JPH0560813B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

〈産業上の利用分野〉 本発明は、シスプラチン（シス−ジアンミンジ
クロロプラチナム（））などの白金を含有する
薬剤投与によつて招来される副作用、特に腎機能
障害を軽減する薬剤に関するものである。 〈従来の技術〉 シスプラチンに代表される白金を含有する薬剤
は多科領域で有力な制癌剤として凡用されてお
り、特に睾丸腫瘍、膀胱癌、腎盂・尿管腫瘍、前
立腺癌、卵巣癌、頭頸部癌、肺癌等において優れ
た制癌効果を示すことが知られている。 しかし、シスプラチンは重篤な副作用、特に腎
機能障害を有することが開発当初より知られてお
り、この副作用は本剤投与上の投与量規制因子
（dose limiting factor）として、シスプラチン
の臨床的有用性を大きく損ねている。 シスプラチン投与により招来される腎機能障害
は、病理組織学的には、S₃セグメントを中心とす
る近位尿細管障害であり、急性尿細管壊死の形を
とる。臨床的には、腎機能障害に対応して血清の
尿素窒素（BUN）およびクレアチニンの上昇、
フラクシヨナル エクスクレシヨン オブ ソジ
ウム（Fractional Excretion of Sodium・
FENa）の上昇、尿中のγ−グルタミルトランス
ペプチダーゼ（γ−GTP），Ｎ−アセチル−β−
Ｄ−グルコサミニダーゼ（NAG）の上昇等がみ
られ、大きな問題となつている。 〈発明が解決しようとする課題〉 このような、シスプラチンにより招来される腎
機能障害を軽減する手段を開発することは臨床上
極めて有用なことである。 従来、シスプラチンの副作用を軽減する薬剤と
しては、ホスホマイシン（特開昭60−28928号公
報）、エラスターゼ（特開昭62−106021号公報）
等が知られている。さらにシスプラチンのヒアル
ロニダーゼ活性化作用が腎機能障害の発症に一部
関与するとの説があり、ヒアルロニダーゼ活性阻
害物質、たとえばアズレンスルホン酸ナトリウ
ム、が腎機能障害の軽減作用を有するとの報告も
ある。しかし、ホスホマイシンは微生物（ストレ
プトミセス フラギエ）が産生する物質であり、
またエラスターゼはブタ膵由来の蛋白質であり、
ヒアルロニダーゼ活性阻害物質も含めいずれもヒ
トにおいては異種性を有しており、より安全性の
高いシスプラチンの腎機能障害軽減剤の開発が望
まれる。 〈課題を解決するための手段〉 かかる現状に鑑み、本発明者らは、臨床上最も
重篤であり、かつ最も問題となつているシスプラ
チンの腎機能障害を防止する安全な手段を見いだ
すべく種々の検討をおこなつた。 その結果、ウリナスタチン（ヒト尿中トリプシ
ンインヒビター）がシスプラチンの副作用、特に
腎機能障害を軽減する作用を有することを見いだ
し、本発明を完成した。 ウリナスタチンは、前述のホスホマイシンおよ
びエラスターゼ等とは異なり、ヒト由来の物質で
あり、安全性が非常に高い。事実、ウリナスタチ
ンの臨床試験および市販後の副作用調査報告約
3200例における副作用発現例は、32例（副作用発
現頻度1.0％）と極めて少なく、かつ重篤なもの
も認めていない。また、シスプラチンとの併用に
おいてもウリナスタチンに起因する副作用の発現
を認めていない。 ウリナスタチンは、ヒト尿由来の分子量約
67000の酸性糖蛋白であり、トリプシン、α−キ
モトリプシン、ヒアルロニダーゼ、顆粒球エラス
ターゼ、プラスミンなどの多種の酵素に対する阻
害作用やライソゾーム膜安定化作用を有する。こ
れらの作用に基づき、臨床的には、急性循環不全
（出血性シヨツク、細菌性シヨツク、外傷性シヨ
ツクおよび熱傷性シヨツク）ならびに急性膵炎の
治療薬として用いられている（医学のあゆみ、
12970（1984）、医学のあゆみ、129730（1984））。 ウリナスタチンは、すでに急性循環不全あるい
は外科手術後などにおける全身の循環不全に基づ
く腎前性の急性腎不全を予防あるいは軽減するこ
とが知られているが、この作用機序は、ウリナス
タチンが血圧等全身の循環不全を改善することに
より２次的に急性腎不全の予防あるいは軽減効果
を発揮するものと説明されている。 一方、シスプラチンは腎尿細管細胞を直接的に
障害し、腎性の腎不全を招来すると考えられてお
り、この発症機序は前述の腎前性の腎機能障害と
は明らかに異なつている。また、ウリナスタチン
がシスプラチンによる腎機能障害を軽減する作用
機序は、全身の循環不全の改善作用によるものは
なく、ウリナスタチンが直接的に腎尿細管保護作
用を示すことに基づくものである。したがつて、
本発明はこれまでの報告からは全く予測されず、
本発明者らによつて初めて見いだされた知見に基
づくものである。 ウリナスタチンは例えばプロクシエ
（Proksch）の方法（J.Lab.Clin.Med.，79491
（1972））に準じ、次のように製造することができ
る。すなわち、健康成人尿650を濃縮し、脱イ
オン水に対して透析した後、1N水酸化ナトリウ
ム溶液でPH7.8に調整し、次いで、0.05Mトリス
−塩酸緩衝液（PH7.8）で平衝化したDEAEセル
ロースカラム（20×80cm）を通過させて、ウリナ
スタチンを吸着させた。このカラムを同緩衝液40
で洗浄した後、0.3M塩化ナトリウムを含む同
緩衝液を用いて、吸着しているウリナスタチンを
溶出させ、この溶出液を60℃，20分間の加熱処理
を行い、混入しているプロテアーゼを失活せしめ
て、粗製ウリナスタチン16gを得た。この粗製ウ
リナスタチンを0.02Mグリシン−塩酸緩衝液（PH
3.4）で平衝化したDEAEセルロースカラム（８
×60cm）に吸着させた。このカラムを同緩衝液10
、次に、0.2M塩化ナトリウムを含む同緩衝液
10で順次洗浄した後、0.4M塩化ナトリウムを
含む同緩衝液８でウリナスタチンを溶出した。
溶出液を限外濃縮で濃縮した後、セフアデツクス
Ｇ−100を充填したカラム（10×95cm）を用い、
生理食塩水を展開溶媒としてゲルクロマトグラフ
イを行い、精製ウリナスタチンを得た。このよう
にして得たウリナスタチンは分子量約67000、等
電点PH２〜３、糖５〜12％を含む酸性糖蛋白質で
あり、その比活性は約2500単位／mgである。な
お、ウリナスタチンの活性は、トリプシン2μgの
活性を50％阻害するウリナスタチンの量を１単位
として表した。 次に、シスプラチンによつて生ずる腎機能障害
に対するウリナスタチンの効果を試験例によつて
説明する。 （試験例１） 動物実験 試験方法 ddY系雄性マウス（体重約20〜30g）を実験動
物として使用した。 シスプラチンの単独投与群（ａ群）、シスプラ
チンとウリナスタチンの併用投与群（ｂ群）およ
び無処置群（ｃ群）の３群について、腎機能障害
の指標であるBUN値を測定し、比較検討した。 ａ群：マウスにシスプラチン16mg／Kgを１回皮
下に投与した。シスプラチンは生理食塩水に
溶解して濃度1.6mg／mlとし、体重10gあたり
0.1mlの割合で投与した。また、シスプラチ
ン投与日より、ウリナスタチンの代わりに生
理食塩水を静脈内に連続投与した。 ｂ群：マウスにシスプラチン16mg／Kgを１回皮
下に投与するとともに、ウリナスタチン
100000単位／Kgを１日１回シスプラチン投与
日よりそれぞれ２日間、３日間、５日間静脈
内に連続投与した。ウリナスタチンは生理食
塩水に溶解して濃度10000単位／mlとし、体
重10gあたり0.1mlの割合で投与した。 ｃ群：無処置とした。 試験結果 結果を第１表に示す。 ａ群では、シスプラチン投与によりBUN値の
上昇がみられ、シスプラチンの腎機能障害が明ら
かに認められた。 ｂ群では、シスプラチン投与により招来される
BUN値の上昇が明らかに抑制された。 上記の試験成績が示す通り、ウリナスタチンは
シスプラチンの腎機能障害を明らかに軽減した。

【表】 （試験例２） 臨床試験 試験方法 肺癌患者を試験の対象とし、ウリナスタチン投
与前後における尿中γ−GTP排泄量、NAG排泄
量およびFENaを測定し、比較検討した。 なお、肺癌患者は、シスプラチン単独投与群７
名とシスプラチンとウリナスタチン併用群８名
（ただし、γ−GTP排泄量測定においては７名）
の２群とし、各群について各々測定した。γ−
GTP活性は、Ｌ−γ−グルタミルパラニトロア
ニリド基質法を用いて測定した。 NAGはNAGテストシオノギを用いて日立自動
分析装置726型で測定した。FENaは、血漿及び
尿中のNa値とクレアチニン値より算出した。 シスプラチン単独投与群では、シスプラチン50
mg／m²（体表面積）を生理食塩水500mlに溶解し、
２時間かけて点滴静注した。シスプラチンの投与
回数は１回とした。 さらにシスプラチン投与前後に利尿を目的に補
液2500mlを点滴静注した。 シスプラチンとウリナスタチンの併用群では、
シスプラチンをシスプラチン単独投与群と同様に
投与し、さらにウリナスタチンをシスプラチン投
与当日（第１日目）と次の日（第２日目）の２日
間点滴静注した。ウリナスタチンは、第１日目に
は、シスプラチン投与前に10万単位、投与後に50
万単位を、第２日目には30万単位を上記補液に溶
解して点滴静注した。 試験結果 結果を第１図ないし第３図に示す。 尿中γ−GTP（第１図）および尿中NAG（第２
図）については、シスプラチン投与前値を100と
して投与後の変化を百分率で示した。FENa（第
３図）は実測値で示した。 尿中γ−GTP、尿中NAG，FENaはいずれも
シスプラチン投与後上昇し、シスプラチンによる
腎機能障害が明らかに認められた。 ウリナスタチンは、シスプラチン投与により招
来される尿中γ−GTP、尿中NAG，FENaの上
昇をいずれも明らかに抑制した。 γ−GTPは腎尿細管細胞膜に豊富に存在する
酵素であり、またNAGは腎尿細管におけるライ
ソゾーム酵素のひとつである。FENaは急性腎不
全の鑑別診断に広く用いられ、腎尿細管Na再吸
収能の指標である。かかる検査はシスプラチンの
腎機能障害、特にシスプラチンの腎毒性の発現部
位である腎尿細管障害のよい指標となるものであ
る。 従つて上記試験結果が示す通り、ウリナスタチ
ンは、シスプラチンの腎機能障害を明らかに軽減
した。 （試験例３） 急性毒性 １群10匹のddY系雄性マウス（体重20〜22g）
にウリナスタチン4g／Kgを静脈内または腹腔内
に投与し、１週間にわたつて症状と体重変化を観
察した。観察期間中の体重変化は対照群のそれと
同様であり、死亡例も認められなかつた。 シスプラチンは１日所定量を生理食塩水または
ブドウ糖−食塩液に混和し、１日１回、１日から
数日間静脈内に点滴した後、１〜３週間休薬す
る。そして、これを１クールとし、数回繰り返す
のが通常の投与方法である。 ウリナスタチンは、シスプラチン投与日より２
〜28日間毎日投与する。ウリナスタチンの１日投
与量は、５〜500万単位、好ましくは、20〜60万
単位とする。 ウリナスタチン投与にあたつては、シスプラチ
ン投与前および／または投与後、あるいはシスプ
ラチンと混合して、適当な補液に溶解して投与す
る。 また、症状あるいは用法に応じて適宜増減する
ことができる。 本発明の副作用軽減剤は、注射剤または点滴注
入剤として静脈内に投与するのが好ましい。 注射剤としては、用時溶解して用いる凍結乾燥
製剤とするのが好ましい。 これらの製剤を調製するに当たつては、慣用の
製剤用担体あるいは賦形剤等を使用して慣用の方
法によることができる。 （実施例１） 凍結乾燥注射剤 ウリナスタチン40gを2000mlの生理食塩水に溶
解し、メンブランフイルターを用いて無菌的に瀘
過した。瀘液を滅菌したガラス容器に１mlづつ充
填し、常法により凍結乾燥して、凍結乾燥製剤と
した。 〈発明の効果〉 本発明のウリナスタチンを有効成分とする白金
を含有する薬剤の副作用軽減剤は、シスプラチン
などの白金を含有する薬剤の副作用、特に腎機能
障害を顕著に軽減する。

【図面の簡単な説明】

第１図ないし第３図は、試験例２の結果を示す
グラフであり、第１図は尿中γ−GTP排泄量の
推移、第２図は尿中NAG排泄量の推移、第３図
はFENaの推移をそれぞれ示すグラフである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ウリナスタチンを有効成分とする白金を含有
   する薬剤の副作用軽減剤。