JPH0551321A - 免疫賦活剤 - Google Patents
免疫賦活剤Info
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- JPH0551321A JPH0551321A JP3235598A JP23559891A JPH0551321A JP H0551321 A JPH0551321 A JP H0551321A JP 3235598 A JP3235598 A JP 3235598A JP 23559891 A JP23559891 A JP 23559891A JP H0551321 A JPH0551321 A JP H0551321A
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- bacteria
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 ビフィドバクテリウム・ビフィダム，ビフィ
ドバクテリウム・ロングム，ビフィドバクテリウム・イ
ンファンティスおよびビフィドバクテリウム・アドレッ
センティスのうちの少なくとも１種の菌体を有効成分と
して含有することを特徴とする免疫賦活剤。 【効果】 本発明は、特定のビフィドバクテリウム属細
菌が、他の食用細菌に比べて明らかに高い免疫賦活作用
を有することを利用し、免疫賦活剤を提供するものであ
り、特に消化器系の疾病や感染症などの治療に有効であ
る。また、本発明に用いるビフィドバクテリウム属細菌
は、腸内の有用細菌でありヨーグルトなどに広く利用さ
れている微生物であるから、経口的に摂取しても安全で
あり、広範な食品に応用できる。
ドバクテリウム・ロングム，ビフィドバクテリウム・イ
ンファンティスおよびビフィドバクテリウム・アドレッ
センティスのうちの少なくとも１種の菌体を有効成分と
して含有することを特徴とする免疫賦活剤。 【効果】 本発明は、特定のビフィドバクテリウム属細
菌が、他の食用細菌に比べて明らかに高い免疫賦活作用
を有することを利用し、免疫賦活剤を提供するものであ
り、特に消化器系の疾病や感染症などの治療に有効であ
る。また、本発明に用いるビフィドバクテリウム属細菌
は、腸内の有用細菌でありヨーグルトなどに広く利用さ
れている微生物であるから、経口的に摂取しても安全で
あり、広範な食品に応用できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、免疫賦活剤に関し、詳
しくは腸内細菌であるビフィドバクテリウム属の微生物
菌体を有効成分として含有する免疫賦活剤に関する。
しくは腸内細菌であるビフィドバクテリウム属の微生物
菌体を有効成分として含有する免疫賦活剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】ビフィドバクテリウム(Bifidobacteriu
m）属細菌は、腸内細菌の一種であり、腸内菌叢をビフ
ィドバクテリウム属細菌優勢に改善することにより、消
化器系の疾病や感染症に効果があることが知られてい
る。特に、人工栄養児に比べ母乳栄養児が消化不良症や
感染症にかかりにくいことの原因の１つに、腸内菌叢に
占めるビフィドバクテリウム属細菌の割合が高いことが
報告されている。一方、ビフィドバクテリウム属細菌の
免疫学的作用については、ビフィドバクテリウム・イン
ファンティス(B.infantis)が、リンパ球のＢ細胞やマク
ロファージを非特異的に活性化し、また同系移殖腫腸を
治癒すること(kohwi, Y. et al：Gann, 69：613, 1978)
が、さらには、ビフィドバクテリウム・ブレーベ(B.bre
ave)に、パイエル板細胞の抗体産産を増強させ、骨髄由
来のＢ細胞の増殖を促進する作用があること（保井ら；
特開平１−２４２５３２）がそれぞれ報告されている。
m）属細菌は、腸内細菌の一種であり、腸内菌叢をビフ
ィドバクテリウム属細菌優勢に改善することにより、消
化器系の疾病や感染症に効果があることが知られてい
る。特に、人工栄養児に比べ母乳栄養児が消化不良症や
感染症にかかりにくいことの原因の１つに、腸内菌叢に
占めるビフィドバクテリウム属細菌の割合が高いことが
報告されている。一方、ビフィドバクテリウム属細菌の
免疫学的作用については、ビフィドバクテリウム・イン
ファンティス(B.infantis)が、リンパ球のＢ細胞やマク
ロファージを非特異的に活性化し、また同系移殖腫腸を
治癒すること(kohwi, Y. et al：Gann, 69：613, 1978)
が、さらには、ビフィドバクテリウム・ブレーベ(B.bre
ave)に、パイエル板細胞の抗体産産を増強させ、骨髄由
来のＢ細胞の増殖を促進する作用があること（保井ら；
特開平１−２４２５３２）がそれぞれ報告されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これま
でにビフィドバクテリウム属細菌とその他の食用細菌と
の免疫学的性質の違いを体系的かつ詳細に調べた例は極
めて少ない。本発明は、ビフィドバクテリウム属細菌の
免疫賦活作用の程度を明確化し、さらには、マクロファ
ージに対する作用から、免疫系への作用機構を解析する
ことを目的とする。
でにビフィドバクテリウム属細菌とその他の食用細菌と
の免疫学的性質の違いを体系的かつ詳細に調べた例は極
めて少ない。本発明は、ビフィドバクテリウム属細菌の
免疫賦活作用の程度を明確化し、さらには、マクロファ
ージに対する作用から、免疫系への作用機構を解析する
ことを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、ビフィドバク
テリウム・ビフィダム，ビフィドバクテリウム・ロング
ム，ビフィドバクテリウム・インファンティスおよびビ
フィドバクテリウム・アドレッセンティスのうちの少な
くとも１種の菌体を有効成分として含有することを特徴
とする免疫賦活剤を提供するものである。
テリウム・ビフィダム，ビフィドバクテリウム・ロング
ム，ビフィドバクテリウム・インファンティスおよびビ
フィドバクテリウム・アドレッセンティスのうちの少な
くとも１種の菌体を有効成分として含有することを特徴
とする免疫賦活剤を提供するものである。
【０００５】本発明で用いる上記微生物としては、特に
制限がなく、例えばＡＴＣＣ，ＩＦＯなどの機関に保存
され、カタログに記載されている公知菌や財団法人 日
本ビフィズス菌センターなどから入手できるもの、市販
されているもの等任意の菌株を使用することができる。
また、これら微生物は生菌体のほか、熱処理等により死
滅させたものや凍結乾燥菌体などの形態でも用いられ、
所望により粉末剤，錠剤，ドリンク剤などに製剤化して
もよい。
制限がなく、例えばＡＴＣＣ，ＩＦＯなどの機関に保存
され、カタログに記載されている公知菌や財団法人 日
本ビフィズス菌センターなどから入手できるもの、市販
されているもの等任意の菌株を使用することができる。
また、これら微生物は生菌体のほか、熱処理等により死
滅させたものや凍結乾燥菌体などの形態でも用いられ、
所望により粉末剤，錠剤，ドリンク剤などに製剤化して
もよい。
【０００６】上記した本発明の課題を解決すべく、本発
明者らはビフィドバクテリウム属細菌とその他の食用細
菌の免疫賦活作用の程度を比較するため、４種類の試験
法を用いた。すなわち、菌体とは無関係の蛋白質抗原を
あらかじめ免疫したマウスを用いたＴ細胞増殖試験，Ｂ
細胞による抗体産生試験，さらには免疫していないマウ
スを用いたリンパ球の幼若化試験を行った。また、ビフ
ィドバクテリウム属細菌の免疫系への作用機構を解析す
るために、マクロファージに対する作用についても検討
した。
明者らはビフィドバクテリウム属細菌とその他の食用細
菌の免疫賦活作用の程度を比較するため、４種類の試験
法を用いた。すなわち、菌体とは無関係の蛋白質抗原を
あらかじめ免疫したマウスを用いたＴ細胞増殖試験，Ｂ
細胞による抗体産生試験，さらには免疫していないマウ
スを用いたリンパ球の幼若化試験を行った。また、ビフ
ィドバクテリウム属細菌の免疫系への作用機構を解析す
るために、マクロファージに対する作用についても検討
した。
【０００７】
【作用】上記のように、４種類の試験法を用いてビフィ
ドバクテリウム属細菌を含む食用細菌の免疫賦活作用を
比較した結果、ビフィドバクテリウム属細菌はリンパ節
細胞の免疫応答を非常によく高め、脾臓細胞を活性化す
るが、胸腺細胞に対する活性作用は示さないことが明ら
かとなった。以上のことから、ビフィドバクテリウム属
細菌は、他の食用細菌に比べ明らかに宿主の免疫系を非
特異的に賦活する作用があることが判る。さらに、脾臓
細胞に対する活性化作用が弱く、胸腺細胞に対する活性
化作用を示さないことから、ビフィドバクテリウム属細
菌のマクロファージに対する作用を検討した。その結
果、ビフィドバクテリウム属細菌は、それ自体では活性
のあまりない微量のリポポリサッカライド（ＬＰＳ）と
共同作用して、マクロファージの活性を高める作用があ
ることが明らかとなった。
ドバクテリウム属細菌を含む食用細菌の免疫賦活作用を
比較した結果、ビフィドバクテリウム属細菌はリンパ節
細胞の免疫応答を非常によく高め、脾臓細胞を活性化す
るが、胸腺細胞に対する活性作用は示さないことが明ら
かとなった。以上のことから、ビフィドバクテリウム属
細菌は、他の食用細菌に比べ明らかに宿主の免疫系を非
特異的に賦活する作用があることが判る。さらに、脾臓
細胞に対する活性化作用が弱く、胸腺細胞に対する活性
化作用を示さないことから、ビフィドバクテリウム属細
菌のマクロファージに対する作用を検討した。その結
果、ビフィドバクテリウム属細菌は、それ自体では活性
のあまりない微量のリポポリサッカライド（ＬＰＳ）と
共同作用して、マクロファージの活性を高める作用があ
ることが明らかとなった。
【０００８】
【実施例】次に、本発明の詳細を以下の実施例により説
明する。なお、実験に用いた菌株と培養条件を以下に示
す。
明する。なお、実験に用いた菌株と培養条件を以下に示
す。
【０００９】
【表１】
【００１０】各菌株は凍結または凍結乾燥保存したもの
を用いて培養した後、遠心分離(10,000rpm, 10分）を行
って菌体を回収し、蒸留水に再懸濁した後、同一条件で
遠心分離を行い、回収した。次いで、回収した菌体を凍
結乾燥後、１mg／mlの濃度で１５分間の超音波処理を行
った。
を用いて培養した後、遠心分離(10,000rpm, 10分）を行
って菌体を回収し、蒸留水に再懸濁した後、同一条件で
遠心分離を行い、回収した。次いで、回収した菌体を凍
結乾燥後、１mg／mlの濃度で１５分間の超音波処理を行
った。
【００１１】実施例１ ビフィドバクテリウム属細菌を含む食用細菌の免疫賦活
作用の比較 リンパ節細胞の増殖試験 あらかじめ完全アジュバント(Mycobocterium tuberculo
isis H37Ra株を含む）とともに、エマルジョン化した鶏
卵オボムコイド（50μg/head）を、マウスの両foot pad
およびbase of tailに免疫(200μｌ／head）しておき、
２週間後にそのリンパ節細胞を取り出し、単細胞懸濁液
を調製した。これを１％同系マウス正常血清を含むRPMI
1640 培地（100U／ml結晶ペニシリンＧカリウム,100μ
g/ml硫酸ストレプトマイシン，５×１０-5Ｍ ２−メル
カプトエタノールを含む）を用いて、各菌体とともに3.
５〜4.０×１０5/ 200μｌ/well(96 well 平底プレー
ト）で培養した。培養は、５％ CO2, 37℃の条件で行っ
た。（以後、細胞培養はこの条件で行った。）３日後、
3Ｈ−チミジンを１μCi/well 添加し、１８〜２２時間
後に培養を終了し、液体シンチレーション カウンター
で取り込まれた 3Ｈ−チミジン量を測定した。
作用の比較 リンパ節細胞の増殖試験 あらかじめ完全アジュバント(Mycobocterium tuberculo
isis H37Ra株を含む）とともに、エマルジョン化した鶏
卵オボムコイド（50μg/head）を、マウスの両foot pad
およびbase of tailに免疫(200μｌ／head）しておき、
２週間後にそのリンパ節細胞を取り出し、単細胞懸濁液
を調製した。これを１％同系マウス正常血清を含むRPMI
1640 培地（100U／ml結晶ペニシリンＧカリウム,100μ
g/ml硫酸ストレプトマイシン，５×１０-5Ｍ ２−メル
カプトエタノールを含む）を用いて、各菌体とともに3.
５〜4.０×１０5/ 200μｌ/well(96 well 平底プレー
ト）で培養した。培養は、５％ CO2, 37℃の条件で行っ
た。（以後、細胞培養はこの条件で行った。）３日後、
3Ｈ−チミジンを１μCi/well 添加し、１８〜２２時間
後に培養を終了し、液体シンチレーション カウンター
で取り込まれた 3Ｈ−チミジン量を測定した。
【００１２】その結果、図１に示したように、ビフィド
バクテリウム属細菌を培地に添加すると、５株全てが異
種抗原に対するリンパ節細胞の増殖を促進させた。
バクテリウム属細菌を培地に添加すると、５株全てが異
種抗原に対するリンパ節細胞の増殖を促進させた。
【００１３】Ｂ細胞による抗−オボムコイド抗体の産
生試験 上記の方法と同じように、あらかじめ鶏卵オボムコイ
ドを免疫し、そのリンパ節細胞を取り出し、２×１０6
個／ml／well（48 well 平底プレート）濃度で各菌体と
ともに培養した。培養開始後、３日目と７日目に半量ず
つ培地交換を行い、１１日目の培養上清中の抗−オボム
コイド抗体の産生量をELISA 法により測定した。その結
果、図２に示したように、この試験においても、ビフィ
ドバクテリウム属細菌は、５株全てが抗−オボムコイド
抗体の産生量を上昇させた。
生試験 上記の方法と同じように、あらかじめ鶏卵オボムコイ
ドを免疫し、そのリンパ節細胞を取り出し、２×１０6
個／ml／well（48 well 平底プレート）濃度で各菌体と
ともに培養した。培養開始後、３日目と７日目に半量ず
つ培地交換を行い、１１日目の培養上清中の抗−オボム
コイド抗体の産生量をELISA 法により測定した。その結
果、図２に示したように、この試験においても、ビフィ
ドバクテリウム属細菌は、５株全てが抗−オボムコイド
抗体の産生量を上昇させた。
【００１４】リンパ球の幼若化試験 免疫していないマウスの脾臓または胸腺よりリンパ球を
調製し、１％同系マウス正常血清を含むRPMI 1640 培地
を用いて、各菌体とともに5.０×１０5 個/200μl/well
の濃度で96wellプレートにまき、２日間培養した。以
後、上記の方法と同様に3Ｈ−チミジンの取り込み量
を測定した。その結果を図３に示した。図から明らかな
ように、脾臓細胞を用いた場合は、ビフィドバクテリウ
ム属細菌の全てにやや高い活性がみられたが、胸腺細胞
を用いた場合には、どの菌株においても活性は見られな
かった。このことから、これらの菌株は胸腺のＴ細胞に
は直接働きかけていないことが示唆された。以上の結果
から、ビフィドバクテリウム属細菌は、非特異的に免疫
系を活性化し、その属に固有な免疫賦活作用を持つこと
が認められた。
調製し、１％同系マウス正常血清を含むRPMI 1640 培地
を用いて、各菌体とともに5.０×１０5 個/200μl/well
の濃度で96wellプレートにまき、２日間培養した。以
後、上記の方法と同様に3Ｈ−チミジンの取り込み量
を測定した。その結果を図３に示した。図から明らかな
ように、脾臓細胞を用いた場合は、ビフィドバクテリウ
ム属細菌の全てにやや高い活性がみられたが、胸腺細胞
を用いた場合には、どの菌株においても活性は見られな
かった。このことから、これらの菌株は胸腺のＴ細胞に
は直接働きかけていないことが示唆された。以上の結果
から、ビフィドバクテリウム属細菌は、非特異的に免疫
系を活性化し、その属に固有な免疫賦活作用を持つこと
が認められた。
【００１５】実施例２ ビフィドバクテリウム属細菌のマクロファージに対する
作用 ビフィドバクテリウム属細菌によるマクロファージのce
ll line であるRAW 264.7 株の活性化作用をリンパ球活
性化化因子の一つであるインターロイキン−１（以下、
ＩＬ−１と略す。）の産生量を指標として調べた。
作用 ビフィドバクテリウム属細菌によるマクロファージのce
ll line であるRAW 264.7 株の活性化作用をリンパ球活
性化化因子の一つであるインターロイキン−１（以下、
ＩＬ−１と略す。）の産生量を指標として調べた。
【００１６】マクロファージを各菌体とともに、48well
平底プレートに５×１０5 個/well/ml濃度でまき、２４
時間培養した後、その培養上清を回収した。また、菌体
にそれ自体では活性の低い微量のＬＰＳ（マクロファー
ジ活性化の陽性コントロール）を加えたものも供試し
た。上清中に含まれるＩＬ−１の濃度はＩＬ−１依存性
細胞でありヘルパーＴ細胞のcell line であるＤ１０Ｇ
4.１の増殖の程度により算出した。
平底プレートに５×１０5 個/well/ml濃度でまき、２４
時間培養した後、その培養上清を回収した。また、菌体
にそれ自体では活性の低い微量のＬＰＳ（マクロファー
ジ活性化の陽性コントロール）を加えたものも供試し
た。上清中に含まれるＩＬ−１の濃度はＩＬ−１依存性
細胞でありヘルパーＴ細胞のcell line であるＤ１０Ｇ
4.１の増殖の程度により算出した。
【００１７】図４に示したように、ビフィドバクテリウ
ム属細菌は、２株とも単独ではＩＬ−１の産生を促進し
なかったが、微量のＬＰＳを加えることにより有意にＩ
Ｌ−１の産生を促進した。つまり、ビフィドバクテリウ
ム属細菌は微量のＬＰＳと共同作用して、マクロファー
ジの活性化を促進していることが明らかとなった。
ム属細菌は、２株とも単独ではＩＬ−１の産生を促進し
なかったが、微量のＬＰＳを加えることにより有意にＩ
Ｌ−１の産生を促進した。つまり、ビフィドバクテリウ
ム属細菌は微量のＬＰＳと共同作用して、マクロファー
ジの活性化を促進していることが明らかとなった。
【００１８】
【発明の効果】本発明は、上記の説明から明らかなよう
に、特定のビフィドバクテリウム属細菌が、他の食用細
菌に比べて明らかに高い免疫賦活作用を有することを利
用し、免疫賦活剤を提供するものであり、特に消化器系
の疾病や感染症などの治療に有効である。また、本発明
に用いるビフィドバクテリウム属細菌は、腸内の有用細
菌でありヨーグルトなどに広く利用されている微生物で
あるから、経口的に摂取しても安全であり、広範な食品
に応用できる。
に、特定のビフィドバクテリウム属細菌が、他の食用細
菌に比べて明らかに高い免疫賦活作用を有することを利
用し、免疫賦活剤を提供するものであり、特に消化器系
の疾病や感染症などの治療に有効である。また、本発明
に用いるビフィドバクテリウム属細菌は、腸内の有用細
菌でありヨーグルトなどに広く利用されている微生物で
あるから、経口的に摂取しても安全であり、広範な食品
に応用できる。
【００１９】
【図１】 ビフィドバクテリウム属細菌を含む食用細菌
のリンパ節細胞の増殖試験の結果を示す。
のリンパ節細胞の増殖試験の結果を示す。
【図２】 ビフィドバクテリウム属細菌を含む食用細菌
のリンパ節細胞のＢ細胞による抗−オボムコイド抗体の
産生試験の結果を示す。
のリンパ節細胞のＢ細胞による抗−オボムコイド抗体の
産生試験の結果を示す。
【図３】 ビフィドバクテリウム属細菌を含む食用細菌
のリンパ球幼若化試験の結果を示す。
のリンパ球幼若化試験の結果を示す。
【図４】 ビフィドバクテリウム属細菌を含む食用細菌
のマクロファージに対する試験の結果を示す。
のマクロファージに対する試験の結果を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 皆川 悦雄 北海道札幌郡広島町輪厚465−１番地 よ つ葉乳業株式会社リサーチセンター内 (72)発明者 司城 不二 北海道札幌郡広島町輪厚465−１番地 よ つ葉乳業株式会社リサーチセンター内 (72)発明者 上野川 修一 埼玉県春日部市増田新田400−８
Claims (1)
- 【請求項１】 ビフィドバクテリウム・ビフィダム，ビ
フィドバクテリウム・ロングム，ビフィドバクテリウム
・インファンティスおよびビフィドバクテリウム・アド
レッセンティスのうちの少なくとも１種の菌体を有効成
分として含有することを特徴とする免疫賦活剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3235598A JPH0551321A (ja) | 1991-08-23 | 1991-08-23 | 免疫賦活剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3235598A JPH0551321A (ja) | 1991-08-23 | 1991-08-23 | 免疫賦活剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0551321A true JPH0551321A (ja) | 1993-03-02 |
Family
ID=16988379
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3235598A Pending JPH0551321A (ja) | 1991-08-23 | 1991-08-23 | 免疫賦活剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0551321A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0769907A (ja) * | 1993-08-27 | 1995-03-14 | Meiji Milk Prod Co Ltd | 日和見感染症防御用組成物 |
| JP2002255853A (ja) * | 2001-03-01 | 2002-09-11 | Biofuerumin Seiyaku Kk | 免疫賦活組成物 |
| KR100406344B1 (ko) * | 1997-08-21 | 2003-11-19 | 뉴질랜드 대어리 보오드 | 면역을 향상시키는 젖산균 |
| JP2005089388A (ja) * | 2003-09-18 | 2005-04-07 | Biofuerumin Seiyaku Kk | 免疫賦活作用増強剤 |
| WO2006123230A3 (en) * | 2005-05-18 | 2007-03-15 | Stallergenes Sa | Compositions for antigen-specific induction of immuno-tolerance via oral immunization |
| WO2010101175A1 (ja) * | 2009-03-04 | 2010-09-10 | 明治乳業株式会社 | 凍結乾燥粉末状菌体及びその製造方法 |
| JP5328158B2 (ja) * | 2006-01-30 | 2013-10-30 | サンスター株式会社 | カンジダ菌感染に基づく疾患の予防又は改善剤及び経口組成物 |
| JP2022552721A (ja) * | 2019-10-18 | 2022-12-19 | ゲノム アンド カンパニー | ビフィドバクテリウム・ビフィダムを含む免疫力増強または改善用組成物 |
-
1991
- 1991-08-23 JP JP3235598A patent/JPH0551321A/ja active Pending
Cited By (9)
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| JPH0769907A (ja) * | 1993-08-27 | 1995-03-14 | Meiji Milk Prod Co Ltd | 日和見感染症防御用組成物 |
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| WO2010101175A1 (ja) * | 2009-03-04 | 2010-09-10 | 明治乳業株式会社 | 凍結乾燥粉末状菌体及びその製造方法 |
| JP2022552721A (ja) * | 2019-10-18 | 2022-12-19 | ゲノム アンド カンパニー | ビフィドバクテリウム・ビフィダムを含む免疫力増強または改善用組成物 |
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