JPH0568546A - 新規シクロマルトデキストリナーゼ、その製造法及び該酵素を生産する微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 作用適温が高く、温度安定性に優れ、作用至
適ｐＨが弱酸性で、菌体外に生産される酵素である新規
シクロマルトデキストリナーゼ、その製造法及び該酵素
を生産する微生物を提供する。 【構成】 バチルス・ステアロサーモフィルスＮｏ．Ｋ
Ｈ−１７株（微工研菌寄第１２４８１号）を培養し、培
養上清液中からシクロマルトデキストリナーゼを採取
し、必要に応じて精製する。このシクロマルトデキスト
リナーゼは、マルトトリオース以上の重合度を有するマ
ルトオリゴ糖中のα−１，４−グルコピラノシド結合を
加水分解及び転移反応させて、一連のマルトオリゴ糖を
生成する。また、シクロデキストリン類に作用し、該シ
クロデキストリンの重合度に由来したマルトオリゴ糖を
主成分として生成する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、マルトオリゴ糖及びシ
クロデキストリン類（以下ＣＤ類と略す）から一連のマ
ルトオリゴ糖を生成する新規なシクロマルトデキストリ
ナーゼ(Cyclomaltodextrinase,EC,3,2,1,54)、その製造
法及び該酵素を生産する微生物に関する。更に詳しく
は、バチルス・ステアロサーモフィラスに属する新規な
好熱性細菌を培養して得られ、マルトトリオース以上の
重合度を有するマルトオリゴ糖に作用して、マルトース
を主成分とする一連のマルトオリゴ糖類を生産し、ま
た、ＣＤ類に作用して、該ＣＤの重合度に由来したマル
トオリゴ糖を主成分として生成するシクロマルトデキス
トリナーゼ、その製造法及び該酵素を生産する微生物に
関する。

【０００２】

【従来の技術】シクロマルトデキストリナーゼに関する
報告は極めて少なく、例えば、バチルス・マセランス
（Bacillus macerans, Biochem., 7巻，121-124 頁，19
68年）、バチルス・コアギュランス（Bacillus coagula
ns, Agric. Biol. Chem., 47巻,1441-1447 頁，1983
年）、バチルス・スフェリカス（Bacillus sphaericus,
特願平1-152257号）、キサントモナス・キャンペスト
リス（Xanthomonas campestris, 特開平3-83582 号）及
びシュードモナス・アミロデラモーサ(Pesudomonas am
yloderamosa, Biochim. Biophys. Acta, 391巻，96-108
頁，1975年）等が知られているにすぎない。

【０００３】これらの酵素は、いずれもＣＤを良く分解
するが、菌体内酵素であることから酵素の調製が繁雑で
あるばかりでなく、生産性にも限界があった。更に、温
度安定性にも劣り、酵素反応の最適温度も低いことか
ら、工業用酵素として澱粉糖の生産に使用する際に問題
があった。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】一般に酵素を用いて澱
粉糖を生産する場合、作用適温が高く、該温度での安定
性の高い酵素が望まれている。これは、低温から中温で
の酵素反応では反応系中への微生物汚染を防止し得ず、
汚染微生物による副次的な反応により不必要な副生物が
生成するばかりではなく、反応時のｐＨが低下すること
によるｐＨ調製に大量のアルカリ剤を必要とすることか
ら、結果的にこれらの塩を除去するための大規模な精製
設備が必要となり経済的ではないことによる。

【０００５】また、酵素の作用至適ｐＨはｐＨ４〜６程
度の弱酸性が好ましい。これは、中性からアルカリ性下
で酵素反応を行う場合には、生成する澱粉糖が異性化す
るため、結果的に必要とされる澱粉糖の純度を低下せし
めることによる。

【０００６】更に、使用される酵素が微生物により生産
される場合には、酵素は菌体外（培地中）に生成蓄積さ
れるのが好ましい。これは、菌体内酵素の場合には、酵
素の生産性に限界があり、経済的に問題があるばかりで
はなく、菌体からの酵素の抽出、精製に繁雑な工程を要
することによる。

【０００７】したがって、本発明の目的は、作用適温が
高く、温度安定性に優れ、作用至適ｐＨが弱酸性であ
り、菌体外に生産される酵素である新規シクロマルトデ
キストリナーゼ、その製造法及び該酵素を生産する微生
物を提供することにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、作用適温
が高く、温度安定性に優れ、作用至適ｐＨが弱酸性であ
り、菌体外に生産される酵素であって、マルトトリオー
ス以上の重合度を有するマルトオリゴ糖及びＣＤ類、特
にα−ＣＤ（シクロヘキサアミロース）を他のＣＤ類に
比較してより強力に分解してマルトオリゴ糖を生成する
作用を有するシクロマルトデキストリナーゼを生産する
微生物を広く自然界から検索した結果、土壌中より分離
したバチルス・ステアロサーモフィラスに属する１菌株
（ＫＨ−１７株）が該酵素を強力に生産することを見出
し、本発明を完成した。

【０００９】すなわち、本発明は、新規な特性を有する
シクロマルトデキストリナーゼを提供すると共に、バチ
ルス・ステアロサーモフィラスに属し、シクロマルトデ
キストリナーゼを菌体外（培地中）に生産する能力を有
する菌株（ＫＨ−１７株）、並びに該菌株を培養し、培
養物から該新規シクロマルトデキストリナーゼを採取す
ることを特徴とする該新規シクロマルトデキストリナー
ゼの製造法を提供するものである。

【００１０】以下に、本発明のシクロマルトデキストリ
ナーゼの理化学的諸性質について述べる。

【００１１】（イ）作用 マルトトリオース以上の重合度を有するマルトオリゴ糖
中のα−１，４−グルコピラノシド結合を加水分解及び
転移反応させて、一連のマルトオリゴ糖を生成する。ま
た、ＣＤ類に作用し、該ＣＤ類の重合度に由来したマル
トオリゴ糖を主成分として生成する。 （ロ）基質特異性 マルトトリオース以上の重合度を有するマルトオリゴ糖
及びＣＤ類を分解する。α−ＣＤの加水分解速度が他の
ＣＤ及び同じ重合度を有する直鎖マルトオリゴ糖よりも
大である。デンプン、アミロペクチン、グリコーゲン、
パノース及びイソパノースを殆ど分解しない。

【００１２】（ハ）至適ｐＨ ｐＨ４〜８の範囲で作用し、至適ｐＨは５．５付近にあ
る。 （ニ）安定ｐＨ範囲 ５℃２４時間保存した時ｐＨ６〜９で安定である。 （ホ）作用適温 温度４０〜７５℃の範囲で作用し、最適温度は６０℃付
近にある。 （ヘ）失活条件 ４℃、２４時間の保存条件下ではｐＨ４で約９０％が失
活し、ｐＨ７、２時間の条件下で８０℃で完全に失活す
る。

【００１３】（ト）温度安定性 ｐＨ７、１時間の条件下で４０℃まで安定であり、５０
℃、６０℃、７０℃及び８０℃での残存活性はそれぞれ
９０％、７０％、３０％及び１３％である。 （チ）阻害化及び活性化 ２価のカドミウム、亜鉛、水銀、マンガン、銅、ニッケ
ル及びｐＣＭＢ（パラクロルマーキュリーベンゾエー
ト）で阻害される。 （リ）分子量 分子量は約１０６，０００である（ゲル濾過法）。 （ヌ）等電点 等電点は約４．７である（等電点電気泳動法）。

【００１４】本発明の酵素と従来の公知のシクロマルト
デキストリナーゼとの理化学的諸性質の相違点を表１に
示す。

【００１５】

【表１】

【００１６】表１からも明らかなように、本発明の酵素
は、従来公知のシクロマルトデキストリナーゼに比較
し、高温で作用するばかりではなく、菌体外（培地中）
に生成蓄積する点で異なっていた。現在までに、以上の
ような性質を有する酵素は知られていないので、本発明
のシクロマルトデキストリナーゼは、新規酵素であると
判断した。

【００１７】本発明のシクロマルトデキストリナーゼ
は、バチルス・ステアロサーモフィルス（Bacillus ste
arothermophilus ）に属し、該酵素を生産する能力を有
する微生物を培養し、培養物から該酵素を採取すること
により得ることができる。

【００１８】本発明で用いるバチルス・ステアロサーモ
フィルスに属し、シクロマルトデキストリナーゼを生産
する微生物としては、以下の菌学的諸性質を有するバチ
ルス・ステアロサーモフィルスＮｏ．ＫＨ−１７株（Ba
cillus stearothermophilusNo.KH-17）が好ましく用い
られる。

【００１９】Ａ．形態学的特徴 （１）細胞の形及び大きさ：桿菌で、大きさは（0.6 〜
1.0)×（2.5 〜3.0)μm （ミクロン） （２）細胞の多形性：なし （３）運動性：運動性が有り、周鞭毛を有す （４）胞子の有無：有 胞子のう：僅かに膨らんでいる 胞子の形：楕円形 胞子の位置：やや末端側 （５）グラム染色性：陽性 （６）抗酸性：陰性

【００２０】Ｂ．各種培地での生育 （１）肉汁寒天平板培養 白色を呈し円形状の集落を形成。中心は凸状もしくは凸
円状。周縁は全縁状。色素の産生は認められない。 （２）肉汁寒天斜面培養 拡布状に生育する。 （３）肉汁液体培養 生育は弱く、わずかに混濁と沈渣を生じ、表面に不完全
なリングを形成する。 （４）肉汁ゼラチン穿刺培養 表面のみ育成し、ゼラチンの液化は認められない。 （５）リトマスミルク 凝固は認められず、酸、アルカリの産生も認められな
い。 （６）グルコース・肉汁液体培地による嫌気的生育は認
められない。 （７）硝酸塩からの嫌気ガスの生成 ガスは生成しない。

【００２１】Ｃ．生理学的性質 （１）硝酸塩の還元 還元する （２）脱窒反応 陰性 （３）ＶＰテスト 陰性 （４）インドールの生成 陰性 （５）硫化水素の生成 陰性 （６）デンプンの加水分解 陽性 （７）クエン酸の利用 利用しない （８）無機窒素源の利用 利用する （９）色素の生成 産生しない （１０）ゼラチンとカゼインの加水分解 分解しない （１１）ウレアーゼ 陽性 （１２）オキシダーゼ 陰性 （１３）カタラーゼ 陰性 （１４）酸素に対する態度 好気性 （１５）生育の範囲 温度：３０〜７５℃（至適５５〜６０℃） ｐＨ：５．５〜８．０（至適ｐＨ６〜６．５） （１６）リゾチームに対する抵抗性 無 （１７）アザイドに対する抵抗性 有 （１８）糖類に対する態度 Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、
Ｄ−フラクトース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−トレハロー
ス、マルトース、蔗糖、乳糖、メリビオース、ラフィノ
ース、セロビオース、グリセリン、Ｄ−マンニットから
酸を生成し、ガスは生成しない。

【００２２】この菌株は、有胞子桿菌で運動性が有り、
グラム氏染色陽性であることからバチルス属に属するこ
とは明らかである。更に、デンプンの加水分解能を有
し、ｐＨ５．０で生育できず、７５℃まで生育できるこ
とから、バージェイズ・マニュアル・オブ・システィマ
ティック・バクテオロジー、第２巻、１９８４年に基づ
きバチルス属のステアロサーモフィルス種に属する細菌
であると同定した。このバチルス・ステアロサーモフィ
ルスＫＨ−１７株は、工業技術院微生物工業技術研究所
に、微工研菌寄第１２４８１号として寄託されている。

【００２３】上記シクロマルトデキストリナーゼ生産菌
株の培養には、一般の好気性微生物の培養に採用されて
いる液体培地による振盪培養法や、通気攪拌培養法等が
用いられる。

【００２４】培地としては、適当な窒素源、炭素源、ビ
タミン、ミネラル等を含む培地を用いればよい。炭素源
としては、可溶性デンプン、デキストリン、粉飴、ＣＤ
類、プルラン、乳糖などを単独もしくは２種類以上を組
み合わせて用いることができる。窒素源としては、有機
窒素化合物として、コーン・スティープ・リカー、ポリ
ペプトン、各種アミノ酸、大豆粕、肉エキス、魚エキ
ス、酵母エキス等を、また、無機窒素化合物として各種
アンモニウム塩、硝酸塩、尿素等を単独もしくは２種以
上を組み合わせて用いることができる。その他、ビタミ
ン、ミネラル等を適宜添加することもできる。

【００２５】また、培養温度は、通常３０〜７５℃、好
ましくは４０〜７０℃、より好ましくは５０〜５５℃で
ある。培養ｐＨは、通常５．５〜８．０、好ましくは
６．０〜７．０である。培養時間は、培養方法によって
異なるが、１８〜１００時間程度である。本培養方法に
より、シクロマルトデキストリナーゼの大部分（約８０
％）は、培地中（菌体外）に蓄積し、残余は細胞表層に
局在する。培養終了後、通常の方法によりシクロマルト
デキストリナーゼを得ることができるが、次にその一例
を示す。

【００２６】先ず培養液を遠心分離して菌体を除去す
る。得られた上清液に、等量のイソパノールを加え、沈
殿物を得る。この沈殿物を１０ｍＭ酢酸バッファー（ｐ
Ｈ６）に対して透析して得られる粗酵素を、ＤＥＡＥ−
トヨパール６５０Ｓを用いた塩化ナトリウムのグラジエ
ントイオン交換クロマトグラフィにかけ、溶出される活
性画分を平均分画分子量１０，０００の限界濾過膜で濃
縮する。この濃縮酵素について、上記と同じバッファー
で平衡化したセファクリルＳ−３００を用いて、ゲル濾
過を行なって活性画分を採取し、この活性画分をクロマ
トフォーカシング法により更に精製して、精製酵素を得
る。

【００２７】なお、本発明のシクロマルトデキストリナ
ーゼの活性は、以下のように測定した。１％のα−ＣＤ
を含む０．５ｍＬ（ミリリットル）の０．１Ｍ酢酸バッ
ファー（ｐＨ５．５）に水で適宜稀釈した酵素液０．０
５ｍＬを添加し、５０℃で１０分間反応させた後、ソモ
ギー（Ｓｏｍｏｇｙｉ）液１．０ｍＬを加えて反応を停
止させた。次いで、沸騰水浴中で３０分間煮沸した後、
流水中で急冷し、ネルソン（Ｎｅｌｓｏｎ）液１．０ｍ
Ｌを加えた。水を加えて１０．０ｍＬとし、同様に処理
した１００μｇのグルコースを標準として生成した還元
糖を５１０ｎｍで測定した。ここで本酵素の１単位は、
同上条件でα−ＣＤから１μｍｏｌｅのグルコースに相
当する還元糖を生成する酵素量とした。

【００２８】

【実施例】次に、本発明を実施例で更に具体的に説明す
る。

【００２９】実施例１ 粗酵素の調製 ０．５％デキストリン、１％シェフトンＦ（シェフトン
社製、Ｕ．Ｓ．Ａ．）、０．１％酵母エキス、０．１％
グルタミン酸ソーダ、０．１％硝酸アンモニウム、０．
１％Ｋ₂ ＨＰＯ₄ 、０．０２％ＭｇＳＯ₄ ・７Ｈ₂ Ｏ、
５０ｍｇ／ＬのＣａＣｌ₂ ・２Ｈ₂ Ｏ及び１０ｍｇ／Ｌ
のＭｎＳＯ₄ ・７Ｈ₂ Ｏを含むｐＨ６．３の液体培地１
５Ｌ（リットル）を、１２０℃で３０分間滅菌した後、
予め、上記と同じ培地を用いて５０℃で２０時間、１８
０ｒｐｍで回転振盪培養したバチルス・ステアロサーモ
フィルスＮｏ．ＫＨ−１７株（微工研菌寄第１２４８１
号）懸濁液１Ｌを接種し、２５０ｒｐｍ，１ｖ，ｖ，ｍ
の条件下で、５０℃で５０時間、通気攪拌培養を行なっ
た。培養終了後、遠心分離して菌体を除去した上清液
を、平均分画分子量５，０００の限界濾過膜（Ｒｏｍｉ
ｃｏｎ社製）を通過させて約２Ｌに濃縮した。本濃縮粗
酵素液は、１ｍＬ当たり２５．５単位の酵素活性を有し
ていた。

【００３０】実施例２ 酵素の精製 実施例１で得られた粗酵素１．０Ｌに等量のイソプロパ
ノースを加えて沈殿物を得た。この沈殿物を、１０，０
００×ｇ、４℃で１０分間遠心分離して集めた後、１０
ｍＭ酢酸バッファー（ｐＨ６．０）に対して４℃で一夜
透析した。次いで不溶物を遠心分離により除去した上清
液を、上記と同じバッファーで平衡化したＤＥＡＥ−ト
ヨパール６５０Ｓに通過させ、該酵素を吸着させた。吸
着した酵素は、塩化ナトリウムを含む上記と同じバッフ
ァーを用いたグラジエント法で溶出した後、活性画分を
集めて平均分画分子量１０，０００の限外濾過膜（Ａｍ
ｉｃｏｎ社製）を用いて濃縮した。濃縮酵素に対して、
上記と同じバッファーで平衡化したセファクリル（Ｓｅ
ｐｈａｃｒｙｌ）Ｓ−３００を用いたゲル濾過クロマト
グラフィーを行なって更に精製した後、上記と同じ限外
濾過膜を用いて濃縮した。濃縮酵素は、クロマトフォー
カシング法により更に精製して精製酵素を得た。なお、
本精製酵素の比活性は、７１単位／ｍｇ蛋白であり、ポ
リアクリルアミドゲルディスク電気泳動的に単一であっ
た。

【００３１】実施例３ 酵素の理化学的諸性質 （イ）作用 １０ｍｇの各種基質を含む０．２ｍＬの１０ｍＭ燐酸バ
ッファー（ｐＨ６．０）に、実施例２で得られた精製酵
素０．１単位を添加し、５５℃で３時間反応させた。次
いで、沸騰水浴中で１０分間加熱して酵素を失活させた
後、生成物をＭＣＩゲル−ＣＫＯ４ＳＳカラム（三菱化
成工業製）を用いたＨＰＬＣにより分析した結果を表２
に示す。

【００３２】

【表２】

【００３３】（ロ）特異性 実施例２で得られた精製酵素を、各種基質に作用させた
結果を表３に示す。なお、反応は常法により測定し、α
−ＣＤを基質とした場合の活性を１００とする相対活性
で表示した。また、各種マルトオリゴ糖の場合には、同
様条件で反応させた後、沸騰水浴中で１０分間加熱して
酵素を失活させた後、生成した還元糖をソモギー・ネル
ソン法で測定した。

【００３４】

【表３】 （表３中、Ｇ６〜Ｇ８は、マルトヘキサオース、マルト
ヘプタオース、マルトオクタオースを表し、Ｇ１−ＣＤ
は、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−ＣＤ、Ｇ２−ＣＤ
は、６−Ｏ−α−Ｄ−マルトシル−ＣＤを表す。）

【００３５】（ハ）至適ｐＨ ０．１Ｍ酢酸バッファー（ｐＨ４．２、５．０、５．
５、６．０）、０．１Ｍ燐酸バッファー（ｐＨ６．０、
６．５、７．０、８．０）又はグリシン−ＮａＯＨ−Ｎ
ａＣＬバッファー（ｐＨ９．０）に溶解させた１％（ｗ
／ｖ）α−ＣＤ溶液１．０ｍＬに、本発明の精製酵素を
予め１ｍＭ ＥＤＴＡを含む水で一夜透析した後、更に
ＥＤＴＡを含まない水で一夜透析したシクロマルトデキ
ストリナーゼ含有溶液０．０５ｍＬを混合し、先に述べ
た方法で活性を測定した。至適ｐＨはｐＨ５．５におけ
る酵素活性を１００とする相対活性で示した。この結果
を図１に示す。

【００３６】（ニ）安定ｐＨ ｐＨ４〜１０の範囲で（ハ）で用いた酵素と同様に処理
した本発明のシクロマルトデキストリナーゼを４℃で２
４時間処理し、ｐＨ７．０で処理した時の残存酵素活性
を１００とする相対活性を図２に示す。なお、使用した
バッファーは酢酸（ｐＨ４〜６）、燐酸（ｐＨ６〜８）
及びグリシン−ＮａＯＨ−ＮａＣＬ（ｐＨ９〜１０）で
ある。

【００３７】（ホ）作用適温 （ハ）で用いた酵素と同様に処理した本発明のシクロマ
ルトデキストリナーゼ含有溶液の活性を各温度で測定し
た。６０℃で測定した時の酵素活性を１００とした時の
相対活性を図３に示す。

【００３８】（ヘ）失活条件及び（ト）温度安定性 （ハ）で用いた酵素と同様に処理した本発明のシクロマ
ルトデキストリナーゼ含有溶液を４０〜８０℃の各温度
で適宜処理し、４℃で同様に処理した時の残存活性を１
００とした時の残存する活性を測定した。結果を図４に
示す。

【００３９】（チ）阻害及び活性化 （ハ）で用いた酵素と同様に処理した本発明のシクロマ
ルトデキストリナーゼ含有溶液を用い、終濃度１ｍＭ
（水銀及びｐＣＭＢは０．１ｍＭ）となるように各種金
属の塩酸塩を基質に添加して活性を測定した無添加時の
活性を１００とした時の相対活性を測定した結果を表４
に示す。

【００４０】

【表４】

【００４１】（リ）分子量 ＴＳＫ−Ｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷ（東ソー製）を用いた
ゲル濾過法により、分子量を求めた結果、図５に示すよ
うに、本発明のシクロマルトデキストリナーゼの分子量
は約１０６，０００であった。

【００４２】（ヌ）等電点 セルバ社製セルバライト・プレコートゲルを用いた等電
点電気泳動法により、本発明のシクロマルトデキストリ
ナーゼの等電点を求めた結果、図６に示すように、等電
点は約４．７であった。

【００４３】

【発明の効果】以上詳しく述べたように、本発明のシク
ロマルトデキストリナーゼによれば、公知シクロマルト
デキストリナーゼに比較し、高い温度安定性を有し、か
つ高温で作用し得ることから澱粉糖生産時の反応中の微
生物汚染を防止することが可能となった。

【００４４】また、ＣＤに作用させた時にＣＤのグルコ
ース重合度に応じたマルトオリゴ糖を蓄積することか
ら、従来、困難とされていたマルトヘキサオース、マル
トヘプタオース、マルトオクタオースを容易に調製でき
る。

【００４５】更に、本発明のバチルス・ステアロサーモ
フィルスＮｏ．ＫＨ−１７株は、上記シクロマルトデキ
ストリナーゼを菌体外に生産するので、同酵素の工業的
な生産に適している。

【図面の簡単な説明】

【図１】新規シクロマルトデキストリナーゼの至適ｐＨ
を示す図である。

【図２】該酵素の安定ｐＨを示す図である。

【図３】該酵素の作用適温を示す図である。

【図４】該酵素の温度による失活の条件を示す図であ
る。

【図５】ＴＳＫ−Ｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷを用いたゲル
濾過法による分子量を示す図である。

【図６】等電点電気泳動法による等電点を示す図であ
る。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の理化学的諸性質を有する新規シク
   ロマルトデキストリナーゼ。 （イ）作用 マルトトリオース以上の重合度を有するマルトオリゴ糖
   中のα−１，４−グルコピラノシド結合を加水分解及び
   転移反応させて、一連のマルトオリゴ糖を生成する。ま
   た、シクロデキストリン類に作用し、該シクロデキスト
   リンの重合度に由来したマルトオリゴ糖を主成分として
   生成する。 （ロ）基質特異性 マルトトリオース以上の重合度を有するマルトオリゴ糖
   及びシクロデキストリン類を分解する。α−シクロデキ
   ストリンの加水分解速度が他のシクロデキストリン及び
   同じ重合度を有する直鎖マルトオリゴ糖よりも大であ
   る。デンプン、アミロペクチン、グリコーゲン、パノー
   ス及びイソパノースを殆ど分解しない。 （ハ）至適ｐＨ ｐＨ４〜８の範囲で作用し、至適ｐＨは５．５付近にあ
   る。 （ニ）安定ｐＨ範囲 ５℃で２４時間保存した時ｐＨ６〜９で安定である。 （ホ）作用適温 温度４０〜７５℃の範囲で作用し、最適温度は６０℃付
   近にある。 （ヘ）失活条件 ４℃、２４時間の保存条件下ではｐＨ４で約９０％が失
   活し、ｐＨ７、２時間の条件下で８０℃で完全に失活す
   る。 （ト）温度安定性 ｐＨ７、１時間の条件下で４０℃まで安定であり、５０
   ℃、６０℃、７０℃及び８０℃での残存活性はそれぞれ
   ９０％、７０％、３０％及び１３％である。 （チ）阻害化及び活性化 ２価のカドミウム、亜鉛、水銀、マンガン、銅、ニッケ
   ル及びｐＣＭＢ（パラクロルマーキュリーベンゾエー
   ト）で阻害される。 （リ）分子量 分子量は約１０６，０００である（ゲル濾過法）。 （ヌ）等電点 等電点は約４．７である（等電点電気泳動法）。
2. 【請求項２】 バチルス・ステアロサーモフィルス（Ba
   cillus stearothermophilus ）に属し、請求項１記載の
   新規シクロマルトデキストリナーゼを生産する能力を有
   する微生物を培養し、培養物から請求項１記載の新規シ
   クロマルトデキストリナーゼを採取することを特徴とす
   る新規シクロマルトデキストリナーゼの製造法。
3. 【請求項３】 バチルス・ステアロサーモフィルスに属
   する新規シクロマルトデキストリナーゼ生産菌が、バチ
   ルス・ステアロサーモフィルスＮｏ．ＫＨ−１７株（Ba
   cillus stearothermophilus No.KH-17、微工研菌寄第１
   ２４８１号）である請求項２記載の新規シクロマルトデ
   キストリナーゼの製造法。
4. 【請求項４】 培養を４０〜７０℃で好気的に行う請求
   項２又は３記載の新規シクロマルトデキストリナーゼの
   製造法。
5. 【請求項５】 培養液のｐＨを５．５〜８．０の範囲内
   とする請求項２〜４のいずれか１つに記載の新規シクロ
   マルトデキストリナーゼの製造法。
6. 【請求項６】 バチルス・ステアロサーモフィルス（Ba
   cillus stearothermophilus ）に属し、請求項１記載の
   新規シクロマルトデキストリナーゼを菌体外に生産する
   能力を有し、以下の菌学的諸性質を有するバチルス・ス
   テアロサーモフィルスＮｏ．ＫＨ−１７株（Bacillus s
   tearothermophilus No.KH-17、微工研菌寄第１２４８１
   号）。 Ａ．形態学的特徴 （１）細胞の形及び大きさ：桿菌で、大きさは（0.6 〜
   1.0)×（2.5 〜3.0)μm （ミクロン） （２）細胞の多形性：なし （３）運動性：運動性が有り、周鞭毛を有す （４）胞子の有無：有 胞子のう：僅かに膨らんでいる 胞子の形：楕円形 胞子の位置：やや末端側 （５）グラム染色性：陽性 （６）抗酸性：陰性 Ｂ．各種培地での生育 （１）肉汁寒天平板培養 白色を呈し円形状の集落を形成。中心は凸状もしくは凸
   円状。周縁は全縁状。色素の産生は認められない。 （２）肉汁寒天斜面培養 拡布状に生育する。 （３）肉汁液体培養 生育は弱く、わずかに混濁と沈渣を生じ、表面に不完全
   なリングを形成する。 （４）肉汁ゼラチン穿刺培養 表面のみ育成し、ゼラチンの液化は認められない。 （５）リトマスミルク 凝固は認められず、酸、アルカリの産生も認められな
   い。 （６）グルコース・肉汁液体培地による嫌気的生育は認
   められない。 （７）硝酸塩からの嫌気ガスの生成 ガスは生成しない。 Ｃ．生理学的性質 （１）硝酸塩の還元 還元する （２）脱窒反応 陰性 （３）ＶＰテスト 陰性 （４）インドールの生成 陰性 （５）硫化水素の生成 陰性 （６）デンプンの加水分解 陽性 （７）クエン酸の利用 利用しない （８）無機窒素源の利用 利用する （９）色素の生成 産生しない （１０）ゼラチンとカゼインの加水分解 分解しない （１１）ウレアーゼ 陽性 （１２）オキシダーゼ 陰性 （１３）カタラーゼ 陰性 （１４）酸素に対する態度 好気性 （１５）生育の範囲 温度：３０〜７５℃（至適５５〜６０℃） ｐＨ：５．５〜８．０（至適ｐＨ６〜６．５） （１６）リゾチームに対する抵抗性 無 （１７）アザイドに対する抵抗性 有 （１８）糖類に対する態度 Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、
   Ｄ−フラクトース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−トレハロー
   ス、マルトース、蔗糖、乳糖、メリビオース、ラフィノ
   ース、セロビオース、グリセリン、Ｄ−マンニットから
   酸を生成し、ガスは生成しない。