JPH057494A - 複素環化合物のメチル基の微生物的酸化方法 - Google Patents
複素環化合物のメチル基の微生物的酸化方法Info
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- JPH057494A JPH057494A JP3018999A JP1899991A JPH057494A JP H057494 A JPH057494 A JP H057494A JP 3018999 A JP3018999 A JP 3018999A JP 1899991 A JP1899991 A JP 1899991A JP H057494 A JPH057494 A JP H057494A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 芳香族５員または６員環の複素環化合物のメ
チル基を、容易にかつ一段階で微生物的に酸化する方法
を提供すること。 【構成】 芳香族５員または６員環の複素環化合物のメ
チル基を微生物酸化して対応するカルボン酸にするに当
り、基質として、酸化すべきメチル基の隣接炭素に置換
基をもたない複素環化合物を用いる。 複素環化合物の
変換反応は、シュードモナス属の微生物であって、トル
エン、キシレンまたはサイメンと前もって酵素を誘導し
たものを用いて行なう。
チル基を、容易にかつ一段階で微生物的に酸化する方法
を提供すること。 【構成】 芳香族５員または６員環の複素環化合物のメ
チル基を微生物酸化して対応するカルボン酸にするに当
り、基質として、酸化すべきメチル基の隣接炭素に置換
基をもたない複素環化合物を用いる。 複素環化合物の
変換反応は、シュードモナス属の微生物であって、トル
エン、キシレンまたはサイメンと前もって酵素を誘導し
たものを用いて行なう。
Description
【０００１】本発明は、芳香族５員または６員環の複素
環に結合したメチル基の微生物的な酸化により、対応す
るカルボン酸を製造する新規な方法に関し、とくに、酸
化すべきメチル基の隣接炭素に置換基を有しない複素環
化合物のメチル基の微生物的酸化方法に関する。 この
ような複素環化合物は、酵素の導入前にトルエン、キシ
レンまたはサイメンを用いたシュードモナス（Ｐｓｅｕ
ｄｍｏｎａｓ）属の微生物の転化を行なうための基質と
して使用される。
環に結合したメチル基の微生物的な酸化により、対応す
るカルボン酸を製造する新規な方法に関し、とくに、酸
化すべきメチル基の隣接炭素に置換基を有しない複素環
化合物のメチル基の微生物的酸化方法に関する。 この
ような複素環化合物は、酵素の導入前にトルエン、キシ
レンまたはサイメンを用いたシュードモナス（Ｐｓｅｕ
ｄｍｏｎａｓ）属の微生物の転化を行なうための基質と
して使用される。
【０００２】これらの複素環カルボン酸は、たとえば医
薬品製造の重要な中間体である。具体例として、ニコチ
ン酸（３−ピリジンカルボン酸）はニコチン酸アミドの
重要な製造中間体であり、これからビタミンＢ群を製造
するとともに、人と家畜の栄養上重要な意味をもつ（Ｕ
ｌｌｍａｎ，１９巻，１９８０，６０３頁）。
薬品製造の重要な中間体である。具体例として、ニコチ
ン酸（３−ピリジンカルボン酸）はニコチン酸アミドの
重要な製造中間体であり、これからビタミンＢ群を製造
するとともに、人と家畜の栄養上重要な意味をもつ（Ｕ
ｌｌｍａｎ，１９巻，１９８０，６０３頁）。
【０００３】２−ピラジンカルボン酸は、たとえば結核
治療薬であるピラジンアミド（２−ピラジンカルボン酸
アミド）の重要な中間体である（Ｒｏｍｐｓ Ｃｈｅｍ
ｉｅＬｅｘｉｋｏｎ，５巻，１９８７）。 ４−チアゾ
ールカルボン酸は、高活性抗寄生虫剤（駆虫薬）である
チアベンダゾールの製造に使用されるほか、たとえばカ
ムベンダゾール（Ｃａｍｂｅｎｄａｚｏｌ）のような他
の新規な抗寄生虫剤の原料となる（Ｕｌｌｍａｎｎ，２
３巻，１９８０，４６頁）。 ２−チオフェンカルボン
酸は、抗アレルギー性作用を示す（Ｕｌｌｍａｎｎ，２
３巻，１９８０，２１９頁）。
治療薬であるピラジンアミド（２−ピラジンカルボン酸
アミド）の重要な中間体である（Ｒｏｍｐｓ Ｃｈｅｍ
ｉｅＬｅｘｉｋｏｎ，５巻，１９８７）。 ４−チアゾ
ールカルボン酸は、高活性抗寄生虫剤（駆虫薬）である
チアベンダゾールの製造に使用されるほか、たとえばカ
ムベンダゾール（Ｃａｍｂｅｎｄａｚｏｌ）のような他
の新規な抗寄生虫剤の原料となる（Ｕｌｌｍａｎｎ，２
３巻，１９８０，４６頁）。 ２−チオフェンカルボン
酸は、抗アレルギー性作用を示す（Ｕｌｌｍａｎｎ，２
３巻，１９８０，２１９頁）。
【０００４】メチル基の酸化に関する研究は、従来、芳
香族炭化水素について綿密に行なわれて来た。
香族炭化水素について綿密に行なわれて来た。
【０００５】メチル化芳香族化合物の微生物的酸化によ
るカルボン酸の製造については、レイモンドと共同研究
者の研究論文に詳述されている（Ｒａｙｍｏｎｄｅｔ
ａｌ., Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ.,１９６９，
７１〜７４頁）。
るカルボン酸の製造については、レイモンドと共同研究
者の研究論文に詳述されている（Ｒａｙｍｏｎｄｅｔ
ａｌ., Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ.,１９６９，
７１〜７４頁）。
【０００６】ＵＳ−ＰＳ第３３８３２８９号明細書に
は、芳香族炭化水素のメチル基をノカルディア（Ｎｏｃ
ａｒｄｉａ）属のグラム陽性微生物種を用いて、生化学
的に酸化する方法が記載されている。
は、芳香族炭化水素のメチル基をノカルディア（Ｎｏｃ
ａｒｄｉａ）属のグラム陽性微生物種を用いて、生化学
的に酸化する方法が記載されている。
【０００７】この方法の欠点は、芳香族炭化水素のメチ
ル基の酸化に際し、ベンゼン環が開裂して対応するカル
ボン酸になることである。
ル基の酸化に際し、ベンゼン環が開裂して対応するカル
ボン酸になることである。
【０００８】シュードモナス・プチダ（ｐｕｔｉｄａ）
ＡＴＣＣ３３０１５を用いて、トルエンのメチル基を三
段階で生化学的に酸化し安息香酸とすることが知られて
いる。 トルエン−モノキシゲナーゼの作用により最初
にベンジルアルコールが生成し、次いで二段階でアルコ
ール−およびアルデヒドハイドロゲナーゼの触媒作用に
より、これが酸に転化される。
ＡＴＣＣ３３０１５を用いて、トルエンのメチル基を三
段階で生化学的に酸化し安息香酸とすることが知られて
いる。 トルエン−モノキシゲナーゼの作用により最初
にベンジルアルコールが生成し、次いで二段階でアルコ
ール−およびアルデヒドハイドロゲナーゼの触媒作用に
より、これが酸に転化される。
【０００９】これらの種では、プラスミドｐＷＷＯにキ
シレン解構用酵素を導入する（ｋｏｄｉｅｒｅｎ）Ｘｙ
ｌ遺伝子とともに、このＸｙｌ遺伝子を調節する遺伝子
が存在する。 このような原型的なＴｏｌ−プラスミド
は、従来は分子生物学の分野で精力的に研究されて来た
（Ｈａｒａｙａｍａ ｅｔ ａｌ., Ｊ．Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌ．１７１，１９８９，５０４８〜５０５５頁；
Ｂｕｒｌａｇｅ ｅｔａｌ., Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏ
ｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５５，１９８９，１３２３〜
１３２８頁）。
シレン解構用酵素を導入する（ｋｏｄｉｅｒｅｎ）Ｘｙ
ｌ遺伝子とともに、このＸｙｌ遺伝子を調節する遺伝子
が存在する。 このような原型的なＴｏｌ−プラスミド
は、従来は分子生物学の分野で精力的に研究されて来た
（Ｈａｒａｙａｍａ ｅｔ ａｌ., Ｊ．Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌ．１７１，１９８９，５０４８〜５０５５頁；
Ｂｕｒｌａｇｅ ｅｔａｌ., Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏ
ｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５５，１９８９，１３２３〜
１３２８頁）。
【００１０】また、文献によれば、Ｎ−複素環化合物の
メチル基を微生物的に酸化することが知られている。
ＳＵ−ＰＳ４１７４６８には、２−メチルピリジンを、
ノカルディア属のグラム陽性微生物を用いて、対応する
酸に酸化することが記載されている。
メチル基を微生物的に酸化することが知られている。
ＳＵ−ＰＳ４１７４６８には、２−メチルピリジンを、
ノカルディア属のグラム陽性微生物を用いて、対応する
酸に酸化することが記載されている。
【００１１】ＳＵ−ＰＳ２２８６８８には、３−メチル
ピリジンをミコバクテリア属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ）のグラム陽性微生物を用いてニコチン酸とする、
微生物的製造方法が記載されている。 同じくＳＵ−Ｐ
Ｓ３０２３４１には、ノカルディア属のグラム陽性微生
物を用いたニコチン酸の製造方法が記載されている。
ピリジンをミコバクテリア属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ）のグラム陽性微生物を用いてニコチン酸とする、
微生物的製造方法が記載されている。 同じくＳＵ−Ｐ
Ｓ３０２３４１には、ノカルディア属のグラム陽性微生
物を用いたニコチン酸の製造方法が記載されている。
【００１２】グラム陽性バクテリアを用いたＮ複素環の
メチル基の酸化には、次のような欠点がある。すなわ
ち、アルカン利用バクテリアでは、生物変換を行なわせ
るために、アルカンと被酸化物質との混合比を厳密に調
整しなければならず、アルカンが存在しないと生物変換
は行なわれない。 言い換えると、基質の変換の際に
も、誘導のためにアルカンを存在させなければならな
い。 グラム陽性バクテリアのノカルディアとグラム陰
性のシュードモナスの比較研究の結果、ノカルディアの
場合は、ドデカン、３−メチルピリジン等のアルカンが
存在しても、ニコチン酸への酸化は行なわれないことが
明らかとなった。
メチル基の酸化には、次のような欠点がある。すなわ
ち、アルカン利用バクテリアでは、生物変換を行なわせ
るために、アルカンと被酸化物質との混合比を厳密に調
整しなければならず、アルカンが存在しないと生物変換
は行なわれない。 言い換えると、基質の変換の際に
も、誘導のためにアルカンを存在させなければならな
い。 グラム陽性バクテリアのノカルディアとグラム陰
性のシュードモナスの比較研究の結果、ノカルディアの
場合は、ドデカン、３−メチルピリジン等のアルカンが
存在しても、ニコチン酸への酸化は行なわれないことが
明らかとなった。
【００１３】また、ＵＳ−ＰＳ４８５９５９２には、シ
ュードモナス・プチダを用いたピコリン酸の製造方法が
記載されている。 これは、アルキル化芳香族炭化水素
を第一段階で分子状酵素の存在下、ジオキシゲナーゼに
より２−ヒドロキシムコン酸セミアルデヒドとし、これ
を第二段階でアンモニアまたは第一級アミンを用いて２
−ピコリン酸に転化する方法である。
ュードモナス・プチダを用いたピコリン酸の製造方法が
記載されている。 これは、アルキル化芳香族炭化水素
を第一段階で分子状酵素の存在下、ジオキシゲナーゼに
より２−ヒドロキシムコン酸セミアルデヒドとし、これ
を第二段階でアンモニアまたは第一級アミンを用いて２
−ピコリン酸に転化する方法である。
【００１４】この方法の欠点は、第二段階の２−ヒドロ
キシムコン酸セミアルデヒドとアンモニアとの反応のは
じめに、対応するピコリン酸が生成してしまうことであ
る。本発明の課題は、上記の欠点を解消し、メチル基を
容易かつ一段で微生物的に酸化して、対応する酸を良好
な収率および純度で分離することができ、しかも芳香族
複素環の開裂が生じない方法を提供することにある。
キシムコン酸セミアルデヒドとアンモニアとの反応のは
じめに、対応するピコリン酸が生成してしまうことであ
る。本発明の課題は、上記の欠点を解消し、メチル基を
容易かつ一段で微生物的に酸化して、対応する酸を良好
な収率および純度で分離することができ、しかも芳香族
複素環の開裂が生じない方法を提供することにある。
【００１５】もう一つの課題は、いったん酵素誘導が開
始したら、誘導に使用した化合物が基質の反応時にはも
はや存在する必要がなく、したがって反応が酵素誘導体
の量には依存しない方法を提供するにある。
始したら、誘導に使用した化合物が基質の反応時にはも
はや存在する必要がなく、したがって反応が酵素誘導体
の量には依存しない方法を提供するにある。
【００１６】上記の課題は、請求項１に記載の方法によ
り達成される。
り達成される。
【００１７】すなわち、本発明は、酸化すべきメチル基
の隣接炭素原子に置換基をもたない芳香族５員または６
員環の複素環化合物のメチル基を微生物的に酸化して対
応するカルボン酸とする方法であって、反応用の基質と
してメチル化した複素環化合物を用い、反応を、シュー
ドモナス属の微生物であってトルエン、キシレンまたは
サイメンを用いて前もってその酵素を導入しておいたも
のを使用して行なうことを特徴とする。
の隣接炭素原子に置換基をもたない芳香族５員または６
員環の複素環化合物のメチル基を微生物的に酸化して対
応するカルボン酸とする方法であって、反応用の基質と
してメチル化した複素環化合物を用い、反応を、シュー
ドモナス属の微生物であってトルエン、キシレンまたは
サイメンを用いて前もってその酵素を導入しておいたも
のを使用して行なうことを特徴とする。
【００１８】反応は、トルエン、キシレンまたはサイメ
ンを用いたシュードモナス・プチダ種の微生物を用いて
行なうのが好ましい。
ンを用いたシュードモナス・プチダ種の微生物を用いて
行なうのが好ましい。
【００１９】とくに好ましいのは、標識ＡＴＣＣ３３０
１５またはその活性突然変異種のシュードモナス・プチ
ダの微生物種とキシレンの組み合わせ、または標識ＤＳ
Ｍ５７０９またはその活性突然変異種のシュードモナス
・プチダの微生物種とサイメンの組み合わせである。
さらに好ましいのは、シュードモナス・プチダＡＴＣＣ
３３１０５である。
１５またはその活性突然変異種のシュードモナス・プチ
ダの微生物種とキシレンの組み合わせ、または標識ＤＳ
Ｍ５７０９またはその活性突然変異種のシュードモナス
・プチダの微生物種とサイメンの組み合わせである。
さらに好ましいのは、シュードモナス・プチダＡＴＣＣ
３３１０５である。
【００２０】微生物種シュードモナス・プチダ（ＤＳＭ
５７０９）は、１９８９年１２月２２日にNo．ＤＳＭ５
７０９として、ドイツ微生物協会（ＤＳＭ）と細胞培養
ＧｍｂＨ（Ｍａｓｈｅｒｏｄｅｒｗｅｇ １ｂ，３３０
０ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，ＢＲＤ）に寄託されて
いる。
５７０９）は、１９８９年１２月２２日にNo．ＤＳＭ５
７０９として、ドイツ微生物協会（ＤＳＭ）と細胞培養
ＧｍｂＨ（Ｍａｓｈｅｒｏｄｅｒｗｅｇ １ｂ，３３０
０ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，ＢＲＤ）に寄託されて
いる。
【００２１】標識ＡＴＣＣ３３０１５の微生物種シュー
ドモナス・プチダは、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃ
ｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１２３０１ Ｐ
ａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉｖｅ Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍ
ａｒｙｌａｎｄ ２０８５２，アメリカ）にNo．ＡＴＣ
Ｃ３３０１５として寄託されている。
ドモナス・プチダは、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃ
ｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１２３０１ Ｐ
ａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉｖｅ Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍ
ａｒｙｌａｎｄ ２０８５２，アメリカ）にNo．ＡＴＣ
Ｃ３３０１５として寄託されている。
【００２２】酵素誘導は、微生物の炭素源およびエネル
ギー源として使用される化合物、たとえばｐ−キシレ
ン、ｍ−キシレン、ｐ−サイメン、ｍ−サイメンやトル
エンを用いて行なうことができ、また、炭素源およびエ
ネルギー源として作用しない化合物、たとえばモノ置換
およびジ置換されたメチル−，エチル−およびクロロ−
トルエン、ベンジルアルコールやｐ−クロロベンズアル
デヒドを用いて行なうこともできる。 これらの化合物
を芳香族炭化水素の解構用酵素誘導体として使用するこ
とが、すでに知られている（Ａｂｒｉｌ Ｍ．−Ａ．ｅ
ｔ ａｌ.,Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，Ｖｏｌ．１７
１，１９８９，ｐ．６７８２−６７８９）。酵素誘導
は、ｐ−キシレン、ｍ−キシレン、２−クロロトルエン
または２−ブロモトルエンを用いて行なうことが好まし
い。
ギー源として使用される化合物、たとえばｐ−キシレ
ン、ｍ−キシレン、ｐ−サイメン、ｍ−サイメンやトル
エンを用いて行なうことができ、また、炭素源およびエ
ネルギー源として作用しない化合物、たとえばモノ置換
およびジ置換されたメチル−，エチル−およびクロロ−
トルエン、ベンジルアルコールやｐ−クロロベンズアル
デヒドを用いて行なうこともできる。 これらの化合物
を芳香族炭化水素の解構用酵素誘導体として使用するこ
とが、すでに知られている（Ａｂｒｉｌ Ｍ．−Ａ．ｅ
ｔ ａｌ.,Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，Ｖｏｌ．１７
１，１９８９，ｐ．６７８２−６７８９）。酵素誘導
は、ｐ−キシレン、ｍ−キシレン、２−クロロトルエン
または２−ブロモトルエンを用いて行なうことが好まし
い。
【００２３】誘導に用いた化合物は、基質の反応の間存
在することはもちろんかまわないが、基質の反応前に供
給を停止してもよい。
在することはもちろんかまわないが、基質の反応前に供
給を停止してもよい。
【００２４】誘導体の濃度は、通常反応に必要な酵素の
最小抑止濃度よりも低くなるように選択する。
最小抑止濃度よりも低くなるように選択する。
【００２５】好ましいのは、各方法の実施後に、誘導に
使用した化合物の供給を基質の反応中は停止するか、ま
たは細胞を遠心分離してその活力を殺ぐことである。
使用した化合物の供給を基質の反応中は停止するか、ま
たは細胞を遠心分離してその活力を殺ぐことである。
【００２６】上記の各微生物種は、通常単一の炭素源お
よびエネルギー源として、ｐ−キシレン、ｍ−キシレ
ン、ｐ−サイメン、ｍ−サイメンまたはトルエンを用い
た無機培地（Ｋｕｌｌａ ｅｔ ａｌ., Ａｒｃｈ．Ｍ
ｉｃｒｏｂｉｏｌ １３５，１９８３，ｐ．１〜７）、
複合培地（“Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｂｒｏｔｈ Ｎo．
２”Ｏｘｏｉｄ Ｌｔｄ.,ＧＢ）または最小培地（Ｍｉ
ｎｉｍａｌｍｅｄｉｕｍ）中で成長する。 これらの培
地の組成は、表３に示した。 成長基質の供給は、クラ
ウスおよびヴァルカー（Ｃｌａｕｓ ａｎｄ Ｗａｌｋ
ｅｒ，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３６，１９６
４，ｐ．１０７〜１２２）の記載に従ってガス状で供給
し、供給速度０．５Ｖ／分とする。
よびエネルギー源として、ｐ−キシレン、ｍ−キシレ
ン、ｐ−サイメン、ｍ−サイメンまたはトルエンを用い
た無機培地（Ｋｕｌｌａ ｅｔ ａｌ., Ａｒｃｈ．Ｍ
ｉｃｒｏｂｉｏｌ １３５，１９８３，ｐ．１〜７）、
複合培地（“Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｂｒｏｔｈ Ｎo．
２”Ｏｘｏｉｄ Ｌｔｄ.,ＧＢ）または最小培地（Ｍｉ
ｎｉｍａｌｍｅｄｉｕｍ）中で成長する。 これらの培
地の組成は、表３に示した。 成長基質の供給は、クラ
ウスおよびヴァルカー（Ｃｌａｕｓ ａｎｄ Ｗａｌｋ
ｅｒ，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３６，１９６
４，ｐ．１０７〜１２２）の記載に従ってガス状で供給
し、供給速度０．５Ｖ／分とする。
【００２７】基質の添加前に、培地中の細胞の６５０nm
における光学密度（吸光度）が１〜２００、好ましくは
５〜１００となるようにする。
における光学密度（吸光度）が１〜２００、好ましくは
５〜１００となるようにする。
【００２８】反応は、培地中の基質濃度が２０％(w/v)
を超えないように、基質を一回に、または連続的に添加
して行なう。 基質の添加は、培地中の基質濃度が５％
(w/v)を超えないようにすることが好ましい。
を超えないように、基質を一回に、または連続的に添加
して行なう。 基質の添加は、培地中の基質濃度が５％
(w/v)を超えないようにすることが好ましい。
【００２９】また、基質の添加は、各方法の実施に際し
て酵素誘導体と同時に、たとえば酵素誘導体と基質の混
合物を添加するようにしてもよい。
て酵素誘導体と同時に、たとえば酵素誘導体と基質の混
合物を添加するようにしてもよい。
【００３０】反応は、ｐＨ４〜１１、好ましくは６〜１
０の範囲で行う。
０の範囲で行う。
【００３１】反応は、通常１５〜５０℃、好ましくは２
５〜４０℃の温度で行う。
５〜４０℃の温度で行う。
【００３２】反応は、通常１〜２４時間で終了する。
【００３３】反応に用いる基質としては、メチル化した
芳香族５員環の複素環化合物であって、酸素、窒素、イ
オウから選ばれた１種または２種以上のヘテロ原子を含
むものが使用される。 その具体例を挙げると、メチル
化したチオフェン、フラン、ピロール、チアゾール、ピ
ラゾールまたはイミダゾールなどであり、酸化すべきメ
チル基の隣接炭素に置換基をもたないものである。 好
ましいのは、フラン、チオフェン、ピロールおよびチオ
ゾールである。 とくに、５員環複素環化合物として
は、３，５−ジメチルピラゾール、５−メチルチアゾー
ル、４−メチルチアゾール、２，５−ジメチルチオフェ
ン、２−メチルチオフェン、３−メチルチオフェン、
２，５−ジメチルフランおよび２，５−ジメチルピロー
ルが用いられる。
芳香族５員環の複素環化合物であって、酸素、窒素、イ
オウから選ばれた１種または２種以上のヘテロ原子を含
むものが使用される。 その具体例を挙げると、メチル
化したチオフェン、フラン、ピロール、チアゾール、ピ
ラゾールまたはイミダゾールなどであり、酸化すべきメ
チル基の隣接炭素に置換基をもたないものである。 好
ましいのは、フラン、チオフェン、ピロールおよびチオ
ゾールである。 とくに、５員環複素環化合物として
は、３，５−ジメチルピラゾール、５−メチルチアゾー
ル、４−メチルチアゾール、２，５−ジメチルチオフェ
ン、２−メチルチオフェン、３−メチルチオフェン、
２，５−ジメチルフランおよび２，５−ジメチルピロー
ルが用いられる。
【００３４】ヘテロ原子として、１個または２個以上の
窒素を有するメチル化した芳香族６員環の複素環化合物
も、反応に使用される。 その具体例は、メチル化した
ピリジン、ピリミジン、ピラジンまたはピリダジンであ
って、酸化すべきメチル基の隣接炭素に置換基を有しな
いものである。 とくに、２−メチルピリジン、３−メ
チルピリジン、４−メチルピリジン、２，５−ジメチル
ピリジン、２，４−ジメチルピリジン、６−クロロ−３
−メチルピリジン、２−クロロ−３−エチル−６−メチ
ル−ピリジン、４，６−ジメチルピリミジン、２−メチ
ルピラジン、２，５−ジメチルピラジン、２，６−ジメ
チルピラジン、２，３，５−トリメチルピラジンおよび
２−クロロ−３，６−ジメチルピラジン等のピリジン
類、ピラジン類およびピリミジン類が好ましい。
窒素を有するメチル化した芳香族６員環の複素環化合物
も、反応に使用される。 その具体例は、メチル化した
ピリジン、ピリミジン、ピラジンまたはピリダジンであ
って、酸化すべきメチル基の隣接炭素に置換基を有しな
いものである。 とくに、２−メチルピリジン、３−メ
チルピリジン、４−メチルピリジン、２，５−ジメチル
ピリジン、２，４−ジメチルピリジン、６−クロロ−３
−メチルピリジン、２−クロロ−３−エチル−６−メチ
ル−ピリジン、４，６−ジメチルピリミジン、２−メチ
ルピラジン、２，５−ジメチルピラジン、２，６−ジメ
チルピラジン、２，３，５−トリメチルピラジンおよび
２−クロロ−３，６−ジメチルピラジン等のピリジン
類、ピラジン類およびピリミジン類が好ましい。
【００３５】図１に、本発明方法の好ましい実施装置を
示す。
示す。
【００３６】この実施装置によれば、酵素誘導体および
（または）基質としてのメチル化複素環化合物はバイオ
リアクター２に供給され、その供給量はバイオリアクタ
ー２の排気３中の酵素誘導体の濃度によって調節され
る。
（または）基質としてのメチル化複素環化合物はバイオ
リアクター２に供給され、その供給量はバイオリアクタ
ー２の排気３中の酵素誘導体の濃度によって調節され
る。
【００３７】排気３中の酵素誘導体の濃度は、測定装置
４により測定する。
４により測定する。
【００３８】酵素誘導体の濃度の測定装置としては、た
とえば紫外線光度計、ガスクロマトグラフィーまたはガ
スクロマトグラフィーと質量分析計とを組み合わせたも
のを使用することができる。
とえば紫外線光度計、ガスクロマトグラフィーまたはガ
スクロマトグラフィーと質量分析計とを組み合わせたも
のを使用することができる。
【００３９】測定装置４には制御装置５を設けて、酵素
誘導体および（または）メチル化複素環化合物の供給量
をポンプ１で調節し、バイオリアクター２への供給を行
なうようにするのが好ましい。
誘導体および（または）メチル化複素環化合物の供給量
をポンプ１で調節し、バイオリアクター２への供給を行
なうようにするのが好ましい。
【００４０】測定装置４と制御装置５との連結により、
酵素誘導体および（または）メチル化複素環化合物の供
給が制御される。 排気３中の酵素誘導体の濃度を一定
に保つように制御するのが好ましい。
酵素誘導体および（または）メチル化複素環化合物の供
給が制御される。 排気３中の酵素誘導体の濃度を一定
に保つように制御するのが好ましい。
【００４１】排気３中の酵素誘導体の濃度は、排気１リ
ットル中０．００１〜１０ミリモル、好ましくは０．０
１〜３ミリモルとする。
ットル中０．００１〜１０ミリモル、好ましくは０．０
１〜３ミリモルとする。
【００４２】酵素誘導体および（または）基質としての
メチル化複素環化合物は、混合してバイオリアクター２
に供給することが好ましい。
メチル化複素環化合物は、混合してバイオリアクター２
に供給することが好ましい。
【００４３】酵素誘導体と基質との比は、５：１ないし
３：１とする。
３：１とする。
【００４４】この実施装置では、酵素誘導体および（ま
たは）メチル化複素環化合物は、バイオリアクター２へ
の通気により行なうのが好ましい。
たは）メチル化複素環化合物は、バイオリアクター２へ
の通気により行なうのが好ましい。
【００４５】図２は、本発明方法の最良の実施形態で得
られた生物変換の結果を示す。
られた生物変換の結果を示す。
【００４６】反応後、対応する酸を既知の方法と操作に
より、たとえば誘起溶媒による抽出や、複素環カルボン
酸のアルカリ塩の場合には細胞を分離した培地の濃縮に
より、分離することができる。
より、たとえば誘起溶媒による抽出や、複素環カルボン
酸のアルカリ塩の場合には細胞を分離した培地の濃縮に
より、分離することができる。
【００４７】複素環カルボン酸のアルカリ塩は、たとえ
ば培地のｐＨ値調節用に添加する水酸化アルカリによっ
て生成する。
ば培地のｐＨ値調節用に添加する水酸化アルカリによっ
て生成する。
【００４８】本発明によれば、芳香族５員または６員環
の複素環化合物のメチル基を、容易にかつ一段階で微生
物酸化して、対応するカルボン酸を良好な収率と純度で
分離することができる。
の複素環化合物のメチル基を、容易にかつ一段階で微生
物酸化して、対応するカルボン酸を良好な収率と純度で
分離することができる。
【００４９】本発明方法のもう一つの利点は、芳香族複
素環の開裂が起こらず、反応速度が酵素誘導体の量に依
存しないことである。
素環の開裂が起こらず、反応速度が酵素誘導体の量に依
存しないことである。
【００５０】〔実施例１〕
５−メチル−２−ピラジンカルボン酸シュードモナス・プチダ
ＡＴＣＣ３３０１５をｐＨ７．
０、温度３０℃の発酵槽中で、複合培地（１００ml）
「ニュ−トリエント・ブロス（ＮｕｔｒｉｅｎｔＢｒｏ
ｔｈ） Ｎｏ．２」（オキソイド（Ｏｘｏｉｄ） リミ
テッド、イギリス）を使用して培養した。 その際、酵
素誘導体であるｐ−キシレンを、クラウス（Ｃｌａｕ
ｓ）およびヴァルカ−（Ｗａｌｋｅｒ）（Ｊ．Ｇｅｎ．
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３６，１９６４，ｐ．１０７〜１
２２）の記載に従って、気相濃度１ミリモル／Ｌで供給
した。
０、温度３０℃の発酵槽中で、複合培地（１００ml）
「ニュ−トリエント・ブロス（ＮｕｔｒｉｅｎｔＢｒｏ
ｔｈ） Ｎｏ．２」（オキソイド（Ｏｘｏｉｄ） リミ
テッド、イギリス）を使用して培養した。 その際、酵
素誘導体であるｐ−キシレンを、クラウス（Ｃｌａｕ
ｓ）およびヴァルカ−（Ｗａｌｋｅｒ）（Ｊ．Ｇｅｎ．
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３６，１９６４，ｐ．１０７〜１
２２）の記載に従って、気相濃度１ミリモル／Ｌで供給
した。
【００５１】次いで、この細胞を２回、無機培地（クラ
（Ｋｕｌｌａ）ら,Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１
３５，１９８３，ｐ．１〜７）で培養し、光学密度を無
機培地１００ml中６５０nmで１０とした。 この細胞懸
濁液に１ミリモルの２，５−ジメチルピラジンを添加し
た。 これは、１００ml中での基質濃度０．１０８％(w
/v) に相当する。 ３０℃で４時間、酵素誘導体が存在
しない状態で反応させた後、０．９ミリモルの５−メチ
ル−２−ピラジンカルボン酸が得られた。 これは、
２，５−ジメチルピラジンに対して９０％の収率であっ
た。
（Ｋｕｌｌａ）ら,Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１
３５，１９８３，ｐ．１〜７）で培養し、光学密度を無
機培地１００ml中６５０nmで１０とした。 この細胞懸
濁液に１ミリモルの２，５−ジメチルピラジンを添加し
た。 これは、１００ml中での基質濃度０．１０８％(w
/v) に相当する。 ３０℃で４時間、酵素誘導体が存在
しない状態で反応させた後、０．９ミリモルの５−メチ
ル−２−ピラジンカルボン酸が得られた。 これは、
２，５−ジメチルピラジンに対して９０％の収率であっ
た。
【００５２】〔実施例２〕実施例１と同様にして、酵素
誘導体として次の化合物を用いて行なった。 それぞれ
の濃度を表１に示した。
誘導体として次の化合物を用いて行なった。 それぞれ
の濃度を表１に示した。
【００５３】
【表１】
収 率 ％
酵素誘導体 濃 度 基質量（１ミリモル ５−メチル−
（モル／１００ ／１００ml培地、 ２−ピラジン ml培地） ０．１０８％(w/v)対応)−カルボン酸
ｏ−キシレン ０．１ミリモル ２，５−ジメチルピラジン ９０
ｍ−キシレン ０．１ミリモル ２，５−ジメチルピラジン ９０
２−クロロトルエン ０．１ミリモル ２，５−ジメチルピラジン ９０
２−ブロモトルエン ０．１ミリモル ２，５−ジメチルピラジン ９０
【００５４】〔実施例３〕実施例１に対応して、炭素源
およびエネルギー源としてｐ−キシレンを用いた無機培
地（クラら,Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１３５，
１９８３，ｐ．１〜７）でシュードモナス・プチダＡＴ
ＣＣ３３１０５を培養した。 光学密度１０としたこの
細胞懸濁液（１００ml）に、濃度０．１０８％(w/v)に
相当する１ミリモルの２，５−ジメチルピラジンを添加
した。 基質の反応中、ｐ−キシレンの供給を停止し
た。 この条件により、１ミリモルの２，５−ジメチル
ピラジンから、反応時間４時間で、９０％の収率に相当
する０．９ミリモルの５−メチル−２−ピラジンカルボ
ン酸が得られた。
およびエネルギー源としてｐ−キシレンを用いた無機培
地（クラら,Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１３５，
１９８３，ｐ．１〜７）でシュードモナス・プチダＡＴ
ＣＣ３３１０５を培養した。 光学密度１０としたこの
細胞懸濁液（１００ml）に、濃度０．１０８％(w/v)に
相当する１ミリモルの２，５−ジメチルピラジンを添加
した。 基質の反応中、ｐ−キシレンの供給を停止し
た。 この条件により、１ミリモルの２，５−ジメチル
ピラジンから、反応時間４時間で、９０％の収率に相当
する０．９ミリモルの５−メチル−２−ピラジンカルボ
ン酸が得られた。
【００５５】〔実施例４〕実施例３と同様にして、それ
ぞれ炭素源およびエネルギー源としてｐ−サイメンを用
いて、シュードモナス・プチダＤＳＭ５７０９を培養し
た。 １６時間後に、収率５０％に相当する０．５ミリ
モルの５−メチル−２−ピラジンカルボン酸が得られ
た。
ぞれ炭素源およびエネルギー源としてｐ−サイメンを用
いて、シュードモナス・プチダＤＳＭ５７０９を培養し
た。 １６時間後に、収率５０％に相当する０．５ミリ
モルの５−メチル−２−ピラジンカルボン酸が得られ
た。
【００５６】〔実施例５〜２８〕実施例３と同様にし
て、１００mlの細胞懸濁液に１ミリモルの基質を加えて
反応を行ない、得られた結果を表２に示した。
て、１００mlの細胞懸濁液に１ミリモルの基質を加えて
反応を行ない、得られた結果を表２に示した。
【００５７】
【表２】
基質濃度 反応
実施例 基 質 〔％(w/v)、 時間 目的生成物 収率 培養培地中〕 (hr) (％)
５ ２−メチルピラジン ０．０４９ １６ ２−ピラジンカ ３０ ルボン酸
６ ２，５−ジメチル− ０．１０８ ４ ２−メチル−５ ９０
ピラジン −ピラジンカル ボン酸
７ ２，６−ジメチル− ０．１０８ ４ ２−メチル−６ ９０
ピラジン −ピラジンカル ボン酸
８ ２，３，５−トリメ ０．１２２ １６ ２，３−ジメチ ５０
チルピラジン ル−５−ピラジ ンカルボン酸
９ ２−クロロ−３，６ ０．１４２ １６ ２−クロロ−３ ９０
−ジメチルピラジン −メチル−６−
ピラジンカルボ ン酸
１０ ２−メチルピリジン ０．０９３ １６ ２−ピリジン ９０ カルボン酸
１１ ３−メチルピリジン ０．０９３ １６ ３−ピリジン ５０ カルボン酸
１２ ４−メチルピリジン ０．０９３ １６ ４−ピリジン ３０ カルボン酸
１３ ２，６−ジメチルピ ０．１０７ １６ ６−メチル−２ ８０
リジン −ピリジンカル ボン酸
１４ ２，５−ジメチルピ ０．１０７ １６ ５−メチル−２ ４０
リジン −ピリジンカル ボン酸
１５ ２，４−ジメチルピ ０．１０７ １６ ４−メチル−２ ４０
リジン −ピリジンカル ボン酸
１６ ３，５−ジメチルピ ０．１０７ １６ ６−クロロ−３ ９０
リジン −ピリジンカル ボン酸
１７ ６−クロロ−２−メ ０．１２８ １６ ６−クロロ−２ ９０
チルピリジン −ピリジンカル ボン酸
１８ ６−クロロ−３−メ ０．１２８ １６ ６−クロロ−３ ９０
チルピリジン −ピリジンカル ボン酸
１９ ２−クロロ−３−エ ０．１５７ １６ ２−クロロ−３ １０
チル−６−メチルピ −エチル−６−
リジン ピリジンカルボ ン酸
２０ ４，６−ジメチルピ ０．１０８ １６ ６−メチル−４ ２０
リミジン −ピリミジン− カルボン酸
２１ ３，５−ジメチルピ ０．０９６ １６ ５−メチル−３ ８０
ラゾール −ピラジール− カルボン酸
２２ ５−メチルチアゾー ０．０９９ １６ ５−チアゾール ８０ ル カルボン酸
２３ ４−メチルチアゾー ０．０９９ １６ ４−チアゾール ８０ ル カルボン酸
２４ ２，５−ジメチルチ ０．１１２ １６ ５−メチル−２ ９０
オフェン −チオフェンカ ルボン酸
２５ ２−メチルチオフェ ０．０９８ １６ ２−チオフェン ９０ ン カルボン酸
２６ ３−メチルチオフェ ０．０９８ １６ ３−チオフェン ９０ ン カルボン酸
２７ ２，５−ジメチル ０．０９６ １６ ５−メチル−２ ４０
フラン −フランカルボ ン酸
２８ ２，５−ジメチル ０．０９５ １６ ５−メチル−２ ４０
ピロール −ピロール カルボン酸
【００５８】〔実施例５〕
５−メチル−２−ピラジンカルボン酸の製造
２０リットルのバイオリアクター２（作業容量１５リッ
トル、図１参照）を用いて、シュードモナス・プチダＡ
ＴＣＣ３３０１５を培養した。
トル、図１参照）を用いて、シュードモナス・プチダＡ
ＴＣＣ３３０１５を培養した。
【００５９】温度を３０℃、ｐＨを水酸化カリウムの添
加により７に保持した。ガスの吹込速度は毎分２０リッ
トルとした。 成長基質として、ｐ−キシレン４部(v/
v)と２，５−ジメチルピラジン１部の混合物を用いた。
この混合物をバイオリアクター２に、ポンプ１で供給
した。 成長基質の添加は、バイオリアクター排気３の
キシレン−測定装置４を制御装置５と連結させて行なっ
た。 この制御装置５により排気３中のキシレン濃度を
０．２ミリモル／ｌの一定値に保った（図１参照）。
加により７に保持した。ガスの吹込速度は毎分２０リッ
トルとした。 成長基質として、ｐ−キシレン４部(v/
v)と２，５−ジメチルピラジン１部の混合物を用いた。
この混合物をバイオリアクター２に、ポンプ１で供給
した。 成長基質の添加は、バイオリアクター排気３の
キシレン−測定装置４を制御装置５と連結させて行なっ
た。 この制御装置５により排気３中のキシレン濃度を
０．２ミリモル／ｌの一定値に保った（図１参照）。
【００６０】生物変換反応の停止は、成長がもはや認め
られなくなった時点で行なった。図２はその結果を示し
たものである。
られなくなった時点で行なった。図２はその結果を示し
たものである。
【００６１】図２の曲線Ａは、６５０nmにおける光学密
度（吸光度）を示す。
度（吸光度）を示す。
【００６２】同じく曲線Ｂは、２，５−ジメチルピラジ
ンの濃度（ｇ／ｌ）を示す。 曲線Ｃは、５−メチル−
２−ピラジンカルボン酸のカリウム塩の濃度（ｇ／ｌ）
を示す。
ンの濃度（ｇ／ｌ）を示す。 曲線Ｃは、５−メチル−
２−ピラジンカルボン酸のカリウム塩の濃度（ｇ／ｌ）
を示す。
【００６３】この実験では、５−メチル−２−ピラジン
カルボン酸の濃度は３８ｇ／ｌに達した。
カルボン酸の濃度は３８ｇ／ｌに達した。
【００６４】
【表３】培地組成
ＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ０．８ ｇ／ｌ
ＣａＣｌ2 ０．１６ｇ／ｌ
（ＮＨ4）ＳＯ4 ２ ｇ／ｌ
ＮＨ4Ｃｌ ５ ｇ／ｌ
Ｎａ2ＳＯ4 ０．２５ｇ／ｌ
ＫＨ2ＳＯ4 ０．４ ｇ／ｌ
Ｎａ2ＨＰＯ4 ０．９ ｇ／ｌ
トレーサ元素 １ ml／ｌ
ＦｅＥＤＴＡ １５ ml／ｌトレーサ元素溶液の組成
ＫＯＨ １５ ｇ／ｌ
ＥＤＴＡＮａ2・２Ｈ2Ｏ １０ ｇ／ｌ
ＺＮＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ９ ｇ／ｌ
ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ４ ｇ／ｌ
Ｈ3ＢＯ3 ２．７ ｇ／ｌ
ＣｏＣｌ2・６Ｈ2Ｏ １．８ ｇ／ｌ
ＣｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ １．５ ｇ／ｌ
ＮｉＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ０．１８ｇ／ｌ
Ｎａ2ＭｏＯ4・２Ｈ2Ｏ ０．２ｇ／ｌＦｅＥＤＴＡの組成
ＥＤＴＡＮａ2・２Ｈ2Ｏ ５ ｇ／ｌ
ＦｅＳｏ4・７Ｈ2Ｏ ２ ｇ／ｌ
【００６５】〔比較例〕
ａ）シュードモナス・プチダ３３０１５
３−メチルピリジンの生物変換を実施例３に従ってシュ
ードモナス・プチダＡＴＣＣ３３０１５を用いて１ミリ
モルの３−メチルピリジンで行なった。８時間の反応
後、０．２５ミリモルのニコチン酸が得られた。 これ
は使用した３−メチルピリジン基準で収率２５％に相当
する。
ードモナス・プチダＡＴＣＣ３３０１５を用いて１ミリ
モルの３−メチルピリジンで行なった。８時間の反応
後、０．２５ミリモルのニコチン酸が得られた。 これ
は使用した３−メチルピリジン基準で収率２５％に相当
する。
【００６６】ｂ）ロードコッカス・ロードコラス（Ｒｈ
ｏｄｃｃｏｃｕｓ ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ）またはノ
カルディア ロードコッカス・ロードコラス を、炭素源およびエネル
ギー源としてドデカンを用い、実施例３と同じ無機培地
で培養した。 次いで、同じ培地でドデカンなしに成長
させた。 この細胞懸濁液（１００ml）の光学密度を、
６５０ｎｍにおいて１０として、次の化合物を容れた三
つのフラスコに添加した。 ａ）３−メチルピリジン１ミリモル、ｂ）３−メチルピ
リジン１ミリモルとドデカン０．０５５ミリモル、ｃ）
３−メチルピリジン１ミリモルとドデカン５．５ミリモ
ル
ｏｄｃｃｏｃｕｓ ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ）またはノ
カルディア ロードコッカス・ロードコラス を、炭素源およびエネル
ギー源としてドデカンを用い、実施例３と同じ無機培地
で培養した。 次いで、同じ培地でドデカンなしに成長
させた。 この細胞懸濁液（１００ml）の光学密度を、
６５０ｎｍにおいて１０として、次の化合物を容れた三
つのフラスコに添加した。 ａ）３−メチルピリジン１ミリモル、ｂ）３−メチルピ
リジン１ミリモルとドデカン０．０５５ミリモル、ｃ）
３−メチルピリジン１ミリモルとドデカン５．５ミリモ
ル
【００６７】３０℃で８時間培養したが、ニコチン酸の
生成は認められなかった。
生成は認められなかった。
【図１】 本発明の方法を実施する装置の説明図であ
る。
る。
【図２】 本発明の実施例で得られた生物変換の結果を
示すグラフである（実施例５）。
示すグラフである（実施例５）。
１ ポンプ
２ バイオリアクター
３ 排気
４ 測定装置
５ 制御装置
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所
Ｃ１２Ｒ 1:40）
Claims (15)
- 【請求項１】 酸化すべきメチル基の隣接炭素原子に置
換基をもたない芳香族５員または６員環の複素環化合物
のメチル基を微生物的に酸化して対応するカルボン酸に
転化する方法であって、反応用の基質としてメチル化し
た複素環化合物を用い、転化反応を、シュードモナス属
の微生物であってトルエン、キシレンまたはサイメンを
用いてあらかじめその酵素を誘導しておいたものを使用
して行なうことを特徴とする酸化方法。 - 【請求項２】 酵素の誘導を、微生物に炭素源およびエ
ネルギー源として作用する化合物を用いて行なうか、ま
たは微生物に炭素源およびエネルギー源として作用しな
い化合物を用いて行なう請求項１の酸化方法。 - 【請求項３】 トルエン、キシレンまたはサイメンを用
いたシュードモナス・プチダ種の微生物により反応を行
なう請求項１または２の酸化方法。 - 【請求項４】 反応を、キシレンと、標識ＡＴＣＣ３３
０１５のシュードモ ナス・プチダまたはその活性突然変
異した微生物種とを用いて行なう請求項１ないし３のい
ずれかの酸化方法。 - 【請求項５】 反応を、サイメンと、標識ＤＳＭ５７０
９のシュードモナス・プチダまたはその活性突然変異し
た微生物種とを用いて行なう請求項１ないし３のいずれ
かの酸化方法。 - 【請求項６】 培地中の基質濃度が２０％(w/v) を超え
ないように基質の添加を１回または連続的に行なって反
応させる請求項１ないし５のいずれかの酸化方法。 - 【請求項７】 反応をｐＨ４〜１１で行なう請求項１な
いし６のいずれかの酸化方法。 - 【請求項８】 反応を１５〜５０℃の温度で行なう請求
項１ないし７のいずれかの酸化方法。 - 【請求項９】 基質として、酸素、窒素およびイオウか
ら選ばれた１個または２個以上のヘテロ原子を有する、
メチル化した芳香族５員環の複素環化合物を用いて反応
を行なう請求項１ないし８のいずれかの酸化方法。 - 【請求項１０】 基質として、メチル化したチオフェ
ン、フラン、ピロール、チアゾール、ピラゾールまたは
イミダゾールを用いて反応を行なう請求項９の酸化方
法。 - 【請求項１１】 基質として、１個または２個以上の窒
素をヘテロ原子として含む、メチル化した芳香族６員環
の複素環化合物を用いて反応を行なう請求項１ないし８
のいずれかの酸化方法。 - 【請求項１２】 基質として、メチル化したピリジン、
ピリミジン、ピラジンまたはピリダジンを用いて反応を
行なう請求項１１の酸化方法。 - 【請求項１３】 酵素誘導体および（または）基質とし
てメチル化した複素環化合物をバイオリアクター２に供
給する際に、バイオリアクター２の排気３中の酵素誘導
体の濃度に関してその供給量を制御する請求項１ないし
１２のいずれかの酸化方法。 - 【請求項１４】 排気３中の酵素誘導体の濃度を測定装
置４で測定し、酵素誘導体および（または）メチル化し
た複素環化合物の供給量を、測定装置４と連結した制御
装置５で制御する請求項１３の酸化方法。 - 【請求項１５】 排気３中の酵素誘導体の濃度を、排気
１リットル当り０．００１〜１０ミリモルの間で一定に
保つように制御して行なう請求項１３または１４の酸化
方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH458/90-0 | 1990-02-13 | ||
| CH45890 | 1990-02-13 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
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