JPH0564736B2 - - Google Patents
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- JPH0564736B2 JPH0564736B2 JP60103649A JP10364985A JPH0564736B2 JP H0564736 B2 JPH0564736 B2 JP H0564736B2 JP 60103649 A JP60103649 A JP 60103649A JP 10364985 A JP10364985 A JP 10364985A JP H0564736 B2 JPH0564736 B2 JP H0564736B2
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Description
産業上の利用分野
本発明は液体試料中の選択物質の免疫定量法に
関する。該液体試料は例えば該選択物質の定量法
を妨害しやすい１種又は複数種の他の非選択物質
を含む生物学的液体である。 従来の技術 周知の通り或種の物質、例えば動物ホルモン及
びヒトホルモンは少くとも２種の構造的に異る鎖
又はフラグメント（断片）を含むがそれらは相互
に弱く結合し、該鎖のひとつ又は該フラグメント
のひとつは免疫学的に共通なもの（common）で
あり、他のひとつは各物質について免疫学的に異
なるもの（distinct）である。これらの物質の定
量は診断に関連して特に重要であるけれども後者
は著しく定量困難であつて被定量物質と他物質と
の間に或種の交差反応が屡々起りその結果前者物
質の定量を妨害して定量を誤謬にみちびく。後者
の構造的に異常な鎖又はフラグメントの使用によ
るのみの場合には被定量物質の高度に特異的な抗
血清の誘発を可能とするけれども或種の交差反応
の残存することが常であり、これは関連物質の定
量を誤らせるに至る。けれども該反応性は該分子
又は物質に対する抗血清の処理によつて減ぜられ
得るのであり、該分子又は物質は被定量物質に構
造的に最も近縁であつてこれに対して該抗血清が
対応して使用される。抗血清中に含有される抗体
は被定量物質に対して完全に特異的ではなく、該
抗体は前記の他物質の過剰量と結合して抗血清か
ら分別され得る。処理される物質が例えばヒトの
絨毛ゴナドトロピン（hCG）である場合には特に
該技法は効率的であつて比較的良い成績をもたら
し、しかも費用は高額でない。けれども使用され
る化合物が例えば胞刺激ホルモン（FSH）、黄
体形成ホルモン（LH）又は甲状腺刺激ホルモン
（TSH）である場合に上記方法は興味あるものと
ならず該諸物質に要する費用は高額となる。 発明が解決しようとする問題点 従つて、本発明の目的は従前の定量法の諸欠陥
の除去にあり、又選択物質の定量を妨害しやすい
１種又は複数種の非選択他物質を含む液体例えば
生物学的液体の中の選択物質の特異的な免疫定量
法を改良する方法の提供にあり、該方法によらな
いときには交差反応物質の純化が必要であつてそ
の費用は多くの場合に莫大である。本発明の方法
は該物質及び１種又は複数種の他の物質即ち少く
とも２種の構造上異る鎖又はフラグメントであつ
てこれらの鎖のひとつ又はこれらのフラグメント
のひとつが免疫学的に共通なものであつて他のひ
とつが免疫学的に異なるものである物質類であ
り、定量を妨害し易いものである限りいかなる種
類の物質類の定量にも使用され得る。 問題点を解決するための手段 上記の目的達成のために本発明に従いタンパク分
解剤、二硫化結合分裂剤、カオトロピツク剤
（chaotropic agents）及びそれらの少くとも２種
の混合物から成る群から選ばれる解離剤を液体試
料に添加し、かようにして被定量選択物質を少く
とも２個の鎖又はフラグメントに分裂させ、１種
又は複数種の非選択物質をも又少くともその２個
の鎖又はフラグメントに分裂させ、かようにして
得られた液を混合し、解離剤を不活化し、該混合
物に対し、選択物質の、及び１種又は複数種の非
選択物質の免疫学的に共通の鎖又はフラグメント
に対する抗血清を添加し、得られた溶液に対し、
被定量選択物質の免疫学的に異なる鎖又はフラグ
メントに対する抗血清を添加し、そして液体試料
中の選択物質量を測定する。 本発明の特性的態様に従うと選択物質及び１種
又は複数種の非選択物質はホルモン類例えば甲状
腺刺激ホルモン（TSH）、胞刺激ホルモン
（FSH）、黄体形成ホルモン（LH）及びヒトの絨
毛ゴナドトロピン（hCG）であり、この場合、免
疫学的に共通の鎖及び異なる鎖はそれぞれα鎖及
びβ鎖からなる。 タンパク分解剤の例はタンパク分解酵素例えば
ペプシン、パパイン及びトリプシンであつて特に
ペプシンはこの目的に適する。二硫化結合分裂剤
の例は還元活性保持物質例えばメルカプトエタノ
ール及びジチオトレイトールである。カオトロピ
ツク剤の例は尿素、グアニジン塩酸塩及びチオシ
アン酸アンモニウムである。 本発明の他の特性的態様に従うと液体試料中の
選択物質量は粒子群の凝集化方法によつて測定さ
れ、選択物質量は微細粒子群の凝集レベル又は非
凝集レベルの関数として測定され得るものであ
り、該微細粒子群はアクリルアミド又はポリスチ
レンから製造されるか又は赤血球群から成ること
が好ましい。アクリルアミド、ポリスチレン又は
その他のポリマーの粒子群は一般に“ラテツクス
（latex）”と称される。 本発明のその他の詳細及び特別な態様は下文の
記載から明かとなる筈であるがこれらは本発明の
或る特別な具体化態様の非限定的な例を挙げるた
めのものである。 作用及び効果 既述の通り本発明は被定量物質の定量を妨害し
やすい１種又は複数種の他の非選択物質を含む生
物学的液体の中の選択物質例えば動物又はヒトに
由来するホルモンの免疫定量法を提供する。該他
物質も動物又はヒトに由来するホルモンであり得
るし、診断の目的の場合に、交差反応を起さなく
ても選択物質の定量を誤謬にみちびく。交差反応
を起さない場合には定量困難である診断目的に特
に重要なホルモンは既述の通り甲状腺刺激ホルモ
ン（TSH）、胞刺激ホルモン（FSH）、黄体形
成ホルモン（LH）及びヒトの絨毛ゴナドトロピ
ン（hCG）である。該物質の夫々は２部分から成
り、相互にゆるく結合していてα鎖及びβ鎖とし
て知られており、各物質について該物質のα鎖は
免疫学的に共通なものであり、β鎖は免疫学的に
異なるものである。 本発明に従うと解離剤例えばタンパク分解剤例
えばペプシン、パパイン又はトリプシンを被定量
物質含有の生物学的液体に添加する。該被定量物
質及び１種又は複数種の定量妨害性物質は該酵素
によつて消化される結果少くとも２個の構造上異
る鎖に分裂する。上記のホルモンの場合には例え
ば欧州特許第51985号明細書記載のペプシン使用
の消化方法が用いられ得るが該方法は各ホルモン
をα鎖とβ鎖とに分裂させる。タンパク分解酵素
による消化の際には選択物質並びに１種又は複数
種の非選択物質は少くとも該２つの鎖に分裂され
ねばならないが消化が更に進行して該両者の構造
上異る鎖をフラグメントに分裂させるかも知れな
い。該両者の鎖の分裂又はフラグメント形成が終
つたら直ちに得られた液体を例えば約５〜15分間
だけ混合し、タンパク分解酵素を例えば中和剤に
よつて不活化し、混合物のPHを約７〜９にまで上
げる。次にこの混合物に対し選択物質の、及び１
種又は複数種の非選択物質の免疫学的通常の鎖に
対する抗血清を添加し、次いで得られた溶液に対
し被定量選択物質の免疫学的異常の鎖に対する抗
血清を添加する。例えばα鎖は例えば既述された
４種のホルモンのいかなるものに対する抗血清に
よつてでも結合し得る。該４種ホルモンはすべて
同じα鎖を有するものである。本発明の一例とし
てヒトの血清試料をペプシンで処理するとペプシ
ンはhCG分子をα鎖とβ鎖とに、又はより小さい
フラグメントに分裂させることが公知である（例
示文献：L.D.and Winand R.J.，Biol.Chem.16，
6503−6508，1975）。得られた溶液を次に約５〜
15分間混合し、ペプシンを不活化し、抗−TSH
抗血清を添加するとその抗体は血清試料中の含有
ホルモン即ちLH，FSH，hCG及びTSHのα鎖
又はフラグメントと反応する。もしhCGのβ鎖に
対する抗血清を添加すれば遊離の抗原は該ホルモ
ンのβ鎖のみである。従つて該ホルモン定量法の
特性は高度に増加する。抗血清添加の後に、得ら
れた溶液を攪拌下に約37℃の温度で約15〜60分間
攪拌しながら恒温保持することが一般である。比
較的少量の純物質から大量の抗血清が誘導される
ので、本発明の方法は或物質の免疫定量法の特性
を実質上増加させる方法であつてしかも本方法は
使用簡単であると共に経済的である。明かに、既
述の通り、解離剤としてタンパク分解剤以外の他
のもの、例えば二硫化結合分裂剤又はカオトロピ
ツク剤（これは水素結合及び疎水性結合を分解す
る）を使用し得る。この点についての非限定的諸
例として挙げ得るものは二硫化結合分裂剤として
還元活性保有物質例えばメルカプトエタノール及
びジチオトレイトール、カオトロピツク剤として
尿素、グアニジン塩酸塩及びチオシアン酸アンモ
ニウムである。 本発明に従うと生物学的液体中の選択物質量
は、抗血清添加後に、粒子群の凝集化技法により
測定され、選択物質量は微細粒子群の凝集レベル
又は非凝集レベルの関数として測定されることが
好ましく、微細粒子群は既述の通りアクリルアミ
ド又はポリスチレン粒子群或は赤血球群である。
下文においてhCGの定量法を非限定的な例示とし
て記載するがこの場合に使用されるラテツクス粒
子計算免疫定量法（PACIA）は公知であるけれ
どもこの技法は多数の他の免疫定量法の諸形式例
えば放射線免疫定量法、酵素学的免疫定量法、螢
光免疫定量法及び類似法にも又適用され得る。 諸hGC測定法はかなり早期における妊娠測定の
ために著しく重要である。hCG含量測定も又子宮
外妊娠の迅速診断において管裂開又は強度出血の
防止のために重要である。最後に、腫瘍の目印と
して、hCG測定は絨毛膜癌の化学療法に対する特
定応答を測定し得る唯一の試験法であることが
屡々である。従つて甚だ敏感で精密な定量法であ
る必要があることは明かである。不幸にも多くの
婦人の場合に特に更年期においてLHレベルが高
いことがあり得るのでhCG含量について誤つた測
定結果を与える。 実施例 hCG〔入手先ダコパツツ（Dakopatts）〕に対す
る抗血清をペプシンで消化させることによりＦ
（ab′）2フラグメントを生成させ、該フラグメント
を米国特許第4397960号明細書記載の方法に従つ
てラテツクス〔latexF（ab′）2〕に結合させた。該
ラテツクスはhCGに対する抗体のＦ（ab′）2フラグ
メントの担体として作用する。他方において、自
動分析器の中で、30μの被定量試料を300μの
ペプシン反応混合物（10mgr／mlの0.3N Hcl）
で希釈し、この混合物を連続攪拌下に室温で５分
間恒温保持させた。次に60μの1Mトリス
（Tris）の添加によつてこの混合物のPHを7.5〜８
に上昇させた。この混合物に対し10μのウサギ
の抗−TSH抗血清（１ｇ Ｇフラクシヨン：
10mgr／ml）及び前記のようにして調製されたＦ
（ab′）2フラグメント被覆されたラテツクスの0.05
％サスペンシヨンを添加した。試料中に含有され
ていたホルモンのα鎖に対する抗体の給源として
の該ウサギ抗血清は完全なフロイントのアジユバ
ント（免疫助成剤）中の20μgrのTSHの隔月の皮
内注射によつて得られたものである。次に全混合
物を連続攪拌下に37℃で30分間恒温保持させた。
0.1％のトウイン（Tween）含有のグリシンで緩
衝された1.0mlの食塩溶液の自動的添加によつて
反応を停止させ、更に20倍希釈の後に非凝集ラテ
ツクス粒子群の数を計測した。非凝集ラテツクス
粒子群数の計測は凝集したラテツクス量を実際に
与え、これは被定量試料中のhCG量の測定を可能
とする。凝集ラテツクス量を又直接測り得ること
は明かである。４種の異るhCG濃度（５，20，50
及び200mlU／ml）を定量し、夫々を10倍し、下
記のイントラ−アツセイプレシジヨン（intra−
assay precision）を得た。
関する。該液体試料は例えば該選択物質の定量法
を妨害しやすい１種又は複数種の他の非選択物質
を含む生物学的液体である。 従来の技術 周知の通り或種の物質、例えば動物ホルモン及
びヒトホルモンは少くとも２種の構造的に異る鎖
又はフラグメント（断片）を含むがそれらは相互
に弱く結合し、該鎖のひとつ又は該フラグメント
のひとつは免疫学的に共通なもの（common）で
あり、他のひとつは各物質について免疫学的に異
なるもの（distinct）である。これらの物質の定
量は診断に関連して特に重要であるけれども後者
は著しく定量困難であつて被定量物質と他物質と
の間に或種の交差反応が屡々起りその結果前者物
質の定量を妨害して定量を誤謬にみちびく。後者
の構造的に異常な鎖又はフラグメントの使用によ
るのみの場合には被定量物質の高度に特異的な抗
血清の誘発を可能とするけれども或種の交差反応
の残存することが常であり、これは関連物質の定
量を誤らせるに至る。けれども該反応性は該分子
又は物質に対する抗血清の処理によつて減ぜられ
得るのであり、該分子又は物質は被定量物質に構
造的に最も近縁であつてこれに対して該抗血清が
対応して使用される。抗血清中に含有される抗体
は被定量物質に対して完全に特異的ではなく、該
抗体は前記の他物質の過剰量と結合して抗血清か
ら分別され得る。処理される物質が例えばヒトの
絨毛ゴナドトロピン（hCG）である場合には特に
該技法は効率的であつて比較的良い成績をもたら
し、しかも費用は高額でない。けれども使用され
る化合物が例えば胞刺激ホルモン（FSH）、黄
体形成ホルモン（LH）又は甲状腺刺激ホルモン
（TSH）である場合に上記方法は興味あるものと
ならず該諸物質に要する費用は高額となる。 発明が解決しようとする問題点 従つて、本発明の目的は従前の定量法の諸欠陥
の除去にあり、又選択物質の定量を妨害しやすい
１種又は複数種の非選択他物質を含む液体例えば
生物学的液体の中の選択物質の特異的な免疫定量
法を改良する方法の提供にあり、該方法によらな
いときには交差反応物質の純化が必要であつてそ
の費用は多くの場合に莫大である。本発明の方法
は該物質及び１種又は複数種の他の物質即ち少く
とも２種の構造上異る鎖又はフラグメントであつ
てこれらの鎖のひとつ又はこれらのフラグメント
のひとつが免疫学的に共通なものであつて他のひ
とつが免疫学的に異なるものである物質類であ
り、定量を妨害し易いものである限りいかなる種
類の物質類の定量にも使用され得る。 問題点を解決するための手段 上記の目的達成のために本発明に従いタンパク分
解剤、二硫化結合分裂剤、カオトロピツク剤
（chaotropic agents）及びそれらの少くとも２種
の混合物から成る群から選ばれる解離剤を液体試
料に添加し、かようにして被定量選択物質を少く
とも２個の鎖又はフラグメントに分裂させ、１種
又は複数種の非選択物質をも又少くともその２個
の鎖又はフラグメントに分裂させ、かようにして
得られた液を混合し、解離剤を不活化し、該混合
物に対し、選択物質の、及び１種又は複数種の非
選択物質の免疫学的に共通の鎖又はフラグメント
に対する抗血清を添加し、得られた溶液に対し、
被定量選択物質の免疫学的に異なる鎖又はフラグ
メントに対する抗血清を添加し、そして液体試料
中の選択物質量を測定する。 本発明の特性的態様に従うと選択物質及び１種
又は複数種の非選択物質はホルモン類例えば甲状
腺刺激ホルモン（TSH）、胞刺激ホルモン
（FSH）、黄体形成ホルモン（LH）及びヒトの絨
毛ゴナドトロピン（hCG）であり、この場合、免
疫学的に共通の鎖及び異なる鎖はそれぞれα鎖及
びβ鎖からなる。 タンパク分解剤の例はタンパク分解酵素例えば
ペプシン、パパイン及びトリプシンであつて特に
ペプシンはこの目的に適する。二硫化結合分裂剤
の例は還元活性保持物質例えばメルカプトエタノ
ール及びジチオトレイトールである。カオトロピ
ツク剤の例は尿素、グアニジン塩酸塩及びチオシ
アン酸アンモニウムである。 本発明の他の特性的態様に従うと液体試料中の
選択物質量は粒子群の凝集化方法によつて測定さ
れ、選択物質量は微細粒子群の凝集レベル又は非
凝集レベルの関数として測定され得るものであ
り、該微細粒子群はアクリルアミド又はポリスチ
レンから製造されるか又は赤血球群から成ること
が好ましい。アクリルアミド、ポリスチレン又は
その他のポリマーの粒子群は一般に“ラテツクス
（latex）”と称される。 本発明のその他の詳細及び特別な態様は下文の
記載から明かとなる筈であるがこれらは本発明の
或る特別な具体化態様の非限定的な例を挙げるた
めのものである。 作用及び効果 既述の通り本発明は被定量物質の定量を妨害し
やすい１種又は複数種の他の非選択物質を含む生
物学的液体の中の選択物質例えば動物又はヒトに
由来するホルモンの免疫定量法を提供する。該他
物質も動物又はヒトに由来するホルモンであり得
るし、診断の目的の場合に、交差反応を起さなく
ても選択物質の定量を誤謬にみちびく。交差反応
を起さない場合には定量困難である診断目的に特
に重要なホルモンは既述の通り甲状腺刺激ホルモ
ン（TSH）、胞刺激ホルモン（FSH）、黄体形
成ホルモン（LH）及びヒトの絨毛ゴナドトロピ
ン（hCG）である。該物質の夫々は２部分から成
り、相互にゆるく結合していてα鎖及びβ鎖とし
て知られており、各物質について該物質のα鎖は
免疫学的に共通なものであり、β鎖は免疫学的に
異なるものである。 本発明に従うと解離剤例えばタンパク分解剤例
えばペプシン、パパイン又はトリプシンを被定量
物質含有の生物学的液体に添加する。該被定量物
質及び１種又は複数種の定量妨害性物質は該酵素
によつて消化される結果少くとも２個の構造上異
る鎖に分裂する。上記のホルモンの場合には例え
ば欧州特許第51985号明細書記載のペプシン使用
の消化方法が用いられ得るが該方法は各ホルモン
をα鎖とβ鎖とに分裂させる。タンパク分解酵素
による消化の際には選択物質並びに１種又は複数
種の非選択物質は少くとも該２つの鎖に分裂され
ねばならないが消化が更に進行して該両者の構造
上異る鎖をフラグメントに分裂させるかも知れな
い。該両者の鎖の分裂又はフラグメント形成が終
つたら直ちに得られた液体を例えば約５〜15分間
だけ混合し、タンパク分解酵素を例えば中和剤に
よつて不活化し、混合物のPHを約７〜９にまで上
げる。次にこの混合物に対し選択物質の、及び１
種又は複数種の非選択物質の免疫学的通常の鎖に
対する抗血清を添加し、次いで得られた溶液に対
し被定量選択物質の免疫学的異常の鎖に対する抗
血清を添加する。例えばα鎖は例えば既述された
４種のホルモンのいかなるものに対する抗血清に
よつてでも結合し得る。該４種ホルモンはすべて
同じα鎖を有するものである。本発明の一例とし
てヒトの血清試料をペプシンで処理するとペプシ
ンはhCG分子をα鎖とβ鎖とに、又はより小さい
フラグメントに分裂させることが公知である（例
示文献：L.D.and Winand R.J.，Biol.Chem.16，
6503−6508，1975）。得られた溶液を次に約５〜
15分間混合し、ペプシンを不活化し、抗−TSH
抗血清を添加するとその抗体は血清試料中の含有
ホルモン即ちLH，FSH，hCG及びTSHのα鎖
又はフラグメントと反応する。もしhCGのβ鎖に
対する抗血清を添加すれば遊離の抗原は該ホルモ
ンのβ鎖のみである。従つて該ホルモン定量法の
特性は高度に増加する。抗血清添加の後に、得ら
れた溶液を攪拌下に約37℃の温度で約15〜60分間
攪拌しながら恒温保持することが一般である。比
較的少量の純物質から大量の抗血清が誘導される
ので、本発明の方法は或物質の免疫定量法の特性
を実質上増加させる方法であつてしかも本方法は
使用簡単であると共に経済的である。明かに、既
述の通り、解離剤としてタンパク分解剤以外の他
のもの、例えば二硫化結合分裂剤又はカオトロピ
ツク剤（これは水素結合及び疎水性結合を分解す
る）を使用し得る。この点についての非限定的諸
例として挙げ得るものは二硫化結合分裂剤として
還元活性保有物質例えばメルカプトエタノール及
びジチオトレイトール、カオトロピツク剤として
尿素、グアニジン塩酸塩及びチオシアン酸アンモ
ニウムである。 本発明に従うと生物学的液体中の選択物質量
は、抗血清添加後に、粒子群の凝集化技法により
測定され、選択物質量は微細粒子群の凝集レベル
又は非凝集レベルの関数として測定されることが
好ましく、微細粒子群は既述の通りアクリルアミ
ド又はポリスチレン粒子群或は赤血球群である。
下文においてhCGの定量法を非限定的な例示とし
て記載するがこの場合に使用されるラテツクス粒
子計算免疫定量法（PACIA）は公知であるけれ
どもこの技法は多数の他の免疫定量法の諸形式例
えば放射線免疫定量法、酵素学的免疫定量法、螢
光免疫定量法及び類似法にも又適用され得る。 諸hGC測定法はかなり早期における妊娠測定の
ために著しく重要である。hCG含量測定も又子宮
外妊娠の迅速診断において管裂開又は強度出血の
防止のために重要である。最後に、腫瘍の目印と
して、hCG測定は絨毛膜癌の化学療法に対する特
定応答を測定し得る唯一の試験法であることが
屡々である。従つて甚だ敏感で精密な定量法であ
る必要があることは明かである。不幸にも多くの
婦人の場合に特に更年期においてLHレベルが高
いことがあり得るのでhCG含量について誤つた測
定結果を与える。 実施例 hCG〔入手先ダコパツツ（Dakopatts）〕に対す
る抗血清をペプシンで消化させることによりＦ
（ab′）2フラグメントを生成させ、該フラグメント
を米国特許第4397960号明細書記載の方法に従つ
てラテツクス〔latexF（ab′）2〕に結合させた。該
ラテツクスはhCGに対する抗体のＦ（ab′）2フラグ
メントの担体として作用する。他方において、自
動分析器の中で、30μの被定量試料を300μの
ペプシン反応混合物（10mgr／mlの0.3N Hcl）
で希釈し、この混合物を連続攪拌下に室温で５分
間恒温保持させた。次に60μの1Mトリス
（Tris）の添加によつてこの混合物のPHを7.5〜８
に上昇させた。この混合物に対し10μのウサギ
の抗−TSH抗血清（１ｇ Ｇフラクシヨン：
10mgr／ml）及び前記のようにして調製されたＦ
（ab′）2フラグメント被覆されたラテツクスの0.05
％サスペンシヨンを添加した。試料中に含有され
ていたホルモンのα鎖に対する抗体の給源として
の該ウサギ抗血清は完全なフロイントのアジユバ
ント（免疫助成剤）中の20μgrのTSHの隔月の皮
内注射によつて得られたものである。次に全混合
物を連続攪拌下に37℃で30分間恒温保持させた。
0.1％のトウイン（Tween）含有のグリシンで緩
衝された1.0mlの食塩溶液の自動的添加によつて
反応を停止させ、更に20倍希釈の後に非凝集ラテ
ツクス粒子群の数を計測した。非凝集ラテツクス
粒子群数の計測は凝集したラテツクス量を実際に
与え、これは被定量試料中のhCG量の測定を可能
とする。凝集ラテツクス量を又直接測り得ること
は明かである。４種の異るhCG濃度（５，20，50
及び200mlU／ml）を定量し、夫々を10倍し、下
記のイントラ−アツセイプレシジヨン（intra−
assay precision）を得た。
【表】
４種の異るhCG濃度（10，20，50及び
200mlU／ml）についても毎日15日間（each day
for／5day）定量を行うことにより下記のイント
ラ−アツセイプレシジヨンを得た：
200mlU／ml）についても毎日15日間（each day
for／5day）定量を行うことにより下記のイント
ラ−アツセイプレシジヨンを得た：
【表】
回収率
雄血清（即ちhCG不含）に対して10，50及び
200mlU／mlのhCGを添加した場合の回収率は
夫々87.9％、103.4％及び103.4％であつた。これ
らは血清中に含まれた他のホルモン類はhCGを妨
害しなかつたことを証する満足すべき成績であ
る。 臨床的試料に対する放射線免疫定量法にもとづ
く相関は8mlU／ml乃至1850mlU／mlにわたつて
変化する濃度を有する15種の試料についてＹ＝−
11.2＋1.06×の回帰線において相関係数0.96を示
したがこれは全く満足すべき成績である。 抗−TSH抗血清を用いる処理の効率を試験す
るために更年期の婦人の10種血清を用い放射線免
疫定量法（RIA）によつてこれを測定したところ
hCGの定量のためには著しく高値のLH含量が示
された。
200mlU／mlのhCGを添加した場合の回収率は
夫々87.9％、103.4％及び103.4％であつた。これ
らは血清中に含まれた他のホルモン類はhCGを妨
害しなかつたことを証する満足すべき成績であ
る。 臨床的試料に対する放射線免疫定量法にもとづ
く相関は8mlU／ml乃至1850mlU／mlにわたつて
変化する濃度を有する15種の試料についてＹ＝−
11.2＋1.06×の回帰線において相関係数0.96を示
したがこれは全く満足すべき成績である。 抗−TSH抗血清を用いる処理の効率を試験す
るために更年期の婦人の10種血清を用い放射線免
疫定量法（RIA）によつてこれを測定したところ
hCGの定量のためには著しく高値のLH含量が示
された。
【表】
上述の免疫定量法においてhCG濃度25mlU／
mlは真実の陽性の成績とみなされ、従つてこの場
合に婦人は妊娠中であると考えられるべきであ
る。抗−TSH抗血清不使用下に得られた結果か
らは10種試料中の少くともひとつ（最初のひと
つ）は陽性と考えられるべきであるがこれら試料
中の他の２種（22及び24mlU／ml）は恐らく取
消され再定量されるべきであり、該成績は疑わし
い。事実、同一血清について本発明方法に従い抗
−TSHの導入下にhCG含量を測定したところ陽
性である試料は無く、すべてのhCG値は実質上25
以下である。 本発明は上記の態様の範囲内に限定されないこ
と、本発明の範囲から逸脱しない限り多くの変改
が可能であることを当業者は理解すべきである。
mlは真実の陽性の成績とみなされ、従つてこの場
合に婦人は妊娠中であると考えられるべきであ
る。抗−TSH抗血清不使用下に得られた結果か
らは10種試料中の少くともひとつ（最初のひと
つ）は陽性と考えられるべきであるがこれら試料
中の他の２種（22及び24mlU／ml）は恐らく取
消され再定量されるべきであり、該成績は疑わし
い。事実、同一血清について本発明方法に従い抗
−TSHの導入下にhCG含量を測定したところ陽
性である試料は無く、すべてのhCG値は実質上25
以下である。 本発明は上記の態様の範囲内に限定されないこ
と、本発明の範囲から逸脱しない限り多くの変改
が可能であることを当業者は理解すべきである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 液体試料が選択物質と、該選択物質の測定を
妨害しやすい１種又は複数種の他の非選択物質と
を含み、該諸物質のそれぞれは少なくとも２種の
構造上異なる鎖又はフラグメントを含み、該鎖の
ひとつ又は該フラグメントのひとつは免疫学的に
共通なものであるが他のものは免疫学的に異なる
ものである上記の液体試料の中の選択物質の免疫
定量方法において、 タンパク分解剤、二硫化結合分裂剤、カオトロ
ピツク剤及び該剤の少なくとも２種の混合物から
成る群から選ばれる解離剤を該液体試料へ添加し
て定量されるべき選択物質を少なくとも２個の鎖
又はフラグメントに分裂させ、この場合に１種又
は複数種の非選択物質をも又少なくとも２個の鎖
又はフラグメントにそれぞれ分裂させ、解離剤を
不活化し、該混合物に対し選択物質の、及び１種
又は複数種の非選択物質の免疫学的に共通なもの
である鎖又はフラグメントに対する抗血清を添加
し、得られた溶液に対し被定量選択物質の免疫学
的に異なる鎖またはフラグメントに対する抗血清
を添加し、そして該液体試料中の選択物質量を測
定することを特徴とする前記の方法。 ２ 選択物質と１種又は複数種の非選択物質とが
ホルモンである特許請求の範囲第１項記載の方
法。 ３ 物質が甲状腺刺激ホルモン（TSH）、濾胞刺
激ホルモン（FSH）、黄体形成ホルモン（LH）
及びヒト絨毛ゴナドトロピン（hCG）からなる群
から選ばれるホルモンである特許請求の範囲第２
項記載の方法。 ４ 被定量選択物質がヒト絨毛ゴナドトロピンで
ある特許請求の範囲第３項記載の方法。 ５ ホルモンの免疫学的に共通な鎖及び異なる鎖
がそれぞれのα鎖及びβ鎖からなる特許請求の範
囲第１項から第４項のいずれかに記載の方法。 ６ 液体試料が生物学的液体である特許請求の範
囲第１項から第５項のいずれかに記載の方法。 ７ 解離剤の添加後に得られた液が約５〜15分間
混合される特許請求の範囲第１項から第６項のい
ずれかに記載の方法。 ８ 混合物のPH値を約７〜９にまで上げることに
よつて解離剤が不活化される特許請求の範囲第１
項から第７項のいずれかに記載の方法。 ９ 抗血清の添加後に得られた溶液が攪拌下に温
度約37℃で約15〜60分間恒温保持される特許請求
の範囲第１項から第８項のいずれかに記載の方
法。 １０ 解離剤がタンパク分解酵素である特許請求
の範囲第１項から第９項のいずれかに記載の方
法。 １１ タンパク分解剤がペプシン、パパイン及び
トリプシンからなる群から選ばれる特許請求の範
囲第１０項記載の方法。 １２ 解離剤が二硫化結合分裂剤である特許請求
の範囲第１項から第９項のいずれかに記載の方
法。 １３ 解離剤がカオトロピツク剤である特許請求
の範囲第１項から第９項のいずれかに記載の方
法。 １４ 液体試料中の選択物質量が微細粒子群の凝
集レベル又は非凝集レベルの関数として粒子群凝
集化法によつて測定される特許請求の範囲第１項
から第１３項のいずれかに記載の方法。 １５ 微細粒子群としてラテツクス粒子群又は赤
血球群が使用される特許請求の範囲第１４項記載
の方法。 １６ 選択物質がヒト絨毛ゴナドトロピン
（hCG）であり、免疫学的に共通な鎖又はフラグ
メントに対する抗血清が抗−TSHウサギ抗血清
であり、そして免疫学的に異なる鎖又はフラグメ
ントに対する抗血清がＦ（ab′）2フラグメントで被
覆されたラテツクスサスペンジヨンである特許請
求の範囲第１４項及び第１５項のいずれかに記載
の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BE0/212939A BE899664A (fr) | 1984-05-15 | 1984-05-15 | Procede de dosage immunologique d'une substance dans un echantillon liquide. |
| BE0/212939 | 1984-05-15 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6150066A JPS6150066A (ja) | 1986-03-12 |
| JPH0564736B2 true JPH0564736B2 (ja) | 1993-09-16 |
Family
ID=3843760
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60103649A Granted JPS6150066A (ja) | 1984-05-15 | 1985-05-15 | 液体試料中の物質の免疫定量法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4725556A (ja) |
| EP (1) | EP0164780B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6150066A (ja) |
| AT (1) | ATE41529T1 (ja) |
| BE (1) | BE899664A (ja) |
| DE (1) | DE3568876D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004108914A (ja) * | 2002-09-18 | 2004-04-08 | Kudo Norio | コラーゲンの測定方法 |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8924112D0 (en) * | 1989-10-26 | 1989-12-13 | Univ Southampton | Assay pretreatment |
| US5420013A (en) * | 1991-05-10 | 1995-05-30 | Sangstat Medical Corporation | HLA typing |
| US5256543A (en) * | 1991-05-10 | 1993-10-26 | Sangstat Medical Corporation | HLA typing |
| US5399484A (en) * | 1991-10-08 | 1995-03-21 | Eastman Kodak Company | Use of blocking protein with high pH extraction in method to determine a microorganism associated with periodontal disease and kit useful therefor |
| WO1994003806A1 (en) * | 1992-08-10 | 1994-02-17 | Boris Cercek | Immunochemical assays for cancer-associated scm recognition factor |
| US6824985B1 (en) * | 1997-09-09 | 2004-11-30 | Bayer Corporation | Formulation for reducing urea effect for immunochromatography assays using urine samples |
| CN119899825A (zh) * | 2023-10-26 | 2025-04-29 | 利多(香港)有限公司 | 解离剂和试剂盒 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2013211B (en) * | 1978-01-26 | 1982-06-30 | Technicon Instr | Immunoassays using f(ab')2 fragments |
| US4256629A (en) * | 1978-02-06 | 1981-03-17 | Research Corporation | Antigen for early pregnancy test and contraceptive vaccine |
| US4234561A (en) * | 1978-02-06 | 1980-11-18 | Research Corporation | Antigen for early pregnancy test and contraceptive vaccine |
| AU543007B2 (en) * | 1980-04-15 | 1985-03-28 | Technicon Instruments Corportion | Agglutination immunoassay |
| EP0051985B2 (en) * | 1980-11-07 | 1989-12-27 | International Institute Of Cellular And Molecular Pathology (Icp) | Immunoassay of proteins |
| FR2502787A1 (fr) * | 1981-03-27 | 1982-10-01 | Human Pharm Sa Laboratoires | Nouveau procede de detection de l'hcg et son application notamment dans un nouveau test de grossesse |
| US4459359A (en) * | 1981-11-19 | 1984-07-10 | New York Blood Center, Inc. | Sensitive immunoassays of antigens or antibodies sequestered within immune complexes |
| US4657851A (en) * | 1984-01-03 | 1987-04-14 | Georgetown University | Breast cancer diagnostic blood test |
-
1984
- 1984-05-15 BE BE0/212939A patent/BE899664A/fr not_active IP Right Cessation
-
1985
- 1985-05-10 DE DE8585200745T patent/DE3568876D1/de not_active Expired
- 1985-05-10 EP EP85200745A patent/EP0164780B1/fr not_active Expired
- 1985-05-10 AT AT85200745T patent/ATE41529T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-05-15 US US06/734,166 patent/US4725556A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-05-15 JP JP60103649A patent/JPS6150066A/ja active Granted
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004108914A (ja) * | 2002-09-18 | 2004-04-08 | Kudo Norio | コラーゲンの測定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3568876D1 (en) | 1989-04-20 |
| EP0164780A1 (fr) | 1985-12-18 |
| ATE41529T1 (de) | 1989-04-15 |
| JPS6150066A (ja) | 1986-03-12 |
| US4725556A (en) | 1988-02-16 |
| EP0164780B1 (fr) | 1989-03-15 |
| BE899664A (fr) | 1984-08-31 |
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Legal Events
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