JPH05503687A - 自己免疫疾患の治療 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 自己免疫疾患の治療 ｉ遣 自己免疫疾患とは、以下のような幅広い疾病を指す。

すなわち、多発性硬化症および静脈周囲性脳を髄炎といった炎症性の中枢神経系 疾患ならびに炎症性脱髄性多発ニューロパシーなどのある種の神経障害；リュー マチ熱などのある種の心血管障害およびシャーガス病などのある型の心筋炎：尋 常性天庖癒および水庖性天庖癒といった自己免疫皮膚疾患；全身性紅斑性狼癒（ ＳＬＥ）；強皮症；自己免疫性溶血性貧血：血小板減少性紫斑病；重症筋無力症 などの骨格筋の自己免疫疾患：皮膚神経症および多発性筋炎；グレーヴズ病；甲 状膳炎およびアジラン病、Ｉ型およびＩＩ型の多線症候群；悪性貧血；インシュ リン依存性糖尿病；慢性活動性肝炎および原発性胆汁性肝硬変といった自己免疫 肝疾患；糸球体腎炎５間買性腎炎、抗ＧＢＭ腎炎および抗原細管基底膜疾患とい った自己免疫腎疾患；藻抗原性ブドウ膜炎、交感性眼炎、廠痕性結膜炎、モーレ ン潰瘍、強腹炎ならびに前部および後部ブドウ膜炎といった自己免疫眼疾患；混 合結合組織疾患；リューマチ様動脈炎；何らかの炎症性小腸疾患：シェーングレ ン症候群；クリオグロブリン血症である。

自己抗原に侵された個人では、あらゆる自己免疫疾患が異常な免疫応答によって 引き起こされる。これは、組織の破壊および細胞機能の変化に至る幅広い免疫機 序にかかわり、自己免疫疾患のさまざまな様相を呈することとなる。

大多数の自己免疫疾患に対する有効な治療法はない。

利用できる治療法では、痛みが緩和されたり、これらの疾病の症状を軽度なもの にする抗炎症薬の使用が考えられる。細胞破壊性ステロイド類などの免疫抑制薬 も、免疫系全体の活動度を抑制するために使用される。

最近、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）または活性型免疫細胞の表面抗原に特異的なモノク ローナル抗体が、自己免疫疾患の治療薬として、モデル動物実験系およびヒトの 臨床試験で検討されてきた。それらの例の中には、（１）ヘルパーＴ細胞上のＣ Ｄ４抗Ｍ［Ｗｏｆｓｙ、　Ｄ、　ａｎｄ　Ｓｅａｍａｎ、　Ｗ。

Ｅ、、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１６１：３７８（１９８５）；　Ｗａｌｄ ｏｒ、Ｍ、に、　ｅｔ　ａｌ、５ｃｉｅｎｃｅ　２２７：４１５（１９８５）； 　５ｈｉｚｕｒｕ、Ｊ、Ａ、　ｅｔ　ａｌ、　５ｃｉｅｎｃｅ　２４０：６５９ （１９８７）コ、（２）マクロファージ、Ｂ細胞および活性型Ｔ細胞上のＩａ抗 Ｍ　［Ｓｔｅｉｎｍａｍ、Ｌ、　ｅｔ　ａｌ、　Ｐｒｏｅ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃ ａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｌｌ、Ｓ、Ａ、　７８ニア１１１（１９８１）；　Ｓｒｉａ ｍ。

Ｓ、　ａｎｄ　Ｓｔｅｉｎｍａｎ、　Ｌ、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１５８ ：１３６２（１９８３）；　ＭｃＤｅｖｉｔｔ、Ｈ，０，ｅｔ　ａｌ、　Ｃ１ｂ ａ　Ｆｏｕｎｄ、　Ｓｙｍｐ、　１２９：８４（１９８７）］および（３）活性 型Ｔ細胞上のインターロイキン−２受容体［Ｋｅｌｌｙ、Ｖ、Ｅ、　ｅｔ　ａｌ 、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１４０：５９（１９８８）：　Ｓｔｒｏｍ、　Ｔ 、Ｂ、ｅｔ　ａｔ、　Ｐｒｏ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｂｉｏｌ、　Ｒｅｓ、　２２４： ２２７（１９８６）　］に対するモノクローナル抗体が挙げられる。これらモノ クローナル抗体は、抗体と反応する表面抗原を保持するリンパ球をインビボで破 壊したり、その増殖を押えたりすることが示されてきた。特異的な標的細胞を枯 渇させる免疫機序は、抗体依存性細胞毒性（Ａ　Ｄ　ＣＣ）および補体依存性細 胞溶解を含み、恐らく他の何らかの機序も含むものと考えられる。Ｔ細胞または 活性型免疫細胞の表面抗原に特異的な抗体は、全免疫系を抑制し得るので、自己 抗原に対する抗体の反応をも抑制することができる。この一般的な免疫抑制によ って、自己免疫疾患患者の疾病の重篤度が軽減される。

しかし、Ｔ細胞または活性型Ｔ細胞の枯渇から生じる一般的な免疫抑制は、副作 用を有する治療であり得るが、これらの副作用は、多くの患者で利点を凌ぐほど 有害である。Ｔ細胞は、細胞障害Ｔ細胞、抗体応答、ならびに貴食性単核および 多形核細胞を含むさまざまな免疫系の発生、成熟および調節において中心的な役 割を担う。

したがって、自己免疫疾患に関連した抗体を抑制したり、選択的に枯渇させる治 療法の開発が望まれている。

例えば、リューマチ様動脈炎の患者では、ＩｇＧのタイプの中には、リューマチ 様因子として知られている、ＩｇＧおよび工ｇＭの産生を誘導する異常エピトー プを有するものもあるにれら自己免疫ＩｇＧは、リューマチ様因子に結合し、免 疫複合体を形成し、リューマチ様動脈炎の病因に結び付く、他の多くの自己免疫 疾患ではｒｇＧおよび１ｇＭアイソタイプの免疫グロブリン産生が刺激され、ま た、自己免疫疾患の中には他のアイソタイプの産生が刺激されるものもあり得る 。特定の自己免疫疾患に関連したアイソタイプ、特にはこういった疾患に最も関 連したアイソタイプのＩｇＧおよびＩｇＭの合成を選択的に抑制することが非常 に望まれることとなるこの発明は、自己免疫疾患に関連したアイソタイプの免疫 グロブリンを産生ずるＢ細胞を選択的に抑制または枯渇するか、またはこれらの 細胞の前駆体を選択的に抑制または枯渇することによる自己免疫疾患の治療に関 する。好ましい実施態様としては、Ｂ細胞表面に発現するＩｇＧおよびＩｇＭ型 のアイソタイプを標的とすることによる自己免疫疾患の治療、ならびにこれらエ ピトープを標的とするために使用可能な抗体および関連産物が含まれる。この発 明の他の実施態様では、特定のアイソタイプ抗体を分泌するＢ細胞が、このＢ細 胞に対するアイソタイプ特異的免疫応答を刺激する産物（例えば、Ｂ細胞に特異 的に結合する抗体の産生）を投与することによって、除去または抑制される。

ヒトの免疫グロブリンアイソタイプには、ＩｇＧ（４つのサブクラスを有する） 、ＩｇＡ（２つのサブクラスを有する）、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥがある。

ＩｇＧは、オプソニン作用および細胞毒性をもたらし、胎盤を通過する。ＩｇＡ は粘膜表面で機能し、ＩｇＭは補体の結合に最も有効であり、ＩｇＥは肥満細胞 および好塩基球の脱顆粒を媒介する。ＩｇＤの機能はまだよく分かっていない、 ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよび■ｇＥは、それぞれ、γ、α、μ、δお よびε鎖と称される。これら免疫グロブリンのアイソタイプそれぞれの細胞結合 型は、Ｂ細胞の表面上で発現され、可溶性の分泌型アイソタイプを産生ずるＢ細 胞は該特定アイソタイプの細胞結合型をも発現する。

免疫グロブリンの細胞結合型におけるＨ鎖のＣ末端からの延長部分は、膜固定ペ プチドである。これら膜固定ペプチドは、細胞膜の脂質二重層を貫通しているの で、関連の免疫グロブリンを細胞膜表面に固定させる。これらペプチドの細胞外 セグメントは、異なったアイソタイプに対して特有のものであるが、特定アイソ タイプの異なったサブクラス間では極めて類似している傾向がみられる。各免疫 グロブリンのアイソタイプ型の細胞外セグメントは、そのアイソタイプを発現す るＢ細胞に特有のエピトープを形成するが、それはセグメントの全体または一部 分である。これら膜結合の免疫グロブリンアイソタイプ特異的（ｒ　ｍ　ｉ　ｇ 　ｉ　Ｓ　Ｊ　（ｍｅｍｂｒａｎｅ−ｂｏｕｎｄ　４ｍｍｕｎ。

ｇｌｏｂｕｔｉｎ　ｊｓｏｔｙｐｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ））細胞外エピトープは 、可溶性分泌型の免疫グロブリン上には存在しない、なお、これらの可溶性分泌 型免疫グロブリンは、膜固定ペプチドによって細胞表面には結合していない。

この発明の抗体および他の関連産物は、Ｂ細胞表面に存在するｍ１ｇ１ｓエピト ープ、好ましくはｍ１ｇ１ｓ−μまたはｍ１ｇ１ｓ−γエピトープに結合する１ 次いで、特定のアイソタイプ、例えば、ＩｇＧまたはＩｇＭは多様な免疫機序に よって除去されたり、調節されたりする場合がある。

免疫担当細胞ではあるが、まだ活性化されていない休止中のＢ細胞は、ＩｇＭお よびＩｇＤを発現する。活性化され、抗体を分泌するように規定されると、これ らのＢ細胞は、５種類のアイソタイプのどれをも発現可能となる１ｍ１ｇ１ｓ− μエピトープを標的とするある産物は、休止中の免疫担当Ｂ細胞を枯渇させたり 抑制する。

その結果、その産物によって、免疫グロブリンアイソタイプの５種類すべてを産 生ずるＢ細胞の枯渇または抑制を引き起こすことになろう、しかし、この免疫抑 制は、抗体の産生に限定され、Ｔ細胞、マクロファージおよび顆粒球の機能に影 響を及ぼすことはない。

この発明の抗体には、ポリクローナル抗体とモノクローナル抗体の両者が含まれ る。投与された抗体に対する免疫産生反応を避けたり、最小にするためには、キ メラ抗体（ある動物の可変結合領域とヒトの不変領域との組合わせ）、単鎖の抗 体、ヒト抗体、またはヒトもしくはキメラ抗体の断片を含む数種の関連産物を使 用することができる。不変領域の全体および可変領域のほとんどがヒト由来であ っ・て、抗原結合部位のみが動物由来である抗体も使用することができる。他に 、この発明の抗体の数種の誘導産物は以降に記載されているが、これらも治療に 使用することができる。

この発明を図面を参照して詳細に記載する。

の　な 図ＩＡは、ヒトチー１鎖の１セグメントのゲノムＤＮＡ配列を示す、膜固定ペプ チドをコードするように提案される第１の膜エクソンの配列には下線が引かれて いるが、フランキングヌクレオチド配列には下線は引かれていない。

図ＩＢは、ヒトチー１鎖の１セグメントのゲノムＤＮＡ配列を示す、膜固定ペプ チドをコードするように提案される第２の膜エクソンの配列には下線が引かれて いるが、フランキングヌクレオチド配列には下線は引かれていない。

図２Ａは、図ＩＡおよびＩＢで示されるヒトチー１鎖の２つの膜エクソンの配列 （フランキングヌクレオチド配列の中には小文字で表されるものもある）、なら びに相当するγ−２、γ−３およびγ−４の各鎖のヌクレオチド配列を示す。

図２Ｂは、図ＩＡで示される膜中エクソンによってコードされた推定のアミノ酸 配列を示す、提案された細胞外セグメントは示されていない。

図３Ａは、ＩＭ９細胞のｍＲＮＡから得られたヒトのγ−１ｍのｃ　ＤＮＡの１ セグメントの配列を示すが、この配列では１図ＩＡで示される膜エクソン、図Ｉ Ｂで示される膜エクソン、および３′末端非翻訳領域にＣＨ３領域が連結されて いる。

図３Ｂは、図３Ａで示されるｃＤＮＡセグメントのスプライシングのドナー／レ セプター部位を示す。

ましい　の　な　な゛びに　および 辺」Ｌ法 膜固定ペプチドは、関連アイソタイプの長鎖の一部であって、細胞表面にこれら のアイソタイプを固定する。

ＩｇＭおよびＩｇＧのそれぞれでは、これら固定ペプチドは、アミノ酸４】およ び７１個分の長さを有する。これらの膜固定ペプチドは３つのセグメントに分け られ、各セグメントは細胞膜中で異なった位置に存在する。２５個の非電荷およ び疎水性残基からなる中間のセグメントは、膜の脂質二重層中にある。ＩｇＭの 膜固定ペプチドのＣ末端親水性セグメントは３個のアミノ酸残基を有し、相当す るＩｇＧのＣ末端親水性セグメントは２８残基を有する。これらＣ末端セグメン トは、細胞中にあると見られている。Ｎ末端方向のＩｇＭセグメントは、１３個 のアミノ酸残基を含むが、相当するＩｇＧのセグメントは１８個のアミノ酸残基 を含む、Ｎ末端方向のこれらセグメントは１強い酸性を示し親水性であるので、 細胞膜の細胞外表面にあると考えられている。このＮ末端セグメントは恐らく細 胞外にあるので、抗体にさらされやすくて接触可能であるため、特定のアイソタ イプを産生ずるＢ細胞を破壊する手段が提供される。これら細胞外セグメントは 、その全体または一部がｍ１ｇ１ｓエビトープと称されるエピトープを形成する 。

ＩｇＧ（サブクラス１ないし４）の膜固定ペプチドの提案された配列は、以下の ような方法によって決定された。ＩｇＤおよびＩｇＭの膜固定ペプチドの配列は 以前に公開されていたが、公開されたヒト１ｇＭの配列は。

部分的に不正確なものと見られていた。ＩｇＡのｍＩｇｉｓセグメントの配列は 、国際出願番号ＰＣ：Ｔ／ＵＳ９０１０３５３２に見られ、ＩｇＥのｍ１ｇ１ｓ セグメントの１イソ型配列は、公開された国際出願番号ＰＣＴ／１Ｊｓ８８１０ ４７０６に見られる。ＩｇＨの第２のイソ型の提案されたｍ１ｇ１ｓセグメント は、以下の通りである。すなわち、 ＧＬＡＧＧＳＡＱＳＱＲＡＰＤＲＶＬＣＨ８ＧＱＱＱＧＬＰＲＡＡＧＧＳＶＰＨ ＰＲＣＨＣＧＡ、ＧＲＡＤＷｊＧＰＰＥＬＤＶＣＶＥＥＡＥＧＥＡＰＷである。

ＩｇＨの第３のイソ型の提案されたｍ１ｇ１ｓセグメントは、以下の通りである 。すなわち、 ＧＡＡＶＰＬＳＨＡＡＧＥＡＰＤＬＰＲＬＨＱＲＰＰＡＰ　Ｒ，Ｌ　Ｇ　ＲＧ　 ＨＳ　ＲＳ　Ｔ　ＲＰ　Ｓ　Ｆ　Ｆ　Ｓ　Ａ　Ｓ　Ａである。

細胞外のｍ１ｇ１ｓエピトープを含むペプチド、またはこれらペプチドのセグメ ントもしくは免疫学的均等物は、免疫原として使用することができる。こういっ た免疫原ペプチドは、Ｆｍｏｃの化学を応用するＲ　ａＭＰ系（ＤｕＰｏｎｔ　 ＤｅＮｅｏｕｒｓ　＆　Ｃｏ、　）などを使った従来の手法によって合成可能で ある。また、ｍ１ｇ１ｓエピトープを含む組換えペプチドまたは免疫グロブリン のＨ鎖（またはその一部）は、これらのペプチドのコード配列を含む遺伝子セグ メントを大腸菌または真核細胞中で発現させることによって生合成可能である。

合成ペプチドのセグメントを免疫原として使用する場合、通常、タンパク担体、 例えば、Ｂ型肝炎の表面抗原、コア抗原、または好ましくはキーホール・リンペ ット（Ｋｅｙｈｏｌｅ　ｌｙｍｐｅｔ）のヘモシアニン（ＫＬＨ）にこのセグメ ントを結合させることがより効果的である。このペプチドセグメントがリジン残 基を欠いていたり、リジン残基がこのセグメントの中央部にある場合、Ｃ末端に リジン残基を付加させることが好ましい、Ｎ末端はすでにα−アミノ基を有して いるので、修飾されたこの合成ペプチドは、連結に利用し得る２つのアミノ基を もつこととなろう。

ペプチドの複数の分子を、担体タンパクの各分子に結合させることができる。Ｋ ＬＨを用いた場合、ペプチド／ＫＬＨの好ましいモル比は１０である。結合法は すでに確立されたものである。グルタルアルデヒド、またはビス（スルホスクシ ニミジル）スペレートもしくは好ましくはジスルホスクシニミジルタルタレート （カタログ番号２１５７９，２０５９１　、Ｐｅ１ｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　 Ｃｏ、、　Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、　ＩＬ）といった架橋側が使用可能である。

免疫原としては、下記に詳述するプロトコールを用いて、上記のペプチドを使用 してそれらに特異的なモノクローナル抗体を作製することができる。ヒトε鎖の ｍ１ｇ１ｓエピトープに対するモノクローナル抗体は、基本的には下記と同じプ ロトコールを用いて作製されている、国際出願番号ＰＣ，Ｔ／ＵＳ８８１０４７ ０６を参照のこと、この８１３１ｍ　ｉ　ｇ　ｉ　εセグメント（長さにして１ ５個のアミノ酸）上のエピトープに対するモノクローナル抗体の作製に成功した のは、ｍ　ｉ　ｇ　ｉ　ｓ−μまたはｍ１ｇ１ｓ−γセグメント（前者は同程度 の長さであり、後者はｍ１ｇ１ｓ−εセグメントより長い）に対する抗体を作製 できることを示している。また、ヒトのδｉ（ＩｇＤ）のセグメントに対する抗 体の産生も報告されている１文献［Ｂｌａｔｔｎｅｒ、　Ｆ、Ｒ，ｅｔ　ａｌ、 　Ｎａｔｕｒｅ、　３０７：　４１７−４２２　ａｔ　４１８　（１９８４）コ 参照のこと。

この発明の免疫原性ペプチドは、ウサギ、ヤギ、ラットもしくはマウス（または 他人でさえ）を免疫して細胞外ｍ１ｇ１ｓエピトープに対するポリクローナル抗 体を調製するためにも使用可能である。この発明のペプチドと反応するモノクロ ーナル抗体は、特異的なアイソタイプを有する細胞との陽性の特異的反応性につ いて更にスクリーニングすることができる０次いで、このモノクローナル抗体を インビボで使用することができる。しかし、この発明のペプチドに対して作製さ れたポリクローナル抗体は、一般に、天然の分子とは反応しないが合成ペプチド と反応する抗体のほとんどを含む０合成ペプチドに対して作製されたポリクロー ナル抗体が完全な細胞と反応するか否かを試験しなければならない。

モノクローナル抗体を調製する場合、該合成または組換えペプチドを免疫化と抗 体同定の画方で使用する必要はない６例えば、骨髄腫細胞と融合させるための膵 臓細胞を調製するに際し、免疫原は、ＩｇＧ発現性ＩＭ９細胞系などの免疫グロ ブリン保持骨髄腫細胞の細胞膜から分離された膜結合免疫グロブリンであっても よく、またはそれが骨髄腫細胞自体であってもよい、マウスの骨髄腫細胞にヒト の免疫グロブリンＨ１１およびＬ鎖をトランスフェクトすることによって作製さ れ、かつ、それら細胞表面上に膜結合免疫グロブリンを発現させるトランスフエ フトーマ（Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｍａ）を免疫原として使用することもできる。

免疫化に続く最初のモノクローナル抗体の分離では、担体タンパクとして用いて いないオバルブミンまたはウシ血清アルブミンに結合した上記の合成ペプチドを 使用することが好ましい。

免疫マウスおよびラットの膵臓またはリンパ節から得られたリンパ球を使用して も、ｍ１ｇ１ｓエピトープに対して特異的なモノクローナル抗体を分泌するハイ ブリドーマを調製することができる。モノクローナル抗体を調製するための好ま しいプロトコールは、ポリエチレングリコールを使って、Ｎ５−１または５Ｐ２ １０細胞などの非分泌性マウス骨髄腫細胞でマウスの免疫膵臓細胞を融合させる ことである。

モノクローナル抗体を調製するための好ましいプロトコールは、完全フロインド アジュバントに溶けたこの発、明の組換えまたは合成ペプチドとＫＬＨとの複合 体５０μｇを各マウスに注射することである。２および４週間後に、同じ量の抗 原を不完全フロインドアジュバント中に溶かして皮下投与する。約６週間後の４ 回目に、抗原を生理食塩水に溶かして腹腔内注射する。最後の注射から４日後、 マウスを解剖し、骨髄腫細胞との融合用の単一細胞浮遊液を調製するために膵臓 を摘出する。

１Ｍ１９細胞などの免疫グロブリン保持ヒト骨髄腫細胞の細胞膜から分離した、 ヒトの天然の精製膜結合免疫グロブリン（膜固定ペプチドセグメントが結合した ）を用いた免疫化のために類似のプロトコールを使用することができる。ヒト免 疫グロブリン保持細胞を免疫原として使用する場合、Ｉ　Ｘ　１０７細胞を２週 間の間隔をおいて腹腔内注射する。

クローニングおよびハイブリドーマの培養に関して。

ポリエチレングリコールを用いた方法および他のさまざまな方法を用いた融合法 が確立されている。好ましいプロトコールとしては、　Ｈｕｄｓｏｎ、Ｌ、　ａ ｎｄ　Ｈａｙ、Ｃ，［Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　１＋ａｍｕｎｏｌｏｇｙ、　２ｎｄ 　ｅｄｉｔｉｏｎ、　ｐｐ、３０３−３１３．１９８０．　Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ 　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ、、　Ｈｏ５ｔｏｎコによって記載された周知の ものがある。

この発明のｍ１ｇ１ｓエピトープと反応するモノクローナル抗体用のハイブリド ーマのスクリーニング（またはポリクローナル抗体の同定）は、固相抗原として 該合成ペプチドを用いた酵素結合免疫吸収法（ＥＬＩＳＡ）によって実施可能で ある。好ましい固相抗原は、免疫原に使用した血清アルブミンまたはオバルブミ ンとは異なった担体タンパクと膜固定ペプチドとの複合体である。

次いで、免疫蛍光フローサイトメトリー解析によって、特定のアイソタイプを発 現するＢ細胞系およびＢ細胞への特異的結合について、ＩｇＧまたはＩｇＭアイ ソタイプのｍ１ｇ１ｓペプチドに特異的なモノクローナル抗体をスクリーニング する。

一般に、最初に得られるｍ１ｇ１ｓ工ピトープ特異的モノクローナル抗体は、マ ウス由来のものであるので。

ヒトに対する治療では免疫原性またはアレルゲン性を示すこともある。したがっ て、キメラ抗体（動物の可変領域およびヒトの不変領域を有する）を産生させる か、ヒト免疫グロブリン発現ライブラリー（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ　Ｃｏｒｐ。

、　Ｌａ　Ｊｏｌｌａ、　Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ）を使ってヒト抗体の断片［Ｖ Ｈ，ＶＬ　、Ｆｙ、Ｆｄ、Ｆａｂ、またはＦ　（ａｂ’　）２コを産生させ、次 いで、キメラ抗体産生のための方法に類似する方法によってヒトの完全な抗体を 構成することが望ましい、さらに、全不変領域およびほとんどの可変領域がヒト 由来であって、抗原結合部位だけが哨乳類由来の抗体を創製することができる１ 文献［Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ、　Ｌ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｎａｔｕｒｅ　３３２： ３２３−３３７（１９８８）］参照のこと、さらに、Ｈ頗およびＬ　＠　Ｆ　ｖ 領域が結合されている単一ペプチド鎖抗体を創製することができる１文献［Ｈｏ ５ｔｏｎ。

Ｊ、Ｓ、ｅｔ　ａｌ、、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８５ ：５８７９−５８８３　（１９８３）　］参照のこと、全ての全体的および部分 的ヒト抗体の免疫原性は嘆乳類の抗体より弱く、断片および単一鎖抗体の免疫原 性は全抗体より弱い、したがって、これらすべての型の抗体は、免疫またはアレ ルギ一応答を引き起こしにくい、ある免疫応答によって、こういった抗体がＩｇ ＧまたはＴｇＭ発現Ｂ細胞を抑制または枯渇させるように機能し得る前に投与さ れた抗体の効果を低下させることができよう。

ＩｇＭまたはＩｇＧアイソタイプの細胞外ｍ１ｇ１ｓエピトープに特異的なモノ クローナル抗体は、ＡＤＣＣ１補体媒介型細胞溶解、または他の細胞溶解性もし くは調節免疫機序によって、これらのアイソタイプを発現するＢ細胞を減少また は除去するために使用可能である。

例えば、マウスのＩｇＧ２ａ、ならびにヒトのＩｇＧ１　および１ｇＧ３のよう なある種のＩｇＧサブクラス抗体は、ある種のＦｃ受容体保有賞食白血球によっ て行われるＡＤＣＣを媒介することができる。特定アイソタイプのＢ細胞を抑制 または溶解するために、こういったマウスＩｇＧ２゜抗体、ヒトγ−１もしくは γ−３鎖を有するキメラ抗体、またはヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３抗体を投与 することができる。これらの抗体を投与して免疫系を抑制することができる。こ れら抗体が、標的とされるアイソタイプクラスの免疫グロブリンを発現する相当 量のＢ細胞の溶解を引き起こし、従って、この免疫グロブリンアイソタイプの産 生を実質的に抑制するからである、また、この発明のモノクローナル抗体は、細 胞障害細胞の標的剤としても使用可能である。

さらに、この発明のモノクローナル抗体は、エフェクター物質を運搬するための 細胞障害薬の担体としても使用可能である。これは、モノクローナル抗体をこれ らの物質に複合させることによって可能である。毒素−抗体複合体は、アイソタ イプＩｇＭまたはＩｇＧを産生するＢ細胞に結合して、これを直接殺傷するであ ろう、これらの毒素は、細胞障害性ステロイド類、ゲロニン５．アブリン、リジ ン、シュードモナス毒素、ジフテリア毒素、アメリカヤマゴボウの抗ウイルスペ プチド、トリカテクム（ｔｒｉｃａｔｈｅｃｕｍｓ）　、放射性核種および膜溶 解酵素（ホスホリパーゼなど）を含む細胞溶解性または細胞障害性の薬剤である 。抗体と薬剤を、化学的に複合させることも、遺伝子工学的手法によって複合さ せることも可能である。毒素−抗体複合体は、単独で使用することも、この発明 の遊離抗体と組み合わせて使用することも可能である。

二の発明の抗体（ならびに毒素複合体、断片および他の誘導体）は、全身投与さ れるが、静注が好ましい、これらは、いかなる薬理学的に許容性のある担体とと もに投与することができる。１種類のアイソタイプに対して２種類以上の抗体を 同時に投与することができる０例えば、さまざまな組合わせの抗ｍ１ｇ１ｓ−μ 抗体と抗ｍ１ｇ１ｓ−γ抗体を同時に使用して免疫嘴制状態に導くことができる 。

もう一つの治療法として、インビボで内分泌的にｍ１ｇ１ｓエピトープ（好まし くはｍ１ｇ１ｓ−μまたはｍ１ｇ１ｓ−γエピトープ）に特異的な抗体を産生さ せる能動免疫が挙げられる。これら体内で産生された抗体は、ｍ１ｇ１ｓエピト ープに結合し、該ｍ１ｇ１ｓが結合しているＢ細胞の破壊を引き起こす、こうい った抗体の産生は、免疫原性のｍ１ｇ１ｓを保持するこの発明の膜固定ペプチド を投与するか、バラトープ（Ｐａｒａｔｏｐｅ）特異的抗イデイオタイプ抗体を 投与することによって誘導することができる。この発明の抗体のパラトープに対 する抗イデイオタイプ抗体は、立体構造が細胞外のｍ１ｇ１ｓエピトープに類似 している。これら抗イデイオタイプ抗体を使って、ｍ１ｇ１ｓエピトープに対す る能動免疫が可能となり、このｍ１ｇ１ｓエピトープに対する抗体の内分泌的産 生を誘導することができる。こういったバラ′トープ特異的抗イディオタイプ抗 体は、標的アイソタイプを発現するＢ細胞に対する抗体の産生を誘導するに足る 免疫原量で患者に投与される。これらの抗イデイオタイプ抗体は、いかなる免疫 応答も最小限に押えるために、キメラ抗体またはヒト抗体として投与することが 好ましい、これらは、抗体断片、ＶＨ，ＶＬ、ＦＶ、Ｆｄ、ＦａｂまたはＦ　（ ａｂ’　）２　［：れらは、キメラまたはヒトの断片であってもよいコのいずれ であってもよい。

顆粒球・単球コロニー刺激因子（ＧＭ−Ｃ８Ｆ）または単球コロニー刺激因子（ Ｍ−Ｃ８Ｆ）といったある種の因子は、ＡＤＣＣを媒介するものも含めて、白血 球の増殖を誘導することが知られている。インビトロでの実験では、ＧＭ−ＣＳ 　ＦおよびＭ−Ｃ８Ｆは、腫瘍細胞上で発現される表面抗原に特異的なモノクロ ーナル抗体によって媒介される腫瘍細胞上でＡＤＣＣ活性を増強することが知ら れている。この発明の特異的モノクローナル抗体、複合体及びポリクローナル抗 体の、免疫応答を抑制する効果は、これらとＡＤＣＣ活性を増強する因子とを組 み合わせることによっておそらく高められるであろう。

標的とされた免疫グロブリン発現Ｂ細胞に対して、マクロファージまたは細胞障 害性Ｔ細胞といった細胞障害性細胞を引きつける誘導抗体を作製することができ る。

これらの誘導抗体には、細胞障害性細胞の受容体に対する特異性と標的Ｉｇ発現 Ｂ細胞に対する特異性とを有する両持異的抗体が含まれる。こういったバイブリ ドの両持異的抗体には、２種類の異なったＦａｂ領域が含まれる。すなわち、一 方のＦａｂ領域は標的ｍ１ｇ１ｓエピトープ（好ましくは、μまたはγ鎖のｍ１ ｇ１ｓエピトープ）に対して抗原特異性を有し、他方のＦａｂ領域はＣＤ３また はＣＤ４などの細胞障害性細胞の表面抗原に対する抗原特異性を有する。この発 明の両持異的抗体は、２つの特異性を有する単一の抗体、または２つ以上の抗体 もしくは抗体断片の異種凝集体であり得る１文献［Ｃ，ＲｅａｄｉｎＨの米国特 許第４，４７４，８９３号および第４，７１４，６８１号ＨＳｅｇａｌ　らの米 国特許第４，６７６．９８０号］を参照のこと。

この発明のモノクローナル抗体は、インビトロでの適用に使用され得る一方、生 体外（ｅｘ−ｖｉｖｏ　）での適用にも使用することができる。患者の体内を循 環している、ＩｇＭまたはＩｇＧを保持するＢ細胞は、この発明のモノクローナ ル抗体と結合したアフィニティマトリックス（固相上に固定化された抗体）によ って除去可能であるこの発明の抗体におけるもう一つの用途は、混合白血球ポピ ユレーション中で特定アイソタイプを有するＢリンパ球の数および相対比率を測 定するものである９ｍ１ｇ１ｓに特異的な抗体は、上記のＦｃ受容体を介しては 、分泌免疫グロブリンを有する細胞と反応しないであろう、こういった細胞には 、マクロファージおよび活性型Ｔ細胞が含まれる。Ｂ細胞のプロフィールをみれ ば、個人の免疫状態が分かり、更に抑制する必要があるか否かが示されることも ある。また、同一の情報は、特定のアイソタイプを有するＢ細胞の実買部分を枯 渇させるためにどの程度の量の抗体を必要とするかを示し得る。この目的には、 細胞表面抗原を決定するために使用される常法で抗体を使用することができる。

一般には、抗体を検体中のアイソタイプ保持細胞に結合させるような条件下、被 検白血球の検体と抗体を接触させる０次いで、細胞を検査にかけて、抗体の結合 を調べる。これは従来の染色法によって行うことができる０例えば、蛍光標識し た第２抗体を、抗体の結合を検出するために使用することヒトＴｇＭのｍ１ｇ１ ｓセグメントの配列は、ラビット　、　Ｔ、　Ｈ，ら　［（１９８１）　Ｎｕｃ ｌ、　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、　９：４５０９−４５２４］によって以前に報告さ れている。彼らは、それがマウスＴｇＭの相当するセグメントと同一であること を指摘した。これは以下の通りである。

マウスのｒｇ　Ｍ　＋　ＥＧＥＶＮＡＥＥＥＧＦＥＮしかし、以下に記載したｃ 　ＤＮＡの配列決定によって、ヒトのＩｇＭの細胞外ｍ１ｇ１ｓ−セグメントは 、実際に以下の通りである。

ヒトのＩｇ　Ｍ　：　ＥＧＥＶＳＡＤＥＥＧＦＥＮ完全なヒトＩｇＭの膜固定ペ プチドのさまざまなセグメントの特徴および性質を、以下の表１に示す。

遣二工 最初の　中間の　最後の セグメント　セグメント　セグメント 性質　疎水性　疎水性　親水性 強酸性　荷電残基なし 物理的　外表面上　膜の脂質　細胞質 位置　二重層内　表面上 京この数は、アミノ酸残基の数を示す。

ヒトμ鎖のｍＲＮＡの膜領域中におけるヌクレオチド配列は、以下の方法によっ て決定された。全ｍＲＮＡ１よ、文献［”Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ 、”　Ｓａｍｂｒｏｏｋ、　Ｆｉｔｃｈ、　ａｎｄＭａｎｉａｔｉｓ、　Ｃｏ１ ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、１９８９コ（二記載の手法番二従って、健常 なドナーの末梢血、およびヒトの表面１ｇＭ発現細胞系であるＲＰＭＩ−１７８ ８［アメ１ノカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、 　Ｍａｒｙｌａｎｄ　）から入手コから分離した１文献［Ｒａｂｂｉｔｓ、　Ｔ 、ｔ＋、　ｅｔａｌ、、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　９： 　４５０９−４５１４　（１９８１）コに報告された既知のＤＮＡ配列に基づ（ １て、２種類のオリゴヌクレオチドを合成し、ＰＣＲ用のプライマーとして使用 した。これらのプライマーの配列は以下の通りである。

５′末端：　５’　ＣＣＡＡＣＡＧＧＧＴＣＡＣＣＧＡＧＡＧ３′ ３′末端＋　５’　ＣＣＴＴＧＡＡＣＡＡＧＧＴＧＡＣＧＧＴ３°　（相補的） 健常なドナーの細胞とＲＰＭＩ−１７８８細胞の両者に関して、増幅されたＤＮ Ａ産物をクローニングし、遺伝子セグメントの配列を次のように決定した。

ＡＧＧＧＧＧＡＧＧＴＧＡＧＣＧＣＣＧＡＣＧＡＧＧＡＧＧＧＣＴＴＴＧＡＧＡ Ａに の配列から、細胞外ｍ１ｇ１ｓ−μセグメント（上掲）のアミノ酸配列が推定さ れた。ＰＣＲの条件および温度は、以下のＢ項（１１）で記載されたｍ１ｇ１ｓ −γセグメントの配列決定で使用されたものと類似であった。

Ｂ、ヒト　の　ペブ　◆ （ｉ）細胞外ｍ１ｇ１ｓ−γセグメントヒトのγ−１、γ−２、γ−３およびγ −４の膜固定セグメントのゲノムＤＮＡ配列を、下記の方法によって決定した。

２つの膜エクソンは、これらのＤＮＡ配列をコードする０図のＬＡ、ＩＢではそ れぞれ、ヒトγ−１の膜エクソンに相当するゲノムヌクレオチド配列に下線を付 す１図２Ａにおける大文字は、ヒトのγ−１、γ−２、γ−３およびγ−４のた めのこれら２つの膜エクソンのゲノムＤＮＡ配列を表し、フランキングヌクレオ チド配列は小文字によって示される０図２Ｂは、図２Ａによってコードされた、 推定のアミノ酸配列を示す１図３Ａは、２つの膜エクソンおよび幾分かのフラン キング配列を含むヒトγ−ＩｌＮの遺伝子セグメントのＤＮＡ配列を示す１図３ Ｂは、１ｉＷ３Ａに示されたセグメントの形成にかかわる、スプライシングのド ナ一部位およびアクセプタ一部位を示す。

ゲノムＤＮＡ配列、ｍＲＮＡ配列、および確認されたスプライシング機構に基づ いて２図２Ｂに示すヒトのγ−１、γ−２、γ−３およびγ−４の膜固定ペプチ ドの予期されていたアミノ酸配列を決定した。他の既知の免疫グロブリンにおけ る膜固定ペプチドの配列と比較することによって、恐らく脂質二重層を貫通して いる疎水性の鎖を同定することができる。２５個のアミノ酸残基の配列は、ＬＷ ＴＴＩＴＩＦＩＴＬＦＬＬＳＶＣＹＳＡＴＶＴＦＦである。この疎水性の鎖のＮ 末端に、ｍ１ｇ１Ｓエピトープを形成するものと思われるセグメントが結合して いる。したがって、ヒトのすべてのγ鎖では、細胞外ｍ１ｇ１ｓエピトープを全 体的または部分的に形成する１８個のアミノ酸残基の配列は、ＥＬＱＬＥＥＳＣ ＡＥＡＱＤＧＥＬＤＧである。

セグメントが複数の酸性残基を有するという事実、これはセグメントが親水性で あることを示唆するが、この事実に基づくと、これらの提案されたｍ１ｇ１ｓセ グメントは細胞外にあり、抗体によって接触可能と考えられる。ヒトのγ−１、 γ−２、γ−３およびγ−４のｍ１ｇ１ｓセグメントは同一であるため、４つの サブクラスのいずれの細胞結合性のものを認識するが分泌性のものを認識しない モノクローナル抗体は調製可能であると思われる。

（ｉｉ）ヒトのｍ１ｇ１ｓ−γセグメントの配列決定ヒトのγ鎖の膜固定ペプチ ドの提案された配列を、下記の方法によって決定した。γ−１．γ−２、γ−３ およびγ−４を含むゲノムＤＮ’Ａは、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ社（ＬａＪｏｌＩ ａ、　Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ）によって提供されたヒト肺の線維芽細胞系ＷＩ３ ８のλＦＩＸファージライブラリーなどのＤゲノムＮＡライブラリーから入手可 能であった。ヒトのゲノムγ−１、γ−２、γ−３およびγ−４は、もともと５ ｈｅｒｒｉｅ　Ｍｏｒｒｉｓｏｎ博士（元コロンビア大学所属、現在ロサンゼル スのカリフォルニア大学所属）より供与されたものであるが、これらを使用した ０表面上でＩｇＧ１を発現するヒトのＢ細胞系ＩＭ９は、アメリカン・タイプ・ カルチャー・コレクション（メリーランド州ロックビル）から入手した。健常な 献血者からの末梢血の単核細胞を、ヒトのγ頌配列を調べるためにｍ　Ｒ，Ｎ　 Ａ源として使用した。使用したさまざまな制限酵素は、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　 Ｍａｎｎｈｅｉｍ社、　Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｂｉｏｌａｂｓ社およびＢｅ ｔｈｅｓｄａ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製のものである 。

Ｅｒａｓｅ−ａ−ｂａｓｅキットは、生じた欠失を構築するために使用可能であ って、Ｐｒｏｍｅｇａ　Ｃａｒｐ社から入手した、２本鎖鋳型のジデオキシ配列 決定法は、Ｐｈａｒｍａｃｉａ／ＬＫＢ社のＴ７シークエンシングキツトを用い て行った、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクターは、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ　Ｃｌｏｎ ｉｎｇ　Ｓｙｓｔｅｍｓ社から入手した。すべてのクローンは、ＤＨ５αＦ′細 胞（Ｂｅｔｈｅｓｄａ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）であった。

マツピングおよび配列決定をしやすくするために、ゲノムチクローンをＢｌｕｅ ｓｃｒｉｐｔ　５ＫＩＩ＋　にサブクローニングした。膜領域をつきとめるため に、１組の欠失をＥｒａｓｅ−ａ−ｂａｓｅキットを用いて創製した。このγプ ラスミドは、５ａｃｒおよびＮｃｏｌを用いて切断した。５ａｃｌの切断によっ て、Ｅｘｏｌｌｌの消化から保護される、５′側がへこんだ末端が形成される。

数μｇをＥ　ｘ　ｏ　ＩＩＩで消化し、アリコートを３０秒間隔で採取した。こ れらのアリコートを８１消化混合物に入れ、それによってＥ　ｘ　ｏ　ＩＩＩの 反応を停止させた。３０分後、７０℃まで加熱することによって、Ｓ１反応を停 止させた。クレノー断片により短時間処理した後、各アリコートを７４．　Ｄ　 Ｎ　Ａリガーゼによって再環化した。

さまざまな長さの欠失を有するプラスミドの配列を決定し、マウスのγ鎖の膜領 域と比較した１Ｍ領域の一部を含むクローンを同定した後、オリゴヌクレオチド ブライマーを作製して膜エクソンを規定するセグメントの配列を完全なものにし た。

ｃ　ＤＮＡの配列決定では、このｃＤＮＡクローンは、３′末端非翻訳領域のプ ライマーである５’　ＧＴＴＧＡＧＧＧＣＧＧＴＧＡＧＡＣＧ３’　（ゲノムＤ ＮＡからの相補配列）およびＡＭＶ逆転写酵素を用いて、１Ｍ９細胞または健常 な献血者の末梢血単核細胞がら分離したＲＮＡから合成したｃＤＮＡより調製し た。このＲＮＡの分離およびｃＤＮＡの調製は、ｒＭｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏ ｎｉｎｇ　Ｊ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ、　Ｆｒ１ｔｃｈ、　ａｎｄ　Ｍａｎｉａｔｉ ｓ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、　１９８９）に従って実施した 。第２の鎖の合成および望ましい遺伝子セグメントの増幅は、３′末端プライマ ーである３′末端非翻訳領域からの５°ＧＧＣＡＡＣＴＧＣＧ　Ａ　Ｇ　Ｇ　Ｃ ＣＡ　Ｇ　Ａ　Ｇ　３　’　、　ｔ−３ヨＵ　ＣＨ３Ｆ　メイン力らの配列（５ °ＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣ３′）を有するプライマーを用いた ＰＣＲ法によって行った。この際のＰＣＲの条件は以下の通りである。変性＝９ ４℃、１分間／アニーリング：６０℃、２分間／ポリメラーゼ反応／７２℃、３ ．５分間／３５サイクル３５０ヌクレオチドおよび５００ヌクレオチドのバンド をＩＭＱＲＮＡ源から分離した。これらをＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫＩＩ＋　に クローニングした。配列決定により、γ−１配列を有する３５０ｂｐの挿入片を 有するクローンを同定した。このｃ　Ｄ　Ｎ　Ａを３２ｐで標識し、正常なリン パ球からのＲＮＡのＰＣＲ産物由来の多数のｃＤＮＡクローンをコロニーハイブ リダイゼーションによってスクリーニングするために、該標識ｃ　ＤＮＡを使用 した。陽性クローンの挿入片を調製して、ヌクレオチド配列を決定し抱」Ｌ惣 ここに挙げた用語、表現および実施例は、例示のためだけであって、限定を付す ものではない、そして、当該分野の技術者には、単なるルーチンの実験法によっ て、ここに記載した特定の実施態様に相当する多くの均等物が認識されるであろ うし、確認することが可能である。

こういった均等物のすべては、以下の請求の範囲によって包含されるものとする 。

Ｆ工ＧＵＲＥ　ＩＡ Ｆ工ＧＵＲＥ　ＩＢ ＣＡＴＧＣＴＧＴＣＣＣＣＡＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＴＧＣＴＧＴＧＣＣＡＣＣ ＡＣＣＣＡＧＧＣＣＡＣＡＣＣＴＧＣＣＣＣＣＧＡＣＦｉｇ、　２Ａ γ４　−−−−−一−−−−−−−−−−−−−−−−一−−−−＝＝ｙｌ　Ａ ＧＧＡＣＧＧＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣＧＧＧＣＴＧＴＧＧＡＣＧＡγ２　−−一− −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−Ｃ７０−−−−一−−− −−−−−−−−−−−−−−−−−＝＝−γ４　−−−−−−−一−−−−− −−−−−−−−−−＝＝＝−γ４　−−−一−−−−−−−−−−−−−−− −−−−＝＝＝（γ４　−−−−−−−−−−−−−−−−−一−−ｃａ’、− ｇｔ　−−ｃγ３　−−−−−−−一−−−−−−−−−−−−−−−−−−＝ ＝γ４　−−−−−一一−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−＝ＦＩＧ 、３Ａ ＣＣＣＡＧＡＣＣＣＣＡＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＡＴＧＧＧＣＣＡＴＧＣＴＣＡＧ ＣＣＡＣＣＡＣＣＣＡＧＧＣＣＡＣＡＣＣＴＧＣＣＣＣＣＧＴＣＣＴＣ、、、、 、。

ＦＩＧ、３Ｂ 膿ｇ小３′非翻観強３１′ 国際調査報告 ＰＣＴ／υ５９（１１０５２２９ ＩＩＩ　、Ｃｌａｉｍｓ　６．２６−２Ｆｌ　ｄｒａｗｎ　ｔｏ　ａｎｔｉｄｉ ｏｔｙｐｉｃ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅ８　ｔｎ　ｐａｒａｔｏ■ ｏｒｍ］３ＬＬ巨：ｃｌａｓｓ１ｆｊｅｄｉｎｃｌａｓ＋５３０１３８７゜ＰＣ Ｔ／Ｉ’Ｓ９ｆ１１０５２２９

Claims (40)

【特許請求の範囲】
1. １．自己免疫疾患に罹患した個人に、特定の免疫グロブリンアイソタイプの産生 を特異的に抑制または防止する物質を投与することからなる、特定の該アイソタ イプと関連した自己免疫疾患を治療する方法。
2. ２．上記免疫グロブリンがＩｇＧまたはＩｇＭアイソタイプである、請求項１記 載の方法。
3. ３．上記自己免疫疾患が、リューマチ様動脈炎、多発性硬化症、重症筋無力症ま たは全身性紅斑性狼瘡である，請求項１記載の方法。
4. ４．上記物質が、ｍｉｇｉｓ−μもしくはｍｉｇｉｓ−γセグメントに相当する アミノ酸配列、または免疫学的に均等な配列を含むペプチドである、請求項２記 載の方法。
5. ５．上記物質が、抗ｍｉｇｉｓ−μまたは抗ｍｉｇｉｓ−γ抗体である、請求項 ２記載の方法。
6. ６．上記物質が、特定の抗ｍｉｇｉｓ−μまたは抗ｍｉｇｉｓ−γ抗体のパラト ープに特異的な抗イディオタイプ抗体である、請求項２記載の方法。
7. ７．上記物質が、ｍｉｇｉｓ−μもしくはｍｉｇｉｓ−γセグメントに特異的に 結合する免疫毒素である、請求項２記載の方法。
8. ８．上記抗体がモノクローナル抗体である、請求項５または６記載の方法。
9. ９．ＩｇＭまたはＩｇＧのＢ細胞膜結合型に特有で分泌型ＩｇＭまたはＩｇＧに は存在しないエピトープに結合する抗体であって、結合に際し、破壊のために膜 結合免疫グロブリンを結合したＢ細胞を標識する抗体を含む、自己免疫疾患を治 療するために有用な抗体調製物。
10. １０．上記調製物が、抗体もしくは抗体断片、または抗体断片の抗原結合部分を 含むペプチドである、請求項９記載の抗体調製物。
11. １１．上記調製物が以下のペプチドセグメント、【配列があります】； 【配列があります】 の一方に存在するエピトープに結合する、請求項９記載の抗体調製物。
12. １２．上記調製物がモノクローナル抗体である、請求項９記載の抗体調製物。
13. １３．上記モノクローナル抗体が動物の可変領域およびヒトの不変領域を有する キメラ抗体である、請求項１２記載の抗体。
14. １４．上記キメラ抗体がネズミ科動物の可変領域およびヒトの不変領域を有する キメラ抗体である、請求項１３記載の抗体調製物。
15. １５．上記モノクローナル抗体が、動物由来であるその相補性決定領域の抗原決 定部分およびその相補性決定領域の他の部分、ならびにヒト由来であるその不変 領域全体を有する、請求項１２記載の抗体調製物。
16. １６．上記モノクローナル抗体が、ヒトのモノクローナル抗体またはその断片で ある、請求項１２記載の抗体調製物。
17. １７．上記ヒトの抗体断片が、ＶＨ、ＶＬ、Ｆｖ、ＦｄＦａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ ａｂ′）２、およびタンパク質またはそのペプチド類似体からなる群より選ばれ る、請求項１６記載の抗体調製物。
18. １８．上記モノクローナル抗体が、以下のアイソタイプおよびサプクラス：ネズ ミ科動物のＩｇＧ２ａ、ヒトのＩｇＧ１およびヒトのＩｇＧ３の１つである、請 求項１２記載の抗体調製物。
19. １９．請求項１２記載のモノクローナル抗体を産生する継続的な安定細胞系。
20. ２０．請求項１３または１４記載のモノクローナル抗体を産生する継続的な安定 細胞系。
21. ２１．ハイプリドーマである請求項１９記載の細胞系。
22. ２２．トランスフェクトーマである請求項２０記載の細胞系。
23. ２３．免疫グロブリンのアイソタイプＩｇＭおよびＩｇＧのうち１つのＢ細胞膜 結合型に対する特有で分泌型ＩｇＭ及びＩｇＧには存在しないエピトープに結合 する抗体であって、該結合により破壊のために該Ｂ細胞を標識することができる 抗体のＬ鎖又はＨ鎖の可変領域を含むペプチドをコードする機能的に再構成され た遺伝子を含む分離されたＤＮＡ。
24. ２４．ヒトのＬ鎖またはＨ鎖の不変領域をコードするＤＮＡに連結した請求項２ ３記載のＤＮＡを含むＤＮＡ構成体。
25. ２５．キメラ抗体を分泌する、請求項２４記載のＤＮＡ構成体でトランスフェク トされた骨髄腫細胞。
26. ２６．免疫グロブリンのアイソタイプＩｇＭおよびＩｇＧのうち１つのＢ細胞膜 結合型に対する特有で分泌型ＩｇＭ及びＩｇＧには存在しないエピトープに結合 する抗体であって、該結合により破壊のために該Ｂ細胞を標識することができる 抗体のパラトープに特異的なモノクローナル抗イディオタイプ抗体。
27. ２７．ペプチド 【配列があります】； 【配列があります】 の一方に存在するエピトープに結合する抗体のパラトープに特異的な請求項２６ 記載のモノクローナル抗イディオタイプ抗体。
28. ２８．請求項２７記載のモノクローナル抗体の抗原結合断片。
29. ２９．動物由来の抗原結合領域およびヒト不変領域を有するキメラ抗体である、 請求項２７記載のモノクローナル抗イディオタイプ抗体。
30. ３０．請求項２９記載のモノクローナル抗体を分泌する継続的な安定細胞系。
31. ３１．細胞毒素または細胞溶解剤と結合した、請求項１２記載のモノクローナル 抗体。
32. ３２．上記細胞毒素または細胞溶解剤が、細胞障害性ステロイド類、ゲロニン、 アブリン、リシン、シュードモナス毒素、ジフテリア毒素、アメリカヤマゴボウ の抗ウイルスペプチド、トリカテクム、放射性核種および膜溶解酵素からなる群 より選ばれた、請求項３１記載のモノクローナル抗体。
33. ３３．上記抗体調製物が、上記エピトープの１つに結合する第１の特異的結合剤 を有し、かつ、細胞障害性細胞の受容体に結合する第２の特異的結合剤を有する 両特異的分子を含む、請求項９記載の抗体調製物。
34. ３４．上記細胞障害性細胞がマクロファージまたは細胞障害性Ｔ細胞である、請 求項３３記載の両特異的分子。
35. ３５．両特異的抗体である、請求項３３記載の両特異的分子。
36. ３６．２種類以上の抗体の異種凝集体である、請求項３３記載の両特異的分子。
37. ３７．ヒトμ鎖およびヒトγ鎖の細胞外セグメントであって、ｉｇＭおよびＩｇ Ｇの分泌型上に存在しないものからなる群より選ばれた一員に対応する、アミノ 酸配列または免疫学的に均等な配列を含むペプチド。
38. ３８．以下の配列 【配列があります】； 【配列があります】 の一方、またはペプチドの免疫原性に有意な影響を及ぼさないそれらの修飾体を 含む、請求項３７記載のペプチド。
39. ３９．上記ペプチドの免疫原性を増強させる物質に結合した、請求項３８記載の ペプチド。
40. ４０．上記物質が、Ｂ型肝炎の表面抗原、コア抗原、またはキーホール・リンベ ットのヘモシアニンである、請求項３９記載のペプチド。