の切り口の縁を、端から端まで６−０ のブロレン（ｐｒｏｌｅｎｅ）で吻合術を施す。

腸を腹部の空胴へもどし、腹部壁を２−〇のブロレン（ｐｒｏｌｅｎｅ）で閉じ る。

対称群（ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ）は、小腸の末端イ装置、すなわちトライ ツ筋の靭帯から５ｃｍ離れた所を起点にして測定した合計長さの２７３の位置の 小腸を切断し、再吻合する、見かけの手術（ｓｈａｍ　ｏｐｒａｔｅ）を受けた 。

動物を、別々に代謝ケージに入れ、外科手術後の当日から、適切な量の炭水化物 、脂質、アミノ酸類。

ビタミン類と塩類を含んだバランスのとれた食餌（−ＧＬＮ）　、あるいは非必 須アミノ酸類の分画（ｆｒａｃｔｉｏｎ）のかわりにＧＬＮを用いた所をのぞい て同一のＧＬＮを含んだ食餌（÷ＧＬＮ）を経口的にひとつがいの動物に与える 。ＧＬＮの含有量はアミノ酸類の０％か２５％であり、アミノ酸類の一５％を示 すＧＬＮのある通常の食餌とは対照的である。

２、グルタミンを　む　の 決められた経口的な食餌は、１００ｇ当りの４２７カロリーで、０．２％（Ｗ／ Ｗ）の塩化コリン、　ｉｏ％のトウモロコシ油、　４６．９％のデキストリンホ ワイト（ｄｅｘｔｒｉｎ−ｗｈｉｔｅ）、　２３．４％の蔗糖、５％の塩混合物 および０．５％のビタミン混合物を含む。両方の食餌は合計で７．１７％の必須 アミノ酸類と、合計で６．８３％の非必須アミノ酸類を含む１４％のアミノ酸類 からできている。ＧＬＮ（−ＧＬＮを含まない食餌）は、アラニン、アスパラギ ン、アスパラギン酸、プロリンおよびセリンを各０、９３７％含んでいる。ＧＬ Ｎ豊富な食餌（＋ＧＬＮ）はこれらの結果アミノ酸０．２３７％と、ＧＬＮ３． ５％を含んでいる。

この結果＋ＧＬＮの食餌の中で、アミノ酸類の合計の２５％および非必須アミノ 酸類の５１％を示す。

３．１監二ヱ１ 食餌を与えてから７日後、ネズミは犠牲となった。

ネズミは腹腔中のベンドパルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ）を注射され麻酔された 。腹部が開かれ、切開術が胸腔部までおこなわれた。左心室に穴をあけ５ｍｆｆ の血液を抜き取り、血液中のアンモニアとプラズマＧＬＮのレベルを測定した。

血液を抜き取った直後、腸を回収した。小腸全体が腸奨膜に近い腸間膜と注意深 く区分されて取り除かれた。取り除かれた腸は、４゜５グラム重の固定張力をか けてつるされ、９つの点に印がつけられた。

腸の切開術を受けたネズミでは、吻合術をした近傍の５．１０．および１２．５ ｃｍの点は空腹の近傍と十二指腸の末端をあられし、吻合術をした所から離れた ２、５゜および１０ｃｍの点は、吻合術をした所に近い残余の回腸をあられし、 回盲腸部に近い、５．ｌＯおよび１５ｃ　ｍの点は回腸の末端をあられし、これ らの点は腸をつき通すまっすぐなビンで印がつけられる。腸は６つの部分に分け られる。みせかけの手術を受けたグループのネズミでは、トライツ筋の靭帯の近 傍１ｃｍの所から、近傍の２つの部分に印がつけられ、上方へ向って測定される 。部分１ａ、２ａおよび３ａは冷却した食塩水中ですすがれ、緩衝された１０％ のフォルマリン液に４時間つけられ、その後同定のために７０％エタノール中に 入れられる。部分１ｂ、　２ｂおよび３ｂは冷却した食塩水中ですすがれ、それ らの管腔が開かれ、湿重量が測られる。腸の部分は５ミリリツトルの冷却した食 塩水中に運ばれ、鋭利なハサミで細かく刻まれる。ポリトロン（Ｐｏｌｙｔｒｏ ｎ）ホモジエナイザー（Ｂｒｉｎｋｍａｎ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ。

Ｗｅｓｔｂｕｒｙ、　ＮＹ）上で、２回、１５秒間（ｔｗｏ　ｆｉｆｔｅｅｎｓ ｅｃｏｎｄｓ）ホモジェネートされ、ホモジェネートができあがる。その後、３ 秒間、電力を２に設定し、超音波処理器（Ｈｅａｔ　Ｓｙｓｔｅｍ　Ｌａｂｏｒ ａｔｏｒｉｅｓ、Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ、ＮＹ）で超音波処理される。ＤＮＡとた ん白質分析用の食塩水でホモジェネートを一３０℃で保存した。

４、庄丘二」 腸のホモジェネートは、ローリ−法（Ｌｏｗｒｙ　Ｍｅｔｈｏｄ）で、総たん白 質として分析された。ＤＮＡは、ブルドン法（ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　Ｂｕｒｔｏ ｎ）（Ｂｉｏｃｈｅｍ６２：ベージ３１５−３２３（１９６５年））により測定 された。組織切片はバラフィ〕ノにつけられ、ヘマトキシリンとエオシンで着色 され、４０倍（４０Ｘ）の拡大率の光マイクロスコープで検査される。粘膜の厚 さと絨毛の高さを接眼マイクロメータで測定するために、２０＠の代表的な高く て方向性のある完璧な絨毛が選ばれ、平均値が得られる。４０倍に拡大された領 域の中央の水平ラインにおかれた腸にある絨毛の数がカウントされる。

Ｃ１結果 最初の５日は、１日に１０グラムから１５グラムの食料の摂取での漸進的増加が あり、食摂取が一定であった。

つがいで食餌を与えられる動物で２回の食餌を同量摂取するにもかかわらず、２ つのグループでの体重の増加の割合は手術直後の期間で異なっている。管理され た動物では、術後最初の３日間は、体重は一定であり、その後１日に５グラムづ つの割合で直線的に増加した。ＧＬＮを与えたグループでは、期間的なお（れは な（、手術後の最初の日からすぐに、継続的な体重の増加が１日５グラムの割合 ではじまった手術後の２日目、３日目には、ＧＬＮを与えたグループでは、管理 されたグループに（らべて、体重の増加が著しかった（Ｐ＜０．０５）。両方の 食餌を与えた動物ではほぼ同じ割合で体重が増加していったが、ＧＬＮを与えら れたグループでは体重が手術後８日目までどんどん増加しつづけた（３２．０± ２．８対２３．７±３．７グラム累積体重増加、　ｐ＜０、０３）。死骸を分析 した結果体重の増加は体全体の水分の累積とは関係なく（７１±　１％＋Ｇ　Ｌ 　Ｎ対７３±　］％−ＧＬＮ管理）　、　ＧＬＮのやせた体の質量に対する効果 と関係があった。手術後最初の３日間での食餌と体重の変化とにおいてのＧＬＮ 濃度の関係が別の動物を使って研究された。食餌のアミノ酸類の約２５％が最大 限の成長の効果をもたらすＧＬＮとして必要とされる。

２５％のＧＬＮを含んだ食餌による体重の増加は、空腹と回腸との残余の部分の 重量増加と関連があった。手術後３日目では、全小腸組織の重量は、ＧＬＮを与 えられたグループでは３．５５±０．１６グラムであり、対照のグループでは２ ．９７±０．１０グラムであった（Ｐ＜０．０５）。

手術後８日目では、腸の重量はそれぞれ３．３０±０．２３グラム、　２．８１ ±０．１６グラムになった（Ｐ＜０．０５　）。ＧＩ−Ｎを含んだ食餌において 、腸の重量の増加と体重の変化全体のたった５％を占めるにすぎない。それゆえ 、腸に対してＧＬＮの摂取の効果はあるが、その効果は腸に限らない。

空腹と回腸の細胞充実性は、ＤＮＡの含有量を測定しかつ、定量組織学により、 さらに直接的に評価（ａｓｓｅｓｓ）された（表Ｘ）。ＧＬＮ摂取に関しては、 手術後３日目の空腹でのＤＮＡ含有量の著しい増加があり、３日間と８日目の回 腸でのＤＮＡ含有量の著しい増加があった。手術を受けず、対照動物と比較し、 切開術とＧＬＮを含んだ適切な栄養の食餌の摂取との組合わせにより、手術後３ 日目で、１ｃｍ当りの空腹のＤＮＡ含有量は５４％の増加となった。この適切な 増生は、食餌中に含まれているＧＬＮをバランスのとれた非必須アミノ酸類の混 合物に置き換えることで、半分近（に減少できた。粘膜の厚さの組織学的測定に よって、ＤＮＡ含有量を測定した（表Ｘ）、ＧＬＮを含んだ食餌に関しては、空 腹と回腸での絨毛の平均的な高さの増加が、手術後３日目と８日目で明白になっ た。この反応は絨毛に限られていて、陰窩の深さと準粘膜（ｓｕｂｍｕｃｏｓａ ｌ）の筋の層の厚さは、ＧＬＮの効果とは関係がない。

（以下余白） 表Ｘ　６０％の小腸の切除手術接法められた経口的食餌の成分のグルタミンの残 余の腸の部分に対する効果法められた３ｃｍの空腹の部分を、手術後３日目と８ 日目に採取し、ＤＮＡ含有量をホモジエネート化し、分析する（Ｂｕｒｔｏｎ、 　Ｋ２．ｅｔ　ａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、６２：ページ３１５（１９６５年） ）。切開術を受けないこの年令の動物では、空腹のＤＮＡ含有量は一３５０μｍ ／ｃｍである。同じ動物の空腹と回腸の別の部分は緩衝化された１０％のフォル マリン液で固定化され、エタノールで脱水され、パラフィン中につけられ、１０ ミクロンの長手方向部分に細かく切られ、ヘマトキシリンとエオシンで着色され る。符号化したスライドに関する盲検方式で１５の方向性のはっきりした保存性 のよい絨毛（５／スライド　オン　３スライド）が、絨毛の高さと陰窩の深さお よび筋の厚さを接眼マイクロメータに適したマイクロスコープで測定するために 使われた。データは９から１２のつがいに対して平均値±ＳＥＭを示す。−ＧＬ Ｎ＝　０％グルタミン、±ＧＬＮ＝２５％グルタミン。

”Ｐ＜０．０５．”Ｐ＜０．０１．＋ＧＬＮ　Ｖ、−）がイニなっていないｔ− テストの−ＧＬＮ 絨毛の高さへのＧＬＮの影響は、ＧＬＮがアミノ酸類の全重量の２５％を示し、 食餌中の非必須アミノ酸類の５１％を示した時に最大になった。より低い濃度で は、空腹と回腸とにおいて、持続した影響は明白でなかった。ＧＬＮの濃度が３ １．２５％へ増加し、他の必須アミノ酸類がさらに減少すると、腸の粘膜への栄 養の効果はなくなった。これは、ＧＬＮを含む食餌のアミノ酸構成が広範囲に変 化し他のアミノ酸類が制限されることに起因する。アミノ酸類の合計の２５％の 量のＧＬＮは、適度ではあるが重要なプラズマＧＬＮ濃度の増加を生じた（８０ ０±４０対６５４　±４８μＭ　（３日目）　、　７５１　±２２対６７６±２ １ｔＬＭ　（８日目））。グルタミン酸やアンモニアのプラズマレベルではプラ ズマ濃度の増加はなかった。

これゆえ、ＧＬＮがアミノ酸類全体の２５％を示すＧＬＮを含む食餌は、さらに 急激な手術後の重量増加と腸の粘膜の増生を生じる。腸の粘膜の増生け、過剰な ＧＬＮやアンモニア、グルタミン酸等のＧＬＮ代謝の最終生成物の蓄積とは関係 がない。

栄養上の支持が必要な患者に適量の経腸の栄養素を与えるのは時には困難である ので、特に病気の過程が胃腸の雪道を含む重大なものに関係する場合、栄養上は 不適当な食餌の成分であるＧＬＮの効果を評価した。

ネズミが同じ６０％の切開手術を受け、その後つがいで食餌のコントロールを受 け、あるいは適度のアミノ酸類、ビタミン類そして塩類の入ったＧＬＮを含んだ 食餌つまり完璧な食餌であるが全カロリーが５０％少ない食餌を与えられ、ＧＬ Ｎを含んだ食餌のグループでは体重がわずかに増加するが、両方の食餌を与えら れたクループではほとんど体重の変化はなかった。カロリーの欠乏にもかかわら ず、腸の粘膜へのＧＬＮの顕著な影響は明白であった（表ＸＩ）。

手術後７日目に、コントロールされた食餌にくらべてＧＬＮを含む食餌では、空 腹では粘膜の湿重量が３６％増加し、回腸では４０％増加した。粘膜のＤＮＡ含 有量はそれぞれ４８％と３２％増加した。これらの粘膜の細胞充実性の測定は定 量組織学研究で確証され、この測定により、空腹と回腸の粘膜の厚さの持続的増 加が示された。カロリーの欠乏にもかかわらず、食餌に含まれるＧＬＮ栄養上の 影響を与え、腸の粘膜の成長を特別に支持した。

表ＸＩ　６０％の小腸切除手術後の、カロリーを５０％に制限された経口的な食 餌の成分としてのＧＬＮの残りの腸の部分に与える影響 −ＧＬＮ　＋ＧＬＮ 腸の部分は、表Ｘの説明文にあるように採取され分析された。データは部分的な 切開術の７日後に調査された１０組の動物の平均値±ＳＥＭをあられしている。

−ＧＬＮ＝　０％グルタミン、　＋ＧＬＮ＝２５％ＧＬＮ、哩＜０．０５．〜Ｐ 〈０．０１．””Ｐ＜０．００１．：＋かイニなっていないｔ−テストでの＋Ｇ ＬＮ対−ＧＬＮ ＧＬＮの効果は、ＧＬＮを静脈内に投与したときにも表れる。ネズミに、最適な 成長を維持できるＧＬＮ含まない形で、腸の部分的な切開術後７日間まったく非 経口的な栄養（ＴＰＮ）を与えつづけた時（Ｐｏｐｐ、　、　ＭＢ、　、　ｅｔ 　ａｌ、　。

ＡｍＪ、Ｃ１１ｎ、Ｎｕｔｒ、３６：　１１９ページ（１９８２年））、絨毛の 高さは空腹内では減少し、回腸内では変化しない（表ＸＩＩ）。このように、部 分的な小腸の切開術の栄養上の刺激は、ＧＩ管路の管腔から食物をのぞく結果、 相殺される（Ｌｅｖｉｎｅ、Ｇ、Ｍ−、ｅｔ　ａＬ、、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒ ｏＬｏｇｙ　６７：ベージ９７５　（１９７４年））。

表ＸＩＩ　６０％の小腸の切開術後の、ＩＶの全経口的栄養処方の成分であるＧ ＬＮが、残った腸の部分に与える影響切開術前　切開術後゛１日目 間ＧＬＮ　＋ＧＬＮ　−ＧＬＮ　＋ＧＬＮデータは９組の動物の平均値±ＳＥＭ を表す。−ＧＬＮ＝　０％グルタミン、　＋ＧＬＮ＝２３％グルタミン、　”Ｐ ＜０．０５　、　”Ｐ＜０．００１　、つがいになってないｔ−テストでの＋Ｇ ＬＮ対−ＧＬＮ、Ｐ＜０．０５　ＰｐＯ，Ｏ０５゜つがいになってないｔ−テス トでの切開術前対切開術後、非必須アミノ酸成分（全アミノ酸類の２５％）の分 画のかわりにＴＰＮ処方のものにＧＬＮを加えることにより、切開術後の過増生 反応が貯蔵される（表ＸＩＩ　）。

ＧＬＮのないＰＴＮ処方のものに比較して、絨毛の高さは、空腹内と回腸内で５ ４％と３１％それぞれ増加した。これらの動物のデータどうりに、最近の人類の 研究でジペプチドのし一アラニルーし一グルタミンを静脈内に栄養として与える ことにより手術後の検素バランスを改善することがわかった（Ｓｔｈ］、ｅ、　 Ｐ、　、　ｅｔ　ａｌ、　。

Ｌａｎｃｅｔ　ｉ：ベージ２３１（１９８９年））。

Ｄ、ディスカッジョン ＧＬＮを含んだ経口的な食餌と静脈への栄養の投与に関するこれらの観察は、非 必須アミノ酸ＧＬＮが腸の切開術と手術によるストレス後の必須の栄養になると いう仮説と対立する。バランスのとれた洗練された経口的食餌の成分として含ま れる時には、ＧＬＮは人体組織に一般的な同化すなわち抗異化（ａｎｔｉ−ｃａ ｔａｂｏ　１　ｉｃ）の効果をもたらし、手術によるストレスに関する体重減少 の過渡期間を防ぐ。通常ＧＬＮを高い割合で使用し、ストレスに反応してＧＬＮ 抽出を増加させる組織がある腸では、ＧＬＮの粘膜への栄養上のはっきりした効 果がみられる。その結果、部分的な小腸の切開術に対しての適切な過増生反応が 増加し、腸のうつの個体数が増加して、次に絨毛の高さが増加する。全カロリー 摂取か不適切であっても、また静脈ルートを通じて全ての栄養が管理されていて も、腸の細胞充実性は増加する。

これらの効果のメカニズムは不明である。ＧＬＮは特定の生化学的経路に調節的 影響を与えたであろうし、燃料としてまたは生合成の前駆体として働き、分泌促 進剤として働き、あるいはこれら全ての機能を行ったのであろう。以下に特別な メカニズムであってもＧＬＮは腸の粘膜の成長を支持するうえで必須の栄養であ ることは以上の研究から明らかである。腸の切開術後のやせた体の質量（ｂｏｄ ｙ　ｍａｓｓ）の増加には、ＧＬＮが筋肉や他の組織に対しての同化効果も与え る可能性がある。総合すると、実験データは、ＧＬＮがストレスの続く期間中条 件付きで必須の栄養であるという仮説を支持している。ＧＬＮの内部的生成は、 不適切であり、ブラズムと組織の濃度の低下と、組織の形態学での関連した変化 を生じる。外因としてのＧＬＮはフリーＧＬＮ濃度を保存し腸の粘膜と成長全体 への影響を含む栄養上の反応をひきおこす。

（以下余白） 失】ｌ粗ユ 濃縮グルタミン非経口栄養剤使用の小腸粘膜の保存非経口栄養補給の結果、小腸 の粘膜が萎縮する（Ｊｏｈｎｓｏｎ、　Ｌ、　Ｒ，、ｅｔ　ａｌ、　、　Ｇａｓ ｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ６８　：ベージ１１７７−１１８３（１９７５年） ）。

この反応は、胃腸の分泌と栄養ホルモンの減少、そして腸皮膚の増殖に必要な特 定の栄養の相対的欠如にも関連している。ＧＬＮは小腸の主な酸素燃料であるが 、標準的経口溶剤中にはない。食餌のＧＬＮの影響を測定するため、このアミノ 酸の濃度を変えて、濃縮した経口溶剤を服用した場合の小腸の反応を測定した。

Ａ、材料と方法 条件づけされた雄のウィスタ・ネズミ（ｎ＝４２１重量２１Ｏ−２３０ｇ）に頚 静脈カテーテル挿入を受けさせて、拘束されない動物に長時間注入が可能なスイ ベル・アセンブリ（Ｓｗｉｖｅｌ　ａｓｓｅｍｂｌｙ）を取り付けた（Ｂｕｒｔ 、　Ｍ、　Ｅ、　、　ｅｔａｌ、　、　Ｊ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　２３８　：Ｈ ５９９−６０３（１９８０年））。

すべてのネズミを個々の代謝かごの中にいれ、水を飲むことだけ許可した。管理 された動物に、０．９％食塩水を注入し、ブルナ・ラット・チャウ・アト・リビ タムを与えた。３つのグループのネズミに栄養を与えた。すべての栄養溶剤は、 等窒素含有（０，９ｇ窒素／１００ｍｊ２　）　、等カロリー（９８Ｋｃａｌ／ １００ｍｊ２　）であり、等濃度の必須アミノ酸、非必須アミノ酸とぶどう糖を 含有している。各溶液の非必須アミノ酸の成分は、０．１ｇ／１００＋＋＋ｊ２ または３　ｇ　／　ｌｏＯｍ、ｆ２のＧＬＮ′ａ度を得るように調整した。経口 溶液を、４８ｍρ７２４時間の速度で注入した。尿の量と窒素排出量とを毎日測 定した。動物は、栄養注射を７日間行った後死亡し、ＧＬＮおよびアンモニア濃 度を測定するために血液を得た。腸の決められた切片から、十分な厚みの空腹節 （ｊｅｊｕｎａｌ　ｓｅｇｍｅｎｔｓ）および粘膜の標本を得た。全てのサンプ ルを計量し、ＤＮＡおよびたん白質について均等質の評価分析を行った。５μｍ の厚みの組織パラフィン切片を準備した。

空腹の柔突起の高さ、数および粘膜の厚みの測定を盲検方式（ｂｌｉｎｄｅｄ　 ｆａｓｈｉｏｎ）で行った。

Ｂ、結果とディスカッジョン 経口的に食餌を管理して与えられている場合と比較して、ｉ、ｖ、栄養を受けた すべてのネズミで、湿重量、　ＤＮＡ　、たん白質、そして絨毛の高さが減少し た。

（表ＸＩＩＩ）　ＧＬＮを含有した溶液の注入後、プラズマ濃度は増加した。Ｇ ＬＮを含まない溶液を受けたネズミと比較して、空腹の粘膜の重量は著しく増加 した。統計上反応は顕著でないのに、全厚みの空腹の重さはＧＬＮの摂取につれ て増加傾向になった。２％と３％の濃度でＧＬＮを注入後、粘膜のＤＮＡと全厚 みの空腹のＤＮＡは増加した。これらの変化は、粘膜成長の組織学的証明と一致 していた。絨毛の高さと粘膜の厚さは、投与されるＧＬＮの量に比例して投与量 依存方法では増加した。動物はすべて窒素バランスが陽性であるが、２％のＧＬ Ｎ溶液を投与されたネズミは実験中ずつと、最大限の窒素量を保持した。非経口 の溶液でのＧＬＮの含有は、動物ではｉ、ｖ、栄養を受けている時に、空腹の粘 膜の重量、　ＤＮＡ含有量および絨毛の高さを増加する。小腸の粘膜質量の増加 により小腸の機能を高め、小腸内の栄養の摂取を高めることができる。現在、標 準非経口溶液に含まれていないＧＬＮは粘膜を支持するのに必要な栄養素である 。

表Ｘｌｌｌ ０ＧＬＮ　２％ＧＬＮ　３％ＧＬＮ　チャウｆｎ＝１０１　（ｎ＝１１１　（ｎ ＝１０）　（ｎ＝＋１］プラズマＧＬＮ　８９０．３±４２．４　１１０５．８ ±９８．８”　７１７．１±４６（μｍｏｌ／Ｌ　ｌ 全厚さ重量　３０．６±０．８　３１．４±１．０　３２．０±０．６　４６． ６±３．６（ｍｇ／ｃｍ） 粘膜重量　１７．７±Ｏｊ　２０．４±１．１”　２０．３±１．０°″　２９ ．３±２．３（ｍｇ／ｃｍｌ 空腹のＤＮＡ　２５２．８±９．５　２７９．９±７．３”　３０３．１±１９ ．４”　３７０．２±３３．０（μｇ／ｃｍ　１ 粘膜のＤＮＡ　１０１．７±５．９　１３４．０±７．１””　１２５．１±７ ．６”　１７１．０±１２．７（μｇ／ｃｍ　） 絨毛の高さ　２６６、５±８．４　２９４．０±７．９＠１　３０６．４±９． ９”’　４０５．６±１７．３（μｍｌ 粘膜の厚さ　４２２．６±９．７　４４８．１±８．９”　４５２．６±１１． ５”　５８９．６±２０．９（μｍ） ”Ｐ＜０．０５．”Ｐ＜０．０２５．”叩＜０．００５対０ＧＬＮＧＬＮ＝グル タミン 叉１ｄ引旦 ５−フルオロウラシル処理後のグルタミン強化非経口栄養供給の効果 ＧＬＮ−添加非経口栄養供給が障害後の腸粘膜の保存または修復に有利であるか 否かを決定するために、動物およびヒトのＧＩ粘膜に対する顕著な毒性を有する 化学療法剤である、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）　（Ｍｕｇｇｉａ　ｅｔ ａｌ、　１９６３；　Ｒｏｃｈｅ　ｅｔ　ａｌ、、　１９７０；　Ｂｏｕｎｕｓ 　ｅｔ　ａｌ、。

１９７７；　５ｔａｎｆｏｒｄ　ｅｔ　ａｌ、、　１９７７；　Ｓｈａｗ　ｅｔ 　ａｌ、、　１９７９）の投与量（ドース）を増加しつつ処理する前およびその 直後にＧＬＮ−強化栄養を４日間投与した。

Ａ、材料および方法 １、肱血豊ユ１ ラットを準備し、本質的に前記実施例６および実施例７に記載されたように収容 し、ランダムにグループ分けしてＯまたは２ｇ　ＧＬＮ／ｄｉを含有する非経口 栄養溶液を摂取させた。

２．５−ＦＵ舌　−ＧＩ”害およびＧｌ−Ｎ已うットに前記のようにカテーテル 挿入し、麻酔回復後最低３時間後、動物群は腹腔的注射により５−ＦＵを１００ 　、１５０または２００ｍｇ／ｋｇ摂取させた。対照群は０．９％食塩水（５− ＦＵ　Ｏｍｇ／ｋｇ）の注射を受けた。各投与量群はＧＬＮを０％またば２％摂 取した。栄養注入は、４６ｍＱ　／２４の速度で５−ＦＵまたは食塩水の投与か ら４時間後に開始され、４日間継続された。これらの時間を選んだのは、実験に より５−ＦＵによる損傷からの粘膜の回復がこのステージに行われており、粘膜 の再生に対するＧＬＮの効果はこの時期に見られる蓋然性が高いことが示されて いるからである。

びその後８日間全強栄養（０または２ＧＬＮ／ｄｉ）を摂取させた。５−ＦＵを 非経口給餌の第４間口に腹腔内投与し、ラットを４日後に犠牲に供した。単一の 投与量の５−ＦＵ（１５０ｍｇ／ｋｇ）を選択したのは、死亡率を増加せずに一 般的な倦怠感と重篤な腸障害を誘起するからである。尿窒素排出を毎日測定し、 窒素平衡を計算した。

４、組　サンプリング 血液および腸組織をサンプリングし、上記各実施例に記載のように分析のために 準備した。ヘモグロビン、白血球および血小板の数を、５−ＦＵの種々の投与量 の一般的な血液学的毒性の指標（メジャー）として決分析はすべて前記実施例６ および７に記載したように行った。統計的解析は、食物および５−ＦＬＩ投与量 の双方を比較した分散の２方向解析を使用して行った。不対ｔテス１〜を使用し て２つの処理群を５−ＦＵの１つの投与量において比較した。差は、＜０．０５ のｐ値において統計的に有意とみなした。

Ｂ、結果 １．９　″の　経口紗　り 動物は５−　Ｆ　Ｕ注射後約３６時間は一般に元気であり、その時間経過後、昏 睡状態になった。実験に使用した６０匹中５匹は技術的理由（カテーテルが機能 しなかったり、注入ポンプの故障）から除外され、６匹（ＧＬＮ給餌群から２匹 、対照群から４匹）は５−ＦＵ処理のために死亡した。分析した４９匹のうち、 ２３匹はＧＬＮを０％摂取し、２６匹はＧＬＮを２％摂取した。

ａ、腸指数 空腹湿重量、ＤＮＡおよび蛋白はすべて５−ＦＵ投与後減少した。しかし、これ らの指標は、ＧＬＮを摂取した動物では無ＧＬＮ対照よりもすべて有意に高い。

この差は粘膜の指標である重量、ＤＮＡおよび蛋白についてはかなり大であった （表ＸＩＶおよびＸＶ）。顕微鏡検査により、ＧＬＮラットでは、粘膜の厚さお よ絨毛の高さの指標に反映された腸の構造の保存が実証された（表ＸＩＶおよび ＸＶ）。

ｂ、血液学 ヘモグロビン濃度は５−ＦＩＪのすべての投与量で維持されたが、用いた食餌療 法とは無関係にすべての薬物措置動物において循環白血球カウントおよび血小板 カウントの顕著な減少があった（表ＸＩＶおよびＸＶ）。

２、章　′″７−の　口給餌のヌ果 ５−ＦＵ使用後の非経口給餌を与えられたラットとは対照的に、ここでは死亡率 が著しく増加し、０％ＧＬＮ群の１２匹の動物中６匹が死亡したのに対してＧＬ Ｎ給餌群の１２匹中２匹が死亡した。この差はｐ＝ｏ、ｏｓのレベルでのみ統計 的に有意であった（フィッシャーの精密テスト）。

ａ、腸指数 空腹湿重量は、粘膜ＤＮＡおよび蛋白と同様に、ＧＬＮ給餌動物では有意に高い が、全厚ＤＮＡおよび蛋白は前記２つの群において差が無かった（表ｘ■■およ びＸＶ）。組織学的分析により、ＧＬＮ摂取動物における粘膜厚と絨毛高さの増 加に関する生化学的知見が確認さいずれの群においても血液学的パラメータに差 が検知できなかった。ヘモグロビンは維持されたが、白血球カウントおよび血小 板カウントは食餌に無関係に落ち込んだ（表ＸＩＶおよびＸＶ）　。

３、と」１旦１１見工麦圭１１）叉１ 血”ｆｆＧＬＮは、食餌中にＧＬＮが存在しないときでさえも、５−ＦＵ投与後 すべての動物において上昇した。この代謝状態において筋肉からのＧＬＮの放出 が増加することは、腸の細胞性が減少すること（および多分ある程度の５−ＦＵ 誘起腎毒性）と組み合わされて、循環ＧＬＮレベルの増加を説明することができ るかも知れない。

４４！王Ｉ 実験の最初のシリーズにおいて２％ＧＬＮを摂取した動物に窒素保持が改善され ることが証明された。

同様の変化が、ＧＬＮ添加非経口栄養を５−ＦＬＩ措置前に摂取した動物に、認 められた。毎日の窒素平衡は、ＧＬＮ給餌群においては給餌６日目までは有意に 大きかった。累積的窒素保持は、Ｏ％ＧＬＮラットに対する７３６±１４９ｍｇ であったのに比べて、２％ＧＬＮラットでは１１０６±８５Ｂであった（　ｐ　 ＜　０．０５）。

失」１糺ユ 放射線照射、化学療法および骨髄移植後のグルタミン強化非経口栄養の効果 この実験は、全身放射線照射および／または化学療法を受けつつある患者に食餌 ＧＬＮの供給が窒素平衡を変えるか、臨床結果を改善するか、および全体的回復 を促進するかについて、無作意抽出された盲検臨床試験で決定するために行われ た。

実験の人数は自己由来または同種の骨髄移植の原簿（プロトコル）に既に登録さ れた患者を含んでいた。

Ａ、材料と方法 １、息遣 患者は自己由来または同種の骨髄移植治療プロトコルに既に登録されたものから 募集した。これらのプロトコルから選ばれる資格のある患者は１８才から６０才 の男性もしくは女性で、最初の寛解（同種移植組織）における急性骨髄性白血病 （ＡＭＩ、）、第２の寛解におけるＡＭＬ　（自己由来移植組織）、骨髄性異形 成症候群、リンパ腫、再生不良性貧血および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を含む 他の白血病と診断されたものである。このプロトコルの患者は非経口栄養を必要 とし、注入のためにささげられた中心線を持っていた。彼等は正常な肝機能（全 ビリルビン　＜　３ｍｇ／ｄｉ）、正常な腎機能（クレアチニン　＜　１．２ｍ ｇ／ｄｉ）　、糖尿病の不存在（インスリンまたは経口血糖低下剤なしに血糖　 ＜　２００ｍｇ／ｄｉ）を持っていた。彼等は病気の安定期（例えば、寛解）に あった。患者の体重損失は自身の理想体重の２０％以下であった。

２、夾１口り様 患者は標準またはＧＬＮ含有ＴＰＮの２つの群の一方にランダムに分けられた。

食餌は等窒素および等カロリーであるが、標準処方としてＯＧＬＮを含有し、実 験溶液では０．５７ｇ　ＧＬＮ／ｋｇ体重／日を含有していた。患者、骨髄移植 医および実験者らには治療群に関しては伏せられた。この仕様の下では、個体の 電解質要求は臨床条件に応じて時間変動することがあり、医師は、実験者および ニュトリション　サポート　サービスと相談しながら、溶液の電解質含有量を血 中濃度と臨床状態に応じて変えてもよい。

担当医師が許可すれば実験期間中自由に経口栄養を摂取した。毎日の経口カロリ ー、蛋白、脂肪および炭水化物の摂取量を記録した。

盲検テスト溶液の投与は骨髄移植の日（０日と呼称する）の後５日以内に開始さ れた。初期平衡化期間である３８経過後、すべての尿および便の捕集を次の７日 間に各２４時間開始した。その次の７日間は捕集を行わず、続（７日間（すなわ ち、移植後はぼ３週目）に再び開始した。捕集は午後４時から午後４時までであ り、溶液袋が吊され９０名の看護スタッフにより投与される時間に対応している 。

血液を毎週抜き取り、ＧＬＮ　、グルタミン酸塩、アンモニア、アミノ酸、Ｃ− 反応性蛋白およびプレアルブミンを検査した。他の血液サンプルはＴＰＮおよび 器官機能を監視するために主治医が得た。

患者は、目隠しされない（ｕｎｂｌｉｎｄｅｄ）実験薬剤師が無作意抽出し、治 療群と対照群に分けた。これらの群は診断に対してバランスをとり、かつ、第１ の寛解におけるＡＭＬ群内でこれらの群は治療（全身照射有りまたは無し）に対 してもバランスをとった。

カロリー要求量の平均５０％である任意経口摂取の連続３日により示されるよう に、患者がＴＰＮをもはや必要としなくなった時に実験を終了した。５０％経口 摂取の３日目はＴＰＮの終りと定義される。全ての場合に、患者が最終の結果分 析に含められるのは、ＴＰＮが必要とされる期間の、必要とされるカロリーおよ び盲検溶液の蛋白の最低６０％を摂取したときだけである。プロトコルは、盲検 溶液を全く摂取せず連続５日間が経過したならばその患者は実験から除外される ことを要求している。

３、未」目１取 カロリー摂取は身長および体重に応じて評価された代謝速度の約１．５倍に設定 した。非蛋白カロリー摂取は約７０％のデキストロースと３０％の脂肪エマルジ ョンであった。蛋白摂取は１．５ｇ／ｋｇ／日であった。電解質と無機質（ミネ ラル）を血中濃度が正常範囲内になるように十分量添加した。ビタミン類をＭＶ Ｉ−１２として１０ｍρ７２４時間添加した。ＴＰＮ溶液を午後４時から午後４ 時までのスケジュールで病棟看護人により投与された。理想体重を２０％越える 患者では、カロリーおよび蛋白の必要量は年齢と性別に対する理想体重に基づい ている。

４、栗ＸＬ原 薬物治療および非ＴＰＮ溶液はすべてこれらの患者に彼等の医師が必要と見なす 所に従って投与された。患者が摂取した薬剤と溶液はすべて記録された。

５、゛自カ口の舌″および、申 患者は、身体の組成（ＴＰＮ−ＡＭＬおよび一後）、中腕筋塊（治療前および後 ）、握力強さく　ＴＰＮ−前、７日目、２１１日目よびＴＰＮ−後）、ラクツロ ース透過性（７日目、２１１日目よびＴＰＮ−後）、敗血症重篤度スコア（毎週 ）、移植片宿主病、結膜炎スコア（週３回）、安寧の全体的評価（ＴＰＮ−前お よび一後）について評価された。

評価された主要な終点はつぎのものを含む：（１）窒素平衡（１週目および２週 目）　；　（２）　３−メチルヒスチジンおよびクレアチニンの分泌（１週目お よび３週目の５−７日の間に捕集された３尿値の平均）　；　（３）　ＣＲＰ（ の最初の４−６週間の平均）；（４）身体組成；（５）平均週間敗血症スコア； （６）平均週間発熱および毎日最高温度の週平均：および（７）平均週間ＧＶＨ グレード。

評価された主要でない終点は次のものを含む：（１）単位の日（移植の時から、 Ｔ＝Ｏ）；（２）移植から再コンタミネーションまでの日数；（３）病院のチャ ージ、全抗生物質チャージ；（４）注文された抗生物質掛ける投与された日数、 すなわち抗生物質日数−ＴＰＮを与えている間のみ、かつ、既知または疑われた 感染症にたいする患者の治療に添加された抗生物質をカウントするのみ；（５） 白血球のカウントが〉５００および１，００細胞／ｃｍ３に復帰するまでの日数 ；（６）移植から絶対好中性球カウントが〉５００細胞・ｃｍ３に復帰するまで の日数；（７）ラクツロース透過性、２つの平衡実験期間の終りの２つの機会に 測定；（８）輸血された血小板および赤血球の単位：　（９）　５０％経口摂取 または排出までのＴＰＮ投与日数；および（１０）安寧感。

Ｂ、結果 ２人の患者で得られた結果を第７図および表ＸＶＩに示す。高投与量のＧＬＮと 併用するＴＰＮは移植患者の臨床状態の顕著な改善を誘起した。この治療は、負 の窒素平衡の増加を防止し、口粘膜炎の重篤度（主に化学療法により誘起された ）を低下させ、かつ、示された３つの臨床的判断基準により評価（アセス）され たように患者の全体的健康を改善した。ＧＬＮはこのクラスの重篤度の患者の健 康に一時的軽減効果を有することが結論される。

表ＸＶＩ 骨髄移植後のグルタミン添加ＴＰＮの効果標準ＴＰＮ　高投与量Ｇ　１．Ｎ 窒素平衡（ｇ／日）　−２，９＋０．６抗生物質日数１　６０　４３ 単位日数２　４６　３９ コンタミネーシヨン　までの日数　３６　２８粘膜炎スコア４　２．５　１．０ １　標準食餌療法に添加された追加の抗生物質の数量と患者に抗生物質投与を継 続した日数との積２　臨床的決定がなされ開放されるまで患者が保護的環境（空 気層流室）におかれる日数（判断基準は、ＷＢＣ＞１０００、発熱なし、口で食 事する用意ができていること、等を含む）。

３　「汚染された」個体との身体的接触が許可されるまで患者が無菌に保たれる 日数。これも臨床的決定である。

４　口粘膜炎を重篤度の増加につれＯから４のスケールで臨床的等級付け （以下余白） 夫ＪＬｆＬ堕 グルタミン強化非経口栄養の膵の外分泌に対する効果全非経口栄１　（ＴＰＮ） は腸と膵臓の萎縮（ａｔｒｏｐｈｙ）と膵臓の外分泌不全とに関連する。最近の 実験によれば、ＧＬＮを静注給餌に添加するとＴＰＮ関連腸萎縮が弱められるこ とが実証されている。さらに、以前の実験によれば、ＧＬＮは、標準アミノ酸処 方には存在しないが、膵臓の好適な酸化燃料であること、および多量の外から投 与されたＧＬＮは膵臓の外分泌組織により消費されることが示されている。しか し、Ｇ　［、、Ｎ添加静脈内給餌の膵臓に対する効果は報告されていない。この 実験は２ｇ／１００＋ｎｊ２　ＧＬＮ強化食餌（グルタミン）か等窒素、等カロ リーのＧＬＮ抜き食餌（対照）のいずれかの静脈内注入の実験室ラットの外分泌 膵臓の組成および構造に対する効果を調べた。

Ａ、材料および方法 １．１隻立ヱ１ 雄ウィスターラットを実施例６−８に記載のように飼養した。標準ブリナ・ラッ ト・チャウの食餌で飼養する間に満足な体重増加を示したラットのみを実験した 。第１の実験（ｎ　＝　３２）ではすべての動物が腸間膜小腸の６０％切除と頚 静脈カテーテル挿入を受けたのに対して、第２の実験の動物（ｎ　＝　２４）は 頚静脈カテーテル挿入とジャム小腸切除とを受けた。チャウ飼養動物（ｎ＝１． ８）は対照として含めた。

これらの手術手順は実施例６に記載のように行った。実験した６９匹のラットの うち、チャウ飼養群から除外されたラットは無かったが、ＴＰＮ群からは１３匹 のラットが除外された。これはカテーテル敗血症、吻合漏れ、腸閉塞、ポンプ機 能不全またはカテーテル閉鎖のためである。

２、失りｌ三」−１基 小腸切除をしまたはせずにカテーテル挿入した後、動物を無作意抽出し、標準ラ ット・チャウを経口的に（チャウ）、標準非経口栄養液をＧＬＮ無しく対照）に 、または２％ＧＬＮ強化溶液（グルタミン）を、一定の静脈内注入により７日間 摂取させた。

静脈内食餌はラットを飼育するのに必須のすべての栄養を提供した（Ｐｏｐｐ　 ｅｔ　ａｌ、、　Ａｍｅｒ、　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｎｕｔｒ。

３６：１１１９−１１２８（１９８２））。これらの溶液は調製され無菌状態に 保たれた。非経口食餌は等カロリー（１，１３ｋｃａｆ２／＋ｒｌ）等窒素（９ ６ｍｇ／ｍ℃）であり、非必須アミノ酸の組成のみが相異していた。

回復後、ラットを代謝ケージ内に個別に収容し、カテーテルは、栄養溶液の連続 注入の間然制約の運動を可能にするスイベル装置（インステック・ラボラトリー ズ社）に取り付けられた。外科手術後の最初の１６時間に動物は０．９％正常食 塩水を１００７時間の速度で摂取したが経口摂取は無かった。すべての動物が手 術後１日目から実験の終りまで水道水への自由接近が許された。手術後１日目に ＴＰＮ使用された動物は対照またはＧＬＮ強化食餌２４ｍ　Ｑを摂取しグルコー ス注入に適応することを許された。手術後２日目に始まり、実験の残りの期間中 継続して、十分な量（４８ｍβ７日）の非経口的食餌が投与された。チャウ飼養 された動物は、常に与えられた飼料をすべて消費したが、これらの動物はカロリ ー濃度においてＴＰＮ飼養ラットの２４時間カロリー摂取とほぼ等しい量のチャ ウを与えられた。このように、チャウ飼養された動物は最初の２４時間はブリナ ・ラット・チャウ８ｇをその後は１６ｇ７日を与えられた。これらの動物の静脈 カテーテルは手術後２日目に閉鎖された。手術後２日目から毎日尿を酸性化され たウェル内に捕集し、アリコートを酸性化された容器内に一２０℃で貯蔵した。

尿の体積を毎日記録した。

３、組　の′　および　１ 動物を手術後８日目の実験の終りに再度体重測定し、ベンドパルビタール（４５ ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）で麻酔し血液を心臓からヘパリン化シリンジ内に抜き取っ た。

全血ＧＬＮおよびグルタミン酸塩濃度をこれらのサンプルについて前記の方法に 従い、逆相高速液体クロマトグラフィを使用して測定した（Ｓｍｉｔｈ、　Ｒ， Ｊ、　ｅｔ　ａｌ、。

Ｊ、　Ｌｉｑ、　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　８：１７８３−１７９５（１ ９８５））。

放血後、膵臓の小片（３Ｘ３ｍｍ）を牌臓部と背部との接合においてこの腺の中 央部分から直ちに切除し、２．５％グルタルアルデヒド緩衝溶液中に固定し、組 織学のために処理するまで４℃で貯蔵した。膵臓の残部は注意深く切開し、隣接 する腸間膜の脂肪組織およびリンパ組織から分離した。膵臓切除は盲検様式で行 った。膵臓を秤量し、水冷蒸留水に希釈（１：１０、重量／体積）し、ポリトロ ン組織ホモジナイザーで３０秒間ホモジナイズした。ホモジネートを３０秒間超 音波処理し、ＤＮＡ　、蛋白および酵素含有量を分析するまで一７０℃で貯蔵し た。肝臓は切除し、秤量し、９０℃で７２時間乾燥して乾燥重量を測定した。

４、五工ヱヱｌ 各日からの尿のアリコートをプールして累積的日別窒素平衡を評価した。酸性化 された尿素サンプルの窒素含有量をマクロキエルダール技法を使用して決定した 。膵臓のホモジネートの蛋白含有量をローリ−法（Ｌｏｗｒｙ、０．Ｈ，ｅｔ　 ａｌ、、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、１９３：２６５−２７５　（１９５１）） により測定し、ＤＮＡをバートンの方法（Ｂｕｒｔｏｎ、　Ｋ、Ａ、、　Ｂｉｏ ｃｈｅｍ、　Ｊ、　６２：３１５−３２２（１９６５））の変法を使用して測定 した。各膵臓ホモジネートの一部を蛋白濃度２００μｇｍ／ｍ　１２まで０．０ １％牛血清アルブミン含有バッファで希釈し、酵素活性を決定するまで一２０℃ で貯蔵した。希釈サンプルのアミラーゼ活性をバーンフェルト法（Ｂｅｒｎｆｅ ｌｄ、　Ｐ、、　Ａｍｙｌａｓｅ：ａｌｐｈａ　ａｎｄ　ｂｅｔａ、　Ｉｎ：　 Ｃｏｌｏｗｉｃｋ　ＳＰ、　ｅｄｓ、　Ｋａｐｌａｎ　ＮＯ。

Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｄ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、　Ｖｏｌ、１．　Ａｃａｄｅｍ ｉｃ　Ｐｒｅｓｓ。

ＮＹ、　１４９−１５８（１９５５））の変法を用いて測定し、トリプシン活性 をハメル法（Ｈｕｍｍｅｌ　Ｂ、Ｃ，、Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｐｈｙｓｉｏｌ、　３７（１２）：１３９３−１３９９（１９５９））にりより 決定した。トリプシノーゲンの活性化はサンプル４００μｍをぶたエンテロキナ ーゼ０．０４９２μｇと３７℃で４時間インキュベートすることにより行われた 。リパーゼ活性はコダック・エクタケム７００アナライザでモーフの２点速度法 　（Ｍａｕｃｋ、　Ｊ、Ｃ，ｅｔ　ａｌ、、　Ｃｌ１ｎ、（１９８４））を使用 して測定した。酵素活性は１分間当りの生成物マイクロモルのユニット（Ｕ）で 表わされている（　Ｉ　ＫＵ＝　１０３ユ膵臓組織を４℃で２．５％燐酸グルタ ルアルデヒド・バッファ中で固定し、１％四酸化オスミウム中で室温で２時間後 固定した。この組織標本をアルコール昇級列中で脱水しアラルダイトに包埋した 。光学顕微鏡検査のため、１μ厚のセクションを１．０トルイジンブルーで染色 した。ＬＫＢツバ・ウルトラミクロトームを使用して電子顕微鏡検査用の６００ −８００厚のセクションを調製した。これらのセクションをウラニルアセテート および酢酸鉛で染色し、次いでフィリップス３０１透過型電子顕微鏡で検査した 。電子顕微鏡で房状細胞を撮影し、最終倍率２７９３Ｘおよび７１２７Ｘで実用 プリント結果を平均上この平均の標準誤差（ｓ、　ｅ、　ｍ、　）で表す。

膵臓の湿重量、ＤＮＡおよび蛋白含有量は全膵臓当りおよび体重１００ｇ当りで 表す。膵臓の重量および蛋白含有量は細胞の大きさの指標としてＤＮＡのｍｇ当 りでも計算した。理想的には、これらの指標について、大きさが１００ないし３ ００ｇの間の雄ウィスターラットで全体重と全膵臓湿重腸との間には線形関係が 存在するので、体重に対して較正した後に群同士の間で比較がなされた。膵臓酵 素活性（ユニット／ｍｇ蛋白）は全課含有量としておよび比活性（ユニット／ｒ ｎｇ膵臓ＤＮＡ　）として表す。チモーゲン（酵素原）顆粒の平均直径分布はウ ェイベル法（Ｗｅｉｂｅｌ、　Ｅ、　Ｒ，ｅｔ　ａｌ、。

Ｐｒ１ｎｃｉｐ］ｅｓ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ｏｆ　Ｅｌｅｃｔｒｏ ｎＭｉｃｒｏｓｃｏｐｙ；　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ 、　Ｖｏｌ、３．　ｅｄ。

Ｍ、　Ａ、　Ｈａｙａｔ、　Ｖａｎ　Ｎｏ５ｔｒａｎｄ　Ｒｅ１ｎｈｏｌｄ、　 ＮＹ（］９７３））に従って計算した。

分散の２方向分析を使用してＧＬＮと腸切除の効果を評価した（Ｗｉｎｅｒ、　 Ｂ、　Ｊ、　５ｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓｉｎ　Ｅｘｐｅｒ ｉｍｅｎｔａｌ　Ｄｅｓｉｇｎ（２ｎｄ　ｅｄ、）　ＭｃＧｒａｗＨｉｌｌ、　 ＮＹ（１９７１，））。分散分析が有意の主要効果を示したら、ＧＬＮ強化食餌 を与えられた動物とそれらの適当な対照との間の計画された事後比較のために不 対を検定が使用された。膵臓萎縮の程度を実証するためにチャウ飼養された動物 が含められているが、全体治療効果の分析には含められていない。差は確率（ｐ ）値が０．０５未満のときは統計的に有意とみなされた。

Ｂ、結果 体重および窒素平衡の変化は、小腸を切除しまたはしなかった、ＧＬＮ飼養され た動物および対照動物と同様であった（表ＸＶＩＩ）。小腸切除を受けた動物で は、血漿ＧＬＮ濃度（１１４３±７５対８９０±４１、ＧＬＮ対対照。

ｐ＜０．０５）および血漿グルタミン酸塩濃度（１７７±１２対１４４±８、Ｇ ＬＮ対対照、ｐ＜ｏ、０５）はＧＬＮ群では対照群よりも有意に高か・った。Ｇ ＬＮ飼養動物と対照動物との間には他には有意の差は見られなかった。

２、Ｉ！二上皿 １ＰＮ飼養動物は、チャウ飼養動物と比べて有意に小さい平均膵臓湿重量（３３ −４３％）、低い蛋白含有量（２５−５８％）およびＤＮＡ含有量（１４−３０ ％）を持っていた（表ＸＶＩＩｒ）。

非切除動物では、ＧＬＮ注入は、対照と比べて体重１００ｇ当りの膵臓重量（２ ２％）　、ＤＮＡ（３２％）および蛋白（２４％）の増加と関連していた。これ らの差は膵臓重量（ｐ　＜　０．０５）およびＤＮＡ　（ｐ　＜　０．００５） に対してはそれぞれ有意であったが膵臓蛋白（ｐ　＝　０．０６）に対しては有 意ではなかった。これらの動物では、膵臓蛋白／ＤＮＡ比および膵臓重量／ＤＮ ＡＤＮＡ含有量なかった（表ＸＶｒＩＩ）。

小腸６０％切除を受けＧＬＮ飼養された動物の膵臓は対照と比べて体重１００ｇ 当り全膵臓蛋白が大きかった（３１％、ｐ　＜　０．０５）。全ＤＮＡ含有量、 膵臓重量／ＤＮＡ比および蛋白／ＤＮＡ比は有意の差が無かった。ただし、後者 はＧＬＮ群では２０％大きかった。

３、膵】冒ｌ！ ＴＰＮ飼養された動物はチャウ飼養された動物に比べて全膵臓酵素活性が低下し ていた（表ＸＩＸ）。切除動物では、全膵臓トリプシノーゲン（ｐ＜０．００５ ）および１〜リブシノーゲン比活性（ｐ　＜　０．００５）はＧＬＮ群では対照 群よりも有意に大きかった。酵素顔料または比活性にはＧｌ、Ｎ飼養された動物 と対照動物鍍の間で他に差は無外分泌性膵臓組織およびランゲルハンス島は光学 顕微鏡下ではすべての動物で正常に見えた。ＧＬＮ強化食餌を与えられたラット に見られる体重または蛋白含有量の増加を説明する肺臓炎または浮腫の証拠は無 かった。非切除ＴＰＮ飼養された動物に対するチモーゲン顆粒の平均プロフィル 直径（ｍｅａｎ　ｐｒｏｆｉｌｅ　ｄｉａｍｅｔｅｒ）はチャウ飼養されたラッ トにおけるよりも有意に小さかった（　ＧＬＮに対して３．８８±０．０６、対 照に対して３．８０±０．０５、および対照に対して４．６９±０．１０．１方 向ＡＮＯＶＡによりｐ＜０．０５）。グルタミン群および対照群は有意の差が無 かった。同様に配向された房状単位のプロフィルを比較すると、細胞体積密度、 チモーゲン顆粒の数、およびチモーゲン顆粒により占められる細胞体積の％面積 の増加が対照動物に比べＧＬＮ飼養された動物において明らかであった。

５１．±Ａシリーズからの汗、果悲立逝ＧＬＮ−強化食餌を与えられた動物また は小腸切除を受けた動物は有意に血漿中のＧＬＮ（ｐ　＜　０．０２）　ａ度お よびグルタミン酸塩（ｐ　＜　０．０２）濃度が上昇していた。ＧＬＮ注入は累 積的窒素平衡に影響しなかったが腸切除は有意の負の効果を示した。膵臓重量は （ｐ＜０．０００１．）　、蛋白含有量（ｐ＜０．００２）、およびＤＮＡ含有 量（ｐ　＜　０．０００４）はＧＬＮを与えられた動物では有意に高（、これら の効果は腸切除とは無関係であった。腸切除は全膵臓蛋白含有量（ｐ　＜　０． ００６）および膵臓蛋白／ＤＮＡ比（ｐ　＜　０．０５）を有意に低下させた。

ＧＬＮ飼養された動物はトリプシノーゲン含有ｆｆ１（ｐ＜　０．０２）および リパーゼ含有量（ｐ　＜　０．０３）が有意に増加している。全アミラーゼ含有 量および全酵素比活性はＧＬＮ注入により影響されなかった。腸切除はトリプシ ノーゲン、アミラーゼおよびリパーゼの全含有量および各比活性に深甚な負の効 果（ｐ　＜　０．０００１１があった。

結論として、ＧＬＮ添加ＴＰＮは、対照の食餌を摂取した動物において、膵臓重 量（１４−２２％）　、ＤＮＡ含有量（１２−３２％）および蛋白（２４−３１ ％）の喪失を有意に減少させた。全体のＧＬＮ飼養された動物は全膵臓トリブシ ノーゲン含有量（５３％）およびリパーゼ含有量（３０％）を有意に増加させた が、酵素の比活性には差が無かった。下がって、ＧＬＮはＴＰＮの間膵臓外分泌 組織のための重要な栄養物である。静脈内栄養補給中の膵臓に対するＧＬＮの栄 養効果は臨床的に重要な意味を含むものである。

失ｌヱリ」 経小腸基礎食餌を与える間グルタミンは膵臓萎縮を防止する。

生体外（インビトロ）実験は、ＧＬＮが膵臓の重要な呼吸燃料であるがＧＬＮを 添加した経小腸食餌の、膵臓の構造および機能に果す役割が未知であることを実 証している。標準的な、ＧＬＮ添加された基礎食餌の、手術ストレスに続く膵臓 および小腸の成長に対する影響は、雄ウィスターラット（ｎ＝２５、体重１９５ 〜２１０ｇ）で調べた。中央腸間膜小腸の６０％切除および胃フィステル形成の 後、ラットは無作為抽出されチャウ（ｃｈｏｗ）あるいは標準的基礎食餌の連続 注入（ＣＯＮ）あるいは等窒素１等カロリーの２ｇｍ／１００＋＋＋ｆ２ＧＬＮ 添加食餌（ＧＬＮ）を受けた。上記２つの基礎食餌は、それらの非必須窒素源の みが異なっている。実験期間中、毎日採尿が行われ、窒素平衡が調べられた。ラ ットを犠牲に供したとき、体重が調べられ、ＧＬＮ　、グルタンミン酸塩（ＧＬ Ｕ）およびアンモニアのために血液が採取された。肝臓。

小腸および膵臓を切り取り、それら重さを秤量し、また、これらは、そのＤＮＡ およびタンパク質の含有量を分析し、組織研究用に準備した。肝臓および膵臓を 脂肪および酵素の含有量が分析された。上記分析等のデータの一部は、下記の表 ＸＸにおいて平均±ｓｅｍで示される。

（以下余白） 五び 膵臓　血漿 １００ｍ　−肝１１−　（ｍｏｌｅｓ／Ｌ）処置ｎｔｉ　二　〃夕宣　１壮匣　 亘　」北Ｃｏｎ　８　３４３±１９　２．７±０．２　６８±５　１０．４±０ ．４　９７６±６０　１６５±１２ＧＩＪＩ　９　４３９±１５”　３．３±０ ．３　９５±９”　８．７±０．４“　１１４８±１０４　１０９±１４Ｃｈｏ ｖ　８　５４７±３８＃　２．２±０．２　９４±７”　８．８±０．８’　７ １８±６１＃　ｌｏｔ±５＃帽Ｐ＜０．０５対ＣＯＮ：　＃：Ｐ＜０．００５　 ｈつ対ｃｏＮマタはＧＩＪＪ　（ＡＮＯＶＡ）上記基礎食餌を与えると、チャウ を与えた動物の膵臓の重さが減少した。ＧＬＮは、膵臓の重さの減少を顕著に弱 め、膵臓のタンパク質含有量を増加させた。また、ＧＬＮはＣＯＮ群と比較して 肝臓の湿重量の増加を防止した。ＧＬＮ群のデータとＣＯＮ群のデータを合わせ ると、膵臓の重量およびＤＮＡは血漿中ＧＬＮの濃度ではなく血漿中のＧＬＬＩ 濃度（ｐ＜　０．０３）に関係づけられた。それは体重および窒素平衡がＧＬＮ 群とＣＯＮ群との間では同様であるため、ＧＬＮの効果は手術後期間の膵臓塊に 異的であると思われる。これらの知見は、ＧＬＮは、手術ストレスに続く胃腸組 織のための条件的必須栄養物であるという仮設をさらに裏付けるものである。

夫１１Ｌ口 グルタミン強化被経口栄養は、５−フルオロウラシルにより誘起される腸壁への ダメージを抑制する。

ラクツロースは非代謝性の糖であり、この糖は、胃腸管経路で十分には吸収され ない。炎症性腸疾患のような胃腸の病気では、ラクツロースはその粘膜の間隙を 通って吸収され、それによってラクツロースは尿中に排出される。従って、尿中 のラクツロースの量は、腸の粘膜障壁を通る漏出の尺度である（ｍｅｎｚｉｅｓ 。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｓａｃ、　Ｔｒａｎｓ、　５５０：１０４２−１０４７（１ ９７４））。

ラットを、上記実施例８で述べた５−フルオロウラシルで処置した。１００　ｍ ｇ／ｍ℃の等浸透圧液としたラクツロース２ｍＪ２を強制飼養によって注入し、 その後２４時間にわたって採尿し、凍らせた。尿中ラクツロースは、Ｚｉｅｇｌ ｅｒ等（Ａｒｃｈ、　Ｓｕｒｇ、　１２３：１３１３−１３１９（１９８８）） に記載のように、酵素的に決定された。

１回の５−ＦＵ油注入よる処置は、２４時間にわたってラクツロースの腸透過性 を増加することが解った。この透過性の増加は処置後２４時間から４８時間の間 に頂点に達した。ＧＬＮに強化ＴＰＮを摂取した動物は、標準的ＴＰＮを与えら れた動物に較べ３日間にわたって腸透過性を顕著に減少させた。例えば、５−Ｆ Ｕの注入後の４８時間から７２時間における２４時間のラクツロースの排出は、 ＧＬＮ措置ラットにおいて３２から１７μｍｏｌｅｓに減少した。

ＧＬＮは、化学療法薬の使用に供なう透過性の上昇から腸管壁を腸の透過性の増 加を防ぐことが結論される。この効果はＧＩ経路を介した感染を防ぐ上で最重要 なものと期待され、また、上記実施例９に記載のように、骨髄移植を受けた患者 のより急速な回復におそらく寄与している。

支１皿月 グルタミンはＴＰＮの　湘交　を　するラットには、実施例１０（材料と方法、 セクション２）に記載したように実験室のチャウ、　ＴＰＮあるいはＧＬＮ添加 ＴＰＮのいずれかが与えられる。処置開始７日後、動物を犠牲に供し、肺臓、胸 腺および腸間膜リンパ節を採取した。標準的な技術（Ｋｌｅｉｎ、　Ｉｍｍｕｎ ｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ　５ｃｉｅｎｃｅ　ｏｆ　５ｅｌｆ−Ｎｏｎｓｅｌｆ　Ｄｉ ｓｃｒｉｍｉｎａｔｊｏｎ。

Ｗｉｌｅｙ−１ｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、　１９８２参照）を用いて、これらの 組織から細胞懸濁液を調製した。ミトゲンの存在による生体外でのリンパ球増殖 反応が、この分野では良く知られた方法を用いて行われた。チャウ群と比較する と、ＴＰＮ群は１週間で５０％リンパ球の反応性を著しく減少させた。このよう な抑制は、非経口的溶液におけるＧＬＮの存在によって逆転された。すなわち、 ＧＬＮ処置がなされたラットは、ＴＰＮ動物と対照チャウ飼養ラットの中間のリ ンパ球反応性を示した。

従って、非経口的溶液にＧＬＮが存在すると、ＧＬＮの存在しないＴＰＮによっ て生じる免疫抑制状態が著しく緩和される。上記実施例１２で述べたような腸粘 膜障壁の破壊は、免疫機能低下（ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｄ　ｉｍｍｕｎｅｆｕｎ ｃｔｉｏｎ）と結合してＴＰＮを与え続けらえた動物の感染に対する影響の受け 易さを増大させる。この影響の受け易さは、（免疫機能低下による）同様に腸管 を通って侵入する細菌や他の微生物に対してだけでなく他の経路によるものい対 影響の受け易さもおそらく増大させるであろう。ＧＬＮの添加されたＴＰＮは、 従ってい（つかの独立した機序によって寄生防御を促進することを可能にする。

骨髄移植を受けた患者の改善された感染状態（上記実施例９参照）は、以上のよ うなＧＬＮの“寄主に有利な（ｐｒｏ−ｈｏｓｔ）”作用の強力な証拠を提示す るものである。

本発明は十分に述べられたので、本発明の要旨および範囲から逸脱せずかつ過度 の実験を要さずに、広い範囲の均等のパラメータ、濃度および条件で、同様の実 施が行われ得ることは当業者にとって明らかであろう。

本発明は、その特定の実施例に関連して説明したが、さらなる変形が可能である ことは理解されよう。

本出願は、本発明のあらゆる変形、利用あるいは改造を範囲とするものであり、 これらは一般に、本発明の原理を伴ない、本発明の分野における公知あるいは慣 用的実施の範囲内にあるような本開示からの逸脱また、添付された請求の範囲に おいて示される構成要件に適用されるような本開示からの逸脱を含むものである 。

窒木才氏惠ＪＬの馬ｄ卓に７し７の植シ系」ξイ愛１窒系摂双斌（ｇ／ｋｇ・旧 ） ・衰壜、木 ゐ　フシアミン＋グ）レグミン ＢＣＡＡ　流２ｈ　、　Ｐｍｏｌ／今　・ｋｇ６峙閘ＢＣＡＡ流主 窒徹處主、　、ｃｚｍｏ！／介−ｋｇ 蛎 ６時間窒素流出 累積的窒素キ衡 ＦＩＧ、７ 手続補正書（方式） 平成４年９月３０日

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．動物の病理的な腸の透過性を処置する方法であって、前記動物の正常時の食 餌に含まれるより多い、治療有効量のＧＬＮ、または該ＧＬＮの特徴を保持する 機能性類縁体を、前記動物に投与することを特徴とする方法。
2. ２．前記腸の透過性は、本質的に静脈栄養供給に伴って起きるものであることを 特徴とする請求の範囲第１項に記載の方法。
3. ３．前記腸の透過性は、本質的に異化機能障害に伴って起きるものであることを 特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
4. ４．前記異化機能障害は、外科手術，敗血症，火傷，カロリー消耗，化学療法， 放射線治療または治療されていない糖尿病の結果起きるものであることを特徴と する請求の範囲第３項記載の方法。
5. ５．前記動物はヒトであることを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
6. ６．動物の膵臓萎縮を処置する方法であって、前記動物の正常時の食餌に含まれ るより多い、治療有効量のＧＬＮ、または該ＧＬＮの特徴を保持する機能性類縁 体を、前記動物に投与することを特徴とする方法。
7. ７．前記膵臓の萎縮は、本質的に静脈栄養供給に伴って起きるものであることを 特徴とする請求の範囲第６項に記載の方法。
8. ８．前記膵臓の萎縮は、本質的に異化機能障害に伴って起きるものであることを 特徴とする請求の範囲第６項記載の方法。
9. ９．前記異化機能障害は、外科手術，敗血症，火傷，カロリー消耗，化学療法， 放射線治療または治療されていない糖尿病の結果起きるものであることを特徴と する請求の範囲第８項記載の方法。
10. １０．前記動物はヒトであることを特徴とする請求の範囲第６項記載の方法。
11. １１．動物の免疫機能の低下を処置する方法であって、前記動物の正常時の食餌 に含まれるより多い、治療有効量のＧＬＮ、または該ＧＬＮの特徴を保持する機 能性類縁体を、前記動物に投与することを特徴とする方法。
12. １２．前記免疫機能の低下は、本質的に静脈栄養供給に伴って起きるものである ことを特徴とする請求の範囲第１１項に記載の方法。
13. １３．前記免疫機能の低下は、本質的に異化機能障害に伴って起きるものである ことを特徴とする請求の範囲第１１項記載の方法。
14. １４．前記異化機能障害は、外科手術，敗血症，火傷，カロリー消耗，化学療法 ，放射線治療または治療されていない糖尿病の結果起きるものであることを特徴 とする請求の範囲第１３項記載の方法。
15. １５．前記動物はヒトであることを特徴とする請求の範囲第１１項記載の方法。
16. １６．骨髄移植による治療された動物の回復を促進する方法であって、前記動物 の正常時の食餌に含まれるより多い、治療有効量のＧＬＮ、または該ＧＬＮの特 徴を保持する機能性類縁体を、前記動物に投与することを特徴とする方法。
17. １７．前記動物はヒトであることを特徴とする請求の範囲第１６項記載の方法。
18. １８．前記ＧＬＮ、または該ＧＬＮの特徴を保持する機能性類縁体の経口による 前記投与の量は、１日に、体重１キログラム当たり０．２ないし３．０グラムの 率であることを特徴とする請求の範囲第１項ないし第１７項のいずれかに記載の 方法。
19. １９．前記ＧＬＮ、または該ＧＬＮの特徴を保持する機能性類縁体の経口による 前記投与の量は、１日に、体重の１キログラム当たり０．３ないし２．５グラム の率であることを特徴とする請求の範囲第１８項に記載の方法。
20. ２０．前記ＧＬＮ、または該ＧＬＮの特徴を保持する機能性類縁体の経口による 前記投与の量は、１日に、体重１キログラム当たり０．４ないし２．０グラムの 率であることを特徴とする請求の範囲第１９項に記載の方法。