JPH05509306A - ヒト・レトロウイルスの抑制およびエイズの治療のためのヘキサ―Ｎ―（ｏ―ヒドロキシベンジル）ネオマイシンＢ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ヒト・レトロウィルスの抑制およびエイズの治療のためのヘキサ−Ｎ−（ｏ−ヒ ドロキシベンジル）ネオマイシンＢ 発明の分野 本発明は、ヒト・レトロウィルス（ＨＲＶ）に罹った恐れのあるヒト患者を含め たヒト細胞系を治療して、そのヒト系または患者におけるＨＲＶのさらなる複製 を予防しまたは遅延させる薬剤としての、Ｎ−ポリ＝（Ｏ−ヒドロキシベンジル ）ネオマイシンＢまたはその塩および／または水和物に関する。

発明の背景 米国では、１００万人ないし１５０万人の人々が、後天性免疫不全症候群（エイ ズ）の病因であるヒトレトロウィルス、ヒト免疫不全ウィルス・タイプＩ　（Ｈ Ｉ　Ｖ−Ｉ）に感染していると見積もられている。ノルマン・ンイ（Ｎｏｒｍａ ｎ、　Ｃ，）、サイｘン７．　（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、６６１−６６２　（１９８ ６）、それらの感染者のうち、２５万人の人々が吹竿にエイズに罹ると見積もら れる。クラン・ジエイ・ダブリューら（Ｃｕｒｒａｎ、　Ｊ、　Ｗ、　、　ｅｔ 　ａｔ）、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、１３５２〜１３５７　（１９８５） 。１９８７年３月２０日、ＦＤＡは、近年エピソードとなったニューモジステイ ス中カリニイ・ニューモニア（ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ　ｃａｒｉｎｉｉ　ｐ ｎｅｗｏｎｉａ）を持つエイズ患者、二ニーモジステイス・カリニイ・ニューモ ニア以外の症状を持つエイズ患者、あるいは末梢血液における絶対ＣＤ４リンパ 球数が２００／ｍｍ’未満で当該ウィルスを持つ患者を治療するために化合物シ トプシン（ＡＴＺ）の使用を認可した。ＡＺＴは、ヒト免疫不全ウィルス複製に 必要な酵素であるウィルス逆転写酵素の公知の阻害剤である。

米国特許第４７２４２３２号は３°−アジド−３′−デオキソ−チミジン（アジ ドチミジン、ＡＺＴ）を利用する後天性免疫不全症候群を有するヒトを治療する 方法を特許請求している。

欧州特許出願第８８３０６４５６．０号（公開番号Ｎｏ、００３３００６８７； きヒドロアルコール性賦形剤、糖またはサッカリンのごとき適当な甘味剤および 芳香苦味剤を用いて調製される。懸濁剤は、水性賦形剤およびアカシア、トラガ カント、またはメチルセルロースのごとき懸濁化剤で調製する。

本発明の特許請求方法で使用する化合物を非経口投与する場合、注射または静脈 内注入によって投与できる。有効量は１日当たり１ｋｇにつき約１ないし１００ ｍｇである。非経口液剤は、本発明の特許請求方法で使用する化合物を水に溶解 させ、該溶液を濾過滅菌し、次いで適当な密閉可能バイアルまたはアンプルに充 填することによって調製される。非経口懸濁剤は、滅菌懸濁剤用賦形剤を用い、 本発明の特許請求方法で使用する化合物を酸化エチレンまたは適当なガスで滅菌 してから該賦形剤に懸濁させる以外は実質的に同様の方法で調製される。

正確な投与経路、用量、または投与頻度は当業者ならば容易に判断でき、年令、 体重、一般的な身体の状態、あるいは治療すべき患者に特異的な他の臨床的症状 に依存する。

治療すべき患者は、１）血清中における測定可能なウィルス抗体または抗原の存 在によって判断して、１種またはそれ以上のヒト免疫不全ウィルス株に感染して る患者、および２）１）散在性ヒストプラズマ症、１ｉ）イソブソリアンス（ｉ ｓｏｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、１ｉｉ）ニューモンステイス・ニューモニア（ｐｎ ｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓｐｎｅｕｃｏｎｉａｅ）を含めた気管支および肺カンジダ 症、ｙ）非ホジキンリンパ腫、またはＶ）カポシ肉腫のごときいずれかのエイズ 感染症状を有し、かつ６０才未満の患者：あるいは末梢血液に２００／ｍｍ３未 満の絶対ＣＤ４リンパ球数を有する患者である。治療は、患者において本発明の 化合物を終始抑制レベルに維持することよりなり、第２のエイズ感染症状の発生 が別の治療を要することを示すまで継続する。

ネオマイシンＢ遊離塩基１２．３３ｇ（２０ｍＭ）を水２５ｍ１に溶解する。得 られた溶液をメタノール５０ｍ１で希釈する。得られた溶液を、５ＡＬ１７．］ 、ｇ（１４０ｍＭ）、メタノール１００ｍ１および水２００ｍ１よりなるサリチ ルアルデヒド（ＳＡＬ；サリチルアルデヒド：２−ヒドロキシベンズアルデヒド ）の水性メタノール溶液と混合する。

得られた溶液を加熱して沸騰させ、次いで室温で４８時間放置する。該混合物を 加熱して沸騰させ、熱水２５０ｍ１を添加し、混合物を０〜５℃で２４時間冷蔵 する。上澄みをデカンテーションし、樹脂状生成物を、ＤＡＲＣＯＧ６０の２ｇ チャーコールでスラリー化し、ケイソウ土（セライト（Ｃｅｌｉｔｅ））を通し て濾過したメタノール：ジオキサン（８０・２０）に溶解する。濾液をエーテル ３００ｍ１に撹拌しながら添加して、所望のネオマイノンＢシッフ塩基を沈澱さ せる。

混合物を一昼夜冷蔵し、上澄みをデカンテーションし、固体を真空中で乾燥する 。

バートＢ バートＡの生成物をメタノール２００ｍ１に溶解し、室温、５Ｑｐｓｉの初期圧 力にて、ｐｔｏ２（アダムス触媒）Ｌ、Ｏｇで水素化する。圧力降下は１００ｍ Ｍ当たり７．Ｑｐｓｉである。生成物をケイソウ±（セライト（Ｃｅｌｉｔｅ） ）を通して濾過し、濾液を真空中で濃縮して約５０ｍ１とし、得られた濃縮物を エーテル３００ｍ１にゆっくりと添加する。得られた混合物を一昼夜冷蔵し、濾 過し／デカンテーションし、固体生成物をまず室温、真空中で数日間乾燥し、最 後に真空オーブン中、５０℃にて一昼夜乾燥して、Ｎ−ポリ−（０−ヒドロキシ ベンジル）ネオマイノンＢ９．５ｇを得る。元素分析＋Ｎ、６．５８　；ｅｑ、 重量２１６．１；分子量（ＭＷ）１２９６．６　；　ＩＲ３２６０，１６０５， １５８６，１４８５，１０４５，１０３０，７５０ 当業者ならば、さらに思考を働かせることなく、本発明を最大限に実施できる。

以下の詳細な実施例は、本発明で特許請求する化合物の、１種またはそれ以上の ヒト免疫不全ウィルス株に感染したヒトを治療するための使用方法をさらに説明 するものである。これらの実施例は説明のためのものに過ぎず、これまでの開示 を限定するものではない。当業者ならば当該実施例から適当な変法を直ちに認識 するであろう。各実施例では、本発明で特許請求するいずれの化合物も特定の実 施例で用いる化合物と置き換えることができる。

実施例１　ハードゼラチンカプセル側 番カプセル剤がＮ−ポリ（Ｏ−ヒドロキシベンジル）ネオマイシンＢを５０ｍｇ 含有する１０００個のツーピース・ノ＼−ドゼラチンカプセル剤を以下の。

Ｎ−ポリ＝（Ｏ−ヒドロキシベンジル）ネオマイシンＢ　５０ｇｍステアリン酸 マグネシウム　２ｇｍ から調製する。

該Ｎ−ポリ−（０−ヒドロキシベンジル）ネオマイシンＢを他の成分に添加し、 混合し、次いて、常法によりカプセル化する。

実施例２　錠剤 各カプセル剤がＮ−ポリ−（○−ヒドロキシベンジル）ネオマイシンＢを５０ｍ ｇ含有する１０００個の錠剤を以下の：Ｎ−ポリ−（○−ヒドロキシベンジル） ネオマイシンＢ　５０ｇｍラクトース　７５ｇｍ コーンスターチ　５０ｇｍ ステアリン酸マグネシウム　４ｇｍ 軽質液体ペテロラタム　５ｇｍ から調製する。

該Ｎ−ポリ−（０−ヒドロキシベンジル）ネオマイシンＢを他の成分１こ添加し 、混合し、スラップ化する。該スラップに力をかけてＮｏ、１６スクリーン１こ 通し、粉砕する。得られた顆粒を打錠して錠剤とする。

実施例３　非経口液剤 １−（４−クロロベンゾイル）−Ｎ−ポリ−（Ｏ−ヒドロキシベンジル）ネオマ イシンＢの１５０ｍｇを１リツトルの溶液中に含有する非経口静注用滅菌水性溶 液を以下の・ Ｎ−ポリ−（０−ヒドロキシベンジル）ネオマイシンＢ　１５０ｇｍ注射用水、 適量　１０００　ｇｍ から調製する。

該Ｎ−ポリ−（０−ヒドロキシベンジル）ネオマイシンＢを滅菌し、滅菌水に添 加し、滅菌容器に充填し、密閉する。

ＨＩＶ−１ｔａｔ媒介トランス活性化、ヒト免疫不全ウィルス複製に不可欠な酵 素を阻害する本発明で特許請求する方法を実施するためのＮ−ポリ−（０−ヒド ロキシベンジル）ネオマイシンＢの能力によって、本発明の利点を証明する。

ＨＩＶは、定常的ウィルスｍＲＮＡのレベルならびにこのｍＲＮＡの翻訳利用を 増大させることによって感染細胞で機能するトランスーアクチベータ−（ＴＡＴ ）をコードするｒｔａｔＪを含めた、種々の遺伝子を含有する。ＴＡＴはＨＩＶ 複製に必須であると共に、いずれの通常の細胞蛋白にも構造的に関係しない。「 ヒト免疫不全ウイルストランスーアクチベーターに基づく迅速で定量的なバイオ アッセイ」はエイズ・リサーチ・アンド・ヒユーマン・レトロウイルノズ（ＡＩ ＤＳＲＥＳＥＡＲＣＨＡＮＤ　ＩＴＵＭＡＮ　ＲＥＴＲＯＶＩＲＵＳＥＳ）、第 ５巻、５号、１９８９年、５０７〜５１６頁に記載されている。結果（ｓＣＤ４ レベルにおける％抑制）は表１に示す。

本発明の抗−ＨＩ〜′利用はさらに、ＨＩＶ感染３および４日後にヒト末梢血液 リンパ球（Ｐ　Ｂ　Ｌ）の培養上澄みにおけるＨＩＶｐ２４およびＨＩＶＲＮＡ のレベルを測定することによって証明される。ＨＩＶ感染性実験はＨＴＬＶ−Ｉ ［Ｉにて（Ｐ　Ｂ　Ｌ）の第１次培地で行った。培地を二連にてＨＩＶで感染さ せ、化合物１を添加し、感染の３ないし４日後に合成され放出されたＨＩＶ　ｐ ２４のレベルを、ＨＩＶ　ｐ２４に対する単クローン捕獲抗体（デュポン（Ｄｕ Ｆｏｎｔ）、ワイルミントン、プラウエア州）および組換えＨＩＶ　ｐ２４検量 標準（ミクロジエンノス（ＭｉｃｒｏＧｅｎＳｙｓ）、ウェストＨバーベン（Ｗ ｅｓｔ　Ｈａｖｅｎ）、コネチカット州）を用いて、免疫酵素法（ＥＬＩ　ＳＡ 法）［アール・マイオリニおよびアール・マセイエフ（Ｒ，Ｍａｉｏｌｉｎｉ　 ａｎｄ　Ｒ，Ｍａｓｓｅｙｅｆｆ）、ジャーナル・オン・イミュノロジカル・メ ソッズ（Ｊ、　ｌｍｌ１ｌｕｎｏ１．　Ｍｅｔｈｏｄｓ）　８．２２３　（１９ ７５）コによって定量的に測定した。また、これらの感染培養で合成したＨＩＶ ＲＮＡの量をＨＩＶ−特異的−３２Ｐ標識プローブでのハイブリダイゼーション 分析によって測定した。平行したＨＩＶＲＮＡハイブリダイゼーションの標準調 製から得られた値に対するハイブリダイゼーション値を正規化することによって 、絶対ＨＩＶＲＮＡレベルを決定した。結果を表■に報告する。

化合物１に暴露した４日後のマイトジェン−刺激ＰＢＬの増殖を薬剤非処理対照 に対して量を測り、感染性実験が薬物の非細胞毒性濃度で行われたことを確認し た。化合物１の４０μｇ／ｍ］では、ＰＢＬ増殖を阻止しなかった。結果は表■ で報告する。

チャート■ 化合物番号１ 表Ｉ ＨＩＶ−１ｔａｔ媒介トランス活性化の阻害μｇ／ｍｌ　培養上澄み中　５ＤＣ ４レベルの５ＤＣ４における％阻止 （μｇ／ｍ１） ２０　６、４８　８３ １０　２２．１５　４３ ５　４３．８　０ ０　３８．７　０ 表■ Ｕ−６４６６のＨＩＶ−１複製の阻止 ％阻止 Ｕ−６４６６（Ｍｇ／ｍｌ）　ｐ２４　ＨＩＶ　ＲＮＡ０．４　２２　０　１２ 　９ ０．０４　２０　４　２３　１７ 表■ ０．０４　９６ 要約書 １種またはそれ以上のヒト免疫不全ウィルス株に感染したヒト患者を治療するた めにＮ−ポリ−（０−ヒドロキシベンジル）ネオマイシンＢ１またはその塩およ び／または水和物を用いることができる。

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．式Ｉ： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒは−（２−ヒドロキシ）フェニルを意味する］で示されるＮ−ポリ− （ｏ−ヒドロキシベンジル）ネオマイシンＢ、またはその塩および／または水和 物のヒト・レトロウイルス（ＨＲＶ）の複製抑制有効量を、１種またはそれ以上 のヒト・レトロウイルス株に感染したヒトに投与することを特徴とするヒト・レ トロウイルスの複製を抑制する方法。
2. ２．該ヒトがヒト免疫不全ウイルス・タイプＩに感染した請求の範囲第１項記載 の方法。
3. ３．該ヒトがヒト免疫不全ウイルス・タイプＩＩに感染した請求の範囲第１項記 載の方法。
4. ４．該投与を経口で行う請求の範囲第１項記載の方法。
5. ５．該投与を非経口で行う請求の範囲第１項記載の方法。
6. ６．該化合物が約１２９６．６の分子量（ＭＷ）を有する請求の範囲第１項記載 の方法。
7. ７．式Ｉ： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒは−（２−ヒドロキシ）フェニルを意味する］で示されるＮ−ポリ− （ｏ−ヒドロキシベンジル）ネオマイシンＢ、またはその塩および／または水和 物の抑制有効量を、後天性免疫不全症候群を有するヒトに全身投与することを特 徴とする該ヒトを治療する方法。
8. ８．式Ｉ： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒは−（２−ヒドロキシ）フェニルを意味する］で示されるＮ−ポリ− （ｏ−ヒドロキシベンジル）ネオマイシンＢ、またはその塩および／または水和 物。
9. ９．約１２９６．６の分子量（ＭＷ）を有する請求の範囲第８項記載の化合物。
10. １０．式Ｉ： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒは−（２−ヒドロキシ）フェニルを意味する］で示されるＮ−ポリ− （ｏ−ヒドロキシベンジル）ネオマイシンＢ、またはその塩および／または水和 物の、１種またはそれ以上のヒト・レトロウイルス（ＨＲＶ）株に感染したヒト におけるヒト・レトロウイルスの抑制用医薬を調製するための使用。