JPH0553777B2 - - Google Patents
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- JPH0553777B2 JPH0553777B2 JP59101636A JP10163684A JPH0553777B2 JP H0553777 B2 JPH0553777 B2 JP H0553777B2 JP 59101636 A JP59101636 A JP 59101636A JP 10163684 A JP10163684 A JP 10163684A JP H0553777 B2 JPH0553777 B2 JP H0553777B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- factor
- precipitate
- solution
- units
- protein
- Prior art date
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- Expired - Lifetime
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
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- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
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- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
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- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
この発明は、第因子（AHF）含有製剤の製
造法に関するものである。
造法に関するものである。
ひとまたは動物の血漿から製造され、天然の血
漿より高い第因子活性を示す第因子（AHF）
濃縮物は既に知られている。フラクシヨン化法に
よる公知の第因子濃縮物製造法は、血漿をエタ
ノール、エーテル、ポリエチレングリコール、お
よび／またはグリシンで処理することを必要とす
る。また、プール〔1965年、「ザ・ニユー・イン
グランド・ジヤーナル・オブ・メデイシン」273
巻1443頁〕による血漿の低温沈殿
（cryoprecipitation）またはジヨンソン〔Congr、
Int.Soc.Blood Transf.オーストラリア、シドニ
ー、報文抄録1109頁、1966年〕による血漿のエタ
ノール低温沈殿（cryoethanol precipitation）も
知られている。
漿より高い第因子活性を示す第因子（AHF）
濃縮物は既に知られている。フラクシヨン化法に
よる公知の第因子濃縮物製造法は、血漿をエタ
ノール、エーテル、ポリエチレングリコール、お
よび／またはグリシンで処理することを必要とす
る。また、プール〔1965年、「ザ・ニユー・イン
グランド・ジヤーナル・オブ・メデイシン」273
巻1443頁〕による血漿の低温沈殿
（cryoprecipitation）またはジヨンソン〔Congr、
Int.Soc.Blood Transf.オーストラリア、シドニ
ー、報文抄録1109頁、1966年〕による血漿のエタ
ノール低温沈殿（cryoethanol precipitation）も
知られている。
さらに、西独公開公報2516186号には、血漿か
ら得た低温沈殿をほぐし、ほぐしたものをくえん
酸・グルコース緩衝液にけんだくし、遠心分離
し、得られた緩衝抽出液を6.0ないし6.8のPHに調
節する方法が記載されている。これらの条件下で
は、望ましくない不純物の沈殿が起り、その後第
因子含有残渣を滅菌し凍結乾燥する。この方法
で得られる第因子製品は、僅かな第因子単
位／蛋白質mgの特異的活性を示すにすぎない。さ
らに、第因子単位当りの免疫グロブリンＧ
（IgG）量が望ましくないほど高い。
ら得た低温沈殿をほぐし、ほぐしたものをくえん
酸・グルコース緩衝液にけんだくし、遠心分離
し、得られた緩衝抽出液を6.0ないし6.8のPHに調
節する方法が記載されている。これらの条件下で
は、望ましくない不純物の沈殿が起り、その後第
因子含有残渣を滅菌し凍結乾燥する。この方法
で得られる第因子製品は、僅かな第因子単
位／蛋白質mgの特異的活性を示すにすぎない。さ
らに、第因子単位当りの免疫グロブリンＧ
（IgG）量が望ましくないほど高い。
同様な方法がオーストリア特許349639号並びに
米国特許4170639号および4104266号に記載され、
そこでは、同様に血漿から出発し、低温沈殿を
得、これを中性PH域の緩衝液に溶解して望ましく
ない蛋白質を分離し、プロトロンビン錯体を分離
するために上漬を水酸化アルミニウムで処理し、
次いで第因子含有溶液を濃縮し凍結乾燥してい
る。この方法でも、第因子単位／蛋白質mgの特
異的活性が極めて低い。例えば、米国特許
4104266号による特異的活性は僅か0.5ないし0.6
単位／蛋白質mgにすぎない。
米国特許4170639号および4104266号に記載され、
そこでは、同様に血漿から出発し、低温沈殿を
得、これを中性PH域の緩衝液に溶解して望ましく
ない蛋白質を分離し、プロトロンビン錯体を分離
するために上漬を水酸化アルミニウムで処理し、
次いで第因子含有溶液を濃縮し凍結乾燥してい
る。この方法でも、第因子単位／蛋白質mgの特
異的活性が極めて低い。例えば、米国特許
4104266号による特異的活性は僅か0.5ないし0.6
単位／蛋白質mgにすぎない。
第因子濃縮物を製造する別の方法として、血
漿をフロリゲル、ベントナイト、イオン交換体お
よび透過クロマトグラフイー剤のような吸着剤で
処理することからなる方法がある。
漿をフロリゲル、ベントナイト、イオン交換体お
よび透過クロマトグラフイー剤のような吸着剤で
処理することからなる方法がある。
この発明は、上記の不利益および欠点を回避す
るためになされたものであつて、ほぼ中性領域の
でPHで望ましくない蛋白質特にフイプリノーゲン
の大部分を沈殿させる方法を用いて、比活性が少
なくとも第因子1.5単位／蛋白質mgであり、免
疫グロブリンＧ（IgG）分が15ないし30mg／第
因子1000単位でフイブリノーゲン分が20ないし40
mg／第因子100単位である、第因子（AHF）
含有製剤を提供しようとするものである。
るためになされたものであつて、ほぼ中性領域の
でPHで望ましくない蛋白質特にフイプリノーゲン
の大部分を沈殿させる方法を用いて、比活性が少
なくとも第因子1.5単位／蛋白質mgであり、免
疫グロブリンＧ（IgG）分が15ないし30mg／第
因子1000単位でフイブリノーゲン分が20ないし40
mg／第因子100単位である、第因子（AHF）
含有製剤を提供しようとするものである。
この発明は、前記した方法に沿つて上記の目的
を達成するものであり、望ましくない蛋白質の沈
殿をPH６ないし７で硫酸化多糖類の存在下に行な
い、沈殿を捨てた後、第因子含有上清をPH６な
いし７で塩類の存在下に蛋白沈殿剤で処理して第
因子含有沈殿を得、これを溶解し、所望によ
り、最終製品を抗トロンビン・ヘパリン錯体ま
たは抗トロンビン・ヘパリノイド錯体と混合す
ることから構成される。
を達成するものであり、望ましくない蛋白質の沈
殿をPH６ないし７で硫酸化多糖類の存在下に行な
い、沈殿を捨てた後、第因子含有上清をPH６な
いし７で塩類の存在下に蛋白沈殿剤で処理して第
因子含有沈殿を得、これを溶解し、所望によ
り、最終製品を抗トロンビン・ヘパリン錯体ま
たは抗トロンビン・ヘパリノイド錯体と混合す
ることから構成される。
この発明によると、高特異的活性、例えば第
因子1.5ないし4.0単位／蛋白質mgを有し、免疫グ
ロブリンが約15ないし30mg／第因子1000単位の
含有の低含量である製剤が得られる。この種の製
品は、凍結乾燥後極めて良好な溶解性を示す。再
構成（reconstitution）時間は0.5ないし４分にす
ぎず、この発明の方法の経済性は良好で、収率は
高い。
因子1.5ないし4.0単位／蛋白質mgを有し、免疫グ
ロブリンが約15ないし30mg／第因子1000単位の
含有の低含量である製剤が得られる。この種の製
品は、凍結乾燥後極めて良好な溶解性を示す。再
構成（reconstitution）時間は0.5ないし４分にす
ぎず、この発明の方法の経済性は良好で、収率は
高い。
好ましい実施態様によると、硫酸化多糖類とし
て、ムコ多糖類ポリ硫酸エステル、ペントサンポ
リスルフエート、デキストランスルフエートのよ
うなヘパリノイド類が用いられる。
て、ムコ多糖類ポリ硫酸エステル、ペントサンポ
リスルフエート、デキストランスルフエートのよ
うなヘパリノイド類が用いられる。
この発明による有利な方法は、下記処理手段の
結合、すなわち 低温沈殿をくえん酸・ヘパリノイド緩衝液に溶
解し、そのPHを6.0ないし6.4に調節し、けんだく
液を０ないし25℃好ましくは４ないし８℃に冷却
して不活性蛋白質を沈殿させること、 沈殿を捨てた後、PH6.0ないし7.0で最高グリシ
ン1.45モルおよび／または最低イオン光度0.15の
存在下にエチルアルコールのような蛋白沈殿剤で
沈殿させることにより精製第因子含有上清溶液
を濃縮すること、 抗トロンビン・ヘパリノイド錯体または抗ト
ロンビン・ヘパリン錯体の存在下に第因子含
有沈殿をグリシン・くえん酸・NaCl緩衝液に溶
解し、これを安定な形態に加工すること、 の結合を特徴とするものである。
結合、すなわち 低温沈殿をくえん酸・ヘパリノイド緩衝液に溶
解し、そのPHを6.0ないし6.4に調節し、けんだく
液を０ないし25℃好ましくは４ないし８℃に冷却
して不活性蛋白質を沈殿させること、 沈殿を捨てた後、PH6.0ないし7.0で最高グリシ
ン1.45モルおよび／または最低イオン光度0.15の
存在下にエチルアルコールのような蛋白沈殿剤で
沈殿させることにより精製第因子含有上清溶液
を濃縮すること、 抗トロンビン・ヘパリノイド錯体または抗ト
ロンビン・ヘパリン錯体の存在下に第因子含
有沈殿をグリシン・くえん酸・NaCl緩衝液に溶
解し、これを安定な形態に加工すること、 の結合を特徴とするものである。
この実施態様の変法として、第因子含有上清
溶液に蛋白沈殿剤と塩類を添加しあ後、得られる
けんだく液を凍結し、０ないし４℃の温度で解凍
し、上清を捨て、抗トロンビン・ヘパリノイド
錯体または抗トロンビン・ヘパリン錯体の存在
下に第因子含有沈殿をグリシン・くえん酸・
NaCl緩衝液に溶解し、安定な形態に加工するこ
とから構成される方法がある。
溶液に蛋白沈殿剤と塩類を添加しあ後、得られる
けんだく液を凍結し、０ないし４℃の温度で解凍
し、上清を捨て、抗トロンビン・ヘパリノイド
錯体または抗トロンビン・ヘパリン錯体の存在
下に第因子含有沈殿をグリシン・くえん酸・
NaCl緩衝液に溶解し、安定な形態に加工するこ
とから構成される方法がある。
安定化を目的として、最終製品にアルブミンを
添加するのが適当である。
添加するのが適当である。
この発明により製造された製剤の特異的第因
子活性とは、第因子活性／蛋白質mgの比率を意
味する。第因子活性は、いわゆる２段階法、す
なわちオーステンおよびライムズ「ア・ラボラト
リー・マニユアル・オブ・ブラツド・コアギユレ
ーシヨン」（ブラツクウエル・サイエンテイフイ
ツク・パブリケーシヨンズ、1975年）にしたがつ
て測定される。蛋白質濃度は、ゴーナル、バーダ
ウイルおよびデイビツト、J.Biol.Chem.177巻751
頁（1949年）記載の方法により測定される。
子活性とは、第因子活性／蛋白質mgの比率を意
味する。第因子活性は、いわゆる２段階法、す
なわちオーステンおよびライムズ「ア・ラボラト
リー・マニユアル・オブ・ブラツド・コアギユレ
ーシヨン」（ブラツクウエル・サイエンテイフイ
ツク・パブリケーシヨンズ、1975年）にしたがつ
て測定される。蛋白質濃度は、ゴーナル、バーダ
ウイルおよびデイビツト、J.Biol.Chem.177巻751
頁（1949年）記載の方法により測定される。
この発明の製剤に適用し得る免疫グロブリンＧ
（IgG）の定量法は、文献すなわちマンチニ、ベ
ルマン、カルボナラおよびヘレマンス、「ア・シ
ングル・ラジアル・デイフユジヨン・メソツド・
フオー・ジ・イムノロジカル・クオンテイテーシ
ヨン・オブ・プロテインズ・（XIコロキユウム・
オン・プロチド・オブ・ザ・バイオロジカル・フ
イルド、370頁、1964年、アムステルダム、エル
スフイール）に記載されている。
（IgG）の定量法は、文献すなわちマンチニ、ベ
ルマン、カルボナラおよびヘレマンス、「ア・シ
ングル・ラジアル・デイフユジヨン・メソツド・
フオー・ジ・イムノロジカル・クオンテイテーシ
ヨン・オブ・プロテインズ・（XIコロキユウム・
オン・プロチド・オブ・ザ・バイオロジカル・フ
イルド、370頁、1964年、アムステルダム、エル
スフイール）に記載されている。
測定法の原理は、抗原（IgG）と抗体（抗IgG）
の反応に存する。アガロース免疫拡散トレイ（例
えばイムノ・デイアグノスチカによる）は、特異
的抗血清（抗IgG）を含んでいる。
の反応に存する。アガロース免疫拡散トレイ（例
えばイムノ・デイアグノスチカによる）は、特異
的抗血清（抗IgG）を含んでいる。
第因子含有製剤とレフアレンス標準製剤
（WHO基準に基づく既知IgG含有のもの）それぞ
れ５×10-3mlをウエル（well）に入れる。少なく
とも20ないし24℃で45時間反応後、環状沈殿の直
径を測定する。上記免疫のグロブリンのレフアレ
ンス標準品と比較して第因子含有製剤の免疫グ
ロブリン濃度を定量する。
（WHO基準に基づく既知IgG含有のもの）それぞ
れ５×10-3mlをウエル（well）に入れる。少なく
とも20ないし24℃で45時間反応後、環状沈殿の直
径を測定する。上記免疫のグロブリンのレフアレ
ンス標準品と比較して第因子含有製剤の免疫グ
ロブリン濃度を定量する。
また、セルロースアセテート膜電気泳動による
フイブリノーゲンの定量も、文献すなわちゲボツ
ト、「ベツクマン・マイクロゾーン・エテクトロ
ホレシス・マニユアル」（ベツクマンインストル
メンツ・インコーポレイテツド、1977年、015−
0833630−Ｃ）に記載されている。
フイブリノーゲンの定量も、文献すなわちゲボツ
ト、「ベツクマン・マイクロゾーン・エテクトロ
ホレシス・マニユアル」（ベツクマンインストル
メンツ・インコーポレイテツド、1977年、015−
0833630−Ｃ）に記載されている。
そこに記載された指示によると、次のように操
作する。セルロースアセテート膜をPH8.6のベロ
ナール／ベロナール・ナトリウム緩衝液（ベツク
マンＢ−２緩衝液）に浸清し、平衡させる。マル
チプル・サンプル・アプリケータを用いて12.5×
10-3mgの第因子含有製剤を平衡膜に適用する。
個々の成分（アルブミン、アルフアーグロブリ
ン、ベーターブロブリン、フイブリノーゲンおよ
びガンマーグロブリン）の分類用レフアレンス物
質として、ひと血漿を用いる。成分の遊走速度の
測定には、ひとアルブミンを標準として用いる。
作する。セルロースアセテート膜をPH8.6のベロ
ナール／ベロナール・ナトリウム緩衝液（ベツク
マンＢ−２緩衝液）に浸清し、平衡させる。マル
チプル・サンプル・アプリケータを用いて12.5×
10-3mgの第因子含有製剤を平衡膜に適用する。
個々の成分（アルブミン、アルフアーグロブリ
ン、ベーターブロブリン、フイブリノーゲンおよ
びガンマーグロブリン）の分類用レフアレンス物
質として、ひと血漿を用いる。成分の遊走速度の
測定には、ひとアルブミンを標準として用いる。
全試料、アルブミンおよび血漿を膜上に適用
後、マイクロゾーン・セパレーシヨン・チエンバ
ー中、パワーユニツト（ベツクマン4264）〔電圧
250V、電流３ないし４ｍＡ／膜、時間20分間〕
で電気泳動による分離を実施する。
後、マイクロゾーン・セパレーシヨン・チエンバ
ー中、パワーユニツト（ベツクマン4264）〔電圧
250V、電流３ないし４ｍＡ／膜、時間20分間〕
で電気泳動による分離を実施する。
その後、蛋白質リボンをポンソー（Ponceau）
Ｓで染色し、過剰の染色液を酢酸１部とメタノー
ル19部の混合物で除く。ホイルを純メタノールで
脱水し、酢酸１部とメタノール３部の混合物に浸
清して透明にする。次いで、ホイルをガラス板上
で乾燥し、デンシトメータ（ベツクマンデンシト
メータＲ−112）で測定する。総蛋白濃度中相対
フイブリノーゲン濃度がプリントアウトされる。
フイブリノーゲンの絶対量は相対フイブリノーゲ
ン濃度に第因子含有製剤の蛋白濃度を剰じて得
られる。
Ｓで染色し、過剰の染色液を酢酸１部とメタノー
ル19部の混合物で除く。ホイルを純メタノールで
脱水し、酢酸１部とメタノール３部の混合物に浸
清して透明にする。次いで、ホイルをガラス板上
で乾燥し、デンシトメータ（ベツクマンデンシト
メータＲ−112）で測定する。総蛋白濃度中相対
フイブリノーゲン濃度がプリントアウトされる。
フイブリノーゲンの絶対量は相対フイブリノーゲ
ン濃度に第因子含有製剤の蛋白濃度を剰じて得
られる。
以下、この発明の方法を実施例によりさらに詳
細に説明する。
細に説明する。
実施例 １
冷凍新鮮血漿6660mlを０℃ないし＋４℃で解凍
した。生成した低温沈殿を遠心分離し、デキスト
ランスルフエート（フアルマシア）0.1mg／mlお
よびアプロチニン30単位／mlを含むくえん酸３ナ
トリウム溶液700mlに溶解した。溶液のPHを6.3に
調節し、温度を４℃に調節した。生成する沈殿を
遠心分離し、捨てた。
した。生成した低温沈殿を遠心分離し、デキスト
ランスルフエート（フアルマシア）0.1mg／mlお
よびアプロチニン30単位／mlを含むくえん酸３ナ
トリウム溶液700mlに溶解した。溶液のPHを6.3に
調節し、温度を４℃に調節した。生成する沈殿を
遠心分離し、捨てた。
８％エタノールを添加することにより第因子
含有フラクシヨンを沈殿させ、免疫グロブリン
（IgG、IgA、IgM）の大部分を、10％グリシンの
ようなアミノ酸を添加するかまたはNaClもしく
はくえん酸ナトリウムによりイオン強度を増加す
ることにより、溶液中に保持した。分離した第
因子含有フラクシヨンを含む沈殿を、抗トロンビ
ン濃度0.05単位／mlの抗トロンビン・ヘパリン
錯体を含むグリシン・くえん酸・NaCl緩衝液に
溶解した。次いで、溶解した沈殿を最終製品の容
器に充填し凍結乾燥した。
含有フラクシヨンを沈殿させ、免疫グロブリン
（IgG、IgA、IgM）の大部分を、10％グリシンの
ようなアミノ酸を添加するかまたはNaClもしく
はくえん酸ナトリウムによりイオン強度を増加す
ることにより、溶液中に保持した。分離した第
因子含有フラクシヨンを含む沈殿を、抗トロンビ
ン濃度0.05単位／mlの抗トロンビン・ヘパリン
錯体を含むグリシン・くえん酸・NaCl緩衝液に
溶解した。次いで、溶解した沈殿を最終製品の容
器に充填し凍結乾燥した。
上記抗トロンビン・ヘパリン錯体の製造は次
のように行なつた。
のように行なつた。
血漿１リツトルにヘパリン80000単位を加え、＋
４℃で30分間撹拌した。DEAE−セフアデツクス
A50を１ｇまぜ込んだ後、＋４℃でさらに２時間
撹拌した。負荷ゲルをブフナー漏斗で過し、燐
酸およびくえん酸緩衝等張食塩水各100mlで２回
洗浄して髄伴している蛋白質を除いた。
４℃で30分間撹拌した。DEAE−セフアデツクス
A50を１ｇまぜ込んだ後、＋４℃でさらに２時間
撹拌した。負荷ゲルをブフナー漏斗で過し、燐
酸およびくえん酸緩衝等張食塩水各100mlで２回
洗浄して髄伴している蛋白質を除いた。
洗浄した負荷ゲルを上記緩衝液50mlにけんだく
し、固体NaClを加えて導電率を42ｍＳ／cmに調
節した。＋４℃で１時間撹拌後、ブフナー漏斗で
分離し、抗トロンビン・ヘパリン錯体を溶出液
として回収し、これを食塩水で透析した。
し、固体NaClを加えて導電率を42ｍＳ／cmに調
節した。＋４℃で１時間撹拌後、ブフナー漏斗で
分離し、抗トロンビン・ヘパリン錯体を溶出液
として回収し、これを食塩水で透析した。
上記実施例で得た製品について前述した文献の
方法による測定値は下記の通りである。
方法による測定値は下記の通りである。
第因子単位／蛋白質mg 1.5
IgG／第因子1000単位 17.0mg
フイブリノーゲン含量／第因子100単位 35mg
再構成時間 ４分
実施例 ２
デキストランスルフエートの代りにムコ多糖類
ポリ硫酸エステルを用いたほかは、実施例１と同
様に操作して製剤を得た。この製品の測定値は下
記の通りである。
ポリ硫酸エステルを用いたほかは、実施例１と同
様に操作して製剤を得た。この製品の測定値は下
記の通りである。
第因子／蛋白質mg 3.1
IgG／第因子1000単位 15.6mg
フイブリノーゲン含量／第因子100単位 30mg
再構成時間 １分
実施例 ３
デキストランスルフエートの代りにペントサン
ポリスルフエート（SP54）を用い、溶解用緩衝
液に抗トロンビン・ヘパリノイド錯体を0.05単
位／mlの濃度で含ませたほかは、実施例１と同様
に操作して製品を得た。この抗トロンビン・ヘ
パリノイド錯体は次のようにして製造した。
ポリスルフエート（SP54）を用い、溶解用緩衝
液に抗トロンビン・ヘパリノイド錯体を0.05単
位／mlの濃度で含ませたほかは、実施例１と同様
に操作して製品を得た。この抗トロンビン・ヘ
パリノイド錯体は次のようにして製造した。
血漿１リツトルにポリアニオンSP54を３ｇ加
え、＋４℃で30分間撹拌した。DEAE−セフアデ
ツクスA50を2.5ｇまぜ込んだ後、＋４℃でさらに
２時間撹拌した。負荷ゲルをブフナー漏斗で過
し、燐酸およびくえん酸緩衝等張食塩水200mlで
２回洗浄して随伴している蛋白質を除いた。洗浄
した負荷ゲルを上記緩衝液100mlにけんだくし、
固体食塩を加えて導電率を60ｍＳ／cmに調節し
た。＋４℃で１時間撹拌後、ブフナー漏斗で分離
し、抗トロンビン・ヘパリノイド錯体（SP54）
を溶出液として回収し、これを食塩水で透析し
た。
え、＋４℃で30分間撹拌した。DEAE−セフアデ
ツクスA50を2.5ｇまぜ込んだ後、＋４℃でさらに
２時間撹拌した。負荷ゲルをブフナー漏斗で過
し、燐酸およびくえん酸緩衝等張食塩水200mlで
２回洗浄して随伴している蛋白質を除いた。洗浄
した負荷ゲルを上記緩衝液100mlにけんだくし、
固体食塩を加えて導電率を60ｍＳ／cmに調節し
た。＋４℃で１時間撹拌後、ブフナー漏斗で分離
し、抗トロンビン・ヘパリノイド錯体（SP54）
を溶出液として回収し、これを食塩水で透析し
た。
上記実施例で得た製品について得た測定値は次
の通りである。
の通りである。
第因子／蛋白質mg 2.47
IgG／第因子1000単位 17.0mg
フイブリノーゲン含量／第因子100単位 33mg
再構成時間 １分
実施例 ４
冷凍新鮮血漿7000mlを０℃ないし＋４℃で解凍
した。生成した低温沈殿を分離し、ムコ多糖類ポ
リ硫酸エステルを含むくえん酸３ナトリウム溶液
550mlに溶解した。溶液のPHを6.65に調節し、温
度を１℃に調節した。生成する沈殿を分離し捨て
た。上清に８％エタノールと7.5％グリシンを添
加することにより第因子含有フラクシヨンを沈
殿させた。けんだく液を（急速）冷凍し、０ない
し＋４℃で再解凍した。
した。生成した低温沈殿を分離し、ムコ多糖類ポ
リ硫酸エステルを含むくえん酸３ナトリウム溶液
550mlに溶解した。溶液のPHを6.65に調節し、温
度を１℃に調節した。生成する沈殿を分離し捨て
た。上清に８％エタノールと7.5％グリシンを添
加することにより第因子含有フラクシヨンを沈
殿させた。けんだく液を（急速）冷凍し、０ない
し＋４℃で再解凍した。
第因子含有沈殿を分離した後、これを溶解
し、容器に充填し凍結乾燥した。この製品につい
ての測定値は次の通りである。
し、容器に充填し凍結乾燥した。この製品につい
ての測定値は次の通りである。
第因子単位／蛋白質mg 1.66
IgG／第因子1000単位 22.0mg
フイブリノーゲン含量／第因子100単位 40mg
再構成時間 ３分
実施例 ５
冷凍新鮮血漿5000mlを０℃ないし＋４℃で解凍
した。生成した低温沈殿を分離し、ペントサンポ
リスルフエートを含むくえん酸３ナトリウム溶液
350mlに溶解した。溶液のPHを6.20に調節し、温
度を８℃に調節した。生成する沈殿を分離し捨て
た。上清に15％グリシンを添加することにより第
因子含有フラクシヨンを沈殿させた。けんだく
液を（急速）冷凍し、０ないし＋４℃で再解凍し
た。
した。生成した低温沈殿を分離し、ペントサンポ
リスルフエートを含むくえん酸３ナトリウム溶液
350mlに溶解した。溶液のPHを6.20に調節し、温
度を８℃に調節した。生成する沈殿を分離し捨て
た。上清に15％グリシンを添加することにより第
因子含有フラクシヨンを沈殿させた。けんだく
液を（急速）冷凍し、０ないし＋４℃で再解凍し
た。
第因子含有沈殿を分離した後、これを溶解
し、容器に充填し凍結乾燥した。この製品につい
ての測定値は次の通りである。
し、容器に充填し凍結乾燥した。この製品につい
ての測定値は次の通りである。
第因子単位／蛋白質mg 3.80
IgG／第因子1000単位 20mg
フイブリノーゲン含量／第因子100単位 21mg
再構成時間 ２分
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 比活性が少なくとも第因子1.5単位／蛋白
質mgであり、免疫グロブリンＧ（IgG）が15〜30
mg／第因子1000単位およびフイブリノーゲンが
20〜40mg／第因子100単位を含む、第因子
（AHF）含有製品の製造法であつて、(a)第因子
含有血漿画分を緩衝液に溶解して溶液とし、(b)上
記溶液をPH６〜７で硫酸化多糖類の存在下で処理
し、望ましくない蛋白質を沈澱させ、ついで、こ
れを除去し、第因子含有上清を得、(c)上記第
因子含有上清をPH６〜７で塩の存在下蛋白沈澱剤
で処理して第因子含有沈澱物を形成させ、つい
で、これを回収すること、 を含むことを特徴とする方法。 ２ 上記沈澱物を溶解し第因子含有溶液を得
る、特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３ 上記溶解が、抗トロンビン・ヘパリン錯体
または抗トロンビン・ヘパリノイド鎖体の存在
下、沈澱物をグリシン・くえん酸・NaCl緩衝液
に溶解することにより行われる、特許請求の範囲
第２項記載の方法。 ４ 上記沈澱物または上記溶液を安定な形態に加
工する、特許請求の範囲第１〜３項のいずれか１
項記載の方法。 ５ 上記加工がアルブミンの添加により行われ
る、特許請求の範囲第４項記載の方法。 ６ 上記工程(a)の操作が、くえん酸・ヘパリノイ
ド緩衝液に、低温沈澱物を溶解することにより行
われる、特許請求の範囲第１〜５項のいずれか１
項記載の方法。 ７ 上記工程(b)の操作が、緩衝液としてPH6.0〜
6.4に溶液を調節してけんだく液を得、上記けん
だく液を０〜25℃に冷却して望ましくない蛋白質
を沈澱として沈澱させることにより行われる、請
求項１〜５のいずれか１項記載の方法。 ８ 上記けんだく液を４〜８℃に冷却する、請求
項７記載の方法。 ９ 上記工程(b)の硫酸化多糖類が、ムコ多糖類ポ
リ硫酸エステル、ペントサンポリスルフエートお
よびデキストランスルフエートからなる群から選
ばれるものである、請求項１〜８のいずれか１項
記載の方法。 １０ 上記工程(c)の操作が、PH6.0〜7.0で最高グ
リシン1.45モルおよび最低イオン強度0.15のうち
少なくとも１種の存在下で、第因子含有上清溶
液を蛋白沈澱剤で処理することにより行われる、
請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。 １１ 上記蛋白沈澱剤がエチルアルコールであ
る、請求項１０記載の方法。 １２ 蛋白沈澱剤および塩の添加後に、得られた
混合物を凍結し、０〜４℃の温度で再融解して第
因子含有沈澱物を形成させる、請求項１０記載
の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT1858/83 | 1983-05-20 | ||
| AT0185883A AT379510B (de) | 1983-05-20 | 1983-05-20 | Verfahren zur herstellung einer faktor viii (ahf) -haeltigen praeparation |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59222420A JPS59222420A (ja) | 1984-12-14 |
| JPH0553777B2 true JPH0553777B2 (ja) | 1993-08-10 |
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| EP (1) | EP0127603B1 (ja) |
| JP (1) | JPS59222420A (ja) |
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| CA (1) | CA1225331A (ja) |
| DE (1) | DE3475871D1 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| US4069216A (en) * | 1975-06-16 | 1978-01-17 | Edward Shanbrom, Inc. | Simplified methods for preparation of very high purity Factor VIII concentrate |
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| US4104266A (en) * | 1977-04-14 | 1978-08-01 | American National Red Cross | Method for preparation of antihemophilic factor |
| CA1074698A (en) * | 1977-12-19 | 1980-04-01 | Gail A. Rock | Method of collecting anti-hemophilic factor viii from blood and blood plasma |
| US4170639A (en) * | 1978-07-10 | 1979-10-09 | Warner-Lambert Company | Antihemophilic factor concentrate and its production |
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-
1984
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- 1984-05-10 EP EP84890083A patent/EP0127603B1/de not_active Expired
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