JPH0571233B2 - - Google Patents
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- JPH0571233B2 JPH0571233B2 JP60128580A JP12858085A JPH0571233B2 JP H0571233 B2 JPH0571233 B2 JP H0571233B2 JP 60128580 A JP60128580 A JP 60128580A JP 12858085 A JP12858085 A JP 12858085A JP H0571233 B2 JPH0571233 B2 JP H0571233B2
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- antibiotic
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- absorption spectrum
- compound
- producing
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
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- Chemical & Material Sciences (AREA)
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
〔産業上の利用分野〕
本発明は、キタサトスポリア
(Kitasatosporia)属に属する微生物によつて生
産され、抗腫瘍活性及び抗菌活性を有する新規抗
生物質並びにその製造方法に関する。 〔従来の技術〕 抗腫瘍活性及び抗菌活性を有する抗生物質とし
ては、アドリアマイシン、アクラシノマイシン等
のアントラサイクリン系のものを中心に多数の有
用な化合物が提案されている。しかし、多種多様
な癌を撲滅するには更に有用な化合物の提供が待
たれている。 この観点から提案され公知となつている化合物
のうち、本発明の抗生物質MF730−N6に近似す
る理化学的性質を示す物質としては、PR−1350
物質(Clerocidin)が開示されている。(例えば、
特開昭57−120522号公報及びテトラヘドロン・レ
ター(Tetrahedron Letters)、vo1.25、No.4、
pp465〜468,1984)。そして該PR−1350物質は
酸化ジテルペン系に属し、次の各式
(Kitasatosporia)属に属する微生物によつて生
産され、抗腫瘍活性及び抗菌活性を有する新規抗
生物質並びにその製造方法に関する。 〔従来の技術〕 抗腫瘍活性及び抗菌活性を有する抗生物質とし
ては、アドリアマイシン、アクラシノマイシン等
のアントラサイクリン系のものを中心に多数の有
用な化合物が提案されている。しかし、多種多様
な癌を撲滅するには更に有用な化合物の提供が待
たれている。 この観点から提案され公知となつている化合物
のうち、本発明の抗生物質MF730−N6に近似す
る理化学的性質を示す物質としては、PR−1350
物質(Clerocidin)が開示されている。(例えば、
特開昭57−120522号公報及びテトラヘドロン・レ
ター(Tetrahedron Letters)、vo1.25、No.4、
pp465〜468,1984)。そして該PR−1350物質は
酸化ジテルペン系に属し、次の各式
以上の如く、従来技術は、抗腫瘍性、抗菌活性
を有する新たな類に属する抗生物質を提供するも
のであるが、癌種の多様性を考慮すると、抗腫瘍
性物質の提供に対する要望が止むものではない。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明者らは、従来より有用な抗生物質の開
発、実用化研究を促進してきたが、本発明もかか
る研究の一端として、従来の文献未載の新規抗生
物質MF730−N6が実験動物の各種の腫瘍細胞に
対して、インビトロ(invitro)及びインビボ
(invivo)で強い抗腫瘍性を有し、かつ、グラム
陽性菌及びグラム陰性菌の発育を強く阻止するこ
とを見出し完成したのものである。 即ち、本発明によれば抗生物質MF730−N6は
以下に示す理化学的性質及び生物学的性質により
特徴づけられる。 抗生物質MF730−N6の理化学的性質 抗生物質MF730−N6も上記公知PR−1350物質
と同様に互変異性の複合体よりなるものと考えら
れるので、測定条件、試料の調製方法によつて、
その理化学的性質は異なつてくる。以下に示す理
化学的性質は後述の実施例に示す方法によつて調
製した白色粉末に関するものである。 (1) 融点 抗生物質MF730−N6は通常、115〜119℃の範
囲内の融点を示す。 (2) 旋光度 上記粉末の0.46%クロロホルム溶液を調製した
直後の測定値は、〔α〕26 D=−28.5°である (3) 溶解性 抗生物質MF730−N6の上記白色粉末はメタノ
ール、エタノール、酢酸エチル又はベンゼンに易
溶である。 一方、水又はn−ヘキサンに実質的に溶解しな
い。 (4) 呈色反応 実施例1の方法で調製される白色粉末のメタノ
ール液をシリカゲルクロマトグラフイーにより展
開したとき、抗生物質MF730−N6に該当する画
分の呈色性は以下のとおりである。 塩化トリフエニルテトラゾリウム 陽性 アニスアルデヒド−硫酸反応 陽性 ヨウ素蒸気 陽性 フエーリング試薬 陽性 硝酸銀−アンモニア(トーレンス)試薬 陽性 8%リンモリブデン酸−エタノール 陽性 ドラーゲンドルフ試液 陰性 塩化第二鉄試液 陰性 (5) 赤外線吸収スペクトル KBr錠剤法によつて調製した抗生物質、
MF730−N6白色粉末の特徴的なな極大吸収は、
3430,2960,1705及び1635cm-1に吸収を有する。 (6) 1H−NMRスペクトル 抗生物質MF730−N6白色粉末を重メタノール
に溶解させた直後の測定値は、それぞれδ値とし
て、1.35(s),1.50〜1.80(m),1.75(brs),1.80〜2.3
0
(m),2.70〜2.85(m)及び5.30〜5.40(m)に特徴的な吸
収を示す。 (7) 紫外線吸収スペクトル 抗生物質MF730−N6白色粉末を、それぞれ下
記の溶媒系に溶解した直後に判定した場合の極大
吸収(nm)及びE1% 1cm値(内に示す)は、そ
れぞれ メタノール:203(60),280(3) 0.1N Hcl−メタノール:203(58),280(3) 0.01N NaOH−メタノール:207(124),267(48) を示す。 (8) 抗生物質MF730−N6の誘導体及びその理化
学的性質 実施例 1 ヴイテツヒ付加体の調製 MF730の粗精製物30mgの無水ベンゼン50ml溶
液にカルボメトキシメチレントリフエニルホスホ
ラン100mgを添加し、室温で18時間かきまぜた後、
反応混合物を30gのシリカゲルカラム(15mm×
240mm)に通導し、吸着させベンゼン−酢酸エチ
ル混合溶媒(混合比10:1)で溶出した。目的物
を有する画分を集めさらにセフアデツクスLH−
20(100ml)のカラム(20mm×350mm)で酢酸エチ
ル−メタノール混合溶媒(混合比2:1)を用い
精製し、付加体1,2の3:1平衡混合物125mg
を得た。 Rf:0.44(ベンゼン−アセトン1:1) 0.40(ベンゼン−酢酸エチル3:1) 主生成物 1 1H=NMR(CDCl3)δ: 0.99(3H,d,J=7.0Hz) 1.00(3H,s) 1.35(3H,s) 1.47(1H,dd,J=10.5Hz,15.0Hz) 1.50〜1.75(3H,m) 1.76(4H,brs) 1.95〜2.10(2H,m) 2.25(1H,brs) 2.64(1H,dd,J=2.0Hz,12.0Hz) 2.85(1H,d,J=5.0Hz) 3.17(1H,d,J=5.0Hz) 3.66(1H,d,J=4.0Hz) 3.79(3H,s) 3.80(3H,s) 4.20(1H,brd,J=13.0Hz) 4.27(1H,dd,J=4.0Hz,14.0Hz) 5.35(1H,br) 6.18(1H,s) 6.38(1H,d,J=16.2Hz) 8.47(1H,d,J=16.2Hz) 副生成物 2 0.84(3H,s) 0.89(3H,s) 1.26(3H,d,J=7.0Hz) 1.46(1H,dd,J=9.5Hz,15.0Hz) 1.50〜2.75(4H,m) 1.81(3H,brs) 1.95〜2.10(2H,m) 2.18(1H,brs) 2.80(1H,q,J=7.0Hz) 2.85(1H,d,J=5.0Hz) 3.16(1H,d,J=5.0Hz) 3.79(3H,s) 3.81(3H,s) 3.85(1H,d,J=5.0Hz) 4.03(1H,brd,J=9.5Hz) 4.38(1H,d,J=5.0Hz) 5.23(1H,br) 6.12(1H,s) 6.37(1H,d,J=16.2Hz) 8.43(1H,d,J=16.2Hz) 実験例 2 P−ブロモベンゾイル体の調製 化合物1,2の混合物10mgを無水ピリジン1mlに
溶解し、P−ブロモベンゾイルクロリド20mgを添
加し、室温で18時間かきまぜた。反応混合物を、
減圧下濃縮し、残渣を酢酸エチル30mlに溶解し、
飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和塩化ナト
リウム水溶液で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾
燥し、減圧下、溶媒を留去した。この残渣を10g
のシリカゲルカラム(15mm×105mm)に展開溶媒
としてベンゼン−酢酸エチル混合溶媒(混合比
20:1)を用い精製し、P−ブロモベンゾイル体
38.2mgを得た。 Rf=0.34(ベンゼン−酢酸エチル5:1) 〔α〕20 D−66.5°(C0.2CHcl3) UVλCH3OH naxnm(ε);247(27700),268(17100) IRνCHCL 3naxcm-12950,1720,1590,1280,1175 FD−MS(m/z);660,658(M+) HI−MS(m/z);660,1707(C33H39O9Br)
658,1768(C33H39O9Br*) H=NMR(CDCl3)δ: 0.88(3H,d,J=7.0Hz) 1.04(3H,s) 1.39(3H,s) 1.55(1H,dd,J=10.0Hz,15.0Hz) 1.66(1H,d,J=15.0Hz) 1.6(1H,br) 1.75(1H,br) 1.74(3H,br) 2.07(2H,br) 2.17(1H,dq,J=14.0Hz,7.0Hz) 2.29(1H,br) 2.84(1H,d,J=5.0Hz) 3.18(1H,d,J=5.0Hz) 2.91(1H,dd,J=1.5Hz,12.0Hz) 3.75(3H,s) 3.77(3H,s) 4.42(1H,brd,J=10.0Hz) 5.36(1H,br) 5.81(1H,d,J=14.0Hz) 6.18(1H,s) 6.45(1H,d,J=16.5Hz) 7.59(2H,d,J=8.5Hz) 7.94(2H,d,J=8.5Hz) 8.40(1H,dd,J=1.0Hz,16.5Hz) 以上本発明の抗生物質MF730−N6は、公知の
PR−1350物質に近似するものであるが、4個の
メチル基及び2個の水酸基を有する点で明瞭に異
なり、新規な化合物であることが明らかである。 抗生物質MF730−N6の生物学的性質 (1) 抗菌スペクトル 抗生物質MF730−N6の普通栄養寒天板上での
各種細菌に対する最低発育阻止濃度は次の第1表
に示すとおりである。
を有する新たな類に属する抗生物質を提供するも
のであるが、癌種の多様性を考慮すると、抗腫瘍
性物質の提供に対する要望が止むものではない。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明者らは、従来より有用な抗生物質の開
発、実用化研究を促進してきたが、本発明もかか
る研究の一端として、従来の文献未載の新規抗生
物質MF730−N6が実験動物の各種の腫瘍細胞に
対して、インビトロ(invitro)及びインビボ
(invivo)で強い抗腫瘍性を有し、かつ、グラム
陽性菌及びグラム陰性菌の発育を強く阻止するこ
とを見出し完成したのものである。 即ち、本発明によれば抗生物質MF730−N6は
以下に示す理化学的性質及び生物学的性質により
特徴づけられる。 抗生物質MF730−N6の理化学的性質 抗生物質MF730−N6も上記公知PR−1350物質
と同様に互変異性の複合体よりなるものと考えら
れるので、測定条件、試料の調製方法によつて、
その理化学的性質は異なつてくる。以下に示す理
化学的性質は後述の実施例に示す方法によつて調
製した白色粉末に関するものである。 (1) 融点 抗生物質MF730−N6は通常、115〜119℃の範
囲内の融点を示す。 (2) 旋光度 上記粉末の0.46%クロロホルム溶液を調製した
直後の測定値は、〔α〕26 D=−28.5°である (3) 溶解性 抗生物質MF730−N6の上記白色粉末はメタノ
ール、エタノール、酢酸エチル又はベンゼンに易
溶である。 一方、水又はn−ヘキサンに実質的に溶解しな
い。 (4) 呈色反応 実施例1の方法で調製される白色粉末のメタノ
ール液をシリカゲルクロマトグラフイーにより展
開したとき、抗生物質MF730−N6に該当する画
分の呈色性は以下のとおりである。 塩化トリフエニルテトラゾリウム 陽性 アニスアルデヒド−硫酸反応 陽性 ヨウ素蒸気 陽性 フエーリング試薬 陽性 硝酸銀−アンモニア(トーレンス)試薬 陽性 8%リンモリブデン酸−エタノール 陽性 ドラーゲンドルフ試液 陰性 塩化第二鉄試液 陰性 (5) 赤外線吸収スペクトル KBr錠剤法によつて調製した抗生物質、
MF730−N6白色粉末の特徴的なな極大吸収は、
3430,2960,1705及び1635cm-1に吸収を有する。 (6) 1H−NMRスペクトル 抗生物質MF730−N6白色粉末を重メタノール
に溶解させた直後の測定値は、それぞれδ値とし
て、1.35(s),1.50〜1.80(m),1.75(brs),1.80〜2.3
0
(m),2.70〜2.85(m)及び5.30〜5.40(m)に特徴的な吸
収を示す。 (7) 紫外線吸収スペクトル 抗生物質MF730−N6白色粉末を、それぞれ下
記の溶媒系に溶解した直後に判定した場合の極大
吸収(nm)及びE1% 1cm値(内に示す)は、そ
れぞれ メタノール:203(60),280(3) 0.1N Hcl−メタノール:203(58),280(3) 0.01N NaOH−メタノール:207(124),267(48) を示す。 (8) 抗生物質MF730−N6の誘導体及びその理化
学的性質 実施例 1 ヴイテツヒ付加体の調製 MF730の粗精製物30mgの無水ベンゼン50ml溶
液にカルボメトキシメチレントリフエニルホスホ
ラン100mgを添加し、室温で18時間かきまぜた後、
反応混合物を30gのシリカゲルカラム(15mm×
240mm)に通導し、吸着させベンゼン−酢酸エチ
ル混合溶媒(混合比10:1)で溶出した。目的物
を有する画分を集めさらにセフアデツクスLH−
20(100ml)のカラム(20mm×350mm)で酢酸エチ
ル−メタノール混合溶媒(混合比2:1)を用い
精製し、付加体1,2の3:1平衡混合物125mg
を得た。 Rf:0.44(ベンゼン−アセトン1:1) 0.40(ベンゼン−酢酸エチル3:1) 主生成物 1 1H=NMR(CDCl3)δ: 0.99(3H,d,J=7.0Hz) 1.00(3H,s) 1.35(3H,s) 1.47(1H,dd,J=10.5Hz,15.0Hz) 1.50〜1.75(3H,m) 1.76(4H,brs) 1.95〜2.10(2H,m) 2.25(1H,brs) 2.64(1H,dd,J=2.0Hz,12.0Hz) 2.85(1H,d,J=5.0Hz) 3.17(1H,d,J=5.0Hz) 3.66(1H,d,J=4.0Hz) 3.79(3H,s) 3.80(3H,s) 4.20(1H,brd,J=13.0Hz) 4.27(1H,dd,J=4.0Hz,14.0Hz) 5.35(1H,br) 6.18(1H,s) 6.38(1H,d,J=16.2Hz) 8.47(1H,d,J=16.2Hz) 副生成物 2 0.84(3H,s) 0.89(3H,s) 1.26(3H,d,J=7.0Hz) 1.46(1H,dd,J=9.5Hz,15.0Hz) 1.50〜2.75(4H,m) 1.81(3H,brs) 1.95〜2.10(2H,m) 2.18(1H,brs) 2.80(1H,q,J=7.0Hz) 2.85(1H,d,J=5.0Hz) 3.16(1H,d,J=5.0Hz) 3.79(3H,s) 3.81(3H,s) 3.85(1H,d,J=5.0Hz) 4.03(1H,brd,J=9.5Hz) 4.38(1H,d,J=5.0Hz) 5.23(1H,br) 6.12(1H,s) 6.37(1H,d,J=16.2Hz) 8.43(1H,d,J=16.2Hz) 実験例 2 P−ブロモベンゾイル体の調製 化合物1,2の混合物10mgを無水ピリジン1mlに
溶解し、P−ブロモベンゾイルクロリド20mgを添
加し、室温で18時間かきまぜた。反応混合物を、
減圧下濃縮し、残渣を酢酸エチル30mlに溶解し、
飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和塩化ナト
リウム水溶液で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾
燥し、減圧下、溶媒を留去した。この残渣を10g
のシリカゲルカラム(15mm×105mm)に展開溶媒
としてベンゼン−酢酸エチル混合溶媒(混合比
20:1)を用い精製し、P−ブロモベンゾイル体
38.2mgを得た。 Rf=0.34(ベンゼン−酢酸エチル5:1) 〔α〕20 D−66.5°(C0.2CHcl3) UVλCH3OH naxnm(ε);247(27700),268(17100) IRνCHCL 3naxcm-12950,1720,1590,1280,1175 FD−MS(m/z);660,658(M+) HI−MS(m/z);660,1707(C33H39O9Br)
658,1768(C33H39O9Br*) H=NMR(CDCl3)δ: 0.88(3H,d,J=7.0Hz) 1.04(3H,s) 1.39(3H,s) 1.55(1H,dd,J=10.0Hz,15.0Hz) 1.66(1H,d,J=15.0Hz) 1.6(1H,br) 1.75(1H,br) 1.74(3H,br) 2.07(2H,br) 2.17(1H,dq,J=14.0Hz,7.0Hz) 2.29(1H,br) 2.84(1H,d,J=5.0Hz) 3.18(1H,d,J=5.0Hz) 2.91(1H,dd,J=1.5Hz,12.0Hz) 3.75(3H,s) 3.77(3H,s) 4.42(1H,brd,J=10.0Hz) 5.36(1H,br) 5.81(1H,d,J=14.0Hz) 6.18(1H,s) 6.45(1H,d,J=16.5Hz) 7.59(2H,d,J=8.5Hz) 7.94(2H,d,J=8.5Hz) 8.40(1H,dd,J=1.0Hz,16.5Hz) 以上本発明の抗生物質MF730−N6は、公知の
PR−1350物質に近似するものであるが、4個の
メチル基及び2個の水酸基を有する点で明瞭に異
なり、新規な化合物であることが明らかである。 抗生物質MF730−N6の生物学的性質 (1) 抗菌スペクトル 抗生物質MF730−N6の普通栄養寒天板上での
各種細菌に対する最低発育阻止濃度は次の第1表
に示すとおりである。
【表】
【表】
(2) 抗腫瘍活性
抗生物質MF730−N6のマウス白血病L1210及
びマウスエーリツヒ腹水癌(EAC)に対する治
療効果は、第2表に示すとおりである。
びマウスエーリツヒ腹水癌(EAC)に対する治
療効果は、第2表に示すとおりである。
【表】
治療マウスの生存日数×
100
* 延命率%=
100
* 延命率%=
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 下記の理化学的性質 A 融点 115〜119℃ B 溶液を調整直後測定した旋光度 〔α〕26 D=−28.5°(C=0.46、クロロホルム) C 溶解性 メタノール,エタノール,酢酸エチル,ベンゼ
ン D 呈色反応 塩化トリフエニルテトラゾリウム反応 陽性 アニスアルデヒド−硫酸反応 陽性 ヨウ素蒸気 陽性 フエーリング試薬 陽性 硝酸銀−アンモニア(トーレンス)試薬 陽性 8%リンモリブデン酸−エタノール 陽性 ドラーゲンドルフ試液 陰性 塩化第二鉄試液 陰性 E 紫外線吸収スペクトル λCH3OH nax(E1% 1cm)=203nm(60),280nm(3) F 赤外線吸収スペクトル KBr錠剤法による赤外線吸収スペクトルは下
記の特性極大吸収波数を示す。 3430,2960,1705及び1635cm-1に明瞭な吸収を
示す。 G 1H−NMRスペクトル(CD3OD)δ値 1.35(s)、1.50〜1.80(m)、1.75(brs)、1.80〜2.30
(m)、2.70〜2.85(m)、5.30〜5.40(m) を有することを特徴とする抗腫瘍活性及び抗菌活
性を有する抗生物資MF730−N6。 2 キタサトスポリア(Kitasatosporia)属に属
し、特許請求の範囲第1項記載の抗生物質
MF730−N6生産菌を栄養培地に培養し、培養物
から該抗生物質を採取することを特徴とする抗生
物質MF730−N6の製造方法。
Priority Applications (9)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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