JPH0573760B2 - - Google Patents
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- JPH0573760B2 JPH0573760B2 JP59032199A JP3219984A JPH0573760B2 JP H0573760 B2 JPH0573760 B2 JP H0573760B2 JP 59032199 A JP59032199 A JP 59032199A JP 3219984 A JP3219984 A JP 3219984A JP H0573760 B2 JPH0573760 B2 JP H0573760B2
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Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
本発明は抗腫瘍活性物質の新規製造方法に関す
る。 本発明者は、軟骨組織よりの粗抽出物はそのま
までは抗腫瘍活性を示さないが、水性溶媒で抽出
した後、親水性有機溶媒で沈澱せしめ分子量２〜
30万の画分を分離したところこれが抗腫瘍活性を
示すことを見出し、この発見に基づいて本発明を
完成するに至つた。すなわち、この物質は、上記
粗抽出物よりソマトメジン様成長因子CDF
（Cartilage−Derived Factor）を分離した残渣
より抽出精製されたものである。 本発明の出発物質として使用する動物軟骨は多
量に入手できるという点で胎児軟骨、特に牛胎児
軟骨が好ましい。 本発明の目的物質は水に可溶、親水性有機溶媒
に難溶であるが、出発物質より抽出するには、グ
アニジン等塩水溶液でPH５〜７程度の塩溶液に溶
解し、これにアセトン、エタノール等の親水性有
機溶媒を加えて再沈せしめ分取すればよい。 分子量２〜30万の画分を分離するには例えば膜
分画法を採用すればよい。 また、本発明の目的物質は血管内皮細胞増殖阻
害活性を有する。血管内皮細胞増殖阻害活性の測
定は公知の測定手段を利用すればよいが、本発明
では後述の方法により行つた。 なお、血管内皮細胞増殖阻害活性成分と抗腫瘍
活性成分が同一かどうか確認できていないが、上
記処理手段により得られ、かつ血管内皮細胞増殖
阻害活性を有する画分、例えば後述試料Ｄ、Ｆお
よびＧが抗腫瘍活性を有するものとして本発明の
目的物質となる。 具体的には例えば、牛胎児軟骨をスライスし水
性溶媒例えば塩水溶液中でホモジナイズし、アセ
トン分画（45〜65％程度沈澱）し、得られた沈澱
を上記塩水溶液中に再溶解し、膜分画（分子量２
〜30万）により分離すればよいが、さらにこれよ
り血管内皮細胞増殖阻害活性を有する物質を分離
することもできる。 又は、さらにジエチルアミノエチル（DEAE）
アガロースに吸着させ（PH７〜９）た後、食塩水
（0.25〜0.6M）で溶離すればよい。所望により透
析等常法の蛋白精製手段により精製し凍結乾燥し
保存することができる。 このようにして得られた凍結乾燥品は淡黄色の
粉末で、水に可溶である。水溶液のPH値は６〜７
である。 本発明で得られた物質を制癌剤として使用する
場合には、そのままあるいは適当な担体とともに
経口投与するか、生理食塩水に溶解して注射投与
することが考えられる。 本発明品は、生体由来であるため副作用が少な
く、大量に入手可能な動物軟骨を出発原料として
いるので、必要によりさらに精製して制癌剤とし
ての実用性が期待される。 以下、実施例により本発明を詳細に説明する。 実施例 血管内皮細胞増殖阻害活性の測定 血管内皮細胞、例えば牛肺動脈内皮細胞を通常
の方法、例えば直径６mm、96穴のマルチ培養プレ
ートに１穴当り５×103個細胞を0.1mlの20％牛胎
児血清含有最小必須培養液（Minimum
Essential Medium）中に懸濁し、播種し、５％
炭酸ガス通気下37℃で培養した。培養３日後培地
交換を行ない、試料溶液（試料を平衡塩類溶液に
溶解したもの）又は試料の溶解に用いた前記平衡
塩類溶液（対照）を添加し、これより22時間後、
3H−チミジン（終濃度1μC／ml）添加し、さら
に２時間後DNA画分へとり込まれた3H放射能を
計測し、「DNA合成」とする。試料および対照の
DNA合成値より、下記式により試料の阻害率を
求める。例を第１図に示した。 DNA合成阻害率（％） ＝（１−試料のDNA合成／対照のDNA合成）×100 ○：試料Ｇ、△：試料Ｆ １mlの培地に添加したとき阻害率50％を示すよ
うな試料を活性１単位とする。 又、培養プレート径を16mmとし、１穴当り２×
104個細胞を播種し、１日置きに培地交換を行な
い同様に１〜２週間培養したときの増殖細胞数に
及ぼす試料Ｄ（後述）の阻害作用を第２図に示し
た。 ●：試料D200μｇ／ml（終濃度）添加 ○：対照 実施例 (1) 牛胎児軟骨200ｇをスライスし、1Mグアニジ
ン塩酸−0.1M6−アミノ−ｎ−カプロン酸（PH
6.0）２中でポリトロンによりホモゲナイズ
した。４℃下48時間攪拌の後、8000rpm、20分
（４℃）遠心し得られた上清にアセトンを45％
（終濃度）添加し、０℃下20分放置した。 次いで、8000rpm、20分（４℃）遠心し得ら
れた上清にさらにアセトンを加え終濃度65％と
し再び０℃下20分放置後8000rpm、20分（４
℃）遠心した。得られた沈澱を50mlの蒸留水に
溶解し、蒸留水に対して、４℃下48時間透析を
行い、凍結乾燥の後４ｇのアセトン画分（試料
Ａ）を得た。 試料A3ｇを4Mグアニジン塩酸、0.01Mエチ
レンジアミン四酢酸（EDTA）、0.1M6−アミ
ノ−ｎ−カプロン酸（PH6.5）200mlに溶解し、
8000rpm20分（４℃）遠心し、得られた上清
を、1.0Kg／cm2加圧下、アミコン社製分子量30
万カツト限外濾過膜「XM−300」を通し、限
外濾過液を得た。さらに、2.0Kg／cm2加圧下、
東洋濾紙社製分子量２万カツト限外濾過膜
「UP20」を通して内液（分子量30万〜２万画
分）（試料Ｂ）限外濾過液（試料Ｃ）を得た。
試料Ｂを同様透析し、凍結乾燥し266mgの試料
Ｂ乾燥品を得た。 ICR雌マウス（５週令）の皮下にザルコーマ
ー180腫瘍細胞を移植し、担癌とした後、試料
ＡおよびＢ乾燥品をそれぞれ２mgを生理食塩水
に溶解したものおよび対照群として生理食塩水
のみを２回皮下投与し、腫瘍移植後５週間目の
腫瘍の短、長径より腫瘍体積を測定し次の式に
より腫瘍阻止率（I.R.）を求め、結果を表１に
示した。 I.R.＝〔対照群の腫瘍体積〕−〔試料投与群の腫
瘍体積〕／〔対照群の腫瘍体積〕×100％ 表１に示すように試料Ａは抗腫瘍活性を示さな
かつたのに対して、これにより精製した試料Ｂは
抗腫瘍活性を示した。 一方、試料ＢおよびＣについてソマトメジン活
性（Ｙ，Kato，Y.Nomura，M.Tsuji，H.
Ohmae，M.Kinoshita，S.Hamamoto and F.
Suzuki“Cartilage−Derived Factor（CDF）． Somato medin−Like Action on Cultured
Chodrocytes”Exp Cell Res.vol.132 P339−347
（1981））を測定したところ、試料Ｃにのみ活性が
認められた。
る。 本発明者は、軟骨組織よりの粗抽出物はそのま
までは抗腫瘍活性を示さないが、水性溶媒で抽出
した後、親水性有機溶媒で沈澱せしめ分子量２〜
30万の画分を分離したところこれが抗腫瘍活性を
示すことを見出し、この発見に基づいて本発明を
完成するに至つた。すなわち、この物質は、上記
粗抽出物よりソマトメジン様成長因子CDF
（Cartilage−Derived Factor）を分離した残渣
より抽出精製されたものである。 本発明の出発物質として使用する動物軟骨は多
量に入手できるという点で胎児軟骨、特に牛胎児
軟骨が好ましい。 本発明の目的物質は水に可溶、親水性有機溶媒
に難溶であるが、出発物質より抽出するには、グ
アニジン等塩水溶液でPH５〜７程度の塩溶液に溶
解し、これにアセトン、エタノール等の親水性有
機溶媒を加えて再沈せしめ分取すればよい。 分子量２〜30万の画分を分離するには例えば膜
分画法を採用すればよい。 また、本発明の目的物質は血管内皮細胞増殖阻
害活性を有する。血管内皮細胞増殖阻害活性の測
定は公知の測定手段を利用すればよいが、本発明
では後述の方法により行つた。 なお、血管内皮細胞増殖阻害活性成分と抗腫瘍
活性成分が同一かどうか確認できていないが、上
記処理手段により得られ、かつ血管内皮細胞増殖
阻害活性を有する画分、例えば後述試料Ｄ、Ｆお
よびＧが抗腫瘍活性を有するものとして本発明の
目的物質となる。 具体的には例えば、牛胎児軟骨をスライスし水
性溶媒例えば塩水溶液中でホモジナイズし、アセ
トン分画（45〜65％程度沈澱）し、得られた沈澱
を上記塩水溶液中に再溶解し、膜分画（分子量２
〜30万）により分離すればよいが、さらにこれよ
り血管内皮細胞増殖阻害活性を有する物質を分離
することもできる。 又は、さらにジエチルアミノエチル（DEAE）
アガロースに吸着させ（PH７〜９）た後、食塩水
（0.25〜0.6M）で溶離すればよい。所望により透
析等常法の蛋白精製手段により精製し凍結乾燥し
保存することができる。 このようにして得られた凍結乾燥品は淡黄色の
粉末で、水に可溶である。水溶液のPH値は６〜７
である。 本発明で得られた物質を制癌剤として使用する
場合には、そのままあるいは適当な担体とともに
経口投与するか、生理食塩水に溶解して注射投与
することが考えられる。 本発明品は、生体由来であるため副作用が少な
く、大量に入手可能な動物軟骨を出発原料として
いるので、必要によりさらに精製して制癌剤とし
ての実用性が期待される。 以下、実施例により本発明を詳細に説明する。 実施例 血管内皮細胞増殖阻害活性の測定 血管内皮細胞、例えば牛肺動脈内皮細胞を通常
の方法、例えば直径６mm、96穴のマルチ培養プレ
ートに１穴当り５×103個細胞を0.1mlの20％牛胎
児血清含有最小必須培養液（Minimum
Essential Medium）中に懸濁し、播種し、５％
炭酸ガス通気下37℃で培養した。培養３日後培地
交換を行ない、試料溶液（試料を平衡塩類溶液に
溶解したもの）又は試料の溶解に用いた前記平衡
塩類溶液（対照）を添加し、これより22時間後、
3H−チミジン（終濃度1μC／ml）添加し、さら
に２時間後DNA画分へとり込まれた3H放射能を
計測し、「DNA合成」とする。試料および対照の
DNA合成値より、下記式により試料の阻害率を
求める。例を第１図に示した。 DNA合成阻害率（％） ＝（１−試料のDNA合成／対照のDNA合成）×100 ○：試料Ｇ、△：試料Ｆ １mlの培地に添加したとき阻害率50％を示すよ
うな試料を活性１単位とする。 又、培養プレート径を16mmとし、１穴当り２×
104個細胞を播種し、１日置きに培地交換を行な
い同様に１〜２週間培養したときの増殖細胞数に
及ぼす試料Ｄ（後述）の阻害作用を第２図に示し
た。 ●：試料D200μｇ／ml（終濃度）添加 ○：対照 実施例 (1) 牛胎児軟骨200ｇをスライスし、1Mグアニジ
ン塩酸−0.1M6−アミノ−ｎ−カプロン酸（PH
6.0）２中でポリトロンによりホモゲナイズ
した。４℃下48時間攪拌の後、8000rpm、20分
（４℃）遠心し得られた上清にアセトンを45％
（終濃度）添加し、０℃下20分放置した。 次いで、8000rpm、20分（４℃）遠心し得ら
れた上清にさらにアセトンを加え終濃度65％と
し再び０℃下20分放置後8000rpm、20分（４
℃）遠心した。得られた沈澱を50mlの蒸留水に
溶解し、蒸留水に対して、４℃下48時間透析を
行い、凍結乾燥の後４ｇのアセトン画分（試料
Ａ）を得た。 試料A3ｇを4Mグアニジン塩酸、0.01Mエチ
レンジアミン四酢酸（EDTA）、0.1M6−アミ
ノ−ｎ−カプロン酸（PH6.5）200mlに溶解し、
8000rpm20分（４℃）遠心し、得られた上清
を、1.0Kg／cm2加圧下、アミコン社製分子量30
万カツト限外濾過膜「XM−300」を通し、限
外濾過液を得た。さらに、2.0Kg／cm2加圧下、
東洋濾紙社製分子量２万カツト限外濾過膜
「UP20」を通して内液（分子量30万〜２万画
分）（試料Ｂ）限外濾過液（試料Ｃ）を得た。
試料Ｂを同様透析し、凍結乾燥し266mgの試料
Ｂ乾燥品を得た。 ICR雌マウス（５週令）の皮下にザルコーマ
ー180腫瘍細胞を移植し、担癌とした後、試料
ＡおよびＢ乾燥品をそれぞれ２mgを生理食塩水
に溶解したものおよび対照群として生理食塩水
のみを２回皮下投与し、腫瘍移植後５週間目の
腫瘍の短、長径より腫瘍体積を測定し次の式に
より腫瘍阻止率（I.R.）を求め、結果を表１に
示した。 I.R.＝〔対照群の腫瘍体積〕−〔試料投与群の腫
瘍体積〕／〔対照群の腫瘍体積〕×100％ 表１に示すように試料Ａは抗腫瘍活性を示さな
かつたのに対して、これにより精製した試料Ｂは
抗腫瘍活性を示した。 一方、試料ＢおよびＣについてソマトメジン活
性（Ｙ，Kato，Y.Nomura，M.Tsuji，H.
Ohmae，M.Kinoshita，S.Hamamoto and F.
Suzuki“Cartilage−Derived Factor（CDF）． Somato medin−Like Action on Cultured
Chodrocytes”Exp Cell Res.vol.132 P339−347
（1981））を測定したところ、試料Ｃにのみ活性が
認められた。
【表】
(2) 牛胎児軟骨150ｇを1Mグアニジン塩酸0.1M6
−アミノ−ｎ−カプロン酸（PH6.0）1.5中で
ミキサーによりホモゲナイズした。４℃48時間
攪拌の後8000rpm、20分（４℃）遠心し得られ
た上清にアセトンを終濃度45％添加し、０℃下
20分放置した。次いで8000rpm20分（４℃）遠
心し得られた上清にさらにアセトンを加え、終
濃度65％とし０℃下20分放置した。8000rpm20
分（４℃）遠心後、得られた沈澱を50mlの蒸留
水に溶解し蒸留水に対して４℃下48時間透析の
後凍結乾燥した。これを200mlの4Mグアニジン
塩酸、0.01M EDTA、0.1M6−アミノ−ｎ−
カプロン酸（PH6.5）に溶解し、1.0Kg／cm2加圧
下、限外濾過膜「XM−300」に通し、得られ
た限外濾過液を1.5Kg／cm2加圧下、限外濾過膜
「UP20」に通し、内液を採取し同様蒸留水に対
して透析の後凍結乾燥し、172mgの粉末（試料
Ｄ）を得た。蛋白を重量比で64.5％（フオリン
法）含有する。 ICR雌マウス（５週令）の皮下にザルコーマ
ー180腫瘍細胞を移植し、担癌とした後、試料
D2mgを生理食塩水に溶解したものおよび対照
群として、生理食塩水のみを４回皮下投与し、
腫瘍移植後５週間目の腫瘍体積を測定し腫瘍阻
止率を求め、結果を表２に示した。
−アミノ−ｎ−カプロン酸（PH6.0）1.5中で
ミキサーによりホモゲナイズした。４℃48時間
攪拌の後8000rpm、20分（４℃）遠心し得られ
た上清にアセトンを終濃度45％添加し、０℃下
20分放置した。次いで8000rpm20分（４℃）遠
心し得られた上清にさらにアセトンを加え、終
濃度65％とし０℃下20分放置した。8000rpm20
分（４℃）遠心後、得られた沈澱を50mlの蒸留
水に溶解し蒸留水に対して４℃下48時間透析の
後凍結乾燥した。これを200mlの4Mグアニジン
塩酸、0.01M EDTA、0.1M6−アミノ−ｎ−
カプロン酸（PH6.5）に溶解し、1.0Kg／cm2加圧
下、限外濾過膜「XM−300」に通し、得られ
た限外濾過液を1.5Kg／cm2加圧下、限外濾過膜
「UP20」に通し、内液を採取し同様蒸留水に対
して透析の後凍結乾燥し、172mgの粉末（試料
Ｄ）を得た。蛋白を重量比で64.5％（フオリン
法）含有する。 ICR雌マウス（５週令）の皮下にザルコーマ
ー180腫瘍細胞を移植し、担癌とした後、試料
D2mgを生理食塩水に溶解したものおよび対照
群として、生理食塩水のみを４回皮下投与し、
腫瘍移植後５週間目の腫瘍体積を測定し腫瘍阻
止率を求め、結果を表２に示した。
【表】
表２より試料Ｄは著しい抗腫瘍活性を示し、
その結果、７匹中３匹は腫瘍が完全に退縮して
いることが理解される。 (3) 牛胎児軟骨350ｇ1Mグアニジン塩酸0.1M、
６−アミノ−ｎ−カプロン酸（PH6.0）3.5中
でミキサーによりホモゲナイズした。４℃下48
時間攪拌の後8000rpm、20分（４℃）遠心し得
られた上清にさらにアセトンを加え、終濃度65
％とし０℃下20分間放置した。8000rpm20分
（４℃）遠心後、得られた沈澱を50mlの蒸留水
に溶解し蒸留水に対して４℃下48時間透析の後
凍結乾燥した。これを200mlの4Mグアニジン塩
酸、0.01M EDTA、0.1M6−アミノ−ｎ−カ
プロン酸（PH6.5）に溶解し1.0Kg／cm2加圧下、
限外濾過膜「XM−300」に通し、得られた限
外濾過液を1.5Kg／cm2加圧下、限外濾過膜
「UP20」に通し、内液を採取し、さらにこれを
１Kg／cm2加圧下、限外濾過膜「スペクトロフイ
ルターUF(A)（スペクトロポア社製；分子量
100000カツト）」に通して内液を採取し、次い
で、同様に蒸留水に対して透析の後凍結乾燥し
270mgの試料Ｅを取得し、これを10mM燐酸ナ
トリウム緩衝液（PH8.0）30mlに溶解し、不溶
物を遠心除去し試料Ｆを得た（蛋白138mg）。こ
れを「DEAEセフアロースCL−6B」（DEAEア
ガロース；フアルマシア社製）カラム（径1.5
cm×13cm、23ml）（10mM燐酸ナトリウム緩衝
液（PH8.0）に平衡化した）に通流し、次いで
上記同一緩衝液０〜0.6M塩化ナトリウムを含
有した溶液でグラジユエント溶出し、溶離液を
分画採取した（１分画13ml）。 溶離パターン（280nm吸光度、血管内皮細胞
増殖阻害活性）を第３図に示した。分画番号19
〜21（塩化ナトリウム0.26〜0.33M溶離分画）
に血管内皮細胞増殖阻害活性を有する画分を回
収した（活性回収率103％、比活性6400単位／
mg、蛋白、×70.4倍精製）。これを試料Ｇとし
た。 C57BL雌マウスの足底にB16メラノーマ腫瘍
細胞（３×105個）を移植し、担癌とした後、
試料Ｅ（0.5mg）を生理食塩水に溶解したもの、
および対照群として、生理食塩水のみを６回皮
下投与し、腫瘍移植後６週間目の腫瘍体積を測
定し腫瘍阻止率を求め、結果を表３に示した。
その結果、７匹中３匹は腫瘍が完全に退縮して
いることが理解される。 (3) 牛胎児軟骨350ｇ1Mグアニジン塩酸0.1M、
６−アミノ−ｎ−カプロン酸（PH6.0）3.5中
でミキサーによりホモゲナイズした。４℃下48
時間攪拌の後8000rpm、20分（４℃）遠心し得
られた上清にさらにアセトンを加え、終濃度65
％とし０℃下20分間放置した。8000rpm20分
（４℃）遠心後、得られた沈澱を50mlの蒸留水
に溶解し蒸留水に対して４℃下48時間透析の後
凍結乾燥した。これを200mlの4Mグアニジン塩
酸、0.01M EDTA、0.1M6−アミノ−ｎ−カ
プロン酸（PH6.5）に溶解し1.0Kg／cm2加圧下、
限外濾過膜「XM−300」に通し、得られた限
外濾過液を1.5Kg／cm2加圧下、限外濾過膜
「UP20」に通し、内液を採取し、さらにこれを
１Kg／cm2加圧下、限外濾過膜「スペクトロフイ
ルターUF(A)（スペクトロポア社製；分子量
100000カツト）」に通して内液を採取し、次い
で、同様に蒸留水に対して透析の後凍結乾燥し
270mgの試料Ｅを取得し、これを10mM燐酸ナ
トリウム緩衝液（PH8.0）30mlに溶解し、不溶
物を遠心除去し試料Ｆを得た（蛋白138mg）。こ
れを「DEAEセフアロースCL−6B」（DEAEア
ガロース；フアルマシア社製）カラム（径1.5
cm×13cm、23ml）（10mM燐酸ナトリウム緩衝
液（PH8.0）に平衡化した）に通流し、次いで
上記同一緩衝液０〜0.6M塩化ナトリウムを含
有した溶液でグラジユエント溶出し、溶離液を
分画採取した（１分画13ml）。 溶離パターン（280nm吸光度、血管内皮細胞
増殖阻害活性）を第３図に示した。分画番号19
〜21（塩化ナトリウム0.26〜0.33M溶離分画）
に血管内皮細胞増殖阻害活性を有する画分を回
収した（活性回収率103％、比活性6400単位／
mg、蛋白、×70.4倍精製）。これを試料Ｇとし
た。 C57BL雌マウスの足底にB16メラノーマ腫瘍
細胞（３×105個）を移植し、担癌とした後、
試料Ｅ（0.5mg）を生理食塩水に溶解したもの、
および対照群として、生理食塩水のみを６回皮
下投与し、腫瘍移植後６週間目の腫瘍体積を測
定し腫瘍阻止率を求め、結果を表３に示した。
【表】
表３より試料Ｅは著しい抗腫瘍活性を示してい
ることが理解される。 C57BL雌マウスの足底にB16メラノーマ腫瘍細
胞（３×105個）を移植し、担癌とした後、試料
F230μｇ蛋白を生理食塩水に溶解したもの、およ
び試料G10μｇ蛋白を生理食塩水に溶解したもの、
および対照群として、生理食塩水のみを６回皮下
投与し、腫瘍移植後2.5週間目の腫瘍体積を測定
し腫瘍阻止率を求め、結果を表４に示した。
ることが理解される。 C57BL雌マウスの足底にB16メラノーマ腫瘍細
胞（３×105個）を移植し、担癌とした後、試料
F230μｇ蛋白を生理食塩水に溶解したもの、およ
び試料G10μｇ蛋白を生理食塩水に溶解したもの、
および対照群として、生理食塩水のみを６回皮下
投与し、腫瘍移植後2.5週間目の腫瘍体積を測定
し腫瘍阻止率を求め、結果を表４に示した。
【表】
表４より、試料Ｅ，Ｇは著しい抗腫瘍活性を示
していることが理解される。 なお試料Ｆ，Ｇの１回投与量中の血管内皮細胞
増殖阻害活性は、各々21単位、65単位であつた。
していることが理解される。 なお試料Ｆ，Ｇの１回投与量中の血管内皮細胞
増殖阻害活性は、各々21単位、65単位であつた。
第１図はDNA合成阻害率測定例を、第２図は
試料Ｄの血管内皮細胞増殖阻害活性作用を、第３
図はDEAEアガロースカラム溶離パターン
（280nm吸光度、血管内皮細胞増殖阻害活性）な
らびに塩化ナトリウム溶離液の塩化ナトリウム濃
度を示す。
試料Ｄの血管内皮細胞増殖阻害活性作用を、第３
図はDEAEアガロースカラム溶離パターン
（280nm吸光度、血管内皮細胞増殖阻害活性）な
らびに塩化ナトリウム溶離液の塩化ナトリウム濃
度を示す。
Claims (1)
- １ 動物軟骨を水性溶媒で抽出し、この抽出液に
親水性溶媒を加え沈澱を析出させ、更にこの析出
した沈澱から限外濾過法を用いて分子量２〜30万
の画分を分離することを特徴とする抗腫瘍性物質
の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59032199A JPS60178820A (ja) | 1984-02-22 | 1984-02-22 | 抗腫瘍活性物質の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59032199A JPS60178820A (ja) | 1984-02-22 | 1984-02-22 | 抗腫瘍活性物質の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60178820A JPS60178820A (ja) | 1985-09-12 |
| JPH0573760B2 true JPH0573760B2 (ja) | 1993-10-15 |
Family
ID=12352232
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59032199A Granted JPS60178820A (ja) | 1984-02-22 | 1984-02-22 | 抗腫瘍活性物質の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60178820A (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5242692A (en) * | 1990-07-10 | 1993-09-07 | Bar Ilan University | Anti-metastatic factor |
| US6380366B1 (en) | 1994-04-28 | 2002-04-30 | Les Laboratoires Aeterna Inc. | Shark cartilage extract:process of making, methods of using and compositions thereof |
| CN1245993C (zh) | 1997-03-11 | 2006-03-22 | 阿特纳赞塔里斯公司 | 用于治疗肿瘤的含有鲨鱼软骨提取物和抗肿瘤剂的药物组合物 |
| US6168807B1 (en) | 1998-07-23 | 2001-01-02 | Les Laboratoires Aeterna Inc. | Low molecular weight components of shark cartilage, processes for their preparation and therapeutic uses thereof |
-
1984
- 1984-02-22 JP JP59032199A patent/JPS60178820A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS60178820A (ja) | 1985-09-12 |
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