JPH05503218A - １７―オキソステロイドの製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １７−オキソステロイドの製法 本発明は、１７β−ヒドロキシステロイドの醗酵酸化による１７−オキソステロ イドの製法に関する。

醗酵による１７−オキソステロイドの製法は長い間知られている。既に１９３８ 年に＾、　Ｖｅｒｃｅｌ　１ｏｎｅ及びり。

Ｍｏ＋＊ｏＬｉが５−アンドロステン−３β、１７β−ジオールの醗酵による４ −アンドロステン−３，１７−ジオンの製法を記載している（　Ｂｅｒ、　、７ ユ、１９３８．１５２〜１５５）。この方法では、好適な微生物が選択されれば 方法生成物の高い収率が達成される（チェコスロバキア国第８７０６８号；文献 Ｃ，Ａ、５４．１９６０．２４４１）。また、１７−オキソステロイド（例えば ４−アンドロステン−３，エアージオン、■、４−アンドロスタジエン−３，１ ７−ジオン又は３−ヒドロキシ−１，３，５（１０）−二ストラトリエン−１７ −オン）を、１７β位に炭化水素連鎖を有する基質の醗酵側鎖分解により高い収 率の達成下に製造できることが記載されている非常に多くの刊行物が見出される 。

１７β−ヒドロキシステロイドを良好な収率で微生物学的に１７−オキソステロ イドに酸化することを可能にし、しかもその際にステロイドを付加的に変換させ ない方法については極めて僅かしか知られてはいない。Ｍ、　１ｌｅｌｓｈ及び Ｃ，［Ｉｅｕｓｇｈｅｍは、エストラジオールを９５％の収率でエストロンに変 換することを可能にする方法を記載しているが、この方法は再現することはでき ない。それというのも著者等ｌこより使われた微生物が公けには入手し得ないか らである（　Ｃｏａ＋ｐｔ、　！？ｅｎｄ。

Ｓｏｃ、　Ｂｉｏｌ、　、１４２．１９４８．１０７４）。

しかし、このような醗酵による方法の開示が強（必要とされている。それという のも化学的酸化法は経費がかさむからである。更に、この化学的方法には、環境 を汚染しない廃棄物処理が問題であるピリジン及びところで、１７β−ヒドロキ システロイドを醗酵させる際にミコバクテリウム・スペック（Ｍｙｃｏｂａｃｔ ｅｒｉｕｍｓｐｅｃ、　）　ＮＲＲＬ　Ｂ　−３８０５、ミコバクテリウム・ス ペックＮＲＲＬ　Ｂ−３６８３、ミコバクテリウム・フレイ（１１ｙｃｏｂａｃ ｔｅｒｉｕｗ　ｐｈｌｅｆ）　ＮＲＲＬ　Ｂ　−８１５４又はミコバクテリウム ・フォルライツム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｆｏｒｔｕ−ｉｔｕｍ）　Ｎ ＲＲＬ　Ｂ　−８１５３の種の細菌培養物を使用する場合に１７−オキソステロ イドが１７β−ヒドロキシステロイドから高収率で製造できることが判明し驚異 的であった。

本発明方法は、前記の微生物培養物を用いる公知の微生物学的変換でも適用され るのと同じ醗酵条件下に実施する。

前記の細菌培養物に一般に使われる培養条件下で好適な培地中で通気下に深部培 養を行なう。その後、培養物に基質（好適な溶剤中に溶解したか又は乳化形で） を添加し、かつ最大の基質変換が達成されるまで醗酵させる。

例えば、好適な基質溶剤はメタノール、エタノール、グリコールモノメチルエー テル、ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシドである。例えば、基質の 乳化は、基質を微細形で又は水と混合可能な溶剤（例えばメタノール、エタノー ル、アセトン、グリコールモノメチルエーテル、ジメチルホルムアミド又はジメ チルスルホキシド）中に溶解して、常用の乳化助剤を含有する（殊に冷却された ）水中に激しい乱流下に噴射装入することにより行なうことができる。好適な乳 化助剤は、例えばエチレンオキシ付加物又はポリグリコールの脂肪酸エステルの ような非イオン系乳化剤である。好適な乳化剤としては、例えば市販されてい、 る湿潤剤テジン（丁ｅｇｊｎ■）、ツイーン（Ｔｖｅｅｎ■）及びスパン（Ｓｐ ａｎ［Ｆ］）が挙げられる。

最適な基質濃度、基質添加時間及び醗酵時間は使用する基質及び微生物の種類及 び醗酵条件に左右される。これらの大きさは、微生物学的ステロイド変換で一般 に必要とされるように、個々の場合に当業者によく知られているように予備実験 により確定しなければならない。

本発明方法を実施するに当り、基質として一般式■Ｒ１は水素原子又はメチル基 を表わし、かつＳｔは連接していない二重結合５個までを含有し、３位でフェノ ール性ヒドロキシ基、低級アルコキシ基、低級−１−アルコキシ−アルコキシ基 、２−テトラヒドロピラニルオキシ基又は低級アルキレンジオキシ基によりかつ 場合により５，１〇−位でエポキシ基によりかつ１９位で場合によりメチル基に より置換されているニストラン−１７β−オール誘導体の残基を表わす］の１７ β−ヒドロキシステロイドを使用すると育利である。

殊に、低級アルコキシ基とは炭素原子４個までを有する基である。例えば、好適 なアルコキシ基はメトキシ基又はｔｅｒｔ−ブチルオキシ基である。殊に、低級 −１−アルコキシ−アルコキシ基とは炭素原子４個までを有するアルコキシ基を 有する低級アルコキシ−メトキシ基である。例えば、１′−メトキ／−メトキン 基が挙げられる。殊に、低級アルキレンジオキシ基とはエチレンジオキシ基又は ２，２−ジメチル−プロピレンジオキシ基のような炭素原子２〜６個を有する基 である。

例えば、本発明方法を実施するのに好適な基質は一般式Ｉａ。

ＲＩ　１は前記のものを表わし、 Ｒ２は水素゛原子又は炭素原子４個までを含有するア＝Ｃ−゛を表わ′す・］の ］ニストランー１７β−オール誘導である。−１・ この基質から形成されたニストラン−１７−オン誘導体もしくはこれからエーテ ル脱離により得られた３−ヒドロキシ化合物は周知のように薬理的に有効であり 、かつ更に周知のように相応する１７α−ヒドロキシ化合物に還元あるいは相応 する１７β−ヒドロキシ−１７α−エチニル化合物に変換することができる。

更に、好適な基質は一般式Ｉｂニ ーは単結合又は二重結合を表わし、 Ｒ１は前記のものを表わし、 Ｒ３は最高４個の炭素原子を有するアルキル基を表わす］のニストラン誘導体で ある。

該化合物から形成した１７−オキソステロイドは周知のように薬理的に有効な１ ７α−エチニル−１７β−ヒドロキシ−４−ニストレン−３−オンないしはその １８−メチル同族体の製造に使うことができる。

また、言及するに値する基１實は一般式Ｉｃ：Ｒ，は前記のものを表わし、 Ｒ４は水素原子又はメチル基を表わし、Ｒ５及びＲ６は一緒になって低級アルキ ルジオキシ基を表わすか、又は Ｒ５は水素原子を表わし、かつ Ｒ６は低級アルコキシ基、低級−１−アルコキシアルコキシ基又は１２−テトラ ヒドロピラニル基を表わす］を゛有す４るものである。　。

該化金物から得られる１７−オキソステロイドは、一般式Ｊｃ）のニストラン− １７β−オール誘導体からのように更に加工することができるが、他方当業者に 知られているようにプレグナン誘導体の製造にも使うことができる。

最後に一般式１ｄ Ｒ１は前記のものを表わし、 Ｒ９は水素原子でありかつＲ７及びＲ８は一緒になって低級アルキレンジオキシ 基を表わし、又はＲ７及びＲ９は２つの水素原子を表わすか又は−緒になって炭 素−炭素結合を表わし、かつＲ８は低級アルコキシ基、低級−１−アルコキシア ルコキシ基又は２−テトラヒドロピラニルオキシ基を表わす］のニストラン−１ ７β−オール誘導体も言及に値する。

該化合物から得られたケトンはヨーロッパ特許公開第０１２９４９９号明細書に 記載されているような方法により抗ゲスタゲン作用ステロイドに変換することが できる。

次の実施例により本発明方法を詳説する。

例　１ ａ）　酵母エキス　１％ Ｎａ２ＨＰＯ４・２Ｈ２００，４５％ ＫＨ２ＰＯ４０，３４％ ツイーン８０　０．２％ を含有するｐＨ６，７の滅菌培地１００ｍＺを含有する５００寵ｌ−三角フラス コにミコバクテリウム・スペックＮＲＲＬ　Ｂ−３６８３培養物の懸濁液を接種 し、かつ７２時間３０℃で１８０　ｒｐｍで振盪させる。

ｂ）　コーンスチーブリ力−０，５％ グルコースモノヒトレート　０．０５％酵母エキス　０．２％ −ｐＨ７，０に調節したー を含有する滅菌培地各２０１１／を含有する三角フラスコ（１００諺１）５０個 にそれぞれ１厘ｌのミコバクテリウム・スペック培養物を接種し、かつ回転式振 盪機で２２　Ｑ　ｒｐｍで２４時間３０℃で恒温保持する。

その後、各培地にジメチルホルムアミド０　、２　ｍｌ中に溶解しかつ滅菌濾過 した３、３−　（２，２−ジメチルトリメチレンジオキシ）−５，１０α−エポ キシ−５α−ニストルー９（１１）−エン−１７β−オール０２ｇを添加し、か つ更に４８時間３０℃で醗酵させる。

Ｃ）　合した培養物をメチルイソブチルケトンで抽出し、かつ抽出物を回転式蒸 発器中で最高５０℃で真空下に濃縮する。引続いて、精製を珪酸ゲルカラムを介 してクロマトグラフィにより行なう。

このようにして３．３−　（２，２−ジメチルトリメチレンジオキシ）−５，１ ０α−エポキシ−５α−ニストルー９（１１）−エン−１７β−オール０．８５ ９が得られ、これはＨＰＬＣにより真正試料と同一である。

例　２ ａ）　培養物の製造は例１ａ）と同様にして行なうｂ）　それぞれ、 コーンスチーブリカ−２５％ 大豆粉　０．２５％ （ＮＨ４）２ＨＰＯ４０，３′％ ツイーン８０　０．２５％ −ｐＨ６，５に調節したー を含む滅菌培地２０ｍ１を含有する三角フラスコ（１００，１）５０個にそれぞ れ１１１のミコバクテリウム・スペック培養物を接種しかつ回転式振盪機上で２ ２Ｏｒｐｍで２４時間３０℃で恒温保持する。

その後、各培地にジメチルホルムアミド９．２ｍｌを溶解しかつ滅菌濾過したα −エクイロール０．００２ｑを加えかつ更に３０℃で７２時間醗酵させる。

Ｃ）　生成物の単離はｌｃ）に記載したように行なう。

このようにしてエクイリン０．０９５ｇが得られ、これはＨＰＬＣにより真正試 料と同一である。

要　約　書 １７β−ヒドロキシステロイドの醗酵酸化による１７−オキソステロイドの製法 が記載されており、この方法は醗酵に当り、ミコバクテリウム・スペック（Ｍｙ −ｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　５ｐｅｃ、　）　ＮＲＲＬ　Ｂ−３８０５、ミ　コ ノ＜　り　チリウム・スペックＮＲＲＬ　Ｂ−３６８３、ミコバクテリウム−７ Ｌ／イ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｐｈｌｅｉ）　ＮＲＲＬ　Ｂ−８１５４ 又はミコバクテリウム・フォルライツム（ｌｌｙｃｏｂａｃ−ｔｅｒｉｕｍ　ｆ ｏｒｔｕｉｔｕｍ）　ＮＲＲＬ　Ｂ−ｇ　ｌ　５３の種の細菌培養物を使用する ことを特徴とする。

国際調査報告 国際調査報告

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. １．１７β−ヒドロキシステロイドを醗酵酸化することにより１７−オキソステ ロイドを製造する方法において、醗酵させるためにミコバクテリウム・スペック （Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｓｐｅｃ．）ＮＲＲＬ　Ｂ−３８０５、ミコバ クテリウム・スペックＮＲＲＬ　Ｂ−３６８３、ミコバクテリウム・フレイ（Ｍ ｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｐｈｌｅｉ）ＮＲＲＬ　Ｂ−８１５４又はミコバク テリウム・フォルッイツム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ ）ＮＲＲＬ　Ｂ−８１５３の種の細菌培養物を使用することを特徴とする１７− オキソステロイドの製法。
2. ２．一般式Ｉ： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）［式中 Ｒ１は水素原子又はメチル基を表わし、かつＳｔは連接していない二重結合５個 までを含有し、３位でフェノール性ヒドロキシ基、低級アルコキシ基、低級−１ −アルコキシ−アルコキシ基、２−テトラヒドロピラニルオキシ基又は低級アル キレンジオキシ基によりかつ場合により５，１０−位でエポキシ基によりかつ１ ９位で場合によりメチル基により置換されているエストラン−１７β−オール誘 導体の残基を表わす］の１７β−ヒドロキシステロイドを酸化することを特徴と する、請求項１による１７β−ヒドロキシステロイドの醗酵酸化による１７−オ キソステロイドの製法。