JPH05507939A - 成長ホルモン放出因子の類似体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヒト成長ホルモン放出因子の類似体およびその断片に関する。本発明 の製剤学的組成物は、人間における成長ホルモンに関係する種々の問題を処理し かつ動物における能力を増強するために使用することができる。

発明の背景 ヒト成長ホルモン放出因子（ｈＧＲＦまたはＧＲＦ）は、グイレミン（Ｇｕ　ｉ 　ｌ　Ｉ　ｅｍｉｎ）ら、サイエンス（Ｓｃ　１ｅｎｃｅ）　、２１８．５８５ −５８７　（１９８２）およびリビエル（Ｒｉｖｉｅ、ｒ）ら、ネイチ＋−（Ｎ ａｔｕｒｅ）、３００．２７６−２７８　（１９８２）により、ヒト小島細胞か ら分離されそして構造的に特性決定された。ＧＲＦの分離および特性決定は、数 十年の間探求されてきたが、非常に少ない量でそれが存在するために、従来不成 功に終わった。ヒト視床下部の成長ホルモン放出因子（ｈＧＲＦ）は、ボーレン （Ｂｏｈｌｅｎ）ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・ コミュニケーションＣＢｒｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍ、） 　、１１４゜９３０−９３６　（１９８３）により、小島細胞の腫瘍から分離さ れたＧＲＦと同一構造を有することが示された。

リビエル（Ｒｉｖｉｅｒ）らは、それぞれ、ＧＲＦ　（１−４４）（ＳＥＱ　Ｉ Ｄ　ＮＯ：１）およびＧＲＦ（１−４０）（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２）の構造を 記載し、そしてＧＲＦが成長ホルモンの放出に対して特異的であることを示した 。ＧＲＦのこれらの２つの形態はアミノ（ＮＩ（ｔ）末端において同一であるが 、カルボキシ（ＣＯＯＨ）末端の停止点において異なる。ＧＲＦ（１−４４）（ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１）は、さらに、カルボキシ末端にアミド基を有すること において区別される。

リビエル（Ｒｉｖｉｅｒ）らは、ＧＲＦの生物学的活性がこの分子のＮＨ！末端 部分に存在することを示し、そして完全な固有の活性および効能はＧＲＦ　（１ 〜２９）　ＮＨ２（Ｓ　ＥＱ　Ｉ　Ｄ　ＮＯ：　３　ＭＨｚ）を使用して生体内 で実証された。

ランス（Ｌａｎｃｅ）ら［バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサー チ・コミュニケーション（Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ。

Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍ、）　、１１旦、２６５−２７２　（１９８４）］は、位置１ ．２および３に選択されたアミノ酸の置換基をもつＧＲＦ　（１−２９）−ＮＨ ｌ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３−ＮＨりがブタおよびラットの両者において生体内 で成長ホルモン（ＧＨ）の増強された放出を引き起こすことを示した。

最近、フリートマン（Ｆｒ　ｉ　ｅｄｍａｎ）ら［「ペプチド：化学、構造およ び生物学的（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、５ｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａ ｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ）Ｊ　（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆ　ｔｈｅ　１１ｔｈ 　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｍｏｓｉｕｍ、リビエル（Ｒｉｖｅ ｉｒ）およびマーシャル（Ｍａｒｓｈａｌ＋）（編）、ＥｓｃｏｍＳＬｅｉｄｅ ｎ、２２０　（１９９０）］は、［Ｌｅｕ”丁］　ＧＲＦ（１３２）　ＮＨｚ（ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４−ＮＨ，）の中のＡｓｎ”残基のｐＨ７，４におけるゆ っ（すした脱アミド化は生物学的に不活性な［１ｓｏＡｓｐ’、Ｌｅｕ”］　− ＧＲＦ　（１−３２）−ＮＨ，（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５−ＮＨ！、ここでＸａ ａ’は１ｓｏＡｓｐである）の形成に導くことを報告した。

動物における成長は生物調節分子のカスケードにより調節されると仮定される。

視床下部は成長ホルモンの下垂体の放出を誘発するＧＲＦを生産する。少量のＧ ＲＦは血液の中への成長ホルモンの実質的な下垂体の放出を引き起こすことが発 見された。こうして、ＧＲＦは、成長ホルモンが適用される感染において、大き い治療学的実用性を有する。例えば、ＧＲＦは下垂体機能低下の小人症、成長ホ ルモン生産異常のための糖尿病の処置、創傷治癒の増強、熱傷の処置、老化プロ セスまたはオステオポローシスの遅延または骨の治癒において使用することがで きる。

農学的使用の例は、食物のために飼育する鶏または動物、例えば、豚、畜牛など の肉の生産を増大して、市場に出す時期を早めるか、あるいは飼料について同様 な時間でより大きい動物を生産するか、あるいは赤身対脂肪の比を改良すること を包含する。ＧＲＦは、また、乳牛の乳の生産およびニワトリの卵の生産を刺激 することができる。さらに、ＧＲＦは、栽培漁業において、例えば、魚類および 他の海の冷血動物の養殖にまたはそれらの成長の促進に使用することができる。

ＧＲＦの首尾よい分離は、一部分、膵臓の腫瘍は先端巨大症的に真新的に生産さ れた大量のＧＲＦに関連するという発見のためであった。４４．４０および３７ 酢酸アンモニウムのアミノ末端から相同性のペプチドから成る、３つの形態のＧ ＲＦが分離された。

４４アミノ酸アミド化された形態のＧＲＦは親の分子である考えられる。広範な 種類の合成類似体が生産された。それらは、種々のアミノ酸置換基を組み込んだ もとのポリペプチドの生物学的に活性な断片から成る。変化は特別に操作されて 、親の分子の生物学的性質よりすぐれた生物学的性質をもつ合成類似体をしばし ば生産されてきている。一般に、直線のペプチドは非常に柔軟な分子であり、そ してよく定められたコンフォメーシコンを欠如する。直線のペプチドの中の各ア ミノ酸は取り囲む環境に暴露して、酵素および化学的分解に対してより大きい感 受性を生ずる。

したがって、例えば、効能、有効性および安定性の最大の生物学的活性ならびに 酵素、酵素以外のおよび化学的分解、脱アミド化および酸化に対する抵抗性を示 すＧＲＦの類似体を開発することは望ましい。

発明の要約 本発明は、位置１におけるＸａａがＴｙ　ｒ、　ｄ　ｅ　ｓ　ＮＨ，Ｔｙ　ｒ、 　ＨｔｓＳｄｅｓＮＨ，Ｈｉｓまたは３−ＭｅＨｉｓであり、位置２におけるＸ ａａがＶａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ 、Ｇｌｙ％ＮｌｅまたはＮＶａｌであり、位置８におけるＸａａがＧｉｎ、Ｓｅ ｒまたはＴｈｒであり、位置１５におけるＸａａがＡｈａまたはＬｅｕであり、 位置２７におけるＸａａがＭｅｔ、ＮｌｅまたはＬｅｕであり、位置２８におけ るＸａａがＳｅｒまたはＡｓｎであり、位置２９におけるＸａａがアミノ酸配列 （ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ。

ニア）またはまたはその断片であり、ここで前記断片がカルボキシル末端から１ 〜１５アミノ酸残基の数だけ減少しており、ここでカルボキシル末端が遊離カル ボン酸または対応するアミドであることができる、２９〜４４アミノ酸の配列（ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６）を有する化合物、およびその製剤学的に許容されつる 酸または塩基の付加塩に関する。

本発明による製剤学的組成物は、必要に応じて製剤学的にまたは獣医学的に許容 されつる液体または固体の担体の中に分散した、２９〜４４の長さのこのような 類似体を包含する。このような製剤学的組成物は、ヒトおよび獣の両者の臨床的 薬物において使用することができる。そのうえ、それらは温血動物および冷血動 物の成長を促進するために使用することができる。それらは、また、温血動物お よび冷血動物における成長に関係する疾患を処置しそして成長能力を改良するた めに使用することができる。

本発明のＧＲＦペプチドは、前述の処置において使用するために下垂体からの成 長ホルモンの放出を刺激する方法において有用である。

発明の詳細な説明 ここで使用するとき、用語ｒＧＲＦＪはヒト成長ホルモン放出因子、４４アミノ 酸の配列（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１）を有するポリペプチド［サイエンス（Ｓｃ ｉｅｎｃｅ）、２旦１．５８５、（１９８２）］または完全なポリペプチドの少 なくとも最初の２９アミノ酸を有しそして成長ホルモン放出活性を表す生物学的 に活性な断片を意味する。普通の表示に従い、Ｎ末端におけるアミノ酸は左に現 れ、そしてカルボキシル末端におけるカルボキシル基またはカルボキシル末端は 右に現れる。アミノ酸は、典型的にはＧｌｙ、ＡｌａＳＶａ　１．Ｌｅｕ、Ｉ　 Ｉｅ、Ｓｅｒ、ＴｈｒＳＬｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｉｎ、Ｃ ７０、Ｍｅ　ｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、ＴｒｐおよびＨｉｓことからなるタ ンパク質において見いだされる、天然に存在するアミノ酸の１つを意味する。Ｎ ｌｅはノルロイシンを意味する；Ｎｖａｌはノルバリンを意味する。アミノ酸残 基が異性体の形態を有するとき、それは、特記しない限り表される、アミノ酸の し一型である。ｒＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：＃ｇのの添字「ＯＨ」およびｒＮＨ２Ｊ 　（ここで＃は配列の番号であり、そしてｒＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：＃Ｊは実施例 の終わりの表３の配列のリストにおいて与える前記配列の番号の特定のアミノ酸 配列を呼ぶ）は、Ｃ末端における、それぞれ、遊離カルボン酸および遊離アミド を呼ぶ。

添字が使用されていない場合、この表現は両者の形態を包含することを意図する 。

用語ｒＢｏｃ−３ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：＃−ＰＡＭ樹脂」は、５ＥＱＩＤ　ＮＯ： ＃の保護された配列を呼び、ここでＢｏｃはＮ末端におけるアミノ基を保護し、 そしてＰＡＭ−樹脂はＣ末端を保護する。化合物は遊離カルボン酸の形態または アミドの形態を包含することができる。

ＧＲＦの類似体はｒＧＲＦＪの前に括弧内に前の置換されたアミノ酸を設定する ことによって示される：例えば、ｒ　［Ｈｉｓ　’ＳＡ　１　ａ　”］　−ＧＲ ＦＪは、ＧＲＦに相当する評価を有するポリペプチドを示し、ここでヒスチジン 残基は位置１においてチロシン残基と置換させた、そしてアラニン残基は位置１ においてグリシン残基と置換されている。ｒＧＲＦ」後の括弧内の数字は、アミ ノ酸残基の位置の番号を与えることによって完全なポリペプチドの断片を示す： 例えば、ＧＲＦ　（１−２９）は完全な配列の最初の２９のアミノ酸を有する断 片を示す。

本発明は、位置１におけるＸａａがＨｉ　ｓ、３−ＭｅＨｉ　ｓ、Ｔｙｒまたは ｄ　ｅ　ｓ　ＮＨｘであり、位置２におけるＸａａがＶａ　ｌ５Ｌｅｕ。

Ｉ　ｌｅ、ＡｌａＳＤ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−ＡｌａＳＧｌｙ、Ｎｌｅまた はＮＶａｌであり、位置８におけるＸａａがＧｉｎ、ＳｅｒまたはＴｈｒであり 、位置１５におけるＸａａがＡｌａまたはＬｅｕであり、位置２７におけるＸａ ａがＭｅｔ、ＮｌｅまたはＬｅｕであり、位置２８におけるＸａ、ａがＳｅｒま たはＡｓｎであり、位置２９におけるＸａａがアミノ酸配列（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ ○＝７）またはまたはその断片であり、ここで前記断片がカルボキシル末端から １〜１５アミノ酸残基だけ減少しており、ここでカルボキシル末端が遊離カルボ ン酸または対応するアミドであることができる、２９〜４４アミノ酸の配列（Ｓ Ｅｏｌｏ　ＮＯ：６）を有する化合物、およびその製剤学的に許容されうる酸ま たは塩基の付加塩に関する。

本発明による製剤学的組成物は、製剤学的または獣医学的に許容されうる液体ま たは固体の担体の中に分散した２９〜４４残基の長さのこのような類似体を包含 する。このような製剤学的組成物はヒトおよび獣医学の両者の臨床的薬物におい て使用することができる。そのうえ、それらは前述したように温血動物および冷 血動物の成長の促進するために使用することができるる 本発明は、ＧＲＦ分子の位置８におけるアスパラギンおよび位置１５におけるグ リシン残基は、位置１におけるチロシン残基および／または位置２におけるアラ ニン残基と一緒に、異なる適当に選択されたアミノ酸で置換して、生物学的に不 活性なＧＲＦ類似体の形成に対する抵抗性を有しかつ下垂体からの成長ホルモン の放出を刺激する増強された生物学的効能を有するＧＲＦ類似体生成することが できるという発見に基づ（。位置８におけるアスパラギンを異なる適当に選択し たアミノ酸と置換すると、ことに生理学的ｐＨ（約７．４）における、生物学的 に不活性なイソアスパラギン酸のゆっくりしたアスパラギンの脱アミド化を防止 することが発見された。さらに、位置２７におけるメチオニン残基および／また は位置２８におけるセリン残基は、また、同一方法において置換して、また、増 強さねた生物学的効能を有するＧＲＦ類似体を生成することができる。また、位 置２７におけるメチオニン残基を異なる適当に選択されたアミノ酸で置換すると 、メチオニンのメチオニンスルホキシドへの酸化が防止されることが発見された 。

種々のこの分野においてよ（知られている方法を使用して、ＧＲＦの特定の位置 における置換のために特定のアミノ酸を選択することができる。１つのこのよう な方法は、らせん性およびヒトロバシーの分析により実証されるように、生ずる ポリペプチドのアンフィリック特性およびらせん構造を増強するように置換アミ ノ酸を選択することである。生ずるペプチドはより効率よくレセプターに結合す ることができ、そしてタンパク質分解に対してより安定であることができ、これ により生物学的効能を増強することができる。らせん性およびヒトロバシーの分 析はこの分野において知られている普通の方法により実施する。

本発明によれば、ＧＲＦ分子の位置８および１５における適当に選択したアミノ 酸残基は、位置１および／または２における適当に選択したアミノ酸残基と一緒 に、生物学的活性および酵素抵抗性を増強した。ＧＲＦ分子の位置２７および／ または２８における適当に選択したアミノ酸残基の追加の置換は、８および１５ の位置ならびに１および／または２位置の置換と同時に、多置換したＧＲＦ類似 体を生成し、下垂体による成長ホルモンの放出を行う生物学的効能を増加したペ プチドを産生ずる。適当に選択した位置における置換のために選択したアミノ酸 は次のものを包含するが、これらに限定されない：ｄｅｓＮＨ，チロシン、アラ ニン、Ｄ−アラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、バリン、アスパラ ギン、セリン、ノルロイシン、ヒスチジン、ｄｅｓＮＨ１ヒスチジンおよび３− メチルヒスチジン。

さらに、２９アミノ酸のＧＲＦ分子のまたは約２９アミノ酸より大きくかつ４４ アミノ酸より小さい長さのＧＲＦ類似体の酸また（よアミド（ま前述の位置にお ける置換に加えて、増強した生物学的活性および増加した抵抗性を有する。

ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯニアの好ましい断片は、Ａｒｇ、ＳＥＱ　ＩＤＮ０ニアの最 初のアミノ酸残基およびＡｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ。

ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯニアの最初の４アミノ酸残基を包含する。

本発明の代表的な化合物は、次のものを包含する：　、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８ 　ＮＨ２、ここでＸａａ’はｄ　ｅ　ｓ　ＮＨｚＴｙｒであり、モしてＸａａ２ はＤ−Ａｌａである；ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９　ＮＨｚ、ここでＸａａ’はｄｅ ｓＮＨＪＹｒであり、モしてＸａａ”はＤ−Ａｌａである：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ：１０　ＮＨｚ、ここでＸａａ’はｄ　ｅ　ｓ　ＮＨ，Ｔｙｒであり、モしてＸ ａａ”はＤ−Ａｌａである：ＳＥＱ、ＩＤ　ＮＯ：１ｌ−ＯＨ； ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２−ＯＨ； ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３−ＯＨ； ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４−ＯＨ； ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５−ＯＨ： ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１６−ＯＨ。

ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１７−ＯＨ；ここでＸａａ”Ｄ−Ａｈａである：ＳＥＱ　 ＩＤ　ＮＯ：１８−ＯＨ： ＳＥＱ　１０　ＮＯ：１９−ＯＨ； ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２ｌ−ＯＨ； ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋２２−ＯＨ； ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２３−ＯＨ； ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２４−ＯＨ；ここでＸａａ’はｄｅｓＮＨｔＴｙｒである ：および ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋３ｌ−ＯＨ；ここでＸａａ’はｄｅｓＮＨ，Ｔｙｒであり 、モしてＸａａ”はＤ−Ａｌａである。

記載した修飾はヒト成長ホルモン放出因子からなる配列についてであるが、同様 な修飾はブタ成長ホルモン放出因子、ｐＧＲＦ：ウシ成長ホルモン放出因子、ｂ ＧＲＦ　、ヒツジ成長ホルモン放出因子、ｏＧＲＦ　；およびウマ成長ホルモン 放出因子、ｃＧＲＦに対してなすことができる。

本発明のポリペプチドは多数の手順により調製することができ、これらの手順は 次のものを包含するが、これらに限定されな０：組み換えＤＮＡ法、固相ペプチ ド合成技術、または溶液相ペプチド合成技術。

ＤＮＡ組み換えの既知の技術はを使用するとき、ＧＲＦのための構造的暗号から なるＤＮＡ配列は、プロモーター配列およびリポソーム結合部位をコードする配 列を包含する適当なコントロール要素のコントロール下に複製可能な発現ベヒク ルの中に挿入することができる。次０で、発現ベヒクルを使用して、宿主微生物 、例えば、］くクチリアを形質転換し、このバクテリアを成長させる、そしてそ れがＧＲＦを発現する条件に暴露させる。当業者は認識するように、この述べた 技術にお（Ａで、自然のアミノ酸のみを組み換え法により導入することができる 。天然に存在しないアミノ酸をＧＲＦにおいて置換する場合、組み換えＤＮＡ技 術を利用して自然アミノ酸残基を含有するペプチドを調製することができ、次い でこれを天然に存在しないアミノ酸を含有する断片とこの分野においてよく知ら れている手順によりカップリングすることができる。

ペプチドは固相合成法、例えば、メリフィールド（ＭｅｒｒｉｆｔｅＩｄＬジャ ーナル・オン・アメリカン・ケミカル・ソサイアテイ−（Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、 Ｓｏｃ、）　、８５．２１４５　（１９６３）に記載されている合成により調製 することができるが、他の同等の化学的合成法を使用することができる。固相合 成法は、ペプチドのＣ末端から、保護されたアミノ酸をベンジルエステル結合を 経てクロロメチル化樹脂またはヒドロキシメチル樹脂にカップリングするか、あ るいはアミド結合を経てベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂またはメチルベン ズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）樹脂にカップリングすることによって開始するこ とができる。樹脂は商業的に入手可能であり、そしてそれらの調製は当業者に知 られている。

新規な類似体の酸型は、固相ペプチド合成手順によりベンジルエステル樹脂また はフェニルアセトアミドメチル樹脂を固体の支持体として使用して調製すること ができる。ポリペプチドを調製用高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰ　Ｌ　Ｃ ）により精製することができ、次いで分析用ＨＰＬＣ，等電点電気泳動または高 い電圧の薄層電気泳動により均質であることが示された。アミノ酸分析を実施し て期待したアミノ酸組成を確証することができる。対応するアミドは、ベンズヒ ドリルアミンまたはメチルベンズヒドリルアミン樹脂を固相ペプチド合成のため の固体の支持体として使用することによって生成することができる。当業者は認 識するように、ＢＨＡまたはＭＢＨＡ樹脂を使用するとき、無水ＨＦで処理して ポリペプチドを固体の支持体から除去して、末端アミド基を有するポリペプチド を生成する。

Ｃ末端のアミノ酸、例えば、ＡｒｇはＮ１−アミノまたは側鎖のグアジニノ位置 において適当に選択された保護基により、Ａｒｇの場合において、それぞれ、ｔ −ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）およびｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ） により保護される。Ｂｏｃ−Ａｒｇ　（Ｔ。

５）−ＯＨをまずベンズヒドリルアミン樹脂にジシクロへキシルカーポジイミド （Ｄ　ＣＣ）を使用して２５℃において撹拌しながらカブプリングすることがで きる。Ｂｏｃ保護されたアミノ酸を樹脂の支持体にカップリングした後、α−ア ミノ保護基を塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）またはＴＦＡＩ独に より除去する。脱保護は約り℃〜室温において実施する。

α−アミノ保護基の除去後、残留するＢｏｃ保護したアミノ酸を段階的に所望の 順序であるいは代替物として付加する各アミノ酸に合成において別々にカップリ ングし、いくつかのものは固相合成法に添加するまえに活性化することができる 。適当なカップリング剤の選択はこの分野において知られている。ＤＣＣはと（ に適当である。

各保護されたアミノ酸は所望のアミノ酸順序で固相反応器に過剰に導入し、そし てカップリングはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）または塩化メチレン（ＣＨＩ ＣＩりの媒質またはそれらの混合物の中で実施することができる。不完全なカッ プリングが起こる場合、カップリングの手順を反復した後、Ｎ“−アミノ保護基 を除去し、次いで次のアミノ酸のカップリングを行う。合成の各段階におけるカ ップリング反応の成功はこの分野においてよ（知られている手順によりモニター することができる。合成をモニターする好ましい方法はニンヒドリン反応である 。カップリング反応は自動的に、例えば、ベガ（ｖｅｇａ）１０００型、２５０ 型または２９６型ペプチド合成装置またはアプライド・バイオシステムス（Ａｐ ｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）４３０Ａ型または４３１Ａペプチド合成装 置を使用して実施することができる。

樹脂からのペプチドの切断はペプチド化学においてよく知られている手順を使用 して実施することができる。スカベンジャー、例えば、ｐ−クレゾールおよびジ メチルサルファイドの存在下に０℃において１時間フッ化水素と反応を行い、次 いでｐ−クレゾールの存在下に０℃において２時間第２の反応を実施することが できる。

本発明のポリペプチドの精製はペプチド化学においてよく知られている手順によ り実施することができる。前に示したように、本発明のポリペプチドは調製用Ｈ ＰＬＣにより精製することができる：しかしながら、他の既知のクロマトグラフ ィーの手順、例えば、ゲル透過、イオン交換および分配クロマトグラフィーまた は向流分布を、また、使用することができる。

本発明のポリペプチドは成長ホルモン放出活性を有する。製剤学的組成物は、製 剤学的または獣医学的に許容されつる液体または固体の担体の中に分散した、２ ９〜４４アミノ酸の長さの類似体を包含する。このような製剤学的組成物は、ヒ トおよび獣の両者の臨床医学において治療または診断の目的で使用することがで きる。例えば、それらは成長ホルモンの産生異常から生ずる成長に関係する疾患 、例えば、下垂体機能低下の小人症および糖尿病の処置において有用である。さ らに、それらは、また、肉の生産のために飼育する動物の成長を刺激しまたは飼 料効率を増大するために、肉の品質を改良するために、乳の生産を増大するため に、そして卵の生産を刺激するために使用することができる。さらに、それらは それらは農業において、例えば、魚類および他の海の冷血動物の成長を上昇また は加速するために使用することができる。

投与すべき本発明のポリペプチドの適当な量は、個々の被検体および処置する状 態に依存して多少変化するであろう。当業者は正常な成長に関連する成長ホルモ ンの既知の循環するレベルおよびポリペプチドの成長ホルモン放出活性に基づい て適当な投与量を決定することができる。

本発明の化合物は、ＧＲＦ−（１−４４）−ＮＨ！（ＳＥＱ　ＩＤＮｏ：　１− ＮＨ＊）のそれより少なくとも２．５倍大きい、生体外の増加した効能を有する 。こうして、これらの類似体は、成長ホルモン放出因子を同一の目的で与えた場 合より、有意に低い投与量で投与することができる。この分野においてよく知ら れているように、成長に関係する疾患の処置は、成長ホルモンの産生の不足の程 度に依存して個体毎に変化する投与量を必要とするであろう。一般に、被検体の 体重に基づいて約０．０４μｇ／ｋｇ／日〜約３０．０μｇ／ｋｇ／日（皮下） の投与量の範囲を使用して、成長ホルモンの放出を刺激することができる。家畜 類の成長活性の刺激に使用する投与量は、成長ホルモンの欠損症、例えば、ヒト における下垂体性小人症の場合において、正常の成長の回復に使用する投与量よ り有意に高い（被検体の体重の１ｋｇ当たり）であろう。一般に、家畜類におい て、約０．４μｇ／ｋｇ／日〜約３０６０μｇ／ｋｇ／日（皮下）の範囲の投与 量を使用して、下垂体からの成長ホルモンの放出を刺激することができる。

こうして、本発明によれば、成長ホルモンの産生を正常の成長に関連するレベル に刺激するために十分な量の本発明の類似体を投与することからなる、成長ホル モンの不十分な産主により特徴づけられる成長に関係する疾患を処理する方法が 提供される。

成長ホルモンの正常のレベルは、個体の間でかなり変化ことかありそして、任意 の所定の個体において、循環する成長ホルモンのｌｖは１日の過程の間でかなり 変化する。大人のヒトにおいて、成長ホルモンの正常の血清レベルは約０〜約１ ０ナノグラム／ｍｌで変化すると報告された。子供において、成長ホルモンの正 常の血清レベルは約０〜約１０ナノグラム／ｍｌで変化すると報告された。

下垂体機能低下性小人症を記載した類似体で処置するために、処置は成長ホルモ ンの欠損症の診断後できるだけ早くに投与される。この処置は２〜３才程度に早 （に開始することができ、そして約１８〜１９才までそして、ある個体の場合に おいて、約２５才まで延長することができる。

また、成長ホルモンの産生を正常の成長に関連するレベルより大きいレベルに刺 激するために十分な量の本発明のＧＲＦ類似体を投与することによって、動物の 成長速度を増加する方法が提供される。

本発明のポリペプチドは、普通の製剤学的配合技術により調製することができる 、ヒトまたは獣医学の製剤学的組成物の形態で投与することができる。経口的、 静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内または鼻内の投与に適当な組成物を使用すること ができる。製剤学的使用に適当な投与の形態は約０．０１〜約０．５ｍｇの化合 物であり、これは無菌の水または生理的塩類溶液で再構成するために凍結乾燥す ることができる。組成物は約８．０以下のｐＨに維持して、類似体の安定性を維 持することができる。処置している種からの血清アルブミン（例えば、ヒトにお いてヒト血清アルブミン、雌牛の場合においてウシ血清アルブミンなど）は、ま た、他の既知の製剤学的アジュバントと一緒に存在することができる。

本発明のポリペプチドは、他の性質の間で、酵素（ジペプチジルペプチダーゼ− ＶＩ）の分解に対する増強された安定性および増強された生物学的活性を有する ＧＲＦを記載する。

次の実施例によって、本発明をさらに説明する。これらの実施例は本発明を限定 しない。特記しない限り、すべての部および百分率は重量により、そしてすべて の温度はセ氏である。

実施例において、特記しない限り、Ｌ−立体配置の光学的に活性な保護されたア ミノ酸を使用する。保護されたアミノ酸はシリカゲルＧのプレートの薄層クロマ トグラフィーにより検査し、そして塩素−ＴＤＭで展開した。アミノ酸分析はウ ォーターズ（Ｗａ　ｔ　ｅ　ｒ　ｓ）アミノ酸分析装置で実施した。

実施例において次の略号を使用して、種々の保護基および試薬を示す。

Ｂｏｃ　＝ｔ−ブチルオキシカルボニルＴｏｓ、　＝ｐ−）−ルエンスルホニル ＤＣＣ＝ジシクロへキシルカーポジイミドＢＨＡ　＝ベンズヒドリルアミン ＤＭＦ　＝ジメチルホルムアミド ＣＨ，ＣＩ、　＝塩化メチレン Ｂｚｌ　＝ベンジル ｃＨｅｘ　＝シクロヘキシル ２Ｃｚ　＝２−クロロベジルオキシ力ルボニルＨＯＢｔ　＝ヒドロキシベンゾト リアゾールＴＤＭ　＝４．４°−テトラメチルジアミノジフェニルメタン Ｄｃｂ　＝２．６−ジクロロベンジル ＢＯＰ　＝ベンゾトリアゾルー１−イルオキシトリ（ジメチルアミノ）ホスホニ ウムへキサフルオロホスフェート ＰＡＭ　＝フェニルアセトアミドメチル本発明の類似体は、アミノ酸の順次のカ ップリングにより、マニュアルのモードによるか、あるいはであることができる 自動化固相ペプチド合成装置（例えば、ベガ（Ｖｅｇａ）１０００型、２５０型 または２９６型ペプチド合成装置またはアプライド・バイオシステムス（Ａｐｐ ｌｆｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）４３０Ａ型または４３１Ａペプチド合成装置 ）Ｎ“−Ｂｏｃ−アミノ酸を合成において使用した。

３官能性アミノ酸を、Ｎ’−Ｂｏｃ−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）−ＯＨ，Ｎ’−Ｂｏｃ −Ｈｉ　ｓ　（Ｔｏｓ）−ＯＨ，Ｎ’−Ｂｏａ−Ｌｙｓ　（２Ｃｚ）−ＯＨ，Ｎ ’−Ｂｏｃ−３ｅｒ　（Ｂｚ　Ｉ）−ＯＨＳＮ’−Ｂｏａ−Ｔｈｒ（Ｂｚ　１） −ＯＨＳＮ’−Ｂｏｃ−Ａｓｐ　（ｃＨｅｘ）−ＯＨおよびＮ１−Ｂｏｃ−Ｔｙ ｒ　（Ｄｃｂ）−ＯＨとして保護した。特記しない限り、ＧＲＦ化合物の遊離カ ルボン酸の形態を下の実施例において形成した。

実施例は、特記しない限り、前述したように実施した。温度はセ氏である。

実施例１ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２６−ＯＨの調製Ｂｏ　ｃ−Ｇ　Ｉ　ｙ−ＰＡＭ−樹脂（ Ｂａｃｈｅｍ、０．フロミリモル／ｇ）をベガ（Ｖｅｇ）２９６ペプチド合成装 置の反応器の中に供給し、そして固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）をＤＣＣ手順に より合計９サイクルについて実施して、保護されたＢｏｃ−ＳＥｏ　１０　ＮＯ ：２５−ＰＡＭ−樹脂、［Ｂｏｃ−［Ｌｅｕ”、Ａｓｎ”］　−ＧＲＦ　（２３ −３２）−ＰＡＭ−樹脂）を生成した。保護されたＢｏａ−ＳＥＱ　ＩＤＮｏ： 　２５−ＰＡＭ−樹脂のＬｏｇのアリコートを５ｐｐｓの１４の追加のサイクル にかけて、１３．８ｇの保護されたＢｏｃ−８ＥＱ　ＩＤＮｏ：　２６−ＰＡＭ −樹脂、（Ｂｏｃ−［ＡＩａ”、Ｌｅｕ”、Ａｓｎ”］　−ＧＲＦ　（９−３２ ）−ＰＡＭ−ｔＭ脂）を生成した。保護されたＢｏｃ−３ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２ ６−ＰＡＭ−樹脂のアリコートを無水ＨＦ（１０％のプロパンチオールを含有す る）で２時間Ｏ℃において処理した。ＨＦを０℃において蒸発させ（高い真空； ＣａＯのトラップ）、そして粗製のペプチド樹脂混合物をＥｔＯＡｃで粉砕し、 ＴＦＡで抽出し、そして濾過した。濾液を蒸発乾固し、残留物を無水エーテルで 粉砕し、そして乾燥すると、１００ｍｇの粗製化合物ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：２６ −ＯＨが得られた。

粗製物質（１００ｍｇ）を２０ｍ１の０．　１％のＴＦＡ／ＨｍＯ中に溶解し、 濾過し、そしてブレブーバク（ｐｒｅｐ−ｐａｋ）ＹＭＣ−ベイシック（Ｂａｓ 　１ｃ）ＨＰＬＣカラム（４，８Ｘ３０ｃｍ）上に負荷した。カラムを（Ａ）Ｈ ２Ｏ（０，１％のＴＦＡ）　（Ｂ）ＣＨｓＣＮ（０，１％のＴＦＡ）で２０％の （Ｂ）から４５％の（Ｂ）の直線の勾配で９０分で５０ｍ１／分の流速において 溶離した。分画を集め（０゜５分／分画）そしてアリコートを分析用ＨＰＬＣ系 で分析した：　（Ａ）０．１モルのＮａＣｌＯ４（１）Ｈ２，５）−（Ｂ）ＣＨ ｓＣＮ：　４０％の（Ｂ）〜５５％の（Ｂ）、２０分、１ｍｌ／分、０．２ＡＵ ＦＳ、２０５ｎｍ、カラム：リチロソープ（Ｌｉ　ｃｈｒｏｓｏｒｂ）ＲＰ−８ ，５ミクロン。産生物は分画１８４−１８５に現れ、そして−緒にし、蒸発サセ 、ソシテ凍結乾燥すると、１３ｍｇのＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２６−ＯＨが得られ た。

産生物は分析用ＨＰＬＣにより均質であることが示され、そして加水分解後期待 したアミノ酸組成を与えた［加水分解：１％のチオグリコール酸（ＴＧＡ）を含 有する６ＮのＨＣＩ；１５０℃：１時間］　：５ｅｒ１．９５　（２）、Ｔｙｒ ｌ、０５　（１）、［６Ｎ　ＨＣＩ　（１％ＴＧＡ）　、１１０℃；７２時間） ］　：Ａｓｐ２．０４　（２）、Ｇ１ｕ４゜１１　（４）　、Ｇｌｙｌ、２３（ １）、Ａｌａ２．０２（２）、Ｖａｌｏ。

９７　（１）　、Ｉ　１ｅ０．９８　（１）　、Ｌｅｕ５．０３　（５）　、Ｌ ｙｓ２゜０２　（２）　、Ａｒｇ２．８２　（３）。

構造の確証はＦＡＢ質量スペクトルにより提供された。計算値＝　（Ｍ＋Ｈ）” ２８００．３゜実測値：２８００．４゜実施例２ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４−ＯＨの調製保護されたＢｏＣ−５ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ：２６−ＰＡＭ−樹脂（実施例１から）の１ｇの部分を、ＢＯＰ手順を使用して ５ｐｐｓの追加のサイクルにかけて、１．５ｇの保護されたＢｏｃ−ＳＥＱ　Ｉ Ｄ　Ｎｏ：１４−ＰＡＭ−樹脂が得られた。

保護されたＢｏｃ−３ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４−ＰＡＭ−樹脂を無水ＨＦｄｅ切 断して（実施例１におけるように）７８１ｇの粗製のペプチドが得られ、これを ２０ｍ１の０．　１％のＴＦＡ／ＨｘＯ中に溶解し、濾過し、そしてプレブーバ ク（Ｐ　ｒ　ｅ　ｐ−Ｐ　ａ　ｋ）　ＹＭＣ−ペイシック（Ｂａｓｊｃ）カラム （４，８Ｘ３０ｃｍ）上に負荷した。カラムを（Ａ）Ｈ，０（０，１％のＴＦＡ ）−（Ｂ）ＣＨｓＣＮ　（０，１％のＴＦＡ）で２０％の（Ｂ）から４５％の（ Ｂ）の直線の勾配で９０分で５０ｍ１／分の流速において溶離した。分画を１５ 分毎に集めそして分析用ＨＰＬＣ系で分析し、そして半純粋の産生物を一緒にし 、蒸発させ、そして凍結乾燥した。

半純粋の物質を０．１％のＴＦＡ／ＨｚＯ中に溶解し、そして２．２Ｘ２５ｃｍ のヌクレオシル（Ｎｕｃ　Ｉ　ｅｏｓ　ｉ　Ｉ）Ｃ−１８カラム上に負荷した。

カラムを（Ａ）　ＨｚＯ（０，１％のＴＦＡ）−（Ｂ）ＣＨ，ＣＮ（０，１％Ｔ ＦＡ）で２５％の（Ｂ）〜４０％の（Ｂ）　、９０分、１５ｍ１７分の流速で溶 離した。分画を１分毎に集め、そしてアリコートを分析用ＨＰＬＣ系により分析 した。産生物は分画４３〜５３の中に現れ、これらを−緒にし、蒸発させ、そし て凍結乾燥すると、７５ｍｇの純粋なＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４−ＯＨが得られ た。

産生物は分析用ＨＰＬＣにより均質であることが示され、そして加水分解後期待 したアミノ酸組成を与えた（６Ｎ　ＨＣｌ−１％ＴＧＡ　：　１５０℃：１時間 ）：ＴｈｒＯ，９９（１）　、５ｅｔ１．９３　（２）、Ｔｙｒｌ、０８　（１ ）。（５Ｎ　ＭＣｌ−１％　ＴＧＡ；１１０℃ニア２時間）：Ａｓｐ３．０７　 （３）　、ＧＩｕ５．０４　（５）　、Ｇｌｙｌ、１１（１，０）　、Ａｌａ３ ．１０　（３）　、Ｖａ　１１．９２　（２）、１１ｅ１．８７　（２）　、Ｌ ｅｕ４．９０　（５）　、Ｐｈｅｏ、９８　（１）　、Ｈｉｓｌ、００　（１） 　、Ｌｙｓ２．ＯＯ（２）　、Ａｒｇ２．９９、（３）。

構造の確証はＦＡＢ質量スペクトルにより提供された。計算値：　（Ｍ＋Ｈ）′ ″３７１２．３゜実測値：３７１２．５゜実施例３ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２−ＯＨの調製保護されたＢｏｃ−８ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ：２６−ＰＡＭ−樹脂（実施例１から）の２．２ｇの部分を、実施例２における ように、５ｐｐｓの６サイクルにかけ、２．１ｇの保護された［Ｂｏｃ−８ＥＱ 　ＩＤ　ＮＯ：２７−ＰＡＭ−樹脂、（Ｂｏｃ−［Ｔｈｒ”、Ａｌａ”５Ｌｅｕ ”、Ａｓｎ”］　−ＧＲＦ　（３−３２）−ＰＡＭ−樹脂）が得られた。保護さ れたＢｏａ−３ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２７−ＰＡＭ−樹脂を５ｐｐｓの追加のサイ クルにかけると、Ｂｏａ−３ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２−ＰＡＭ−樹脂が得られた 。アリコート（０，６ｇ）を無水ＨＦで切断すると、３２０ｍｇの粗製のペプチ ドが得られた。ＨＰＬＣ精製（実施例２におけるように）により、２０ｍｇの純 粋なＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２−ＯＨが得られた。

産生物は分析用ＨＰＬＣにより均質であることが示され、そして加水分解後期待 したアミノ酸組成を与えた（６Ｎ　ＨＣｌ−１％ＴＧＡ　：　１１０℃：２４時 間）：Ａｓｐ３．０３　（３）　、Ｔｈｒｌ、９２　（２≧、５ｅｔ１．９１　 （２）　、ＧＩｕ４．３０　（４）　、Ｇｌｙｌ、０１　（１）　、Ａｌａ３． ０３　（３）　、Ｔｙｒｌ、００　（１）　、Ｈｉ　ｓｏ、９８　（１）　、Ｌ ｙｓｌ、９７　（２）Ａｒｇ２．８８　（３）。（６Ｎ　ＨＣｌ−１％ＴＧＡ： １１０℃ニア２時間）：Ｖａｌｌ、９８　（２）、Ｉ　１　ｅ　１．９５　（２ ）、Ｌｅｕ５．０６　（５）　、Ｐｈｅｌ、００　（１）。

構造の確証はＦＡＢ質量スペクトルにより提供された。計算値：　（Ｍ＋Ｈ）’ ３６８５．２゜実測値：３６８５．５゜実施例４ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１６−ＯＨの調製保護されたＢｏａ−ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ：２６−ＰＡＭ−樹脂（実施例１から）の２．２ｇの部分を、実施例２における ように、５ｐｐｓの６サイクルにかけ、２．１ｇの保護された［Ｂｏｃ−３ＥＱ 　ＩＤ　ＮＯ：　２８−ＰＡＭ−樹脂、（Ｂｏａ−［Ｓｅｒ”、Ａｌａ”、Ｌｅ ｕ！７、Ａｓｎ”］　−ＧＲＦ　（３−３２）−ＰＡＭ−樹脂）が得られた。保 護されたＢｏｃ−５ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋２８−ＰＡＭ−樹脂を５ｐｐｓの追加の サイクルにかけ、生ずる保護されたペプチド樹脂（０，９４ｇ）をＨＦで切断す ると、０．５３ｇの粗製のペプチドが得られ、これを実施例２におけるように精 製した。産生物は分析用ＨＰＬＣにより均質であることが示され、そして加水分 解後期待したアミノ酸組成を与えた（６Ｎ　ＨＣｌ−１％ＴＧＡ；１１０℃：２ ４時間）：Ａｓｐ２．０８（２）、ＴｈｒＯ，，９８（１）　、５ｅｔ３．７８ 　（４）　、Ｇｌ　ｕ４．３９　（４）、Ｇｌｙｌ、０９　（１）　、Ａｌａ３ ．１３　（３）　、Ｖａｌ　１．８０　（２）、！　１ｅ１．８１　（２）　、 Ｌｅｕ５．０８　（５）　、Ｔｖｒｌ、０２　（１）、Ｐｈｅｏ、９１　（１） 　、Ｈｆ　ｓＯ，９９（１）　、Ｌｙｓ２．００　（２）、Ａｒｇ２．９４　（ ３）。

構造の確証はＦＡＢ質量スペクトルにより提供された。計算値：　（Ｍ＋Ｈ）″ ３６７１．２゜実測値：３６７１．７゜実施例５ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２９−ＯＨの調製Ｂｏｃ−Ｇｌ　ｙ−ＰＡＭ−樹脂（１０ ｇ；０．フロミリモルｇニア。

６ミリモル）を反応器の中に入れ、モして５ｐｐｓの２３サイクルをマニュアル のモードで実施すると、１７．２ｇの保護されたＢｏａ−３ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： ２９−ＰＡＭ−樹脂、１Ｂｏｃ−［Ａｌ　ａ”５Ｌｅｕ！７］　−ＧＲＦ　（９ −３２）−ＰＡＭ−樹脂）が得られた。２００ｍｇのアリコートをＨＦで切断し 、ヌクレオシル（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ）Ｃ−１８のＨＰＬＣ，１０ミクロンのカ ラム（２，２Ｘ２５ｃｍ）により精製すると、２．５ｍｇｏ）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ Ｏ：２９−ＯＨが得られた。

産生物は分析用ＨＰＬＣにより均質であることが示され、そして加水分解後期待 したアミノ酸組成を与えた（６Ｎ　ＨＣｌ−１％ＴＧＡ　；　１５０℃：１時間 ）：５ｅｒ３．００　（３）　、Ｔｙｒｌ、００　（１）。（６ＮＨＣＩ−１％ 　ＴＧＡ；１１０℃；２４時間）＋Ａｓｐ１．１０　（１）、Ｇｌ　ｕ４．１０ 　（１）　、Ｇｌｙｌ、０３　（１）　、Ａｌａｌ、８７　（２）、Ｉ　１　ｅ ｏ、９３　（１）　、Ｌｅｕ４．８１　（５）　、Ｌｙｓ２．０３　（２）、Ａ ｒｇ３．０５　（３）。（６Ｎ　ＨＣｌ−１％ＴＧＡ；　１１０℃ニア２時間） ：Ａｌａ２．０５　（２）　、Ｖａ　１０．９５　（１）。

構造の確証はＦＡＢ質量スペクトルにより提供された。計算値：　（Ｍ＋Ｈ）“ ２７７３．３゜実測値：２７７３．３゜実施例６ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３−ＯＨの調製保護されたＢｏａ−３ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ：２９−ＰＡＭ−樹脂（実施例５から）の１．５ｇの部分を５ｐｐｓみら８の追 加のサイクルにがけて、保護されたＢｏｃ’−５ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３−ＰＡ Ｍ−樹脂が得られた。保護されたポリペプチド樹脂を無水ＨＦで切断すると、０ ．８３ｇの粗製の物質が得られ、これをＨＰＬＣで精製した（実施例２における ように）。収量：１７ｍｇｏ産生物は分析用ＨＰＬＣにより本質的に均質である ことが示され、そして加水分解後期待したアミノ酸組成を与えた（６Ｎ　ＨＣｌ −１％ＴＧＡ：１１０℃：２４時間）：Ｔｈｒｌ。

０４　（１）　、５ｅｒ２．７６　（３）　、ＴｙｒＯ，９６（１）、（６Ｎ　 ＨＣｌ−１％　ＴＧＡ；１１０℃ニア２時間）：Ａｓｐｌ、９２　（２）、Ｇｌ ｕ４．８９　（５）　、Ｇｌｙｌ、ＯＯ（１）　、Ａｌａ２．８８　（３）、Ｖ ａ　１１．８２　（２）、Ｉ　１ｅ１．８２　（２）、Ｌｅｕ４．９２　（５） 、Ｐｈｅｏ、９２　（１）　、Ｈｉ　ｓｏ、９６　（１）　、Ｌｙｓｌ、９７　 （２）、Ａｒｇ２．７３　（３）。

構造の確証はＦＡＢ質量スペクトルにより提供された。計算値：　（Ｍ十Ｈ）’ ３６８５．３゜実測値：３６８５．７゜実施例７ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２３−ＯＨの調製！護されたＢｏｃ−８ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ：３０のＰＡＭ−樹脂、（Ｂｏｃ−［ＧＩｎ”５Ａｌａ”、Ｌｅｕ”ｌ　−ＧＲ Ｆ　（３−３２）−ＰＡＭ−樹脂）　（実施例６からの中間体）を５ｐｐｓの２ つの追加のサイクルにかけ、そして生ずる保護されたポリペプチドＢｏａ−３Ｅ Ｑ　ＩＤＮ０：　２３−ＰＡＭ−樹脂（０，４６ｇ）をＨＦで切断すると、２８ ４ｍｇの粗製のＢｏｃ−３ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２３−ＯＨが得られ、これをＨＰ ＬＣにより精製する（実施例２におけるように）と、２８ｍｇの産生物が得られ 、これは分析用ＨＰＬＣにより本質的に均質であることが示され、そして加水分 解後期待したアミノ酸組成を与えた（６ＮＨＣＩ−１％ＴＧＡ；１５０℃：１時 間）：Ｔｈｒｌ、ＯＯ（１）　、５ｅｒ２．８９　（３）　、Ｔｙｒｌ、１０　 （１）。　（６Ｎ　ＨＣｌ−１％　ＴＧＡ；１１０℃；７２時間）：Ａｓｐｌ、 ９６　（２）　、Ｃ，Ｉｕ５．１９（５）　、ＧＩｙｌ、０５　（１）　、Ａｌ ａ３．９１　（４）　、Ｖａ　１１．０２（１）　、Ｉ　Ｉｅｌ、８８　（２） 　、Ｌｅｕ５．０２　（５）　、Ｐｈｅｏ、８９（１）　、１（ｉｓｏ、９０　 （１）　、Ｌｙｓ２．０７　（２）　、Ａｒｇ３．１０（３）。

構造の確証はＦＡＢ質量スペクトルにより提供された。計算値：　（Ｍ＋Ｈ）” ３６５７．２゜実測値：　３６５７．２゜実施例８ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋１７−ＯＨ，ここでＸａａ”はＤ−Ａｌａである、の調製 保護されたＢｏｃ−３ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３０−ＰＡＭ−樹脂（実施例６からの 中間体）の０．５ｇの部分を５ｐｐｓの２つの追加のサイクルにかけると、０． ４６ｇの保護されたＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１７−ＰＡＭ−樹脂、ここでＸａａ” はＤ−Ａｌａである、が得られた。この保護されたポリペプチド樹脂（０，４６ ｇ）をＨＦで切断すると、２７０ｍｇの粗製（７）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１７− ＯＨ，ここでＸａａ”はＤ−Ａｌａである、が得られ、これをＨＰＬＣにより精 製する（実施ｆｐＩ２におけるように）と、３０ｍｇの産生物が得られ、これは 分析用ＨＰＬＣにより本質的に均質であることが示され、そして加水分解後期待 したアミノ酸組成を与えた（６Ｎ　ＨＣｌ−１％ＴＧＡ：１５０℃：１時間）： Ｔｈｒｏ、９７　（１）　、５ｅｒ２．９６　（３）　、Ｔｙｒｌ、０７　（１ ）。

（６Ｎ　ＨＣｌ−１％　ＴＧＡ；１１０℃ニア２時間）：Ａｓｐ２．００　（２ ）　、ＧＩｕ５．３７　（５）　、Ｇｌｙｌ、０５　（１）　、Ａｌａ３．７７ 　（４）　、ＶａｌＯ，９５（１）　、Ｉ　Ｉｅｌ、８８　（２）、Ｌｅｕ５． １４　（５）、Ｐｈｅｏ、８５　（１）　、Ｈｔ　ｓＯ，９１（１）　、Ｌｙｓ ｌ、９６　（２）　、Ａｒｇ３．１２　（３）。

構造の確証はＦＡＢ質量スペクトルにより提供された。計算値＝　（Ｍ＋Ｈ）″ ３６５７．２゜実測値：３６５７．５゜実施例９ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３ｌ−ＯＨ，ここでＸａａ’はｄ　ｅ　Ｓ　ＮＨｚＴ　７ 　ｒであり、モしてＸａａ”はＤ−Ａｌａである、の調製保護されたＢｏａ−３ ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３０−ＰＡＭ−樹脂（実施例６からの中間体）の０．５ｇの 部分を５ｐｐｓの２つの追加のサイクルにかけると、０．４４ｇの保護されたＳ ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３１−ＰＡＭ−樹脂、ここでＸａａ’はｄｅｓＮＨ，Ｔｙｒ であり、モしてＸａａ２はＤ−Ａｌａである、が得られた。この保護されたポリ ペプチド樹脂をＨＦで切断すると、２５０ｍｇの粗製の産生物が得られ、これを 実施例１におけるように精製した。精製されたＳＥＱ　１０　ＮＯ：３ｌ−ＯＨ ，ここでＸａａ’はｄｅｓＮＨ，Ｔｙｒであり、モしてＸａａ’はＤ−Ａｌａで ある、は分析用ＨＰＬＣにより本質的に均質であることが示され、そして加水分 解後期待したアミノ酸組成を与えた（６Ｎ　ＭＣｌ−１％ＴＧＡ；１５０℃；１ 時間）：Ｔｈｒｌ、０４　（１）、５ｅｔ２゜８７　（３）　、Ｔｙｒｌ、１０ 　（１）。（６Ｎ　ＭＣｌ−１％　ＴＧＡ。

１１０℃：２４時間）：Ａｓｐｌ、９６、Ｇ１ｕ５．１９　（５）　、Ａｌａ３ ．９９　（４）　、Ｖａ　１０．９３　（１）　、Ｌｅｕ４．９１　（５）　、 Ｌｙｓ２．０１　（２）　、Ａｒｇ３．１０　（３）。（６Ｎ　ＨＣｌ−１％Ｔ ＧＡ：１１０℃ニア２時間）：Ｇｌｙｌ、１１　（１）、Ｉ　Ｉ　ｅ　１−９３ 　（２）、ＰｈｅＯ，９６（１）。

構造の確証はＦＡＢ質量スペクトルにより提供された。計算値＝　（Ｍ＋Ｈ）” ３６６８．２゜実測鎖：３６６８．０゜実施例１０ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２４−ＯＨ，ここでＸａａ’はｄｅｓＮＨｔＴｙｒである 、の調製 保護されたＢｏｃ−８ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋３０−ＰＡＭ−樹脂（実施例６からの 中間体）の１５ｇの部分を５ｐｐｓの２つの追加のサイクルにかけると、０．４ ３ｇの保護されたＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２１−ＰＡＭ−樹脂、ここでＸａａ’は ｄｅｓＮＨＩＴｙｒである、が得られた。

この保護されたポリペプチド樹脂をＨＦで切断すると、２２４ｍｇの粗製の産生 物が得られ、これをＨＰＬＣにより精製した。産生物、５ＥＱＩＤ　ＮＯ：２４ −ＯＨ，ここでＸａａ’はｄｅｓＮＨ，Ｔｙｒである（収量＋　２５ｍｇ）　、 は分析用ＨＰＬＣにより本質的に均質であることが示され、そして加水分解後期 待したアミノ酸組成を与えた（６Ｎ　ＨＣｌ−１％ＴＧＡ；１５０℃：１時間） ：Ｔｈｒｌ、ＯＯ（１）　、５ｅｔ２．９３　（３）　、Ｔｙｒｌ、０７　（１ ）。（６Ｎ　ＨＣｌ−１％　ＴＧＡ；１１０℃：２４時間）＋Ａｓｐ２．００　 （２）　、Ｇ１ｕ５．１８　（５）、ＧＩｙｌ、０７　（１）　、ＡＩａ３．０ ８　（３）　、Ｖａ　１１．９５　（２）、Ｉ　］　ｅ１．８３　（２）　、Ｌ ｅｕ５．０１　（５）　、ＰｈｅＯ，８４（１）、Ｌｙｓ２．０３　（２）　、 Ａｒｇ３．００　（３）。

構造の確証はＦＡＢ質量スペクトルにより提供された。計算値＝　（Ｍ＋Ｈ）“ ３６９５．３゜実測値：３６９５．９゜実施例１１ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１９−ＯＨの調製保護されたＢｏａ−３ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ 二３０−ＰＡＭ−樹脂（実施例６からの中間体）の０．５ｇの部分を５ｐｐｓの ２つの追加のサイクルにかけた。ペプチド樹脂（０，４８ｇ＞をＨＦで処理し、 そして粗製のペプチドをＨＰＬＣにより精製すると、３３ｍｇのＳＥＱ　ＩＤ　 Ｎ０＝１９が得られた。

産生物は分析用ＨＰＬＣにより本質的に均質であることが示され、そして加水分 解後期待したアミノ酸組成を与えた（６Ｎ　ＨＣｌ−１％ＴＧＡ；１５０℃；１ 時Ｍ）：ＴｈｒＯ，９９（１）　、５ｅｔ２．９６　（３）、Ｔｙｒ２．０４　 （２）。（６Ｎ　ＨＣｌ−１％　ＴＧＡ；１１０℃；２４時間）：Ａｓｐ２．０ ７　（２）　、Ｇｌｕ５．１０　（５）　、ＧＩｙｌ、１１　（ＩＬ　ＡＩａ３ ．１０　（３）　、Ｖａｌｌ、７７　（２）、ｌ１ｅ１．７８　（２）　、Ｌｅ ｕ５．０３　（５）　、ＰｈｅＯ，９１（１）　、Ｌｙｓ２．０９　（２）　、 Ａｒｇ３．０１　（３）。

構造の確証はＦＡＢ質量スペクトルにより提供された。計算値＝　（Ｍ＋Ｈ）″ ３７１０．３゜実測値＋３７１０．６゜実施例１２ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１１−ＯＨの調製保護されたＢｏｃ−５ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ：２９−ＰＡＭ−樹脂（実施例５から）の２．０ｇの部分を５ｐｐｓの追加の６ サイクルにかけると、２ｇｃ７）保護されたＢｏｃ−３ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３２ −ＰＡＭ−樹脂、［Ｂｏｃ−［Ｔｈｒ’、ＡＩａ１５、Ｌｅｕ”］　−ＧＲＦ　 （３−３２）−ＰＡＭ−樹脂１が得られた。０．９３ｇの部分を追加の２サイク ルにかけ、そして保護されたポリペプチド樹脂をＨＦで切断し、そしてＨＰＬ。

Ｃにより精゛すると、２９ｍｇのＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１ｌ−ＯＨが得られた。

産生物は分析用ＨＰＬＣにより本質的に均質であることが示され、そして加水分 解後期待したアミノ酸組成を与えた（６Ｎ　ＭＣｌ−１％ＴＧＡ：１１０℃：２ ４時間）：Ａｓｐ２．０５　（２）　、Ｔｈｒｌ、８５（２）　、５ｅｒ２．８ ０　（３）　、Ｇ１ｕ４．４．０　（４）　、ＧＩｙｌ、０９（１）　、ＡＩａ ３．０１　（３）　、Ｌｅｕ５．０５　（５）　、Ｔｙｒｏ、９８（１）　、Ｈ ｉ　ｓＯ，９５（１）　、Ｌｙｓｌ、９９　（２）　、Ａｒｇ２．９０（３）。

（６Ｎ　ＨＣＩ；１１０℃ニア２時Ｍ）：Ｖａ　１２．００　（２）、１１ｅ２ ．００　（２）　、Ｐｈｅｌ、００　（１）。

構造の確証はＦＡＢ質量スペクトルにより提供された。計算値：　（Ｍ＋Ｈ）′ ″３６７０．２゜実測値：３６７０．７゜実施例１３ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５−ＯＨの調製保護されたＢｏａ−３ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ：２９−ＰＡＭ−樹脂（実施例５から）の２．０ｇの部分を５ｐｐｓの追加の９ サイクルにかけると、２ｇの保護されたＢｏＣ−５ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５−Ｐ ＡＭ−樹脂が得られた。１ｇの部分をＨＦで切断し、モしてＨＰＬＣにより精製 すると、１０％ｍｇのＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１ｌ−ＯＨが得られた。

産生物は分析用ＨＰＬＣにより本質的に均質であることが示され、そして加水分 解後期待したアミノ酸組成を与えた（６Ｎ　ＨＣｌ−１％ＴＧＡ：１１０℃：２ ４時間）＋Ａｓｐ３．０９　（３）　、Ｔｈｒｏ、９８　（１）　、５ｅｔ２． ８７　（３）　、Ｇ１ｕ４．４５　（４）、ＧＩｙｌ、０９　（１）、ＡＩａ３ ．０７　（３）　、Ｌｅｕ５．０４　（５）　、Ｔｙｒｌ、０２　（１）、Ｈｉ ｓｏ、９８　（１）　、Ｌｙｓ２．０１　（２）　、Ａｒｇ３．０２　（３）。

（６Ｎ　ＨＣｌ−１％　ＴＧＡ；１１０℃ニア２時間）：Ｖａｌｌ、９９　（２ ）　、Ｉ　Ｉｅｌ、９４　（２）　、Ｐｈｅｌ、ＯＯ（１）。

構造の確証はＦＡＢ質量スペクトルにより提供された。計算値＝　（Ｍ＋Ｈ）” ３６４４．２゜実測値：３６４４．５゜実施例１４ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８　ＮＨ２、ここでＸａ　ａ’はｄｅｓＮＨ，Ｔｙｒであ り、モしてＸａａ”はＤ−Ａｌａである、の調製Ｂｏａ−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）− ベンズヒドリルアミン樹脂（Ｌｏｇ、０゜４５ミリモル／ｇ）を、ＲＤ−２０震 盪器ヘツドを装備したＳ−５００型震盪器にクランプした２５０ｍ１の反応器の 中に供給した。固相ペプチド合成は、通常、合計の２０サイクルの間Ｄｃｃ／Ｈ ＯＢｔおよびＢＯＰ手順により実施して、２０．５ｇのＢｏａ−３ＥＱ　ＩＤ　 Ｎｏ：３３−ＢＨＡ−樹脂（Ｂｏｃ−［ＡＩａ”］　−ＧＲＦ　（９−２９）− ＢＨＡ−樹脂）を得た。ペプチド−樹脂の１．５ｇの部分を取り出し、反応器の 中に供給し、モして固相合成を追加の８サイクルの間続けて、保護されたＢｏｃ −３ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８−ＢＨＡ−樹脂、ここでＸａａｌはｄｅｓＮＨ，Ｔｙ ｒであり、そしてＸａａ”はＤ−Ａｌａである（１．４ｇ）を得た。保護された ポリペプチド樹脂の一部分（８００ｍｇ）を無水の液体ＨＦでタム（Ｔ　ａ　ｍ ）ら［テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、）、２ ３．２９３９−２９４２　（１９８２）］の変更した方法：ｐ−クレゾール（１ ０％）ニジメチルサルファイド（６５％）：ＨＦ（２５％）［合計の体積：１０ ｍ１ｌを使用して０℃において１時間処理し、そして蒸発させた。次いで、ｐ− クレゾール（１０％）：ＨＦ（９０％）［合計の体積：１０ｍ１ｌと０℃におい て２時間さらに反応させた。ＨＦを０℃において蒸発させ（高い真空、ＣａＯの トラップ）そして粗製のペプチドおよび樹脂の混合物をＥｔＯＡｃ、エーテルで 粉砕し、モしてＴＦＡで抽出し、濾過し、そして乾燥すると、４００ｍｇの粗製 のペプチドが得られた。

この粗製の物質を２０ｍ１の０．　１％のＴＦＡ／ＨｔＯ中に溶解し、濾過しく ０．４５μ、ＨＡ型ミリポア・フィルター）そしてブレブーバク（Ｐｒｅｐ−Ｐ ａｋ）ＹＭＣ−ペイシック（ｂａｓｉｃ）カラム（４゜８Ｘ３０ｃｍ）上に負荷 した。このカラムを（Ａ）Ｈ，Ｏ（０，１％の”ｒＦＡ）−（Ｂ）ＣＨｓＣＮ　 （０，１％のＴＦＡ）で２０％の（Ｂ）から５０％の（Ｂ）への直線の勾配で９ ０分で５０ｍ１／分の流速で溶離した。分画を集め（０，５分／分画）そしてア リコートを分析用ＨＰＬＣ系により分析した：　（Ａ）０．１モルのＮａＣｌ０ ４（＋）Ｈ２，５）（Ｂ）ＣＨｓＣＮ；　３５％の（Ｂ）−５５％の（Ｂ）　、 ２０ｍｎ、１ｍｌ／分。カラム：リクロソーブ（Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ）ＲＰ− ８（５μ）、産生物は分画７８〜８０の中に現れ、これらを−緒にし、蒸発させ 、そして凍結乾燥すると、１０ｍｇの純粋なＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ。

：　８−ＮＨ，、ここでＸａａ’はｄｅｓＮＨ２Ｔｙｒであり、モしてＸａａ！ はＤ−Ａｌａである、が得られた。分画７３〜７７および８１８４を、また、プ ールし、蒸発させさせ、そして凍結乾燥すると、３９ｍｇの半純粋な産生物が得 られた。

精製した産生物は分析用ＨＰＬＣにより本貫的に均質であることが示され、そし て期待したアミノ酸組成を与えた（加水分解＝６Ｎ塩酸、１１０℃、２４時間） ：Ａｓｐｌ、９０　（２）　、Ｔｈｒｌ、７３　（２）　、５ｅｒ３．０５　（ ３）　、Ｇ１ｕ２．２０　（２）　、Ａｌａ４．０６　（４）　、Ｖａｌｏ、８ ０　（１）、Ｍｅｔｌ、０２　（１）、ｌ１ｅ１．７７（２）、Ｌｅｕ４．２５ 　（４）　、Ｔｙｒｏ、９４　（１）　、Ｐｈｅｏ、８３　（１）　、Ｌｙｓｌ 、８９　（２）、Ａｒｇ３．２１　（３）。

構造の確証はＦＡＢ質量スペクトルにより提供された。計算値：　（Ｍ十Ｈ）“ ３３４３．９゜実測値：３３４３．１゜実施例１５ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９　ＮＨｚ、ここでＸａａ’はｄｅｓＮＨ，Ｔｙｒであり 、そしてＸａａ”はＤ−Ａｌａである、の調製保護されたＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： ３３−ＢＨＡ−樹脂（実施例１４からの中間体）の１．５ｇの部分を固相合成法 の８サイクルにかけると、１．４ｇの保護されたＢｏｃ−３ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： ９−ＢＨＡ−樹脂、ここでＸａａ’はｄｅｓＮＨ，Ｔｙｒであり、モしてＸａａ ”はＤ−Ａｌａである、が得られた。０．９ｇの部分を無水ＨＦ（実施例１４に おけるように）で切断すると、４９５ｍｇの粗製のペプチドが得られ、これを精 製し、（実施例１４におけるように）そして４２ｍｇの純粋な５ＥＱＩＤ　ＮＯ ：９　ＮＨｔ、ここでＸａａ’はｄｅｓＮＨ，Ｔｙｒであり、そしてＸａａ”は Ｄ−Ａｌａである、が得られた。

産生物は分析用ＨＰＬＣにより均質であることが示され、そして期待したアミノ 酸組成を与えた（加水分解＝６Ｎ塩酸、１１０℃、２４時間）：Ｔｈｒｌ、０１ 　（１）　、５ｅｔ３．９９　（４）、（６Ｎ　ＨＣＩ、１１０℃；２４時間） ：Ａｓｐｌ、９４　（１）　、Ｇｌｕ２．０３　（２）　、Ａｌ　ａ４．００　 （４）　、Ｖａ　１０．９１　（１）　、Ｍｅ　ｔｏ。９６（１）、ｌ１ｅ１． ８４　（２）　、Ｌｅｕ４．０４　（４）　、Ｔｙｒｌ、ＯＯ（１＞　、Ｐｈｅ ｏ、８８　（１）　、Ｌｙｓ　１．９３　（２）　、Ａｒｇ２．９３　（３）。

構造の確証はＦＡＢ質量スペクトルにより提供された。計算値：　（Ｍ＋Ｈ）” ３３３０．９゜実測値：３３３２．１゜実施例１６ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１Ｏ−ＮＨｔ、ここでＸａａ’はｄｅｓＮＨ，Ｔｙｒであ り、モしてＸａａ’はＤ−Ａｌａである、の調製保護されたＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ：３３−ＢＨＡ−樹脂（実施例１４からの中間体）の１．５ｇの部分を固相合成 法の８サイクルにかけると、１．０５ｇの保護されたＢｏｃ−８ＥＱ　ＩＤ　Ｎ Ｏ：１Ｏ−ＢＨＡ−樹脂、ここでＸａａ’はｄｅｓＮＨ，Ｔｙｒであり、そして Ｘａａ”はＤ−Ａ　１　ａである、が得られた。０．６９ｇの部分を無水ＨＦ（ 実施例１４におけるように）で切断すると、４９５ｍｇの粗製のペプチドが得ら れ、これを実施例１４におけるように精製しそして３１ｍｇの純粋なＳＥＱ　Ｉ Ｄ　ＮＯ：１Ｏ−ＮＨ！、ここでＸａａ’はｄｅｓＮＨ２Ｔｙｒであり、モして Ｘａａ”はＤ−Ａｌａである、が得られた。

産生物は分析用ＨＰＬＣにより均質であることが示され、そして期待したアミノ 酸組成を与えた（加水分解＝６Ｎ塩酸、１１０℃、２４時間）＝（５Ｎ　ＭＣＩ 、１１０℃；２４時間）：Ａｓｐｌ、９６　（２）、ＴｈｒＯ，９５（１）　、 ５ｅｒ３．０１　（３）　、Ｇ１ｕ３．０８　（３）　、Ａｌａ４．１０　（４ ）、Ｖａｌｏ、８５　（１）、Ｍｅｔｌ、ＯＯ（１）、ＩＩｅｌ、８０　（２） 　、Ｌｅｕ４．１２　（４）　、ＴｙｒＯ，９７（１）　、Ｐｈｅｏ、８７　（ １）　、Ｌｙｓ　１．８８　（２）　、Ａｒｇ３．１４　（３）。

構造の確証はＦＡＢ買量入量スペクトルり提供された。計算値：　（Ｍ＋Ｈ）′ ″３３７１．Ｏ０実測値：３３７１．７゜実施例１７ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋３７−ＯＨの合成りｏｃ−Ｇｌｙ−Ｐａｍ−樹脂をアプラ イド・バイオシステムス（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）４３０Ａ型 ペプチド合成装置の反応器の中に供給し、そして固相ペプチド合成の３１サイク ルにかけて、保護されたＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３７−Ｐａｍ−樹脂が得ることが できる。保護されたペプチド−Ｐａｍ−樹脂は実施例１におけるようにＨＦで処 理して、粗製のＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３７−ＯＨを生成することができる。次い で、この粗製の産生物の一部分を実施例２におけるようにＨＰＬＣにより精製す ることができる。いくつかの分画の中に現れる所望の産生物を一緒にし、蒸発さ せ、そして凍結乾燥することができる。

産生物は分析用ＨＰＬＣにより均質であることを示し、そしてアミノ酸分析およ びＦＡＢ質量スペクトルにより確証することができる。

実施例１８ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３８−ＯＨ，ここでＸａａ！７はＮｌｅである、の合成 りｏｃ−Ｇｌｙ−Ｐａｎ−樹脂をアプライド・バイオシステムス（Ａｐｐｌｉｅ ｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）４３０Ａ型ペプチド合成装置の反応器の中に供給し 、そして固相ペプチド合成の３１サイクルにかけて、保護されたＳＥＱ　ＩＤ　 ＮＯ：３８−Ｐａｍ−樹脂１、ここでＸａａ鵞７はＮｌｅである、が得ることが できる。保護されたペプチド−Ｐａｍ−樹脂は実施例１におけるようにＨＦで処 理して、粗製のＳＥＱ　ＩＤＮ０：３８−ＯＨを生成することができる。次いで 、この粗製の産生物の一部分を実施例２におけるようにＨＰＬＣにより精製する ことができる。いくつかの分画の中に現れる所望の産生物を一緒にし、蒸発させ 、そして凍結乾燥することができる。産生物は分析用ＨＰＬＣにより均質である ことを示し、そしてアミノ酸分析およびＦＡＢ質量スペクトルにより確証するこ とができる。

実施例１９ 新規なペプチドの生物学的活性を、先端巨大症に悩まされる個体のヒト膵臓腫瘍 ［ソーク研究所（Ｓａｌｋ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）の標準ｈｐ　ｇｒｆ　ＮＨｔ （ＮＬ　Ａ　１０）］から分離したＧＲＦ　（１−４４）−ＮＨｔ（ＳＥＱ　Ｉ Ｄ　ＮＯ：１−ＮＨｔ）の自然配列のそれと比較した。生物学的活性のアッセイ は、組織培養においてラット下垂体細胞の中の成長ホルモンの産生を刺激する能 力に基づき、次の方法で実施した。

３０〜４０の雄のスブレイグーダウリイ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラッ ト（１７５ｇ）からの下垂体を、断頭後、無菌的に取り出した。前葉を集め、無 菌のＨｅｐｅｓ緩衝液（０，０２５モル）（ｐＨ７，３５）の中で３回洗浄し、 そして３７℃において２０〜３０ｍ１のコラゲナーゼ（４ｍｇ／ｍ＋）およびデ ィスパーゼ（Ｄｉｓｐａｓｅ）（プロテアーゼ・グランデＩＩ、２ｍｇ／ｍｌ） を含有するＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ７，３５）の中に分散させた。おだやかな８ ０分の渦形成およびパスツールピペットによる粉砕後、分散した細胞を遠心（１ ５０ｘｇ、４分）により分離し、そしてネウラミニダーゼ（４ｍｇ／ｍｌ）およ び２００ｍｇ／ｍ＋のエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）二ナトリウム塩を含 有するＨｅｐｅｓ緩衝液ｐＨ７，３５の中に１０分間再懸濁させた。細胞をプレ イティング培地で２回洗浄し、そしてマルチウェル−ブレート（１，５Ｘ１０’ 細胞／　ｍ　ｌ　）上で次の定められた培地を使用してプレイティングした：　 Ｆ−１２／ＤＭＥＭ／ＢＧＪ　（６：　３　：　１）［ギブ：Ｉ　（Ｇｉｂｃｏ ）：　４３０−１７００／４３０−２５９１１および８ｇのＢＳＡ／１．２．３ ８ｇのＨｅｐｅｓ／１，５０ｍｇのゲンタマイシン／ｌ［シエリング・カンパニ ー（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ　Ｃｏ、）。

各ウェルの中の培地を新規なペプチドまたは自然ＧＲＦ　（１−４４）−ＮＨｔ 　（Ｓ　ＥＱ　Ｉ　Ｄ　Ｎｏ　：　Ｉ　ＮＨｚ）で培地の１ｍｌ当たり３．１〜 ２００ｆｍｏｌの範囲の濃度で補充した。対照ウェルは補充物質を含有しなかっ た。プレイティングは２％の胎児仔ウシ血清を添加したこの培地を使用して実施 して、細胞の急速な固定を保証した。第４に、細胞を胎児仔ウシ血清を含まない 定めた培地で２回洗浄した。最後に、９００ｍ１の定めた培地を各ウェルに、三 重反復実験において、各個体の処置を含有する同一の培地の１００ｍ１とともに 添加した。３時間のインキュベーション後、培地を集め、そして必要に応じて希 釈して、ラットの成長ホルモンについてラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）を実施 した。

ＲＩＡはシンハ（Ｓｈｎｈａ）の抗ネズミＧＨ免疫血清を使用して実施し、そし てナショナル・ピツイタリー・エイジエンシイ（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｐｉｔｕｉ ｔａｒｙ　Ａｇｅｎｃｙ）に従いプロティンＡを使用して抗体抗原複合体を沈澱 させた。結果を表１に要約する。

ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１−ＮＨｚ　１．００ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９　ＮＨｚ　 ３．５５ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８−ＮＨｔ　３．７７ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０ 　ＮＨｚ　４．５７ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３−ＯＨ２，７９ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ Ｏ：１４−ＯＨ３，１１ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２３−ＯＨ２，９６生体内のＧＲ Ｆ類似体の投与 生体内のＧＲＦ類似体の研究は、食物および水が自由に入手可能である、個々の 代謝ケージの中に収容した交雑種のブタ［はぼ７０ボンド；ホフマンーラ・ロウ チェ・イクスペリメンタル・リサーチ・ファッシリティ−（Ｈｏｆｆｍａｎｎ− Ｌａ　Ｒｏｃｈｅ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｆａｃｉｌ ｉｔｙ）］において実施した。検査した各ＧＲＦ類似体について、６頭のブタを ６×６のラテン正方形のデザインｄｅ配置し、こうして各ブタに６日の期間にわ たって異なる投与量（０［生理的塩類溶液］、０．３．１．０．３．０．６，０ または１０．０ｇｇ／ｋｇ体重）を与えた。引き続＜ＧＨの応答に前の日のＧＲ Ｆ類似体の投与の「キャリー−オーバー」効果は、検査したいずれの動物ついて も観察されなかつた（約１６時間の「洗浄」期間）。すべてのブタは、引き続（ （２〜３日）の血液のサンプリングのためにハロテン／ケタミンＨＣ１／キシレ ジンの麻酔下に大腿動脈を経てカニユーレ挿入した。予備処理（対照）の血液試 料を８＝３０〜９：３０ａ、ｍ。

から３０毎に取つた。処置の投与量は１０：００ａ、ｍ、に開始して投与した。

投与後１時間に、動物を１５ｍｎの間隔でサンプリングした：投与後１時間に、 動物を３０分の間隔でサンプリングした。すべての試料を遠心し、そして血清の 分画をＧＨについてアッセイするまで貯蔵（−２０℃）した。

ブタ血清の中のＧＨのレベルは、相同性の二重抗体のＲＩＡにより、ブタＧＨ標 準（ロット＃ＡＦＰ−１０８５９Ｃ）　、Ａ、パーロウ（Ｐａｒｌｏｗ）博士［ 研究および教育研究所（Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄＥｄｕｃａｔｉｏｎ　Ｉｎ５ ｔｉｔｕｔｅ）、カリフォルニア州トランス］から供給された、およびヒヒ抗ｐ ＧＨ血清［Ｂ−５８；ホフマンーラーｏウチェ（Ｈｏｆ　ｆｍａｎｎ−Ｌａ　Ｒ ｏｃｈｅ）］を使用して測定した。これらのアッセイにおいて使用したｐＧＨ抗 血清はブタＦＳＨ（小胞刺激ホルモン）、ブタＡＣＴＨ（副腎皮質刺激ホルモン ）、ブタ（プロラクチン）またはヒトＧＨと交差反応しなかった。最も低い検出 可能なＧＨ濃度は１．５６ｎｇ／ｍｌ　（０，１５６ｎｇ／１００ｍ１の試料） であり、５０％の置換が１２．１３ｎｇ／ｍ＋において観測された。スパイク（ ｐＧＨを使用する）または非スパイク血清の系統的希釈はｐＧＨの標準曲線と平 行性を示した。変動の相互アッセイおよび内部アッセイは、それぞれ、９．６お よび６．２％であった。処理期間（０〜３６０分）の間の曲線（ＧＨＡＵＣ）よ り下のＧＨ面積は台形の和により決定した。平均のＧＨＡＵＧおよび平均のＧＨ のピークのデータを、変動のワン−ウェイ分析（反復した測定ＡＮＯＶＡ）およ びフィッシャーノ最下位の差（Ｆｉｓｈｅｒ　１ｅａｓｔ　５１ｇｎ１ｆｉｃａ ｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）（ＬＳＤｏ、ａｓ）を使用して、独立に比較した 。

アッセイの結果法の通りであった：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３−ＯＨおよびＳＥ Ｑ　ＩＤ　ＮＯ：１４−ＯＨ，本発明の新規な化合物のうちの２つ、およびＳＥ Ｑ　ＩＤ　ＮＯ：３５−ＯＨは、ＧＨＡＵＣにより推定して、ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ Ｏ：３４−ＮＨｚ、ここでＸａａ’はｄｅｓＮＨＩＴｙｒであり、そしてＸａａ ”はＤ−Ａｌａである（米国特許第４．６４９．１３１号に開示されている）と 効能が類似した（投与量の範囲：０．０．０．３．１．０．３．　０および６． ０ｍｇ／ｋｇ）、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３４　ＮＨ２、ここでＸａａ’はｄｅｓ ＮＨ，Ｔｙｒであり、そしてＸａａ”はＤ−Ａｌａである、は、ＧＲＦ　（１− ２９）−ＮＨＩ　（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：　３　ＮＨｚ）より１０〜１５倍効能 がある。

実施例２１ 水溶液中のＧＲＦの半減期の安定性を３７℃において逆相ＨＰＬＣにより決定し た。ＧＲＦ類似体は前述したように調製した。ＧＲＦ類似体を２０ｍ１のＨ２Ｏ 中に溶解し、次いで１．０ｍｌの０．２５モルのＮａ　ｚＨＰ　Ｏ４／　Ｈ３Ｐ 　Ｏ４および１．０ミリモルのＮａＮ、を含有する緩衝液の中に取った。ＧＲＦ 類似体の濃度は０．１５ｍｇ／ｍｌであった。

ＨＰＬＣ系はウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）Ｃ−１８カラム（３，９Ｘ３００ｍ ｍ、ＩＱμ）をもつラボラトリ−・データ・コントロール（Ｌａｂｏｒａｔｏｒ ｙ　Ｄａｔａ　Ｃｏｎｔｒｏｌ）（ＬＤＣ）ＨＰＬＣであった。検出器はＬＤＣ スペクトロモニターＩＩＩであり、そして勾配の供給系はコンスタメトリック（ Ｃｏｎｓｔａｍｅｔｒｉｃ）Ｉ　Ｉであった。移動相−（Ａ）Ｈ，Ｏ中（Ｄｏ、 ０２５％のＴＦＡ、（Ｂ）アセトニトリル中の０．０２５％のＴＦＡ０勾配はｓ ＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：８−ＮＨ，、ここでＸａａ’はｄｅｓＮＨ，Ｔｙｒであり、 モしてＸａａ”はＤ−ＡｌａであるおよびＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９　ＮＨＩ、こ こテＸａａ１はｄｅｓＮＨ，Ｔｙｒであり、そしてＸａａ”はＤ−Ａｌａである について１５分で０〜３７％（７）（Ｂ）；ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３５−ＮＨ３ 、ここでＸａａ’はｄｅｓＮＨ２Ｔｙｒであり、モしてＸａａ”はＤ−Ａｌａで ある、について１５分で０〜３５％（７）（Ｂ）；ソしｒｓＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋ １０　ＮＨＩ、ここでＸａａｌｄｄｅｓＮＨ，Ｔｙｒであり、モしてＸａａ”は Ｄ−Ａｌａである、について１５分で０〜３６％。すべての勾配について流速は ２ｍ１７分であった。結果を表２に記載する。

告１ ３７℃の水溶液中の半減期 化合物　半減期’ｔ（１７１）、時間 １）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：ｌについての情報：（ｆ）配列の特性： （Ａ）長さ：４４アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （目）分子の型：ペプチド （ｘｉ）Ｅ’ｆｉＪ（ＤＥｔｔ：ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：　１　：２）ＳＥＱ　Ｉ Ｄ　ＮＯ：２についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝４０アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２：Ｔｙｒ　ＡＩＪＬ　Ａｌ！Ｐ　 ＡＩＪＬ　ｒｌｅ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ａｓ！Ｉ　Ｓｅｒτｙｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ 　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　f１ｎ Ｉｌ＠！ｕ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ａｒｑ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｉ＋ｅｕ　Ｇｉｎ　Ａ ｓｐ　Ｉｌｅ　Ｍｅｔ　Ｓｅｒ　Ａｘｑ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　fｌｙ ３）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝２９アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３：Ｔｙｒ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｌ ａ工１ｅ　Ｐｈａτｈｒ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　：Ａｘｑ　ＸａｙＳ　Ｖａ 工Ｌａｕ　Ｇｌｙｉｎ ４）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４：５）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５に ついての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｉ　ｔ）分子の型：タンパク質 （ｘ　ｉ）　配列ｃＤ記載：　ＳＥＱ　Ｉ　Ｄ　Ｎｏ　：　Ｓ　：６）ＳＥＱ　 ＩＤ　ＮＯ：６についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：２９アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記ｆｉ：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６：Ｘａａ　Ｘａａ　Ａｓｐ　Ａ ｌａ工１ｅ　Ｐｈｅ　’ｒｈｒ　Ｘａａ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｔａ１Ｂ　 Ｖａｌ　シｕ　Ｘａａ　Ｇ１ｎ７）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯニア１．：つぃｒ１７） 情報：（ｆ）配列の特性： （Ａ）長さ：１６アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列（７）記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯニア：８）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ二 ８についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝２９アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８：９）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９に ついての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝２９アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ’ＮＯ：９：１０）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋１ ０についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：２９アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０：Ｘａａ　Ｘａａ　Ａｓｐ　Ａ ｌａ　工１ｅ　Ｐｈｅ　′ｒｈｒ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　 Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｇ１■ １１）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１１についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１１：Ｈｌｓ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　入 １ａ　Ｉｌｅ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｖ ａｌ　Ｌｅｕ　ＡＬａ　Ｇ１ｎ１２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２についての情報 ：（ｆ）配列の特性： （Ａ）長さ：３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘ　ｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２：１３）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ：１３についての情報＝（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３：１４）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： １４についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４：Ｈｌｓ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａ ｌａ工１ｅ　Ｐｈａ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　ｈｘｑ　ＬＹＳ　Ｖａ ｌ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｇ１ｎ１５）ＳＥＱ　［Ｄ　ＮＯ：１５についての情報： （ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５：！ｉ１ｓ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　 Ａｌａ工１ｅ　Ｅ’ｈｅ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　 Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｇ１■ Ｌａｕ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｉａ’ｙｓ　Ｌｅｕ　！ａｕ　Ｇｉｎ　Ａｓ ｐ工ｌｅ　Ｌｅｕ　ｓａｒ　ｋｑ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ１６）ＳＥＱ　ＩＤ 　ＮＯ：１６についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （、ｉｉ）分子の型：ペプチド （ｘ　ｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１６：１７）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ：１７についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ０＝１７：Ｈｌｓ　Ｘａａ　Ａｓｐ　Ａ ｌａ　Ｉｌｅ　Ｐｈｅτｈｒ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｖａ ｌ　Ｌａｕ　Ａｌａ　Ｇ１ｎ１８）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１８についての情報： （ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｆ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　［）ＮＯ：１８：Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｌ ａ　Ｉｌｅ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ａｊ”ｇ　Ｌｙｓ　Ｖ ａｌ　Ｘａａｕ　Ａｌａ　ＧPｎ １９）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１９についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１９：２０）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： ２０についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２０：Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ａ ｒｇ　ＬＹ！ｌ　Ｌ４！ｕ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　ｘｓｐ工ｌｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　 Ａｒｇ　Ｇｌｎ　Ｇｉｎ　Ｇｌ■ ２１）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２１についての情報：（＋）配列の特性： （Ａ）長さ＝３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：Ｚｌ：２２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： ２２についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｉ　ｎ分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２２：２３）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： ２３についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２３：２４）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： ２４についての情報＝（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘ　ｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋２４＋Ｘａ＆　Ｖａｌ　Ａｓｐ　 Ａｌａ工１ｅ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ｓｅｘτｙｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｖａ ｌ　Ｉ、ｅｕ　Ａｌａ　ＧｉｎＩ　Ｓ　１０　１５ ２５）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ＝２５についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝１０アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｔ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２５：２６）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： ２６についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝２４アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘ　ｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２６：２７）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ：２７についての情報＝（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝３０アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２７二２８）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： ２８についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝３０アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘ　ｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２８２９）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： ２９についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝２４アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘ　ｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２９：３０）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ：３０についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝３０アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｔ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３０：３１）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋ ３１についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３１：３２）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ： についての情報＝（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘ　ｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３２：３３）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ：３３についての情報二（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝２１アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥｏ　１０　ＮＯ：３３：３４）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： ３４についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：２９アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３４：３５）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： ３５についての情報＝（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：３５アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３５：３６）ＳＥＱ　１０　ＮＯ： ３６についての情報＝（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３６：３７）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： ３７についての情報：（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （１１）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ｔＤ　ＮＯ：３７：３８）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： ３８についての情報＝（ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子の型：ペプチド （ｘ　ｉ）配列の記載：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３８要　約　書 位置１におけるＸａａがＴｙｒＳｄｅｓＮＨ，Ｔｙｒ、Ｈｉ　５１ｄｅｓＮＨ， Ｈｉｓまたは３−ＭｅＨｆｓであり、位置２におけるＸａａがＶａｌ、Ｌｅｕ、 Ｉ　ｌｅ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｎｌｅまた はＮＶａｌであり、位置８におけるＸａａがＧＩｎ、ＳｅｔまたはＴｈｒであり 、位置１５におけるＸａａがＡｌａまたはＬｅｕであり、位置２７におけるＸａ ａがＭｅｔ、ＮｌｅまたはＬｅｕであり、位置２８におけるＸａａがＳｅｒまた はＡｓｎであり、位置２９におけるＸａａがアミノ酸配列（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ニア）またはまたはその断片であり、ここで前記断片がカルボキシル末端から１ 〜１５アミノ酸残基だけ数が減少しており、ここでカルボキシル末端が遊離カル ボン酸または対応するアミドであることができる、２９〜４４アミノ酸の配列（ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６）を有する、新規な成長ホルモン放出因子の類似体、お よびその製剤学的に許容されうる酸または塩基の付加塩が提供される。新規な成 長ホルモン放出因子の類似体は、成長ホルモンを放出する増強された効能および 酵素安定性、水溶液中の改良された半減期の安定性を有し、そして成長ホルモン の欠損症の被検体に投与することができるか、あるいは家畜類および他の温血動 物および魚類および他の海の冷血動物における成長能力を改良するために使用す ることができる。

国際調査報告 国際調査報告 ＥＰ　９２００７２３ Ｓ＾　５９２２７

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、位置１におけるＸａａがＴｙｒ、ｄｅｓＮＨ２Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、ｄｅｓＮＨ ２Ｈｉｓまたは３−ＭｅＨｉｓであり、位置２におけるＸａａがＶａｌ、Ｌｅｕ 、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｎｌｅまた はＮＶａｌであり、位置８におけるＸａａがＧｌｎ、ＳｅｒまたはＴｈｒであり 、位置１５におけるＸａａがＡｌａまたはＬｅｕであり、位置２７におけるＸａ ａがＭｅｔ、ＮｌｅまたはＬｅｕであり、位置２８におけるＸａａがＳｅｒまた はＡｓｎであり、位置２９におけるＸａａがアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：７ ）またはまたはその断片であり、ここで前記断片がカルボキシル末端から１〜１ ５アミノ酸残基だけ数が減少しており、ここでカルボキシル末端が遊離カルボン 酸または対応するアミドであることができる、２９〜４４アミノ酸の配列（ＳＥ ＱＩＤＮＯ：６）を有する化合物、およびその製剤学的に許容されうる酸または 塩基の付加塩。 ２、位置１５におけるＸａａはＡｌａであり、位置２７におけるＸａａはＭｅｔ であり、位置２８におけるＸａａはＳｅｒであり、そして位置２９におけるＸａ ａはＡｒｇである請求の範囲第１項記載の化合物。 ３、位置１におけるＸａａはｄｅｓＮＨ２Ｔｙｒであり、そして位置２における ＸａａはＤ−Ａｌａである請求の範囲第２項記載の化合物。 ４、位置８におけるＸａａはＧｌｎ、ＳｅｒおよびＴｈｒから成る群より選択さ れる請求の範囲第３項記載の化合物。 ５、ＳＥＱＩＤＮＯ：８−ＮＨ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：９−ＮＨ２およびＳＥＱＩ ＤＮＯ：１０−ＮＨ２から成る群より選択される請求の範囲第４項記載の化合物 。 ６、位置１５におけるＸａａはＡｌａであり、そして位置２９におけるＸａａは Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙである請求の範囲第１項記載の化合物。 ７、位置２におけるＸａａはＶａｌである請求の範囲第６項記載の化合物。 ８、位置１におけるＸａａはＴｙｒ、ｄｅｓＮＨ２ＴｙｒおよびＨｉｓから成る 群より選択される請求の範囲第７項記載の化合物。 ９、位置８におけるＸａａがＧｌｎ、ＳｅｒおよびＴｈｒから成る群より選択さ れる請求の範囲第８項記載の化合物。 １０、位置２７におけるＸａａはＬｅｕである請求の範囲第９項記載の化合物。 １１、位置１におけるＸａａはＴｙｒである請求の範囲第１０項記載の化合物。 １２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９−ＯＨ、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１−ＯＨおよびＳＥＱ ＩＤＮＯ：３６−ＯＨから成る群より選択される請求の範囲第１１項記載の化合 物。 １３、位置１におけるＸａａはＨｉｓである請求の範囲第１０項記載の化合物。 １４、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１−ＯＨ、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３−ＯＨおよびＳＥＱ ＩＤＮＯ：１５−ＯＨから成る群より選択される請求の範囲第１３項記載の化合 物。 １５、位置１におけるＸａａはｄｅｓＮＨ２Ｔｙｒである請求の範囲第１０項記 載の化合物。 １６、位置１におけるＸａａはｄｅｓＮＨ２Ｔｙｒである請求の範囲第１５項記 載の化合物、ＳＥＱＩＤＮＯ：２４−ＯＨ。 １７、位置１におけるＸａａはｄｅｓＮＨ２Ｔｙｒであり、そして位置２におけ るＸａａはＤ−Ａｌａである請求の範囲第１０項記載のＳＥＱＩＤＮＯ：３１− ＯＨ。 １８、位置２８におけるＸａａはＡｓｎである請求の範囲第１１項記載の化合物 。 １９、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８−ＯＨ、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０−ＯＨおよびＳＥＱ ＩＤＮＯ：２２−ＯＨから成る群より選択される請求の範囲第１８項記載の化合 物。 ２０、位置２８におけるＸａａはＡｓｎである請求の範囲第１３項記載の化合物 。 ２１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１２−ＯＨ、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４およびＳＥＱＩＤＮ Ｏ：１６−ＯＨから成る群より選択される請求の範囲第２０項記載の化合物。 ２２、位置２におけるＸａａはＡｌａまたはＤ−Ａｌａから成る群より選択され る請求の範囲第６項記載の化合物。 ２３、位置２におけるＸａａはＤ−Ａｌａである、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７−ＯＨ およびＳＥＱＩＤＮＯ：２３−ＯＨから成る群より選択される請求の範囲第２２ 項記載の化合物。 ２４、温血動物または冷血動物における、ホルモンに関係する疾患の処置のため 、あるいは成長能力を改良するための請求の範囲第１〜２３項のいずれかに記載 の化合物。 ２５、固相ペプチド合成により合成された対応するアミノ酸配列の適当に側鎖保 護された樹脂結合ポリペプチドを切断剤と反応させそして、必要に応じて、製剤 学的に許容されうる塩に転化することを特徴とする請求の範囲第１〜２３項のい ずれかに記載の化合物の製造方法。 ２６、有効量の請求の範囲第１〜２３項のいずれかに記載の化合物および必要に 応じて無毒の製剤学的に許容されうる液体または固体の担体を含有する製剤学的 組成物。 ２７、ヒトにおける成長ホルモンの欠乏により特徴づけられる勾配の処置におけ るか、あるいは動物の成長能力を促進するための動物の処置における請求の範囲 第１〜２３項のいずれかに記載の化合物の使用。 ２８、請求の範囲第２５項記載の方法に従い製造された、請求の範囲第１〜２３ 項のいずれかに記載の化合物。 ２９、上に記載した本発明。 ３０、温血動物または冷血動物に有効量の請求の範囲第１〜２３項のいずれかに 記載の化合物を投与することからなる、前記動物における成長ホルモンの欠乏に より特徴づけられる成長ホルモンに関係する疾患を処置するか、あるいは成長能 力を改良する方法。