JPH05500856A - 改良されたセルロースクロマトグラフィー支持体 - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 Ｔ改良されたセルロースクロマトグラフィー支持体２本発明は、改良された未架 橋セルロースクロマトグラフィー支持体に関し、特に、実質的に球状の高密度セ ルロース粒子を含む支持体に関する。　本発明はまた、このような実質的に球状 の高密度セルロース粒子を製造する方法に関し、特に、液体キャリアーおよび乳 化剤の安定なエマルジョン中のビスコースから球状セルロース粒子を製造する方 法に関する。 史呪ｑ豊且 セルロースおよびセルロース誘導体は、クロマトグラフィー支持体、およびポリ マーキャリアーとして用いられている。 一般的なりロマトグラフィーの用途には、分析用および調製剤カラムクロマトグ ラフィー、薄層クロマトグラフィー、イオン交換、ゲルクロマトグラフィーおよ びキレート化およびアフィニティー吸着剤が含まれる。　さらに、セルロース粒 子は、医薬品、化粧品、および食品の充填剤および増量剤として用いられる。　 セルロースは天然に豊富に産出して利用可能であり、様々な公知の誘導体化法に より理想的なりロマトグラフィー支持体となるが、一般的には、い（つかの欠点 を有している。 最も顕著な欠点は、機械的に不安定であり、流動性に乏しいことである。 セルロースは、結合したグルコースモノマーからなる天然に存在するポリマーで ある。　天然状態では、隣接するポリマー状グルコース鎖には、広範囲にわたっ て水素結合している領域もあれば、それほど水素結合していない領域もある。　 比較的よく水素結合している領域は、一般に「微結晶領域」と呼ばれるのに対し 、さほど水素結合していない領域はアモルファス領域と呼ばれる。　クロマトグ ラフィーへの２用に際しては、一般には、アモルファス領域の繊維状または微粒 状のいずれかの形態を有するセルロースを利用することが望ましい。　このよう な繊維状および微粒状材料は、一般には、鎖間のアモルファス領域を優先的に減 少させ、微結晶領域を増大させるような、塊状セルロースの限定的酸加水分解に よって調製される。　繊維状および微粒状セルロース組成物は、いずれも一般に は、微結晶セルロースと呼ばれる。 微結晶セルロースを調製するためによく用いられる方法では、凝集した粒子が得 られるが、クロマトグラフィーに適した材料を得るには粉砕および粒径分離を必 要とする。　さらに、個々の微結晶セルロース粒子は、比較的不規則な形状であ り脆い。 微結晶セルロースの詰まり易く、緻密になる傾向は、この種の材料をクロマトグ ラフィーのベッドまたはカラム用途に悪影響を及ぼす。　さらに、これら材料は 高い圧力を受けた場合、壊れ易（、微粉を生じる傾向がある。　これらの欠点は 、許容できない流動特性および乏しいクロマトグラフィー分離をもたらすもので ある。 セルロースを架橋ビーズまたは球状粒子の形態で用いれば、微結晶セルロースか らなるクロマトグラフィー支持体の乏しい流動特性を部分的に解消し得る。　し かしながら、セルロースを公知の方法を用いてビーズにする場合、セルロース粒 子が多孔性であり、またセルロース粒子の大きさに多様性があることから、ベッ ドまたはカラムに充填して用いたときに、ビーズが機械的に破壊される。　機械 的安定性は架橋剤を添加することによって向上できるが、架橋剤は、支持体の費 用を押し上げ、製造工程を複雑化し、支持体用途の一般的用途を限定することに なる。 さらに、水溶液中に入れた場合、多孔性のセルロース粒子は一般には著しくＮＩ ｍする。　膨潤した多孔性セルロースビーズは、溶出用緩衝液および溶媒のイオ ン強度の変化に対する感受性を有する。　その結果、従来の膨潤性セルロース支 持体は、特定の狭い範囲内のイオン強度で用いなければならない。　この特定の イオン強度の範囲を超えると、膨潤したセルロース粒子は、緻密になるか、ある いは収縮するので、流動性が非常に乏しくなり、クロマトグラフィーの分離が乏 しくなるか、あるいは全く行われなくなる。 球状のセルロース粒子を調製するいくつかの方法が公知である。　セルロースビ ーズを調製するある方法では、ビスコースをノズルから高速で酸性の紡績凝固浴 中へ押し出す。　他の方法では、界面活性剤を含む有機溶媒の分散液を形成し、 この分散液を酸溶液中に注ぎ込むことによって凝固させる。　これら方法は、可 変で制御できない粒径を有する多孔性セルロース粒子を生成し、不規則で変形し た形状の望ましくない凝集体、集塊体、および団塊体を形成する。　これら問題 点は、変化している流体力学的条件下でセルロースが凝固することに起因すると 考えられる。　第３の手法では、撹拌した比較的低粘度の非水混和性液体中の低 分子セルロースキサンチン酸ナトリウムの水性懸濁液を加熱してセルロース粒子 を熱的に形成する。　この方法は、ビーズの形成に比較的一定の流体力学的環境 を用いているが、セルロースキサンチン酸ナトリウムの熱分解によって、広範囲 の粒径を有する多孔性粒子が得られる。 広範囲のｐｌ（値およびイオン強度において用いることができ、しかも均一な粒 径および形状を有する粒子を提供する再現性のある一般的な方法によって容易に 調製でき、機械的安定性に優れた球状の高密度セルロースクロマトグラフィー支 持体が必要とされている。 茜囲９叉丘 上記問題点の１つまたはそれ以上を解消するのが本発明の目的である。 本発明は、約０．６５〜０．８５ｇ／ｍｌの乾燥嵩密度および約２００　ミクロ ン未満の範囲内の平均粒径を有し、水溶液または有機溶液中で本質的に非膨潤性 であり、実質的に球状の高密度セルロース粒子からなるセルロースクロマトグラ フィー支持体を含む。 好ましくは、セルロース粒子は、さらに、ｉ）少なくとも３．ＯＭまでの塩化カ リウムおよび８Ｍまでの尿素それぞれの溶液を含む様々なイオン強度および水素 結合開裂能を有する溶液中における増大した安定性；ｉｉ）約３〜１２のｐＨ範 囲における安定性：ｉｉＤ水性溶媒および有機溶媒の両方との混和性；ｉｖ）ク ロマトグラフィーリガンドによって修飾される能力；およびＶ）カラムクロマト グラフィー支持体として用いた場合の優れた流速によって特徴付けられる。 本発明の球状セルロース粒子は、クロマトグラフィーリガンドを高い添加割合、 すなわち粒子の質量に対するリガンドのモル数として定義される添加割合、で粒 子に共有結合させることによって化学的に修飾してもよい。　好ましいリガンド には、共有結合した極性および非極性リガンドが含まれる。　好適なリガンドに は、アミノエチル、ジエチルアミノエチル、エビクロロヒドリントリエタノール アミン、ポリエチレンイミン、メチルポリエチレンイミン、ベンジルジエチルア ミンエチル、ジエチル−［２−ヒドロキシプロピル］−アミノエチル、トリエチ ルアミノエチル、スルホプロピル、カルボキシメチル、スルホネート、４級アン モニウムエチル、抗原および抗体を含まれる。　特に好ましいリガンドは、ポリ エチレンイミンであり、その修飾支持体はイオン交換支持体として用いることが できる。 また、本発明は、実質的に球状の高密度セルロース粒子を製造する方法も含み、 その製造方法は、ｉ）少なくとも１つの乳化剤および液体キャリアーの存在下で 、エマルジョン形成の間にビスコースを熱的に分解しないような前記ビスコース の温度で、工業用ビスコースの安定なエマルジョンを形成し、ｊｉ）均一なサイ ズの変形可能な粒子の分散液を生成するために、酸の非存在下、ある一定時間に わたって、定常的流体力学的条件下で絶えず撹拌しながらビスコースからセルロ ースを再生し、１ｉｉ）部分的に硬化し始めている変形可能な粒子の前記分散液 を、前記エマルジョンから前記液体キャリアーを部分的に抽出させるのに適当な 溶媒と接触させ、およびｊｖ）変形可能な粒子を硬化させる工程からなる。　エ マルジョンを形成し、セルロースを再生するに好ましい温度は３０’Ｃ未満であ り、最も好ましくは約２０〜３０℃の温度である。　ビスコースからセルロース の再生は、好ましくは、約６〜１８時間かけて行う。　適当な液体キャリアーは 、大気温度下、約１００ｃＳｔより高い粘度を有する。 好ましい高粘度液体キャリアーは、大気温度において標準技術によって測定した 場合、１５０ｃＳｔより高い粘度を有する：最も好ましいキャリアーは、約１， ２００の平均分子量と、約２０〜３０″Ｃの温度において約１６０ｃＳｔの粘度 を有するポリプロピレングリコールである。 球状粒子は、部分的に硬化した粒子を、好ましくは、エタノール中に３０％の酢 酸を含有する溶液、プロパツール中に３０％のプロパン酸を含有する溶液、また はエタノール中に２０％のリン酸を含む酸性アルコール溶液中で撹拌することに より、さらに硬化させてもよい。 本発明の他の目的および利点は、本発明の実施例の開示を含む下記の詳細な説明 を考察すれば明らかである。 図面の簡単な説明 第１図は、粒径約２５〜４５ミクロンの球状セルロース粒子の顕微鏡写真（倍率 ５００倍）である。　第２図は、機械的に半分に切断されたーセルロース粒子の 顕微鏡写真（倍率２．０００倍）である。　第３図も、機械的に半分に切断され 、ポリマーフィルム中に埋め込まれたセルロース粒子のＳＥＭｉＩ微鏡写真（倍 率２、０００倍）である。 ■粗餐■匪 本発明は、実質的に球状の高密度セルロース粒子を含むセルロースクロマトグラ フィー支持体に関し、本発明の粒子は約０．６５〜０．８５ｇ／ｍｌの乾燥嵩密 度、約２００ミクロン未満の範囲内の平均粒径を有し、しかもこれら粒子は水溶 液または有機溶液中で本質的に非膨潤性である。 ここで用いられる「本質的に非膨潤性」という用語は、水溶液、有機溶媒または 有機溶液のいずれかと接触させた場合に、明らかな体積変化が認められないセル ロース粒子を意味する。 すなわち、本発明のセルロース粒子は、様々な誘電率または極性を有する種々の 有機溶媒中に入れた場合に、膨潤および収縮の双方に対して抵抗性を有する。　 ヘキサン、トルエン、およびベンゼンのような非極性溶媒、あるいは、水、ジメ チルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、またはＮ−メチルピロリドンのよう な極性溶媒中において、明らかな体積変化が認められない。　さらに、８Ｍ尿素 のような水素結合を開裂する溶媒は、体積変化を全くもたらさない。　この性質 は、水または池の溶媒中に入れた場合に、かなりの程度まで膨潤する公知のセル ロースビーズとは対照的である。　本発明の球状粒子の体積保持性は、粒子の密 度が比較的高く、しかも多孔性の低さに相関していると考えられる。　例えば、 １０〜２５ミクロンの粒子は見掛けの乾燥嵩密度が０．８０４５ｇ／ｍｌであり ；２５〜５３ミクロンの粒子は見掛けの密度が０．７９２３ｇ／ｍｌであり：そ して、５３〜１７７　ミクロンの粒子は見掛けの密度が０．６７８９ｇ／ｍｌで ある。 第２図および第３図に示されているように、本発明の粒子の多孔性は非常に低い 。　これら粒子は、顕微鏡下で観察した場合、あるいはＳＥＭによって倍率２． ０００倍で観察した場合、実質的に固体である。　第１図および第２図に示す顕 微鏡写真は、ＪＢＯＬのＪＳ！Ｉ！−３５４型走査電子顕微鏡によって撮影され た。　第３図に示す顕微鏡写真はＪＥＯＬのＪＳＭ−８４０型走査電子顕微鏡に よって撮影された。　顕微鏡写真に示すセルロース粒子は、コロジオンポリマー フィルム中に埋め込まれ、次いで半分に切断されたものである。 セルロース粒子は、化学的に修飾して、クロマトグラフィーリガンドをこれら粒 子に共有結合させてもよい。　適当なリガンドには、極性または非極性の種々の 公知リガンドが含まれる。 極性リガンドは、カチオン性またはアニオン性の化合物のいずれでもよ（、非極 性リガンドは、電荷を帯びていない、もしくは中性の化合物である。　特に、共 有結合したポリエチレンイミンは、イオン交換支持体として用いることができる 支持体に修飾できる。　他の公知リガンドは、アフィニティー、逆相および疎水 性クロマトグラフィーに有用な支持体を提供する。 適当なリガンドには、アミノエチル、ジエチルアミノエチル、エビクロロヒドリ ントリエタノールアミン、ポリエチレンイミン、メチルポリエチレンイミン、ベ ンジルジエチルアミンエチル、ジエチル−［２−ヒドロキシプロピル］−アミノ エチル、トリエチルアミノエチル、スルホプロピル、カルボキシメチル、スルホ ネート、４級アンモニウムエチル、抗原および抗体が含まれる。 公知のクロマトグラフィーリガンドは、各分子に会合している二つの反応性部位 を有した二官能性結合分子を用いて粒子に影響を及ぼす表面上の水酸基に共有結 合できる。　セルロースの水酸基と反応することが知られている、いかなる二官 能性結合分子を用いてもよい。　二つの反応性部位を有する特に好ましい結合基 には、エビクロロヒドリン、ベンゾキノン、およびアルカンジオールのジグリシ ジルエーテルが含まれる。　この結合工程を実施する際に、一般には、結合分子 上の一つの反応性部位を用いてセルロースに共有結合するのに適当な条件下で、 結合基をセルロース粒子と接触させる。　つぎに、得られた中間体は、結合基の 第二反応性部位に結合する公知の反応性クロマトグラフィーリガンドと接触させ る。　適当な反２性クロマトグラフィーリガンドは、当業者に周知の種々のいか なるリガンドでもよい。　イオン交換クロマトグラフィー支持体の形成に用いら れる好ましいりガントは、反応性ポリエチレンイミンである。 本発明のセルロース粒子は、いくつかの所望の特性を有する。 例えば、本発明のセルロース粒子は機械的に安定である。 種々の有機溶媒、あるいは酸性水溶液中において、５〜１２時間にわたって、強 い電磁撹拌を行っても、粒子は機械的に破壊されなかった。 これらセルロース粒子はまた、クロマトグラフィーカラムに用いた場合、高い圧 力に対して安定である。　球状のセルロース粒子は、圧力および条件範囲にわた って、優れた流速を示す。 例えば、セルロース粒子をカラムに充填し、流体計量型ポンプによって与えられ た中程度の圧力を受けた場合、少なくとも１２０ｐｓｉまでの圧力では、長時間 にわたって機械的な破壊が起こらず、また圧力が上昇するにつれて、クロマトグ ラフィーベッドの流速または体積の減少は認められなかった。 本発明の実質的に球状の高密度セルロース粒子を製造する方法は、ｉ）ビスコー スを熱的に分解することなく、液体キャリアー中で工業用ビスコースの安定なエ マルジョンを形成し、ｉｊ）変形可能な球状粒子を生成するために、セルロース を再生し、および１ｉｉ）変形可能な粒子をさらに硬化させる工程を含む。 ここで用いられる「工業用ビスコースＪという用語は、高分子量セルロースを含 むバルブ、水酸化ナトリウム、およびキサントゲン酸塩基による水酸基の置換に 由来する硫黄から生成した水溶液を意味する。　適当なビスコースは、約７．０ χの高分子セルロース、約５．０％の水酸化ナトリウム、および約１．７％の硫 黄を含有する。　このビスコースは、セルロースの水酸基の約２０％がキサント ゲン酸塩基で置換されている。　木材バルブから適当なビスコースを生成する方 法が米国特許第４．７７８．６３９号に開示されている。 ここで用いられる「液体キャリアー」という用語は、好ましくは大気温度で１０ ０ｃＳｔより高く、より好ましくは約２０〜３０℃の温度で約１５０ｃＳｔより 高い粘度を有し、乳化剤の存在下でビスコースと安定なエマルジョンを形成する 液体溶媒を意味する。 ここで用いられる「安定なエマルジョン」という用語は、ビスコースからセルロ ースを再生するのに必要とされる時間内にエマルジョンが分解しないように乳化 剤を用いて液体キャリアー中に形成されたビスコースのエマルジョンを意味する 。　安定なエマルジョンは、ビスコースからセルロースを制御方法で再生し得る ので好ましい。　再生が制御されなかったり、再生の間に二硫化炭素の生成が速 すぎると、非常に多孔性の生成物が形成される。　さらに、再生の間にエマルジ ョンが分解されると、成長しつつある粒子は望ましい球形状を失い、また望まし くない不規則な形状の凝集体および集塊体を形成する。 低粘度溶媒と高分子ビスコースとの組合せが一般的に安定なエマルジョンを生成 しないことが、経験的に観察された。　例えば、乳化剤と、ジクロロベンゼン、 クロロホルム、クロロホルムとパラフィン、パラフィン、ヘキサン、シクロヘキ サン、シリコン油、鉱物油、およびトルエンなどの比較的低粘度の溶媒とは、す べて高分子ビスコースに対して安定なエマルジョンを与えなかった。　一般に、 安定なエマルジョンを生成できないと、球状のセルロース粒子ではなく、部分的 に脱キサントゲン酸塩化された不安定なセルロースの固まりが生成される。 また、溶媒の粘度が上昇するにつれて、エマルジョンの安定性が増大することも 観察された。　例えば、アルコプライム（粘度：約７８．５ｃＳｔ）は、比較的 不良なエマルジョンを生成したが、不規則な粒径および形状の粒子を生成した。 ポリプロピレングリコール１２００　（粘度；約１６０ＣＳｔ）　、ポリメグ６ ５０（粘度：約６５０ｃＳｔ）およびカルギーレＢ型浸漬油（粘度：を生成した 。　好ましい溶媒は、ポリプロピレングリコール１２００である。 乳化剤は、エマルジョンの安定性を変化させるために最適化される。　平均分子 量が約１．２００のポリプロピレングリコールと組合せて用いられる好ましい乳 化剤には、ソルビタンモノオレエートおよびＴｗｅｅｎ−８０（登録商標）（ポ リオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）およびＴｒｙｌｏｘ　Ｃ ０−５（登録商標）が含まれる。　ポリプロピレングリコール中のＴｗｅｅｎ− ８０（登録商標）に対するソルビタンモノオレエートの好ましい重量％比は、約 ７５〜９８ｗｔ％ソルビタンモノオレエートおよび２〜２５ｗｔ％Ｔｗｅｅｎ− ８０（登録商標）である。　ポリプロピレングリコール中のＴｗｅｅｎ−８０（ 登録商標）に対するソルビタンモノオレエートの特に好ましい重量％比は、それ ぞれ８０〜２０ｗｔ％および９６．５〜３、５ｗｔ％である。　ポリプロピレン グリコール中のＴｒｙｌｏｘ　Ｃ０−５（登録商標）に対するソルビタンモノオ レエートの好ましい重量％比は、約９〜３０ｗｔ％ソルビタンモノオレエートお よび７０〜９１ｗｔ％Ｔｒｙｌｏｘ　Ｃｏ−５（登録商標）である。　特に好ま しい重量９石比は、９．７２４ｗｔ％ソルビタンモノオレエートおよび９０．２ ７６ｔｔ　％Ｔｒｙｌｏｘ　Ｃｏ−５（登録商標）である。 最適なエマルジョン系を決定するのに適した試験は、乳化剤（Ｑ、　１ｍ１）の 重量％を変化させて予めポルテックスミキサーにかけた平均分子量が約１．２０ ０のポリエチレングリコール（１，５ｍ１）に工業用ビスコース（０，３ｍ１） を添加して試料混合物を調製することによって容易に実施できる。　試料混合物 をポルテックスミキサーに１分間かけ、この混合物を用いて、ウィントロープ（ Ｗｉｎｔｒｏｂｅ）赤血球沈降管を満たす。　各混合物に対して二本の試験管を 用い、これら試験管を５分間遠心分離した。　遠心分離後に依然として乳化して いるビスコースの量と、沈降管中の液体の全量との比を取る。　全液量に対する 乳化したビスコースの量の比が最も大きいエマルジョンが、最適の乳化剤濃度を 有すると考えられる。　エマルジョン系試験は、一般には二度実施され、その結 果が平均される。　ビスコース温度、室温、または遠心分離の正味時間における 小さな差は、対照としての初期実験から得られた最適濃度を用いて補正される。 特定のエマルジョン系の安定性を決定する他の方法は、視覚化試験によってなさ れる。　この試験を実施するには、視覚化すべき１滴のビスコースエマルジョン を清潔なスライドガラス上に置き、この滴の上に別のスライドガラスをわずかに ずらして置（。　次いで、下側のスライドガラスを下向きに角度をつけて保持し 、上側のスライドガラスを徐々にずらすことにより、エマルジョンの小滴の層が 最初のスライド上に残る。　次いで、このスライドガラスを垂直状態で乾燥させ る。　約２ＥＩ間乾燥させた後、残留する溶媒を除去するために、アセトンを満 たしたｃｏｐｌｉｎジャーに約１日間もしくは２０間入れる。　スライドガラス から溶媒を除去した後、低倍率の顕微鏡で直接観察すると、エマルジョンの形成 時に乳化したビスコースの大きさが視覚化される。 これら試料試験を用いれば、液体キャリアー中の乳化剤の重量％濃度を約１／１ ，０００９４まで特定できる。　この精度は、至適なエマルジョン系を得て、本 発明の方法を実施する上で好ましい。 本発明に従ってセルロース粒子を製造するために工業用ビスコースを用いる場合 、好ましくは、ビスコースに塩溶液を添加する。　この方法により球状粒子が得 られるが、その球体は、ビスコースエマルジョンに塩溶液を添加しない以外は同 じ工程を踏む方法を用いて得られた粒子より小さい。　典型的な塩溶液には、塩 化カリウ゛ム水溶液が含ま０る。 より小さい球体を製造する他の方法は、ビスコースエマルジョンを形成する際の 混合時間を増大することである。 また、酸の非存在下における所望の球状セルロース粒子の形成は、エマルジョン 形成の温度と、ビスコースからセルロースを再生するだめの温度に依存する。　 室温より高い温度では、温度が上昇するにつれて、一般に粒子サイズの分布範囲 は拡大し、粒子は凝集体や固まりをさらに形成し易くなり、粒子は大気圧に依存 して、より柔軟にかつ多孔性になる。　好ましくは、本発明の方法を大気圧下で 実施する場合、温度は約３０°Ｃより低く維持され、最も好ましい乳化温度およ び再生温度は約２０〜３０°Ｃの範囲である。　圧力を上昇し、温度を約２０℃ より低くすれば、多孔性が減少した粒子が製造されるが、再生時間は増加し、従 って生産率が低下する。　また、用いた溶媒を冷蔵下で保存し、ブレンダー冷却 槽の温度が低い場合のエマルジョンの最終温度がさらに低いことも観察された。 再生後に得られた粒子は比較的柔軟であり、取扱いを誤れば、容易に変形する。 　従って、液体キャリアーを抽出し、粒子の硬化を開始させるために、再生され たセルロース粒子を、好ましくは、ヘキサンまたはトルエンなどの非極性溶媒中 に懸濁させる。　酸性アルコール溶液、例えば、エタノール中の３０９６酢酸、 プロパツール中の３０％プロパン酸またはエタノール中の２０％リン酸中で粒子 を撹拌することによって、さらに粒子の硬化が起こる。　好ましくは、酸性アル コール溶液中での粒子の硬化は約−３０〜３０℃の範囲内の低温で行われる。 この方法の最終工程として、粒子の硬化は、粒子を段階的勾配組成のジメチルス ルホキシドおよびｔ−ブチルメチルエーテル、ジメチルスルホキシドおよびジエ チルエーテル、またはジメチルスルホキシドおよびプロパツール溶液と、約−３ ０〜３０°Ｃの温度で接触させることにより促進され、またより高い温度では、 反応がより速く、さらにより低い温度では、得られた粒子はより均一である。 本発明の実質的に球状の高密度セルロース粒子は、様々な用途において有用であ る。　セルロース粒子が極性のクロマトグラフィーリガンドで修飾されている場 合、この物質は、核酸、オリゴヌクレオチドまたは関連化合物などの生物学的物 質を分離する高性能薄層クロマトグラフィー吸着剤として用いることができる。 　同じく該修飾物質は、生体分子を精製するためのイオン交換吸着剤として小さ いカラムに用いることができる。 セルロース粒子が非極性のクロマトグラフィーリガンドで修飾されている場合、 この物質は、分析的薬物試験法、もしくは水溶液から除去困難な有機物質を抽出 なとの面相抽出に用いることができる。　未修飾の状態では、本発明のセルロー ス粒子の例外的な物理特性により、化粧品、医薬品または食品の増量剤または充 填剤として用いることができる。 本発明の様々な実施態様を説明したいくつかの実施例を、以下に記した。　これ ら実施例は、単に例示を目的としたものであり、本発明の範囲を限定することを 意図するものではない。 寒凰斑上 Ｃａｒｇｉｌｌｅ　Ｂ型浸漬油（２００ｍｌ、粘度１．２５０ＣＳｔ）を、８０ ｗｔ％のソルビタンモノオレエートおよび２０ｗｔ％のＴｗｅｅｎ−８０（登録 商標）（１，０６４ｇ、界面活性剤の全重量）を手短に混合し、水（３３，５ｍ １）で希釈した工業用ビスコース（３３，５ｍ１）の溶液に添加した。　ハミル トン・ビーチ・ブレンダー（Ｈａｍｉｌｔｏｎ　Ｂｅａｃｈ　Ｂｌｅｎｄｅｒ） の最高速度で、この混合物を２分間混合し、３８℃の一定温度で加熱し、３７７ ｒｐｍの速度で一晩撹拌した。　この反応混合物に、シクロヘキサン（１００ｍ ｌ）を添加し、得られた粒子を濾過し、エタノールで洗浄した。　次いで、この 粒子状物質をエタノール中の４０９３酢酸中で撹拌した。　１時間撹拌した後、 粒子を１−プロパツールで洗浄し、各溶媒混合物あたり１時間までの間、下記溶 媒の混合物中に浸漬した。　最初に用いた溶媒は、１００％ジメチルスルホキシ ド（ＤＭＳＯ）であり、続いて７５９６　Ｄ！１ｌｓｏ　、／　２５％ｔ−ブチ ルメｆ　ルｘ　−チル（ＴＢＭＥ＞、５０％ＤＭＳＯ，１５０％丁ＢＭＢ、　２ ５９６ＤｖＳＯ／１５９４ＴＢＭＥ、および１００９１００９４ＴＢ用イタ。　 ＴＢＭＥｔ’ｆｉ後に洗浄した後、ビーズをガラスフィルター漏斗上で吸引乾燥 した。　乾燥篩分後に、以下の粒径分布が観察された：５３〜１７７５３〜１７ ７ミフロンー９５３ミクロン−１０％。 実施例２ 工業用ビスコース（３３，５［［＋１）を水（３３，５ｍｌ　）に添加し、均質 なビスコース溶液が得られるまで撹拌した。　Ａｒｅｏｐｒｊｍｅ　３５０（登 録商標）（２０（１＋＋１．粘度７８．９ｃＳ　ｔ　）を、分離フラスコ中で、 ８０ｗｔ９４のソルビタンモノオレエートおよび２０ｗ　ｔ％のＴｗｅｅｎ−８ ０（登録商標）（１，０６４ｇ、界面活性剤の全重量）と〕０〜１５秒間混合し 、ビスコース溶液を添加した。　得られた混合物を高速度で、２分間混合し、反 応容器に移して、３９°Ｃの一定温度にて一晩、４０Ｏｒｐｍで撹拌した。　得 られた粒子を、実施例１に記載の方法と同様の方法により洗浄し、溶媒の混合物 中に浸漬した。　乾燥篩分後に、以下の粒径分布が観察された：５３〜１７７　 ミクロン−６１’％：２５〜５３ミクロンー２９？う５１７７　ミクロン超　− １０９６゜衷凰匠ｌ 工業用ビスコース（３５ｍｌ）を水（３５ｍ’ｌ）に添加し、得られた溶液を８ ０ｗｔ％のソルビタンモノオレエートおよび２０ｗｔ％のＴｗｅｅｎ−８０（登 録商標）　（１，０６４ｇ、界面活性剤の全重量）と混合したポリプロピレング リコール（ＰＰＧ）　１２００　（２００ｍｌ、分子量１，２００　、粘度１６ ０ｅＳｔ）に添加した。　この混合物を３０秒間混合し、混合作業を１５秒間停 止し、そして同様の一連の作業を２分間の全混合時間にわたって４回繰り返した 。　この混合物を反応容器に移し、４１℃の一定温度にて一晩、３３０ｒｐ［［ ｌで撹拌した。　得られた粒子を、２．５分間にわたって２１’Ｃにて、２．５ ００ｒｐｍで遠心分離した。　ヘキサン中で撹拌して傾瀉した粒子から液相を傾 瀉した。 粒子を再びヘキサンと撹拌して傾瀉し、次いでエタノールと撹拌した。　粒子を ガラスフィルター漏斗で濾過し、エタノール中の３０９６酢酸で処理した。　得 られた粒子を溶媒の混合物中に浸漬して、ＴＢＭＥをエタノールに置き換えた以 外は実施例１に記載の方法と同様の方法で処理した。　最後に、粒子を蒸留水中 で撹拌し、ガラスフィルターで濾過し、そして凰乾した。　硫黄の存在に関する モリブデン酸定性試験、および硫黄に関する元素分析は、どちらも否定的であっ た。　乾燥篩分後に、以下の粒径分布が観察された＝５３〜１７７　ミクロン− ９７％；２５〜５３ミクロン−３％。 実施例４ 工業用ビスコース（１００ｍｌ）を水（１００ｍｌ）に添加し、この溶液を、８ ０ｗｔ　９づのソルビタンモノオレエートおよび２０ｗｔ％のＴｗｅｅｎ−８０ （登録商標）　（１，０６４ｇ、界面活性剤の全重量）と混合したＰＰＧ１２０ ０　（６００ｍｌ）に添加した。　実験は、−晩撹拌しながら、反応温度を２３ °Ｃに維持したこと以外は、実施例３に記載の方法と同様の方法により実施した 。　乾燥篩分後に、以下の粒径分布が観察された；５３〜１７７　ミクロン−６ ７９う；２５〜５３ミクロン−３２℃％：１０〜２５ミクロンー１０６゜ 寒喜倣１ ＰＰＧ　１２００　（５５０ｍｌ）を８０ｗｔ９４のソルビタンモノオレエート および２０ｗｔ％のＴｗｅｅｎ−８０（登録商標）　（１，０６４ｇ、界面活性 剤の全重量）と混合し、工業用ビスコース（１００ｍｌ、原液）に添加した。 反応温度が２４°Ｃであったこと以外は、実施例３に記載の方法と同様の方法に より操作を続けた。　乾燥篩分後に、以下の粒径分布が観察された：５３〜１７ ７　ミクロン−９７％　；　２５〜５３ミクロン−３％。 実施例６ ＰＰＧ　１２００　（６００山１）を８０ｗｔ％のソルビタンモノオレエートお よび２０ｗｔ％のＴｗｅｅｎ−８０（登録商標）（１，０６４ｇ、界面活性剤の 全重量）と混合し、工業用ビスコース（１００［１１１、原液）に添加した。　 この混合物をピストン型流動化装置を用いて高圧で乳化させ、反応容器中におい て一晩、２３°Ｃにて、３７５ｒｐｍで撹拌した。　実施例３に記載の方法と同 様の方法により操作を続けた。　乾燥篩分後に、以下の粒径分布が観察された： ５３〜１７７５３〜１７７ミフロンー８５３ミクロン−１８９４゜実施例７ ＰＰＧ　１２００　（３００ｍｌ）を８０＊ｔ９４のソルビタンモノオレエート および２０＋ｖｔ！％のＴｗｅｅｎ−８０（登録商標）　（１，０８４ｇ、界面 活性剤の全型１）と混合し、工業用ビスコース（１００ｍｌ）に添加した。　こ の混合物を反応容器中において、２２℃の一定温度にて、５００ｒｐｍで撹拌し た。　次いで、実施例３に記載の方法と同様の方法により操作を続けた。　乾燥 篩分後に、以下の粒径分布が観察された：５３〜１７７　ミクロン−８２％；２ ５〜５３ミクロン−５９勺；１７７　ミクロン超−１３９−６゜ 実施例８ ＰＰＧ　１２００　（８００ｍｌ）を８０Ｗｔ？ｆｉのソルビタンモノオレエー トおよび２０ｗｔ％のＴｗｅｅｎ−８０（登録商標）　（３，１８ｇ、界面活性 剤の全重量）と混合し、工業用ビスコース（１００，５田１）および水（１００ ，５ａ＋１）の溶液に添加した。　この混合物を、冷却ジャケットおよび冷却コ イル（循環水の温度、−１０°Ｃ）を備えたウォーリング・コマーシャル・ブレ ンダーＣＷａｒｉｎｇ　Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　Ｂｌｅｎｄｅｒ）を用いて、高 速度で４分間混合した。　この混合物を、２４℃にて２ＱＯｒｐｍで一晩撹拌し た。　次いで、実施例３に記載の方法と同様の方法により操作を続けた。　乾燥 篩分によって、以下の粒径分布が得られた：５３〜１７７　ミクロン−１１９４ ；２５〜５３ミクロン−７７％。 １０〜２５ミクロン−８％：ユ７７　ミクロン超−４％。 実施例９ ＰＰＧ　１２００　（６００１ｎｌ）を乳化剤（２４ｍｌ、９６．５ｗｔ　９６ のソルビタンモノオレエートおよび３．５ｗｔ９−６のＴｗｅｅｎ−８０（登録 商標））と混合し、ビスコース原液（２００ｍｌ）に添加した。　次いで、実施 例８に記載の方法と同様の方法により操作を続けた。　乾燥篩分後に、以下の粒 径分布が観察された：５３〜１７７　ミクロン−７２９っ；２５〜５３ミクロン −２８９６゜ 実施例１０ ＰｌｏＰｏｌｙ　６５０（登録商標）（ポリテトラメチレンエーテルグリコール 、３００＋ｎｌ）を、乳化剤（１２ｍｌ、９６．５９’６ソルビタンモノオレー トおよび３．５％Ｔ＊ｅｅｎ−８０（登録商標））と混合し、ビスコース原液（ １００ｍｌ）に添加した。　この混合物を、冷却ジャケットおよび冷却コイル（ 循環水の温度、−１０’Ｃ）を備えたつす−リング・コマーシャル・ブレンダ− （Ｗａｒｉｎｇ　Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　Ｂｌｅｎｄｅｒ）を用いて、高速度で ７分間混合した。　この混合物を、２４°Ｃ，６２８ｒｐｍで一晩撹拌した。　 ２１°Ｃ１２，５分間、２．５００ｒｐｍで遠心分離した後、液体部分を傾瀉、 廃棄した。　粒子をプロパツール中で２回撹拌し、傾瀉した。　粒子を濾過し、 エタノール中の２００６リン酸の溶液に添加した。　実施例３に記載した方法に 従って、粒子を洗浄した。　乾燥篩分後に、以下の粒径分布が観察された；５３ 〜１７７　ミクロン−９８％：２５〜５３ミクロン−２９も。 実施例１１ 工業用ビスコースＣ１００［１１１）を、１ｖの塩化カリウム溶液＜：１００ｍ １）で希釈し、得られた溶液を、ＰＰＧ　１２００　ｆ：５００ｍ１）、９５． ９ｗｔ！％ソルビタンモノオレエートおよび４．１１１１ｔＯうＴｗｅｅｎ−８ ０（登録商標）（２２ｍｌ、界面活性剤の全容量）を混合した溶液に添加した。 上記実施例８に記載した方法に従って、粒子形成を実ｉ　ｊ、た。 乾燥篩分後に、以下の粒径分布が観察された：２５〜５３２５〜５３ミフロンー ８〜２５ミクロン−２００も。　顕微鏡検査によると、１０〜２５ミクロンの範 囲内にある粒子が、１０ミクロン以下の粒径の粒子と共にその占有割合が非常に 高く、これら粒子の質量が小さいことが、従来の篩分法を用いた分離の妨げとな った。 実施例１２ 工業用ビスコース（１０＋）ｍｌ）を塩化カリウム水溶液（２５ｍｌの水中に５ ．５６ｇ　ＫＣＩ）で希釈し、ビスコース希釈溶液中の塩濃度を約１Ｍとした。 　得られた溶液を、ＰＰＧ　１２００　（２７５ｍｌ）、９５．９ｗｔ％ソルビ タンモノオレエートおよび４．１ｗｔ％Ｔｗｅｅｎ−８０（登録商標）（１２ｍ ｌ、界面活性剤の全容量）を混合した溶液に添加した。 この混合物を、実験８と同様に、つオーリング・コマーシャル・ブレンダー（Ｗ ａｒｉｎｇ　Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　Ｂｌｅｎｄｅｒ）を用いて、速度＃６で１ ０分間、次いで、速度＃７で２分間混合し、上記実施例４に記載の方法に従って 、粒子の形成を実施した。　乾燥篩分後に、以下の粒径分布が観察された；２５ 〜５３ミクロン−７８％；１０〜２５ミクロン−２２９４゜　顕微鏡検査による と、篩分によって得られた分布とは対照的に、１０〜２５ミクロンの範囲内にあ る粒子が、１０ミクロン以下の粒径の粒子と共にその占有割合が非常にに高く、 これら粒子の質量が小さいことが、従来の篩分法を用いた分離の妨げとなった。 実施例１３ 工業用ビスコース（１２０ｍｌ）を、ＰＰＧ　１２００　（３００［＋１１）、 ９．７２４ｗｔ％ソルビタンモノオレエートおよび９０．２７８ｗｔ％Ｔｒｙｌ ｏｘ　Ｃｏ−５（登録商標）　（２２ｍｌ、界面活性剤の全容量；　Ｅｍｅｒｙ 製のトラＴｒｙｌｏｘ　Ｃ０−５（登録商標）は、ヒマシ油１モルあたり５モル のエチレンオキシドを含むヒマシ油エトキシレートであった）を混合した溶液に 添加した。　この混合物を、実施例８と同様、つｔ−リング・コマーシャル・ブ レンダー（Ｗａｒｉｎｇ　Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　Ｂｌｅｎｄｅｒ）を用いて低 速度で計３分間混合し、上記の実施例４に記載の方法に従って粒子の形成を実施 した。　乾燥篩分後に、以下の粒径分布が観察された：３８〜５３３８〜５３ミ フロンー５〜３８ミクロン−３７９４５：　１０〜２５ミクロン−１１％。 寒及斑Ｈ 工業用ビスコース（８００ｍｌ）を、ＰＰＧ　１２００　（１５００ｎｌ）、３ ０、　Ｏｗｔ　９６ソルビタンモノオレエートおよび？０．　Ｏｗｔ％Ｔｒｙｌ ｏｘ　Ｃ０−５（登録商標）　（１１０ｍｌ、界面活性剤の全容量）を混合した 溶液に添加した。　この混合物を、実施例８と同様、つす−リング・コマーシャ ル・ブレンダ−（Ｗａｒｉｎｇ　Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　Ｂｌｅｎｄｅｒ）を用 いて、低速度で計３分間混合し、上記実施例４に記載の方法に従って粒子の形成 を実施した。　乾燥篩分後に、以下の粒径分布が観察された；３８〜５３ミクロ ン−８６５％：２５〜３８ミクロン−１４０６゜ 球体の集団がいくつか存在していたが、粒子の大部分は個々の球体であった。 実施例１５ 工業用ビスコース（１２５ｍｌ）を、ＰＰＧ　１２００　（２５０ｍｌ）、０． ７２５ｗｔ％ソルビタンモノオレエートおよび９０．２７５ｗｔ％Ｔｒｙｌｏｘ 　Ｃ０−５（登録商標）（１５ｍｌ、界面活性剤の全容量）を混合した溶液に添 加した。 この混合物を、実施例８と同様、ウォーリング・コマーシャル・ブレンダーＣＷ ａｒｉｎｇ　Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　Ｂｌｅｎｄｅｒ）を用いて、中速度で計１ ５分間混合し、上記実施例４に記載の方法に従って粒子の形成を実施した。　乾 燥篩分後に、以下の粒径分布が観察された：３８〜５３３８〜５３ミフロンー１ 〜３８ミクロン−８２％　；　１０〜２５ミクロン−７％。 寒凰斑用 セルロース粒子（３８〜５３ミクロン）を、エース・ミツチェルーミラー（Ａｃ ｅ　Ｍｉｅｈｅｌ−Ｍｉｌｌｅｒ）のパンフレットに記載されているように、ス ラリー法を用いて、８．５Ｘ０．８　ｃｍのミツチェルーミラーカラムに充填し た。　二〇カラムは、流体計量型ポンプを用いて約１２０ｐｓｉの背圧で充填さ れた。　このベッドに、ポンプを用いて、溶媒（水または２ｖのＫＣＩ溶液）を 、約１００ｐｓｉの背圧で６４時間にわたって通過させた。　安定なベッド容量 で、１時間あたり３７０ｍ１の流速を記録した。　セルロース粒子を顕微鏡（１ ００Ｘ）で検査したところ、粒子の変形は全く認められなかった。 同様に、セルロース粒子（３８〜５３ミクロン）を、８．５　Ｘ　０．８ｃｍの ミツチェルーミラーカラムに乾燥充填し、次いで、二〇カラムを、約４０ｐｓｉ の背圧で運転している流体吐ｌ型ポンプに接続した。　湿潤させると、ベッド容 量が約６％だけ増大した。 容１５リットルの２Ｍ　ＫＣＩをカラムに通過させた。　ベッド容量は実験を通 じて一定であった。 実施例１７ セルロース粒子（２０〜３８ミクロン）を水に２時間浸漬させた後、細粉ガラス フィルターで濾過し、室温で一晩凰乾させてから秤ｌした（２．９９１７ｇ）。 　１乾した粒子を、真空デシケータ−中で、減圧下（１０−”ｍｍＨｇ）で２４ 時間乾燥させ、再秤量を行った（最終ｆｆ１ｌ：　：　２．７７９９ｇ）。　粒 子に吸収された残留水による減量は約７％であった。 下記の方法により、ベンゾキノンを用いてポリエチレンイミン（ＰＥＩ）をセル ロースに結合させた。　セルロース（０，４１１７ｇ）を酢酸緩衝液（０，１Ｍ 、　ｐＨ５，４）と１時間接触させ、そして濾過した。　エタノール（６０ｍ１ 　）および酢酸緩衝液（２４０［＋１１）の溶液にベンゾキノン（１，６２１５ ｇ）を溶解することによりｔｌｉＭされた溶液５０ｍ１を、セルロース濾過物に 添加し、反２容器を穏やかに１時間回転させた。　セルロースを濾過し、０．５ Ｍの塩化ナトリウムおよび酢酸緩衝液で、洗浄液が塩基に対して反２性を示さな くなるまで洗浄した。　エタノール（１００ｍｌ）中のＰａｌ　、　＊Ｃ１１３ ，３ｍ１）の溶液を湿ったセルロースに添加した。　この混合られた固体を酢酸 緩衝液（５００ｍｌ）　、塩化ナトリウム（５００ｍｌ）、およびメタノール（ ５００ｍｌ）で洗浄した。　酢酸緩衝液中の酢酸（２０？４）を固体に添加し、 混合物をポルテックスミキサーにかけ、遠心分離し、傾瀉し、そしてプロットし た。　この一連操作を４回繰り返した。　粒子をアミンの存在下で定性的に試験 したところ、ＰＥＩのセルロース粒子への共有結合を肯定する試験結果が得られ た。 下記の方法により、エピクロロヒドリンを用いてＰＥＩをセルロースに結合させ た。　セルロース粒子（１，０ｇ）を酢酸緩衝液（０，１Ｍ、　］）Ｈ５，４） で１時間平衡化し、そして濾過した。　ホウ化水素ナトリウム溶液（５ｍｌ、水 酸化ナトリウム（５００ｍｌ、２Ｎ）、ホウ化水素ナトリウム（２，５ｇ）を混 合し、この混合物を水で１：２に希釈することにより調製）を、平衡化セルロー ス粒子に添加した。　エビクロロヒドリンＣ１，０ｍ１）をこの混合物に添加し 、反応容器を６０°Ｃにて穏やかに１時間回転させた。　この混合物を温水（６ ０℃）で洗浄し、ＰＥＩ＋ｓ溶液（４ｍｌ、３７ｍｇＰＥ１／ｍｌ）と混合し、 反応容器を６０°Ｃにて、さらに３０分間回転させた。　次いで、生成物を熱塩 水で洗浄した。　元素分析：窒素３．０３％、セルロース１．０ｇあたりＰＥＩ 　９６．０６ｍｇの結合に相当。 実施例２ｑ 溶液（１ｍ１、ホウ化水素ナトリウムＱｚｇ含む水酸化ナトリウム（０，６Ｍ） ）を１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテルに添加した。　この混合物を セルロース（１．　０ｇ）に添加し、反応容器を３０°Ｃで７時間回転させた。 　セルロースを水で洗浄し、ＰＥＩ，ａ　（１４８．７８９ｍｇ）を含む溶液（ ４ｍｌ）に添加した。　反応容器を３５°Ｃにて３０分間回転させ、生成物を温 水（８０〜９０℃）および水性ＮａＣ１／ＮａＯＨ　Ｃ１Ｍ）で洗浄した。　元 素分析；窒素３．６０％、セルロース１．０ｇあたりＰＥ１　１１０．５７ｍｇ の結合に相当。 国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．実質的に球状の高密度セルロース粒子を含むクロマトグラフィー支持体であ って、前記粒子が約０．６５〜０．８５ｇ／ｍＩの見掛けの乾燥嵩密度を有し、 前記粒子の各々が約２００ミクロン未満の範囲内の平均粒径を有し、および前記 粒子が水溶液または有機溶液中で実質的に非膨潤性である。 ２．前記粒子が、イオン強度範囲を有する水溶液中で安定である請求の範囲第１ 項に記載のセルロース粒子。 ３．前記粒子が、少なくとも３．０Ｍまでの塩化カリウムおよび８Ｍまでの尿素 の水溶液中で安定である請求の範囲第２項に記載のセルロース粒子。 ４．前記粒子に共有結合したクロマトグラフィーリガンドをさらに含む請求の範 囲第１項に記載のセルロース粒子。 ５前記粒子に共有結合した極性クロマトグラフィーリガンドを含む請求の範囲第 ４項に記載のセルロース粒子。 ６．前記粒子に共有結合した非極性クロマトグラフィーリガンドを含む請求の範 囲第４項に記載のセルロース粒子。 ７．前記共有結合したリガンドが、アミノエチル、ジエチルアミノエチル、エピ クロロヒドリントリエタノールアミン、ポリエチレンイミン、メチルポリエチレ ンイミン、ベンジルジエチルアミンエチル、ジエチル−［２−ヒドロキシプロピ ル］−アミノエチル、トリエチルアミノエチル、スルホプロピル、カルボキシメ チル、スルホネート、４級アンモニウムエチル、抗原および抗体からなるグルー プから選択される請求の範囲第５項に記載のセルロース粒子。 ８．前記粒子が、高圧で安定である請求の範囲第１項に記載のセルロース粒子。 ９．前記粒子が、少なくとも約１２０ｐｓｉまでの圧力で安定である請求の範囲 第８項に記載のセルロース粒子。 １０．前記粒子が、機械的に安定である請求の範囲第１項に記載のセルロース粒 子。 １１．実質的に球状の高密度セルロース粒子を製造する方法であって下記工程を 含む。すなわち、 少なくとも１つの乳化剤および液体キャリアーの存在下でビスコースの安定なエ マルジョンを形成し、前記エマルジョン形成時の前記ビスコースの温度が、前記 ビスコースを熱的に分解しないものであり、 均一な粒径の変形可能な粒子の分散液を得るために、酸の非存在下で、ある時間 にわたって、定常的な流体力学的条件下で絶えず撹拌しながら、前記ビスコース からセルロースを再生し、 変形可能な粒子の記分散液を、前記エマルジョンから前記液体キャリアーを部分 的に抽出させるのに適当な溶媒と接触させ、前記変形可能な粒子が、部分的に硬 化し始めており、および、前記変形可能な粒子を硬化させる。 １２．前記温度が、３０℃未満である請求の範囲第１１項に記載の方法。 １３．前記温度が、約２０〜３０℃である請求の範囲第１２項に記載の方法。 １４．前記液体キャリアーが、約２０〜３０℃の湿度で１５０ｃＳｔより高い粘 度を有する請求の範囲第１１項に記載の方法。 １５．前記液体キャリアーが、約１，２００の平均分子量および約２０〜３０℃ の温度で約１６０ｃＳｔの粘度を有するポリプロピレングリコールである請求の 範囲第１４項に記載の方法。 １６．前記エマルジョンが、少なくとも２つの乳化剤の存在下で形成される請求 の範囲第１１項に記載の方法。 １７．前記乳化剤が、ソルビタン、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノ オレエートおよびヒマシ油エチオキシレートからなるグループから選択される中 性の界面活性剤である請求の範囲第１６項に記載の方法。 １８．前記粒子の硬化が、前記変形可能な粒子を酸性アルコール溶液中で撹拌す ることを含む請求の範囲第１１項に記載の方法。 １９．塩溶液をビスコースエマルジョンに添加することをさらに含む請求の範囲 第１１項に記載の方法。 ２０．球状の高密度セルロース粒子であって、下記工程を含む方法により製造さ れる。すなわち、 少なくとも１つの乳化剤および液体キャリアーの存在下でビスコースの安定なエ マルジョンを形成し、前記エマルジョン形成時の前記ビスコースの温度が、前記 ビスコースを熱的に分解しないものであり、 均一な粒径の変形可能な粒子の分散液を得るために、酸の非存在下で、ある時間 にわたって、定常的な流体力学的条件下で絶えず撹拌しながら、前記ビスコース からセルロースを再生し、 変形可能な粒子の前記分散液を、前記エマルジョンから前記液体キャリアーを部 分的に抽出させるのに適当な溶媒と接触させ、前記変形可能な粒子が、部分的に 硬化し始めており、および、前記変形可能な粒子を硬化させる。