JPH05501417A - 低温殺菌中の血漿安定化のための配合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 低温殺菌中の血漿安定化のための配合物本発明は、特に血漿及び凝固因子Ｖ、Ｘ Ｉ及びＸｌｌｌ代償療法のための、低温殺菌中の血漿を安定化する配合物、該配 合物を用いた方法、及びそのようにして得た血漿溶液に関する。

ヒト全血漿又はクリオプロテインを含まないヒト血漿は、重度の熱傷患者及び重 症の外傷患者、あるいは外科的大手術を受けた患者、すなわち患者がかなりの体 液の損失を受けた場合にまだ代償療法として使用されている。

この治療の場合、一般にウィルス感染症の伝播の危険を予防するための予備試験 を行った健康な人からの個人的提供による血漿が使用される。

しかしこの方法は、前−血清学的処理段階のウィルス、特に種々の肝炎ウィルス 及びＡＩＤＳウィルスによる汚染のすべての危険をさけることはできない。

従って血漿の種々の生物機能に影響を与えずにウィルスを不活性化する方法の開 発は有益である。

０．５Ｍのクエン酸ナトリウムの存在下で６０℃に１０時間加熱することにより Ｂ型肝炎ウィルスが完全に不活性化されることは、明確に示されている（Ｔａｂ ｏｒ等、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ　Ｒｅｓ、２２．１９８１．２３３−２３８）。

しかしある種の血漿蛋白質の場合、この処理により生物活性が失われる（Ｔａｂ ｏｒ等及びＢａｒｒｏｗｃｌｉｆｆｅ等、Ｆｒ、Ｊ、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ　 ５５．’１９８３．３７−４６）。

血漿から精製した治療上価値のある種々の蛋白質に、種々の安定剤の存在下、６ ０℃で１０時間従来の低温殺菌を行うことは、可能であった。

しかし、ある生物活性を安定化する分子が、他の活性を全（安定化しないことが あり得る。

例えば、アルブミンは、アセチルトリプトファン及びカブリレートにより安定化 することができるが（Ｇｅｌｌｉｓ等、Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、２７，１ ９４８．２３９−２４４）、これらの安定剤はプラスミノーゲンには効果がない 。高濃度の糖は、トロンビンを安定化することができるが（Ｓｅｅｇｅｒｓ、Ａ ｒｃｈ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、３゜１９４４．３６３−３６７）　、これらはプロト ロンビンを保護しない。

アミノ酸及び糖の添加は、第ＶＩＩＩ因子及びアンチトロンビンＩＩＩの場合に 良い結果を与えた（特許ＤＥ２９．１６．７１１参照）。

欧州特許０　０３５　２０４は、スクロースだけを例外とするポリオールの存在 下におけるアンチトリプシン、アンチトロンビンＩＩＩ、プレカリクレイン、フ ィブロネクチン及び第ＶＩＩＩの安定化を示している；しかし同一条件下で、第 １Ｘ因子及びプレカリクレインがその治療活性を失うことを指摘している。

これらの種々の実験データは、全血漿（新鮮な血漿、凍結した新鮮な血漿又は低 温沈澱上澄み）のウィルス不活性化を低温殺菌によって行うことはできないとい う一般に受け入れられている考えを支持している。

しかしまだ全血漿が医学的に必要とされているので、出願人は低温殺菌中に、問 題となるすべての治療因子の生物活性を変性に対して同時に保護することを確実 にする配合物の開発を追及した。

ソルビトールが熱的変性からある程度保護するが、ある血漿試料と次ぎの試料で 結果が異なり、収率が低いことを観察し、出願人はソルビトールと混合してその 安定化力を増す種々の添加剤を探した。

従って本発明の配合物は、ソルビトール、塩化カルシウム、ヘパリン及びリジン の混合物を含む。種々の成分の濃度は、低温殺菌すべき血漿中の最終濃度がニ ー５０−８０％、好ましくは６０％のソルビトール、−〇、１−ＩＵ／ｍｌ好ま しくは領　５Ｕ／ｍｌのヘパリン、−１−１，０ｇ／Ｉ、好ましくは４ｇ／ｌの リシン、−３＝−５ｍ　Ｍ、好ましくは４ｍＭのＣａＣ１，となるよう調節する 。

本発明の配合物は、６０℃±１℃で１０時間加熱することによる低温殺菌の前に 新鮮な血漿又は凍結−解凍した新鮮な血漿、あるいは低温沈澱を含まない血漿に 加える。

低温殺菌の後、温度を徐々に２０℃に下げ、溶液を透析してソルビトール及びヘ パリンを除去する。透析緩衝液のｐＨは７であり、４−７ｍＭの濃度のクエン酸 ナトリウム、４ｍＭの塩化カルシウム、０．１３Ｍの塩化ナトリウム及び４ｇ／ ｌのリシンを含む。必要に応じて種々の配合物の透析緩ｌｉ液を使用することも できる。その後溶液を濃縮して生理学的量の血漿蛋白質に戻す。得られた溶液を 滅菌濾過し、調剤し、凍結又は凍結乾燥する。

本発明は又、本発明の配合物を加熱前に血漿に加え、低温殺菌した血漿を上記の 緩衝液に対して透析することによる、血漿の低温殺菌法にも関する。

本発明は、多数回の採血により得た大バッチの血漿に適用できるので、特に有利 である。特に、１００−２００リツトルかそれ以上のバッチを低温殺菌すること により、適した試験を行った後バッチが一定の品質を持つことを保証することが できる。

さらに本発明の方法を用いて血漿の低温殺菌を行ったバッチは、第Ｖ因子、第Ｘ Ｉ因子又は第ＸＩＩＩ因子のような精製濃厚液のない凝固因子が欠乏している患 者のための代償品とすることができる。

従って本発明は、特に一方では凝固因子Ｖ、ＸＩ及びＸＩＩＩの欠乏の治療、他 方では全血漿又は低温沈澱上澄みを必要とする代償療法のための、本発明の方法 を用いて得た低温殺菌血漿溶液にも関する。

以下の実施例は、本発明の具体化のひとつの形態を記載するものであるが、その 範囲を制限するものではない。

実施例： 解凍した２リツトルの血漿にヘパリン（１００ＯＵ）、リシン（８ｇ）及び塩化 カルシウム（２２０ｍｇ）を加える。これらの二生成物を、粉末の形態の塩とし て加え、血漿を穏やかに撹拌する。その後１２００ｇの非溶解ソルビトールを徐 々に注ぐ。

水浴を用いて又は温度調節器で制御した槽中で６０℃に１０時間加熱することに より、５リツトルの受容器中で低温殺菌を行う。低温殺菌後、４ｇ／ｌの濃度の りシン、４ｍＭのＣａＣｌ２及び０．１３ＭのＮａＣ１を含むクエン酸塩緩衝液 を用い、人工腎臓又はカセット上のＰｅ１ｌｉ　ｃ　ｏ　ｎ’？＝どの限外濾過 系を用いた透析によりソルビトール及びヘパリンを除去する。透析の後、同装置 を用いた濃縮により、凝固因子の割合を高品質の治療用血漿の場合と同様の約Ｉ Ｕ／ｍｌに戻す。生成物を、３７０ｍＯｓｍｏｌ／Ｉの浸透圧及びｐＨ７で透析 する。その後生成物を、例えば孔径が０．２２μｍのＭｉｌｌｉｐａｃｋｏフィ ルター４０（Ｍｉ　Ｉ　Ｉ　１ｐｏｒｅ）を用いて滅菌濾過する。生成物を凍結 のためのプラスチックの袋、又は凍結乾燥のためのびんに入れる。

カルシウム、ヘパリン及びリジンを添加することによる、低温殺菌及び限外濾過 の際の血漿の安定化により、リジン及びソルビトールのみを含む標準製品に対し て（下記で°対′　と示す）以下の収率を得ることができる： ＦＶＩｒｌｃ　８７％対６６％ ＦＶｃ　７７％対３５％ ＦＶＩＩｃ　５５％対５２％ ＦＩＸｃ６０％対４９％ 凝固性フィブリノーゲン　８１％　対　５７％ＦＸＩＩＩ　７７％対７１％ この量のカルシウムの存在による凝固因子の活性化の兆候は見られない。従って 牛ＦＶＩＩ／凝固ＦＶＩＩ比は、標準製品の１．０９に対して０．９５である。

周囲温度にて液状で２４時間保存した後のＦＶＩＩ■の活性を監視することによ り調べた安定性は、標準試料と比較して悪影響を受けていない（１００％活性の 回収）。これは、低温殺菌した製品及び標準製品に関するＰＫＡにおける比率が 〈２％ということと一致している。

さらにこのようにして低温殺菌した血漿の静脈注射によるラットについての試験 は、高血圧効果のないことを示し、心リズムの変化は現さない。

要　約 本発明は、全体又はクリオプロテインを含まない血漿を、低温殺菌の間安定化す るための配合物に関する。本発明の配合物は、非常に大量の血漿の低温殺菌を可 能にする（最高数百リットル）。

本発明は、安定化配合物を用いた血漿の低温殺菌法にも関する。

得られる低温殺菌血漿は、治療への使用を目的とする。

国際調査報告 国際調査報告 ＦＲ９１００４９３ Ｓ＾　４８７４６

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. １．低温殺菌中の血漿の安定化のための配合物において、ソルビトール、ヘパリ ン、塩化カルシウム及びリシンの混合物の形態であることを特徴とする配合物。
2. ２．第１項に記載の配合物において、ソルビトール濃度が５００−８００ｇ／ｌ であることを特徴とする配合物。
3. ３．第２項に記載の配合物において、ソルビトール濃度が６００ｇ／ｌであるこ とを特徴とする配合物。
4. ４．第１−３項のいずれかに記載の配合物において、ヘパリン濃度が１００−１ ０００Ｕ／ｌであることを特徴とする配合物。
5. ５．第４項に記載の配合物において、ヘパリン濃度が５００Ｕ／ｌであることを 特徴とする配合物。
6. ６．第１−５項のいずれかに記載の配合物において、塩化カルシウム濃度が３− ５ｍＭであることを特徴とする配合物。
7. ７．第６項に記載の配合物において、塩化カルシウム濃度が４ｍＭであることを 特徴とする配合物。
8. ８．第１−７項のいずれかに記載の配合物において、リシン濃度が１−１０ｇ／ ｌであることを特徴とする配合物。
9. ９．第８項に記載の配合物において、リシン濃度が４ｇ／ｌであることを特徴と する配合物。
10. １０．血漿の低温殺菌において、加熱段階の前に第１−９項のいずれかに記載の 配合物を血漿に添加し、該配合物を透析により除去することを含むことを特徴と する方法。
11. １１．第１０項に記載の方法において、透析をｐＨ７にて、４−１０ｍＭの濃度 のクエン酸ナトリウム、４ｍＭの塩化カルシウム、０．１３Ｍの塩化ナトリウム 及び４ｇ／ｌの濃度のリシンを含む緩衝液に対して行うことを特徴とする方法。
12. １２．第１１又は１２項に記載の方法において、１リットルから数百リットルの 量の血漿に適用できることを特徴とする方法。
13. １３．血液凝固因子Ｖ，ＸＩ及びＸＩＩＩの欠乏を補うことを目的とする治療的 利用のための血漿溶液において、第１０−１２項のいずれかに記載の方法を用い て得ることを特徴とする溶液。
14. １４．治療に使用する全血漿において、第１０−１２項のいずれかに記載の方法 を用いて低温殺菌したことを特徴とする全血漿。
15. １５．治療に使用するための低温沈澱の上澄み及びクリオプロテインを含まない 血漿において、第１０−１２項のいずれかに記載の方法を用いて低温殺菌したこ とを特徴とする上澄み及び血漿。