JPH05509309A - ２―フェニル―１，２―ベンズイソセレナゾール―３（２ｈ）―オンの利用法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オンの利用法 本発明は、２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オン （Ｅｌ）ｓｅｌｅｎ）をシスプラチン及びこれを含防に新規に使用すること、及 び Ｅｂｓｔｌｅｃをシスプラチン薬物療法上の副作用の治療のために、ことに関す る。

２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オンはりニーマ チの治療用として（Ｄ　Ｅ　−ＯＳ　３０２７０７３）もしくは酸化的ストレス の治療用として（ＤＥ−Ｏ３３６１６９２３）利用できる化合物として知られる 。

この化合物は例えば、！Ｊ、Ｒｅｎ＋ｏｎ　ｚｎｄ　Ｒ，Ｗ！ｂｅｔ法（Ｂｕｌ ｌｅｔｉｎｄｅ　１ｗ　Ｓｏｃ、Ｃｈｉｌ！、ｄｅＦｒＪＱｃｅ　１９７６ｆ７ ／８）、Ｐ、１１２４−１１２６　）に順じて、２−メチルセレノ−Ｎ−フェニ ル−ベンズアミドと五塩化リンを反応させ、続いて加水分解することにより得ら れる。

シスプラチンは多くの異なった型の臘瘍の処理によるガン治療の分野で分裂抑制 剤として用いられている。この医薬は様々な固形ガン、たとえば畢丸ガン、卵巣 ガン、膀胱ガン、頭凰部しかしながら、この薬物の臨床応用は非常に困難である ことが多い。なぜならば薬物の作用機構が、異常細胞ばかりでなく健常細胞にま で作用がおよぶものであり、肉体に障害を与えるためである。

これら副作用としては、（慢性）腎中毒や、消化管、末梢神経の中毒そして骨髄 の中毒（プラチナの沈着）が最も多く表われる。腎毒性及び／又は神経毒性の障 害発生が最も多い。神経毒性はより重篤で臨床と深くかかわる副作用である。長 期投与においては、まず第一に感覚神経障害、眼球後の神経炎及び聴覚神経障害 が表われる。

シスプラチン投与によるこれら好ましからぬ副作用を相殺もしくは最小限にとど めるための多くの試みがなされている。この様にして種々のシスプラチン誘導体 が好ましからぬ副作用をより少なくするために発見された。しかし、それら物質 の投与による腫瘍細胞への障害力も同時にかなり減少した。過去に幾つかの物質 、たとえば千オ硫酸ナトリウム（Ｌ、　Ｅ、　ＰｒｅｌＨｅｅｌ　ｓｌ、、　１ ．　Ｃｌ１ｎ、　０ｎｅｏ１．３（１９８７）、　Ｐ、　２３７−２４４）及び ジエチルジ（こ立ノ チオカルノ＜”　’　−（Ｄ、Ｌ、Ｂｏｄｅｎｎｅｒ　ｅｔａｌ、、Ｃａｎｅｅ ＋Ｒｅ＋、　４６　（１９８６）、　Ｐ、　２７５１−２７５５　）のシスプラ チンの薬効から正常細胞を保護する能力について試験された。

これらの物質はシスプラチン由来の腎毒性及び／もしくは神経毒性に対しである 程度の保護作用がある。しかしながら次の理由によりこれらの物質の臨床応用は 制限される。即ち、チオ硫酸塩はシスプラチンの薬効と拮抗する。ジエチルジチ オカルバメートではこの現象が起きないのだが、この物質の毒性は大変高い。

セレンの単純な化合物−例えばニセラン化ナトリウム−においてシスプラチンの 抗ガン活性と拮抗することなくシスプラチン由来の腎毒性を軽減することが可能 である事実がマウス実験系において既に知られている。（１，Ｐ、Ｂ＋＋Ｂ　ｒ ｌ　ｘｌ、、ｃａｎｃｅ＋Ｒｅ＋　イイ（１９８４＋２８６４−２８６８　及び ８ａｌｄｅｒ　Ｉｒ　ｘｌ、、ＣａＱｃｅｒ　Ｒｅｓ、４９（１９８９）　３０ ２０−３０２３他）しかしながら、セレンの潜在的な高毒性のためヒト臨床適用 には至っていない。

本発明の目的は、シスプラチン自体医薬投与における副作用を抑制もしくは予防 する薬剤を供給することにある。

驚くことに、この目的はシスプラチン投与において２−フェニル−１，２−ベン ズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オン（Ｅｂｚｌｅｎ）を併用することで達成 できることがわかった。

本発明の目的は、シスプラチンの医薬投与の副作用を治療及び予防するための医 薬品製造に２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オン を使用することで達成された。

シスプラチンをＥｂｓｅｌｅａ　と併用して投与することでシスプラチン由来の 副作用を明らかに軽減させることができた。実際にシスプラチン由来の腎毒性及 び／もしくは神経毒性が完全に抑制されていた。Ｅｂ＋ｅｌｅｎはシスプラチン と同時に投与可能であるが、シスプラチン投与の前後１時間においてはＥｂ＋ｅ ｌｅｎの効果は減じない。

新生物疾、虫の治療及びシスプラチン医薬投与による副作用の防止のため医薬品 を製造するに当たりシスプラチンとＥｂ＋ｅｌｅｎを組合せる好ましい具体例と しては、シスプラチン１０■〜１００■及びＥｂ＋ｅｌｅｎ　１０■〜２０００ ■の組成物がある。好ましくは、本発明の使用法に順じてこれら二つの活性酸物 を隣接分離体形態で含む集合体又は容器から成る医薬キットとして組合せる。

既知及び肌用のセレン化合物に対比してＥｂｓｅｌｅｎの毒性は低く（マウス及 びラット急性調査でＬＤｏ＞１０００■／ｋｇ体重）最大投与量をもってしても この値よりも小さくなる。従って患者への投与は危険がないと考えられる。

シスプラチン由来の腎毒性 Ｅｂｓｅｌｅｎのシスプラチン由来の毒性効果へ及ぼす影響は二つの異なる方法 論的研究によって証明された。

１）近位尿細管株化細胞としての多くの特性を示す細胞系を用いたｌローマ白ｒ ｏでの研究 ２）マウス等のガン誘発処理における１Ｑ−ｒ目０での研究研究の目的はＥｂ＋ ｅｌｅｎの副作用（シスプラチン由来の）へ及ぼす影響のみならず、抗ガン有効 性についてもその情報を得ることにあった。

１）ＬＬＣ−ＰＫｌ細胞を用いたシスプラチン催の！ｎ−マ１ｔｒｏ毒性におけ る影響 ＬＬＣ−ＰＫ、は豚腎臓細胞であり、多くの近位尿細管上皮系細胞の特性を示め し、シスプラチンの腎毒性の研究に広く利用されている。この株化細胞において は乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の放出をもって細胞毒性の指標とすることができる 。

試薬、材料及び方法 ＬＬＣ−ＰＫ１細胞はドｌｏｗ研究所（オランダＸｖｘｎｅｃｂｎｒｇ）より入 手し、７５ｄのプラスチック製培養フラスコ中で５％二酸化炭素混合空気を吹き 込み続け３７℃で継代培養して維持した。培地はＦｌｏｗ研究所よりＥ　１９９ を入手し、これに２ｍＭ　Ｌ−グルタミンと５％ウシ胎児由来血清を添加した。

細胞を２４穴培養皿（０，２ｃＩｌ／穴）に移し、ウシ胎児由来血清を５％含む 血清中で８日間以上培養し、集密状態を形成させた（２．４　ＸＩＯ３個／ｄ） 。薬物処理実験を行なうに当っては２日間、無血清培地中でインキュベートした 。

実験にはドームフォーメーションを形成した単層のみ使用した。シスプラチンは 次の組成の滅菌済の塩溶液に溶解した。

塩溶液組成：１１４　ｍＭ　ＮａＣ１，５，４ｍＭ　ＫＣｌ０．８ｍＭ　ＭｇＣ ｌ　、１．２ｍＭ　ＣａＣ＋２．０．８ｍＭＮａ　ＨＰｏ　、０．２　ｍＭ　Ｎ ａＨ２ＰＯ４，５，５ｍＭグルコ一ス。さらに５％二酸化炭素含有空気を３７℃ において飽和させ、溶液のｐＨ値を７．４とした。Ｅｂｘｅｌｅｎは２％のジメ チルスルホキシドを含む塩溶液に溶解した。

ＬＬＣ−ＰＫ、の単層はトリプシンを用いて溶解し、その細胞の生存率をＬＤＨ 活性とタンパク吸着量を測定することで評価した。ＬＤＨ活性の測定法ハ５ｌｅ ｙｅｎｓ　らの方法（］、ＢｉｏｌＣｈｅｒａ、、　ｆ１９８６）２６１：３３ ２５−３３３２　）を用いて行ない、タンパク吸着量についてはＬｏｖｒ７らの 方法（１，８ｉｏｔ、　Ｃｈｅｗ、　、　（１９５１）　１９３：　２６５−２ ７５）に従って、ウシ血清アルブミン標準において培養皿への吸着残量を測定し た。

ＬＬＣ−ＰＫ、細胞の単層を生理的食塩水で三日洗浄した後、シスプラチンまた はＥｂ＋ｅｌ＋ｎに６０分間さらしインキュベートした。続いて三回生理的食塩 水で洗浄し薬物を取り除いた後、５％ウシ胎児由来血清を含有する培地中で細胞 を成育した。細胞生存率は経時的に測定し、対照実験としては、医薬の代わりに ビヒクルを用いた系について測定した。

Ｅｂ＋ｅｌｓｎの影響（シスプラチンがＬＬＣ−ＰＫｌ細胞に及ぼす細胞毒性に 対する）は次の用に評価した。ＬＬＣ−ＰＫ　の単層を生理的食塩水で三日洗浄 し、Ｅｂｓｅｌｅｎと６０分間インキュベートした後に、単層を三回生理的食塩 水で洗浄し、前述と同様にシスプラチンとインキュベートした。対照実験におい てはＥｂｓｅｌ＋ａ無添加のビヒクルを用いた。

艷！ シスプラチンのＬＬＣ−ＰＫ、＄１胞への細胞毒性。

数種の濃度のシスプラチンがＬＬＣ−ＰＫ１細胞の生存率に及ぼす影響について 図１に示した。

図１ シスプラチンのＬＬＣ−ＰＫ、細胞への細胞毒性。静止性の細胞を１時間シスプ ラチンにさらし、洗浄後新鮮な培地中でインキュベートし続は次の（Ａ）、（Ｂ ）について測定し細胞の生存率を分析した。

（Ａ）ＬＤＨ放出量 （Ｂ）培養皿へのタンパク吸着残量 測定値については三日の実験の内の典型例を示した。ＳＤ＜６％。

ＬＤＨ及び培養皿へのタンパク吸着残量の測定値は類似の結果となった。　０． ４ｍＭ濃度のシスプラチンに１時間さらされた静止性の細胞は、薬物無添加の培 地中でのインキュベージタン後の評価において、細胞生存率の減少を認めた。こ れはシスプラチンとのインキュベーション終了後２４時間経過した最初の評価で のことである。細胞生存率は次の４８時間の測定点でさらに２１％に減少してい た。この条件においては０．１ｍＭ濃度のシスプラチンでのサンプルは７２時間 後の測定点においても有意な細胞生存率の減少が見られなかった。

ＬＤＨ放出量や培養皿へのタンパク吸着残量の測定により７２時間後まで評価し ても変化しなかった。

シスプラチンのＬＬＣ−ＰＫ１細胞への細胞毒性に対してＥｂｓｅｌｅｎが及ぼ す影響。

図２に示される結果から次のことが証明される。ＬＬＣ−ＰＫ１細胞を事前に５ 〜１５ｕＭのＥｂｓｅｌｅｎと１時間インキュベートした時には、０．２または ０．４ｍＭのシスプラチンへの露爆による細胞生存率の減少から保護されていた 。

図２ ＬＬＣ−ＰＫ、に対するシスプラチンの細胞毒性にＥｌ＋＋ｅｌｅｎが及ぼす影 響。静止性細胞をεｌ＋＋ｔｌｅａに１時間さらし、洗浄後シスプラチンに１時 間さらした。さらに洗浄後、新鮮培地中で７２時間、次の（Ａ）、（Ｂ）を測定 し生存率を分析しながらインキュベートした。

（Ａ）ＬＤＨ放出量、（Ｂ）培養皿へのタンパク吸着残量測定値はミロの実験の 内、典型例を示した。ＳＤ＜６％。

Ｅｂ＋ｅｌｅｎの保護効果は濃度に依存していた。最も高い保護効果を示したの は１５ｕＭ濃度の時であった。

事前にＥｂｓｅｌｅｎ　とインキュベートする方法では、シスプラチン０．８ｍ Ｍ濃度１時間の露爆条件において細胞生存率保護効果がなかった。シスプラチン 露爆に対するＥｂｓｅｌｅｎの保護効果の経時変化について図３に示した。

図３ シスプラチンのＬＬＣ−ＰＫｌ細胞に対する細胞毒性に保護作用経時変化。

静止性の細胞をｌｏｕＭのＥｂｓｅｌｅｎに１時間さらし洗浄した後、０．４ｍ Ｍシスプラチンに１時間さらした。洗浄後、新鮮な培地中で次の（Ａ）、（Ｂ） を測定し、生存率を分析するまでインキュベートした。

（Ａ）ＬＤＨ放出量、（Ｂ）培養皿へのタンパク吸着残量。

測定値はミロの実験の内の典型例である。ＳＤ＜６％。

これより、ＷＢ＃１生存率は（０，４ｍＭシスプラチンへ１時間露爆後）７２時 間の全測定領域において、明らかに、１０ｕＭＥｂｘｅｌｔｎに１時間、事前に インキュベートした細胞よりも高か腫瘍。ＭＰＣＩＩ腫瘍細胞をオランダＵｔ＋ ｅｃｈｔ大学病理学研究室から入手した。ＭＰＣ１１腫瘍は形質細胞腫由来であ り、英国Ｂｉｒｍｉｎｇｈ！ｚのり、Ｃｘ１ｔ７氏により初めて得られた。腫瘍 細胞はＢＡＬＢ／ｃマウス内にて１週間ごとに継代培養した。実験には腹水の細 胞を使用した。細胞はへモサイトメーターにて測定した。移植可能な初代乳腺癌 細胞はオランダ、　Ｒｉｉ＋ｒｉｉｋ、　放射線生物学研究所ＴＮＯより入手し た。初代乳腺癌細胞はネズミ乳腺ガンウィルスをＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウス 内で強制的に繁殖させることで発生させた。初代癌細胞株はダルベツコの標準変 法に基づいて１ｎ−ｙｉＨｏにおいて培養した。培地にはＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃ ｏ、　Ｐｔｉ＋ｌＢ、英国）にレーグルタミン（５０［１■／　］　）　、］２ −メルカプトエタノール６Ｇｕｍｏｌ／　ｌ　）　、並びに１０％ウシ胎児由来 血清（Ｎｏｖ研究所、　Ｘｖｚｎｅｎｂｕｒｇ、　オランダ）を添加したものを 使用した。

実験動物。メスのＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　Ｃ７ウスを、＾ｏｉＩＩｘｌｔ／Ｌ＋ｌ ａｎＳｐｒｚｇｕ＋−Ｄ！ｖｌｅ７　（ＣＰＢ／Ｈ３［ｌ）実験所（２ｅｉ＋＋ 、オランダ）の中の中央研究所から入手した。実験開始時にマウスは８週齢で体 重１８〜２０ｇであった。飼料は全て標準実験用（Ｓ　ＲＭ　Ａ　、　ｅｈｏｖ 。

［１ｏｐｅ　Ｆｔ＋ｉ＋、ｊｏｅｒｄｅｎ、オランダ）を使用し、水は随時与え た。

治療。動物は非規則的に８つの集団に分けた。シスプラチンは１．０ｍｌの生理 的食塩水にて投与した。Ｅｂｓｅｌｅａは次の組成からなる混合液に溶解し、０ ．６ｍｌ容量で腹腔内に投与した。ジメチルスルホキシド／ポリエチレングリコ ール／生理的食塩水が（１／４／２（１）。

腎機能。シスプラチン由来の腎毒性にＨｓｅｌ＊ｎが与える影響はシスプラチン 投与前後１時間のＥｂｓｃｌｅｎの腹腔内投与によってした系を実験した。血液 試料はマウス眼窩後の網状組織から得た。血清クレアチニン及びＢＵＮは予備検 討時には毎ヨ測定した（測定値は示さず。）。さらに検討進めることによって、 投与後４日目における最大の毒性観察時に前記値を測定した。

肝機能。血清グルタミックピルベートトランスアミナーゼ（ＳＧＰＴ）及び５Ｇ ＯＴをシスプラチン単体もしくはＥｂ＋＋ｌｅｎとシスプラチンの投与療法から １日目と４８目に定量した。

対照はＥｂｓｅｌｅｎ　もしくはビヒクルでの投与療法系である。

組織学。シスプラチン単体またはＥｂ＋ｅｌｓｎとシスプラチンの投与療法から ４日目にマウスを解剖した。対照はＥｌｚｅｌｅｎ単体またはビヒクルで処理し た。腎臓と肝臓を摘出し顕微鏡用に処理した。６ｕｍ厚に切断し、断片をＨＥ染 色（ヘマトキシリン：イオシン染色）した。全てのスライドは、調査対象となっ た標本がとられた動物に加えられた処置に関して予め何の知見を与えられない状 態で検討された。

抗腫瘍性評価。Ｅｂ＋ｅｌｅｎがシスプラチンの腹水中のガンに対する抗ガン活 性に与える影響をＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウスにおいて調査した。マウスには ＭＰＣガン細胞を腹腔内にｌＯ６接種しく０日目とする）、２４時間後にマウス にシスプラチンを単独で腹腔内投与した。Ｅｂ＋ｅｌｅ［ｌの影響を評価する場 合は、シスプラチン投与の１時間前にＥｂ＋ｅｌｅｎを腹腔内投与する。対照と してはＥｂ＋＋ｌ＋ｎまたはビヒクルで投与療法した個体を利用した。マウスの ガン発生については毎日調査した。実験は４２Ｅ１間続け、半数生存時間（ＭＳ Ｔｓ）を計算した。

０．５Ｘ１０６初代ガン細胞を皮下接種したＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウスの左 大腿部（０８目）を用いてシスプラチンの固形ガンに対する抗ガン活性にＥｂ＋ ｅｌｅｎが与える影響を考察した。一つのマウス集団は、ガン細胞接種２４時間 後にシスプラチンを１単位単独で腹腔内投与したもので、もう一つはシスプラチ ン投与の１時間前にＥｂ＋ｅｌｅｎを１単位腹腔内投与したマウス集団である。

対照群はＥＪ＋ｅｌｅｃまたはビヒクルを投与したものである。ガンの発生は毎 日触診により調査した。実験は１５日間続け、終了時にガンを切開し計量した。

統計。スチューデント式テストを用いて実験群間の有意差を評価した。有意の度 合いはＰ　＜　０．０５であった。

結果 Ｅｂ＋！ｌ＋ｎの毒性。Ｅｂ＋ｔｌ＋ｎ自体ではＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃ　マウ スにおいて肝臓または腎臓への機能障害は起こらないことが証明できた。

シスプラチンの腎毒性に対するＥｂｘｅｌｅｎの影響表１のデーターより、マウ スにおけるシスプラチンの腎毒性に対するＥｂ＋ｅｌｅｎの保護効果の濃度依存 性が説明できる。

Ｅｂ＋＋ｌｅｎが１０．０■／ｋｇ相当投与の際に最大の保護効果が得られた。

表２にまとめた結果から、マウスにおける種々濃度のシスプラチン投与による腎 毒性に対するＥｂ＋＋ｌｅｎの保護効果が説明できる。シスプラチンを１１．５ 〜１９０■／ｋｇ相当の範囲で投与することによって、ＢＵＮ及び血清クレアチ ニンのレベルシカ（投与４日目において増加していた。シスプラチン投与１時間 前１こＥｂ＋＋ｌｅｎを投与した系においては、シスプラチンを最大量投与した 例を除いて、全ての系において、ＢＵＮ及び血清クレアチニンの増加が抑えられ ていた。

Ｅｂｉｅｌ＋ｎをシスプラチン投与の１時間後に投与した系にお０ては、シスプ ラチン由来と見うけられるＢＵＮ及び血清クレアチニンの変化に対する保護効果 がやはり見られるが、顕著なものではない。

Ｅｂ＋ｅｌｅｎがシスプラチン由来の腎臓障害（ＢＵＮやクレアチニンレベルで 観察される）に対して保護効果を持つことｉｔ［識学的に確認した。Ｅｂ＋！ｌ ｅｎをシスプラチン投与の１時間後（こ１０■／ｋｇで投与したマウス腎臓尿細 管は投与後４日目にお′−）で変性及び上皮系尿細管細胞の損失がシスプラチン 単独投与の場合よりも非常に少なかった。

腹膜後の神経節の組織が腎臓に付着すること（よ組織学的１こ証明されている。

腹膜後の神経節細胞への障害につ０ても、シスプラチンを単独で投与したマウス の方がより大きな障害を・シスプラチン投与１時間前にＥｂ＋ｅｌｅｎを投与し たマウスよりも受けると言える。これらの観点から、Ｅｂ＋ｅｌｅｎがシスプラ チン由来の神経毒性に対しても保護作用をも持つ可能性があると推測できる。

Ｅｂｉｅｌ！ｎがシスプラチンの抗腫瘍活性に与える影響。

Ｍ　Ｐ　Ｃ１１は形賀細胞腫である。ＭＰＣＩＩガン細胞を接種したＢ　Ａ　Ｌ 　Ｂ　／　ｃマウスにおける、種々のシスプラチン／Ｅｂ＋ｅｌｓｎの組合せの 抗ガン活性を表３に示した。Ｅｂ＋＋ｌｅｎはシスプラチンの抗ガン活性を減じ なかった。シスプラチン投与量を６．５■／ｋｇ相当まで落した時、シスプラチ ン単独投与のマウスとシスプラチン投与相当量が同じで、かつＥｂ＋ｅｌｅｎを 投与したマウスの半数生存時間に明確な差はなかった。Ｅｂ＋ｅｌｅｎ単独を投 与したマウスの半数生存時間はビヒクル単独を投与した対照群のそれと同一であ った。

表３のデーターからさらに次のことがわかる。Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウスに おいて、ＥｂＩ８１！ｎは、シスプラチンのＭＰＣＩＩガンに対する抗ガン活性 を減じることな（、シスプラチンの腎毒性からマウスを保護した。ＭＰＣ１１ガ ンを発生させ１３０■／ｋｇ相当のシスプラチンで治療を行なった５日目のマウ スのＢＵＮレベルの平均値は、 １６２土５６■／　ｌｏｏｍｌであった。

信体数８からなるこの群では４個体が７日目に死亡した。生存するマウスはガン 発生しなかった。（ＭＳＴ＞４２日）。

０日目にＭＰＣＩＩ細胞をｌＯ接種したマウスのＭＳＴは１６日であった。Ｅｂ ＋ｅｌｅｎ　１０■／ｋｇ相当とシスプラチン１３．０＋＋＋ｇ／ｋｇ相当を投 与したマウスは全個体（８個体）が生存した（ＭＳＴ＞４８日）。これらのマウ スはガンを発生しなかった。これらのマウスのＢＵＮレベルの平均値は５日目に おいて２９±１０■／ｌＱＯｍｌであった。

この値はシスプラチン単独を投与した群のそれよりもはるかに低い。

初期のガン。ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて初期の乳腺ガンに対してシスプラチン を９０．　１１．５■／ｋｇ相当量投与することは効果的であった（表４）。Ｅ ｂ＋ｅｌｅｎを１０■／ｋｇ相当量投与することは初期のガンに対して効果はな かったが、シスプラチンの抗ガン活性を減じることもなかった。

表４からは次のこともわかる。Ｅｂｓｅｌｅｎは腎毒性を軽減させるが、マウス においてシスプラチンの初期のガンに対する抗ガン活性を減じることはない。８ 個体のマウスにおいてシスプラチン単独でＨ，Ｏ■／ｋｇ相当量を投与した時に 、５日目においてＢＵＮレベルの増加が認められた（平均１４８±８５■／１０ ０　ｍｌ）が、マウスは生存していた。この群のマウスは全て、７日目の触診評 価においてガンを発生していなかった。その一方でＥｂｓｅｌｅｎとシスプラチ ンを投与したマウスでは、腎障害が見られた個体は一つもなかった。全てのマウ スが生存し、ガンを発生した個体は一つもなかった。Ｅｂ＋ｅｌｅ＋＋とシスプ ラチンを投与したマウスでは５日目のＢＵＮレベルも１５５日目ガン重量平均値 も対照群のそれらの値と明確な差は見られなかった。対照群とは、ビヒクルのみ を投与したマウスである。

表１ ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいてシスプラチン由来の腎毒性に種々の量のＥｂｔｅｌ ｅｎ投与が与える影響 Ｃｉ＋ｐｌａｌｉｎ　Ｅｂｉｅｉｅｎ’　ＢＵＮ　Ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ（■／ ｋｇ）　（■／ｋｇ）　（■／　ｌｏｏｍｌ）　（■／　ｌｏＯｍｌ）Ｇｂｏ　 ２２：２　０．５４：　０．０３０　１０．０　２１±３　０．５３＝＝　０． ０３ａ　Ｅｂｓｅｌｅｎはシスプラチンの１時間前に腹腔内投与した。

ｂ　対照動物はビヒクルを投与した。

Ｃ平均値士（８個体） ｄ　Ｐ＜０．０５、シスプラチン単独投与群と比較した。

表２ ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて種々の量のシスプラチン投与による腎毒性に対する Ｅｂ＋ｅｌｅｎの影響 Ｃ１５ｐｌｘｊｉｎ　Ｅｂｓｅｉｅｎ　Ｂ　ＵＮ　Ｃｒｅｚｔｉｎｉｃｅ（■／ ｋｇ）　（■／ｋｇ）　（■／　ＩＱＱｍｌ）　（■／　１［１［１ｍ１）Ｑ　 １０．０　１９±３　０．５３　＋：０．０２ａ　対照動物はビヒクルを投与し た。

ｂ　平均値±ａＩ準偏差（８個体） ｃ　Ｅｈ＋ｅｌｅｎはシスプラチンの前に投与した。

ｄ　Ｐ＜０．０５、シスプラチン単独投与群と比較した。

ｅ　Ｅｂ＋ｅｌｅｎをシスプラチン投与の１時間後に投与した。

表３ ＭＰＣＩＩガン細胞を接種したＢＡＩ、Ｂ／ｃマウスにおいてシスプラチン由来 の腎毒性及び抗ガン活性にＥｂｓｅｌｅｎが与える影響（８個体）Ｉｖｃｌｄｅ ｎｅｅ Ｓｅ＋ｗｉｗｘｌ　ｏｆ　ｔｕｉｏｒ＋Ｃ１ｘｐｌｓｊｉｎ　Ｅｂａｅｉｅｎ　 ＢＵＮ　Ｄ＊７７　ＤｓｌＩ　ＭＳＴ　Ｔ／Ｃｂ鳳 （ｗ／ｋｇ）　（ｍｇ／ｋｇ）　（＋ｗ／　１００ｍ１）　（％）　（％）　（ ｄａ７ｓ）　％０　０　２２±１　１００　１００　１６±３１０００　１０． ０　２０±２　１００　１００　１７±２１０６４．０　Ｇ　２２土２　１００ 　１００　２４±４１５０４．０　１０．０　２０±２　１００　１００　２３ ±５１４４６．５　０２３±３　１００　ｔｏｏ　２９±４１８１１ｉ、５　１ ０．０　２２±２　１０（Ｊ　ＥＧＧ　３Ｇ±２１８８９．０　０　２１±２　 １００　０　＞３０　＞３００９．０　１０．０　２３±２　１００　０　＞４ ８　＞３００１１．５　０　８６±３２　８５．５ｄＯ＞４８　＞３００１１． ５　１０．０　２３＋３ｅ１００　Ｇ　＞４８　＞３００１３．０　０　１６２ ±５６　５０ｄＧ　＞４８　＞３００１３．０　１０．０　２９±１０　１００ 　０　＞４８　＞３００１４．５　０　２０４±３２００ １４．５　１０．０　７９″１：４５！７５（ＩＯ＞４８　＞３００ａ　Ｅｂｓ ｅｌｅｎはシスプラチンの１時間前に投与した。

ｂ　Ｔ／Ｃとは投与群ＭＳＴ／対照群ＭＳＴ比である。

Ｃ平均値上標準偏差 ｄ　７日生存マウスは日々の調査及び４８日目の解剖から審査した結果ガンを発 生していなかった。７日までに死亡したマウスはシスプラチンの毒性が要因と推 定した。

ｅ　Ｐ＜０．０５、シスプラチン単独投与の群と比較した。

表４ 初期乳ガン細胞を接種したＢＡＬＢ／ｃマウスにおいてシスプラチンの腎毒性及 び抗ガン活性にＥｂ＋ｅｌｅ＋＋が与える影響（８個体）Ｉａｃｆｄｅａｃｅ　 Ｍｔｔａ　ｒａｚｏｒＢＵＮ　５ｅｒｙｉｎｌ　ｏ［ｔｌＩｌｏｒｓ　ｗｅｉｇ ｈｔ　Ｔ／ＣｂＣｉ＋山ｔｉｎ　Ｅｂｓｅｉｅｎ”　Ｉｈ７５　Ｄｓｙ８　ＤＢ ＩＩ’　Ｄｓ７１５　Ｄｔｔ１５（■７’ｋｇ）　（■／ｋｇ）　（■／１００ ｍ１）　（％）　（％）　（％）　（％）ＯＧ２１±１ｄ１００　１００　１． ５±０．３０　１Ｇ、０　２２±１　１００　１００　１．５±０．４　１００ ６．５　０　２２±１　１００　１００　１．４±０．２　９３６．５　１０． ［ｌ　２３±２　１００　１００　１．４±０．４　９３９．０　０　２２±２ 　１００　０　０．７±０．４　４７９．０　１０．０　２３±２　１００　０ 　０．８±［１，４５３１１，５０６２±２３　１００　０　０．４２±０．Ｈ ２ｇ１１．５　１０．０　２２±２　１００　０　０．３１１±０．０６　２５ １３．０　０　１４８±８５　１００　０　０．１２±０．０２　８１３．０１ ０．０２２±３１００口０．１２±Ｇ、０３８１４．５　０　２１５″１：３４ 　０　０　７１４．５　１０．０　９３＋７７ｅ７５　０　０．１１＋Ｏ，Ｇ２ 　７ａ　Ｅｂｉｅｌｅｎはシスプラチンの１時間前に投与した。

ｂ　Ｔ／Ｃとは薬物投与したマウスのガン重量平均値／対照群のガン重量の平均 値比のことである。

Ｃガン発生率は触診で評価七九 ｄ　平均値上標準偏差 ｅ　Ｐ＜０．０５、シスプラチン単独投与の群と比較した。

実験から次のことが明らかになる。Ｅｂ＋ｅｌｅ１１はシスプラチン由来の腎毒 性及び／または神経毒性の予防及び／または治療に宵月である。

シスプラチンを用いた薬物療法によって引起される副作用を予防または薬物治療 するために、Ｅｂ＋＋ｌ＋ｎは経口または非経口投与される。適正な量としては 、１日に１０〜２０００■、好ましくは１０〜３００■を１回または数回に分け 、好ましくは２〜３回に分けて投与する。

非経口投与はＤＥ−Ａ９　３８２６８９２に示される方法に順じて行なう。本考 察は、Ｅｂｉｅｌｅｎを活性成分として含有する医薬品にまで適用できる。

医薬品とは、たとえば腸内溶解型（経口や経腸）、非経口投与等があり、医薬品 は単独で用いられたり、常用薬物賦形剤と併用して投与されたりすることを意味 する。

医薬品は、個々の投与形態をとるが、投与法によって望まれるならば、錠剤、糖 衣錠剤、カプセル、座薬、顆粒、溶液、乳剤または分散剤でも良い。

通常では物質は１日１０〜２［１００■の範囲で好ましくは１日１０〜３１）０ ■の範囲で、１回もしくは数回に分けて、好ましくは１ヨに２〜３回に分けて投 与する。本発明の医薬品の製造例を以下に示す。

例１　錠剤 ２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オン　３０■ 乳糖（ラクトース）１５０■ 結晶状セルロース　５０■ カルボキシメチルセルロースカルシウム　７■ステアリン酸マグネシウム　３■ 掲示した物質は常法に従って混合し押し固めた。必要ならば常用のコーティング を行なっても良い。

例２　錠剤 ２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オン　５０■ 微結晶状セルロース　１５０■ Ｃｏ１１ａｉｏ）ＩＲ１５■ ヒドロキシプロピルメチルセルロース フタル酸エステル　２０■ 例３　カプセル コロイド状二酸化ケイ素　２■ 掲示した物質は常法に従って混合、粒化した後；こ固（１ゼラチンのカプセルに つめ込んだ。

例４　カプセル Ａ！ｔｏ＋ｉ１２Ｎ　１０” ：　ＬＤＨ−放出量 ７　ＬＤＨ−放出量 要約書 ２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オン（Ｅｂｓｅ ｌｅｎ）は、細胞分裂抑制治療中にシスプラチンにょ補正書の写しく翻訳で提出 書（特許法第１８４条の８）１、特許出願の表示　ＰＣＴ／ＥＰ　９１１０１４ ３８２、発明の名称　２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２ Ｈ）−オンの利用法３、特許出願人 ４、代　理　人　東京都新宿区新宿１丁目１番１４号　山田ビル６、添附書類の 目録 （１）補正書の翻訳文　１通 請求の範囲 １、シスプラチンの医薬投与により誘起される副作用を治療及び予防する医薬品 の製造のための２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）− オンの使用。

２、新生物症の治療及びシスプラチンの医薬投与により誘起される副作用を予防 する１０■〜１００■のシスプラチンと１０■〜２０００■のＥｂ＋ｅｌｓｃを 含む医薬品の製造のためのシスプラチンとＥｂ＋ｅｌ！口の組ｉ合わせの使用。

３、シスプラチン及びＥｂ＋＊ｌｅｎが、かかる２種の薬剤を近隣に分離した形 態で含む医療キット集合体又は容器の形態である請求項２記載の使用。

４、　Ｅｂｉｅｌｅｎ及び常用の医薬補助剤を含むシスプラチンの副作用を治療 するための医薬組成物。

５、　Ｅｂ＋ｅｌ＋ｎをシスプラチンと組合せて、これら２種の薬剤を近隣に分 離した形態で含む医療キット、集合体又は容器の形態で含むシスプラチンの副作 用を治療するための医薬組成物。

６、シスプラチンの投与前、同時または後にＥｂｉｅｌｅｎを投与することでシ スプラチンの副作用を治療する方法。

７、　Ｅｂ＋ｅｌ＋ｎを投与するに当って、経口的または非経口的に１日にＬＯ ■〜２０００■を１回または数回に分は投与する請求項６に記載の方法。

８、シスプラチン及びＥｂｓｅｌｅｎの組合せの投与により新生物症を治療する に当って、医薬品が１０■〜１００■のシスプラチン及び１０■〜２０００■の Ｅｂｉｅｌｅｎを含む治療方法。

９、ｌＯ■〜１００■のシスプラチン及び１０■〜２００１１＊のＥｂｉｅｌｅ ｎ並びに常用の医薬補助剤を含んでなる、新生物置治療用医薬組成物。

１０、　Ｅｂ＋ｅｌ＋ｎを１０■〜２０００■含む請求項４記載の医薬組成物。

国際謂香翰牛 ＋−Ｗｌ−ｎ＾＋ｍ＋−＋＋−ｓ−ＰＣＴ／ＥＰ　９１１０１４３８

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．シスプラチンの医薬投与により誘起される副作用を治療及び予防する医薬品 の製造のための２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）− オンの使用。
2. ２．新生物症の治療及びシスプラチンの医薬投与により誘起される副作用を予防 する１０ｍｇ〜１００ｍｇのシスプラチンと１０ｍｇ〜２０００ｍｇのＥｂｓｅ ｌｅｎを含む医薬品の製造のためのシスプラチンとＥｂｓｅｌｅｎの組合せの使 用。
3. ３．シスプラチン及びＥｂｓｅｌｅｎがかかる２種の薬剤を近隣に分離した形態 で含む、医療キット集合体又は容器の形態である請求項２記載の使用。
4. ４．Ｅｂｓｅｌｅｎ及び常用の医薬補助剤を含むシスプラチンの副作用を治療す るための医薬組成物。
5. ５．Ｅｂｓｅｌｅｎをシスプラチンと組合せて、これら２種の薬剤を近隣に分離 した形態で含む、医療キット、集合体又は容器の形態で含む、シスプラチンの副 作用を治療するための医薬組成物。
6. ６．シスプラチンの投与前、同時または後にＥｂｓｅｌｅｎを投与することでシ スプラチンの副作用を治療する方法。
7. ７．Ｅｂｓｅｌｅｎを投与するに当って、経口的または非経口的に１日に１０ｍ ｇ〜２０００ｍｇを１回または数回に分け投与する請求項６に記載の方法。
8. ８．シスプラチン及びＥｂｓｅｌｅｎの組合せの投与により新生物症を治療する に当って、医薬が１０ｍｇ〜１００ｍｇのシスプラチン及び１０ｍｇ〜２０００ ｍｇのＥｂｓｅｌｅｎを含む治療方法。
9. ９．１０ｍｇ〜１００ｍｇのシスプラチン及び１０ｍｇ〜２０００ｍｇのＥｂｓ ｅｌｅｎ並びに常用の医薬補助剤を含んでなる、新生物症治療用医薬組成物。
10. １０．Ｅｂｓｅｌｅｎを１０ｍｇ〜２０００ｍｇ含む請求項９記載の医薬組成物 。