JPH05508384A - 新規なＨＭＧ―ＣｏＡレダクターゼ抑制物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、化学物、製薬組成物及びヒトの血清コレステロールを減少するのに有 益な方法に関する。更に詳細には、本発明はトランス−６−［（２−アリール置 換スピロ環式−１，３−ジエン−１−イル）アルケニルまたはアルキル）３．４ ，５．６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ピラン−２−オン、それから 誘導された相当する開環ヒドロキシ酸及びエステル並びにこれらの製薬上許され る塩（これらは酵素３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−補酵素Ａレダクタ ーゼ（以下、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼと称する）の効能のある抑制物質であ る）、その製薬組成物、並びにアテローム性動脈硬化症、高脂血症及び高コレス テロール血症の治療のためにコレステロールの生合成を抑制する方法に関する。

２、関連する従来技術 ＨＭＧ−ＣｏＡの抑制物質は血漿コレステロール量を低下するの、に有効である だけでなく、ヒトのコレステロールの生合成を抑制するのに有効である。そのよ うなものとして、ＨＭＧ−ＣｏＡの抑制物質は冠状心疾患の予防及び治療に有益 である。従来技術、例えばベスリッジ（Ｂ　ｅｔｈｒｉｄｇｅ）ら著、Ｂｒ１ｔ 、Ｍｅｄ、Ｊ、、　４．５００頁（１９７５年）及びブラウン（Ｂｒｏｗｎ）ら 著、５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ａｍｅｒｉｃａｎ、５８頁（１９８４年、１１月） は、このような化合物の重要性を認めている。このような化合物に関する例示参 考文献は、以下のとおりである。

Ｂ、Ｄ、　ロス（Ｒｏ、ｔｎ）の米国特許第４　、６８１．８９３号は、コレス テロール低下薬剤として有益なトランス−６−Ｃ２−（３−または４−カルボキ サミド−置換ビロール−１−イル）アルキル〕−４−ヒドロキシ−ビラン−２− オンに関する。

ホフマン（Ｈｏｆｆｍａｎ）らの米国特許第４．６６８．６９９号は、抗高コレ ステロール血症適用に関してコンパクチン及びメビノリンの半合成類似体並びに これらのジヒドロ類似体及びテトラヒドロ類似体を開示している。

スミス（Ｓｍｉｔｈ）らの米国特許第４．２８２．１５５号は、コレステロール の生合成の抑制のための６（Ｒ）−（２−（８’−エーテルイヒーヒトロキシ− ２’、６’−ジメチルポリヒドロナフチル−１′）エチル）−４（Ｒ）−ヒドロ キシ−３，４，５，’６−チトラヒドロー２Ｈ−ピラン−２−オンに関する。

ライラード（Ｗｉｌｌａｒｄ）らの米国特許第４．５６７、２８９号は、ＨＭＧ −ＣｏＡレダクターゼ抑制物質であるＥ−（３Ｒ，５Ｓ）−７−（４’−フルオ ロー３．３’　、５−トリメチル−（１，ｌ’−ビフェニル〕−２−イル）−３ ，５−ジヒドロキシ−６−ヘプテン酸のメチルエステル、エチルエステル、ｎ− プロピルエステル、２−（アセチルアミノ）ニスチルＬステル、または１−（２ ，３−ジヒドロキシ）プロピルエステル、二関する。

ボランテ（■ｏ１．ａｎｔｅ）らの米国特許第４．６１１．０６７号は、４−ヒ ドロキシ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−ピランー２−オン部分を含む ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ抑制物質の調製法を開本発明に従って、或種のトラ ンス−６−（（２−アリール置換スピロ環式−１，３−ジエン−１−イル）アル ケニルまたはアルキル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２ Ｈ−ピラン−２−オン、それから誘導される相当する開環ヒドロキシ酸及びエス テル並びにこれらの製薬上許される塩が提供され、これらはＨＭＧ−ＣｏＡレダ クターゼの効能のある抑制物質である。更に詳細には、本発明は式Ｉの化合物、 そのヒドロキシ酸及びエステル、並びにこれらの製薬上許される塩を提供する。

Ｙは−ＣＨＲ−１−ＣＨＲＣＨＲ，−ＣＨＲＣＨＲＣＨＲ−１または−ＲＣ＝Ｃ Ｒ−（式中、ＲはＨまたは低級アルキルである）であり；Ｘ、Ｘ＋及びＸ、は独 立にＨ，Ｆ、Ｃ１、Ｂｒ、　ＯＨ，ＣＦｓ　、アルキル、またはアルコキシであ り、； Ｒ１はＨ、アルキル、置換アルキル、７個までの炭素原子を有するシクロアルキ ル、ＣＦユまたはアリールであり；ｍは０、ｌ、２または３であり； ｎは０または１である。） 発明の詳細な説明 本明細書に使用される下記の用語は、特にことわらない限り、下記の意味を有す るものと理解されるべきである。

“低級アルキル”は、１〜４個の炭素原子を含む飽和または不飽和の脂肪族炭化 水素（これは直鎖または分枝鎖のいずれであってもよい）を意味する。

“アルキル”は約１〜１０個の炭素原子を含む飽和または不飽和の炭化水素（こ れは直鎖または分枝鎖のいずれであってもよい）を意味する。“置換アルキル” は“ハロゲン“、“ヒドロキシ”、“アルコキシ”または“アミノ”置換を意味 する。

“アルコキシ”はアルキルオキシ基（この場合、“アルキル”は前記のとおりで ある）を意味する。メトキシ、ニドキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、５ ｅＣ−プロポキシ、及びｎ−ブトキシを含む低級アルコキシ基が好ましい。

“アリール”は、４〜１０個の炭素原子を有する芳香族炭化水素基を意味する。

好ましいアリール基はフェニル、置換フェニル及びナフチルである。′置換”と いう用語は、′アルキル”、“アルコキシ”、“ハロゲン”または“ヒドロキシ アルキル”置換を意味する。

“ハロゲン“は塩素、フッ素、臭素及びヨウ素を意味する。

本発明の製薬上許される塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミニウ ム、リチウム、マグネシウム、亜鉛、リシン、アルギニン、プロカイン、エチレ ンジアミン及びピペラジンから生成された塩を含む。

本発明は、これらの化合物の光学異性体及び立体異性体並びに上記の構造式によ り特定されるこれらの混合物を含む。

本発明の化合物を製造するための一般操作は、以下のとおりである。

ｄ）　ＦＣａＨ，ＭｇＢｒ　ｅ）　ＰＴＳＡ　ｆ）　ＭｅＪＣＨＣＨＣＨＯ／Ｐ ＯＣＩｓｇ）−ＣＨｔＣＯＵＨＣＯ２ＣＨ３ｈ）　Ｅｔ３Ｂ／ＮａＢ）Ｉ。

ｉ）　ＮａＯＨ／ＭｅＯＨｊ）　Ｅｔ、Ｎ／ＣＩＣＯＪｔ艮に式１ ａ）　ＡｌＣｌ３／Ｃ，Ｈ３Ｐ　ｂ）　５ＯＣＬ　ｃ）　（ＥｔＯ）２ＰＯＣＨ ｚ−ｄ）　ＦＣｓＨａＭｇＢｒｅ）　ＨＣＩ　＋、、、ｆ）　Ｍｅ２ＮＣＨＣＨ ＣＨＯ／Ｐｏｃｌｓ　ｇ）　ＣＩ（、ＣＯＣ’ＨＣＯｚＣＨ。

ｈ）　Ｅｔ、Ｂ／ＮａＢＨ。

出発物質はアルドリッチ・ケミカルキ・カン、＜ニイ（ＡｌｄｒｉｃｈＣｈｅｍ ｉｃａｌ　Ｃｏ、　）から得たが、それらはまｔこ当業界で知られてｌ、ｓる方 法により合成し得る。

以下の調製実施例は本発明を更に説明する。

実施例１ −４−ペンテン−１−オン 鉱油を含まない水素化ナトリウム３．６ｇ（１５０ミリモル）、シクロペンチル フェニルケトン１７．９ｍｊ（１００ミリモル）、カリウムｔ−ブトキシド１． １２ｇ（１０ミリモル）、３−クロロ−２−メチルプロパン１５．１１ｉ（１５ ０ミリモル）、及び１．２−ジメトキシエタン１００−の混合物を室温で１週間 撹拌した。

混合物を徐々に水に注ぎ、エーテルで抽出した。有機層を食塩水で抽出し、エー テルを減圧で除去した。

工程ｌで得た生成物のエタノール４０〇−中の冷却（−７８°Ｃ）溶液にオゾン を吹き込んだ。約１時間後に、反応は青色を生じた。

過剰のオゾンを、窒素ガスを吹き込んで反応から追い出した。反応を０℃に温め 、オシニドを硫化メチル９．１．８ｍＡ’（１２５ミリモル）で分解した。

室温で一夜撹拌した後、エタノールを減圧で除去した。残渣をエーテルに再度溶 解し、Ｈ２Ｏ，１０％ＮａＨ３Ｏｚ及び食塩水で抽出した。

工程２で得たジケトンをｔ−ブタノール１００ｄに溶解し、カリウムｔ−ブトキ シド１２．３４．ｇ　（１１０ミリモル）で処理した。

室温で２時間撹拌した後、反応を１２　ＮＨＣＡ　Ｉ　Ｏｍ！！で中和した。

溶媒を減圧で除去し、残渣をエーテル及び水に再度溶解した。これらの層を分離 し、エテールを食塩水で抽出し、Ｍｇ５Ｏａで乾燥した。エーテルを減圧で除去 した後、残渣をエーテル／ヘキサン混合物で結晶化した。

融点７５〜７６℃を有する白色結晶を得た。

工程４：３−（４−フルオロフェニル）−１−フェニル−スピロ　４．　ノナ− １３−ジエン 工程３で調製したケトン（６，３６ｇ、３０ミリモル）の１．　ＯＭののＴＨＦ 溶液を４−フルオロフェニルマグネシウムプロミドの２ＭのＴＨＦ溶液２０−に 滴下して添加した。室温で２時間撹拌した後、反応物を氷とＩＮＨ（Ｊ’の混合 物に注いだ。エーテルで抽出し溶媒を蒸発して粗アルコールを得た。

そのアルコールを還流トルエン中で触媒量のｐ−トルエンスルホン酸−水和物（ ０，５７ｇ、３ミリモル）で処理してアルコールを脱水した。

プロペンアルデヒド ３−ジメチルアミノアクロレイン（２，９７ｇ、３０ミリモル）の２．０Ｍのア セトニトリル溶液をＰ　０Ｃ１ｓ（３，０３ｙｔ、３２．５ミリモル）の氷冷ア セトニトリル溶液に滴下して添加した。この溶液に、０℃で１５分間撹拌した後 に、工程４で調製したジエン（７，２５ｇ、２５ミリモル）の１．０Ｍのアセト ニトリル溶液を滴下して添加した。反応混合物を室温に温め、２５時間撹拌した 。

暗色の反応混合物を２ＮのＮａＯＨ１００−に注ぎ、１０分間撹拌した。得られ た混合物を酢酸エチルで抽出した。

有機層を食塩水で抽出し、溶媒を減圧で除去した。残渣をヘキサンに再度溶解し 、冷蔵庫（−２０℃）に−要人れた。ヘキサンを濾過して、黄褐色に着色された 固体３．９ｇ（１１，３４ミｌＩモル）を得た。

ル〕−５−ヒドロキシー３−オキソ−６−へブテノエート窒素雰囲気下で一６０ ℃でＴＨＦ　５８−中のジイソプロピルアミル（４，，０３ｒＩＩｌ、２８．８ ミリモル）の撹拌溶液に、ｎ−ブチルリチウムの２．５Ｍのヘキサン溶液１．０ ．５６　Ｔｄ！（２６，４ミリモル）を添加した。１５分後、温度が一４０℃に 温まった時、メチルアセトアセテート１．３０Ｊ　（１２ミリモル）を滴下して 添加した。その溶液を３０分間撹拌し、その間温度を一１０℃に温めた。

そのジアニオンの黄色溶液に、工程５で調製したアルデヒド３．４４ｇ（１０ミ リモル）の０．２５ＭのＴＨＦ溶液を添加した。その添加は３０分かかった。そ の反応を一１Ｏ℃で更に３０分間撹拌し、ついで酢酸エチルに注ぎ、Ｈ２Ｏ、飽 和ＮａＨＣＯｓ及び食塩水で抽出した。

残渣を、溶離剤としてヘキサン／酢酸エチル（５／１）を、用いてシリカゲルで フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。

工程６で調製した５−ヒドロキシ−３−ケトエステル（４，１ｇ、８．９１ミリ モル）を乾燥ＴＨＦ　２２−に溶解し、トリエチルポラン（Ｔ１（Ｆ中重量、１ ３．４１ｎｌ、１３．４ミリモル）で処理した。室温で５分間撹拌した後、反応 混合物を一７８℃に冷却した。ホウ水素化ナトリウム（０，４０ｇ、１０．７　 ミリモル）を添加し、続いて３０分間にわたってメタノール（８，９１ｎＩりを 滴下して添加した。反応を一７８℃で３０分間攪拌した。次に３０分間で一６０ ℃に温めた。−６０°Ｃで、反応をＨ２Ｏ（５０Ｊ）中の３０％ＨｚＯｚ（２０ −）の滴下による添加により停止した。

反応を室温に温め、３０分間攪拌した。それを酢酸エチルに注ぎ、希薄なＮＨ， Ｃ１’溶液で抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯｓ及び食塩水で抽出した。

５−ジヒドロキシ−６−ヘプテン ＩＮのＮａＯＨ水溶液（１３，４１ｎｌ、１３．４ミリモル）を工程７で調製し た３、５−ジヒドロキシエステル（４，１ｇ、８．９ミリモル）の０．２Ｍのエ タノール溶液に添加した。１０分間攪拌した後、エタノールを減圧で蒸発させた 。残渣をＨ，０に再度溶解し、水層を１ＮＨｃＪ７　（１５Ｊ、１５ミリモル） で酸性にした。

水層をエーテルで抽出した。エーテル層を食塩水で抽出し、ＮａｔＳＯ４で乾燥 した。濾過後、エーテルを減圧で除去した。

工程９ニドランス−（Ｅ）　−６−（２−（２−（４−フルオロフェニル）−４ −フェニル−スピロ（４，４）−ノナ−１，３−ジエン−１−イル〕エチニル］ −３，４，５，６−チトラヒドロー４一ヒドロキシー２Ｈ−ピランー２−オンク ロロギ酸エチル（０，７６ｍ７．８ミリモル）の１．０ＭのＨｚＣＣｊ’ｚ溶液 を、工程８で調製した３、５−ジヒドロキシカルボン酸３．６ｇ（８ミリモル） の冷却（−１０℃）　０．２Ｍ　Ｈ２ＣＣｆｆ溶液及びトリエチルアミン１．３ ４ｉ（９，６ミリモル）に滴下して添加した。

反応を一１０℃で１５分間攪拌し、ついでＨ２Ｏに注いだ。これらの層を分離し 、ＨｚＣＣｊ？を層を飽和ＮａＨＣＯｓで抽出した。

ＩｈＣＣ１２を減圧で除去し、残渣を、溶離剤として１／１の酢酸エチル／ヘキ サンを使用してシリカゲルでクロマトグラフィーにかけた。得られた化合物をＨ ｚＣＣＩｌｔ／ヘキサンで再結晶して、融点１２４〜１２５°Ｃ（分解）を有す る黄褐色に着色された固体を得た。

元素分析：　計算値　Ｃ７８，１２；　Ｈ６，３２実測値　Ｃ７８，０１；Ｈ６ ，３３ 実施例１に詳しく記載した一般方法を使用して、下記の化合物を調製し得る。

１、トランス−（Ｅ）−６−［２−［２−（４−フルオロ−３−メチルフェニル ）−４−フェニル−スピロＣ４，４］−ノナ−１，３−ジエン−１−イル］エチ ニル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ピラン−２− オン；２、トランス−（Ｅ）−６−（２−（７，９−（４−フルオロフェニル） −スピロＣ４，５）デカ−６，８−ジエン−６−イル〕エチニル）−３，４，５ ，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ピラン−２−オン； ３、トランス−（Ｅ）−６−Ｃ２−（２−（４−フルオロフェニル）−４−（４ −ヒドロキシメチルフェニル）−スピロ［４，５）デカ−１，３−ジエンー１− イル〕エチニル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ピ ラン−２−オン；４、トランス−（Ｅ）、−６−Ｃ２−（６−（４−フルオロ− ３−メチルフェニル）−８−（シクロヘキシル）−スピロ（３，５：ｌ　ノナ− ５，７−レニン−５−イル〕エチニル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−４− ヒドロキシ−２Ｈ−ビラン−２−オン：５、トランス−（Ｅ）−６−Ｃ２−Ｃ２ −（４−フルオロフェニル）−４−（６−ヘキサノール）スピロＣ４，４Ｅ−ノ ナ−１，３−ジエン−１−イル〕エチニル）−３，４，５，６−テトラヒドロ− ４−ヒドロキシ−２Ｈ−ビラン−２−オン；及び６、　トランス−（Ｅ）−６− Ｃ２−（５−（４−フルオロフェニル）−７−（２−ヒドロキシプロブ−２−イ ル）−スピロ（２，４）へブタ−４，６−レニン−４−イル〕エチニル〕−３， ４，５，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ビラン−２−オン。

ルオロフェニル　ペンタン 固体の３，３−テトラメチレン無水グルタル酸（２５，２２ｇ、１５０ミリモル ）をフルオロベンゼン１２５−中のＡｌＣｌ。

４０ｇ（３００ミリモル）の攪拌混合物に少しずつ添加した。室温で２時間攪拌 した後、濃厚な反応混合物を氷水５００ｄに少しずつ添加した。混合物をエーテ ルＩＡで抽出し、有機層を水で抽出した。ＭｇＳＯ４で乾燥した後、エーテルを 減圧で蒸発した。ゴム状残渣を精製しないで次の工程に直接使用した。

工程２：３．４−ジヒドロ−４，４−テトラメチレン−６−４−フルオロフェニ ル　−２−ピーン−２−オン塩化チオニル（１５０ｍＪ）を工程１で調製した生 成物に添加した。反応混合物を１０分間加熱し還流させて溶液を得た。冷却後、 過剰の塩化チオニルを減圧で除去した。残渣をエーテルに再度溶解し、水、飽和 ＮａＨＣＯ，及び食塩水で抽出した。ＭｇＳＯ４で乾燥した後、エーテルを減圧 で除去し、残渣をヘキサン２５０−と共に攪拌して黄褐色に着色した融点５５〜 ５７℃を有する固体を得た。

ジエチルメチルホスホネー）（４，６３ｇ、３０．４６ミリモル）の２．０Ｍの ＴＨＦ溶液をＴＨＦ　７５−中のｎ−ブチルリチウム（２，５Ｍのヘキサン溶液 １２．７９１１！、３１．９８ミリモル）冷却（−７８℃）溶液に滴下して添加 した。−７８℃で１５分間攪拌した後、ＴＨＦ２Ｏｒｎｌ中の工程２で調製した ラクトン（７，５ｇ、３０．４６ミリモル）の溶液を滴下して添加した。反応を 室温に温め、１６時間攪拌した。反応混合物を水３００−に注ぎ、エーテルで抽 出した。

有機層を食塩水で抽出し、溶媒を減圧で除去した。化合物を、溶離剤としてヘキ サン／酢酸エチル（１０／１）を用いてシリカゲルでクロマトグラフィーにより 精製して生成物１．８ｇを得た。

４−フルオロフェニルマグネシウムプロミド（５０−１５０ミリモル）の氷で冷 却したＩＭのＴＨＦ溶液に、工程３で調製したケトン（８，０ｇ、３２．７５ミ リモル）の０．３ＭのＴＨＦ溶液を添加した。その混合物を室温で１５時間攪拌 し、ついで冷却ｌＮＨＣｌ’２５ｍＪに注いだ。その混合物を室温で３０分間攪 拌し、ついでエーテルで抽出した。エーテルを減圧で蒸発し、残渣を溶離剤とし てヘキサンを使用してシリカゲルでクロマトグラフィーにかけてジエン４．５ｇ を得た。

工程５　：（Ｅ）−３−（７，９−ジ（４−フルオロフェニル）スピロ［４，５ Ｅデカ−６，８−ジエン−６−イル〕　２−ブロペンア水浴中で冷却したアセト ニトリル５０ｍ１中のオキシ塩化燐（１゜６９　ｍｌ　、　１８．１５　ミリモ ル）の溶液に３−ジメチルアミノアクロレイン（１，６８ｍ１　、１６．７５ミ リモル）を３分間に渡って滴下した。

この混合物を５分間攪拌し、１５０　ｍｌの温アセトニトリル中の７゜９−ジー （４−フルオロフェニル）スピロ（４，５３デカ−６゜８−ジエン（４，５ｇ、 １３．９６　ミリモル）を３０分間に渡って滴下した。上記の混合物を室温で１ ６時間攪拌し、その後油浴中で６０℃で６時間加熱した。この混合物を冷却し、 ４００　ｍｌの冷ＩＮ水酸化ナトリウム中に注いだ。上記混合物をエーテルで抽 出した。

このエーテルを水洗し、減圧下で蒸発させた。残留物を１７．５ｍｌの沸騰へキ サンで粉末にし、濾過した。この濾液を冷蔵庫で−晩冷却したところ、融点１２ ０−１２４°Ｃの生成物が析出した。

−５−ヒドロキシ−３−才キソー６−へブテノエート一７８°Ｃの８０ｍ１の無 水ＴＨＦ中のジイソプロピルアミン（３゜１．３　ｍｌ、２２．３８　ミリモル ）の攪拌溶液に、窒素下で、８．２４　ｍｌの２．５！ｉ（のｎ−ブチルリチウ ムのヘキサン溶液を添加した。５分間攪拌した後、ＩＯｍｔのＴＨＦ中のメチル アセトアセテート（１，０７ｍ１、９゜１９ミリモル）の溶液を１５分間に渡り 滴下した。ドライアイス−アセトン浴を除き、１０分後、水浴を用いた。この混 合物を１．　５時間攪拌した。この混合物にＴＨＦ５０ｙｄ中の（Ｅ）−３−（ ７，９−ジー（４−フルオロフェニル）スピロ（４，５）デカ−６，８−ジエン −６−イル〕２−プロペンアルデヒド（２゜７ｇ、７．１７　ミリモル）の溶液 を４０分間にわたって滴下して添加した。その混合物を水中で１時間攪拌し、Ｔ ＨＦＬＯ＋＋＋１中の氷酉乍酸（２，４６ｄ、４２．９７　Ｅリモル）の溶液を ５分間にわたって滴下して添加した。　その混合物を酢酸エチル２５０ｍ１ｌこ 注ぎ、水、重炭酸ナトリウム及び食塩水で抽出した。有機層を硫酸マグネシウム で乾燥し、減圧で蒸発させて、９６〜９９℃の融点を育する生成物３．３ｇを得 た。

無水ＴＨＦ８０ｍｌ中のメチル−（Ｅ）　−７−（７，９−ジー（４−フルオロ フェニル）スピロ（４，５３デカ−６，８−ジエン−６−イル〕−５−ヒドロキ シ−３−オキソ−６−へブテノエート（３，０ｇ、６．０９ミリモル）の溶液に 、トリエチルボラン（９，０７−１９，０７ミリモル）のＩＭのＴＨＦ溶液を添 加した。その溶液を室温で５分間攪拌し、ついでドライアイス−アセトン洛中で 一７８°Ｃに冷却した。この混合物にホウ水素化ナトリウム（０，２７ｇ、７． ０ミリモル）を添加し、続いて３０分間にわたってＴＨＦ１５−中のメタノール ６、０９　ｍｌの溶液を滴下して添加した。反応を１時間攪拌し、温度が徐々に 一５０°Ｃまで上昇した。この混合物に、水（７ｍｌ）中の３０％の過酸化水素 （１４，１７ｍｌ＞の溶液を５分間で滴下して添加した。反応を室温で１時間攪 拌し、酢酸エチル２００イに注いだ。その混合物を１ＮＨｃｊ７で抽出し、つい で食塩水で抽出した。有機層を減圧で蒸発させて物質２．８ｇを得た。残渣を酢 酸エチルに溶解し、その溶液をヘキサンで希釈して１１３〜１１５℃（分解）の 融点を有する固体生成物を沈殿させた。

本発明の化合物は、酵素ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの抑制によりコレステロー ルの生合成を抑制するそられの能力によりコレステロール低下薬剤または血中脂 質低下薬剤（ｈｙｐｏｌｉｐｉｄｅｍｉｃａｇｅｎｔ）として有益である。この ような能力を有するので、これらの化合物は製薬上許される担体中に混入され、 このようなコレステロール生合成の抑制を必要とする患者に経口投与または非経 口投与される。このような製薬製剤は、本発明の少な（とも一種の化合物を含む 。

好適な担体は、希釈剤または充填剤、無菌の水性媒体及び種々の無毒性有機溶媒 を含む。組成物は、錠剤、カプセル、ロゼンジ、トローチ、硬質キャンディ、粉 末、水性懸濁液、または溶液、注射溶液、エリキシール剤、シロップ等の形態で 製剤化でき、また製薬上許される製剤を得るために甘味剤、矯味矯臭薬、着色剤 及び防腐剤を含む群から選ばれた一種以上の薬剤を含んでもよい。

特別な担体及び活性化合物対担体の比は、化合物の溶解性及び化学的性質、特別 な投与法並びに通常の製薬上の慣例により決められる。例えば、ラクトース、ク エン酸ナトリウム、炭酸カルシウム及びリン酸二カルシウムの如き賦形剤並びに 澱粉、アルギン酸及び或種の複雑なシリケートの如き種々の崩壊剤が、ステアリ ン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム及びタルクの如き滑剤と一緒に、錠 剤を製造するのに使用し得る。カプセル形態に関して、好ましい製薬上許される 担体の中にラクトース及び高分子量のポリエチレングリコールがある。

経口用の水性懸濁液が製剤化される場合、担体は乳化剤または懸濁剤であっても よい。エタノール、プロピレングリコール、及びグリセリン並びにそれらの組合 わせの如き希釈剤が使用し得るだけでなく、その他の物質も使用し得る。

非経口投与に関して、水性アルコール媒体中、またはゴマ油もしくは落花生油中 のこれらの化合物の溶液もしくは懸濁液または可溶性の製薬上許される軟膏の水 溶液が使用し得る。

本発明の方法を行なう投薬養生法は、改善が得られるまで最大の治療応答を確保 し、その後、軽減を与える最小有効量を確保する投薬養生法である。投薬量は、 年令、重度、体重及び患者のその他の状態に応じて変化し得るが、通常、経口投 与では体重１ｋｇ当り５ｍｇ〜５００ｍｇの範囲である。勿論、このような投薬 量は２〜４回の投薬に分けて与えられてもよい。その他の投与形態に関して、等 量の投薬量または調節された投薬量が、投与経路に応じて投与される。

本発明の化合物の有用性は、下記の試験方法により測定される。

その方法は下記の文献に基づく。タレインセフ（Ｋｌｅｉｎｓｅｋ）ら著、“ラ ット肝臓からの３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａレダクターゼの 精製”　、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、４巻、１ ４３１〜１４３５頁、１９７７年４月（生化学）；アルブルツ（Ａｌｂｅｒｔｓ ）ら著、“メビノリン：ヒドロキシメチルグルタリル補酵素Ａレダクターゼの高 度に効能のある競合抑制物質及びコレステロール代謝”、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ 、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、７７巻、３９５１〜８９６１頁、１９８０ 年７月、（生化学）；エントウ（Ｅｎｄｏ）ら著、“マウス、ラット中のコレス テロール代謝に関するＭＬ−２３６Ｂの効果、正常動物中のコレステロール低下 活性の欠如“、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ　ｅｔ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ　ＡＣｔａ 、　５７５巻（１９７９年）２６６〜２７６頁；及びバラスブラフ　ン７　Ｌ　 （ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ）ら著、″ラットの非肝臓組織に於ける３− ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａレダクターゼ活性及びコレステロー ル合成の調節の実証”　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　 ＵＳＡ、７３巻、８号、２５６４〜２５６８頁、１９７６年８月（生化学）。

使用した第一の方法（ＨＭＧＲスクリーンと称する）は、以下のとおりであった 。雄のラットを１２時間交互の明暗サイクルに２〜３週間にわたって順化させた 。体重１８０〜２３０ｇの動物に、暗中期間で犠牲にする前の５日間にわたって ２％のコレスチラミンを含むラット用食物を随時与えた。肝臓ミクロソームを調 製し、ＨＭＧＲ酵素を高イオン強度の緩衝液中の凍結融解操作によりミクロソー ムから可溶化した。酵素製剤を３００μβずつの試料中で一８０℃で貯蔵した。

使用前に、酵素を反応混合物中で３７℃で３０分間活性化した。その反応混合物 は、２４０μｌの容積中に、０．１４Ｍのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，０） ；０．１８ＭのＫＣＩ！；　３．５　ｍＭのＥＤＴＡ；１０ｍＭのジチオスレイ トール；　０．　Ｉｍｇ／ｍＡ’　ＢＳＡ　；　３０．０００ｃｐｍの（１４Ｃ ）　ＨＭＧ−ＣｏＡ：２０ＭＭのＨＭＧ−ＣｏＡ、及び２０　ｏμｇの可溶化酵 素（これは抑制物質を含むものと抑制物質を含まないものである）（１０μｌの ＤＭＳＯ中）を含んでいた。３０℃で５分間保温した後、その反応を０．２ｍＭ のＮＡＤＰＨで開始させた。最終アッセイ容積は３００μｌであった。ついで、 反応をＩＮのＨＣＩ！１００μ！で停止した。生成物の完全なラクトン化を可能 にするため３７℃で更に１５分間保温した後、混合物をＧＤＷ３−で希釈した。

ついで、希釈混合物を、蒸留水で平衡にした１００〜２００メツシユのバイオ− レックス（Ｂｉｏ−Ｒｅｘ）イオン交換樹脂（バイオ−ラド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ） の塩化物の形態）を含む０．７　Ｘ　１．４　ｃｍのカラムに注入した。この樹 脂で未反応（”Ｃ）ＨＭＧ−ＣｏＡを吸着し、生成物（”Ｃ）ラクトンをシンチ レーションバイアル中に直接溶出させた（回収率８０％）。アクアゾル（Ａｑｕ ａｓｏｌ）　Ｉ　Ｏ−を添加した後、試料の放射能をシンチレーションカウンタ ーで測定した。

実施例１、工程９で得た化合物及びそのラクトン形態に関する結果を表Ｉに示す 。

使用する第二の方法（断食半ビボと称する）は、以下のとおりであった。１７０ 〜２１０ｇのラットを、使用前に１週間にわたって低コレステロール食事で維持 した。薬剤（表Ｉに示される）を、断食させた（１６時時間量）ラットに０．５ ％のメトセル中で経口投与した。１時間後、ラットを断頭し、それらの肝臓を除 去し、冷却した酸素化フレブーリンゲル−重炭酸塩緩衝液（ｐＨ７，４）ツバを 使用して０．５　ｍｍの薄片に裁断し、同緩衝液中に懸濁させた。

１００１１１ｇの組織を含む懸濁液をアリコートを、（”Ｃ）酢酸ナトリウム（ ２μＣｉ、ＩｍＭ）を含む培養管にピペットで入れた。これらの管を９５％Ｏｘ 　／ｓ％Ｃｏｔで通気し、栓をし、振とう水浴中で１５０振動／分で２時間にわ たって３７℃で保温した。最終アッセイ容積はｌＯｄであった。保温後、反応を エタノール中の１５％ＫＯＨ１，０艷の添加により停止し、内部標準の３Ｈ−コ レステロールを添加した。。管に再度栓をし、試料を周期的に混合しながら２時 間にわたって７５℃でケン化した。続いて、パイオーラドの標準キットを使用す るタンパク質分析のため、アリコート取り出し、ケン化試料の残りを石油エーテ ル１０−で３０分間抽出した。下方の水相をドライアイス／アルコール混合物中 で凍結させ、エーテル層をラベルした管に注入した。ついでエーテルを蒸発、乾 燥し、プラスチックのシリカゲルプレートで薄層クロマトグラフィーにより分離 した。ヨウ素で視覚化した後、コレステロールスポットを切断し、液体シンチレ ーション流体でカウントした。実施例１、工程９の化合物のナトリウム塩に関す る結果を表１に示す。

表１ 本ＩＣｇｏ（マイクロモル／Ｉりまたはコレステロール抑制率Ｃ％）ＭＧＲ スクリーン　０．０００９０μＭ　Ｏ，０７ＭＭ零コレステロール合成の５０％ 抑制に必要とされる化合物のマイクロモル濃度＝ＩＣ，。

宝際膿査報倫 ＰＣＴ／ｕｓ９Ｍ）１０１２６３ １．　Ｃｂ＊ｊｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　５ｕｂｊｅｃｔ　Ｍａｊｔｅｒ工 ＰＣ５（ｃｏｎｔ、）　■７Ｃ５９１５４；■７Ｃ５９／１１ｔ１．５．ｃｌ、 （ａａｎ！、）　５６２／４５１；　５６２／４６９；　５１４１５３０；　５ １４／４３１；　５１４／４３２；　５１S１５３８；　５１４１５６７； ５１４１５６８；　ａｒｄ　５１４１５７０Ｕ、Ｓ、Ｃ１，（ｃｏｎｅ、）　５ １４／４３１；　５１４１５３２；　５１１１５３８；　５１４１５６７；　５ １４１５６８；　ａｎｉ@５１４１５７０ ＰＣＴ／ＩＪ３９０１０１２６３ Ｃｏｒ＋を土ｎｕａｅｉｏｎＳｈｅｅｔＡｔｔａｃｈｎｅｎｔ　５ｈｅｅｔ　ｆ ｏｒ　５ｅｃｔｉｏｎ　ＶＩ。

ＰＣＴＩＵＳ９０１０１２６３ Ｃｏｎｔｉｎｕａｔｉｏｎ　Ｓｈａａｔ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、 Ｙは−ＣＨＲ−、−ＣＨＲＣＨＲ、−ＣＨＲＣＨＲＣＨＲ−、または−ＲＣ＝Ｃ Ｒ−（式中、ＲはＨまたは低級アルキルである）であり；Ｘ、Ｘ１及びＸ２は独 立にＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、ＣＦ３、アルキル、またはアルコキシであり、 ； Ｒ１はＨ、アルキル、置換アルキル、ＣＦ３、アリール、または置換アリールで あり； ｍは０、１、２または３であり； ｎは０または１である。） により表わされる化合物、そのヒドロキシ酸及びエステル、並びにこれらの製薬 上許される化合物。 ２．Ｘがフルオロである請求の範囲第１項に記載の化合物。 ３．Ｘがフルオロであり、Ｒ１が１〜６個の炭素原子のアルキルである請求の範 囲第１項に記載の化合物。 ４．Ｒ１がアリールであり、Ｘがトリフルオロメチルである請求の範囲第１項に 記載の化合物。 ５．Ｘがアルキルであり、Ｒ１がフェニルである請求の範囲第１項に記載の化合 物。 ６．Ｘがアルキルであり、Ｒ１が置換フェニルである請求の範囲第１項に記載の 化合物。 ７．ＸがＨであり、Ｒ１がナフチルである請求の範囲第１項に記載の化合物。 ８．Ｒが１〜４個の炭素原子を有する低級アルキルである請求の範囲第１項に記 載の化合物。 ９．Ｒ１がフルオロフェニルである請求の範囲第１項に記載の化合物。 １０．ｎが１である請求の範囲第１項に記載の化合物。 １１．Ｙが−ＣＨ＝ＣＨ−である請求の範囲第１項に記載の化合物。 １２、Ｙが−ＣＨ２ＣＨ２−である請求の範囲第１項に記載の化合物。 １３．トランス−（Ｅ）−６−［２−［２−（４−フルオロ−３−メチルフェニ ル）−４−フェニル−スピロ［４，４］−ノナ−１，３−ジエン−１−イル］エ テニル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ピラン−２ −オン。 １４．トランス−（Ｅ）−６−［２−［７，９−ジ−（４−フルオロフェニル） −スビロ−［４，５］デカ−６，８−ジエン−６−イル］エテニル］−３，４， ５，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ビラン−２オン。 １５．トランス−（Ｅ）−６−［２−［２−（４−フルオロフェニル）−４−（ ４−ヒドロキシメチルフェニル）スピロ［４，５］デカ−１，３−ジエン−１− イル］エテニル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ピ ラン−２−オン１６．トランス−（Ｅ）−６−［２−［６−（４−フルオロ−３ −メチルフェニル）−８−（４−ピリジル）−スピロ［３，５］ノナ−５，７− ジエン−５−イル］エテニル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキ シ−２Ｈ−ピラン−２−オン。 １７．トランス−（Ｅ）−６−［２−［２−（４−フルオロフェニル）−４−（ ２−フリル）スピロ［４，４］−ノナ−１，３−ジエン−１−イル］エテニル］ −３，４，５，６−チトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ピラン−２−オン。 １８．トランス−（Ｅ）−６−［２−［５−（４−フルオロフェニル）−７−（ ２−ヒドロキシプロプ−２−イル）−スピロ［２，４］ヘプタ−４，６−ジエン −４−イル］エテニル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２ Ｈ−ピラン−２−オン。 １９．トランス−（Ｅ）−６−［２−［２−（４−フルオロフェニル）−４−フ ェニル−スピロ［４，４］ノナ−１，３−ジエン−１−イル］エチニル］−３， ４，５，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ピラン−２−オン。 ２０．メチル−（Ｅ）−７−（７，９−ジ−（４−フルオロフェニル）スピロ［ ４，５］デカ−６，８−ジエン−６−イル］−３，５−ジヒドロキシ−６−ヘプ テノエート。 ２１．治療有効量の請求の範囲第１項記載の化合物及び製薬上許される担体を含 むことを特徴とするコレステロール低下、血中の脂質低下製薬組成物。 ２２．前記の化合物が トランス−（Ｅ）−６−［２−［２−（４−フルオロ−３−メチルフェニル）− ４−フェニル−スピロ［４，４］−ノナ−１，３−ジエン−１−イル］エテニル ］−３，４，５，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ピラン−２−オン ；トランス−（Ｅ）−６−［２−［７，９−ジ−（４−フルオロフェニル）−ス ピロ［４，５］デカ−６，８−ジエン−６−イル］エテニル］−３，４，５，６ −テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ピラン−２−オン； トランス−（Ｅ）−６−［２−［２−（４−フルオロフェニル）−４−（４−ヒ ドロキシメチルフェニル）スピロ［４，５］デカ−１，３−ジエン−１−イル］ エテニル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ピラン− ２−オン；及びトランス−（Ｅ）−６−［２−［６−（４−フルオロ−３−メチ ルフェニル）−８−（４−ピリジル）−スピロ［３，５］ノナ−５，７−ジエン −５−イル］エテニル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２ Ｈ−ピラン−２−オンからなる群から選ばれる請求の範囲第２１項に記載のコレ ステロール低下、血中の脂質低下製薬組成物。 ２３．前記の化合物が トランス−（Ｅ）−６−［２−［２−（４−フルオロフェニル）−４−（２−フ リル）スピロ［４，４］−ノナ−１，３−ジエン−１−イル］エテニル］−３， ４，５，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ピラン−２−オン； トランス−（Ｅ）−６−［２−［５−（４−フルオロフェニル）−７−（２−ヒ ドロキシプロプ−２−イル）−スピロ［２．４］ヘプタ−４，６−ジエン−４− イル］エテニル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ピ ラン−２−オン；トランス−（Ｅ）−６−［２−［２−（４−フルオロフェニル ）−４−フェニル−スピロ［４，４］ノナ−１，３−ジエン−１−イル］エテニ ル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ピラン−２−オ ン；及び メチル−（Ｅ）−７−（７，９−ジ−（４−フルオロフェニル）スピロ［４，５ ］デカ−６，８−ジエン−６−イル］−３，５−ジヒドロキシ−６−ヘプテノエ ートからなる群から選ばれる請求の範囲第２１項に記載のコレステロール低下、 血中の脂質低下製薬組成物。 ２４．請求の範囲第２１項に記載の製薬組成物を投与することを特徴とする、コ レステロール生合成を抑制するような治療を必要とする患者のコレステロール生 合成を抑制する方法。