JPH05508165A - Ｈｉｖの処置および予防用ワクチン - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 ＨＩＶの処置および予防用ワクチン 発明の分野 本発明は、ＨＩＶの処置および伝播の阻害（伝播防止）に使用するためのワクチ ンおよび免疫治療法に関する。さらに詳しくは、本発明はＨＩＶ−１ペプチドと 担体のコンジュゲート化によって創製されるワクチンに関する。これらのペプチ ドは、ＨＩＶ−１のｇｐ１２０主中和ドメイン（Ｐｒｉｎｃｉｐａｌ　Ｎｅｕｔ ｒａｌｉｚｉｎｇ　Ｄｏｍａｉｎ　；ＰＮＤ）由来の単独または反復の直鎖また は立体配座アミノ酸配列のいずれであってもよい。ＨＩＶのｇｐ１２０ＰＮＤ由 来のアミノ酸配列の例は、ＫＲＩＨＩＧＰＲＡＦＹＴ％ＲＨ［ＨＩＧＰＧＲＡＦ ＹＴ。

ＲＲＴＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ、ＴＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ。

ＣＴＲＰＮＹＮＫＲＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴＴＫＮＩ　ＩＧＴＩＲＱＡＨＣ 。

ＧＰＧＲＡＦＧＰＧＲＡＦＧＰＧＲＡＦＣ，ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ。

ＩＡＩＧＰＧＲＡＣ，Ｉ　ＨＩＧＰＧＲＡＣ，ＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ。

Ｒ３ＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＡ、ＫＳ　ＩＴＫＧＰＧＲＶＩＹＡ。

ＫＧＩＡＩＧＰＧＲＴＬＹＡ、および５ＲＶＴＬＧＰＧＲＶＷＹＴである。

ＨＩＶのｇｐ１２０ＰＮＤ由来の最も有効なアミノ酸配列は、ＧＰＧＲＡＦＧＰ ＧＲＡＦＧＰＧＲＡＦＣＳ　ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ，、ＩＡＩＧＰＧＲＡＣ，ＩＨ ＩＧＰＧＲＡＣ％ＫＲＩ　ＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴＳＲ３ＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＡ 、ＫＳ　ＩＴＫＧＰＧＲＶＩＹＡ、ＫＧＩＡＩＧＰＧＲＴＬＹＡ、および５ＲＶ ＴＬＧＰＧＲＶＷＹＴである。最も良好な担体は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ 　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ由来のノベルタリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰ Ｄ）である。単一のペプチド担体コンジュゲート単独または「カクテル」状態に ある数種の異なるペプチド担体コンジュゲートのいずれかをＨＩＶ−１感染およ び未感染の個体にワクチン接種することができる。ワクチンを個体に投与した後 に、ワクチン接種した個体からの抗体含有液を検定に用いて高親和性／結合活性 の中和性および／または保護性のＨＩＶ特異的な抗体が液中に存在しているか否 かを検出する。この検定はチメロサール含有希釈剤を含む抗原限定ＥＬＩＳＡで あり、高親和性／結合活性の中和性および／または保護性のＨＩＶ特異的な抗体 を検出することができる。さらに、インビトロのリンパ球増殖反応、ＰＮＤとイ ンキュベートしたときのＩ　Ｌ−２分泌および細胞毒性リンパ球（ＣＴＬ）の生 成を用いて、ワクチンがＨＩＶに対して宵効か否かを測定することができる。抗 体の産生を誘導および／またはＰＮＤＮノリ球増殖、Ｉ　Ｌ−２もしくはＣＴＬ を誘導したフンシュゲートはＨＩＶの伝播防止および処置に有用である。

発明の背景 ＨｒＶの処置にレトロウィルス由来のワクチンを利用することが最近になって進 歩した。具体的には、ホルマリン−不活性化した全ＨＩＶワクチンが開発されて おり、これはマカク（サルの１種）において保護を与えた。アルブミンで強化し たワクチンによる免疫化は、ＨＩＶの感染用量でチャレンジした９匹のサルのう ち８匹において臨床的疾患からの保護を与える結果になった。特に、ウィルスの 侵入が妨げられていない場合であっても保護を得ることができ、このことは感染 を完全にブロックすることが成功裏のワクチンを得るために必要ではな（＜こと もあることを示唆する。

また、全死滅ＨＩＶワクチンは、ＨＩＶで予め感染させたチンパンジーの治療に 有用であった。これらのチンパンジーは、ワクチン接種の後に血流中においてＨ ＩＶ感染を浄化したようである。ヒトにおける暴露後の免疫化も研究されている 。これらの試験により、免疫化を用いてＨ［Ｖ感染からヒトを保護しつること、 さらにこのウィルスに既に感染しているヒトを治療しうろことが示唆されている 。

しかし、全ウィルスワクチンは感染性の粒子を含んでいることがある。従って、 このウィルスの必須成分を用いて保護を得るのがより安全であろう。このウィル スのエピトープがこのウィルスの比較的安全な必須成分の１つの例である。さら に最近の研究によって、ｇｐ１２０およびｇｐ１６０由来のワクチンによっても 感染からの部分的保、護を得ることができることが確認されている［Ｄｅｓｒｏ ｓ　１ｅｒｓ、　Ｒ，Ｃ，ら。

旺四コ１↓、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ｔｌｓＡ　８６：　６３５３　（１９８ ９）　；　Ｋｅｓｔｌｅｒら、５ｃｉｅｎｃｅ　２４８：　P１０９　（１９ ９０）　：　ｋｌｕｒｐｈｅｙ−Ｃｏｒｂ、Ｍ、、　３ｃｉｅｎｃｅ　２４６： 　１２９３　（１９８９）］。

免疫原性担体にフンシュゲート化されたアミノ酸のペプチドエピトープが高レベ ルの高親和性抗ペプチド抗体を誘導しうることが長く認識されていた［Ｔａ１ｖ ａｒ。

Ｇ、Ｐ、、　Ｂｌｏｏｍ、Ｂら、「再生産の生物学的および臨床的側面ｊ　、　 Ｅｘｃｅｐｔｏｒ　１１ｅｄ、ｓｅｒツー３！±　２２２４−２２３２　（１９ ８７）を参照：ここでは、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモンのβ鎖を破傷風トキソイ ドにフンシュゲート化して不妊ワクチンを得ている］。本発明においてペプチド がコンジュゲート化される担体のすべては動物において免疫原性担体として用い られているものであり、その一部はヒトにおいて用いられているものである。

１！ｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕ＋＊　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ由来のツベルクリ ンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）は独特の免疫学的試薬であるが、その理由 はＢＣＧまたはＭ、　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染に！Ｉ露された機能的な免 疫反応を有する世界中の実質的にすべての人が微量のＰＰＤに対してＴ−細胞媒 介の遅延型の過敏反応を有するであろうためである。

ツベルクリン−ＰＰＤフンシュゲートが過去において利用されていた。ＢＣＧで ［プライム］したかまたは予め感作したマウスは、ＰＰＤにコンジュゲート化し たペプチドまたは炭水化物エピトープに対して高レベルの抗体を産生ずることが できる。特に興味深いのは、２株のマウスにおいてのみ免疫原性であるＰ、　ｆ ａｌｃｉｐａｒｕｍのサーカムスボロ／イト（ｃｉｒｃｕ＊５ｐｏｒｏｚｏｉｔ ｅ）抗原のＮＡＮＰ反復エピトープに関する研究である。ＮＡＮＰ反ＩＮペプチ ドをＰＰＤにフンシュゲート化すると、ＮＡＮＰエピトープに対して遺伝的に非 反応株において１：１０００以上の抗体力価の生成を誘導する。この反応の程変 は、完全フロインドアジュバント中のペプチドフンシュゲートを与えた反応株に おいて観察されるものに匹敵するＥＬｕｓｓ。

豐ら、ｒＢａｃｉｌｌｕｓ　Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎプライムしたマウ スにおいてツベルクリン精製したタンパク質誘導体−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ａｓｎ− Ｐｒｏフンシュゲートを用いると、抗体＾ｃａｄ、ｓｃｉ、ＵｓＡ　８７　（１ ９９０）を参照］。

Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの外毒素Ａ（毒素Ａ）かコンジ ュゲートワクチンにおける担体として効率的に用いられている。この担体を用い て調製されたコンジュゲートは比較的高い免疫原性を有しており、特に組換えタ ンパク質Ｒ３２と結合させてＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ　ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのス ポロゾイト（ｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅ）段階に対する免疫反応を創製するときに高 い免疫原性を有している。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの外 毒素ＡはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　Ｐ　Ａ　１０３の発 酵型増殖培養物の上清から精製することができる。キーホール・リンペット・ヘ モシアニン（ＫＬＨ）はメガツラ・クレヌラタ（ｍｅｇａｔｈｕｒａ　ｃｒｅｎ ｕｌａｔａ）から精製される高分子量タンパク質である。

ＫＬＨはリジン残基由来の多数の利用可能な１級アミンを有しており、これがタ ンパク質のコンジュゲート化を容易にする。ＫＬＨは免疫原性が高く、１級アミ ンが利用可能であることからタンパク質のフンシュゲート化に理想的である。

また、破傷風およびジフテリアのトキソイドもタンパク質担体として成功裏に使 用されている。ジフテリアトキソイドは合成３１アミノ酸のＮ−末端ペプチドで 使用されている。破傷風およびジフテリアの両トキソイドは、Ｈｅｍｏｐｈｉｌ ｕｓ　ｉｒ＋ｆｌｕｅｎｚａ　ｂの免疫原性の低い炭水化物抗原のためのヒトに おける有効な担体であることがわかっている。

Ｂ型肝炎の組換えコア抗原は、実験動物において免疫原性の高い２７開の粒子に 自己組立てする能力を有している。これらＨＢＶコア粒子を、組換えＤＮＡ法ヲ 用いてペプチドと直接フンシュゲート化することができる。高エピトープ密度を 有する規定された配列のペプチドとＨＢＶコア抗原の間で融合タンパク質を調製 することができるが、これは高力価の抗体を導き、長く持続する中和性の抗ウイ ルス免疫を導く。Ｂ型肝炎コア抗原と自己組立てＨＢｃ−ＨＩＶペプチド融合融 合タンパクツンパク質担体として用いることができる。

ミコバクテリア細胞壁の主な抗原性成分は１０〜１６Ｋｄのポリペプチドモノマ ーからなるタンパク質であることが確かめられており、そのアミ／末端配列によ りそれが多（の細菌に存在するＧｒｏＥＳ熱ショックタンパク質に関連している ことがわかっている。ＣＤ４＋Ｔ−細胞によって認識されるミコバクテリアの主 抗原性成分はこの細胞壁に関係していることが示されている。ＢＣＧ細胞壁（精 製）をタンパク質担体として用いることができる。また、ＢＣＧを用いてワクチ ン接種の前に動物またはヒトをプライムすることができる。ＢＣＧプライムはワ クチン接種によって誘導される体液性および細胞性の応答を増強する。

現在、ヒトに使用することが認可されている唯一のアジュバントはアルミナであ る。本発明において、担体Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ外毒 素Ａ、ＫＬＨ，ならびに破傷風およびジフテリアトキソイドを含むフンシュゲー トと共にアルミナを用いることができる。本発明において、Ａｌ（ＯＨ）３およ びＡＩＰＯ，などのアルミニウムに基づくゲルならびにリポソームを担体Ｐｓｅ ｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ外毒素Ａと共にアジュバントとして用 いることができる。ツベルクリン陽性の個体にさらにアジュバントを含まない食 塩水中てＰＰＤコンジュゲートを投与することができる。ＢＣＧ細胞壁とＨＢｃ 抗原フンシュゲートに対してはアジュバントが必要になる可能性が高い。トレハ ロース・シミコール酸および２％スクアレンを含有するＲｉｂｉアジュバントを アジュバントとして用いることができる。別法として、不完全フロインドアジュ バントまたはｌＳＣ０Ｍアジュバントの長期安全性に関する研究によってそれら がヒトにおいて安全かつ有効であることが示されたときには、これらのアジュバ ントを用いることができる。さらに、ポリアクチド／ポリグリコリド生物分解性 ポリマーを用いるマイクロカプセル封入法をアジュバントとして用いることがで きる。

担体の使用を含む現在までに開発された方法のどれもＨＩＶの処置および伝播防 止に成功していなかった。本発明の目的は、ＨＩＶの伝播阻害および処置のため のペプチド担体コンジュゲートワクチンおよび該ワクチンを製造するための方法 を提供することである。

図面の簡単な説明 図１は、Ｋ　１．、　Ｈおよび５種の異なるペプチド：　２８２（ＧＰＧＲＡＦ ＧＰＧＲＡＦＧＰＧＲＡＦＣ）、２８３（ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ）、２８４（ＩＡ ＩＧＰＧＲＡＣ）、２８５（ＴＨＩＧＰＧＲＡｃ）およびＭＮ（ＫＲＩＨＩＧＰ ＧＲＡＦＹＴ）のコンジュゲートをワクチン接種したマウスの免疫反応性を示す グラフである。

図２は、ＫＬＨとペプチド２８２（ＧＰＧＲＡＦＧＰＧＲＡＦＧＰＧＲＡＦＣ） 、２８３（ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ）、２８４（Ｉ　ＡＩＧＰＧＲＡＣ）および２８ ５（ＩＨＩＧＰＧＲＡＣ）のフンシュゲートに対する、抗体の最高力価を伴うマ ウスの親和性／結合活性を示すグラフである。

図３は、マウス２８３−５におけるペプチド２８２（ＧＰＧＲＡＦＧＰＧＲＡＦ ＧＰＧＲＡＦＣ）およびＭＮ（ＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ）とペプチド２８３ （ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ）の間の競合の結果を示すグラフである。ペプチド２８２ は効率的に競合したが、ペプチドＭＮは競合しなかった。また、図３はマウス２ ８４−４におけるペプチド２８２およびＭＮとペプチド２８４（ＩＡＩＧＰＧＲ ＡＣ）の間の競合の結果をも示している。ペプチド２８２およびＭＮの両方が効 率的に競合した。

発明の要約 本発明は、ＨＩＶの処置および伝播防止のためのワクチンに使用される、（１） ＨＩＶのｇｐ１２０主中和ドメイン（Ｐ　Ｎ　Ｄ）に類似したアミノ酸配列を有 するペプチド、および（２）免疫原性を増強する担体、から調製されるフンシュ ゲートに関する。本発明の態様の１つにおいては、ペプチドが、ＫＲＩＨＩＧＰ ＲＡＦＹＴＳＲＨＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ。

ＲＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴＳＴＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ。

ＣＴＲＰＮＹＮＫＲＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴＴＫＮＩ　ＩＧＴＩＲＱＡＨＣ 。

ＧＰＧＲＡＦＧＰＧＲＡＦＧＰＧＲＡＦＣＳ　ＩＹＩＧＰＧＲＡｃ。

ＩＡＩＧＰＧＲＡＣ，ＩＨＩＧＰＧＲＡＣ，ＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ。

Ｒ３ＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＡ、ＫＳ　ＩＴＫＧＰＧＲＶＩＹＡ。

ＫＧＩＡＩＧＰＧＲＴＬＹＡ、および５ＲＶＴＬＧＰＧＲＶＷＹＴである。

本発明の好ましい態様においては、ペプチドが、ＧＰＧＲＡＦＧＰＧＲＡＦＧＰ ＧＲＡＦＣＳ　ＩＹＩＧＰＧＲＡｃ、ＩＡＩＧＰＧＲＡＣ，ＩＨＩＧＰＧＲＡｃ 。

ＫＲ［ＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ、Ｒ３ＩＨＴＧＰＧＲＡＦＹＡ、ＫＳＩＴＫＧＰＧ ＲＶＩＹＡ、ＫＧＩＡＩＧＰＧＲＴＬＹＡ、および５ＲＶＴＬＧＰＧＲＶＷＹＴ である。

別の好ましい態様においては、担体がＰＰＤである。ＰＰＤ陰性であるワクチン 接種すべき個体を、フンシュゲートによるワクチン接種の４〜６週間前にＢＣＧ でプライムして、ペプチド担体コンジュゲートによるワクチン接種によって誘導 される免疫反応を増強する。個体がＰＰＤ陽性である場合には、この個体をＢＣ Ｇでプライムする必要はない。

このワクチンは、単一のペプチド担体コンジュゲート単独または数種の異なるペ プチド担体コンジュゲートのカクテルのいずれかを含有していてよい。このワク チンを液体形帖で１回もしくは数回で投与してよ（、また、定期放出もしくはパ ルス放出機序で投与してもよい。フンシュゲートによるワクチン接種の後に、抗 体含有液をワクチン接種した個体から抽出し、抗原限定ＥＬＩＳＡで検定する。

このＥＬＩＳＡはチメロサールを含有する希釈剤を含み、高い親和性／結合活性 の中和性および／または保護性のＨＩＶ４’ｅ異的な抗体を選択する。さらに、 インビトロのリンパ球増殖反応、ＰＮＤとインキュベートしたときのＩＬ−２分 泌および細胞毒性リンパ球（ＣＴＬ）の生成を用いて、ワクチンがＨＩＶに対し て有効か否かを測定することができる。抗体の産生を誘導および／またはＰＮＤ リンパ球増殖、Ｉ　Ｌ−２もしくはＣＴＬを誘導したコンツユゲートはＨＩＶの 伝播防止および処置に膏用である。

発明の詳細な説明 本発明は、ＨＩＶの処置および伝播防止に用いるペプチド担体コンジュゲートワ クチンに関する。本発明は、ＨＩＶのｇｐ１２０　ＰＮＤのアミノ酸配列に類似 したアミノ酸配列を何するペプチドおよびワクチンを得るための担体のコンジュ ゲート化、ＢＣＧによる動物のプライム、該ワクチンによる動物の免疫化、免疫 した動物からの抗体含有液の抽出、ならびにチメロサールを含有する希釈剤を含 み、高い親和性／結合活性の中和性および／または保護性のＨＩＶ特異的な抗体 を選択する抗原限定ＥＬＩＳＡでの抗体含有液の検定を包含する。高い親和性／ 結合活性の中和性および／または保護性のＨＩＶ特異的な抗体の産生を誘導、お よび／またはＰＮＤにインビトロ暴露したときにＩ　Ｌ−２分泌および／または 増殖反応を誘導したワクチンはＨＩＶの伝播防止および処置に膏用である。

本発明のペプチドとのコンジュゲート化に用いることができる担体には、Ｍｙｃ 。

ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ由来のツベルクリンの精製タン パク質誘導体（Ｐ　Ｐ　Ｄ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ の外毒素Ａ１キーホール・リンペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソ イド、ジフテリアトキソイド、Ｂ型肝炎のコア抗原、およびＢａｃｉｌ　ｌｕｓ 　Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ（Ｂ　ＣＧ）の細胞壁が含まれる。さらに、 アルミナ、Ｒｉｂｉ、フロイント、Ｉｓｃｏｍまたはマイクロカプセル封入法に よるアジュバントなどのアジュバントを上記担体のすべてと共に用いることがで きる。

本発明のペプチドを製造するためには、ＨＩＶのどの株が個体に感染するか、お よびそれぞれの株のどのペプチドが最も効率的に高い親和性／結合活性の中和性 および／または保護性のＨＩＶ特異的な抗体の産生を誘導するかを測定すること が必要である。多数の異なるＨＩＶ株が存在し、異なる株は異なる地域に多く存 在する。従って、本発明のワクチン中のペプチドは地域に特異的なものであって よい。例えば、ＨＩＶのＭＮ株は米国において多（存在している。従って、ＨＩ ＶのＭＮ株に由来するペプチドは、米国の個体にワクチン接種するために用いる コンジュゲートに有効である。これら特定のペプチドおよびフンシュゲートは他 のＨＩＶ株が多く存在している異なる地域においては有効ではな（、特定の地域 において進化した最も多く存在する株に応じて調整しなければならないであろう 。別の例は、ＨＩＶのＭＮ株のｇｐ１２０　ＰＮＤに対する高親和性／結合活性 の中和性および／または保護性のＨＩＶ特異的な抗体が、米国におけるｍａｔｅ ｒｎｏ−胎児のＨＩＶ伝播からの保護と関係していることである。従って、ＨＩ ＶのＭＮ株に由来するペプチドをフンシュゲートに用いて米国におけるＨＴＶの ｍａｔｅｒｎｏ−胎児伝播を防止することができる。

本発明のペプチドはＨＩＶのｇｐ１２０ＰＮＤに由来する。選択されるペプチド は、ＭＮ−ＨＩＶのｇｐ１２０のアミノ酸１１６〜１３１，３０７〜３１９およ び４７０〜４９０を含んでいてよい。高い親和性／結合活性の中和性および／ま たは保護性のＨＩＶ特異的な抗体の産生を誘導する最も有効な配列（本発明のコ ンジュゲートの好ましいペプチド配列である）は次の通りである：ＳＥＱ、ｌＤ 、ＮＯ，Ｉ　ＧＰＧＲＡＦＧＰＧＲＡＦＧＰＧＲＡＦＣ；ＳＥＱ、ｌＤ、ＮＯ， ２１ＹＩＧＰＧＲＡＣ：ＳＥＱ、ＩＤ、ＮＯ，３１ＡＴＧＰＧＲＡＣ；ＳＥＱ、 ＩＤ、Ｎｏ、４　１ＨＴＧＰＧＲＡＣ。

ＳＥＱ、ＴＤ、ＮＯ，５ＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ。

ＳＥＱ、ＩＤ、ＮＯ，６Ｒ３ＩＨＴＧＰＧＲＡＦＹＡ；ＳＥＱ、ＩＤ、ＮＯ，７ ＫＳＩＴＫＧＰＧＲＶＩＹＡ。

ＳＥＱ、ＩＤ、ＮＯ，８ＫＧＩＡＩＧＰＧＲＴＬＹＡ；ＳＥＱ、ＩＤ、Ｎｏ、９ 　５ＲＶＴＬＧＰＧＲＶＷＹＴ０可溶性のペプチドはそれらがＴおよびＢ細胞反 応性エピトープを欠き、低分子量であるが故に免疫原性が低いので、本発明のペ プチドを別の担体とコンジュゲート化して免疫原性を高める。これらペプチドを 担体とコンジュゲート化する方法には、Ｃ末端ペプチドシスティン結合によるジ スルフィド結合、グルタルアルデヒド溶液による２時間のカップリング、チロシ ンによるカップリング、または水溶性カルボジイミドによる力、ブリングが含ま れる。

担体がＰＰＤであるときには、ＰＰＤネガティブの個体はフンシュゲートワクチ ン接種の前にＢＣＧでプライムすべきである。個体がＰＰＤネガティブであるか またはＰＰＤポジティブであるかを調べるために、増殖反応試験または皮膚試験 を行なってよい。増殖反応試験で個体がＰＰＤに対して末梢血液リンパ球に対す るインビトロの増殖反応を示したときには、その個体はＰＰＤ反応性である。

皮膚試験では個体を皮肉５ＴＵのＰＰＤに暴露すべきであり、ネガティブであれ ば２０ＴＵのＰＰＤに暴露すべきである。個体がＰＰＤポジティブであるときに は、ＢＣＧでプライムする必要はない。個体がＰＰＤ不カテイブであるとみなさ れるときには、コンジュゲートワクチン接種の４〜６週間前に個体にＢＣＧ免疫 化を行なうべきである。ＢＣＧ免疫化の後に、ＰＰＤ試験をもう一度行なうべき である。ＰＰＤ試験の結果がポジティブであれば、フンシュゲートワクチンをそ の個体に投与する。

個体がＨＩＶネガティブかつＰＰＤネガティブであるときには、ＢＣＧプライム に制限はない。しかし、個体がＨＩＶポジティブかつＰＰＤネガティブであると きには、その個体が無症状および／またはその個体のＣＤ４　Ｔ−細胞の計測数 が２００を越える場合にのみＢＣＧでプライムすることができる。ＨＩＶポジテ ィブかつＰＰＤネガティブであって進展した症状を示す個体はＢＣＧでプライム すべきでない。さらに、標準の英国製または日本製のＢＣＧワクチンは個体に副 反応を誘導することが非常に少ないので、これらのワクチンをプライムに使用す ることが推奨される。

本発明のペプチド−担体コンジュゲートは、ワクチン形態、廃剤形態、皮肉、皮 下、経口で、または任意の他の適当な経路で投与することができる。ワクチンは 単一のペプチド担体コンジュゲートまたは数種の異なるペプチド担体コンジュゲ ートのカクテルを含有していてよく、また、液体の形態または定期放出、ノクル ス放出もしくは遅延放出機序（例えば、ビロソームなど）で投与してもよＬＸｏ 　ビロソームはその系中にウィルス特異的な抗原を含んでおり、次いでマクロフ ァージと強く反応する。このようなビロソームは、１〜１０μｇのＰＰＤもしく はインフルエンザ赤面球凝集素（ＨＡ）に結合したＰＮＤペプチド、またはＰＰ ＤもしくはＨＡに会合しているが共有結合していない遊離状態のＰＮＤ、１〜１ ０μｇのインフルエンザウィルスのヒト株から単離したＨＡ、０．１〜１μｇの インフルエンザウィルスのヒト株から単離したノイラミニダーゼ（ＮＡ）、０． ２５〜０．７５ｍｇのケファリン、および１００〜１４０ｍｇのレシチンを含有 してｔｌでよＬＳ０ペプチド担体コンジ二ゲートによる１回のワクチン接種また は複数回のワクチン接種のいずれかを用いて、高い親和性／結合活性の中和性お よび／また：ま保護性のＨＩＶ特異的な抗体の産生を誘導することができる。好 ましｔ）用量範囲（よコンジュゲートあたり５０〜５００Ｉ１ｇのペプチドであ る。後日に、抗体を含有する液体をワクチン接種した個体から抽出する。次いで 、この抗体含有液を検定する。この検定はチメロサール含有の希釈剤を含んでお り、高い親和性／結合活性の中和性および／または保護性のＨＩＶ特異的な抗体 を選択する抗原限定のＥＬＩＳＡである。

この検定を行なうために、上記抗体が反応性である抗原、例えばＭＮ−ＰＮＤま たは他の血清に多いＨＩＶ株から導いた別のＰＮＤ抗原を用い、以下の減少する 被！ｌｊｌ＆系列でマイクロプレートのウェルを被覆する：Ａ列　：　５００ｎ ｇ／ｍｌ ８列　：　１１００ｎ／ｍｌ ０列　：　５０ｎｇ／ｃｌ ワクチンが担体にコンジュゲート化した異なるペプチドのカクテルを含有してい るときには、プレートのウェルのすべてをワクチン中の全ペプチドで被覆して、 高い親和性／結合活性の中和性および／または保護性のＨＩＶ特異的な抗体の産 生の誘導が存在するか否かを測定する。そのような抗体が産生されていたら、プ レートのそれぞれの列がカクテル由来の別々のペプチドて被覆されている第２の Ｅ　Ｌ　Ｉ　Ｓ　Ａを行なう。

次いで、抗体含有液をワクチン接種した個体から採取し、抗体含有液希釈剤でｌ 　２１〈試料　希釈剤）の比まで希釈し、ウェルの系列に添加する。この抗体含 有液希釈剤は、チメロサールを含む緩衝溶液中の添加剤の配合物からなる。この ような抗体含有液希釈剤の例は、０．０５％Ｔｓｅｅｎ−２０（ｐＨ７，４）、 ０．００１％ローダミンおよびチメロサールを含有するＰＢＳ中の０１〜０５％ カニ／ンである。任意の抗体含有液を用いることができる。抗体含有液の例は血 清、血漿、を髄液および粘液である。また、ネガティブ対照（抗ＨＩＶネガティ ブヒト血清など）およびポジティブ対照（抗ＨＩＶポジティブヒト皿清または抗 ＨＩ　Ｖ−ＭＮ−ＰＮＤモノクローナル抗体など）もＥＬＩＳＡプレートのウェ ルに加えるべきである。次いで、このプレートを被覆し、３７°Ｃで６０分間イ ンキュベートすべきである。

インキュベートの後、このプレートを希釈したプレート洗浄液［１：１０でクロ ラセテミドを含有する脱イオン水で希釈した０、０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含む リン酸緩衝食塩水（ｐＨ７，４）’］を用いて５〜６回洗浄すべきである。自動 プレート洗浄器の使用が推奨される。洗浄の後、ウェルあたり１００μｌの抗− ヒトコンジュゲート［ペルオキシダーゼ−フンシュゲート化（ヤギ）　Ｆ　ａｂ 　１抗ヒトＩｇＧ、抗ヒトＩｇＡまたは抗ヒト分泌成分（ＳＣ）など：コンジュ ゲート希釈剤で１１００．０００に希釈コをウェルに加える。任意のコンジュゲ ート希釈剤を用いることができる。このフンシュゲート希釈剤は、例えば、当業 者が抗体フンシュゲート溶液に普通に加える緩衝溶液中に添加剤を配合したもの からなっていてよい。次いで、ウェルを３７℃で６０分間インキュベートし、希 釈したプレート洗浄液を用いて５〜６回洗浄する（ここでも、自動プレート洗浄 器の使用が推奨される）。

洗浄の後、２００μｌの基質［Ｏ−７二二レンジアミン（ｏ−ＰＤ）錠剤など； クエン酸緩衝液中の過酸化水素で希釈（１２ｍｌの希釈剤に対して１個の錠剤） ］をウウニあたりに加える。次いで、このウェルを室温で３０分間、暗所でイン キュベートする。次に、ウェルあたり５０μｌの４Ｎ硫酸を加えることによって 反応を止める。次いで、このプレートについて、マイクロプレート分光光度計で ４９２ｎｍの吸光度を読み取ることができる（６２０ｎｍの対照フィルターの使 用が推奨される）。

対照のためには、ヒトネガティブ対照の値は平均が約００５０であるべきである 。カットオフ値は約０．１００であるべきである。ヒトポジティブ対照は少なく とも５番目のウェル（５ｎｇ／ｍｌ）まで通過すべきである。

抗体含有液について、吸光度の値が第４列またはそれ以下においてカットオフ値 より大きければ、液中の抗体は低親和性である。吸光度の値が第５列またはそれ 以上（５ｎｇ／ｍｌ）においてカットオフ値より大きければ、その抗体は中親和 性である。吸光度の値が第５列またはそれ以上（５ｎｇ／ｍｌに等しいかまたは それ以下）においてカットオフ値より大きければ、その抗体は高親和性である。

次いで、置換検定を行なって高親和性の抗体を確かめることができる。

誘導された抗体（インビボおよびインビトロ）の親和性を、ＰＨＡＲＭＡＣＩＡ ＢＩＡＣＯＲ＋システムよれは、バイオセンサーに基づ（技術であり（Ｂｉｏｓ ｐｅｃｉｒｉｃ　Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　：　Ｂ　Ｉ　Ａ ）、ラベル（放射活性または蛍光）を必要とすることなくピコモル範囲まで生物 分子の相互作用を評価するコを用いてさらに評価することができる。ＢＩＡは、 遊離溶液中の分子と共に表面に結合した分子のＫＡおよびＫＤを測定する。小型 の感知表面上で光ビームを反射させることによって、抗原／抗体結合（会合−解 離定数）について定量的な動力学的データを得ることができる。

次いで、高親和性／結合活性の中和性および／または保護性のＨ＋Ｖ特異的な抗 体（ＥＬＩＳＡによって選択される）の産生を誘導したコンジュゲートワクチン を、ＨＩＶの処置および伝播防止に用いることができる。

寒寒ｆｆ１ｌｌ　担体ＫＬＨ，ＰＰＤ、アビジンおよび破傷風菌に結合させたペ プチドのフンシュゲートによるマウスの免疫化異なる担体に結合させたペプチド ＫＲＩＨ＋ＧＰＧＲＡＦＹＴ（ＭＮペプチドまたはＭＮ−ＰＮＤ）を用いてマウ スを免疫した。文献ＩＭｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙ＋ｎｏ１．７０°１５９　（１ ９８０）ｌに記載のようにしてキーホール・リンベット・ヘモシアニン（ＫＬＨ ）に結合させたＭＮペプチドを用いて５匹のマウスを免疫した。このマウスから 採血し、ＭＮ−ＰＮＤに指向性の抗体力価をＭＮ−ＰＮＤに特異的なＥ　Ｌ　Ｉ 　Ｓ　Ａによって測定した。ＫＬＨ−ＭＮ−ＰＮＤコンジュゲートで免疫したマ ウスから得たＩ　：　１４００希釈の血清は、０１以下のバックグラウンドで３ ．８５（ＫＯ）、０．５９８（Ｋｌ）、１．７６２（Ｋ２）、０．２８２（Ｋ３ ）、および０．３５６（Ｋ４）の光学密度を有していた。４力月後にこのマウス をＫＬＨ−ＭＮ−ＰＮＤでブースター処理し、次いで血清の反応性を調べた。こ のデータを表１にまとめる。免疫されたマウスのすべてがＭＮ−ＰＮＤに対して 高力価と高親和性抗体を有していた。マウスに４を犠牲にした。その肺臓を取り 、これを用いてＭＮ−ＰＮＤに対するモノクローナル抗体を調製した。ＭＮ−Ｐ ＮＤを認識する複数のモノクローナル抗体が得られ、その一部は中和性であった 。他のマウスをＰＰＤ−ＭＮ−ＰＮＤ、アビジン−ＭＮ−ＰＮＤおよび破傷風菌 −ＭＮ−ＰＮＤコンジニゲートで免疫した。これらマウスからの血清はＭＮ−Ｐ ＮＤに対して指向性の有意の活性を有していなかった。

５０００　０．０５４　Ｇ、０５６　０．１５１　１．９４６０．１７３　２． ０９８　０．０？６　Ｑ、２７９　０．０７５　１．７０４@０．１０８ １０００　０．０９３　０．０５６０．０７３　１．０９６　０．１３１２１． ７９　０．１２５　０．４０５　０．０７５　２．０５４　O．１６５ ５００　０．０９４　０．０５８　０．０７３　１．２３１　０．１０５　１． ２３　０．１１１　０．２６ｇ　０．１０１　１．７２９　O．１３５ １００　０．０５５　Ｇ、０５３　０．０７　０．２２９　０．０６９　０．４ ２３　０．０ｇ４　０．１４９　０．０９１　１．０１８　O．１１ｇ ５０　０．０６２　０．０５７　０．１１２　０．４７７　０．１０８０．３８ ９　０．１０７　０．２５４　０．０９４　０．７４８　０D１４４ １０　０．０５９　Ｑ、０５９　０．０８３　０．１４　０．０９４　Ｑ、２３ ９　０．４５　０．０９３　０．１０５　０．５７８　０．P３６ 実施例２　担体毒素Ａに結合させたペプチドのフンシュゲートによるマウスの免 疫 ＰＮＤ−Ｉｔ素人フンジ二ゲートの調製固体カルボジイミド（１ｇ）を、アジピ ン酸デヒドラジドで誘導体化した毒素Ａ［ＴＡ−ＡＤＨ、リン酸緩衝食塩水（ｐ Ｈ７，４：　ＰＢＳ）中、５　、９　＠ｇ／　ｍｌ］（ｌ　ＯＯｍｇ）に加えた 。０．３Ｎ　ＨＣＩを加えることによってｐＨ４，８に調節した。この混合物に 、ピロゲンを含まない水（２，５ｍ１）中のＭＮ−ＰＮＤペプチド（５０＋Ｉ１ ｇ）を一定の撹拌のもとて徐々に加えた。この混合物を周囲温度で３時間撹拌し た。この混合物を０．４５μｍのフィルター・ユニットを用いてフィルター滅菌 し、５ｅｐｈａｄｅｘＧ７５カラムに通して反応物質からコンジュゲートを分離 した。ボイドボリュームで溶出したコンジュゲート含有分画を濃縮し、ＰＢＳに 対して透析し、フィルター滅菌した。このフンシュゲートを１ＩＩｌｌのＰＢＳ 中に２００ｇｇの全タンパク質まで希釈し、ＡＩ（ＯＨ）、に吸収させた。

免疫化の研究 吸収させたフンシュゲート（５０ｇｇ）を、３匹のモルモットの群に０日および １４日目に筋肉内でワクチン接種した。血清試料を０日、１４日および２８日目 に得た。プレートをＭＮ−ＰＮＤペプチドで被覆し、連続希釈した抗血清とウェ ルを反応させ、洗浄後にプレートを抗モルモｙトｒｇＧ抗体と反応させることに よって抗ＭＮ−ＰＮＤペプチドＥＬＩＳＡを行なった。以下の表２に示すように 、このコンツユゲートは抗ＭＮ−ＰＮＤ抗体反応を刺激しなかった。

日　平均ＥＬＩＳＡ力価 実施例３　担体毒素Ａに結合させたペプチドのコンジュゲートによるマウス、ウ サギおよびモルモットの免疫 ペプチドの担体に対する比が３・ｌでＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎ ｏｓａの外毒素Ａ（毒素Ａ）に結合させたＭＮ−ＰＮＤにより、マウス、ウサギ およびモルモットを免疫した。さらに、このＭＮ−ＰＮＤはカルボキシ末端に次 ぐチロフン残基を欠いていた。動物を０日と１４日に免疫した。血清を０日、１ ４日および２８日に採取した。用いた量は、モルモットには５および２５μｇ１ ウサギには５．１０および５０ｇｇ１そしてマウスには２および１０ｇｇであっ た。コンジュゲート単独またはアルミニウム中で免疫を行なった。これらの免疫 によって得られる血清はどれもＭＮ−ＰＮＤに対して反応性を全く示さなかった 。これは恐らく毒素Ａの免疫原性、結合の問題または用いた量のいずれかによる のであろう。

実施例４　担体ＰＰＤに結合させたペプチドのフンシュゲートによるモルモット の免疫 ＰＰＤ−ＭＮ−ＰＮＤコンジュゲートの調製滅菌蒸留したＨ、０（４００μ＋） 中のＭＮ−ＰＮＤ（４ｍｇ）を、ｌｏｇ、／＋１の滅菌ＰＰＤ−ＲＴ２３（４ｍ ｌ）と混合した。担体ＰＰＤ−ＲＴ２３は５ｔａｔｅｎｓ　ＳｅｒｕｍＩ　ｎ５ ｔｉｔｕｔｅ［Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、　Ｄｅｎ＋５ａｒｋｌから入手した。担 体ＰＰＤ−２９８はＣｏｎｎａｕｇｈｔ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ［Ｗｉｌｌ ｏｖｄａｌｅ、　Ｔｏｒｏｎｔｏ］から入手した。ＰＰＤ−２９８−Ｈ。

０は、ＰＮＤＭＮペプチドとＰＰＤ−２９８担体のコンジュゲート化が水中で行 われたことを示す。ＰＰＤ−２９８−ＰＢＳは、ＰＮＤ−ＭＮペプチドとＰＰＤ −２９８担体のフンシュゲート化がＰＢＳ中で行われたことを示す。次いで、０ ．２％グルタルアルデヒド（４５μｌ）をＰＰＤ−ＭＮ−ＰＮＤ溶液に加え、旋 回混合し、２２℃で３０分間、暗所でインキュベートした。さらに、０．２％グ ルタルアルデヒド（２０μｌ）を加え、この溶液を９０分間インキュベートした 。この時点で溶液は乳白色を発しているように見えた。この反応混合物を滅菌透 析管に移し、４℃で２４時間、滅菌ＰＢＳ（ＩＬ）に対して透析した。反応混合 物に加えたＰＰＤの合計量を透析後の試料の最終容量で割ることによってＰＰＤ の濃度を算出した。このフンツユゲートの一部をピロゲンを含まない滅１１１Ｐ Ｂｓで希釈してＬｌあたり２０ｇｇのＰ　Ｐ　Ｄ（〜１０００　Ｅ／ｍｌ）とし 、Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｐｈａｒｍａｃ。

ｐｅａのガイドラインに従ってこのワクチン調製物の無菌性と全般的な安全性を 測定した。試料の残りは未希釈のまま４℃で維持した。

モルモットにおけるＰＰＤ　ＭＮ−ＰＮＤコンジュゲートの免疫原性５匹のモル モットのグループをｌｏ”ｃＦＵのＢＣＧまたは食塩水でプライムした。次いで 、プライムの１４日および２８日後にＰ　Ｂ　Ｓ　（０，１ｍ１）中のＰＰＤ− ＭＮ−ＰＮＤコンジュゲート（１０または５０ｇｇ）で動物を免疫した。プライ ムの１４日、２８日および４２日目に動物から採血した。次いで、血清をＭ　Ｎ 　−ＰＮＤ　ＥＬＩＳＡで検定してＰＰＤ−ＭＮ−ＰＮＤコンジ二ゲートの免疫 原性を測定した。

ＭＮ−ＰＮＤ　Ｉ（ＩＶ　ＥＬｒＳＡのブａトコ−ルＤ　ｙｎａＬｅｃｈポリス チレンプレートを、１．０ｇｇ／ｍｌのＭＮ−ＰＮＤ［炭酸緩衝液中、ｐＨ９， ６］（１００μｌ）を用い、２２°Ｃで一晩被覆した。溶液を除去し、次いでＰ ＢＳ（ｐＨ７，４）中ノウシ血清アルブミ７（Ｂ　Ｓ　Ａ）＋７）　ｌ　ｍｇ／ ｍｌ溶液（１００μｌ）を用いて２２℃で１時間ブロックした。１：２０から始 めたＰ　Ｂ　Ｓ　−Ｔ　ｗｅｅｎ（ｐＨ７，４）中の血清の２倍連続希釈液（１ ｏＯμｌ）をそれぞれのウェルに分注し、このプレートを３時間インキュベート した。プレートをＰ　Ｂ　Ｓ　−Ｔｗｅｅｎ（３００μｌ）で３回洗浄した。ベ ルオキシダーゼーコンジコゲート化したウサギ抗モルモット［ｇＧ［Ｐ　Ｂ　Ｓ −Ｔｗｅｅｎ中でｌ　：　２５００　；　Ｎｏｒｄｉｃ　１ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ＋　Ｔｉｌｂｕｒｇ、　Ｔｈｅ　Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ］（ｌ　ＯＯμｌ）を それぞれのウェルに加え、プレートを２時間インキュベートした。このプレート をＰＢＳ−Ｔ豐ｅｅｎ中で３回洗浄し、リン酸ｐ−ニトロフェニル［Ｍｅｒｃｋ ］（１００μｌ）をウェルに加えた。次いで、このプレートを２２℃で６０分間 インキュベートした。４０５ｎｍでの吸光度をＤ　ｙｎａｔｅｃｈ　Ｍ　Ｒ５０ ００微量滴定プレートリーダー［Ｄｙｎａｔｅｃｈ、　５ｖｉｔｚｅｒｌａｎｄ ］を用いて測定した。滴定曲線の直線部分（０，１５と０．６の開）の血清希釈 を、対応する血清希釈の逆数と乗じてＥＬＩＳＡ単位として表した。

以下の表３に示すように、ＢＣＧによるモルモットのプライムとそれに続くＰＰ Ｄ　ＭＮ　ＰＮＤコンジュゲートによる免疫によって、高い親和性／結合活性の 中和性および／または保護性のＨＩＶ特異的な抗体の産生が誘導された。ＢＣＧ でプライムされたモルモットの抗体力価はＢＣＧでプライムされなかったモルモ ・／トの力価よりも非常に高く、従って、コンジュゲート免疫の前にＢＣＧでプ ライムすることによってコンジュゲート免疫に対する免疫系のより良好な反応が 引き起こされ、それにより高い親和性／結合活性の中和性および／または＠膜性 のＨＩＶ特異的な抗体の産生がより効率的に誘導されることがわかった。ＢＣＧ でプライムされなかったモルモット（グループｄ）の抗体力価は、ＰＰＤ−ＭＮ −ＰＮＤコンジュゲートワクチンで免疫されなかったモルモット（グループａ） より統計学的に高くはなかった。

敷３　ＢＣＧプライムおよび非プライムモルモットにおけるＰＮＤ−ＭＮ−ＰＰ Ｄコンジュゲートの免疫原性ワクチン　用１（μｇ）　幾何平均ＥＬＩＳ＆単位 （範囲）ＰＰＤ−Ｍｌｌ−ＰＮＤ　１０　２．４　（２，１４−２゜７８）ｄＰ ＰＩ）−１１Ｎ−ＰＮＴ）　５０　６．０　（５，６１１−６，１２）ｄＰＰＤ −１１Ｎ−ＰＭＤ　Ｉｏ　１２１．　ｌ　（５，４０−４６２，１）ｂＰＰＤ− ＭＮ−ＰＮＤ　５０　１４．１　（５，５６−２５，６８）ｃＲＴ２３　１０　 ２１．０　（６，７−７０，８）ｂＲＴ２３　５０　１８０．５　（４９，４− ６９２，５）ｂＰＰＤ−２９８−）！、０　１０　３１．１　（４，９−１８１ ，９）ｂＰＰＤ−２９８−Ｈ，０５０１４２，２（３１，０−３９３，０）ｃＰ ＰＤ−２９８−ＰＢ５　１０　２２．８　（６，３−２３２，０）ｃＰＰＤ−２ ９８−ＰＢ５　５０　６３．２　（９，６−８５８９）ｃａ：４匹のモルモット からの免疫前血清の幾何平均ＥＬＩＳＡ単位ｂ：４匹りモルモットからの免疫後 血清の幾何平均ＥＬＩＳＡ単位Ｃ：３匹のモルモットからの免疫後血清の幾何平 均ＥＬＩＳＡ単位ｄ：Ｂ’ＣＧでプライムしなかったモルモット実施例５　担体 ＰＰＤに結合させたペプチドのフンシュゲートによるモルモットおよびマウスの 免疫 モルモットおよびマウスを、２種類のＰＰＤに結合させたＭＮ−ＰＮＤで免疫し た。ＰＰＤ免疫した動物の一部は初めにＢＣＧでプライムした。表４は、ＭＮＰ ＮＤに対する動物の免疫反応性を示すものである。表５は、ＭＮ−ＰＮＤに対す る血清の反応性の滴定を示すものである。表６は、抗原限定ＥＬＩＳＡで測定し たときのＭＮ−ＰＮＤに対する親和性を示すものである。試料＃６４７４および 試料＃６４６９については中和活性を検定した。得られた結果は、どの血清もＭ Ｎ−ＰＮＤに対して中和活性を有していないことを示した。

ｆｉ４　ＰＰＤに結合させたＭＮ−ＰＮＤて免疫したマウスおよびモルモットの 反応性 ７２９５　４２　３．３　１　グループＩ＋３　４２　２．４７２８７　２８　 ２．９０　ｆｌ、４（１０，１２０，０９［１，０７７２９２２８０，２７ ７２９３４２３，６００，５２（１，１２０，０ｇ　０．０７７２９４　４２　 ３．１０　１，３０　０，２７　０．１８　０．１０？２９８　４２　３．５０ 　０．２４　０，０９　０．０６　０．０４疫 実施例５に記載したモルモットにおけるＰＰＤ−ＭＮ−ＰＮＤコンジュゲートの 免疫原性に基づいて、５人のＰＰＤ−ポジティブのヒトをこのコンジユゲートで 免疫した。５人のヒトボランティアからのｒｍ清の反応性を、ＰＰＤ−ＭＮ−Ｐ ＮＤによる免疫の１力月後に検定した。ＭＮ−ＰＮＤに対する有意のＩｇＧまた はＴｇＭは検出されなかった。免疫の２力月後にもう一度血清を検定した。表７ はこの検定の結果を示すものである。

轟ヱ　免疫の２力月後のＭＮ−ＰＰＤ−ＰＮＤに対するヒトボランティアの反応 性 化成光度（４１０ｎ＋ｎ） ネガティブ対照　０．０６７　０゜０５４　０．０６３ネガテイブ対照　０．０ ９９　０．０５９　Ｑ、　０９６ポジテイブ対照　ＯＪ　Ｏ，４３４０Ｊ５７ボ ランテイア＃　１　０．２２９　０．４６３　０．３８８ボランテイア＃　２　 Ｇ、　０５４　０．０６ｇ　０．０６８ボランテイア＃　３　０．０９６　０． １１４　０．１０５ボランテイア＃　４　０．０５５　０．０６５　０．０７１ ボランテイア＃　５　０．０４９　０．０５５　０．０７６ボランテイアの２回 目の免疫を行なった。血清試料を、それぞれの免疫の前ならびに免疫の約１４日 および２８日後に採取した。以下の表８に示すように、第２の免疫の後には、１ 人の対象は極めて強い反応者であり、１人は「ボーダーライン」反応者であり、 そして２人は非反応者であった。

ｆｉ８　ＭＮ−ＰＮＤに対する反応性の検定＊試料＃ｌ−０．３７０±０．０５ ７ 試料＃２−　０．０６３±０．０３８ 試料＃３−　０．１０５±０．００４ ポジテイブ　０．３６３±０．０３１ ネガテイブ＃１　０．０８４±０．０１０＊免疫の４４日後に得た試料で３回行 なった。

試料＃１はネガティブ対照とは有意に異なっており（ｐ＜０．００１）、試料＃ ３はネガティブ対照とは有意に異なっているであろう（ｐ＜０．０５）。

ボランティアの３回目の免疫を行なった。ＰＰＤ−ＭＮ−ＰＮＤフンシュゲート による第３の免疫の後に、１人のボランティアの血清は高力価の高親和性／結合 活性のＨＩＶ特異的な抗体を有していた。ＭＮ−ＰＮＤに暴露したときには、リ ンパ球はインビトロでインターロイキン〜２の分泌と増殖で応答した。このこと は、完全な免疫反応が誘導されたことを示すものである。抗体の産生から明らか なように、Ｂ細胞の体液性免疫反応が誘導された。また、コンジュゲートに暴露 したときのＴ細胞の増殖およびインターロイキン−２（免疫反応の媒介物質であ る）の分泌によって示されるように、Ｔ細胞の免疫反応も誘導された。他の３つ の血清試料は有意の免疫学的反応を示さなかった。高い親和性／結合活性のＨＩ Ｖ特異的な抗体がＨＩＶ＠染した無症状の個体においてより頻度高く見い出され たという事実は、この抗体が保護性であるということを示すものである。

実施例７　ペプチドの合成ならびに担体ＫＬＨに結合させた合成ペプチドのフン シュゲートによるマウスの免疫 ＭＮ−ＰＮＤに加えて、４種の他のペプチドを合成した。これらのペプチドは、 ２８２（ＧＰＧＲＡＦＧＰＧＲＡＦＧＰＧＲＡＦＣ）、２８３（ｒＹＩＧＰＧＲ ＡＣ）、２８４（ｒＡＩＧＰＧＲＡＣ）および２８５（Ｉ）（ＩＧＰＧＲＡＣ） ’？”ある。

これらペプチドを上記のようにＫＬＨに結合させた。５匹のマウスをそれぞれの ペプチドコンジュゲートで免疫し、２力月後にブースター処理した。血清を採取 した。図１は、それぞれのペプチドに対する反応性を示すものである。図２は、 最高力価の抗体とのマウスの親和性／結合活性を示すものである。ペプチドの免 疫原性に差異があった。２８４が最も免疫原性が高く、２８５は全く免疫原性で はなかった。２８３および２８４で免疫したマウスの一部はＭＮ−ＰＮＤに対し て極めて反応性が低かった。ペプチド２８２をＥＬＩＳＡを行なう前にマウス２ ８３−５からの血清とインキュベートしたときにペプチド２８２はマウス血清中 の抗体と結合（競合）したが、ＭＮペプチドはマウス血清抗体とインキュベート したときにそれと競合しなかったという事実によって明らかなように、上記のこ とはＥＬＩＳＡの人工物ではなかった。対照的に、２８２およびＭＮの両ペプチ ドは、マウス２８４−４の血清中の抗体と競合（結合）することができた。

２　合成ペプチドに対するヒトの免疫反応性ＰＮＤペプチドの特異な免疫原性の 観察に基づいて、２０のＨＩＶポジティブの個体からの血清につき、５種類の表 示したペプチドとの反応性を調べた（表９を繋照）。８つの試料は５ペプチドの うちの少なくとも４つと反応し、１つの試料は５ペプチドのうち３つと反応し、 １つの試料は５ペプチドのうち２つと反応し、６つの試料は５ペプチドのうち１ つだけと反応した。１つの試料はネガティブであり、３つの試料は高いバックグ ラウンド値を有していた。ＭＮ−ＰＮＤに対して親和性の高い抗体を有していた ８個体のうち２個体は２８２に対して親和性の高い抗体を有していた。さらに、 ＭＮ−ＰＮＤに対して親和性の高い抗体を宵していた８個体のうち、５個体は５ ペプチドのうちの５つを認識し、１個体は５ペプチドのうちの４つを認識し、１ 個体は５ペプチドのうちの３つを認識し、そして１個体は５ペプチドのうちの１ つを認識した。このことは、ＭＮ　ＰＮＤに対する高親和性／結合活性の抗体を 有する個体のグループの中に複数のサブグループが存在し、その一部がＨＩＶに 対してより保護性が高いこともあることを示すものである。さらに、これは臨床 的な予後の意義を有しており、これが多価ワクチン中の複数のペプチドの色画に 影響を及ぼすであろう。

（ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ（１，０２ ｔｔ　Ｏ，０３５ ＩＹＩＧＰＧＲＡｃ　０．０３ ”　０．０１８ １＾ＩＧＰＧＲＡＣ０，０２５ ”　０．０２１ １ＨＩＧＰＧＲＡＣＯ，０３３ 〃０．０１９ ２２０７ＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ＋２．９４９３．０８９２．９０９２．４ ２６１．８２８０．８５７０．６０８０．４６９（ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ−１，５ ４４０，５７９１，１２３０，６０７０，１１１６１０，４８６０，６１７０， ７７５ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ＋２．８８４２．４４４２．５４４０．４２２０．７ ８７０．４９６０．７７６０．７１１１ＡＩＧＰＧＲＡｃ　＋　３．０３９　２ ．７８１．９８５０．４ｇ４０．８９４０．６７７０．８３２０．９６５１１（ ＩＧＰＧＲＡＣ＋　３．１２６２．９８１２．７８９０．７７３１．０４７０． ６３４１．１］５１．Ｑ８３２４３４　ＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ　＋１．８ ０８１．５１７０．８２８０．２９ｇ　０．３０．２７２０．１７８０．３２４ （ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ＋　３．３９２２．９７９２．８５７２．０３１．８９９ ０．０９７０．８４２１．１４ＩＹＩＧＰＧＲＡｃ　＋　１．６６１１．４２５ １．３２０．１８４０．７４６０．３５８０．６２８０．９６１人ＩＧＰＧＲＡ Ｃ＋ＬＬ２Ｂ２．３？２２．０２ＲＧ、４１（１，ｌ５７７Ｑ、３５５０．３２ ０．３５９ＩＨＩＧＰＧＲＡＣ＋２．１３６１．９１３１．．５１２０．５５０ ．３６７０．３３４０．６３２Ｑ、４５３２４７７　ＫＩ’１ｌＨＩＧにＲＡＦ ＹＴ＋　、　５０　２．７０９２．４＋５２．６０６１．３６５０．７１５０． １５８０．１０３０．O９５ （ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ＋−５０３，２２，１３７２，２１２０，３２３０，３８ ５０，０４１０，０７４０，ｌ５２ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ＋　−１００００，７７ ６０，６８８０，ＩＯ，０５５０，Ｑ２１０．０２７０．０５３０．０９１１＾ ＩＧＰＧＲＡＣ＋−５００２，３６６０，８５６０，９８３０，０５３０，０９ １０，０２３０，０４６０，１３６（ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ＋−５００２，２９１ ，２３０，６６６０，０３１１０，０４９０，０４０，０５２Ｇ、１０８ＩＹＩ ＧＰＧＲＡｃ　＋　−１００００，７８９０，３０３０，ｌ６９Ｑ、０３ｇ０． ０５１０．０３１０．０４７０．０７９ＩＡＩＧＰＧＲＡｃ　＋　−１０００２ ，２４３０，４３２０，１２４０，０１４０，０４０，（１３６０，０４７１］ 、０７３ＩＨＩＧＰＧＲＡＣ＋−５００１，２１４２，０２３１，３５０，０７ ３０，０６３０，０５５０，０４６０，０９２２２３４ＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦ ＹＴ　＋　＋　１０　３．０４９２．９３２２．５４７１．７０５１！３４０． ２０４０．１１１０．０７T （ＣＰＧＲＡＦ）３Ｃ−−５０００，５６４０，４８２０，３０３０，０３８０ ，０３９０，０２ｇ　０．０５０．０４２ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ−−５００００， ２１８０，１１Ｂ　０．０９１０．０２７０．０２９０．０２６０．０３９０． ０３９ＩＡＩＧＰＧＲＡＣ＋　−ｊｏｏｏ　２，３４０．：（８９０，１１６０ ，０１６０，０４４０，Ｑ３６０．０３０．０４９１ｔｌｌＧＰＧＲＡｃ−−５ ００２，３６１０，５２５１，Ｑ４２０．０２３０．０４９０．０３３０．０４ ＋！０４０５７２４８８ＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ＋＋１２．９８３３．１３ １３゜０１２２．３６７１．７７？０．５３１０．３０７０．２４１（ＧＰＧＲ ＡＦ）３Ｃ＋　＋　５０　１．２８２０，９１１１３０．９１０．５３６０．４ ３０．０８ｇ０．１３１０．１４４ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ÷　−１００００，２６ ９［１，２２６０，１５５０，０９２０，０５２０，０７９０，０９５０，１２ ６ＩＡＩＧＰＧＲＡｃ　＋　−５００１，２０４０，２５４０，２２３０，０７ ２０，０２ｇ０．０６３０．０５４０．１２３ＩＨＩＧＰＧＲＡＣ＋　−５００ ２，９６８２，８２９２，３３８０，１３５０，１２９０，０７７０，１０，１ １５２５３５ＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ　＋−５０００，５８４０，２６０， ２３７０，１６２０，１２４０，Ｏｎ、１８２Ｑ、Ｑ７５（ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ ＋　−５００２，２４４１，２７４０，６ｇ５０．０７１０．０７９０．０７６ ０．０７５０．　Ｏｆ！２ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ−−−０，１１５０，０９１０， ０？７　０，０７　０．０７　０．０６０．０８６０．０９９ＩＡＩＧＰＧＲＡ Ｃ＋−５００００，３４７０，１１９０，１６２０，０６３０，０８５０，０６ ７０，０８７０，０９７ＩＨＩＧＰＧＲＡｃ　＋　−５００２，２４４１，９４ ３１，３３９０，１４１０，１０，１４４０，０８０，０９４２＋２６　ＫＲＩ ＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ　＋＋１０　２．１３６１．８７７１．６２７０．６０３ ０．４８５０．３０ｇ　０．１７７０．１R５ （ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ＋　−５０００，６７３０，５１７０，３３３０，０５５ ０，１０ｇ０．０５４０．０９６０．０９１１ＹＩＧＰＧＲＡＣ＋−５００２， ６３３２，０４９１，＋＋５７０．０７７０．１４０．０３７０．０ｇ９０．０ ５３１ＡＩＧＰＧＲＡＣ＋　−５００００，２６６０，１３２０，０９９０，０ ２６０，０３Ｇ、０２５０゜０４１　０．０９（ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ？　？　？ 　Ｑ、０５５０．０９８０．０７２０．２２０．３３３０．２ｇ１０．３４９０ ．５７４ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ？　？　？　０．４６９０．４２３０．４３５０． ２０１０．２７５０．２５ｇ０．２８０．４８９ＩＡＩＧＰＧＲＡＣ？　？　？ 　０．５２５０．２５５０．２７８　０．２４０．２９６０．２３１０．２７９ ０．４０５１ＨＩＧＰＧＲＡＣ？　？　？　ｌ［１０２０，８０６０，６ｇ３０ ．２９５　０．４５０．３０１０．４４２　０．７２１１５　ＫＲＩＨＩＧＰＧ ＲＡＦＹＴ　＋−１００１，３２５１，３６７１，２６３０，３７４０，２３５ ０，１３５０，０６３０，２２S （ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ＋−５００００，２５４０，１３０，１１０，０７１０， ０４２０，０８４０，０９２０，１３５ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ＋−５００００，２ ３７０，１６０，２５４０，０３７Ｇ、　０４２０．０４５０．０４６　０．０ ７ＩＡＩＧＰＧＲＡＣ＋−５００００，７８３０，１４３０，１１０，０６０， ０６５０，０６２０，０９１０，１２ＩＨＩＧＰＧＲＡＣ＋　−５００００，３ ４６０，１８７０，１６６０，０５８０，０？０．０５８０．０８１０．１６８ ２２７０　ＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ　＋　−５００００，３３９０，１３７ ０，１０４０，０４４０，０４４０，０４５０，［１３８０C０７４ （ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ＋　−５０００，７０，５２ｇ　０．３４　Ｑ、０４０． ０４３０．０３５０．０３４０．０６３ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ−−−０，０９６０ ，０７４０，０５２０，０２２０，０２Ｂ　０．０２６０．０２６０．０３３Ｉ ＡＩＧＰＧＲＡＣ−−−０，０８９０，０９６０，１２０，０５６０，０？１０ ．０４３０．．０７５０．０７３ＩＨＩＧＰＧＲＡＣ−−−０，０６２０，０７ １０，０７６０，０６１０，０ｇ　０．０５３　Ｑ、０８　Ｑ、１Ｏ１２１２５ ＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ　÷　＋　ｔｏ　２．６ｇ３２．７０４２．６５２ １．７４ｇ　１．４１６０．２４４　Ｑ、Ｌ２４　p、Ｑ６：（ （ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ＋　−５０Ｑ　１．９Ｇ４０．９４７０．９０５０．０４ ６０．０４５０．０４９０．０７１０．１０７ＩＹＩＧＰＧｌ’ｌＡＣ−−−０ ，０７０，０？１０．０７９０．０４３０．０６７０．Ｑ３６０．０６８０．０ ６９ＩＡＩＧＰＧＲＡＣ＋−５００００，２６６０，１３２０，Ｑ９９０．０２ ６０．０３０．０２５Ｇ、０４１０．０３９ＩＨＩＧＰＧＲＡＣ＋−５００００ ，２９１０，１８５０，０９７０，０２ｇ０．０３８０．０３１０．０３４０． ０３１２３３５　ＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ　＋＋　１０　１．８３９１．１ ９４２．０６２１．５３３１．１８８０．３１３０．１７４　０．P （ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ＋　−１０００・０．４２６０．３４９０．１８３０．０ ３２　０．０５０．０２１０．０６８０．１２６ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ−−−０， １４８０，０７３０，０３１０，０２２０，０４７０，０２６０，０５５Ｑ、　 ０９８１＾ＩＧＰＧＲＡＣ−−−０，１８４０，１２３０，１２９０，０４３０ ，０３４０，０３４０，０４３Ｇ、　＠９８表　９（続き） 反応性親和／結合活性　濃度（■／ｍｌ）試料　ペプチド　＋／〜（ｍｇ／飄１ ）　５０００　１０００　５００　ｔｏｏ　５０　１０　５　０２２３２ＫＲＩ ）ＩＩＧＰＧＲＡＦＹＴ＋＋５０１．１４８１．０Ｂ３０．９７９０．５３７０ ．２＋１１１０．０７８０．０６５０．０７T （ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ−−−０，１２０，０６４０，０５３０，０３０，０４１ Ｑ、０２５Ｇ、０３７０．０４？ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ−−−０，０４４０，０４ ６０，０２４Ｑ、Ｏ１２０，０２Ｂ　０．０１７０．０２６０．０４７ＩＡＩＧ ＰＧＲＡＣ−−−０，０６３０，０５５０，０４３０，０２１０，０３４０，０ ２７０，０３３０，０５９ＩＨＩＧＰＧＲＡｃ　−−−０，１５８０，０３３０ ，０４８０，０２７Ｑ、０３５０．０２７Ｑ、０３５０．０４５２４３６ＫＲＩ Ｉ（ＩＧＰＧＲＡＦＹＴ＋−５００１，３０６０，９ｇ０．５７９０．０９３０ ．０５７０．０２５０．０２６０．０２２（ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ−−−０，０５ ０，０２５，０，０２９０，０３９０，０３２０，０１５０，０Ｌ８０．０２２ ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ−−−０，０２３０，０３４０，０１７０，０１５０，０１ ６０，０１２０，０２０，０１９ＩＡＩＧＰＧＲＡｃ　−−−０，０２３０，０ １９０，０２１０，０２３０，Ｑ１６０．０２４Ｑ、０２６０．０１ｇＩＨＩＧ ＰＧＲＡＣ−−−０，０８４０，０５１０，０３１０，０１８０，０１５０，０ １６０，０２０，０２３２２０５ＫＲＩ）ＩＩＧＰＧＲＡＦＹＴ　−−’−０， ０９４０，０４９０，Ｑ６４０．０４２０．０５５０．０５１０．Ｑ５５０．０ ７１（ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ＋　−５００１，０３７０，４７５０，２２３０，０ ４６０，０４２０，０５４０，０４３０，０５９ＩＹＩＧＰＧＲＡＣ−−〜　０ ．１１３０．０６７０．０６５０．０４２０．０４５　０．Ｑ４　Ｑ、０４１０ ．０４６ＩＡＩＧＰＧＲＡＣ−−−０゜ｉｌｌ　０．０３４０．０５ｇ　０．０ ４２０．０４４０．０５３０．０５７０．０５１１ＨＩＧＰＧＲＡＣ−−−０， １４３０，ｔｏ５０．０７２０．０２３０．０４３０．０４２０．０４９０．０ ６３２２３６　ＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ　−−−０，０３５０，０２６０， ０２５０，０２８０，Ｑ３２０．０２４０．０２ｇ　０．０３２（ＧＰＧＲＡＦ ）３Ｃ−−−０，１，４１０，０？９０．０５７０．０１６０．０２１０．０１ ９０．０２５０．０３８ＩＹＩＧＰＧＲ人Ｃ−−−０，０４３０，０３１０，０ ３２０，０１？　０．０１７　０．０２１　０．０１６　０．０２１人ＩＧＰＧ ＲＡＣ＋−１０００２，３３５０，９１４０，１３７Ｑ、０１＋１．０２１０． ０２３０．０３２０．０３３ＩＨＩＧＰＧＲＡｃ　−−−０，０９５０，０４９ ０，０４０，０１９０，Ｑ２３０．０２４０．０３３　０．０４２１２８ＫＲＩ ＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ−−−０，１７３０，１５ｇ０．１１３０．０６６０．０ ５ｇ０．０５６Ｇ、０５１０．０５７（ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ−−−０，１９６０ ，１１９０，０８０，０２９０，０３５Ｑ、０３１Ｇ、０４３０．０４５ＩＹＩ ＧＰＧＲＡＣ−−−Ｑ、１２５Ｑ、０８７０．０？２０．０２６０．０２６０． ０２１０．０２６０．０４９ＩＡＩＧＰＧＲＡＣ−−−０，０７８０，０３４０ ，０４４０，０２５０，０３４０，０２７０，０１９Ｑ、０４９ＩＨＩＧＰＧＲ ＡＣ＋　−５００１，８２４１，２６２＋、４５６０．０５９０．０７３Ｑ、０ ２６０．０３６０．０７１（ＧＰＧＲＡＦ）３Ｃ−−−０，０８７０，０４８０ ，０４０，０２＋０．０２６０．０２２０．０２ｇ０．０５１１ＹＩＧＰＧＲＡ ｃ　−−−０，０２４０，０２６Ｑ、０３１０．０２２０．０２３０．０２１　 Ｑ、０２５０．０３４ＩＡＩＧＰＧＲＡＣ−−−０，０３０，０４０，０４１０ ，０２７０，０２４０，０２５０，０３３０，０３８ＩＨＩＧＰＧＲＡｃ　−− −０，０３６０，０３９０，０３２０，０２６０，０２７０，０２１０，０２６ ０，（１４８２４３７ＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹＴ−−−０，０５９０，０５２ ０，１１７０，１２１０，０３６０，０３６０，１２５０，０９８（ＧＰＧＲＡ Ｆ）３Ｃ＋　−１００００，２６１Ｑ、１３１ｔＯ，１１５０，０４９０，０４ ２０，０３５０，０４５０，０６６ＩＹＩＧＰＧＲＡｃ　−−−０，０３２０， Ｑ９０．０７７０．０３６０．０４４０．０３５０．０５４０．０７ＩＡＩＧＰ ＧＲＡＣ−−−０，０５７０，０４３０，０４６０，０３６０，０６２０，０４ ７０，０５３０，０７８表１０に示すように、試料＃２２３４はＥＬＩＳＡの前 にＭＮ　ＰＮＤとインキュベートしたときにＭＮ−ＰＮＤと結合したが、ペプチ ド２８２とでは結合しなかった。ペプチド２８２は（ＧＰＧＲＡＦ）ｓＣを含有 しており、ＭＮペプチドは２つの境界を接する配列（ＫＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦＹ Ｔ）によって囲まれたＧＰＧＲＡＦを含有している。このことは、ＭＮ−ＰＮＤ に対する反応性の大部分力（この境界配列にあることを示唆する。試料＃２２３ ２がペプチド２８２に結合することができないことは、境界配列に対する反応性 だけが存在し、ＧＰＧＲＡＦに対する反応性が存在しないことを示唆する。試料 ＃２４３４は高（Ｘツクツクグラウンド値のために解析することが困難である。

試料＃２２７０はフンシュゲート中のペプチド２８２との強い反応性を有してい たが、可溶性ペプチド２８２との反応性は有していなかった。このことは、吸着 されたペプチド２８２が、可溶性ペプチド２８２中に存在しない、血清によって 認識されるエピトープを現す可能性を示唆する。別の可能性は、抗原限定ＥＬＩ ＳＡによって測定される親和性と競合によって測定される親和性の間に不一致か 存在しているというものである。

表１０ 濃度（ｍｇ／ｍ１） ２２３４　０　ＭＮ　１．８０３　２．５９７　２．２０１　１．４１６　０． ６７９　０．１１ｇ　０．０９１　０．０４ｇＭＮ　Ｏ，２８０，４３７０，３ ３５０，０６１０，０５６０，０３６０，０４７０，０３１２８２１，８８７２ ，１９１１，９６１，５１０，７９５０，１３９０，１０９０，０４６０２８２ ０，７０４０，５６７０，４６９０，１８２０，１６３Ｑ、０７７　０．０８６ 　０．０８５２８２　０．２２２　０．１５２　０．１０６　０．０５ｇ　０． ０５　０．０９１　０．０４　０．０７ＭＮ　Ｏ，１１６０，０５７０，１２５ ０，０６９０，０６１１１０，０５ｇ　０．０７４　０．０７３２２３２　０　 ＭＮ　１．３５２　１．３６　１．１５９　０．７８８　０．４３４　０．１１ ４　Ｑ、０９２　０．０８８ＭＮ　Ｏ，９５２０，９２７０，７２７０，２８６ ０，１５０，０６９０，０６８０，０８９２８２１，５Ｇ７　１，４５　１．３ ０９　Ｑ、８２４　０．４３３　０．２６７　０．０８　０．１０　２Ｂ２　０ ．１３１　Ｑ、１０４　０．１０６　０．０８５　０．０９７　０．０ｇ６　０ ．０７４　０．０５３２８２　０．１２４　０．１０３　０．１［１３０，０Ｂ ３　０．１０８　０．０９３　０．０７４　Ｑ、０８４ＭＮ　Ｏ，１１４０，０ ｇ３　０．０９７　０．１０７　０．０９１　０．０９９　０．０９８　０．０ ９２４３４　０　ＭＮ　１，１４　０．５８４　０．６６９　０．１７３　０． ２５４　０．３１１　０．２０２　０．２８２ｋｌＮ　１．０２９　０．９２６ 　０．４８８　０．２９４　０．７４５　０．４０８　０．３４１　０．３９２ ２８２　Ｑ、６４４　０．５９８　０．３５　Ｇ、２３４　０．２６６　０．３ ３２　０．２８７　０．３７２０　２８２　３．１３３　３．１４４　２．９５ ９　１．５４４　０．６９９　０．６９３　０．６１１　０．３６１２８２　３ ．２３８　３．１１７　２．３５６　Ｑ、６６６　０．４０５　０．６５４　０ ．５９８　０．５５６１１Ｎ　３．３７５　３．３１７　３．０５２　１．６２ ６　１．０２１　０．７５４　０．５５　０．５８８２２７０　０　ＭＮ　Ｏ， ０７０，０９５０，０６８０，０４４０，０５６０，０７１０，０７１０，０５ １１１Ｎ　Ｏ，０９７０，０７６０，１０，５０，０５５０，０５０，０８９０ ，０５ｇ　０．０９７２８２　０．１０３　０．１０５　０．０ｇ７　０．０５ ＋　０．０６６　０．０ｇ６　０．０５９　０．０９３０　２ｇ２　１．５０６ 　０．７７ｇ　０．１４１　０．０５　０．０ｇ７　０．０８３　０．０８２　 ０．０７３２８２　１．４５８　０．８０９　Ｇ、１６３　０．Ｑ７　０．０８ ８　０．０７３　０．０Ｂ１　０．０６８以上に特定の態様を参考にして本発明 を説明したが、これらの態様は本発明の種々の側面を単に例示するものにすぎな いと理解されるべきである。即ち、本発明の思想および範囲から逸脱することな く、例示した態様に多（の修飾を加えることができ、また、他の変法を考案する ことができることを理解すべきである。

配列表 （１）一般的情報 （ｉ）　特許出願人二　アリ−・ルーピンシュタインスタンレイ・クリソ （ｉｉ）　発明の名称：　ＨＩＶの処置および予防用ワクチン（ｉｉｉ　）配列 の数＝　９ （１ｖ）連絡先： （Ａ）　名宛人：アムスター、ロスシュタイン・アンド・エベンシコタイン（Ｂ ）　通り：パーク・アベニュー９０番（Ｅ）　国・アメリカ合衆国 （Ｆ）　ＺＩＰ：１００１６ （ｖ）コンピューター解読書式： （Ａ）　媒体型：３．５インチ、１．４４Ｍｂ収容ディスケ、ト（Ｂ）　コンピ ューター・ｌＢＭＰｃｊｉ合（Ｃ）　オペレーティング・システム　ＭＳ−ＤＯ ３（Ｄ）　ソフトウェア＋　Ｗｏｒｄ　Ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ　（Ａ　Ｓ　ＣＩ　 Ｉ　）（ｖｉ）　本出願のデータ： （Ａ）　出願番号：未　定 （Ｂ）　出願日一本　日 （Ｃ）　分類、未　定 （ｖｉ）　優先権主張出願のデータ。

ｒＨＩＶの処置および予防用ワクチン」と題する１９９１年４月２日出願の出願 番号Ｎｏ、０７／６８１，６２４の一部継続出願（ｖｉ）弁理士／代理人情報： （Ａ）　氏名：パスカリニ、パトリシア・ニー（Ｂ）　登録番号：３４，８９４ （Ｃ）参照／整理番号：９６７００／１８８（ｉｘ）　１１話連絡先情報： （Ａ）　電話番号：（２１２）６９７−５９９５（Ｂ）　ファックス番号：（２ １２）２８６−０８５４または２８６−００８２ （Ｃ）　テレックス番号：ＴＷＸ　７１０−５８１−４７６６（２）　配列番号 １の情報 （ｉ）　配列の特徴： （Ａ）　長さ：１９アミノ酸 （Ｂ）　型二アミノ酸 （Ｃ）　鎖の数、一本鎖 （Ｄ）　トポロジー：直鎖状および環状（１１）　配列の種類： （Ａ）　種類：ペプチド （ｉｉｉ　）　ハイポセティカル配列二Ｎ。

（Ｉｖ）　アンチセンス、Ｎ。

（ｖ）　７ラグメント型：中間部フラグメント（ｖｉ）　起源 （Ａ）　生物名：ＨＩＶ （Ｂ）　株名二ＭＮ科 ＜ｃ＞　’（１１体・単離生物名：該当しない（Ｄ）　分化の程度・該当しない （Ｅ）　ハブロタイブ：該当しない （Ｆ）　組織の種類　該当しない （Ｇ）　細胞の種類・該当しない （Ｈ）　セルライン、該当しない （１）　オルガネラ名：該当しない （Ｖｉｉ　）　直接の起源：該当しない（ｖｉ）　ゲノム内での位置： （Ａ）　染色体セグメント名：エンベローブのＶ３ループ・フラグメントの一部 （ｉｘ）　配列の特徴： （Ａ）　特徴を表す記号：　ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｂ）　存在位置：　Ｈ［ＶのＰＮ Ｄ （Ｃ）　特徴を決定した方法：該当しない（Ｄ）　他の情報：該当しない （ｘ）　刊行物の情報　なし くＡ）　著者：なし くＢ）　標題　なし くＣ）　刊行物名：なし くＤ）　巻数　なし くＦ）　頁数　なし くＧ）　８１寸、なし くＨ）　文書数、なし く１）　提出日、なし くＪ）　出版日：なし くＫ）　関連の追加物・なし くｘｉ）　配列・配列番号１゜ Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　 Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇｌ　５　１０　１５ Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ （３）　配列番号２の情報 （１）　配列の特徴：　゛ （Ａ）　長さ：９アミノ酸 （Ｂ）　型・アミノ酸 （Ｃ）　鎖の数ニ一本鎖 （Ｄ）　トポロジー：直鎖状および環状（１１）　配列の種類： （Ａ）　種類、ペプチド （ｉｉｉ　）　ハイボセティカル配列二Ｎ。

（１ｖ）　アンチセンス二Ｎ０ （Ｖ）　フラグメント型：中間部フラグメント（ｖｉ）　起源 （Ａ）　生物名：ＨＩＶ （Ｂ）　株名＝ＭＮ科 （Ｃ）　個体・単離生物名、該当しない（Ｄ）　分化の程度：該当しない （Ｅ）　ハブロタイブ：該当しない （Ｆ）　組織の種類：該当しない （Ｇ）　細胞の種類：該当しない （Ｈ）　セルライン：該当しない （Ｉ）　オルガネラ名：該当しない （ｖｉ）　直接の起源：該当しない （ｖｉ）　ゲノム内での位置： （Ａ）　染色体セグメント名、エンベロープのｖ３ループ・フラグメントの一部 （ｉｘ）　配列の特徴： （Ａ）　特徴を表す記号：　ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｂ）　存在位置・ＨＩＶのＰＮＤ （Ｃ）　特徴を決定した方法　該当しない（Ｄ）　他の情報、該当しない （ｘ）　刊行物の情報：なし くＡ）　著者：なし くＢ）　標題：なし くＣ）　刊行物乞：なし くＤ）　巻数　なし くＦ）　頁数　なし くＧ）　日付・なし くＨ）　文書数、なし く１）　提出日、なし くＪ）　出版日、なし くＫ）　関連の追加物・なし くｘｉ）　配列　配列番号２・ ｌｅｅ　Ｔｙｒ　ｌｌｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇａｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｃｙｓ（ ４）　配列番号３の情報 （１）　配列の特徴。

（Ａ）　長さ　９アミノ酸 （Ｂ）　型　アミノ酸 （Ｃ）　鎖の数、一本鎖 （Ｄ）　トポロジー：直鎖状および環状（ｉｉ）　配列の種類 （Ａ）　種類　ペプチド （ｉｉｉ　）　ハイポセティカル配列　Ｎ。

（Ｉｖ）　アンチセンス゛Ｎ。

（Ｖ）　フラグメント型、中間部フラグメント（ｖｉ）　起源 （Ａ）　生物名：ＨＩＶ （Ｂ）　株名二ＭＮ科 （Ｃ）　個体・単離生物名・該当しない（Ｄ）　分化の程度：該当しない （Ｅ）　ハブロタイブ　該当しない （Ｆ）　組織の種類：該当しない （Ｇ）　細胞の種類、該当しない （Ｈ）　セルライン：該当しない （１）　オルガネラ名：該当しない （ｖｉ）　直接の起源：該当しない （ｖｉ）　ゲノム内での位置： （Ａ）　染色体セグメント名　エンベロープのｖ３ループ・フラグメントの一部 （ｉｘ）　配列の特徴： （Ａ）　特徴を表す記号＋　ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｂ）　存在位置：ＨＩＶのＰＮＤ （Ｃ）　特徴を決定した方法、該当しない（Ｄ）　他の情報：該当しない （ｘ）　刊行物の情報、なし くＡ）　著者：なし くＢ）　標題：なし くＣ）　刊行物乞、なし くＤ）　巻数：なし （６）　配列番号５の情報 （１）　配列の特徴： （Ａ）　長さ、１３アミノ酸 （Ｂ）　型二アミノ酸 （Ｃ）　鎖の数・−重鎖 （Ｄ）　トポロジー：直鎖状および環状（ｉｉ）　配列の種類。

（Ａ）　種類：ペプチド （山）　ハイポセティカル配列＝Ｎ。

（Ｉｖ）　アンチセンス：Ｎ。

（Ｖ）　フラグメント型　中間部フラグメント（ｖｌ）　起源 （Ａ）　生物名：ＨＩＶ （Ｂ）　株名９ＭＮ科 （Ｃ）　個体・単離生物名：該当しない（Ｄ）　分化の程度、該当しない （Ｅ）　ハブロタイブ：該当しない （Ｆ）　組織の種類：該当しない （Ｇ）　細胞のｉ類、該当しない （Ｈ）　セルライン、該当しない （Ｉ）　オルガネラ名：該当しない （ｖｉｉ　）　直接の起源　該当しない（ｖｉ）　ゲノム内での位置 （Ａ）　染色体セグメント名、エンベロープのＶ３ループ・フラグメントの一部 （ｉｘ）　配列の特徴： （Ａ）　特徴を表す記号：　ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｂ）　存在位置：ＨＩＶのＰＮＤ （Ｃ）　特徴を決定した方法：該当しない（Ｄ）　他の情報、該当しない （ｘ）　刊行物の情報：なし くＡ）　著者；なし くＢ）　標題、なし くＣ）　刊行物乞：なし くＤ）　巻数：なし くＦ）　頁数：なし くＧ）　日付；なし くＨ）　文書数・なし く１）　提出日：なし くＪ）　出版日：なし くＫ）　関連の追加物：なし くｘｉ）　配列：配列番号５； Ｌｙｓ　Ａｒｇ　ｌｌｅ　Ｈｉｓ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　 Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ５１Ｏ （７）　配列番号６の情報 （ｉ）　配列の特徴： （Ａ）　長さ：１３アミノ酸 （Ｂ）　型二アミノ酸 （Ｃ）　鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）　トポロジー：直鎖状および環状（ｉｉ）　配列の種類： （Ａ）　種類：ペプチド （■１）　ハイポセティカル配列８Ｎ。

（１ｖ）　アンチセンス：Ｎｏ （Ｖ）　フラグメント型：中間部フラグメント（ｖｉ）　起源 （Ａ）　生物名：ＨＩＶ （Ｂ）　株名二ＭＮ科 （Ｃ）　個体・単離生物名、該当しない（Ｄ）　分化の程度：該当しない （Ｅ）　ハブロタイブ：該当しない （Ｆ）　組織の種類：該当しない （Ｇ）　細胞の種類：該当しない （Ｈ）　セルライン：該当しない （Ｉ）　オルガネラ名・該当しない （ｖｉｉ）　直接の起源：該当しない （ｖｉ）　ゲノム内での位置： （Ａ）　染色体セグメント名：エンベロープの■３ループ・フラグメントの一部 （ｉｘ）　配列の特徴： （Ａ）　特徴を表す記号：　ｐ６ｐｔｉｄｅ（Ｂ）　存在位置　ＨＩ　Ｖ（７） ＰＮＤ（Ｃ）　特徴を決定した方法、該当しない（Ｄ）　他の情報：該当しない （ｘ）　刊行物の情報：なし くＡ）　著者：なし くＢ）　標題：なし くＣ）　刊行物乞：なし くＤ）　巻数：なし くＦ）　頁数、なし くＧ）　日付：なし くＨ）　文書数二なし くＩ）　提出日：なし くＪ）　出版日：なし くＫ）　関連の追加物：なし くｘｉ）　配列：配列番号６： Ａｒｇ　Ｓｅｒ　ｌｉｅ　Ｉ（ｉｓ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ 　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ａｌａ（８）　配列番号７の情報 （ｉ）　配列の特徴： （Ａ）　長さ：１３アミノ酸 （Ｂ）　型二アミノ酸 （Ｃ）　鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）　トポロジー・直鎖状および環状（ｉｉ）　配列の種類： （Ａ）　種類：ペプチド （ｉｉｉ　）　ハイポセティカル配列二Ｎ０（１ｖ）　アンチセンス゛Ｎ０ （Ｖ）　フラグメント型、中間部フラグメント（ｖｉ）　起源 （Ａ）　生物名：ＨＩＶ （Ｂ）　株名・ＭＮ科 （Ｃ）　個体・単離生物名：該当しない（Ｄ）　分化の程度：該当しない （Ｅ）　ノ・プロタイプ：該当しない （Ｆ）　組織の種類　該当しない （Ｇ）　細胞の種類：該当しない （Ｈ）　セルライン、該当しない （Ｄ　オルガネラ名　該当しない （■ｉｉ）　直接の起源　該当しない （ｖｉ）　ゲノム内での位置。

（Ａ）　染色体セグメント名　エンベロープのｖ３ループ・フラグメントの一部 （ｉｘ）　配列の特徴 （Ａ）　特徴を表す記号：　ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｂ）　存在位置・ＨＩＶのＰＮＤ （Ｃ）　！黴を決定した方法　該当しない（Ｄ）　他の情報。該当しない （ｘ）　刊行物の情報、なし くＡ）　著者　なし くＢ）　標題、なし くＣ）　刊行物乞・なし くＤ）　巻数・なし くＦ）　頁数　なし くＧ）　０１寸　なし くＨ）　文書数２なし く１）　提出日　なし くＪ）　出版日　なし くＫ）　関連の追加物　なし くｘｉ）　配列　配列番号７ Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　ｌｌｅ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　 Ｖａｔ　ｌｉｅ　Ｔｙｒ＾１ａ（９）　配列番号８の情報 （ｉ）　配列の特徴 （Ａ）　長さ、１３アミノ酸 （Ｂ）　型二アミノ酸 （Ｃ）　鎖の数、−重鎖 （Ｄ）　トポロジー　直鎖状および環状（ｉｉ）　配列の種類− （Ａ）　種類、ペプチド （ｉｉｉ　）　ハイボセティカル配列、Ｎ０（１ｖ）　アンチセンス、Ｎｏ （Ｖ）　フラグメント型・中間部フラグメント（ｖｉ）　起源 （Ａ）　生物名：ＨＩＶ （Ｂ）　株名ｚＭＮ科 （Ｃ）　個体・単離生物名：該当しない（Ｄ）　分化の程度：該当しない （Ｅ）　ハブロタイブ・該当しない （Ｆ）　組織の種類　該当しない （Ｇ）　細胞の種類：該当しない （Ｈ）　セルライン・該当しない （Ｉ）　オルガネラ名　該当しない （〜１１）　直接の起源・該当しない （ｖｉ）　ゲノム内ての位置： （Ａ）　染色体セグメント名、エンベロープのフラグメント（１ｘ）　配列の特 徴。

（Ａ）　特徴を表す記号　ｐｅｐｔ　ｉｄｅ（Ｇ）　日付、なし くＨ）　文書数・なし く１）　提出日、なし くＪ）　出版口：なし くＫ）　関連の追加物、なし くｘｉ）　配列：配列番号９： Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　 Ｖａｌ　Ｔｒｐ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ０．０ マウス　２８３−５ ０、（ＨＯ，Ｉ　Ｌ　１０　１００ 添加したペプチド競合物貿（μｇ／ｍｌ）マウス　２Ｂ４−４ ＥＬＩＳＡ　２Ｂ２　ＥＬＩＳＡ　ＹＯ−）４Ｎｉｇ−３ 要　約　書 本発明は、ＨＩＶの処置および伝播防止のためのワクチンに使用されるフンシュ ゲートであって、ＨＩＶのｇｐ１２０ＰＮＤに類似したアミノ酸配列を有するペ プチドと免疫原性を高める担体のコンジュゲートに関する。このコンジュゲート をワクチン接種した後、抗体含有液を個体から抽出し、チメロサールを含有する 希釈剤を含みかつ高親和性／結合活性の中和性および／または保護性のＨＩＶ特 異的な抗体を選択する抗原限定ＥＬＩＳＡで検定する。そのような抗体の産生を 誘導したフンシュゲートはＨＩＶの処置および伝播防止に有用である。

Claims (28)

【特許請求の範囲】
1. １．担体に結合させた、ＭＮ−ＨＩＶ、ＳＣ−ＨＩＶ、ＷＭＪ１−ＨＩＶ、ＷＭ Ｊ３−ＨＩＶまたはＳＬ−ＨＩＶのｇｐ１２０エピトープのアミノ酸１１６〜１ ３１、３０７〜３１９および４７０〜４９０からの少なくとも１つのべプチドを 含有する、ＨＩＶに感染および未感染の個体の処置に使用するための、および／ またはＨＩＶの伝播防止のためのワクチン。
2. ２．ペプチドが、以下のペプチド： （ａ）【配列があります】 （ｂ）【配列があります】 （ｃ）【配列があります】 （ｄ）【配列があります】 （ｅ）【配列があります】 （ｆ）【配列があります】 （ｇ）【配列があります】 （ｈ）【配列があります】 （ｉ）【配列があります】 （ｊ）【配列があります】 （ｋ）【配列があります】 （ｌ）【配列があります】または （ｍ）【配列があります】 の少なくとも１つである請求項１に記載のワクチン。
3. ３．担体が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａの外毒素Ａ、ＫＬＨ 、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕ ｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ由来のツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）、 ＢａｃｉｌｌｕｓＣａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）、またはＢ型肝炎 のコア抗原である請求項１または２に記載のワクチン。
4. ４．ペプチドが、 （ａ）Ｃ末端ペプチドシステイン結合によるジスルフィド結合、（ｂ）グルタル アルデヒドの存在下でのペプチドと担体タンパク質の反応、または （ｃ）スペーサー分子を含むかまたは含まない水溶性カルボジイミドの存在下で のペプチドと担体タンパク質の反応、 によって担体タンパク質にコンジュゲート化される請求項１〜３のいずれかに記 載のワクチン。
5. ５．スペーサーが、アジピン酸ジヒドロジンまたは末端反応基の間に２〜２４個 の炭素原子を有する２官能性スペーサーである請求項４に記載のワクチン。
6. ６．ワクチンがアジュバントと混合される請求項１〜５のいずれかに記載のワク チン。
7. ７．アジュバントが、アルミナ、Ｒｉｂｉ、好ましくはモノホスホリル脂質Ａ、 フロインドアジュバント、ＩＳＯＭアジュバント、ビロソームまたはマイクロカ プセル封入である請求項６に記載のワクチン。
8. ８．マイクロカプセル封入がポリラクチドーポリグリコリドを用いて行われる請 求項７に記載のワクチン。
9. ９．アルミナがＡｌ（ＯＨ）３またはＡｌＰＯ４のいずれかからなる請求項７に 記載のワクチン。
10. １０．ワクチンが、担体に結合された５種またはそれ以上の異なるペプチドのカ クテルを含有している請求項１〜９のいずれかに記載のワクチン。
11. １１．ペプチドの好ましい用量範囲が用量あたり５０〜５００μｇのペプチドで ある請求項１〜ｍのいずれかに記載のワクチン。
12. １２．ペプチドの好ましい用量範囲が用量あたり１０〜１０００μｇのペプチド である請求項１〜１０のいずれかに記載のワクチン。
13. １３．ワクチンを１回以上、好ましくは２〜１０回投与する請求項１〜１２のい ずれかに記載のワクチン。
14. １４．コンジュゲートを、定期放出、パルス放出または遅延放出機序で投与する 請求項１〜１３のいずれかに記載のワクチン。
15. １５．ＨＩＶの予防、処置および／または伝播防止に用いるためのワクチンの製 造方法であって、以下の工程からなる方法：（ａ）ＨＩＶのｇｐ１２０エピトー プの主中和ドメイン（ＰＮＤ）に類似したアミノ酸配列を有する少なくとも１つ のペプチドを合成し、（ｂ）この合成ペプチドを担体とコンジュゲート化して、 ワクチンとして使用するための少なくとも１つのペプチド担体コンジュゲートを 得、（ｃ）工程（ｂ）の少なくとも１つのコンジュゲートを個体にワクチン接種 して抗体の生成を誘導することによって調製した抗体含有液を、希釈剤の存在下 かつ高親和性／結合活性の中和性および／または保護性のＨＩＶ特異的な抗体を 選択する条件下での抗原限定ＥＬＩＳＡにおいて検定し、そして（ｄ）高親和性 ／結合活性の中和性および／または保護性のＨＩＶ特異的な抗体の産生を誘導し たコンジュゲートを、ＨＩＶの予防、処置および／または伝播防止に用いる。
16. １６．希釈剤がチメロサールを含有している請求項１５に記載の方法。
17. １７．ＨＩＶが、ＭＮ株、ＳＣ株、ＷＭＪ１株、ＷＭＪ３株またはＳＬ株である 請求項１５または１６に記載の方法。
18. １８．製造されたワクチンが請求項１〜１４に記載のいずれかである請求項１５ 〜１７のいずれかに記載の方法。
19. １９．ＥＬＩＳＡが、高親和性／結合活性の抗体を検出する、請求項１５（ａ） に記載したペプチドに特異的な抗原限定ＥＬＩＳＡである請求項１５〜１８のい ずれかに記載の方法。
20. ２０．抗原限定ＥＬＩＳＡが、５００ｎｇ／ｍｌからＯｎｇ／ｍｌまでの減少濃 度系列のＭＮ−ＰＮＤ抗原で微量滴定プレートを被覆することによって行われる 請求項１９に記載の方法。
21. ２１．抗体含有液が、血清、血漿、脊髄液または粘液である請求項１５〜２０の いずれかに記載の方法。
22. ２２．希釈剤が、チメロサールを含有する緩衝溶液中の添加剤の配合物からなる 請求項１５〜２１のいずれかに記載の方法。
23. ２３．希釈剤が、Ｔｗｅｅｎ−２０、ローダミンおよびチメロサールを含有する ＰＢＳ中のカゼインからなる請求項２２に記載の方法。
24. ２４．希釈剤が、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０（ｐＨ７．４）、０．００１％ロ ーダミンおよびチメロサールを含有するＰＢＳ中のＯ．１〜０．５％カゼインか らなる請求項２２に記載の方法。
25. ２５．（ａ）請求項１〜１４のいずれかに記載のワクチン、および（ｂ）ＨＩＶ の予防、治療および／または伝播防止のために逐次使用するための混合調製物と して該ワクチンの投与前にプライムの必要な個体をプライムするための組成物、 からなるワクチンキット。
26. ２６．個体が、ＰＰＤネガティブ、ＨＩＶネガティブ、またはＨＩＶポジティブ であるがＡＩＤＳの症状を示さずかつ２００を越えるＣＤ４細胞数を有する請求 項２５に記載のワクチンキット。
27. ２７．組成物がＢＣＧを含有する請求項２５または２６に記載のワクチンキット 。
28. ２８．組成物が、個体にワクチン接種する４〜６週間前にプライムするためのも のである請求項２５〜２７のいずれかに記載のワクチンキット。