JPH05509234A

JPH05509234A - ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列対応するペプチドセグメント並びに診断及び治療への利用

Info

Publication number: JPH05509234A
Application number: JP4505541A
Authority: JP
Inventors: エルサン，チェリ; トリエブル，フレデリク; ロマンロマン，セルジオ; フェラジニ，ローラン
Original assignee: ルセル　ユクラフ
Priority date: 1991-02-08
Filing date: 1992-02-07
Publication date: 1993-12-22
Also published as: AU660660B2; WO1992013949A1; EP0529033A1; US5817511A; US5798231A; ES2271940T3; DE69233804D1; US6114516A; KR100242278B1; CA2079879C; ATE504650T1; DE69233652T2; CA2079879A1; DK0529033T3; AU1360392A; IE920413A1; EP1721978A1; EP1721978B1; EP0529033B1; DE69233652D1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列対応するペプチドセグメント発明の背景本発明は、Ｔ細胞レセプターのα鎖の可変領域をコードする新規なヌクレオチド配列、対応するペプチド断片並びにその診断及び治療への利用に関係する。

成熟Ｔリンパ球表面の、抗原を認識するレセプター（以後、Ｔ細胞レセプターと呼ぶ）は、免疫グロブリンとある種の類似性を有する構造を有する。従って、それらは、α及びβ糖蛋白質鎖又はγ及びδ糖蛋白質鎖を含むヘテｏ２ｆｉ体構造を含む（（１）Ｍｅｕｅｒ等、（２）Ｍ□ｉｎｇｅｏｎ等、　（３）Ｂｒｅｎｎｅｒ等、　（４）Ｂａｎｋ等を参照されたい）。

Ｔ細胞レセプターのディレクトリ−は、抗原決定基の莫大な多様性を指示することが出来なければならない。

これは、Ｔ細胞レセプターの異なる構造領域をコードする遺伝子の異なる不連続断片の遺伝的組換えによって得られる。従って、これらの遺伝子は、■セグメント（可変セグメント）、適宜にＤセグメント（多様性セグメント）、Ｊセグメント（結合セグメント）及びＣセグメント（定常セグメント）を含む、Ｔ細胞の分化の間に、β及びδ遺伝子座に関してはＶ、Ｄ及びＪセグメントの組換えにより、α及びγ遺伝子座に関してはＶ及びＪセグメントの組換えにより特異的遺伝子が造られる。これらの特異的結合並びに２つの鎖の対合は、結合の多様性を造り出す、この多様性は、２つの補足的機構（即ち、■−Ｄ−Ｊ又はＶ−Ｊセグメントの不正確な組換え及びＮ領域に対応するヌクレオチドの追加）によって大いに増幅される（　Ｄａｖｉｓ等、（５））。

若干数の遺伝子■セグメントが既に知られている。これらのセグメントは、配列の類似性の関数としてサブファミリーに分類された。定義により、ヌクレオチド配列における７５％を超える類似性を有するセグメントは、同じサブファミリーのメンバーであると見なされた（　Ｃｒｅｗｓ等（６））。既知の■α遺伝子セグメントも又２２サブフアミリーに分類されたが、そのうち１４フアミリーは１つのメンバーしか有しない（（７）Ｃｏｎｃａｎｎｏｎ等、（８）Ｋｉｍｕｒａ等、　（９）Ｗｉｌｓｏｎ等を参照されたい）。

更に、約６０のＪ遺伝子セグメントが記載された（９）。

更に、Ｔ細胞レセプター（特にβ又は６Ｍ）の可変部分の特異的セグメントに対するモノクローナル抗体が、最近、ＷＯ９０１０６７５８に記載された。これらのモノクローナル抗体は、例えば、リウマチ様関節炎の診断手段として有用であるだけでなく治療手段としても有用である。

自己免疫疾患の治療におけるα又はβ鎖の可変領域に対応する合成ペプチドの利用も又記載されている（２３及び２４）。

ヒトにおけるＴ細胞レセプターの異なる可変セグメントの発現において個人個人で変動があることも又知られている（２７及び２８）６本発明は、一方で、新規なファミリー又は少な（とも１つのメンバーが既知のサブファミリーに属する新規なＶα遺伝子セグメントを、他方で、新規なＪα遺伝子セグメントを供給することによって、Ｔ細胞１／セブターの鎖の可変領域をコードする遺伝子セグメントのディレクトリ−を強化することを目的とする。

それ故、本発明の主題は、下記の何れか１つから選択するヌクレオチド配列を鳴むｃＤＮＡに対応する、ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列、並びに、それらと１つ以上のヌクレオチドが異なる配列である：ａ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１−１１の配列の１つに対応するＶαセグメント、及びｂ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１２．１３及び１５〜２０の配列の１つ１こ対応するＪαセグメント。

特に、本発明の主題は、 −ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１〜１０の配列の１つに対応する■αセグメントの何れか１つから選択するヌクレオチド配列を含むｃＤＮＡに対応する、ヒトＴリンパ球レセプターの鎖の可変領域をコードする配列、及びそれらと１つ以上のヌクレオチドが異なる配列、−ＳＥＱ、ＩＤ　Ｎｏ、１２．１３及び１５〜２０の配列の１つに対応するＪαセグメントの何れか１つから選択するヌクレオチド配列を含むｃＤＮＡに対応する、ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖の可変領域をコードする配列、並びにそれらと１つ以上のヌクレオチドが異なる配列。

“及びそれらと１つ以上のヌクレオチドが異なる配列”という表現は、最大８ヌクレオチドまで異なるが、最も多くは１又は２ヌクレオチドが異なり、或は、ｌ又１す２コドンの欠失又は付加によって異なる対立遺伝子を含む。

この発明の更に特別の主題は、 −ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２〜５の配列の１つに対応するＶαセグメントの何れか１つから選択するヌクレオチド配列の全部又は一部に対応するｃＤＮＡに対応する、ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列、並びにそれらと１又は２ヌクレオチドだけ異なる配列、 −下記の配列の１つに対応するＶαセグメントの何れか１つから選択するヌクレオチド配列の全部又は一部に対応するｃＤＮＡに対応する、ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列、並びにそれらと１又は２ヌクレオチドだけ異なる配列＝ＳＥＱ　ｒＤ　Ｎｏ、１の１〜２００ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、６の１〜４６７ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、７の１〜７７ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、８の１〜１５１ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、９の２９１〜３８６ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１０（７）１〜２６０、−　ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１１に対応するヌクレオチド配列の全部又は一部に対応するｃＤＮＡに対応し且つ１０８ヌクレオチドを含む、ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列、−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ。１２．１３及び１５〜２０の配列の１つに対応するＪαセグメントの何れか１つから選択するヌクレオチド配列の全部又は一部に対応するｃＤＮＡに対応する、ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列、並びにそれらと１又は２ヌクレオチドだけ異なる配列。

−ヌクレオチド配列の全部又は一部に対応するｃＤＮＡに対応するヌクレオチド配列”という表現によって、完全な配列並びにプローブ（一般に少なくとも１０ヌクレオチドを含む）又はプライマー（一般に少なくとも１５ヌクレオチドを含む）として使用し得る短い断片（オリゴヌクレオチド）を含むこれらの配列の断片をも意味する。一般的な様式において、この発明は、この発明に対応する■α 及びＪα配列の断片である新規なオリゴヌクレオチドの群を含む。

１又は２ヌクレオチドだけ異なる配列に関しては、それらは、幾つかのｃＤＮＡのヌクレオチド配列の決定の時に実験的に見られる変動に対応する。

本発明の主題は又、この発明によるヌクレオチド配列並びに対立遺伝子及び同じ機能を有するその誘導体によりコードされるペプチドでもある。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１１の配列１０８〜３６４の全部又は一部によりコードされるペプチド配列によって構成され又は該ペプチド配列からなるペプチドも又本発明の主題である。

一般的様式において、本発明は、この発明によるヌクレオチド配列によりコードされるペプチド配列並びにこれらのペプチドの断片から構成され又は該ペプチド配列からなるペプチドを含む。それは、後者と１つ以上のアミノ酸が異なり且つ同じ機能を有するペプチドをも含む。これらのペプチドは、突然変異蛋白質を伴って知られるもの等の変異又は対立遺伝子の変異に対応し得る。

実際、特に、ヒトのＴレセプターの鎖の可変領域をコードする成る遺伝子セグメントが、対立遺伝子変異と呼ばれる遺伝的多型の現象にさらさられるということが示された（２５）。本発明は、この現象から生じるペプチドを含む。

この発明によるヌクレオチド配列は下記の段階によって得られたニーａ＋人の末梢リンパ球のＲＮＡの単離；−逆転写酵素及びＣα領域に特異的なプライマーＡ（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２１）を用いた相補的ＤＮＡの獲得。

−ＤＮＡポリメラーゼ、ポリＣプライマー（ＳＥＱＩＤ　Ｎｏ、２２）及びＣα 領域に特異的なプライマーＢ　（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２３）を用いた遺伝子増幅（固定化ポリメラーゼ連鎖反応、即ちＡ−ＰＣＲによる）； −ＤＮＡポリメラーゼ及びＣａ領域に特異的なプライマーＣ（ＳＥＱ　ｒＤ　Ｎｏ、２４）を用いたＡ−ＰＣＨによる新たな増幅； −　プラスミツドベクターへの挿入； −組換えベクターによる細菌宿主のトランスホーメーション； −Ｃαに特異的な標識オリゴヌクレオチドＤ（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２５）を用いた組換え体細菌コロニーのスクリーニング； −陽性コロニーからのプラスミツドの抽出；−及びＣ領域を含むＤＮＡ断片の配列決定。

本発明は、特に、この発明の配列ＩＤ　Ｎｏ、１〜１３及び１５〜２０に対応する可変又は結合セグメントを含むｍＲＮＡを発現する末梢リンパ球から出発することによる双特異的（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）遺伝子増幅（ポリメラーゼ連鎖反応即ちＰＣＲ）により、或は、無作為に採取した個人の任意の体細胞のゲノムＤＮＡにこのＰＣＲ技術を適用することによって再現することが出来る。この発明は又、オリゴヌクレオチドの化学合成により上記のゲノム配列を製造することによっても再現することが出来る。

この発明によるペプチドは、榎準的なペプチド合成によって得ることが出来る。

それらは又、この発明によるペプチドをコードするＤＮＡ配列のプラスミツド等の発現ベクターへの挿入及びこの発現ベクターでの細胞のトランスホーメーションを含む公知の遺伝子工学技術の適用によっても得ることが出来る。

それ故、本発明の主題は又、この発明によるペプチドをコードするＤＮＡ配列を含むプラスミツド及び発現ベクター並びにこのベクターでトランスホームした宿主でもある。

更に、本発明の主題は、この発明によるペプチドに属する又は該ペプチドからなる抗原決定基に対する抗体、特に、モノクローナル抗体である。

これらのモノクローナル抗体は、培養細胞系統から抗体分子を産生させる任意の技術によって得ることが出来る。これらの技術は、ハイブリドーマを用いる種々の技術を含む。

抗体産生は、この発明によるペプチド又は断片（天然、組換え又は合成の何れかであり、適宜、テタニー性アナトキシン等の免疫原に結合した後使用）の注射によって動物を免疫化することにより、或は、対応する配列を表面に発現しているヒトＴリンパ球（対応するコード配列でトランスフェクトした組換え細胞を含む）の注射によっても動物において得ることが出来る。

この発明によるポリペプチドに対するモノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマも又、本発明の主題である。

本発明は又、Ｔ細胞レセプターの限定された可変領域と反応するこの発明によるモノクローナル抗体の断片及び誘導体をも含む。これらの断片は、特に、抗体分子のペプシンによる酵素的開裂によって得ることの出来るＦ　（ａ　ｂ’　）　ｘ断片、Ｆ　（ａｂ’　）ｘ断片のジスルフィド橋の還元により得ることの出来るＦａｂ’断片及び還元剤の存在下でのパパインによる抗体分子の酵素的開裂により得られるＦａｂ断片である。これらの断片も又、遺伝子工学によって得ることが出来る。

これらのモノクローナル抗体誘導体は、例えば、放射性同位体等の標識を付けた抗体又はこれらの抗体の断片である。モノクローナル抗体誘導体は又、治療上活性な分子（特に細胞毒性化合物）を付けた抗体又はこれらの抗体の断片でもある。

この発明の生成物は、診断分野及び治療分野における幾つかの利用を有する。

１−　診断分野における利用この発明によるヌクレオチド配列に含まれるオリゴヌクレオチドは、鎖の可変領域とハイブリダイズし得る検出用プローブ（一般に、少なくとも１０ヌクレオチド）又は増幅すべき配列に結合し得るＤＮＡの増幅用のプライマー（一般に、少なくとも１５ヌクレオチド、好ましくは、少なくとも１７ヌクレオチド）を構成するために利用することができる。

従って、これらのオリゴヌクレオチドを、患者からの試料のｍＲＮＡ中においてＴ細胞レセプターの鎖の可変領域をコードする遺伝子に相同な核酸配列の存在を検出することによる免疫不全の診断に利用する。種々の方法を用いてＴ細胞遺伝子の発現と病気との間の関係を確立することが出来る。これらの方法は下記を含む：ａ　−優性遺伝子の頻度を決定するための病気と関係のあるＴ細胞から得られるｃＤＮＡ発現ライブラリーの生成及び分析；ｂ　−存在するＴ細胞レセプターをコードする遺伝子の遺伝的冬型又は再配列を決定するためのゲノムＤＮＡの試料のサザーンプロット分析；ｃ　−ｃＤＮＡの獲得、ＰＣＨによる増幅及び標識したプローブとのハイブリダイゼーションによる試料の分析；ｄ　−予めの培養なしてのＴ細胞のイン・サイチューハイブリダイゼーション。

これらのプライマーを上記のＣにおいて定めたような方法でＰＣＲ反応において使用する。

この発明によるモノクローナル抗体（特に、抗■α抗体）、これらの抗体の断片又は誘導体を用いて、例えば、自己免疫疾患、発癌、アレルギー、移植及び感染症の分野におけるＴ型免疫応答を研究することが出来る。

特に、Ｔレセプターの種々の可変αセグメントのディレクトリ−を、血中又は組織のＴ細胞の何れでも研究することが出来る。一般的様式において、使用する技術は、イン・ビトロ又はイン・ビボの方法であって良い。

イン・ビトロの方法を用いるならば、使用する試料は、体液試料又は組織試料であって良い、使用する技術は、特に、血中Ｔリンパ球を分析し又は組織に浸潤したリンパ球を研究するために病理解剖切片をイムノペルオキシダーゼで標識するためのフローサイトフルオリメトリーを含むことが出来る。

イン・ビボの方法を用いるならば、これらの抗体、それらの断片又は誘導体を通常の経路、例＾ば静脈経路によって投与し、且つ免疫特異的結合を検出する。これは、例えば、放射性同位体で標識した抗体を用いる場合に得られる。

２−　治療分野における利用この発明によるヌクレオチド配列に含まれるオリゴヌクレオチドを、アンチセンスオリゴヌクレオチドとして治療に利用することが出来る。事実、ヒトのリンパ球における転写遺伝子の発現を、これらのリンパ球を問題の遺伝子に特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチドと共にインキュベートすることによりイン・ビトロで阻害することが可能であることは公知である（２６）。これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、一般に、少な（とも１０、好ましくは、少なくとも１６ヌクレオチドを含む。これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、特に、翻訳開始部位（ＡＴＧ）から２０ヌクレオチド上流に対応する逆向配列及び相補性配列であって良い。Ｖα又はＪα遺伝子セグメントに特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチドのイン・ビトロでの利用の意義は、このＶα又はＪαセグメントを含むＴレセプターの発現を停止（又は強く減少）させ、こうして、Ｔリンパ球の特異的反応性のレベルにおいてクローン脱落の現象を得ることである。これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、イン・ビトロでの、次いで再注入されるヒトＴリンパ球における利用のみならず、イン・ビボでの、好ましくは、これらのオリゴヌクレオチドのイン・ビボでの安定性及びＴリンパ球への透過性“を増大する改質後の、局所注射又は全身注入による利用も可能である。

この発明によるモノクローナル抗体、特に抗■α抗体を用いて免疫系を調節することが出来る。抗体を投与してエフェクターＴ細胞とそれらの特異的抗原との相互作用をブロックすることが出来るのはこの方法においてである。Ｔ細胞レセプターのα鎖上への特異的固定のおかげで、例えば、細胞毒性分子又は放射性同位元素に結合された抗Ｔレセプター抗体を、クローン脱落を得るように投与することも出来る。この発明によるモノクローナル抗体を、Ｔ細胞のあるサブアセンブリーを特異的様式で活性化するように分裂促進する濃度で治療に用いることが出来、又はより高濃度で用いてそれらを関係するレセプターに固定し、こうして、細網内皮細胞系によりこれらのサブアセンブリーを除去するために標識することが出来る。病気の治療における重要な基準は、病気と関係するＴ細胞のサブアセンブリーを調節する能、力である。この治療用の調節（即ち、Ｔ細胞の特定のサブアセンブリーをブロック若しくはサプレスし又は逆に刺激し及び活性化すること）の正確な性質は、問題の病気及び関係するＴ細胞の特異的サブアセンブリーに依存する。

この発明によってＴ細胞集団の全体は調節されず、Ｔ細胞レセプターに特異的な αサブファミリーを発現しているＴ細胞のサブアセンブリーのみが調節されるので、この型の治療は、腎臓移植を受けて拒絶の問題を有している患者における抗ＣＤ３抗体での治療等の現行の抗体を用いる治療において利点を有する。

更に、Ｔ細胞の応答がしばしばオリゴクローン性（ｏｌｉｇｏｃｌｏｎａｌ　）であるとき、治療において幾つかの抗体の“カクテル”を用いることは、一般に、便利である。

更に、例えば抗体を有する球を含むカラムを通すことによって、抗Ｖα抗体を用いてイン・ビトロでＴリンパ球を選択することが出来る。このＴリンパ球の分離は、これらのリンパ球を患者に再注入する前に培養するために用いることが出来る。

更に、この発明によるペプチド配列の全部又は一部、即ち、この発明によるヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列又はこれらの配列の断片（一般に、少なくとも８〜１０アミノ酸を含む）を治療に用いることが出来る。ヒト又は動物に投与されたこれらの配列又はこれらの断片は、おとりとして作用しく即ち、それらは有害な抗原が有するエピトープ上に固着して正常Ｔ細胞と抗原との反応を停止する）、こうして、自己の決定基に対して攻撃的な病気の発展を阻止する。それらは又、ワクチンの製造において（適宜、蛋白質キャリアーと結合した後で）免疫原として利用することも出来る。

本発明を、以下において、下記の添付図面に言及することによって一層詳細に記載する。

−第１Ａ〜Ｅ図には、公知の■配列及び５ＥＱＩＤＮｏ、６〜１０のそれぞれの配列についてのこの発明による伸長の部分的配列を一本線状に示しである（ＩＧＲａ０８〜ＩＧＲａ１２と記しである）。これらの図において、ヌクレオチドの番号付けは、ＡＴＧ開始コドン（下線を引いである）にて開始する。点は、同じヌクレオチドを示す。リーダー配列と想定される配列はその上に線を引いである。

−第２図には、新規なＪ配列（ＳＥＱ　ＩＤＮｏ、１２．１３及び１５〜２０）を一本線状に示し、ＩＧＲＪａＯｌ、０２及び０４〜０９と記しである。これらの配列において、生殖系列の組換え信号には下線を引いである。高度に保存されたコドンに対応するアミノ酸を配列の上に記しである。保存されたアミノ酸の一つの位置における置換に対応するコドンには二重の下線を引いである。

−第３図には、制限酵素で処理したゲノムＤＮＡのＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１〜５の配列に特異的なプローブを用いたサザーンプロット分析を示しである。用いた制限酵素はＥｃｏＲＩ　（カラムＲ）、ＨｉｎｄＩ　Ｉ　Ｉ　（カラムＨ）及びＢａｍＩＩＩ（カラムＢ）である。この図において、三角形は、特異的様式でＣ αとハイブリダイズしているＤＮＡ断片の位置を示している。

−第４図は、健康な個人の末梢リンパ球により発現したＴＣＲα鎖の増幅された転写物及び同時に増幅したβ−アクチン対照のオートラジオグラフィーによる検出を示している。

Ｉ−ｃＤＮＡの　′　びＰＣＲによる一個人の末梢リンパ球をＤＮＡＩとして用いる。全ＲＮＡをグアニジウムイソチオシアネート及び塩化セシウムを用いる方法（Ｃｈｉｒｇｗｉｎ（１０））又はグアニジウムイソチオシアネート、フェノール及びクロロホルムを用いる抽出による一段階方法（ＣｈｏｍｃｙｚｎｓｋＮｌｌ）　）によって調製した。

第１のｃＤＮＡ鎖を、最終容積５０μｍにて、５μｇの全ＲＮＡ、逆転写酵素及び配列５−ＧＴＴＧＣＴＣ（：ＡＧＧＣＣＡＣＡＧＣＡＣＴＧにより構成されるＣα領域に特異的なプライマーＡ　（ＳＥＱ　ｒＤ　Ｎｏ、２１）を用いて、温度４２℃で１時間にわたって合成した。この物質を次いでフェノール／クロロホルムでの抽出及び酢酸アンモニウムでの沈殿により精製した。アガロースゲル上で０．４５／ｌｋｂ画分を選択した後、１４単位のターミナルデオキシヌクレオチヂルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）を用いてＣｏ　Ｃ１ｘ添加緩衝液中のＲＮ　Ａ　／　ｃ　Ｄ　Ｎ　ＡへのｄＧの添加を３７℃で３０分間行なう。７０℃に１０分間維持することにより反応を停止した。ＩＮ　ＮａＯＨ（１／３容）を添加して試料を５０’Ｃで１時間インキュベートしてＲＮＡをハイブリダイズし、次いで、２Ｍ　トリスＨＣ１（ｐＨ８）及びＩＮ　ＨＣＩで中和した。フェノール／クロロホルム混合物での抽出の後、末端がＧである第１のｃＤＮＡをエタノールで沈殿させ且つ５０ｍＭＫＣｌ　、　１０ｍＭ　ト　リ　ス　−　Ｃ１（ｐＨ８、３）　、１．５ｍＭ　ＭｇＣ１１，０，１％（Ｗ／Ｖ）　ゼラチン、２００マイクロモルのｄＮＴＰ、２．５単位のＴａｑポリメラーゼ及び１００ピコモルの２つのプライマーを含む１００μｍの最終容積中でのＰＣＲ技術（５ａｉｋｉ等（１２）により記載されたポリメラーゼ連鎖反応）を用いた増幅にかけた。

用いた２つのプライマーは、一方は、Ｌｏｈ等（１３）により記載されたポリＣプライマー（５−ＧＣＡＴＧＣＧＣＧＣＧＧＣＣＧＣＧＧＡＧＧ−１４Ｃ）　（Ｓ　Ｅ　Ｑ　Ｉ　ＤＮｏ、２２）であり、並びにＣα領域に特異的なプライマー　Ｂ　（５°−ＧＴＣＣＡ丁ＡＧＡＣＣＴＣＡＴＧＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧ　）　（Ｓ　Ｅ　ＱＩＤ　Ｎｏ、２３）である。

２５回の増幅サイクルを行ない、その後、最後に７２℃での伸長期間を１５分間続ける。各サイクルは、９２℃で１分間の変性段階、５５℃で２分間のハイブリダイゼーション及び７２℃で４分間の伸長期間を含む。増幅した生成物を次いでエタノール沈殿し、３０ｍＭ　酢酸ナトリウム（ｐＨ５）、５０ｍＭ　ＮａＣ１，１ｍＭＺｎＣ１ｇ、５％（ｖ　／　ｖ　）グリセロール中に再Ｐ、濁し、この物質の１／１０を１％低融点アガロースゲル上で大きさの関数として精製する。

次いで、第２の増幅フェーズを、直ちに、約１０％のバンドを含むアガロースにおいて前と同じ条件に従って行なう（但し、プライマー５°−ＡＴＡ（：ＡＣＡＴＣＡＧＡＡＴＴＣＴＴＡＣＴＴＴＧ（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２４）をＣａ領域に特異的なプライマーＣとして用いる）。反応混合物を次いでエタノール沈殿し、６０μｌのＨ，Ｏに再懸濁する。

ＩＩ−ｃＤＮＡのクローニング　び　夕１゛第２の増幅の生成物の１／３を５ａｃＩＩで消化し、１％アガロースゲル上で分離し、そしてガラスピーズ上での吸収により精製する。この物質をブルースクリプト（Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ）　Ｓ　Ｋ　”ベクター（米国、Ｌａ　Ｊｏｌｌａ在、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）に挿入し、得られた組換え体を用いてＥ。

ｃｏｌｉのＸＬＩブルー株（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）をトランスホームする。Ｘ −ｇａｌ及びｒ　ＰＴＧの存在下での沈降の後、“ドツトプロット”技術を用いて白色コロニーについて試験を行ない、そしてＳ２ｐで標識したＣα領域に特異的な第３のオリゴヌクレオチド（５°−ＧＴＣＡＣＴＧＧＡＴＴＴＡＧＡＧＴＣＴ）　（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２５．）をプローブとして用いる。陽性コロニーのプラスミツドＤＮＡを抽出し、配列決定を二本鎖の下でシーケネース２．０（米国、Ｃ１ｅｖｅｌａｎｄ在、ＩＪｎｉｔｅｄ　５ｔａｔｅｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、１ｃａｌｓ社）を供給者の勧めに従って用いて、ジデオキシチェーンターミネーション法（Ｓａｎｇｅｒ等（１４））によって行なう。５ＥＱＩＤＮｏ、５の配列を例外として、すべてのヌクレオチド配列を少なくとも２つの別個のｃＤＮＡクローンを用いて二本鎖にて決定した。

得られた配列を、ＬｉｐｍａｎとＰｅａｒｓｏｎ　（１５）によって開発された方法を用いて公開されたＶａ及びＪα配列と比較した。想定される開始コドンを、真核細胞における翻訳開始部位についてのＫｏｚａｋのコンセンサス配列（Ｋｏｚａｋ（１６）　）の存在を探すことによって同定した。Ｎ末端部位の疎水性リーダー配列の存在を、Ｋｙｔｅ（１７）により記載された方法に従って疎水性分析によって検出した。

ｌｌｌ−サザーンプロットＤＮＡをヒト赤白血病細胞系統に５６２から抽出し、制限酵素ＥｃｏＲ１，ＢａｍＨＩ又はＨｉｎｄＩＩｒの内の１つで消化した。そのＤＮＡ（１５μｇ）を０，７％アガロース上での電気泳動にかけ、Ｔｒｉｅｂｅｌ等（１８）により記載されたようにしてナイロン膜上にトランスファーした。ハイブリダイゼーションを、６ＸＳＳＣ１０，５％ＳＤＳ、５×デンハート溶液、及び１００μｇの変性サケ精子ＤＮＡと共に６５℃で１６時間行なった。この膜を６５℃で２ＸＳＳＣと０．２％のＳＤＳで洗った。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１〜５の配列に対応する■α断片を含むＶ−Ｊ−ＣｃＤＮＡ　（＞５００ｂｐ）の増幅（ポリＣプライマー及びＣプライマーをプライマーとして使用）によって得たプローブをＶに特異的なプローブとして使用する。このプローブを１％アガロースゲル上で精製した。Ｓ２ｐで［２したＤＮＡプローブを、Ｆｅｉｎｂｅｒｇ法（１９）によりアガロース上で精製した断片から調製した。

ＩＶ−佐】Ａ−ＰＣＲ法を用いて、Ｃαクローンとハイブリダイズする３０８のｃＤＮＡをクローン化し、次いで、配列決定した。これらの内で、１７２ｃＤＮＡがＶ−Ｊ −Ｃα可変領域に対応しただけである。

この発明の■α及びＪα配列を、それぞれ５ＥＱＩＤ　Ｎｏ、１〜１１並びにＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１２．１３及び１５〜２０の下に配列表に示す。ＳＥＱ　ＩＤＮｏ、２〜５の配列は新規なサブファミリー（それぞれ、■α２５、Ｖａ２６、Ｖａ２７及びＶａ２９と命名）に対応し、他方、ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１及び６〜１１は公知のＶセグメントの伸長に対応する。

１、新規なサブファミリーに対応するＶα配列エンドヌクレアーゼによる消化を受けた生殖系列ＤＮＡの、ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２〜５の配列に対応する■α断片を含むＶ−Ｊ−Ｃαプローブを用いたサザーンプロット分析を、“低ストリンジエンシー”ハイブリダイゼーション条件下で行なって、各ファミリーに属するＶα遺伝子セグメントの数を同定し且つこれらのＶα遺伝子セグメントを有するＤＮＡ制限断片の特性決定をした。代表的な結果を図３に示す。

これらの分析は、ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、３の配列に対応するサブファミリーが少なくとも２つの遺伝子セグメントを含み、他方、他の配列（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ。

２．４及び５）が恐らくユニークなメンバーに対応することを示している。

これらの生殖系ＤＮＡの制限断片のサイズは下記の通りである。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２：ＥｃｏＲＩ　２．２ｋｂ、ＨｉｎｄＩＩＩ　４．８及び５．７ｋｂ、ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、３：ＥｃｏＲＩ　４．６及び７．５ｋｂ、ＨｉｎｄＩＩＴ　４．２及び６．４ｋｂ、ＢａｍＨＩ　２３及び４．５ｋｂＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、４：ＥｃｏＲＩ　７．　６ｋｂ　、ＨｉｎｄＩＩＩ　１８ｋｂ、ＢａｍＨＩ　９及び０．９ｂＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、５：ＥｃｏＲＩ　５．９及び４、　８ｋｂ、ＨｉｎｄＩ　Ｉ　Ｉ　６．　６ｋｂ　％　ＢａｍＨＩ６、　５ｋｂ。

２、公知の■配列の伸長に対応する配列ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１　（ＩＧＲａ　０２）は、ＬＩＮＶ配列（１７１ｂ　ｐ　）　（Ｍｅｎｇｌｅ−Ｇａｗ（２０））の５°側の伸長に相当する：この配列は、仮に７０ｗ２４と命名したサブファミリーを規定する。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、６（ＩＧＲａ　０８）：この配列は、Ｖａｌ　ＡＥＩＩクローン配列（Ｋｌｅｉｎ等（２１））の５゛側の伸長に対応する。これらの２つの直線状の配列を図ＩＡに示す。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、７（ＩＧＲａ　０９）：この配列は、Ｖａ　ＡＦＩＩＯ配列（Ｋｌｅｉｎ前出）のＮＨ２末端をコードする伸長に対応する。これらの２つの直線状配列を図ＩＢに示す。配列ＩＤＮｏ、７は、コンセンサス配列に対応する。Ｃの代わりにＴの存在が２０６位に見られる。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、８　（ＩＧＲａ　０１０）：こ（Ｄ配列は、Ｖａ　ＨＡＰ３５クローン（Ｙｏｓｈｉｋａｉ　（２２）　）の５′領域の伸長に対応する。

これらの２つの直線状配列を図ＩＣに示す。配列ＩＤ　Ｎｏ、８は、コンセンサス配列に対応する。Ａの代わりにＧの存在が３０７位に及びＣの代わりにＴの存在が３６０位に見られた。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、９（ＩＧＲａ　１１）：この配列は、Ｖａ７　ＨＡＰＬ２配列（Ｙｏｓｈｉｋａｉ前出）の３゛側の伸長に対応する。これらの直線状配列を図ＩＤに示す。配列ＩＤ　Ｎｏ、９は、コンセンサス配列に対応する。Ｔの代わりにＣの存在が８６位に見られた。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１０　（ＩＧＲａ　１２）：この配列は、以前に部分配列（１３３ｂｐ）　ＡＣ９（Ｋｌｅｉｎ前出）により同定されたＶα２２サブファミリー遺伝子の完全なコード領域を含む。これらの２つの直線状配列を図ＩＥに示す。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１１　（ＩＧＲａ　１３）：この配列は、部分的に、ＨＡＶＴ３２及びＨＡＶＴ３５クローン（Ｖａ１６　（８）サブファミリーに属し、偽遺伝子として記載された）に対応する。事実、１０８位のヌクレオチドの追加の後に、ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１１は、元のＴリンパ球レセプターの可変域をコードする。更に、この配列は、コード部分について、配列Ｈ３ＴＣＡＹＭ（Ｋｌｅｉｎ等、（２１））に等しい。しかしながら、５ＥＱＮｏ、１１の配列が唯一の完全なコード鎖である。

３、Ｊα配列新規のＪα配列のセットを図２に示す。８つのＪαセグメントの内で、それらの大多数は、前出のＹｏｓｈｉｋａｉにより記載されたように、Ｊαセグメントの高度に保存されたアミノ酸配列ＦＧＸＧＴを有する。しかしながら、ｒＧＲＪａ０７セグメントについては、スレオニン残基は、イソロイシン残基で置換されている。

更に、ＩＧＲＪａ０２Ｇにおいては、フェニルアラニン残基の代わりに、システィン残基が見出される。

本発明は又、例えば、患者におけるあるＶαサブファミリーの発現の研究及び最終的には上述のような免疫不全の診断の目的で、種々の■αサブファミリーに対応するＤＮＡを増幅するためのプライマーとして使用可能な種々の■αサブファミリーの特定のオリゴヌクレオチドを提供することをも目的とする。

ある■αサブファミリーの優勢な発現は、不完全なオリゴヌクレオチド範囲を用いて既に研究されている。この方法によって、Ｎ１ｔｔａ等（２９）は、腫瘍に浸潤しているリンパ球における■α７遺伝子の優勢な発現を記載した。更に、５ｏｔｔｉｎｉ等（３０）は、リューマチ関節炎の患者におけるＶａのディレクトリ−の研究を記載した。

本発明は又、公知の■αサブファミリー及びこの発明の新規な■αサブファミリーの研究を可能にし且つ各サブファミリーに完全に特異的である完全なオリゴヌクレオチド範囲を提供することをも目的とする。従って、これらのオリゴヌクレオチドを、この目的のために、及び天然の配列に関連したサブファミリー間の交叉反応を減じるために導入する１又は２ヌクレオチドの改変の要求に応じて選択し及び合成した。

従って、本発明の主題は又、Ｔ細胞レセプターのα鎖の可変領域に対応するＤＮＡの増幅のためのプライマーとして使用可能なオリゴヌクレオチドでもある（ＳＥＱＩＤ　Ｎｏ、２６〜５４から選択する）。

これらのＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２６〜５４の配列から選択するオリゴヌクレオチドの、Ｔ細胞レセプターのα鎖の可変領域に対応するＤＮＡの増幅のためのプライマーとしての利用も又、本発明の主題である。

下記を含むことを特徴とする、ＴレセプターのＶαセグメントをコードするヌクレオチド配列又はその転写産物に対応するｃＤＮＡの生物試料における検出工程も又本発明の主題である：ａ）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２６〜５４の配列並びにセグメントＣαに属する１つのオリゴヌクレオチドから選択するオリゴヌクレオチドの１つによって形成される少なくとも１対のプライマーを用いるＤＮＡの増幅、及びｂ）増幅した配列のＣαプローブによる検出。

この増幅のために用いるＣαセグメントに属するオリゴヌクレオチドを、特に、ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、５５及び５６の配列から選択することが出来る。　。

増幅の効率を検査するために、好ましくは、この操作を１対の対照プライマーの存在下で行ない、且つ、対応する対照プローブを用いて増幅された対応する対照配列を検出する。

この対照プライマーの対は、２つのＣβセグメント（例えば、ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、６１及び６２の配列に対応するＣａＦ及びＣａにプライマー）に対応し得る。

その場合は、Ｃβ検出プローブを用いる（例えば、ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、６３の配列に対応する）。しかし、このプライマーの対は又、β−アクチンに属する２つのプライマー（特に、ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、５８及び５９に対応するもの）によっても構成され得る。その場合は、β−アクチンの配列に対応する検出プローブ（ＳＥＱＩＤ　Ｎｏ、６０の配列等）を用いる。

下記を含む、前に規定した工程の実施のための診断用キットも又本発明の主題である：ａ）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２６〜５４から選択する少なくとも１つのオリゴヌクレオチド、更に、このようなキットは、下記を含むならば有利である：ｄ）１対の対照用プライマー、ｅ）対照用プローブ。

このキットは、特に、下記を含んで良い：ａ）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２ｆ３〜５４の配列に対応する２９オリゴヌクレオチドの群、ｂ）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、５５及び５６の配列に対応する配列から選択するＣα プライマー、ｃ）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、５８及び５９の配列にそれぞれ対応する配列を有する β−アクチンに対する１対の対照用プライマー、ｄ）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、５７の配列に対応するＣａプローブ、ｅ）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、６０の配列に対応するβ−アクチンに対する対照用プローブ。

配列表に与えた配列２６〜６０についての情報において、配列のＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２６〜４７ば、公知のＶαｌ〜Ｖα２２サブファミリーのクローン（ＥＭＢＬデータベースから入手可能）に属する配列或はそれらと１又は２ヌクレオチドだけ異なる配列に対応する。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、４９．５０．５１．５２及び５４の配列は、仮に、７０ｗ　２４．７０ｗ　２５、■αＷ２６．７０ｗ　２７及び７０ｗ　２９と命名されたサブファミリーに対応する、この発明の新規のサブファミリーのクローンに属する配列に対応する（Ｗは、命名が未決定の定義名称であることを示す）。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、４８及び５３の配列は、それぞれ、公知のサブファミリーのクローンであるが未だ定義名（それぞれ、Ｖαｗ２３及びＶαｗ２８）を受けていないＩＧＲａＯｌ及びＩＧＲａ０６に属する配列に対応する。その１つのメンバーエレメントは既に記載されている（それぞれ、Ｈｉｎｋｋａｎｅｎ　Ａ、等（３１）及びＢｅｒｎａｒｄ　Ｏ，等（３２）に記載）。ｒＧＲａ０６の完全な配列は、未だ公表されていない。

ＳＥＱ　Ｉｏ　Ｎｏ、５５及び５６の配列は、増幅のためのＣαプライマーとして使用し得るオリゴヌクレオチドの２つの例である。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、５７の配列は、増幅したＤＮＡの検出に使用可能なＣプローブの配列である。

ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、５８．５９の及び６０の配列は、それぞれ、増幅を検査するために用い得るβ−アクチンの配列及び対応する増幅したＤＮＡを検出するためのプローブの配列に属する１対のオリゴヌクレオチドの配列である。

配列表において、示した位置は、ＡＴＧ翻訳開始部位と想定される位置から数えた５゛末端の位置である。配列が不完全な（５゛領域が未知の）場合には、その位置（星印で示しである）は、配列の第１ヌクレオチドとの関係で与えられる。

下線を引いたヌクレオチドは、天然の配列に関連して導入されたミスマツチに対応する。

β−シアノ−エチルホスホルアミダイト法（５ｉｎｈａ　Ｎ。

等、（３３））を用いる自動式ＤＮＡ合成装置ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍ　３８１　Ａにより、製造業者の勧めるプロトコールに従ってオリゴヌクレオチドを合成した。オリゴヌクレオチドを装置内で脱トリチル化し、支持体から開裂させ、そしてアンモニアで脱保護した（６０℃で５時開）。粗生成物を、Ｏ，ＯＩＭ）リエチルアンモニウムアセテート緩衝液（ｐＨ５，５）中でのアセトニトリル勾配（９〜１５％）を用いるμｍ　ｂｏｎｄａｐａｋ　Ｃ１ｇカラム上での逆相高圧クロマトグラフィーによって精製した。

この発明によるプライマーを用いて行なう増幅は、特に、５ａｉｋｉ等（Ｉ２）、特許ＬＩＳ−Ａ−４６８３１９５，４６８３２０２，４８８９８１８に記載されたＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）による増幅技術であって良い。

ＰＣＨには、変性させた２本鎖ＤＮＡ又は上述のようにＲＮＡから逆転写酵素を使用して得られたｃＤＮＡを用いることが出来る。

重合剤はＤＮＡポリメラーゼ（特に、Ｔａｑポリメラーゼ）である。

一般に、この増幅サイクルは、２５〜４０回反復する。

増幅した配列を検出するために使用するプローブは、オリゴヌクレオチドを放射性同位体で標識することによって得ることが出来、オートラジオグラフィーによる検出が可能となるが、或は、ペルオキシダーゼ（ＥＣＬＡｍｅｒｓｈａｍ　５ｙｓｔｅＩ１１）　、アルカリホスファターゼ又はβ−ガラクトシダーゼ（Ｔｒｏｐｉｘ　Ｏｚｙｍｅ　ｓｙｓｔｅｍ　）等の酵素と結合することによって化学発光による検出が可能となる。

下記の例は、この発明による検出工程の実施を説明する。

健康な個人の末梢リンパ球を、密度勾配遠心分離によって調製した。全ＤＮＡを、一段階方法により、グアニジウムイソチオシアネート、フェノール及びクロロホルムでの抽出（Ｃｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉ、　１１）によって抽出した。相補性ＤＮＡを、最終容積２０μｍ中で、１〜５μｇの全ＲＮＡ、逆転写酵素及びＣα Ｂプライマー（１，２５μＭ）を用いて、４２℃にて、１時間で合成した。

得られた物質を、次いで、３分間９５℃に加熱してから、ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２６〜５４の配列に対応する特異的■αプライマー及びＣα領域に特異的なＣα Ｂプライマー（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、５６）の各々を同時に用いるＰＣＲ技術による増幅にかけた。この増幅を、チューブ当り、５０ｍＭのＫＣｌ、ｌ０ｍＭのトリス−ＨＣｌ　（ｐＨ８，３）、１．５ｍＭのＭｇＣ１１，０，１％（Ｗ／Ｖ）のゼラチン、２００μＭのｄＮＴＰ。

０．２５単位のＴａｑポリメラーゼ及び０．２５μＭの各プライマーを含む１０ μｍの最終容積中で実行した。

対照の増幅を、各チューブ内で、ＰＣＨにより調製した８７７塩基対のβ−アクチンの２５ｍＮのＤＮＡ断片、及びアクチンに特異的なＡｃｔｌ及びＡｃｔ２プライマー（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、５８及び５９）から行なった。３０回の増幅サイクルを行なった後、最終伸長段階を７２℃で５分間行なった。各サイクルは、９４℃で１分間の変性段階、６５℃で１分間のハイブリダイゼーション段階、及び７２℃で１分間の伸長期間を含んだ。

得られた生成物を、２％アガロースゲル上の電気泳動によって分離し、アルカリ性緩衝液中でナイロン膜上にトランスファーし、そして、ポリヌクレオチジルＴ４キナーゼ酵素によって３″Ｐで標識したＣαＣオリゴヌクレオチドプローブ（ＳＥＱ　ｒＤ　Ｎｏ、５７）及びＡｃｔ３　（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、６０）と同時にパイプリダイズさせた。ハイブリダイゼーションを、５ｘＳＳＣ１０，５％ＳＤＳ、５×デンハート溶液、０．０５％ＮａＨｘ　ＰＯ４及び１００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡを含む緩衝液中で、４２℃で、１６時間行なった。次いで、その膜を、６ＸＳＳＣ１２０ｍ　Ｍ　Ｎ　ａ　Ｈ。

ＰＯ４で、周囲温度にて５分間ずつ２回洗い、５０℃で３０分間洗った後、オートラジオグラフィーを行なった。

得られた結果を、図４に示す。

アクチンの対照（８７７塩基対のバンド）は、すべてのウェルにおける増幅の確認を与える。特異的シグナルがこのバンドの下に現れているが、そのサイズは対応する増幅した断片のサイズに対応する（各断片は、特異的■αオリゴヌクレオチドの遺伝子座とＣαプライマーの間の距離に対応する長さを有する）。

検査した個人について、図４は、ある限られた遺伝子セグメントの他と比較して優先的な発現を示す。例えば、Ｖα２７．２８及び２９サブフアミリーは、■α ２．３及び６サブフアミリーより良く現れていない。

丑ｍ慰１、　Ｍｅｕｅｒ、　Ｓ、Ｃ，等、Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１９８３．１５７：７０５２、　Ｍｏｉｎｇｅｏｎ、　Ｐ、等、Ｎａｔｕｒｅ　１９８６ａ、　３２３：６３８゜３、８ｒｅｎｎｅｒ、　Ｍ、Ｂ、等、Ｎａｔｕｒｅ　１’Ｊ８Ｂ、３２２：１４５゜４、８ａｎｋ、　１．等、Ｎａｔｕｒｅ　１９１１６．３２２：１７９゜５、０ａｖｉｓ、　Ｍ、Ｍ、等、Ｎａｔｕｒｅ　１９８８．３３４：３９５゜６、　Ｃｒｅｗｓ、　Ｓ、等、Ｃｅ１ｌ　１９ｇ１．２５：５９゜７、　Ｃｏｎｃａｎｎｏｎ、　Ｐ、等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ。

１９８６、　８３：６５９８゜８、　Ｋｉｍｕｒａ、　Ｎ、等、Ｅｕｒ、　Ｊ、　１ｍ１ｌＩｌｕｎｏ１．１９８７．１７：３７５゜９、　Ｗｉｌｓｏｎ、　Ｒ，に、等、　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　１９８８ｃ。

１０１：１４９゜１０、　Ｃｈｉｒｇｗｉｎ、　Ｊ、Ｍ、等、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１９７９．１８：５２９４゜１１、　Ｃｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉ、　Ｐ、等、Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　１９８７．１６２：１５６゜１２、５ａｉｋｉ、　Ｒ，に、等、５ｃｉｅｎｃｅ　１９８ｇ、　２３９：４８７゜１３、　Ｌｏｈ、　Ｅ、Ｙ、等、５ｃｉｅｎｃｅ　１９８９．２４３：２１７゜１４、　Ｓａｎｇｅｒ、　Ｆ、等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　１９７７．７４：５４６３゜１５、　Ｌｉｐｍａｎ、　Ｄ、Ｊ、等、５ｃｉｅｎｃｅ　１９ｇ５．２２７：１．４３５゜１６、　Ｋｏｚａｋ、　Ｍ、等、Ｎｕｃｌ、　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、　１９８４．１２：８５７゜１７、　Ｋｙｔｅ、　Ｊ、等、Ｒ，Ｆ、、　Ｊ、　Ｍｏ１．　Ｂｉｏｌ、　１９８２．１５７：１０５゜１８、　Ｔｒｉｅｂｅｌ、　Ｆ、等、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎ、　１９８８．１４０＋３００゜１９、　Ｆｅｉｎｂｅｒｇ、　Ａ、Ｐ、等、Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　１９ｇ３．１３２：６゜２０、　Ｍｅｎｇｌｅ−Ｇａｗ、　Ｌ、等、Ｔｈｅ　ＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ、　１９８７．６：２２７３゜２１、　Ｋｌｅｉｎ、　Ｍ、Ｈ，等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＬＩＳＡ１９ｇ７．　８４：６ｇ８４゜２２、　Ｙｏｓｈｉｋａｉ、　Ｙ、等、Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１９ｇ６．１６４：９０゜２３、　Ｎａｕｄｅｎｂａｒｋ、　Ａ、等、Ｎａｔｕｒｅ、　３４１．５４１゜２４、Ｊａｎｅｗａｙ、Ｃ，、Ｎａｔｕｒｅ、３４１．　４８２゜２５、　１ｉｎ、Ｙ、、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、、１７１．　２２１゜２６、Ａｃｈａ−Ｏｒｂｅａ、Ｈ，、ＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ、１９９０，９，１２．　３ｇ１５゜２７、Ｋａｐｐｌｅｒ、Ｊ、、５ｃｉｅｎｃｅ　２４４．　８１１゜２８、Ｃｈｏｉ、Ｙ、、ＰＮＡＳ、８６．　８９４１゜２９、　Ｎ１ｔｔａ　Ｔ、等、５ｃｉｅｎｃｅ　１９９０．２４９．６７２゜３０、５ｏｔｔｉｎｉ　Ａ、等、Ｅｕｒ、　Ｊ、　ｒｍｍｕｎｏｌ、、　１９９１．２１．４６１゜３１、　Ｈｉｎｋｋａｎｅｎ　Ａ、等、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ、　１９ｇ９．２９．１３１゜３２、　Ｂｅｒｎａｒｄ　Ｏ，等、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、　１９８８．２．１９５゜３３、５ｉｎｈａ　Ｎ、等、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、　１９８４．１２．４５３９゜配２人 ■　−一般的情報（１）出願人：ルセルーユクラフなる名称の会社（２）発明の名称：ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列、対応するペプチドセグメント並びに診断及び治療への利用。

（３）配列の数：６２Ｉｆ　−ＳＥＱ　ｒＤ　Ｎｏ、１の情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ：３７１塩基対鎖の数−一本鎖配置二直鎖状配列の種類：　ｍＲＮＡについてのｃＤＮＡ起源３　生物８二ヒトセルライン：ヒトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称：　ＩＧＲａ０２配列：１０ｗ２４配列Ｅｒｒ−５ＥＱ　ｒＤ　Ｎｏ、２０）情報配列の特徴型・ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ：　４００塩基対鎖の数ニー重鎖配置：直鎖状配列の種類：ｍＲＮＡについてのｃＤＮＡ起源生物名二ヒトセルライン：ヒトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称＋　ＩＧＲａ０３配列・Ｖ　ａ　ｗ　２５配列ＩＶ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、３の情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ；３３９塩基対鎖の数ニー重鎖配置：直鎖状配列の種類二ｍＲＮＡについてのｃＤＮＡ起源生物名二ヒトセルライン：ヒトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称：　ＩＧＲａ０４配列：■αｗ　２６配列Ｖ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、４の情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ＝３３５塩基対鎖の数ニー重鎖配置：直鎖状配列の種類ＨｍＲＮＡについてのｃＤＮＡ起源生物８：ヒトセルライン：ヒトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称：　ｒＧＲａ０５配列：７０ｗ２７配列ＶＩ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、５の情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ＝３６１塩基対鎖の数ニー重鎖配置：直鎖状配列の種類：ｍＲＮＡについてのｃＤＮＡ起源生物８：ヒトセルライン：ヒトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称：　ＩＧＲａ０７配列：■αｗ２９配列ＶＩＴ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、６の情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ：５６９塩基対鎖の数ニー重鎖配置：直鎖状配列の種類・ｍＲＮＡについてのｃＤＮＡ起源生物８：ヒトセルライン・ヒトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称：　ＩＧＲａ０８配列・Ｖα１配列ＣＴτｃｃ＝ｃＣａｃ　ｃτ（Ｃ７τＣ）ＣＴ　丁Ｃ？Ｔ丁ＣＣ入ＧＡ　（ＡＡＡＧ＾Ｃ人λｃ　τＣ入Ｃ入＾Ｃ入八へ　ＴＡｃ八ｃへｒｒ■O　７゜ｖｒｒＩ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、７の↑真報配列の特徴型、ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ：３３０塩基対鎖の数ニー重鎖配置：直鎮状配列の種類：ｍＲＮＡにつし１てのｃＤＮＡコンセンサス配列起源生物８：ヒトセルライン：ヒトＴリンフく球特徴ＤＮＡの名称：ＩＧＲａ０９配列二■α２配列ＩＸ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、８の情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ＝４００塩基対鎖の数ニー重鎖配置：直鎖状配列の種類：ｍＲＮＡについてのｃＤＮＡコンセンサス配列起源生物８：ヒトセルライン：ヒトＴ　ＩＪンパ球特徴ＤＮＡの名称：ＩＧＲａｌＯ配列：Ｖα５配列Ｘ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、９の情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ＝３８６塩基対鎖の数ニー重鎖配置：直鎖状配列の種類：　ｍＲＮＡについてのｃＤＮＡコンセンサス配列起源生物８：ヒトセルライン：ヒトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称：　ＩＧＲａｌ　１配列：Ｖα７配列ＸＩ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１０の情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ：３８３塩基対鎖の数ニー重鎖配置：直鎖状配列の種類：ｍＲＮＡについてのｃＤＮＡ起源生物８：ヒトセルライン：ヒトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称：ｒＧＲａ１２配列：Ｖα２２配列丁に？０ＡＣＴＴＣＴ　ＴＣＡＴＧτ丁人＾ＧＧＡ丁ＣＡＡにＡｃｅ　ＡＴｒ＾丁τｒｃｃｃ　を人ＡＣＡＣＡＣＴＡ　５０Ｘｌｒ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１１の情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ＝３６４塩基対鎖の数ニー重鎖配置：直鎮状配列の種類二ｍＲＮＡについてのｃＤＮＡ起源生物８：ヒトセルライン：ヒトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称：ＩＧＲａ１３配列二■α１６配列ＸＩＩＩ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１２の情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ＝２６４塩基対鎖の数ニー重鎖配買：直鎖状配列の種類：ｍＲＮＡについてのｃ　ＤＮＡ起源生物８：ヒトセルライン：とトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称：ＪａＯｌ配列：Ｊα 配列ＸＩＶ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１３の情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ：２７７塩基対鎖の数ニー重鎖配置：直鎖状配列の種類：ｍＲＮＡについてのｃＤＮＡ起源生物８：ヒトセルライノコヒトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称：Ｊａ０２配列：Ｊα 配列ＸＶＩ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、Ｌ５（７）情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ二　６０塩基対鎖の数ニー重鎖配置：直鎖状配列の種類：　ｍＲＮＡについてのｃＤＮＡ起源生物８：ヒトセルライン：ヒトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称：　Ｊａ０４配列：Ｊα 配列ＸＶＩＩ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１６の情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ：　５９塩基対鎖の数ニー重鎖配置、直鎖状配列の種類：ｍＲＮＡについてのｃＤＮＡ起源生物８：ヒトセルライン：ヒトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称：　Ｊａ０５配列：Ｊα 配列ＸＶＩｒＩ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１７の情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ二　６０塩基対鎖の数ニー重鎖配置：直鎖状配列の種類二ｍＲＮＡについてのｃＤＮＡ起源生物８：ヒトセルライン：とトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称：　Ｊａ０６配列：Ｊα 配列ＸＩＸ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１８の情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ＝　５６塩基対鎖の数ニー重鎖配置：直鎖状配列の種類：ｍＲＮＡについてのｃＤＮＡ起源生物８：ヒトセルライン：ヒトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称：Ｊａ０７配列：Ｊα 配列ＸＸ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１９（７）情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ＝　５７塩基対鎖の数ニー重鎖配置：直鎖状配列の種類：ｍＲＮＡについてのｃＤＮＡ起源生物８：ヒトセルライン：ヒトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称：　Ｊａ０８配列：Ｊα 配列ＸＸＩ　−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２０（７）情報配列の特徴型：ヌクレオチド及びその対応する蛋白質長さ＝　５０塩基対鎖の数ニー重鎖配置：直鎖状配列の種類二ｍＲＮＡについてのｃＤＮＡ起源生物８：ヒトセルライン：ヒトＴリンパ球特徴ＤＮＡの名称：　Ｊａ０９配列：Ｊα 配列ＸＸｌｌ−３ＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２１〜２５の情報配列の型：オリゴヌクレオチド配列Ｎｏ、　２１　Ａ　（５’−ＧＴｒＧＣＴＣＣＡＧＧＣＣＡＣＡＧＣＡＣ′ｒＧＩＮｏ、　２２　ｐｏｌｙ　Ｃ（５’−ＧＣＡＴＧＣＧＣＧＣＧＧＣＣＧＣＧＧＡＧＧ−１４Ｃ）Ｎｏ、　２３　Ｂ　（５’−ＧＴＣＣＡＴＡＧＡＣＣＴＣＡＴＧＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＩＮｏ、　２４　Ｃ（５’−ＡＴＡＣＡＣＡＴＣＡＧＡＡＴｒＣＴｒＡＣＴＴＴＧ）Ｎｏ、　２５　Ｄ　（５’−ＧＴＣＡＣＴＧＧＡＴＴｒＡＧＡＧＴＣＴ）ＸＸＩＩＩ−ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．２６〜６３の情報配列の型二才リゴヌクレオチド配列ｖａ１ＩＧＲａ０８　ＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＡＡＧＧＡＧＣＣＴＣＡＣＴＧＧＡＧＴＴＧＡＧＡＴＧＴＡＡＣＴＡＴＴＣＣＴＡＴＧＧＧＧＩＧＲａ０８　ＣＡＡＣＡＣＣＴ丁ＡＴＣＴＣＴＴＣＴＧＧＴＡＴＧＴＣＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＧＣＣＡＡＧＧＣＣＴＣＣＡＧＣＴＧＣＩＧＲａ０８　ＴＣＣＴＧＡＡＧＴＡＣＴＴＴＴＣＡＧＧＡＧＡＣＡＣＴＣＴＧＧＴＴＣＡＡＧＧＣＡＴＴＡＡＡＧＧＣＴＴＴＧＡＧＧＡＥＩＩＶａ２ＩＧＲａ０９　ＣＣＣＴＣＡＧＴＧＴＴＣＣＡＧＡＧＧＧＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＣＴＣＴＣＡＡＣＴＧＣＡＣＴＴＡＣＡＧＴＧＡＣＣＡＦＩＩＯ　．．．．．．．．．．．．．．−−．．−．．−”””””””””””””’ＩＧＲａ０９　ＧＡＧＧＴＴＣＣＣＡＧＴＣＣＴＴＣＴＴＣＴＧＧＴＡＣＡＧＡＣＡＡＴＡＴＴＣＴＧＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＴＧＡＧＴＡＦＩＩＯ　．　。．．，，．．，　．．　．．．．　．６，．．　．．．．．．　．，．．．．．．　．．．．．　．．．．．ＩＧＲａ０９　ＴＧＡＴＡＡＴＧＴＣＣＡＴＡＴＡＣＴＣＣＡＡＴＧＧＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＧＡＴＧＧＡＡＧＧＴＴＴＡＣＡＧＣＡＣＡＦＩＩＯ　．．．．．．．．．．．．．−．＝．．−””””””””””””””’旦 σ」旧Ｖａ５ＨＡＰ３５ＩＧＲａｌＯ　ＣＣＣＴＧＡＡＣＡＴＴＣＡＧＧＡＧＧＧＴＡＡＡＡＣＧＧＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＡＣＴＡＴＡＣＡＡＡＣＴ｝ＩＡＰ３５　．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． −．．．．．．．−．−．ＩＧＲａｌＯ　ＡＴＴＣＴＣＣＡＧＣＡＴＡＣＴＴＡＣＡＧＴＧＧＴＡＣＣＧＡＣＡＡＧＡＴＣＣＡＧＧＡＡＧＡＧＧＣＣＣＴＧＴＴＴ｝ＩＡＰ３５　．．．．．．．．．．．．．．．．．．．−．−．．．−．．．．．．−．−”””””．．”””’ＩＧＲａｌＯ　ＴＣＴＴＧＣＴＡＣＴＣＡＴＡＣＧＴＧＡＡＡＡＴＧＡＧＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＧＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＣＴＧＡＡＧＧＨＡＰ３５　．．．．．．．．．．．．．．．−．−　．．．− ．．．−　．．−””．．”．．””””””ＩＧＲａｌＯ　ＴＣＡＣＣＴＴＴＧＡＴＡＣＣＡＣＣＣＴＴＡＡＡＣＡＧＡＧＴＴＴＧＴＴＴＣＡＴＡＴＣＡＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＧＣＨＡＰ３５　．．．．．．．．．．．．．．．．．．−．．．．．．−．−．−．．．−．”””””””””’Ｖｃｙ７ＨＡＰ１２　．．．．．．．．．．．．．．−．．．．−−−．””””””” ””””””””．ｒＧＲａｌｌ　ＣＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＴＴＧＴＣＣＡＧＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＣＧＴＡＣＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＴＴＣＡＡＣＧＨＡＰ１２　．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．−　．−−．−−−．． −”””””””””’ＩＧＲａｌｌ　ＧＧＣＴＧＴＴＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＡＴＧＣＴＧＧＣＧＡＡＧＣＡＣＣＣＡＣＡＴＴＴＣＴＧＴＣＴＴＡＣＡＨＡＰ１２　．．．．．．−−．，．−．．．””””””””””””””” ””’ＩＧＲａｌｌ　ＡＴＧＴＴＣＴＧＧＡＴＧＧＴＴＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＡＧＧＴＣＧＴＴＴＴＴＣＴＴＣＡＴＴＣＣＴＴＡＧＴＣＧＧＴＨＡＰ１２　．．．．．．．．．．．．．．．．．．　＝−−．ＩＧＲａｌｌ　ＣＴＡＡＡＧＧＧＴＡＣＡＧＴＴＡＣＣＴＣＣＴＴＴＴＧＡＡＧＧＡＧＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡＡＡＧＡＣＴＣＴＧＣＣＴＨＡＰ１２ＦＩＧ．ｉＤａ２２ＩＧＲａ１２　ＡＴＴＴＧＧＧＴＡＡＣＡＣＡＣＴＡＡＡＧＭ工ＡＡＣＴＡＴＴＣＴＣＣＡＧＧＣＴＴＡＧＴＡＴＣＴＣＴＧＡＴＡＣＩＧＲａ１２　ＴＣ丁ＴＡＣＴＧＣＴＴＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＧＴＧＧＡＧＡＴＴＣＡＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＴＧＧＡＡＧＧＧＣＣＡＧＩＧＲａ１２　ＴＧＡＣＴＣＴＣＴＣＡＧＡＡＧＡＧＧＣＣＴＴＣＣＴＧＡＣＴＡＴＡＡＡＣＴＧＣＡＣＧＴＡＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡＧＩＧＲａ１２　ＧＡＴＡＣＣＣＴＴＣＣＣＴＴＴＴＣＴＧＧＴＡＴＧＴＣＣＡＡＴＡＴＣＣＴＧＧＡＧＡＡＧＧＴＣＴＡＣＡＧＣＴＣＣ日二Ｌユ旦５ＥＱ　ＩＤ　Ｎ’ｌ−５ＥＯＩＤ　Ｎ’２．５ＥＯＩＣＮ’３−５ＥＱ　ＩＤ　Ｎ”イー５ＥＱしｌ［）Ｎ’５−゛区要　約　書ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖可変領域をコードする新規なヌクレオチド配列、それらの対応するペプチドセグメント並びに診断及び治療への応用。

国際調査報告１１１！−響一輸（＾帥靴−−舛ａｐ（πｈ王９２１００１１．１

Claims

【特許請求の範囲】

１．下記の何れか１つから選択するヌクレオチド配列を含むｃＤＮＡに対応する、ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列、並びに、それらと１つ以上のヌクレオチドが異なる配列：ａ）ＳＥＱＩＤＮｏ．１〜１１の配列の１つに対応するＶαセグメント、及びｂ）ＳＥＱＩＤＮｏ．１２、１３及び１５〜２０の配列の１つに対応するＪαセグメント。
２．請求項１に記載の、ＳＥＱＩＤＮｏ．１〜１０の配列の１つに対応するＶα セグメントの何れか１つから選択するヌクレオチド配列を含むｃＤＮＡに対応する、ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖の可変領域をコードする配列、並びに、それらと１つ以上のヌクレオチドが異なる配列。
３．請求項１に記載の、ＳＥＱＩＤＮｏ．１２、１３及び１５〜２０の配列の１つに対応するＪαセグメントの何れか１つから選択するヌクレオチド配列を含むｃＤＮＡに対応する、ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖の可変領域をコードする配列、並びに、それらと１つ以上のヌクレオチドが異なる配列。
４．ＳＥＱＩＤＮｏ．２〜５の配列の１つに対応するＶαセグメントの何れか１つから選択するヌクレオチド配列の全部又は一部に対応するｃＤＮＡに対応する、ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列、及びそれらと１又は２ヌクレオチドだけ異なる配列。
５．下記の配列の１つに対応するＶαセグメントの何れか１つから選択するヌクレオチド配列の全部又は一部に対応するｃＤＮＡに対応する、ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列、並びに、それらと１又は２ヌクレオチドだけ異なる配列：ＳＥＱＩＤＮｏ．１の１〜２００ＳＥＱＩＤＮｏ．６の１〜４６７ＳＥＱＩＤＮｏ．７の１〜７７ＳＥＱＩＤＮｏ．８の１〜１５１ＳＥＱＩＤＮｏ．９の２９１〜３８６ＳＥＱＩＤＮｏ．１０の１〜２６０。
６．ＳＥＱＩＤＮｏ．１１に対応するヌクレオチド配列の全部又は一部に対応するｃＤＮＡに対応し且つヌクレオチド１０８を含む、ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列。
７．ＳＥＱＩＤＮｏ．１２、１３及び１５〜２０の配列の１つに対応するＪαセグメントの何れか１つから選択するヌクレオチド配列の全部又は一部に対応するｃＤＮＡに対応する、ヒトＴリンパ球レセプターのα鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列、並びに、それらと１つ以上のヌクレオチドが異なる配列。
８．請求項１〜７の何れか１つにおいて定めたヌクレオチド配列並びに同じ機能を有する対立遺伝子及びその誘導体の何れか１つによってコードされるペプチド。
９．ＳＥＱＩＤＮｏ．１１の配列１０８〜３６４の全部又は一部によってコードされる１つのペプチドにより構成され又は組み立てられるペプチド。
１０．請求項８又は９において定めたペプチドの１つをコードするＤＮＡ配列を含む発現ベクター。
１１．請求項１０に記載のベクターでトランスホームした宿主。
１２．請求項８又は９において定めたペプチドの１つの抗原決定基に対する抗体。
１３．モノクローナル抗体である、請求項１１に記載の抗体、又はその断片。
１４．請求項１３に記載のモノクローナル抗体のＦａｂ、Ｆａｂ′又は（Ｆａｂ ′）２断片及びそれらの誘導体。
１５．検出可能なマーカー及び／又は少なくとも１つの治療用分子を付けた、請求項１３又は１４に記載のモノクローナル抗体又はその断片の誘導体。
１６．請求項１３に記載の抗体を産生するハイブリドーマ。
１７．請求項１３〜１５の何れか１つにおいて定めた１つ以上のモノクローナル抗体、それらの断片又は誘導体を含む診断用組成物。
１８．請求項１３〜１５の何れか１つにおいて定めた１つ以上のモノクローナル抗体、それらの断片又は誘導体を含む治療用組成物。
１９．細胞毒性分子又は放射性同位体を含む誘導体を含む、請求項１８に記載の組成物。
２０．請求項８又は９において定めたペプチドの少なくとも１つを含む治療用組成物。
２１．請求項４〜７の何れか１つにおいて定めたＶαセグメントの配列の何れか１つ又はＪαセグメントの配列の何れか１つに対応するアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む治療用組成物。
２２．請求項４〜７の何れか１つにおいて定めたＶαセグメントの配列の何れか１つ又はＪαセグメントの配列の何れか１つに含まれる少なくとも約１７ヌクレオチドのヌクレオチド配列の、ＤＮＡの増幅のためのプライマーとしての利用。
２３．請求項４〜７の何れか１つにおいて定めたＶαセグメントの配列の何れか１つ又はＪαセグメントの配列の何れか１つに含まれる少なくとも約１０ヌクレオチドのヌクレオチド配列の、検出用プローブとしての利用。
２４．Ｔ細胞レセプターのα鎖の可変領域に対応するＤＮＡの増幅のためにプライマーとして使用し得る、ＳＥＱＩＤＮｏ．２６〜５４の配列から選択するオリゴヌクレオチド。
２５．請求項２４に記載のオリゴヌクレオチドの、Ｔ細胞レセプターのα鎖の可変領域に対応するＤＮＡの増幅のためのプライマーとしての利用。
２６．ＳＥＱＩＤＮｏ．４９、５０、５１、５２及び５４の配列から選択するオリゴヌクレオチドの、請求項２５に記載の利用。
２７．ＴレセプターのＶセグメントをコードするヌクレオチド配列又はその転写産物に対応するｃＤＮＡの、生物試料における検出工程であって、下記を含むことを特徴とする検出工程：ａ）請求項２４に記載のオリゴヌクレオチドの１つにより形成される少なくとも１対のプライマー及びＣαセグメントに属する１つのオリゴヌクレオチドを用いるＤＮＡの増幅、及びｂ）増幅した配列のＣαプローブでの検出。
２８．増幅を１対の対照用プライマーの存在下で行ない且つ検出を対照用プローブを用いて行なうことを特徴とする、請求項２７に記載の工程。
２９．下記を含むことを特徴とする、請求項２７に記載の工程の実施のための診断用キット：ａ）少なくとも１つの請求項２４に記載のオリゴヌクレオチド、ｂ）Ｃαプライマー、ｃ）Ｃαプローブ。
３０．下記を含むことを特徴とする、請求項２８に記載の工程の実施のための診断用キット：ａ）少なくとも１つの請求項２４に記載のオリゴヌクレオチド、ｂ）Ｃαプライマー、ｃ）１対の対照用プライマー、ｄ）Ｃσプローブ、ｅ）対照用プローブ。
３１．下記を含む、請求項２９又は３０に記載のキット：ａ）請求項２４に記載の２９オリゴヌクレオチドの群、ｂ）ＳＥＱＩＤＮｏ．５５及び５６の配列に対応する配列から選択するＣαプライマー、ｃ）それぞれ、ＳＥＱＩＤＮｏ．５８及び５９の配列に対応する配列を有するβ−アクチンに対する１対の対照用プライマー、ｄ）ＳＥＱＩＤＮｏ．５７の配列に対応するＣαプローブ、ｅ）ＳＥＱＩＤＮｏ．６０の配列に対応するβ−アクチンに対する対照用プローブ。