JPH05507282A - 抗コクシジアおよび成長促進多環式エーテル抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抗コクシジアおよび成長促進多環式ニーデル抗生物質憩咀Ω互党 本発明は、式 を有し、記載のように相対的立体化学を有する新規の酸性多環式エーテル抗生物 質；薬学的に許容しうるその陽イオン塩：家禽、ウシまたはブタ用の該抗生物質 を含む栄養飼料組成物：家禽における抗コクシジア藁として、ブタの赤痢の治療 若しくは予防において、またはウシ若しくはブタの成長促進剤としてのその使用 。

その［連用の発酵法；および該発酵法において該抗生物質を生産する微生物であ るストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）種に関する。

化合物（１）は、酸性多環式エーテル群の抗生物質の新規のメンバーである。

この系列としては、モネンシン（ｍｏｒｘｅｎｓｉｎ）（メルックインデックス （Ｔｈｅ　Ｍｅｒｃｋ　Ｉｎｄｅｘ）、第１１版、メルック・アンド・カンパニ ー・インコーホレーテッド（Ｍｅｒｃｋ　ａｎｄ　Ｃｏ、、Ｉｎｃ、）、ｏ−ウ ェー、Ｎ、Ｊ、、１９８９．モノグラフ番号６１５７）、ニゲリシン（ｎｉｇｅ ｒｆｃｉｎ）（上記引用文中、モノグラフ番号６４５７＞、ナラジン（ｎａｒａ ｓ　ｔ　ｎ）（上記引用文中、モノグラフ番号６３３９）および構造が化合物（ １）と特に近いラサロシド＜Ｉａｓａｌｏｃｆｄ）Ｂを含むラサロシドＡ〜Ｅ（ ウェスドリー（Ｗｅｓｔｌｅｙ）ら、Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、２７養１７ ４４頁、１９７４）のような周知の薬剤がある。

スｌ−レプトミセス種ＡＴＣＣ５ヲ０２７の培養は、水性培地中の好気性条件下 で発酵した場合、前記に定義の式（ｒ）を有する化合物である新規の酸性多環式 エーテル抗生物質を生産する。

本発明は、薬学的に許容しうる陽イオン塩を含む式（Ｉ）を有する前記の化合物 、並びに同化しうる炭素源および窒素源を含む水性栄養培地において回収しつる 量の式（１）を有する前記の化合物が生成されるまで、好ましくは深部好気性条 件下での前記のストレプトミセス種ＡＴＣＣ５う０２７の発酵を含むその製造方 法に関する。抗コクシジア薬として、ブタの赤痢の予防若しくは治療において、 および／または成長促進剤としての使用に対して、化合物ｆＩ）は発＃物から分 離し且つ実質的に純粋の状態で単離することができる。しかしながら、それは、 或いは、菌糸体と混合した沈Ｍ状ＦＥｉ（発酵培地の濾過によりて回収される） かまたは発酵培地全部をｃｔｉｇ若しくは凍結乾燥することによって得られた固 体での粗製状態で用いられる。

前記の薬学的に許容しつる陽イオン塩としては、制限されないが、ナトリウム、 カリウム、カルシウム、アンモニア、Ｎ、Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、 Ｎ−メチルグルカミン（メグルミン）およびジェタノールアミンの塩がある。好 ましい陽イオン塩はカリウムおよびナトリウムの塩である。

本発明は、更に、栄養飼料組成物に間し、一つは式（Ｉ）を有する化合物をウシ またはブタの飼料利用を促進および／または改良するのに有効な量で含むウシま たはブタ用；そしてもう一つは式（Ｉ）を有する化合物を家禽におけるコクシジ ア感染を制御するのに有効な量で含む家禽用である。

更に、本発明は、ブタまたはウシに対して式ＣＩ＞を有する化合物の成長促進性 または洞科利用効率促進性量を、特に栄養飼料組成物の形で投与することを含む ブタまたはウシにおける成長を促進するおよび／または飼料利用効率を増大させ る方法：ブタに対して式（ｒ）を有する化合物をブタの赤痢を予防しまたは治療 する場合の有効量で投与することを含むブタの赤痢を予防または治療する方法： 並びに家禽に対して抗コクシジア有効量の式（Ｉ）を有する化合物を、特に栄養 飼料組成物の形で投与することを含む家禽におけるコクシジア感染を制御する方 法に関する。

最後に、本発明は、ストレプトミセス種ＡＴＣＣ５５０２７の生物学的に純粋な 培ｌ！を物であって、同化しうる炭素源および窒′！＃源を含む水性培地中での 発酵によって回収しうる量の式（１）を斉する化合物を生産することができる、 凍結乾燥状態の培ｇｌ物を含む上記の培養物に間する。

ユ盟＠拌但皇戊四 式（１）を有する不多環式エーテル抗生物質を生産することかできる培養物をス トレプトミセス種と称し、そしてブダペスト染約に基づきアメリカン・タイプ・ カルチャー・コレクション（Ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　ＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒ ｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、）−口γクビル、メリーランド州において寄託番号 ＡＴＣＣ５５０２７の基準培貢薗株として寄託しな、アメリカン・タイプ・カル チャー・コレクション、ロヅクヒル、メリーランド州でのこの培養物の寄託の永 続性およびそれに対する一般による容易な入手可能性は特許の有効期間中を通し て与えられる。

この新規の培養物は、日本の茨城県筑波町において採取された土壌試料に由来し たものであり；そしてファイザー・インコーボレッテッド（ＰｆｉｚｅｒＩｎｃ 、）の培養採取物中においてＮ７６８−２８およびＦ、Ｄ、２８７０６として同 定された。その説明および分類は、Ｌ、Ｈ，ワン（Ｈｕａｎ、ｇ）博士によって 提供された。この培！！！物は、放＃Ｓ薗目（Ａｃｔｔｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ ）の典型的な細長い菌糸、胞子鎖か生産される気中菌糸体、および非断片の基質 菌糸体を生じることか分かった。全細胞分析の結果により更に、それがストレプ トミセス属に属することが示された。

Ａ、ＴＣＣ１７２培地上での微生物の斜面培養物をＡＴＣＣ１７２ブイヨン中に 接種し且つ振どう機上において２８℃で４日間増殖させた０次に、それを２０分 間遠心分離し、滅菌蒸留水で３回洗浄し、そして放線菌目のメンバーの同定用に 一般的に用いられる培地上で平板培養した。

培養物を２８℃でインキュベートし、そして結果を種々の時間で読み取るが、最 も一般的には１４日である８色は一般的な専門用語で記載されたが、正確な色は Ｔｈｅ　Ｃｏ１ｏｒ　Ｈａｒｍｍｏｎｖ　Ｍａｎｕａｌ、第１４版による色標と の比較によって決定された。全細胞アミノ酸および糖分析の方法は、それぞれバ ッカー（ＢａｃＫｅｒ）ら、Ａ　つ１〜１ｉ（ｒｏｂｉｏｌ、、１２巻７４２１ 〜４２３頁（１９６４）および、レチェヴアリア（Ｌｅｃｈｅｖ、−Ｌｌｉｅｒ ）。

Ｊ、Ｌａｂ、Ｃ１ｆｎ、Ｍｅｄ、、７１巻、９３４〜９４４頁（１９６８）に記 載されたものである。

培ｇｌ物は下記のように同定された。

＃母抽出糊−麦芽抽出物案天（ＩＳＰ：ｌ：２培地、ディフコ（Ｄｉｒｃｏ）） −増殖良好、クリーム色（２ｃａ）：青起、しわ状：気中菌糸体かまばら、白色 ；裏面帯ｆＡ黄色（２ｇａ、２ｉｃ）；可、容性色素なし。

オートミール寒天（ＩＳＰギ３培地、ディフコ）−増殖中程度、白色〜クリーム 色（１１／２ｃａ）；僅かに隆起、平滑、白色の気中菌糸体有り；裏面％Ｆ淡黄 色＜２ｃａ、２ｅａ）；可、容性色素クリーム色（２ｃａ）、無　塩“−デンプ ン実　（ＩＳＰ、ｆ４堵地、ティフコ）−増殖不十分〜中程度：白色〜クリーム 色（２ｃａ）；（ｉかに隆起、平滑、密集または単離されたように見えるコロニ ー、白色気中菌糸体有り；裏面帯淡黄色（２ｅａ、２ｃａ）；可溶性色素なし。

グリセロール−アスパラギン寒　（Ｉ　ＳＰ’：５培地、ディフコ）−増殖不十 分〜中程度；白色〜クリーム色（２ｃａ）；僅かに隆起、平滑、密集またはＪＩ Ｌ離されたように見えるコロニー：気中菌糸体白色；裏面無色〜クリーム色（１ １／２ｃａ）；可溶性色素なし。

ッザベクースクロー又寒天（ワクスマン（Ｗａｋｓｍａｎ）、’放線菌（ＴＨｅ 　Ａｃｔｆｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）ｇ、２巻、培地３１．３２８頁、１９６１）− 増殖中程炭：白色：僅かに隆起、平滑：気中菌糸体白色：裏面無色、可溶性色素 なし。

グルコース−アスパラギン寒天（同書中、培地＃２）−増殖中程度〜良好：白色 の縁付きのクリーム色：薄い〜１かに隆起、平滑〜１かにしわ状；気中菌糸体白 色；裏面りリーム色〜帯淡黄色（２ｃａ、２ｅａ）；可／１ｖ性色素なし。

ゴートン（Ｇｏｒｄｏｎ＞およびスミス（ｓｍｉｔｈ）の千ロジン寒天（ゴート ンおよびスミス、Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｊｏｌ、、６９：　１４７−１５０．１９５ ５）−増殖中程度：白色〜クリーム色（２ｃａ）；薄い〜僅かに隆起、平滑、白 色気中菌糸体有り：裏面クリーム色〜帯淡黄色（２ｃａ、２ｅａ）；可溶性色素 なし。

’）　７ｊ’　ｈｔｌ、＝’ｉ’ｙｌ−８（ワクスマン、Ｂａｃｔｅｒｉｏ！、 Ｒｅｖ、、２１゜１〜２９．１９５７）−増殖中程度：白色；薄い〜僅かに隆起 、平滑、白色気中菌糸体有り；裏面無色〜クリーム色（２ｃａ）；可溶性色素な し。

Ａヱエと夷因（ゴートンおよびスミス、同書中ウー増殖中程度；クリーム色（２ ｃａｌ　；僅かに隆起、平滑であるが線の先端近くがしわ状、気中菌糸体なし： 裏面ＩＦ淡黄色（２ｅａ）；可溶性色素帯黄色＜２　ｆ　ａ）　。

べ木ヅト（Ｂｅｎｎｅｔｔ’　ｓ＞婁　（ワクスマン、上記引用文中、培地＃３ ０．３３１り一増殖良好：白色〜クリーム色（２ｃａ）：中程度の隆起、しわ状 ：気中菌糸体白色；裏面帯淡黄色（２ｅａ、２ｇａ）；可溶性色素１１淡黄色良 好：暗クリーム色（２ｇｃ）；隆起、しわ状；気中菌糸体なし：裏面は表面と同 一：可溶性色素帯黄色（２！ｃ）− 玉！夷因（同書中、＃１４，３３０頁）−増殖中程度；クリーム色（２ｃａ。

２ｅａ）；薄い〜僅かに隆起、平滑、気中菌糸体なし〜まばらに白色；裏面無色 〜クリーム色（２ｃａ）：可溶性色素なし。

ギラｊ≦」４困（ゴートンおよびミーム（Ｍｉｈｍ＞、Ｊ、Ｂａｃｔｒｉｏｌ、 。

７３．１．５〜２７．１９５７）−増殖中程度〜良好：白色；中程度の隆起、平 滑、白色気中菌糸体有り：裏面クリーム色（２ｃａ）；可溶性色素なし。

デンプン寒天（同書中）−増殖中程度〜良好：白色；中程度の隆起、平滑、白色 気中菌糸体有り、＆Ｉ面クり−ム色〜％Ｆ淡黄色（２ｃａ、２ｅａ）；可溶性色 素なし。

ポテトキャロット寒天（ジャガイモ３０ｇ、ニンジン２５ｇおよび寒天２゜ｇだ けを用いること以外は、レチェヴアリア、Ｌａｂ、ＣＩ　ｉｎ、Ｍｅｄ、、７１ ．９３４〜９４４．１９６８）−増殖なし。

水道水寒天（２％）〜増殖中程度：白色；中程度の隆起、平滑：気中菌糸体白色 ：裏面無色：可溶性色素なし。

形襲主昨ｉ冨−形態学的住質は、オートミール寒天上のインキュベーションの１ ６日後に観察された。白色連続の胞子塊：セクション・レクティフレキシビルズ （Ｓｅｃｔｉｏｎ　Ｒｅｃｔｉｆｌｅｘｉｂｌｅｓ）の胞子頒、直線、曲線また は不規則な波状：胞子鎖当９１０個〜う０個または５０個以上の胞子；単軸型の 分枝状胞子柄：樺状胞子、時々卵形〜長円形、１〜２ＸＱ、６〜１．０μｍまた はそれより長い；平滑、走査型電子票員鏡によって示される。

上止ヱ些ユ！−メラニン非産生：硫化水素非生産：セラチン液化：デンプン加水 分解；硝酸塩を亜硝酸塩に非還元、ジエンセン（Ｊｅｎｓｅｎ’　ｓ）セルロー スブイヨンまたはレヴイン（１，ｅｖｉｎ）およびシェーライン（Ｓｃｈｏｅｌ ｅｉｎ′ｓ）セルロースブイヨン上で増殖なしおよび分解なし：乳のべ１トン化 および凝固：カゼイン消化陽性；チロシン消化陰性：リンゴ酸カルシウム消化陰 性、炭水化物利用性ニゲルコース、スクロース、フルクトース、マンニトール、 ラフィノース、スクロースおよびキシロース利用：アラビノース、イノシトール およびラムノース非利用。

遁喧閃係− λ±’Ｃ２旦ニ　ュヱｌ　土二二 増殖良好　増殖良好　増殖なし　増殖なし凱胞皇左折−全細胞加水分解物はＬＬ ジアミノピメリン酸を含み且つ特徴的な糖を含まなかった。

本培養物は、塊の白色胞子、陰性のメラニン反応、直線〜波上の胞子鎖および平 滑胞子を特徴とする。全細胞加水分解物は、ＬＬ−ジアミノピメリン酸の存在お よび特徴的な糖の不存在を示す、グルコース、フルクトース、マンニトール、ラ フィノース、スクロースおよびキシロースか利用された。したがって、培養物は ストレアトミセス属に属する。

既知の種のストレブトミでス属と比較した場合、本培養物は、培養、形態学的お よび生ｆヒ学的性質か、Ｓ　アルボスポレウス（ａｌｂｏｓｐｏｒｅｕｓ）（ク ラインスキー（Ｋｒａｉｎｓｋｙ）ワクスフ７およびヘンリシ（Ｈｅｎｒｊｃｉ ）亜種ラヒロミセ子イクス（ｌａｂｉ　Ｉｏｍｙｃｅｔｉｃｕｓ）７ｒカミ（Ｏ ｋａｍｉ　）、スズキ（Ｓｕｚｕｉ＜ｉ）およびウメサヮ（Ｕｍｅｚａｗａ）（ 、Ｊ、Ａｎｔｊｂｔｏｔｉｃ　５ｅｒｊｅｓ　Ａ　１６；１５２〜＋５４．１９ ０３）に似ている。しかしながら、それは、同−培地上の栄養成長増殖か淡褐色 〜淡桃色よりもむしろクリーム色てｈることおよびフルクト−＋り用が陽性であ ることにおいて後者とは興なる。

ｖｒ記に示したデータを基準として、本培ｔ’ｌ’ｖＮ７６８　２８をストレグ トミセス属の新規の菌株であるとみなし且つストレプトミセス種と称する。それ をアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託番号ＡＴＣＣ５５０２ ７として寄託した。

本発明の抗生物質化合物（１）は、本ストレプトミセス種により、炭水化物源、 例えは、楯、デンプン、クリ七ロール：有機窒素物質、例えば、大豆ミール、カ ザミノ酸、酵母抽出物：成長物質、例えば、Ｉ！物可溶性物、魚ミール、綿実ミ ール：跣、コバルト、銅、亜鉛等のような微量元素を含む無機塩類：並びに緩衝 剤としての炭酸カルシウムまたはリン酸カルシウムからなる培地上において深部 条件下で撹拌および通気しながら約り０℃〜約３５℃で増殖させることによって 容易に生産される。増殖が完了した後に、抗生物質は、全ブイヨンを有機溶媒、 例えば、ｎ〜ブタノール、メチルイソブチルケトン若しくはクロロホルムを用い て４．０〜８．０のＰＨ範囲で抽出することによって：沈殿した抗生物質を含ん でいる菌糸体を４去し、その濾液を捨てることによって二または全ブイヨンを単 純に１ｌｉｌＮ１２燥若しくは凍結乾燥することによって容易に回収される。或 いは一国糸体または全乾燥ブイヨンを前記の有１ｓ浴媒の１種類で抽出する。精 製された抗生物質化合物が型置れるならば、それは、以下に例示したように、′ ａ１！、塩若しくは遊離酸の生成、クロマトグラフィー、沈殿および／または結 晶化の標準的な方法によって有機抽出物から単離される。

発酵を行う通常の方法において、最初に、ストレプトミセス種ＡＴＣＣ５５Ｏ２ ７を播種した斜面またはルーボトルから、適当な培地上で増殖する増殖性細胞を 掻き収ることによって接種材料を調製する。得られた増殖性細胞を順次に用いて 、適当な増殖培地か入っている振どうフラスコまたは接種材料タンクに接種する 。或いは、接種材料タンクに振どうフラスコから接種する。適当な増殖期（概し て、振どうフラスコ中で１２０〜１４４時間および接種材料タンク中で１６８〜 １９６時間）の慢、適当な増殖培地が入っている発酵槽に、振どうフラスコまた は接種材料タンクからの増殖性ブイヨンと無菌条件下て＃種する。増殖が完了し たら（概して、約１２０〜１９６時間）、抗生物質化合物は、所望に応して、前 記に概説した方法の一方若しくは他方によってまたは以下に例示される具体的な 方法によって粗製または純粋状態で回収さｎる。

式（Ｉ）を有する化合物のインビトロでの抗細菌活性を、１種類またはそれ以上 の微生物に対するｍ（４／ｍｌでの最小阻害濃度＜ＭＩＣ′Ｓｌか測定される標 準法によって試験する。このような方法の一つは、抗生物質感受性＃、＃の国際 共同研究（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏ１１ａｂｏｒａｔｆｖｅＳｔｕｄ ｙ　ｏｎ　Ａｎｔｉｂｆｏｔｉｃ　ＳｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙＴｅｓｔｉｎｇｌ　 （エリクソン＜Ｅｒｆｃｃｓｏｎ＞およびシェリス＜５ｈｅｒｒｉｓ＞、Ａｃｔ ａ、Ｐｈａｔｈｏｌｏ　Ｉｃａ　ｅｔＭｆｃｒｏｂｉｏｌｏ　ｉａ　５ｃａｎｄ ｉｎａｖ、補遺２１７．８節：６４〜６８［１９７１））によって推奨されたも のであり且つ脳心臓浸出液（ＢＨＩ）寒天および接種材料複製装置を用いる。− 晩中増殖させた試験管を、ＷＡ４的な接種材料として用いるために１００倍に稀 釈する（約０．００２ｍ１中に２０．０００〜１００．０００個の細胞を寒天表 面上に置＜；ＢＨＩ寒天２０ｒｎ１７／′皿）、２＠稀釈の試験化合物１２個を 用い、試験薬剤の初期濃度は２００ｍＣｇ／’ｍＩである。３７℃で１８時間後 にプレートを読み取った場合、単一コロニーは無視される。試験微生物の感受性 （ＭＩＣ＞は、裸眼によって判断される完全な阻害増殖を生じることかできる化 合物の最低濃度として認められる。他の多環式エーテル抗生物質と同機に、式（ Ｉ＋を宥する化合物は、典型的に、ダラム陽性抗細菌活性、更にはトレポネーマ ・ヒオディセンテリエ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ　ｈｙｏａｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ＞ 　（ブタの赤痢の原因物質）に対する活性を示す。

ニワトリにおけるコクシシア感染に対する式（Ｉ）を有する化合物およびその塩 の効力データは下記の方法によって得られる６１０日令の病原体不含白色レグホ ンの雄のヒナ３〜５羽の群を、化合物（Ｔ）またはそのナトリウム塩および／ま たはカリウム塩を均一に分散させて含むマツシュ飼料で飼育する。このｉｒｉ！ 料において２４時間後に、各ヒナに、試験されるアイメリア！！（Ｅｉｍｅｒｉ ａ）の特定の種の接合子嚢を経口的に播種する。ｅの群の３〜５羽の１０日令の ヒナを、化合物（１）またはその塩を含まない同様のマツシュ飼料で飼育する。

更に、それらを２４時間後に感染させ、そして感染対照として用いる。更にもう 一つの群の３−５羽の１０日令のヒナを、抗生物質不含の同一のマツシュ飼料で 飼育１．且つコクシジアに感染させない、これへは正常対照として役立つ、処置 の結果は、Ｅ、アセルヴリナ（ａｃｅ　ｒｖｕ　ｌ　ｉ　ｎａ）の場合５日後に 、そして池の試験全部に関しては６日後に評価される。

抗コクシジア活性を測定するのに用いた判定基準は、Ｅ、テネラ（ｔｅｎｅｌｌ 、ａ）に関しては、Ｊ、Ｅ、　リンチ（Ｌｙｎｃｈ）、「抗コクシジア活性の初 期評価の新規の方法（Ａ　Ｎｅｗ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｔｈｅＰｒｉｍａｒｙ 　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡｎｔｉｃｏｃｃｉｄｊａｌＡｃｔ　１ｖｉｔ ｙ））、Ａｍ、Ｊ、Ｖｅｔ、Ｒｅｓ、、２２．３２４〜３２６゜１９６１の後の ０〜４：および他の種に関しては、Ｊ、ジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ、）および Ｗ　Ｈ，ライド（Ｒｅ　ｉ　ｄ　）、「抗コクシジア薬剤。

ニワトリのヒナにおけるハソテリーおよびフロアベン実験での病変評点技術（Ａ ｎｔｉｃｏｃｃｉｄｉａｌ　Ｄｒｕｇｓ、Ｌｅｓｉｏｎ　ＳｃｏｒｔｎｇＴｅｃ ｈｎｊｑｕｅｓ　ｉｎ　Ｂａｔｔｅｒｙ　ａｎｄ　Ｆｌｏｏｒ　ＰｅｎＥｘｐｅ ｒｔｍｅｎｔ、ｓ　ｉｎ　Ｃｈｉｋｓ）」−Ｅｘｐ、Ｐａｒａｓｉｔ、。

２８．３０〜３６．１９７０によって考案された評点システムの変法に基づくＯ 〜３の＠変評点から成る。活性は、各被処理群の病変評点を感染対照の病変評点 で除することによって測定される。この試験において、例えば、化合物（Ｉ）お よびその陽イオン塩は、ニワトリのマツシュ飼料中に約３０〜６０ｐｐｒｎの１ 度で配合された場合、家禽においてアイメリア・テ本う感染に対する活性を示す 。

更に、式（１）を有する本化合物は、概して、ハミル（Ｈａｍｉ　Ｉ　！　）ら 、米国特許第４．５８２．８２２号明細書に定義されたように、ある種の他の既 知の抗コクシジア薬、例えば、ニカルバジン、４，４−ジニトロ力ルバニリドま た；；ナフタレンアミンとの組合わせで有用である。

家禽におけるコクシジウム症の予防または制御に対して、本発明の化合物を家禽 に対して適当な担体中で軽口投与する。ｌｌ用的には、１剤を飲料水中または家 禽飼料中で単純に保持して、治療的投薬量の薬１１を毎日の水ｔなは家禽飼料と 一緒に摂取するようにする。薬剤は飲料水中に、好ま！、＜は　液体４１ｉａ物 の形で直接計量する：或いは飼料にそのまま直接加える、または更に一般的には 、治療薬の固体担体中プレミックス若しくは濃縮物の形で飼料に加えることがで きる。冶ｆ薬は、実質的に純粋な状：ｎ（例えば、遊′Ｍ酸まなは薬学的に許容 しうるその塩）または分析された粗製状態、例えば、湿潤若しくは乾燥菌糸体ま たは乾燥全ブイヨンであることができる。適当な担体は、所望に応じて液体また は固体であり、例えば、水、各種ミール（例えば、大豆油ミール、亜麻仁油ミー ル、トウモロコシ穂軸ミール）および家禽め飼料に一般的に用いられているよう な鉱物配合物である。特に有効な担体は家禽飼料それ自体、すなわち、少量の家 禽飼料部分である。担体は、プレミックスが配合される最終飼料において活性材 料の均一の分布を容易にする。これは、低比率の本強力票剤のみが必要とされる ので重要である。

化合物をプレミックス中に、そして引き続き飼料中に完全に配合することは重要 て゛ある。この点に関して、薬剤は適当な油性ビヒクル、例えば、大豆油、コー ン油、綿実油等または揮発性有ｌ！溶媒に分散または溶解した後、担体と配合す ることかできる。活性材料の１絹物中での比率は、最終飼料中の薬剤の量を、適 当な比率のプレミックスと飼料とを配合することによって望ましいＳ度の治療薬 を得るように調整することができるので広範に変化しうる。

高力価の濃縮物を、飼料製造により、前記に記載したように大豆油ミールおよび 他のミールなどのタンパク質性担体と配合して、家禽にｉ［接与えるのに適当て ・、Ｐ＼る（Ｉ！ｌｌ厚助刑を製造する。このような場合、家禽は通常のｆ４料 を消費することか可能である。或いは、このような１厚助剤を家禽ｆｙｉ料に直 接加えて、本発明の化合物め治療的有効量を含む栄養的に平均のとれた最終飼料 を製造する。混合物を標準法によって、例えば、Ｖ形ブレンダー中で完全に配合 して均一性を確実にする。家禽での使用に対しては１本明細書中に記載した化合 物の使用４度を種々の状況下で変化させる。増殖期中、すなわち、ニワトリに関 しては最初の３〜１２週間中の連続紙Ｊ！４度投藁は有効な予防処置て゛ある。

立証された感染の治療においては、感染を克服するのに更に高Ｊ度を必要とする ことかある、化合物ｔＩ）力飼料中の使用′ａ度は、概して、約１０〜１１００ ｐｐの範囲である。飲料水中で投与した場合　その濃度は、水の平均−日消費量 に対する飼料の平均−日消費量の重量比を要因とした投薬の同一の一日用量を提 供する量である。

ブタまたはウシにおける１２１：長の促進および／′または１ｒｉＩ料利用効率 の増大における式（Ｉ）を有する化合物およびその塩の活性は、被験動物の試験 群に飼料中で各種１度の化合物（ｒ）または塩を直接与えることによって測定す ることかできる。或いは、英国特許第１．１９７．８２６号明細書に、飼料中の 抗生物質の評価に関するインヒドロでの瘤胃法か詳述されている。

ブタの赤痢の予防若しくは治療においてまたはウシ若しくはブタでの成長を促進 するおよび／′または調料利用効率を増大させる場合の使用に対しては、式（Ｉ ）を有する化合物または塩を飼料添加剤として投与することか好ましい、家禽飼 料の製造に関して前記に詳述したのと完全に類似の方法にしたがってそれを用い て製造さ＃ｆ、ｚ′！Ａ科は、治療薬か均一に分散しているｌ１ｉｉｌ料を製造 するのに重要である。

ウシまたはブタの飼料中の化合物（Ｉ）の使用濃度は、概して、約１０〜１１０ ０ｐｐの範囲である０反局動物において、式（Ｉ）を有する化合物は、ＨＩ網胃 嚢中に保持される巨丸剤形で経口投与することもでき、治療薬を実質的に一定速 度で長期間、例えば、４〜８週間常に放出して、飼料中での前記の日用量と同等 の用量、すなわち、 平均日用量ミリグラム＝１０〜Ｉ００ｐｐｍｘ平均−日飼料消費量ｋｇを与える 。

本発明を下記の実施例によって例証する。しかしながら、本発明がこれらの実施 例の具体的な説明に制限されないということを理解すべきである。

叉棟刑１ ストレプトミセス種ＡＴＣＣ５う０２７の発酵式（Ｉ）を亙する　生物　のナト リウム塩と１−ての単離最初に、ストレプトミセス種を　ＡＴＣＣ５ヲ０２７培 貢物を接種した斜面で増殖させた。斜面の一部分を用いて、攪拌された５００ｍ １７ラスコ（ミニジャー（ｍｉｎｉｊａｒ））中の下記の培地１５０ｍ１に接種 した。

デキストリン　２４ ポリペプトン　５ 酵母抽出物　ラ ビーフ抽出物　３ て、６リツトル滅菌発酵フラスコ中の下記の培地の１種類３リツトルに播種した 。

グルコース　１０　グルコース　１０ デキストリン　ラ　コーンスターチ　２０トウモロコシ浸漬溶液　ラ　ＮＺアミ ンＡ型　ら血液ミール　５　酵母抽出物　５ Ｃａ　ＣＯ３３小麦胚芽　５ ＣｏＣ１２６Ｈ２００，００１ グリ七ロール　１ｏ　デキストリン　２ｃ大豆ミール　１０　小麦グルテン　１ ゜トウモロコシ浸漬溶液　１ｏ　トウモロコシ浸漬溶液　５Ｎ　ａ　２　Ｓ　Ｏ ４０−５ポリペプトン　ｌＣｏＣ１２６Ｈ２００，００１（ＮＨ４）　２Ｓｏ　 ４　１ＣａＣＯ３４ＣｏＣｌ２６Ｈ２００，００１容量当り１容量の空気を通気 した。完了した発酵を珪藻上上の濾過によって清澄にし、そして抗生物質を下記 に詳述したように濾液がらＪＩＬ離した。

前の段落にしたかって製造されたブイヨン（８０す・ソトル）をメチルイソブチ ルゲトンを用いて中性のＰＨで柚比した。有機抽出物を真空下で濃縮して油性残 留物を得た。残留物を、３２〜６３ミクロンのカラム等級シリカゲルを用い、ヘ キサン、酢酸エチルか８０　：　２０〜５ｏ：う０の勾配を用いるクロマトグラ フィーによって分離した。ａｍｉを、シリカゲルプレート上にクロロボルム：イ ソプロパノール（９５：５）で展開した後、エタノールニリン酸（２：１）中に 溶解した３、３％バニリンを噴震し、そして８０″Ｃまで加熱した１層クロマト グラフィー（ｔｌｃ）によって試験した。共通成分を含む両分を合わせ且つ黄色 ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）ＯＩＡＩＩＯに対 する抗細菌活性について試験しな、活性画分を合わせ、そして更に、シリカ１０ ０ｇのカラムを用い、ヘキサン・酢酸エチル９０：１０〜１００％酢酸エチルの 勾配をゲルティライジング＜ｇｅｌｕｔｉｌｉｚｉｎｇ）するフラッシュクロマ トグラフィーによって精製した。再度、溶離液をｔｌｃによって試験した。バニ リン指示薬とｒ＠霧し往９８０’Ｃまで加熱した後、活性成分はＲｆｏ、３２の 黄色スボントとして現れた。この成分を含む両分全部を合わせ、そしてフラッシ ュクロマトグラフィー（シリカゲル１００ｇ：クロロホルム：酢酸エチル８０： ２０＞を用いるりロマトグラフィーによって分離し、そして真空下て′溶媒を除 去した後に式（Ｉ＞を育する化合物のナトリウム塩３８７ｍｇを得た：　ｍｐ　 １６０〜１６２”Ｃ。

ＰＴ、ＨＥＴＣＯＲおよび長範囲１３ｃ　ＩＨ力・ｙブリング実験を含む）並び に質量スペクトルデータに基づいて・帰属させた。相対的立体化学は、ＩのＣｓ 塩のＸ′ｍ分析によって決定された。しかしながら、Ｘ線データは、ＮＭＲテー タに基づいて行われた芳香族環の４位（すなわち−メチルまたはエチル）および ４−エチル帰属の炭素鎖長さに関して決定的ではない６分光分析データおよび元 素分析はＩのナトリウム塩に関するＣ３６Ｈ５７０８Ｎａと一致した。例えば、 陽性のＦＡＩＬ−ＭＳにおいて、特徴的な陽イオン化分子ｍ／ｚ６４１　（ｍ＋ Ｎａ）”および６６３　（Ｍ＋２Ｎａ−Ｈ）　を、ナトリウム塩としての化合物 （Ｉ）に関して検出した。

シフト（ｐｐｍ）、括弧内は水素数コニ２１６．１８（０）、１７６．１６　（ ０）、１５８．７３（０１，１４９，９７（０）、１２９．８７（１）、１２８ ．２６（０）、１１８．３０（０）、１１５．３９（１）、８６．７７（０＞。

８２．７２　（１）、７６．０４　（１）、７１．Ｏｆ　（０）、６９．７８　 （１）。

６９．３０　（１）、５５．８３　（１）、４８．４６　（１，）、４４．６０ 　（２）、３８．００　（２）、３４．３５　（１）、３１□４６（２）、３１ ．０２（１）。

３０．５５（１）、２９．６８（２）、２９．５６（２＞、２３．１８（２）。

１．８．９８（２）、１８．６６（３）、１５．４６（２）、１５．３６（３） 。

１４、Ｏｆ　＜３）、１３．２７（３）、１３．２７（３）、１２．４１　（３ ）。

１２．４１　（３）、９．２１　（３）および６．４１　（３）。

丁Ｒ（薄膜）ａｍ−１：１７００（ケトン）および１５８５（カルボキシレート ）。

ＵＶ（メタノール）：２４６ｎｒｎで変曲、３０５ｎｍ″Ｃ−ｉ大。

実施例２ 遮醒並芒工幻化皇−二Ｌ一 式（１）を有するＭＭ酸の形の抗生物質を　ナトリウム塩のクロロホルム溶液を 等量の塩酸と一緒に汁液漏斗中においてｐＨ３で激しく振とうすることによって 製造した。相を分離し、そしてクロロホルム層を水で洗浄した後、真空下て′（ 発させて遊離酸を得た。

ＩＲＩＪｔｌｇ）　ａｍ　’　：　１７００　（ケトン）および１６４５（水素 結合したカルボキシル基）。

実施例３ イ合物（１）のセシウム塩 式（Ｉ）を有する化合物のセシウム塩を製造するために、遊離酸（９８ｍｇ）を クロロホルム７Ｏｒｒｉｌ中に溶解した。炭酸セシウム（水１００ｍ１中１３０ 　ｍｇ）を加え、得られた混合物を数分間撹拌した後、分液漏斗に入れ、そして 数分間激しく振とうした。有機相を分離し且つ真空下で蒸発させて白色固体を得 た。

セシウム塩そ塩化メチレン：へブタン（２：１．）から徐々に蒸発させることに よって再結晶させ、そして得られた結晶からＭｓ、Ｇ、シュルテ（Ｓｃｈ＋１ｌ ｔｅ＞によってＸ線データを得た。

要約書 ＸｄＡ結晶学によって立証された構造を育する酸性多環式エーテル抗生物質を、 新規の微生物であるアクチノマデユラ（Ａｃｔ、ｉ　ｎｏｍａｄｕｒａ）種ＡＴ ＣＣう５０２７の発酵によって生成する。この新規の抗生物質は、家禽における 抗コクシシア物質として、ブタの赤痢の予防および治療において、そしてウシお よびブタの成長促進剤として有用である。

国際調査報告 鋤−一一一〜−１，１１，，，，ＰＣＴＡＩＳ　９１１０６０８５国際調査報告 ）コニ；コー＝、−９２．宕；に；ニー’、Ｉ＝　ｏｃａｃｏ　ｓ　Ｄ　Ｐ〒Ｈ ＋ｍｄ１′−一−−１７帽乃１ｅ１“°“１−７丁１ｗＫＷ＾啼−噺・＃−１＊ ｌｌＩａｗ１ｗｌ−＃Ｑｌ１ｍ＠紬ｗｒｈｗｒｍａｒ峠ｗｌ拳ｒｓｗｈｉｍｆｉ −＋’ｅｌＶ１ｍ１ｍｍａｍ髄]ａｄｌＰＩｗｗｓ−ｅ−。

Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. １．式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＭｅはＣＨ３を表わし且つＥｔはＣＨ２ＣＨ３を表わす）を有する化合 物または薬学的に許容しうるその陽イオン塩。
2. ２．ナトリウム塩またはカリウム塩の形である請求項１に記載の化合物。
3. ３．アクチノマデュラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）種ＡＴＣＣ５５０２７また はその突然変異体若しくは組換え体を、同化しうる炭素源および窒素源を含む水 性栄養培地中の深部好気性条件下において、回収可能な量の前記の化合物が生成 されるまで発酵させることを含む請求項１に記載の化合物を製造する方法。
4. ４．前記の化合物を発酵培地から分離する工程を更に含む請求項３に記載の方法 。
5. ５．前記の分離工程が、発酵培地を濾過し且つ前記の化合物および菌糸体の混合 物を回収することを含む請求項４に記載の方法。
6. ６．前記の分離工程が、前記の発酵培地を噴霧乾燥または凍結乾燥し且つ前記の 化合物を粗製状態で回収することを含む請求項４に記載の方法。
7. ７．アクチノマデュラ種ＡＴＣＣ５５０２７を発酵させることを含む請求項３に 記載の方法。
8. ８．ウシにおいて成長を促進しまたは飼料利用効率を改良するのに有効な量の請 求項１に記載の化合物を含むウシ用の栄養飼料組成物。
9. ９．ブタにおいて赤痢を予防若しくは治療し、成長を促進しまたは飼料利用効率 を改良するのに有効な量の請求項１に記載の化合物を含むブタ用の栄養飼料組成 物。
10. １０．家禽においてコクシジア感染を予防または制製するのに有効な量の請求項 １に記載の化合物を含む家禽用の栄養飼料組成物。
11. １１．ウシにおいて成長を促進しまたは飼料利用効率を増大させるのに有効な量 の請求項１に記載の化合物をウシに対して投与することを含む、ウシにおいて成 長を促進しまたは飼料利用効率を増大させる方法。
12. １２．請求項８に記載の栄養飼料組成物をウシに対して投与することを含む、ウ シにおいて成長を促進しまたは飼料利用効率を増大させる方法。
13. １３．ブタにおいて赤痢を予防若しくは治療し、成長を促進しまたは飼料利用効 率を増大させるのに有効な量の請求項１に記載の化合物をブタに対して投与する ことを含む、ブタにおいて赤痢を予防若しくは治療し、成長を促進しまたは飼料 利用効率を改良する方法。
14. １４．請求項９に記載の栄養飼料組成物をブタに対して投与することを含む、ブ タにおいて赤痢を予防若しくは治療し、成長を促進しまたは飼料利用効率を改良 する方法。
15. １５．家禽においてコクシジア感染を予防または制御するのに有効な量の請求項 １に記載の化合物を家禽に対して投与することを含む、家禽においてコクシジア 感染を予防または制御する方法。
16. １６．請求項１０に記載の栄養飼料組成物を家禽に対して投与することを含む、 家禽においてコクシジア感染を予防または制御する方法。
17. １７．ＡＴＣＣ５５０２７の識別特性を有するアクチノマデュラ属の菌株または その突然変異体若しくは組換え体の生物学的に純秤な培養物であって、同化しう る炭素源および窒素源を含む水性栄養培地中での発酵によって回収しうる量の請 求項１に記載の化合物を産生することができる上記の培養物。
18. １８．凍結乾燥状態の請求項１７に記載の培養物。
19. １９．アクチノマデュラ種ＡＴＣＣ５５０２７である請求項１７に記載の培養物 。