JPH0567279B2 - - Google Patents
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- JPH0567279B2 JPH0567279B2 JP60111754A JP11175485A JPH0567279B2 JP H0567279 B2 JPH0567279 B2 JP H0567279B2 JP 60111754 A JP60111754 A JP 60111754A JP 11175485 A JP11175485 A JP 11175485A JP H0567279 B2 JPH0567279 B2 JP H0567279B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- enzyme
- sucrose
- fructosyltransferase
- bacteria
- solution
- Prior art date
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- Expired - Lifetime
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明はフラクトオリゴ糖を含有する糖質の新
規製造法に関し、詳しくはバチルス（Bacillus）
属に属し、生育の至適PHを中性からアルカリ性に
有する好アルカリ性の微生物を培養し、新規菌体
外フラクトシルトランスフエラーゼを培養液中に
生成蓄積せしめ、これを採取して得られる該菌体
外フラクトシルトランスフエラーゼをβ−Ｄ−フ
ラクトフラノシド結合を有する糖類基質に作用さ
せることを特徴とするフラクトオリゴ糖を含有す
る糖質の製造法に関する。 ここでいうフラクトシルトランスフエラーゼと
はシユークロースなどのフラクトースとグルコー
スとのβ−（２→１）結合を有する基質に作用し
てその結合を切断した後、該フラクトースをシユ
ークロースや１−ケストースあるいはニストース
などのフラクトース残基へ転移し、オリゴフラク
タンあるいはそれ以上の分子量を有するフラクタ
ンを生成する作用を有する酵素であり、従来は、
アスパラガスやキクイモ等の植物組織中あるいは
オーレオバシデイウム・プルランス
（Aureobasidium pullulans）、アスペルギルス・
ニガー（Aspergillus niger）、酵母などの菌体内
酵素として存在することが知られている（酵素ハ
ンドブツク、P.806、朝倉書店；米国特許第
4309505号；特開昭57−166981号）。 このようなフラクトシルトランスフエラーゼを
例えばシユークロースに作用させると糖転移反応
の結果、副生したグルコースやフラクトースの他
にシユークロースにフラクトースが数分子転移し
た１−ケストースやニストース、フラクトシルニ
ストースなどのフラクトオリゴ糖および未反応の
シユークロースを含有する甘味組成物が得られる
ばかりでなく、該トランスフエラーゼとグルコー
スイソメラーゼを併用してシユークロースに使用
させることによりシユークロースから高フラクト
ース含有物を容易に製造し得ることが知られてい
る（米国特許第4317.880号）。 また、シユークロースにフラクトースが数分子
転移したフラクトオリゴ糖は、う触原因菌である
ストレプトコツカス・ミユータンスの生産するデ
キストランシユークラーゼの基質とならないので
う触性が無く虫歯の原因とならないだけでなく、
有用腸内細菌であるビフイズス菌の増殖促進物質
としても知られており、工業的にも非常に有用な
物質と考えられている。（特公昭59−53834号）。 従来、これらのフラクトオリゴ糖は主としてオ
ーレオバシデイム・プルランス
（Aureobasidiumu pullulans）を好気的に培養す
ることにより菌体内に生成蓄積されるフラクトシ
ルトランスフエラーゼを高濃度のシユークロース
に作用させることにより得られているが（BIO
INDUSTRY、１巻、６号、第５頁〜13頁、1984
年）、該酵素が菌体内酵素であるため菌体からの
抽出精製操作が繁雑であるばかりでなく、酵素の
生産性もそれ程高いもとのとは言えなかつた。 また、菌体から該酵素を抽出せずに菌体そのも
のを酵素源として使用する方法もあるが菌体内に
存在する他の酵素群による副次的な反応が起り、
目的とするフラクトオリゴ糖の収率を低下させる
だけでなく、添加した菌体（酵素）が転移反応生
成物の濾過精製工程において目詰まりの原因とな
り、糖液の精製を実質上困難とする原因となつて
いた。そのため、菌体内酵素をフラクトオリゴ糖
の製造に用いる場合は包括法で菌体を固定化して
使用する必要があつた。 本発明者らはPHや温度に安定で精製の容易なフ
ラクトシルトランスフエラーゼを培養濾液中に生
成蓄積せしめる能力を持つ微生物を鋭意検索し、
中性からアルカリ性に生育の至適PHを有し、バチ
ルス（Bacillus）属に属するいくつかの好アルカ
リ性細菌が培養液中に著量の新規菌体外フラクト
シルトランスフエラーゼを生成蓄積することを見
出し、該酵素をシユークロースに作用させること
により著量のフラクトオリゴ糖を製造し得ること
を発見し、本発明を完成せしめたものである。 本発明に使用される新規菌体外フラクトシルト
ランスフエラーゼは、本発明者らにより天然界か
ら新たに検索単離された好アルカリ性のバチルス
属に属する数種類の新菌株を培養することにより
培養濾液中に生成蓄積されるものである。これら
の新菌株は夫々、工業技術院微生物工業技術研究
所にFERM Ｐ−8254、Ｐ−8255、Ｐ−8256、と
して寄託されている。 これらの菌株の菌学的性質を第１表に示す。
規製造法に関し、詳しくはバチルス（Bacillus）
属に属し、生育の至適PHを中性からアルカリ性に
有する好アルカリ性の微生物を培養し、新規菌体
外フラクトシルトランスフエラーゼを培養液中に
生成蓄積せしめ、これを採取して得られる該菌体
外フラクトシルトランスフエラーゼをβ−Ｄ−フ
ラクトフラノシド結合を有する糖類基質に作用さ
せることを特徴とするフラクトオリゴ糖を含有す
る糖質の製造法に関する。 ここでいうフラクトシルトランスフエラーゼと
はシユークロースなどのフラクトースとグルコー
スとのβ−（２→１）結合を有する基質に作用し
てその結合を切断した後、該フラクトースをシユ
ークロースや１−ケストースあるいはニストース
などのフラクトース残基へ転移し、オリゴフラク
タンあるいはそれ以上の分子量を有するフラクタ
ンを生成する作用を有する酵素であり、従来は、
アスパラガスやキクイモ等の植物組織中あるいは
オーレオバシデイウム・プルランス
（Aureobasidium pullulans）、アスペルギルス・
ニガー（Aspergillus niger）、酵母などの菌体内
酵素として存在することが知られている（酵素ハ
ンドブツク、P.806、朝倉書店；米国特許第
4309505号；特開昭57−166981号）。 このようなフラクトシルトランスフエラーゼを
例えばシユークロースに作用させると糖転移反応
の結果、副生したグルコースやフラクトースの他
にシユークロースにフラクトースが数分子転移し
た１−ケストースやニストース、フラクトシルニ
ストースなどのフラクトオリゴ糖および未反応の
シユークロースを含有する甘味組成物が得られる
ばかりでなく、該トランスフエラーゼとグルコー
スイソメラーゼを併用してシユークロースに使用
させることによりシユークロースから高フラクト
ース含有物を容易に製造し得ることが知られてい
る（米国特許第4317.880号）。 また、シユークロースにフラクトースが数分子
転移したフラクトオリゴ糖は、う触原因菌である
ストレプトコツカス・ミユータンスの生産するデ
キストランシユークラーゼの基質とならないので
う触性が無く虫歯の原因とならないだけでなく、
有用腸内細菌であるビフイズス菌の増殖促進物質
としても知られており、工業的にも非常に有用な
物質と考えられている。（特公昭59−53834号）。 従来、これらのフラクトオリゴ糖は主としてオ
ーレオバシデイム・プルランス
（Aureobasidiumu pullulans）を好気的に培養す
ることにより菌体内に生成蓄積されるフラクトシ
ルトランスフエラーゼを高濃度のシユークロース
に作用させることにより得られているが（BIO
INDUSTRY、１巻、６号、第５頁〜13頁、1984
年）、該酵素が菌体内酵素であるため菌体からの
抽出精製操作が繁雑であるばかりでなく、酵素の
生産性もそれ程高いもとのとは言えなかつた。 また、菌体から該酵素を抽出せずに菌体そのも
のを酵素源として使用する方法もあるが菌体内に
存在する他の酵素群による副次的な反応が起り、
目的とするフラクトオリゴ糖の収率を低下させる
だけでなく、添加した菌体（酵素）が転移反応生
成物の濾過精製工程において目詰まりの原因とな
り、糖液の精製を実質上困難とする原因となつて
いた。そのため、菌体内酵素をフラクトオリゴ糖
の製造に用いる場合は包括法で菌体を固定化して
使用する必要があつた。 本発明者らはPHや温度に安定で精製の容易なフ
ラクトシルトランスフエラーゼを培養濾液中に生
成蓄積せしめる能力を持つ微生物を鋭意検索し、
中性からアルカリ性に生育の至適PHを有し、バチ
ルス（Bacillus）属に属するいくつかの好アルカ
リ性細菌が培養液中に著量の新規菌体外フラクト
シルトランスフエラーゼを生成蓄積することを見
出し、該酵素をシユークロースに作用させること
により著量のフラクトオリゴ糖を製造し得ること
を発見し、本発明を完成せしめたものである。 本発明に使用される新規菌体外フラクトシルト
ランスフエラーゼは、本発明者らにより天然界か
ら新たに検索単離された好アルカリ性のバチルス
属に属する数種類の新菌株を培養することにより
培養濾液中に生成蓄積されるものである。これら
の新菌株は夫々、工業技術院微生物工業技術研究
所にFERM Ｐ−8254、Ｐ−8255、Ｐ−8256、と
して寄託されている。 これらの菌株の菌学的性質を第１表に示す。
【表】
【表】
＋；生育する −；生育しない
これらの菌株を例えばシユクロース５％、ポリ
ペプトン0.5％、酵母エキス0.％、K2HPO40.1％、
MgSO4・7H2O0.02％、Na2CO31％を含む液体培
地を用い、35〜55℃で20〜50時間好気的に培養す
ることによりフラクトシルトランスフエラーゼが
培養液上清中（菌体外）に生成蓄積される。な
お、本培地で使用する培地は前述の培地に限定さ
れるものではなく、実質的に安価に入手し得るコ
ーンステイープリカーやアミノ酸液あるいは無機
物を用いても可能である。また培地のPH調整剤も
炭酸ソーダに限定されるものではなく、重炭酸ソ
ーダ、炭酸アンモン、炭酸カリウム、苛性ソーダ
など実質的に培地のPHを中性からアルカリ性に調
整し得る物質であれば培養は可能である。 本培養液中の菌体を遠心分離あるいは濾過で除
いた上澄液（粗酵素液）を糖転移反応に用いるの
が経済的であるが、硫安等により塩析、エタノー
ル、アセトン、イソプロパノール等による溶媒沈
殿、限外濾過法、ゲル濾過法、イオン交換樹脂等
の一般的な酵素精製手段により精製した酵素を用
いることもできる。また、吸着法や包括法などの
種々の方法で調整した固定化酵素を用いることも
できる。 次に本発明で使用される新規菌体外フラクトシ
ルトランスフエラーゼの一般的特性に関し述べ
る。 (イ) 作用 シユークロース、１−ケストース、ニストー
ス、ラフイノース等のβ−Ｄ−フラクトフラノ
シド結合を有する糖類のβ−Ｄ−フラクトフラ
ノシド結合を切断し、生成したフラクトースを
シユークロース、１−ケストース、ニストー
ス、ラフイノースなどの糖類へ転移する。 (ロ) 基質特異性 シユークロース、１−ケストース、ニストー
ス、ラフイノースに良く使用するがツラノー
ス、マルチユロース、トレハロースには作用し
ない。 (ハ) 至適PHおよび安定PH範囲 ●至的PH Ｓ−432菌：5.5〜6.5 Ｓ−442菌：5.0〜6.0 Ｓ−452菌：5.5〜6.5 ●安定PH範囲（55℃、30分間処理） Ｓ−432菌 Ｓ−442菌 Ｓ−452菌5.0〜8.5 (ニ) 作用適温の範囲 Ｓ−432菌：50〜60℃ Ｓ−442菌：50〜60℃ Ｓ−452菌：45〜55℃ (ホ) PH、温度などにより失活の条件 55℃、30分間の処理条件ではPH3.5及び10.5
で完全に失活する。PH5.5、15分間では70℃で
完全に失活する。 (ヘ) 阻害剤および安定化剤 水銀、銅、EDTAで失活する。カルシウム
で安定化する。 (ホ) 分子量（ゲル濾過法） Ｓ−432菌：80000±10000 Ｓ−442菌：150000±10000 Ｓ−452菌：115000±10000 上記の理化学的及び酵素化学的性質を既知の微
生物由来のフラクトシルトランスフエラーゼと比
較して第２表に示す。
これらの菌株を例えばシユクロース５％、ポリ
ペプトン0.5％、酵母エキス0.％、K2HPO40.1％、
MgSO4・7H2O0.02％、Na2CO31％を含む液体培
地を用い、35〜55℃で20〜50時間好気的に培養す
ることによりフラクトシルトランスフエラーゼが
培養液上清中（菌体外）に生成蓄積される。な
お、本培地で使用する培地は前述の培地に限定さ
れるものではなく、実質的に安価に入手し得るコ
ーンステイープリカーやアミノ酸液あるいは無機
物を用いても可能である。また培地のPH調整剤も
炭酸ソーダに限定されるものではなく、重炭酸ソ
ーダ、炭酸アンモン、炭酸カリウム、苛性ソーダ
など実質的に培地のPHを中性からアルカリ性に調
整し得る物質であれば培養は可能である。 本培養液中の菌体を遠心分離あるいは濾過で除
いた上澄液（粗酵素液）を糖転移反応に用いるの
が経済的であるが、硫安等により塩析、エタノー
ル、アセトン、イソプロパノール等による溶媒沈
殿、限外濾過法、ゲル濾過法、イオン交換樹脂等
の一般的な酵素精製手段により精製した酵素を用
いることもできる。また、吸着法や包括法などの
種々の方法で調整した固定化酵素を用いることも
できる。 次に本発明で使用される新規菌体外フラクトシ
ルトランスフエラーゼの一般的特性に関し述べ
る。 (イ) 作用 シユークロース、１−ケストース、ニストー
ス、ラフイノース等のβ−Ｄ−フラクトフラノ
シド結合を有する糖類のβ−Ｄ−フラクトフラ
ノシド結合を切断し、生成したフラクトースを
シユークロース、１−ケストース、ニストー
ス、ラフイノースなどの糖類へ転移する。 (ロ) 基質特異性 シユークロース、１−ケストース、ニストー
ス、ラフイノースに良く使用するがツラノー
ス、マルチユロース、トレハロースには作用し
ない。 (ハ) 至適PHおよび安定PH範囲 ●至的PH Ｓ−432菌：5.5〜6.5 Ｓ−442菌：5.0〜6.0 Ｓ−452菌：5.5〜6.5 ●安定PH範囲（55℃、30分間処理） Ｓ−432菌 Ｓ−442菌 Ｓ−452菌5.0〜8.5 (ニ) 作用適温の範囲 Ｓ−432菌：50〜60℃ Ｓ−442菌：50〜60℃ Ｓ−452菌：45〜55℃ (ホ) PH、温度などにより失活の条件 55℃、30分間の処理条件ではPH3.5及び10.5
で完全に失活する。PH5.5、15分間では70℃で
完全に失活する。 (ヘ) 阻害剤および安定化剤 水銀、銅、EDTAで失活する。カルシウム
で安定化する。 (ホ) 分子量（ゲル濾過法） Ｓ−432菌：80000±10000 Ｓ−442菌：150000±10000 Ｓ−452菌：115000±10000 上記の理化学的及び酵素化学的性質を既知の微
生物由来のフラクトシルトランスフエラーゼと比
較して第２表に示す。
【表】
尚、フラクトシルトランスフエラーゼの活性測
定方法ならびに活性表示方法は以下の通りであ
る。 0.1Mの酢酸緩衝液（PH5.5）に溶解させた５％
（Ｗ／Ｖ）のシユークロース溶液0.5mlに酵素液
0.1mlを混合し、55℃で10分間反応させた後沸騰
水浴中で10分間加熱して酵素を失活させる。糖転
移反応で生成する還元性糖類をソモギー・ネルソ
ン法〔メソツド イン カーボハイドレイト ケ
ミストリー（Method in Carbohydrate
chemistry）第１巻、第386頁、1962年〕で定量
する。ここで酵素の単位は前述の条件で１分間に
1μmoleのグルコースに相当する還元糖を生成す
る酵素量を１単位として表示する。 また、該酵素をシユークロースに作用させるこ
とにより得られるフラクトオリゴ糖はセンシユー
パツクNH2−1251(H)カラム（4.6×250mm）（セン
シユー科学社製）を用い、アセトニトリル：水
（75：25）の溶媒系を用いる高速液体クロマトグ
ラフ（HPLC）法もしくは、TSKゲルG2000PW
カラム（21.5×600mm）（東洋ソーダ製）を用い
て、展開溶媒に水を使用するHPLC法により定量
した。 次に本発明の方法によるフラクトオリゴ糖の生
産には酵素の特異性および経済的な観点から基質
濃度は高い方が好ましく、濃度50〜70％（Ｗ／
Ｖ）、好ましくは６％（Ｗ／Ｖ）前後で反応させ
るのが良い。また、反応温度も工程内の微生物汚
染を防止する上から50℃以上が好ましい。 また、糖転移反応で生成するフラクトオリゴ糖
は当業者が糖の分離精製に通常用いている例えば
ダイヤイオンFRK−01やダイヤイオンFRK−
131（三菱化成工業製）などの陽イオン交換樹脂や
トヨパールHW−40（東洋ソーダ製）などのゲル
濾過樹脂などを用いるカラムクロマトグラフイー
により容易に単離することができる。 以下に本発明を実施例により更に詳しく説明す
る。 実施例 １ 好アルカリ性細菌バチルスNo.−Ｓ−432株
（FERM Ｐ−8254）を１容の三角フラスコ中
のシユークロース５％、酵母エキス0.5％、ポリ
ペプトン0.5％、K2HPO40.1％、MgSO4・
7H2O0.02％及び炭酸ソーダ１％を含む培地300ml
（PH10.3）に植菌し、37℃で48時間250rpmで回転
振とう培養し、培養液を遠心分離して27.5単位／
mlの粗酵素を得た。次いで、該粗酵素液を平均分
画分子量10000の限外濾過膜を用いて約10倍に濃
縮し、280単位／mlの酵素を得た。 このようにして得られたフラクトシルトランス
フエラーゼを60％（Ｗ／Ｖ）シユークロース溶液
10ml（シユークロース：６ｇ）中に、シユークロ
ース１ｇ当り２単位添加し、55℃、PH6.0で48時
間反応させた。得られた糖質をHPLC方で定量し
た結果、フラクトース17.4％、グルコース32.5
％、シユータロース6.3％、フラクトオリゴ糖
43.8％であつた。 実施例 ２ 好アルカリ性細菌バチルスNo.−Ｓ−442株
（FERM）を実施例１で述べた培地組成の炭酸ソ
ーダに代えて重炭酸ソーダ0.25％を含む倍地300
ml（PH8.6）に植菌し、実施例１と同一条件で振
とう培養し、20.3単位／mlの粗酵素液を得、更に
実施例１で用いた限外濾過膜を用いて約10倍に濃
縮し、200単位／mlの酵素得た。 このようにして得られたフラクトシルトランス
フエラーゼ0.5ml（100単位）を10Mの酢酸緩衝液
（PH5.5）で平衡化した５ｇ（湿重量）の陰イオン
交換樹脂ダイヤイオン1RA904（三菱化成工業製）
に吸着させた。ついで、同樹脂を55℃に保温され
たカラムに充填し、同上緩衝液で良く洗浄した。
酵素の同樹脂への吸着率は約90％、活性発現率は
約65％であつた。ついで、同カラムに50％（Ｗ／
Ｖ）シユークロース溶液（PH5.5）をSV0.2で通液
し、得られた糖液をHPLC方で測定した結果、フ
ラクトース18.1％、グルコース35.9％、シユーク
ロース7.5％、フラクトオリゴ糖38.5％であつた。 実施例 ３ 好アルカリ性細菌バチルスNo.−Ｓ−452株
（FERM Ｐ−8256）を実施例１で述べた培地組
成の炭酸ソーダに代えて苛性ソーダでPH7.5に調
整した培地に植菌し、実施例１と同一条件で振と
う培養し、24.8単位／mlの粗酵素液を得た。該粗
酵素液に冷却した５倍量のアセトンを添加し一夜
冷室中に放置した。生じた沈殿を遠心分離で集
め、減圧下で乾燥させ2500単位／ｇの酸素粉末を
得た。 PH6.0に調整した50％（Ｗ／Ｖ）シユークロー
ス溶液１（シユークロース：600ｇ）に上記酵
素粉末１ｇ（約4.2単位／ｇ・シユークロース）
を添加し、50℃に保温した。該反応混液を平均分
画分子量30000の限外濾過膜を装置した限外濾過
装置（日本ミリポア・リミテツド社製、ペリコン
ラボカセツト）中を５時間、50℃で回分させた。
ついで10ml／分の流速でシユークロース溶液を保
充すると同時に同速度で濾過液（パーミエート）
を抜き出し、その糖組成をHPLC法で測定した結
果、フラクトース17.9％、グルコース34.2％、シ
ユークロース8.5％、フラクトオリゴ糖39.4％で
あつた。
定方法ならびに活性表示方法は以下の通りであ
る。 0.1Mの酢酸緩衝液（PH5.5）に溶解させた５％
（Ｗ／Ｖ）のシユークロース溶液0.5mlに酵素液
0.1mlを混合し、55℃で10分間反応させた後沸騰
水浴中で10分間加熱して酵素を失活させる。糖転
移反応で生成する還元性糖類をソモギー・ネルソ
ン法〔メソツド イン カーボハイドレイト ケ
ミストリー（Method in Carbohydrate
chemistry）第１巻、第386頁、1962年〕で定量
する。ここで酵素の単位は前述の条件で１分間に
1μmoleのグルコースに相当する還元糖を生成す
る酵素量を１単位として表示する。 また、該酵素をシユークロースに作用させるこ
とにより得られるフラクトオリゴ糖はセンシユー
パツクNH2−1251(H)カラム（4.6×250mm）（セン
シユー科学社製）を用い、アセトニトリル：水
（75：25）の溶媒系を用いる高速液体クロマトグ
ラフ（HPLC）法もしくは、TSKゲルG2000PW
カラム（21.5×600mm）（東洋ソーダ製）を用い
て、展開溶媒に水を使用するHPLC法により定量
した。 次に本発明の方法によるフラクトオリゴ糖の生
産には酵素の特異性および経済的な観点から基質
濃度は高い方が好ましく、濃度50〜70％（Ｗ／
Ｖ）、好ましくは６％（Ｗ／Ｖ）前後で反応させ
るのが良い。また、反応温度も工程内の微生物汚
染を防止する上から50℃以上が好ましい。 また、糖転移反応で生成するフラクトオリゴ糖
は当業者が糖の分離精製に通常用いている例えば
ダイヤイオンFRK−01やダイヤイオンFRK−
131（三菱化成工業製）などの陽イオン交換樹脂や
トヨパールHW−40（東洋ソーダ製）などのゲル
濾過樹脂などを用いるカラムクロマトグラフイー
により容易に単離することができる。 以下に本発明を実施例により更に詳しく説明す
る。 実施例 １ 好アルカリ性細菌バチルスNo.−Ｓ−432株
（FERM Ｐ−8254）を１容の三角フラスコ中
のシユークロース５％、酵母エキス0.5％、ポリ
ペプトン0.5％、K2HPO40.1％、MgSO4・
7H2O0.02％及び炭酸ソーダ１％を含む培地300ml
（PH10.3）に植菌し、37℃で48時間250rpmで回転
振とう培養し、培養液を遠心分離して27.5単位／
mlの粗酵素を得た。次いで、該粗酵素液を平均分
画分子量10000の限外濾過膜を用いて約10倍に濃
縮し、280単位／mlの酵素を得た。 このようにして得られたフラクトシルトランス
フエラーゼを60％（Ｗ／Ｖ）シユークロース溶液
10ml（シユークロース：６ｇ）中に、シユークロ
ース１ｇ当り２単位添加し、55℃、PH6.0で48時
間反応させた。得られた糖質をHPLC方で定量し
た結果、フラクトース17.4％、グルコース32.5
％、シユータロース6.3％、フラクトオリゴ糖
43.8％であつた。 実施例 ２ 好アルカリ性細菌バチルスNo.−Ｓ−442株
（FERM）を実施例１で述べた培地組成の炭酸ソ
ーダに代えて重炭酸ソーダ0.25％を含む倍地300
ml（PH8.6）に植菌し、実施例１と同一条件で振
とう培養し、20.3単位／mlの粗酵素液を得、更に
実施例１で用いた限外濾過膜を用いて約10倍に濃
縮し、200単位／mlの酵素得た。 このようにして得られたフラクトシルトランス
フエラーゼ0.5ml（100単位）を10Mの酢酸緩衝液
（PH5.5）で平衡化した５ｇ（湿重量）の陰イオン
交換樹脂ダイヤイオン1RA904（三菱化成工業製）
に吸着させた。ついで、同樹脂を55℃に保温され
たカラムに充填し、同上緩衝液で良く洗浄した。
酵素の同樹脂への吸着率は約90％、活性発現率は
約65％であつた。ついで、同カラムに50％（Ｗ／
Ｖ）シユークロース溶液（PH5.5）をSV0.2で通液
し、得られた糖液をHPLC方で測定した結果、フ
ラクトース18.1％、グルコース35.9％、シユーク
ロース7.5％、フラクトオリゴ糖38.5％であつた。 実施例 ３ 好アルカリ性細菌バチルスNo.−Ｓ−452株
（FERM Ｐ−8256）を実施例１で述べた培地組
成の炭酸ソーダに代えて苛性ソーダでPH7.5に調
整した培地に植菌し、実施例１と同一条件で振と
う培養し、24.8単位／mlの粗酵素液を得た。該粗
酵素液に冷却した５倍量のアセトンを添加し一夜
冷室中に放置した。生じた沈殿を遠心分離で集
め、減圧下で乾燥させ2500単位／ｇの酸素粉末を
得た。 PH6.0に調整した50％（Ｗ／Ｖ）シユークロー
ス溶液１（シユークロース：600ｇ）に上記酵
素粉末１ｇ（約4.2単位／ｇ・シユークロース）
を添加し、50℃に保温した。該反応混液を平均分
画分子量30000の限外濾過膜を装置した限外濾過
装置（日本ミリポア・リミテツド社製、ペリコン
ラボカセツト）中を５時間、50℃で回分させた。
ついで10ml／分の流速でシユークロース溶液を保
充すると同時に同速度で濾過液（パーミエート）
を抜き出し、その糖組成をHPLC法で測定した結
果、フラクトース17.9％、グルコース34.2％、シ
ユークロース8.5％、フラクトオリゴ糖39.4％で
あつた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ バチルス属に属し、中性からアルカリ性に生
育の至適PHを有する好アルカリ性の微生物を培養
して得られる菌体外フラクトシルトランスフエラ
ーゼを、β−Ｄ−フラクトフラノシド結合を有す
る糖類基質に作用させることを特徴とするフラク
トオリゴ糖を含有する糖質の製造法。 ２ 上記基質がシユークロースであることを特徴
とする特許請求の範囲第１項に記載のフラクトオ
リゴ糖を含有する糖質の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60111754A JPS61268191A (ja) | 1985-05-24 | 1985-05-24 | フラクトオリゴ糖を含有する糖質の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60111754A JPS61268191A (ja) | 1985-05-24 | 1985-05-24 | フラクトオリゴ糖を含有する糖質の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61268191A JPS61268191A (ja) | 1986-11-27 |
| JPH0567279B2 true JPH0567279B2 (ja) | 1993-09-24 |
Family
ID=14569337
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60111754A Granted JPS61268191A (ja) | 1985-05-24 | 1985-05-24 | フラクトオリゴ糖を含有する糖質の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61268191A (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5962297A (en) * | 1996-06-10 | 1999-10-05 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Polypeptides having β-fructofuranosidase activity |
| US6383769B1 (en) | 1996-06-10 | 2002-05-07 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Polypeptides having β-fructofuranosidase activity |
| US6762046B2 (en) | 1996-06-10 | 2004-07-13 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Polypeptide having β-fructofuranosidase activity |
-
1985
- 1985-05-24 JP JP60111754A patent/JPS61268191A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61268191A (ja) | 1986-11-27 |
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