JPH0573400B2 - - Google Patents
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- JPH0573400B2 JPH0573400B2 JP59154750A JP15475084A JPH0573400B2 JP H0573400 B2 JPH0573400 B2 JP H0573400B2 JP 59154750 A JP59154750 A JP 59154750A JP 15475084 A JP15475084 A JP 15475084A JP H0573400 B2 JPH0573400 B2 JP H0573400B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reagent
- phosphotransacetylase
- che
- coenzyme
- acetylcholine
- Prior art date
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は、コリンエステラーゼ（以下ChEと略
す）定量用試薬に関するものである。 現在臨床検査室などで用いられているChEの定
量方法には、 (1) アセチルコリンを基質として、PH変化を測定
する方法。 (2) 基質にチオコリンエステルを用い、遊離する
SH基を測定する方法。 (3) ベンゾイルコリンなどを基質とし、遊離する
コリンをコリンオキシダーゼを用い、H2O2と
して測定する方法。 などがある。これらのうち、(1)の方法が古くから
検査室に取り入れられている標準的な方法である
が、至適PHを維持できないとか、PH変化が必ずし
も指示薬の変色程度と平行しないことなどのため
に精度が悪く、(2)、(3)の方法にとつてかわられつ
つあるのが現状である。しかし、(2)では共存SH
化合物による誤差、(3)ではH2O2定量にまつわる
諸問題や発色系のフエノールによる妨害などの問
題があり、現在のところいずれも満足できるまで
には至つていない。 このような観点から、特開昭58−155099号公報
には、アセチルコリン、酢酸キナーゼ、アデノシ
ン三リン酸を含有するChE定量用試薬が提案され
ている。この試薬は精度が優れ、血中成分の影響
を受けないなど試薬としての高い性能を有してい
る。 しかしながら、ChE活性値が高い検体（血清）
を用い、これを生理的食塩水などで順次希釈して
作成する希釈系列のChE活性値を測定し、得られ
たChE活性値と血清の希釈率との相関を調べると
いわゆる血清希釈テストにおいて、ChE活性値が
約4000U／Ｌ付近から以上の領域で相関からはず
れる現象が認められ、この場合、検体を希釈して
再度測定しなければならない。また、この試薬
は、30℃における正常値範囲の上限が約3000U／
Ｌであるが、一般的に測定範囲の上限として正常
値上限の２倍程度が望ましいとされていることか
ら、約6000U／Ｌまでの測定範囲が強く要望され
ているのである。 本発明者らは、このような実状に鑑み、さらに
鋭意研究を重ねた結果、ChEの活性測定中に消費
されることなく蓄積されるアセチルリン酸が悪影
響を及ぼしていることを見出し、このアセチルリ
ン酸を消去するために、ホスホトランスアセチラ
ーゼとコエンザイム−Ａを含有せしめると、試薬
の測定範囲の上限が飛躍的に上昇するという事実
を見出し、本発明に到達したのである。 すなわち、本発明は、基質としてのアセチルコ
リンと、コリンエステラーゼの作用で生成する酢
酸をアデノシン二リン酸とアセチルリン酸に変換
するためのアデノシン三リン酸及び酢酸キナーゼ
と、変換したアデノシン二リン酸を還元型ニコチ
ンアミド−アデニン・ジヌクレオチドの吸収の減
少に導くためのピルビン酸キナーゼ及び乳酸脱水
素酵素と、変換したアセチルリン酸を消去するた
めのホスホトランスアセチラーゼ及びコエンザイ
ム−Ａとからなることを特徴とするChE定量用試
薬である。 本発明の試薬について説明すると、基質として
アセチルコリンを使用し、生体資料中のChEを作
用させると、基質は、酢酸とコリンとに分解す
る。ここに、酢酸キナーゼを作用させると、アデ
ノシン三リン酸（以下ATPという。）を補基質と
して酢酸はアセチルリン酸に変化する。この反応
式を下記に示す。 アセチルコリン＋H2OChE ―――→ 酢酸＋コリン …… 酢酸＋ATP酢酸キナーゼ ――――――――→ アセチルリン酸＋アデノシン二リン酸 …… 次いで、ここで生成したアセチルリン酸又はア
デノシン二リン酸（以下ADPという。）を定量す
ればChEの定量は完了するのである。 反応式で生成するアセチルリン酸を定量する
場合には、コエンザイム−Ａとホスホトランスア
セチラーゼを作用させると、アセチルコエンザイ
ム−Ａに変換し、その生成量を紫外部（233nｍ）
の吸光度として測定するか、あるいは生成するリ
ン酸を通常の方法で定量することで可能となる。
その反応を下記に示す。 アセチルリン酸＋コエンザイム−Ａホスホトランスアセ
チラーゼ ――――――――――――――――→ アセチルコエンザイム−Ａ＋リン酸 …… 上記反応式による測定は、紫外部領域では不
安定な波長（233nｍ）で測定しなければならな
い、あるいは、リン酸を定量する方法は血清中に
存在するリン酸の影響を受けるなどの欠点があ
り、一般的ではない。 一方、反応式により生成したADPは、以下
の反応式に従つて、ピルビン酸キナーゼと乳酸脱
水素酵素との共役酵素系により測定することがで
きる。この場合の反応式を下記に示す。 ADP＋ホスホエノールピルビン酸ピルビン酸キナー
ゼ ―――――――――――――→ ATP＋ピルビン酸 …… ピルビン酸＋NADH乳酸脱水素酵素 ――――――――――→ 乳酸＋NAD+ …… （但し、NADHは還元型β−ニコチンアミド−
アデニン・ジヌクレオド、NAD+は、酸化型β−
ニコチンアミド−アデニン・ジヌクレオドを表
す。） 上記反応式、で示された方法は、血清中共
存物質による影響を受けにくい紫外部吸収
（340nｍ）減少法であるため、コリンエステラー
ゼ測定法として望ましく、本測定原理に基づくコ
リンエステラーゼ定量用試薬は、極めて容易に高
精度の定量を行うことができる。また、ピルビン
酸キナーゼの作用により、生成ADPをATPに再
生することができるので、酢酸キナーゼの酢酸に
対する作用が増強され、極めて高感度の測定が可
能となるものである。 さらに本発明において、反応式により生成し
たアセチルリン酸を消去するために、この反応系
に反応式に示したホスホトランスアセチラーゼ
とコエンザイム−Ａを共存させるものである。こ
の反応で生成するアセチルコエンザイム−Ａは、
紫外部領域に吸収をもつが、その吸収極大は
233nｍであり、NADHによる340nｍにおける紫
外部吸収の減少を測定する本測定系に何ら悪影響
を及ぼさない。また、生成するリン酸も本測定系
に何ら悪影響を及ぼさない。これにより、酢酸キ
ナーゼ、ピルビン酸キナーゼ及び乳酸脱水素酵素
の共役酵素系を用いるコリンエステラーゼ定量用
試薬の性能を大幅に向上させることが可能とな
る。 本発明でいうホスホトランスアセチラーゼと
は、常用名であり、正式にはアセチルコエンザイ
ム−Ａ；オルソホスフエイトトランスフエラーゼ
（EC2.3.1.8）である。 本発明を実施するためのホスホトランスアセチ
ラーゼとしては、微生物由来の各種のものを使用
することができるが、安定性が良好であるバチル
ス・ステアロサーモフイルス、ストレプトマイセ
ス・サーモアセチクム、アクロモバクタ−Ｖ−２
などのような好熱菌の産生する耐熱性のホスホト
ランスアセチラーゼを使用するのが有利である。
特にこれらの中では、精製の容易さ、比活性の高
さなどから、バチルス・ステアロサーモフイルス
からのものが最も好ましい。 本発明の試薬は、例えば特開昭58−155099号公
報に記載の試薬にホスホトランスアセチラーゼと
コエンザイム−Ａとを含有せしめるが、その使用
量としては、例えばホスホトランスアセチラーゼ
は１〜100U／mlであればよく、５〜50U／mlが
好ましい。また、コエンザイム−Ａは0.005〜１
ｍＡであればよく、0.01〜0.5ｍＭが好ましい。
その他の試薬の使用量としては、アセチルコリン
20〜200ｍＭ、酢酸キナーゼ５〜100U／ml、
ATP1.5〜15ｍＭ、ピルビン酸キナーゼ３〜
50U／ml、乳酸脱水素酵素１〜20U／ml、ホスホ
エノールピルビン酸0.1〜２ｍＭ、NADH0.1〜１
ｍＭ程度が適当である。 本発明の反応温度としては、通常の臨床化学検
査などに用いる温度が好適であり、例えば30℃の
温度で好都合に使用することができる。 また、本発明を実施するにあたつて、上記の試
薬構成成分すべてを一つの試薬としても、支障な
く使用することができるが、試薬構成成分を安定
させるため、酢酸キナーゼ、ピルビン酸キナー
ゼ、乳酸脱水素酵素、ホスホトランスアセチラー
ゼ、ATP、ホスホエノールピルビン酸、
NADH、マグネシウム塩を含有する第一試薬と、
アセチルコリン、コエンザイム−Ａを含有する第
二試薬とから構成して使用することが望ましい。
そのときに、それぞれのPHは、第一試薬において
は、NADHに由来する340nｍにおける吸光度の
安定性のためにPH8.0〜10.0、第二試薬において
はアセチルコリン、コエンザイム−Ａの安定性の
ためにPH3.5〜5.5であることが望ましい。 さらには、所定の比率で第一、第二試薬を混合
した時にChEの至適PHであるPH7.0〜8.0になるよ
う第一、第二試薬の緩衝剤濃度を設定することが
望ましい。 本発明に使用する緩衝剤として、第一試薬にお
いては、例えばトリス（ヒドロキシメチル）アミ
ノメタン−HCl、ｂリス（ヒドロキシメチル）ア
ミノメタン−マレイン酸、Ｎ−２−ヒドロキシエ
チルピペラジン−N′−エタンスルホン酸−
NaOH、グリシン−KOH、トリエタノールアミ
ン塩酸−NaOHなば通常の使用範囲がPH8.0〜
10.0のものであればよい。 また、第二試薬に使用する緩衝剤としては、例
えば、フタル酸水素カリウム−HCl、クエン酸−
クエン酸ナトリウム、マレイン酸−NaOH、グ
リシン−HCl，３，3′−ジメチルグルタル酸−
NaOH、乳酸−乳酸ナトリウムなど通常の使用
範囲がPH3.5〜5.5のものであればよい。 次に本発明を実施例により具体的に説明する。 実施例 １ 表１に示す第一試薬及び第二試薬からなるChE
定量用試薬を調製し、ChE活性値が6500U／Ｌの
標準血清を原液とした血清希釈テスト（標準血清
を生理食塩水で希釈し、2/10ずつ濃度の異なる血
清をサンプルとして調製した）を行つた。試薬
は、第一試薬2.4mlと第二試薬0.6mlを混合して、
最終反応PHが7.5となるように緩衝剤濃度を設定
した。 ChEの測定は、第一試薬2.4mlに対し、各希釈
倍率の標準血清サンプル0.02mlを加え、37℃で５
分間保温後、第二試薬0.6mlを加え、ChEの反応
を開始し、３分間にわたつてNADHの340nｍに
おける吸収減少を追跡した。ChEの活性は、１分
間当たりの340nｍにおける吸収減少速度を求め、
通常の計算方法からChE活性を算出した。 その結果を第１図に示すように6500U／Ｌまで
ChE活性測定値とサンプルの希釈系列の間にきれ
いな直線関係が得られた。このことは、本発明に
よる試薬の測定範囲が6500U／Ｌまであることを
示している。
す）定量用試薬に関するものである。 現在臨床検査室などで用いられているChEの定
量方法には、 (1) アセチルコリンを基質として、PH変化を測定
する方法。 (2) 基質にチオコリンエステルを用い、遊離する
SH基を測定する方法。 (3) ベンゾイルコリンなどを基質とし、遊離する
コリンをコリンオキシダーゼを用い、H2O2と
して測定する方法。 などがある。これらのうち、(1)の方法が古くから
検査室に取り入れられている標準的な方法である
が、至適PHを維持できないとか、PH変化が必ずし
も指示薬の変色程度と平行しないことなどのため
に精度が悪く、(2)、(3)の方法にとつてかわられつ
つあるのが現状である。しかし、(2)では共存SH
化合物による誤差、(3)ではH2O2定量にまつわる
諸問題や発色系のフエノールによる妨害などの問
題があり、現在のところいずれも満足できるまで
には至つていない。 このような観点から、特開昭58−155099号公報
には、アセチルコリン、酢酸キナーゼ、アデノシ
ン三リン酸を含有するChE定量用試薬が提案され
ている。この試薬は精度が優れ、血中成分の影響
を受けないなど試薬としての高い性能を有してい
る。 しかしながら、ChE活性値が高い検体（血清）
を用い、これを生理的食塩水などで順次希釈して
作成する希釈系列のChE活性値を測定し、得られ
たChE活性値と血清の希釈率との相関を調べると
いわゆる血清希釈テストにおいて、ChE活性値が
約4000U／Ｌ付近から以上の領域で相関からはず
れる現象が認められ、この場合、検体を希釈して
再度測定しなければならない。また、この試薬
は、30℃における正常値範囲の上限が約3000U／
Ｌであるが、一般的に測定範囲の上限として正常
値上限の２倍程度が望ましいとされていることか
ら、約6000U／Ｌまでの測定範囲が強く要望され
ているのである。 本発明者らは、このような実状に鑑み、さらに
鋭意研究を重ねた結果、ChEの活性測定中に消費
されることなく蓄積されるアセチルリン酸が悪影
響を及ぼしていることを見出し、このアセチルリ
ン酸を消去するために、ホスホトランスアセチラ
ーゼとコエンザイム−Ａを含有せしめると、試薬
の測定範囲の上限が飛躍的に上昇するという事実
を見出し、本発明に到達したのである。 すなわち、本発明は、基質としてのアセチルコ
リンと、コリンエステラーゼの作用で生成する酢
酸をアデノシン二リン酸とアセチルリン酸に変換
するためのアデノシン三リン酸及び酢酸キナーゼ
と、変換したアデノシン二リン酸を還元型ニコチ
ンアミド−アデニン・ジヌクレオチドの吸収の減
少に導くためのピルビン酸キナーゼ及び乳酸脱水
素酵素と、変換したアセチルリン酸を消去するた
めのホスホトランスアセチラーゼ及びコエンザイ
ム−Ａとからなることを特徴とするChE定量用試
薬である。 本発明の試薬について説明すると、基質として
アセチルコリンを使用し、生体資料中のChEを作
用させると、基質は、酢酸とコリンとに分解す
る。ここに、酢酸キナーゼを作用させると、アデ
ノシン三リン酸（以下ATPという。）を補基質と
して酢酸はアセチルリン酸に変化する。この反応
式を下記に示す。 アセチルコリン＋H2OChE ―――→ 酢酸＋コリン …… 酢酸＋ATP酢酸キナーゼ ――――――――→ アセチルリン酸＋アデノシン二リン酸 …… 次いで、ここで生成したアセチルリン酸又はア
デノシン二リン酸（以下ADPという。）を定量す
ればChEの定量は完了するのである。 反応式で生成するアセチルリン酸を定量する
場合には、コエンザイム−Ａとホスホトランスア
セチラーゼを作用させると、アセチルコエンザイ
ム−Ａに変換し、その生成量を紫外部（233nｍ）
の吸光度として測定するか、あるいは生成するリ
ン酸を通常の方法で定量することで可能となる。
その反応を下記に示す。 アセチルリン酸＋コエンザイム−Ａホスホトランスアセ
チラーゼ ――――――――――――――――→ アセチルコエンザイム−Ａ＋リン酸 …… 上記反応式による測定は、紫外部領域では不
安定な波長（233nｍ）で測定しなければならな
い、あるいは、リン酸を定量する方法は血清中に
存在するリン酸の影響を受けるなどの欠点があ
り、一般的ではない。 一方、反応式により生成したADPは、以下
の反応式に従つて、ピルビン酸キナーゼと乳酸脱
水素酵素との共役酵素系により測定することがで
きる。この場合の反応式を下記に示す。 ADP＋ホスホエノールピルビン酸ピルビン酸キナー
ゼ ―――――――――――――→ ATP＋ピルビン酸 …… ピルビン酸＋NADH乳酸脱水素酵素 ――――――――――→ 乳酸＋NAD+ …… （但し、NADHは還元型β−ニコチンアミド−
アデニン・ジヌクレオド、NAD+は、酸化型β−
ニコチンアミド−アデニン・ジヌクレオドを表
す。） 上記反応式、で示された方法は、血清中共
存物質による影響を受けにくい紫外部吸収
（340nｍ）減少法であるため、コリンエステラー
ゼ測定法として望ましく、本測定原理に基づくコ
リンエステラーゼ定量用試薬は、極めて容易に高
精度の定量を行うことができる。また、ピルビン
酸キナーゼの作用により、生成ADPをATPに再
生することができるので、酢酸キナーゼの酢酸に
対する作用が増強され、極めて高感度の測定が可
能となるものである。 さらに本発明において、反応式により生成し
たアセチルリン酸を消去するために、この反応系
に反応式に示したホスホトランスアセチラーゼ
とコエンザイム−Ａを共存させるものである。こ
の反応で生成するアセチルコエンザイム−Ａは、
紫外部領域に吸収をもつが、その吸収極大は
233nｍであり、NADHによる340nｍにおける紫
外部吸収の減少を測定する本測定系に何ら悪影響
を及ぼさない。また、生成するリン酸も本測定系
に何ら悪影響を及ぼさない。これにより、酢酸キ
ナーゼ、ピルビン酸キナーゼ及び乳酸脱水素酵素
の共役酵素系を用いるコリンエステラーゼ定量用
試薬の性能を大幅に向上させることが可能とな
る。 本発明でいうホスホトランスアセチラーゼと
は、常用名であり、正式にはアセチルコエンザイ
ム−Ａ；オルソホスフエイトトランスフエラーゼ
（EC2.3.1.8）である。 本発明を実施するためのホスホトランスアセチ
ラーゼとしては、微生物由来の各種のものを使用
することができるが、安定性が良好であるバチル
ス・ステアロサーモフイルス、ストレプトマイセ
ス・サーモアセチクム、アクロモバクタ−Ｖ−２
などのような好熱菌の産生する耐熱性のホスホト
ランスアセチラーゼを使用するのが有利である。
特にこれらの中では、精製の容易さ、比活性の高
さなどから、バチルス・ステアロサーモフイルス
からのものが最も好ましい。 本発明の試薬は、例えば特開昭58−155099号公
報に記載の試薬にホスホトランスアセチラーゼと
コエンザイム−Ａとを含有せしめるが、その使用
量としては、例えばホスホトランスアセチラーゼ
は１〜100U／mlであればよく、５〜50U／mlが
好ましい。また、コエンザイム−Ａは0.005〜１
ｍＡであればよく、0.01〜0.5ｍＭが好ましい。
その他の試薬の使用量としては、アセチルコリン
20〜200ｍＭ、酢酸キナーゼ５〜100U／ml、
ATP1.5〜15ｍＭ、ピルビン酸キナーゼ３〜
50U／ml、乳酸脱水素酵素１〜20U／ml、ホスホ
エノールピルビン酸0.1〜２ｍＭ、NADH0.1〜１
ｍＭ程度が適当である。 本発明の反応温度としては、通常の臨床化学検
査などに用いる温度が好適であり、例えば30℃の
温度で好都合に使用することができる。 また、本発明を実施するにあたつて、上記の試
薬構成成分すべてを一つの試薬としても、支障な
く使用することができるが、試薬構成成分を安定
させるため、酢酸キナーゼ、ピルビン酸キナー
ゼ、乳酸脱水素酵素、ホスホトランスアセチラー
ゼ、ATP、ホスホエノールピルビン酸、
NADH、マグネシウム塩を含有する第一試薬と、
アセチルコリン、コエンザイム−Ａを含有する第
二試薬とから構成して使用することが望ましい。
そのときに、それぞれのPHは、第一試薬において
は、NADHに由来する340nｍにおける吸光度の
安定性のためにPH8.0〜10.0、第二試薬において
はアセチルコリン、コエンザイム−Ａの安定性の
ためにPH3.5〜5.5であることが望ましい。 さらには、所定の比率で第一、第二試薬を混合
した時にChEの至適PHであるPH7.0〜8.0になるよ
う第一、第二試薬の緩衝剤濃度を設定することが
望ましい。 本発明に使用する緩衝剤として、第一試薬にお
いては、例えばトリス（ヒドロキシメチル）アミ
ノメタン−HCl、ｂリス（ヒドロキシメチル）ア
ミノメタン−マレイン酸、Ｎ−２−ヒドロキシエ
チルピペラジン−N′−エタンスルホン酸−
NaOH、グリシン−KOH、トリエタノールアミ
ン塩酸−NaOHなば通常の使用範囲がPH8.0〜
10.0のものであればよい。 また、第二試薬に使用する緩衝剤としては、例
えば、フタル酸水素カリウム−HCl、クエン酸−
クエン酸ナトリウム、マレイン酸−NaOH、グ
リシン−HCl，３，3′−ジメチルグルタル酸−
NaOH、乳酸−乳酸ナトリウムなど通常の使用
範囲がPH3.5〜5.5のものであればよい。 次に本発明を実施例により具体的に説明する。 実施例 １ 表１に示す第一試薬及び第二試薬からなるChE
定量用試薬を調製し、ChE活性値が6500U／Ｌの
標準血清を原液とした血清希釈テスト（標準血清
を生理食塩水で希釈し、2/10ずつ濃度の異なる血
清をサンプルとして調製した）を行つた。試薬
は、第一試薬2.4mlと第二試薬0.6mlを混合して、
最終反応PHが7.5となるように緩衝剤濃度を設定
した。 ChEの測定は、第一試薬2.4mlに対し、各希釈
倍率の標準血清サンプル0.02mlを加え、37℃で５
分間保温後、第二試薬0.6mlを加え、ChEの反応
を開始し、３分間にわたつてNADHの340nｍに
おける吸収減少を追跡した。ChEの活性は、１分
間当たりの340nｍにおける吸収減少速度を求め、
通常の計算方法からChE活性を算出した。 その結果を第１図に示すように6500U／Ｌまで
ChE活性測定値とサンプルの希釈系列の間にきれ
いな直線関係が得られた。このことは、本発明に
よる試薬の測定範囲が6500U／Ｌまであることを
示している。
【表】
比較例 １
表１に示した第一試薬中のホスホトランスアセ
チラーゼ及び第二試薬中のコエンザイム−Ａを除
いた試薬を調製し、実施例１と同様のサンプルを
用いて血清希釈テストを行つた。その結果を第２
図に示す。第２図から、ChE活性測定値とサンプ
ル希釈系列の間には、約4000U／Ｌまでの直線関
係しか得られず、比較例１による試薬では、測定
範囲が4000U／Ｌまでの性能にあることを示して
いる。 実施例 ２ 実施例１で示した各試薬組成成分を一つの試薬
として調製した。各試薬組成成分の濃度は以下の
通りである。 トリス（ヒドロキシメチル） 80ｍＭ アミノメタン−マレイン酸緩衝液（PH7.5） 硫酸マグネシウム 10ｍＭ 塩化カリウム 25ｍＭ 硫酸アンモニウム 10ｍＭ ATP ５ｍＭ ホスホエノールピルビン酸 １ｍＭ NADH 0.26ｍＭ コエンザイム−Ａ 0.01ｍＭ 酢酸キナーゼ（バチルス・ステアロサーモフイル
ス由来） 30U／ml ピルビン酸キナーゼ（ウサギ筋肉由来） 10U／ml 乳酸脱水素酵素（ウサギ筋肉由来） 5U／ml ホスホトランスアセチラーゼ（バチルス・ステア
ロサーモフイルス由来） 10U／ｍＭ 塩化アセチルコリン 60ｍＭ この反応試薬3.0mlを37℃、５分間保温した後、
実施例１で調製した血清サンプル0.02mlを加え、
ChEの反応を開始し、３分間にわたつて、
NADHの340nｍにおける吸収減少を追跡した。
実施例１と同様の血清希釈テストの結果、第１図
と同様の結果を得た。
チラーゼ及び第二試薬中のコエンザイム−Ａを除
いた試薬を調製し、実施例１と同様のサンプルを
用いて血清希釈テストを行つた。その結果を第２
図に示す。第２図から、ChE活性測定値とサンプ
ル希釈系列の間には、約4000U／Ｌまでの直線関
係しか得られず、比較例１による試薬では、測定
範囲が4000U／Ｌまでの性能にあることを示して
いる。 実施例 ２ 実施例１で示した各試薬組成成分を一つの試薬
として調製した。各試薬組成成分の濃度は以下の
通りである。 トリス（ヒドロキシメチル） 80ｍＭ アミノメタン−マレイン酸緩衝液（PH7.5） 硫酸マグネシウム 10ｍＭ 塩化カリウム 25ｍＭ 硫酸アンモニウム 10ｍＭ ATP ５ｍＭ ホスホエノールピルビン酸 １ｍＭ NADH 0.26ｍＭ コエンザイム−Ａ 0.01ｍＭ 酢酸キナーゼ（バチルス・ステアロサーモフイル
ス由来） 30U／ml ピルビン酸キナーゼ（ウサギ筋肉由来） 10U／ml 乳酸脱水素酵素（ウサギ筋肉由来） 5U／ml ホスホトランスアセチラーゼ（バチルス・ステア
ロサーモフイルス由来） 10U／ｍＭ 塩化アセチルコリン 60ｍＭ この反応試薬3.0mlを37℃、５分間保温した後、
実施例１で調製した血清サンプル0.02mlを加え、
ChEの反応を開始し、３分間にわたつて、
NADHの340nｍにおける吸収減少を追跡した。
実施例１と同様の血清希釈テストの結果、第１図
と同様の結果を得た。
第１図、第２図は標準血清の希釈倍率とChE活
性値との関係を示す図で、横軸に標準血清の希釈
倍率、縦軸にChE活性値を示す。
性値との関係を示す図で、横軸に標準血清の希釈
倍率、縦軸にChE活性値を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 基質としてのアセチルコリンと、コリンエス
テラーゼの作用で生成する酢酸をアデノシン二リ
ン酸とアセチルリン酸に変換するためのアデノシ
ン三リン酸及び酢酸キナーゼと、変換したアデノ
シン二リン酸を還元型ニコチンアミド−アデニ
ン・ジヌクレオチドの吸収の減少に導くためのピ
ルビン酸キナーゼ及び乳酸脱水素酵素と、変換し
たアセチルリン酸を消去するためのホスホトラン
スアセチラーゼ及びコエンザイム−Ａとからなる
ことを特徴とするコリンエステラーゼ定量用試
薬。 ２ ホスホトランスアセチラーゼが、耐熱性のホ
スホトランスアセチラーゼである特許請求の範囲
第１項記載の試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15475084A JPS6131099A (ja) | 1984-07-25 | 1984-07-25 | コリンエステラ−ゼ定量用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15475084A JPS6131099A (ja) | 1984-07-25 | 1984-07-25 | コリンエステラ−ゼ定量用試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6131099A JPS6131099A (ja) | 1986-02-13 |
| JPH0573400B2 true JPH0573400B2 (ja) | 1993-10-14 |
Family
ID=15591090
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15475084A Granted JPS6131099A (ja) | 1984-07-25 | 1984-07-25 | コリンエステラ−ゼ定量用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6131099A (ja) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58155099A (ja) * | 1982-03-12 | 1983-09-14 | Unitika Ltd | コリンエステラ−ゼ定量用試薬 |
-
1984
- 1984-07-25 JP JP15475084A patent/JPS6131099A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6131099A (ja) | 1986-02-13 |
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