JPH05504335A - コングルチニンフラグメント、その調製と使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 コングルチニンフラグメント、その調整と使用技術分野 本発明は、組み換えＤＮＡ技術によるコングルチニンの交差反応物質の調製に関 する。

背景 フングルチニンは、いくつかの細胞外糖タンパク質レセプターと類似構造を有す るウシ血清タンパク質である。完全な分子は、ジスルフィド結合された三重体が 会合して４価の巨大分子を形成している多量体構造を示す。フングルチニンは、 免疫複合体と結合し得、そして反すう動物の免疫応答での役割をなし得る、カル シウムイオン依存性のレクチンとして記載されている。しかしながら、タンパク 質の生理学的な厳密な機能は明らかにされていない。これまでの構造研究により 、非常に限定されたアミノ末端配列データに基づいて、コングルチニンがコラー ゲン様の分子であることが示されている。

糖に特異的に結合する化合物を研究することは、非常に興味深い。糖は特定の分 子または分子のファミリーと結合し得る。Ｓ、　ａｕ■胚タンパク質Ａは、免疫 複合体の単離での使用が見いだされた。その他のレクチンもまた、特定の多糖類 または単糖類を有する生理学的に活性な分子の単離での使用が見い出され得る。

これらの組成物は、目的の分子の単離および精製での使用が見い出され得る。そ のため、種々のレクチンを単離し、結合に関連するこれらの領域を決定し、およ び市販製品とするための技術を開発することは、非常に興味深い。

関連文献 コングルチニンの物理的および化学的特性に関する記述は、Ｓｔｒａｎｇら、Ｂ ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ　Ｊ、２３ま：３８１−３８９　（１９８６）；　Ｌａｃ ｈ醜ａｎｎおよびＭｕｔｔｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒｄ、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　 １００：６９１−６９８　（１９６８）：Ｌｉｎａｃｏｔｔら、１ｂｉｄ　１２ １：６５８−６６４　（１９７８）：　［ｎｇｒａｍ、Ｉｍｍｕｎｏｌ。

Ｕ　ｉ：３２２−３３３　（１９５９）；　Ｉｎｇｒａｔ凹ｉ＋３３４−３４５ 　（１９５９）：およびＤａｖｉｓおよびＬａｃｈ＊ａｎｎ、　Ｂｊｏｃｈｅｍ ｉｓｔｒ　２３＋２１３９−２１４４　（１９８４）に見い出され得る。

発明の開示 フングルチニンの機能性のフラグメントが提供される。このフラグメントは、フ ラーケン様活性またはレクチン様活性を提供する。この領域は、１位から１８０ 位までのアミノ酸、または１７５位から３３３位までのアミノ酸のオリゴペプチ ド配列を含む。Ｎ−近位（ｐｒｏｘｉ■ａｌ）配列は、コラーゲン活性に関連し 、Ｃ−近位領域は、レクチン活性に関連する。

図面の簡単な説明 図ＩＡは、トリブ／ンベブチド、およびリジンに特異的なエンドペプチダーゼに よって得られたペプチド、およびコラゲナーゼの消化物を示し、そして図ＩＢは 、化学的に開裂されたペプチドおよびキモトリリジンまたはサーモリシンによる 長いペプチドフラグメントの一次的な消化を示す。

発明を実施するための様式 フングルチニン配列の１位から１８０位または１７５位から３３３位のいずれか の配列からの少な（とも約８個のアミノ酸配列と実質的に同一の配列を有する、 オリゴペプチドが提供される。

Ｎ−近位配列は、フラーケン様活性を有し、Ｃ−末端配列はレクチン様活性を有 する。

本発明のオリゴペプチドは、少な（とも８個のアミノ酸、通常は、少なくとも約 １２１１Ｎのアミノ酸、そして約１８０個を越えないアミノ酸、さらに一般的に は約１２０個を越えないアミノ酸を有する。このオリゴペプチドは、以下の配列 に見られる配列と少なくとも実質的に同一の配列を有するか、または、以下の配 列と通常は配列の１０％より大きくは違わず、さらに一般的には５％よりも大き くは違わない、標示されている部位で変化し得る可変配列を有する。

（以下余白） ＬＯ２０３０ ＡＥＭＴＴＦＳＱＫｒＬＡＮＡＣＴＬＶＭＣ５ＰＬＥＳＧ１；’Ｇｈ１００　１ １０、　１２０ ＰＧｈＰＧ：’ＰＧＥｅＧｐＡＧｇＶＧＡ二ＧｉＱＧｒ：ＧＰＳＧＬ１コ０　１ ４０　１５０ ｅＧｅｉＧａＰＧ！〒ＧＡＰＧｒＡＧＶＴＧＰＳＧＡｉＧＰＱＧＰＮＡＬＫＱＲ ＶＴＩＩ、ＤＧＩＩｒｌ、ＲＲｒＱＮＡｒＳＱＹＫＫＡＶＩ、ｒ２２０　２３Ｇ 　２４Ｇ ＰＣ）ＧＱＡＶＧＥＫＩ！’に’ｒＡＧＡＶＫ５ＹＳＤＡＥＱＬＣＲＥＡ２５０ 　２ｇ０　２７０ ＫＧＱＬＡＳＰＲ５ＳＡＥＮＥＡＶ’ｒＯＭＶＲＡＯＥＫＮＡＹＩ、５８ＮＤ工 Ｓ？ＥＧＲｆ’ＴＹＰＴＧＥＩＬＶＹＳＮ％ＩＡＤＧＥＰＮＮ旦ＤＥＧＱＰＥＮ ＣＶＥＩＦＰＤＧＫＷＮＤＶＰＣ５ＫＱＬＬＶＩ　Ｅ　ｒ 上記の配列において、アナログのタンパク質の中で保持されていない部位は、小 文字で示されている。コラーゲンのＧ−Ｘ−ＹのモチーフのＹ位がヒドロキシル 化されたタンパク質残基には、下線を引いである。Ｔｌ２１、ＳＬ？２（０−結 合された）およびＮ２９９（Ｎ−結合された）の炭水化物認識配列にも、下線が 引かれている。さらに、残基番号１６３−１６５で、細胞結合に関連するＲ−Ｇ −Ｄ配列は、上線と下線によって示される。

超可変領域において、２７位は、ＬあるいはＰ；３０位は、ＨあるいはＳ：３１ 位は、Ｄ、Ｎ、Ｐ、Ａ、　あるいはｖ；３３位は、Ｑ、Ｐ、あるいはＲ；３４位 は、Ｄ、ＮあるいはＡ；３６位は、ＲあるいはＰ：３７位は、Ｅ、ＨあるいはＡ ；３８位は、ＣあるいはＧ；３９位は、Ｐ％Ｒ，ＳあるいはＶ、４０位は、ＨＳ Ｍ％Ｐあるいはｖ；４２位は、Ｅ、ＰあるいはＷ；４３位は、■あるいはＥ；４ ５位は、ＰあるいはＬ；４６位は、ＩあるいはＡ；４９位は、Ｓ、ＰあるいはＱ ；５１位は、Ａ、ＤあるいはＰ；５２位は、■、Ｎ、ＳあるいはＤ；５４位は、 Ｆ、Ｒ，あるいはＡ；５５位は、■あるいはＲ；６１位は、Ｐあるいはに２８２ 位は、ＳあるいはＭ：８４位はＫあるいはＰ；９３位は、ＨあるいはＴ；１００ 位は、Ｔ、Ａ％Ｓ、ＮあるいはＶ、１０３位は、ＰＳ　Ａあるいは１１１０５位 はＧ、ＨあるいはＶ；１１１位は、！あるいはＲ；１２１位は、ＳあるいはＴ； １２３位は、ＡあるいはＥ；１２４位は、ＳあるいはＲ：１２６位は、Ａあるい はＤ；１３５位は、トＩあるいはＲ：１４５位は、１あるいはＲ，１６０位は、 ＳあるいはＴ；１７２位は、ＰあるいはＳ：および、１７５位は、ＳまたはＸで あり得る。

可変領域が各々の示されたアミノ酸によって置換され得るだけでなく、Ｇ−Ｘ− Ｙのモチーフの中のＸおよびＹ位がプロリンまたはヒドロ半シブロリンによって 、および同類の置換物（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ　５ｕｂｓｔｉｔｕ口ｏｎｓ ）によって置換され得る。

下記の表では、同じ列のアミノ酸が他のアミノ酸で置換され得る、同類の置換が 示されている。

表１ Ｈ，Ｆ、　Ｗ、　Ｙ （Ｎ、Ｑ、ＤおよびＥは、同類の置換を達成するための等個物であり？辱る。） Ｎ−近位領域では、約アミノ酸２０位からアミノ酸１８０位までの領域、さらに 詳細には、アミノ酸２５位から６０位および６０位から１７８位の領域が特に興 味深い。残基２７位から５５位までの領域が超可変性を有し、一方６０位から１ ７８位までの領域は可変性が低いことがわかった。超可変領域は、トリプレット のグリシン部位での変異は１０％を越えないで、残りの部位では大きく変化し得 る。通常は、Ｇ−Ｘ−ＹモチーフのＹは、Ｎ−近位領域においてプロリンまたは ヒドロキシプロリンとしての、アミノ酸を少なくとも約２５％、さらに一般的に は少なくとも５０％を有する。オリゴペプチド中の繰り返しの回数は、通常は少 なくとも約３回、そして約５５回よりは多くなく、一般的には、約４回から５１ 回、さらに一般的には約６回から４０回の範囲にある。

Ｎ−近位領域は、配列の可変性の原因である２つの断続がある、約４９回から５ １回のＧ−Ｘ−Ｙの繰り返しを有することにより特徴付けられる：断続の１つは Ｃ３８であり、Ｇが考えられ、そしてもう１つは、Ｇ以外のアミノ酸が考えられ る部位のＧ　１０５である。１２個のヒドロキシ−プロリン残基（このうち１１ 個は不変部位）が、Ｇ−Ｘ−ＹのモチーフにおけるＹ位に見い出され、コラーゲ ン様の分子の特徴を示す。この配列は、少なくとも３つの潜在的な炭水化物認識 部位を有し、このうち２つはコラーゲン様の可変ドメイン中に（〇−結合された ）、および１つは、Ｃ−近位領域中（Ｎ−結合された）にある。さらに、Ｎ−近 位領域には、Ｒ−Ｇ−Ｄ、種々の細胞の表面に見られるレセプターのインテグリ ンのスーパーファミリーをＬ？！、ｍする通常の認識配列が含まれる。

分子全体の構成からすると、フングルチニンは、補体タンパク質ｃｌｑ、マンノ ース−結含タンパクｌｉｔ　（ＭＢＰ）および肺胞表面活性物質関連タンパク質 （ＰＳＡＰ）に類似性を有している。

Ｃ−近位領域、特に２３２位−３３３位の残基は、ＭＢＰおよびＰＳＡＰの炭水 化物認識ドメインに顕著な相同性を有する。

フングルチニンの配列相同性は、ニワトリおよびラットの肝細胞のｌ結合の動物 性レクチン、ヒトのアンアログリコプロティンレセプター、ヒトリンパ球Ｆｃイ ブンロンレセプター、ラット軟骨プロテオグリカンのマトリックスタンパク質、 ｈｒｃｏ　ｈａ　ａ　ｅｒｅ　ｒｉｎａ液素性の可溶解性レクチン、マウスリン パ節帰巣レセプターおよびヒト内皮白血球付着分子（ＥＬＡＭ−１）のレクチン ドメインにも広がる。全部で１５のタンパク質が並んでいる保存部位には、フン グルチニン配列の２３７位ｊ０９位。

３２３位および３３１位の４つのシスティン、および２９８位のＰ、３０７位の Ｅ　、　３１９位のＮ、２９３位のＷおよび３１８位のＷが含まれる。

炭水化物結合部位および／または２価のカチオン配位のような潜在的な機能的に 重要な領域は、保存されているようだ。

当該ペプチドの大きさによって、ペプチドは種々の方法で調製され得る。アミノ 酸が約６０個より少ないアミノ酸配列では、このペプチドは、現在では入手可能 な自動合成装置、例えば、ＡＢＩ　４３ＯＡペプチド合成装置を使用して合成さ れ得る。

アミノ酸が約２５個よりも多いアミノ酸配列では、組み換えＤＮＡ技術が使用さ れ得る。当該ペプチドをコードするこの配列は、合成でＸｌｌ製され、天然に存 在する遺伝子から単離され、ゲノム遺伝子またはｃ　ＤＮＡのフラグメントとし て、またはそれらの組み合せとして得られ得る。さらに、分泌のために、この配 列は、生成物を培養上清へ分泌させる／グナル配列をコードする配列を有するコ ーディング鎖の５−末端に連結させられ得る。多くの発現ベクターが、文献に記 載されており、入手可能であるかまたは容易に調製され得る。発現カセットは原 核細胞および真核細胞用が入手可能である。グリコンレーンヨンのような、当該 ペプチドのプロセッシングが所望される場所では、通常、昆虫、菌類または哺乳 類宿主、および、そのような宿主において真核性のプロセッシングに関連する、 多糖類側鎖を備えるためのプロセッシングに機能するベクターを用いる、真核細 胞用のベクターが用いられる。

当該組成物には、種々の方法により応用が見い出され得る。

Ｃ−近位領域からのフラグメントは、糖のレクチンへの結合を阻害するために使 用され、または種々の糖と結合させて、適切な炭水化物構造を有する分子を単離 するため、およびそのような分子を精製をするため等に使用され得る。この分子 は、これら自身であり、ポリソームの一部であり、または細胞と結合して存在し 得る。当該組成物は、相補的炭水化物リガンドの存在を示す特徴付けのために使 用され得る。Ｎ−近位配列は、これらのレセプターを有する細胞と結合し得るた めのレセプターのインテグリンスーパーファミリーへの結合における用法が見い だされ得る。さらに、超可変額域は、末梢血単核細胞（Ｒｅｉｄ、　Ｂｉｏｃｈ ｅｍ、　Ｓａｃ、　Ｔｒａｎｓ、　ｌｌ：１−１２　（１９８３））のＣＩＱお よび軟骨細胞のコラーゲ７　（Ｍｏｌｌｅｎｈａｕｅｒ　ａｎｄ　Ｙｏｎ　Ｄｅ ｒＭａｒｋ、　ＥＭＢＯＪｌ：４５−５ｏ、（１９８３）：およびＭｏｌ　１ｅ ｎｈａｕｅｒら、ニ域に結合する細胞を同定する、細胞と結合するための分子認 識部位として働き得る。

当該化合物はまた、この化合物が結合する表面膜レセプターを有する細胞を活性 化するために使用され得る。当該化合物を細胞の活性化に十分な量、例えば１が ら１００■ｇ／■ｌを、細胞を含む培地に加えることによって、活性化状態に関 連する増殖およびタンパク質の発現を含み、細胞は、活性化される。

以下の実施例は、発明の例証として提供され、限定としては提供されていない。

【とユ夾ヱ コングルチニンを、地方の屠殺場からのランの血液から個々に単離した。酵母細 胞壁を処理したタンパク質（Ｓｔｒａｎｇら、（１９８６）前述）を、さらに５ ｅｐｈａｅｒｙ＋　４００で精製した。精製タンパク質の相同性は、５ＯＳ−Ｐ ＡＧＥによって顕著になり、４３にのソングルバンドが観察された。細菌のコラ ゲナーゼによるコングルチニンの短時間消化によって生じた非コラーゲンのｃ。

ＯＨ−領域のための配列情報は、トリプシンペプチド（図ＩＡ−Ｖ中のＴ）およ び引き続きのコラゲナーゼ消化（図ＩＡ−１■）によって生産された、ｃＬ２お よびｃＬ３のフラグメントの特徴付けによって得られた。Ｃ００Ｈ−領域（ＣＬ Ｉ）の配列分析は、完全なフングルチニンのりジン特異性エンドペプチダーゼ処 理によって生じた（図ＩＡ−ＩＩＩ中のＬＰ）、オーバーラフピングペプチドの 特徴付けによって完了した。

コングルチニンのＣＯＯＨ−ドメインの改変されていないコングルチニンを、２ ５　ｒａＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、１０ｍＭ　ＣａＣｌ２、ｐ）！７．４中、３７ °Ｃで、１５がら３ｏ分間、細菌のコラゲナーゼ（フングルチニン１ｍｇに対し てコラゲナーゼ２５ユニツト）で短時間消化した。生成されたペプチドは、逆相 ｃ４カラムを使用してＨＰＬＣで精製した。単離されたＣｏｏ）Ｉ−末端ペプチ ドを、Ｎ）１２−末端アミノ酸配列分析または他のタンパク質分解酵素によって さらに分画する前に、４−ビニルピリジンで改変した。

ンパク　による リシル結合は、リジン特異性エンドペプチダーゼを使用しｒ選択１ｃＭＷした。

酵素ハ、０．２　Ｍ　ＮＨａＨＣＯｘ、ｐＨ８，３中で、アルキル化ＣＬＩに対 して１：５０の比率（ｖ／ｖ）　テ、３７°（ｊ？４時間使用した。Ｃ００Ｈ− 末端ドメインのトリプシン消化は、０．２ＭＮＨａ）ＩＣＯ３、ｐＨ１，９中、 ３７″で、６時間、基質に対する比率がｌ：Ｉｏｏ　＜ｖ／ｖ）の酵素で、同様 に実施した。

コラゲナーゼドメインでは、大きなペプチドフラグメントが、化学的な方法、そ の後のタンパク質分解酵素によりまたは罵２の化学的な方法による二次的な開裂 によって生じた。

ランのタンパク質をヒドロ亭ジルアミンで処ＥＪして、ｌｌＡｌおよびＨＡ２　 （図ＩＡ−１を生成した。３番目のフラグメンｌ−［ｆＡ３は、観察されるよう にＮＳ２の高可変部位から得られた非開裂タンパク質、あるいはヒドロ亭ジルア ミンによる不完全な開裂による。ＨＡＩとＨＡ２との間のオーバーラッピング配 列は、ＨＡ３または完全なコングルチニンから得られた、ペプチドＬＰ２の特徴 付け（図Ｉ　Ａ−１１１およびＩＢ−１１）によって決定した。同様の目的のた めに、それぞれ図Ｉ　Ｂ−ｍおよび−■に示されるように、ＣＮＢｒ開裂のペプ チド（ＣＢｘ）および以−ヨードソ安息香酸ペプチド（ＩＢＡ）を使用した。

ＬＰハ、リジン特異性エンドペプチダーゼ（ｍ）によっテ開裂されたペプチドを 示し；ｃＬは、細菌のコラゲナーゼ消化（■）によって得られたペプチドを示す 。３７℃、　３０分間の消化テｃＬ１　（１６７−３３３）を得た。短時間の消 化（１５−２０分間）では、トリプシン消化（Ｖ）に使用された長いペプチド（ １６４−３３３）が生じた。長時間の消化（６０分以上）により、ＣＬＩは、破 壊され短いペプチドＣＬ２を生じた。さらに長時間の消化（１２時間）では、主 にＣＬ３ペプチドを生じた。図１８において、■は、完全なコングルチニンのア ミノ末端配列分析を示す。下線■、■、■およびＶは、コラゲナーゼドメインを 配列分析するために使用されたオーバーラフピングペプチドを示す。■は、サー モリシンによるＬＰ２−火消化（ｓｕｂｄｉｇｅｓＬｉｏｎ）およびキモトリプ シンまたはΣ、　ａｕｒｅｕｓ　Ｖ８によるＬＰ３の一次消化を示す。

Ｔｈは、完全なフングルチニン由来のＬＰ２のサーモリシンペプチド；Ｃは、Ｈ Ａ３由来のＬＰ３のキモトリプシンペプチド；ｓＰは、Ｈ＾３由来のＬＰ３のＳ 、　ａｕｒｅｕｓ　Ｖ８ペプチドを示す。ｍは、Ｈ４ＳのＣＮＢｒ開裂から回収 したＣＮＢｒヘブチド（Ｃａｗ）を示す。５Ｐ−Ｃａｌは、Σ　ａｕｒｅｕｓ　 Ｖ８によるＣａｗの一次消化によって生産された。■は、完全なフングルチニン のＷでの開裂によって得られるヨードソ安、豐香酸ペプチド（ＩＢＡ）を示す。

■は、アルギニン特異性酵素によるタンパク質の消化によって得られた４つのペ プチドを示す。Ｔｘａ、Ｔｘｂおよびｒｙは、完全なフングルチニンに由来した 。Ｔｘｃは、ｌＡ３に由来した。Ｌｅｅら、Ａｒｃｈ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉυ 立ｖ−２４１：５７７−５ｆ１９　（１９８５）；　ＭａｈｏｎｅｙおよびＨｅ ｒｍｏｎｄｓｏｎ、　１１順堕」工注」１８：３８１０−３８１４　（１９７９ ）。

５Ｐ−Ｃａｌ　（ｌＡ３から得た）を、始めにＩＡＩとｌＡ２との間のオーバー ラッピング配列を決定するために使用した。５Ｐ−ＣＢｌは、しかしながら、Ｎ ５２を現さなかった。残基３７−５４の間の５Ｐ−ＣＢＩと配列相同性を有する 、Ｔｘｃ（ｌＡ３由来）もまた、８５２を現わさなかった。完全なフングルチニ ンから得られたＩＢＡを、続いて分析した。このペプチドは、残基４３−５６の 間の５Ｐ−ＣＢＩとの配列相同性および残基５３−７１に沿ってｌＡ２と同じ配 列を現した。これは、Ｃ５２およびＧ５３を現したが、Ｎ５２は現さなかった。

ＤＳ２は、化学開裂反応および／または精製工程の間に生じ得るＮの脱アミノ化 生成物なので、ＬＰ２は、その後のサーモリシンによるＬＰ２の一次消化によっ て、完全なフングルチニンから生じた。

ｍ１ｃｒｏｂｏｒｅ　Ｃ１ｇカラムによって分離されたＴｈ１ａ、　Ｔｈ１ｂお よび丁ｈｌｃは、残基２３−４２の間の配列相同性を示すが、アミノ酸残基３１ ．３４．３７および４０ての可変部位を示した。一連のＴｈｌペプチドもまた、 残基３１．３３．３４および４０を除いて、５Ｐ−ＣＢＩと配列相同性を示した 。５Ｐ−ＣＢ＋は、エドマン分解サイクルで多数のＰＴｌ（−アミノ酸を示した 。ペプチドＴｈ２は、残基４９．５１および５２を除いて、４３−５２の間の残 基で、ペプチドＴｘｂ、　Ｔｘｃ、　５Ｐ−ＣＢｌおよびＩＢＡが配列している 。このＴｈ２ペプチドは、ヒドロキシルアミン開裂部位Ｎ５２およびＧＳ３を確 定し、さらにＩＡＩと１（Ａ２との間の配列のオーパーラ、ブを明確にしている 。ペプチドＴｈ３は、アミノ末端残基Ｆを有し、２６サイクルから配列分析され た。このペプチドは、アミノ末端領域ＨＡ２と同一の配列を示した。Ｔｔ＋４は 、Ｖをアミ／末端残基として有し、Ｐ６１に代わる［６１以外はＴｈ３と同じ配 列を示した。ＬＰ２ペプチドのＲＰ−ＨＰＬＣによる回収は、予測されたよりも 低かった。これはおそらく、ｌＡ２−含有ＬＰ２が使用された条件下で回収され なかったことを示す。

上記の結果は、ＬＰ２に存在する超可変配列の広がりを示した。

ヘフチドＬＰ３もまた、可変配列を示した。アルギニンプロテアーゼ処理された 完全なコングルチニンから得られたペプチド（Ｔｙ）は、ｌＡ２中のＳ８２、に ８４およびＮ９３と比較して、ＴＦ中のｌＡ２、Ｐ８４およびＴ９３以外は、） ｌＡ２（残基８Ｏ−９８）のアミノ末端領域と同一の配列を示した。キモトリプ シンペプチドＣＩと＋ＩＡ２、ＬＰ３、ｒｙおよびＳＦ３との比較により、残基 ９３、ｉｏｏ、１０３および１１０の変化が示された。ペプチドＣ２ａ、　Ｃａ ｂおよびＣ２ｃは、配列相同性を有したが、この領域で超可変性を示す残基１２ １．１２３．１２４および＋２６では異なっていた。Ｃ２とＳＦ３　（Ｈ＾３由 来）との比較は、１３５位での可変残基を示した。さらに可変配列は、Ｃ３ａ、 　Ｃ３ｂ、　Ｃ３ｃおよびＳＦ３　（ｌ（Ａ３由来）の間に観察された。

Ｎ−近位領域の配列の変化および超可変性は、次のページに示す。

当該組成物は、種々の方法でＮ−近位領域との結合に関連する、特にフングルチ ニンのＮ−近位領域の超可変配列の１つの配列に関する、特定の配列を同定する ために使用され得る。従って、個々のコラーゲン様の配列のレセプターが、単離 され得る。さらに、フングルチニンの保存Ｃ−近位領域に結合する種々の炭水化 物が単離され得る。従って、当該組成物は、アフィニティクロマトグラフィーに 、相補性のリガンド結合部位をフングルチニン等との結合から離すために使用さ れ得る。当該組成物の他の使用には、細胞クロマトグラフィー（アフィニティ細 胞分１ｔｌ）、細胞活性の調節等が含まれる。より小さいフラグメントを使用す ることによって、同一タンパク貫での機能の多重性を防ぐことができるので、個 々の特性が単離および同定され得る。

本明細書中のすべての公開文献および特許出願は、個々の公開文献または特許出 願が、引例として開示されるために特定的におよび個別的に開示されているもの として、引例として開示されている。

この発明は例示と実施例によって理解を明らかにするために詳細に記述したが、 当業者にとっては本発明の教示を考慮した変更および修正が、添付の請求項の精 神または範囲から逸脱することな（なされ得ることは自明である。

国際調査１１１告 ＰＣＴ／ＬｊＳ　９９／の６５１６ ＾ｔｔａｅｈ＋＋＋ｅｎｔ　ｔｏ　Ｆｏｒｍ　ＰＣＴ／ＩＳＡ／２１９　Ｐａｒ ｔ　！Ｖ。

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Ｉｔ曽＋ｅｉｚｅｄ　ｍｕ−画−ｒ　ｏｆ　Ｃ五−１−一　ｒＯｕ　１ｎ　−１ −Ｃ１ａｉ＋ｍ＊　Ｌ−５＋　ｄｒｍｌｌｌｌｌ　ｔｏ　ａ　ｐｅｐｔｉｄｅ　 ｏｆ　ｂｏｖｉｎｅ　ｅｏｆｉ（ｌｌｕｔｉｌ’ｌｉｎ　撃撃戟fｌｄ ＊　ｍｅｔｈｏｄ　０１　ｉｓｏｌａｔｉｎｇ　ｃｏ＊ｐｏｕｎｄ＋ｗ　ｂｙ　 ｕｓｉｎｇ　ｔｈｉｓ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｆｆｉｒａｇ＊ｅ獅煤@ｏｆ ｂｃ＋ｖｉｎｅ　ｃｏｒ＋ｇｌｕｔｉｎｉｒ＋、ｃｌａｍｓｉｆｉｅｄ　ｉｎ　 Ｃ１−１−５３の、５ｕｂｃｌ魯１１　コ２４゜１１　Ｃ１ａ九ｗａｇ　６−７ 、　ｄｒａｗｎ　ｔｏ　６　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｉｓｏｌａｔｉｎｇ　ｃｅ ｌｌｓ。

ｃｌａｍｓｉｆｉｅｄ　ｉｎ　Ｃ五１１１１＠　４３５．　ｓｕｂｅｌｓｍｓ　 ２４Ｇ、２゜ＩＩｌ、　Ｃ１＠ｉ＋ｅ＊　ｓ、ｄｒ＠ｗｎ　ｔａ　＠　１伊ｔｈ ６ｄ　Ｏｆ　＠ｅｔｌＶ＠ｔｉｎＱ　ｃｅｌｌ＋ｗ、ｅ上Ｉ−１五ｆｌｅ■ ｉｎ　Ｃ１ａｓｓ　４３５ｅ　ｓｕｂｅｌａｍｓ　２４＠、２゜

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. １．ウシコングルチニンのコラーゲン領域またはレクチン領域内に含まれる少な くとも８個の、そして１８０個を越えないアミノ酸配列を含有するペプチド。
2. ２．前記ペプチド配列が、コラーゲン領域の超可変領域内に含まれる、請求項１ に記載のペプチド。
3. ３．前記ペプチド配列が、コラーゲン領域の可変領域内に含まれる、請求項１に 記載のペプチド。
4. ４．前記ペプチド配列が、レクチン領域内に含まれる、請求項１に記載のペプチ ド。
5. ５．ウシコングルチニンと特異的に結合する糖類を有する化合物を単離する方法 であって、該方法が、該化合物を支持体に結合された請求項４に記載のペプチド 配列に結合する工程； 該支持体に結合された化合物を結合されていない化合物から分離する工程；そし て 結合された化合物を単離する工程を包含する、方法。
6. ６．ウシコングルチニンのフラグメントに特異的に結合する表面膜レセプターを 有する細胞を単離する方法であって、該方法が、 細胞混合物を支持体に結合された請求項４に記載のペプチド配列に結合する工程 ； 該支持体に結合された細胞を結合されていない細胞から分離する工程；そして 結合された細胞を単離する工程を包含する、方法。
7. ７．前記細胞が造血細胞である、請求項６に記載の方法。
8. ８．ウシコングルチニンのエピトープと反応する表面膜レセプターを有する細胞 を活性化する方法であって、該方法が、該表面膜レセプターを有する細胞を該エ ピトープを有する請求項１に記載のペプチドに結合する工程を包含し、その結果 、該ペプチドが該表面膜レセプターに結合し、そして該細胞が活性化される、方 法。