JPH0579985A - 化学発光増強剤及び増強方法 - Google Patents
化学発光増強剤及び増強方法Info
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- JPH0579985A JPH0579985A JP24325391A JP24325391A JPH0579985A JP H0579985 A JPH0579985 A JP H0579985A JP 24325391 A JP24325391 A JP 24325391A JP 24325391 A JP24325391 A JP 24325391A JP H0579985 A JPH0579985 A JP H0579985A
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 式:
【化１】
[式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4の内１つは炭素数８〜
２０のアルキルまたはアルケニル基であり、他の３つ
は、同一または異なって、炭素数１〜８のアルキルまた
はアルケニル基を表し、Ｘ-はハロゲンイオンを表す。]
で示される第４級ホスホニウム塩により化学発光を増強
する。 【効果】 アクリジニウムエステルの化学発光系に第４
級ホスホニウム塩(Ｉ)を添加することにより、化学発光
強度を増大させることができる。さらに、化学発光測定
系において、被測定種の濃度が低い場合でも、この増感
効果によって、より正確な測定が可能となる。
２０のアルキルまたはアルケニル基であり、他の３つ
は、同一または異なって、炭素数１〜８のアルキルまた
はアルケニル基を表し、Ｘ-はハロゲンイオンを表す。]
で示される第４級ホスホニウム塩により化学発光を増強
する。 【効果】 アクリジニウムエステルの化学発光系に第４
級ホスホニウム塩(Ｉ)を添加することにより、化学発光
強度を増大させることができる。さらに、化学発光測定
系において、被測定種の濃度が低い場合でも、この増感
効果によって、より正確な測定が可能となる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、化学発光増強剤及び増
強方法に関し、更に詳しくは、アクリジニウムエステル
の酸化による化学発光を増強する増強剤および方法に関
する。
強方法に関し、更に詳しくは、アクリジニウムエステル
の酸化による化学発光を増強する増強剤および方法に関
する。
【０００２】
【従来の技術】アクリジニウムエステルの酸化による化
学発光は、種々の免疫測定において、被測定種を定性的
または定量的に測定する為に採用されている。すなわ
ち、被測定種または被測定種と結合しうる物質をアクリ
ジニウムエステルにより標識し、種々の免疫反応を行
い、これに酸化剤(たとえば、過酸化水素)を加え、化学
発光を生じさせ、その発光量を測定することにより、被
測定種の濃度を測定するのである。
学発光は、種々の免疫測定において、被測定種を定性的
または定量的に測定する為に採用されている。すなわ
ち、被測定種または被測定種と結合しうる物質をアクリ
ジニウムエステルにより標識し、種々の免疫反応を行
い、これに酸化剤(たとえば、過酸化水素)を加え、化学
発光を生じさせ、その発光量を測定することにより、被
測定種の濃度を測定するのである。
【０００３】このアクリジニウムエステルの化学発光を
増強する為に、ノニオン系界面活性剤、第１級アルコー
ル硫酸塩または第４級アンモニウム塩を発光系に添加す
ることが提案されている(米国特許第４,９２７,７６９
号明細書参照)。
増強する為に、ノニオン系界面活性剤、第１級アルコー
ル硫酸塩または第４級アンモニウム塩を発光系に添加す
ることが提案されている(米国特許第４,９２７,７６９
号明細書参照)。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかし、上記従来技術
において増強剤として用いられているノニオン系界面活
性剤、第１級アルコール硫酸塩または第４級アンモニウ
ム塩では、増感効果が十分でなく、さらに増感率の高い
化学発光増強剤が求められていた。
において増強剤として用いられているノニオン系界面活
性剤、第１級アルコール硫酸塩または第４級アンモニウ
ム塩では、増感効果が十分でなく、さらに増感率の高い
化学発光増強剤が求められていた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、式:
【化３】 [式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4の内１つは炭素数８〜
２０のアルキルまたはアルケニル基であり、他の３つ
は、同一または異なって、炭素数１〜８のアルキルまた
はアルキル基を表し、Ｘ-はハロゲンイオンを表す。]で
示される第４級ホスホニウム塩をアクリジニウムエステ
ルの酸化による化学発光の増強剤として用いることによ
り、上記課題を解決するものである。
２０のアルキルまたはアルケニル基であり、他の３つ
は、同一または異なって、炭素数１〜８のアルキルまた
はアルキル基を表し、Ｘ-はハロゲンイオンを表す。]で
示される第４級ホスホニウム塩をアクリジニウムエステ
ルの酸化による化学発光の増強剤として用いることによ
り、上記課題を解決するものである。
【０００６】上記式(Ｉ)における炭素数８〜２０のアル
キルまたはアルケニル基の中では、炭素数１４〜１８、
特に炭素数１６のアルキル基が好ましい。また、炭素数
１〜８のアルキルまたはアルキル基の中では、炭素数３
〜５、特に炭素数４のアルキル基が好ましい。
キルまたはアルケニル基の中では、炭素数１４〜１８、
特に炭素数１６のアルキル基が好ましい。また、炭素数
１〜８のアルキルまたはアルキル基の中では、炭素数３
〜５、特に炭素数４のアルキル基が好ましい。
【０００７】アクリジニウムエステルの酸化による化学
発光反応は、従来技術と同様に行えばよく、本発明で
は、化学発光増強に効果的な第４級ホスホニウム塩の濃
度は、化学発光反応混合物に対して０．０１％以上で、
好ましくは０．５％以上である。また、化学発光反応を
行わせる試薬の中で、最後に添加する試薬(アルカリ液)
に第４級ホスホニウム塩を添加しておくと、より高い増
感率が得られる。
発光反応は、従来技術と同様に行えばよく、本発明で
は、化学発光増強に効果的な第４級ホスホニウム塩の濃
度は、化学発光反応混合物に対して０．０１％以上で、
好ましくは０．５％以上である。また、化学発光反応を
行わせる試薬の中で、最後に添加する試薬(アルカリ液)
に第４級ホスホニウム塩を添加しておくと、より高い増
感率が得られる。
【０００８】
【発明の効果】本発明によれば、アクリジニウムエステ
ルの化学発光系に第４級ホスホニウム塩(Ｉ)を添加する
ことにより、化学発光強度を増大させることができる。
さらに、化学発光測定系において、被測定種の濃度が低
い場合でも、この増感効果によって、より正確な測定が
可能となるのはいうまでもない。
ルの化学発光系に第４級ホスホニウム塩(Ｉ)を添加する
ことにより、化学発光強度を増大させることができる。
さらに、化学発光測定系において、被測定種の濃度が低
い場合でも、この増感効果によって、より正確な測定が
可能となるのはいうまでもない。
【０００９】
【実施例】次ぎに、実施例および比較例を示して本発明
を具体的に説明する。
を具体的に説明する。
【００１０】実施例１および比較例１〜２ 固相系での測定方法 抗β2−マイクログロブリン(microglobulin)抗体(ベ
ーリンガー・マンハイム社製ＢＭ−０１２)１モル当た
りアクリジニウムI(同仁化学製)を５モルの割合で、
０．１Ｍリン酸バッファ(ｐＨ８．０)中で反応させるこ
とにより結合させて、アクリジニウムＩ標識抗体を調製
した。
ーリンガー・マンハイム社製ＢＭ−０１２)１モル当た
りアクリジニウムI(同仁化学製)を５モルの割合で、
０．１Ｍリン酸バッファ(ｐＨ８．０)中で反応させるこ
とにより結合させて、アクリジニウムＩ標識抗体を調製
した。
【００１１】一方、０．１ＭＮａＨＣＯ3中で、抗β2−
マイクログロブリン(microglobulin)抗体 (ベーリンガ
ー・マンハイム社：ＢＭ−０１１）１モル当たり、Ｎ−
ヒドロキシサクンイミド−ビオチン(ピアス社製)を２７
モルの割合で反応させて、ビオチン標識した。
マイクログロブリン(microglobulin)抗体 (ベーリンガ
ー・マンハイム社：ＢＭ−０１１）１モル当たり、Ｎ−
ヒドロキシサクンイミド−ビオチン(ピアス社製)を２７
モルの割合で反応させて、ビオチン標識した。
【００１２】これらの２種の標識抗体とβ2−マイクロ
グロブリン (コスモバイオ社製）を混合し、１０分間、
抗原抗体反応させた。この反応で生じた抗原抗体複合物
をトラップするために、反応液５０μlをアビジン結合
ガラスフィルター (直径９cm）に添加し、５分間放置し
た。その後、リン酸緩衝化生理食塩水でブフナーロート
により吸引洗浄して、Ｂ／Ｆ分離を行った。
グロブリン (コスモバイオ社製）を混合し、１０分間、
抗原抗体反応させた。この反応で生じた抗原抗体複合物
をトラップするために、反応液５０μlをアビジン結合
ガラスフィルター (直径９cm）に添加し、５分間放置し
た。その後、リン酸緩衝化生理食塩水でブフナーロート
により吸引洗浄して、Ｂ／Ｆ分離を行った。
【００１３】Ｂ／Ｆ分離したガラスフィルターに１５μ
lの３％過酸化水素を含む０．０１Ｍクエン酸リン酸バ
ッファ(ｐＨ４．０)を添加し、１０分間放置した。その
後、０．０５ＮＮaＯＨ２５μlを添加し、発光検出器微
弱光検出システム (自社製）により、発光量を測定し
た。以上の工程において、後記発光増強剤を、３％過酸
化水素含有０．０１Ｍクエン酸リン酸バッファまたは
０．０５ＮＮaＯＨのいずれかに加えて、増強効果を比
較した。結果を以下に示す。
lの３％過酸化水素を含む０．０１Ｍクエン酸リン酸バ
ッファ(ｐＨ４．０)を添加し、１０分間放置した。その
後、０．０５ＮＮaＯＨ２５μlを添加し、発光検出器微
弱光検出システム (自社製）により、発光量を測定し
た。以上の工程において、後記発光増強剤を、３％過酸
化水素含有０．０１Ｍクエン酸リン酸バッファまたは
０．０５ＮＮaＯＨのいずれかに加えて、増強効果を比
較した。結果を以下に示す。
【００１４】ＣＬＩＡシステムでの増感効果の比較(１) (増強剤は３％過酸化水素含有０．０１Ｍクエン酸リン
酸バッファに添加) (実施例１) 臭化セチルトリｎ−ブチルホスホニウム 発光量(カウント) 増感率(倍) ０％(無添加) ２８４３１ − ０．１％ ５７５３６ ２．０２ １％ ６６１０３ ２．３２ ５％ ６７３６７ ２．３６
酸バッファに添加) (実施例１) 臭化セチルトリｎ−ブチルホスホニウム 発光量(カウント) 増感率(倍) ０％(無添加) ２８４３１ − ０．１％ ５７５３６ ２．０２ １％ ６６１０３ ２．３２ ５％ ６７３６７ ２．３６
【００１５】(比較例１） 塩化セチルトリメチルアンモニウム 発光量（カウント) 増強率(倍) ０％(無添加) ３３４２３ − ０．１％ ３９７３８ １．１８ １％ ５２７５０ １．５７ ５％ ５７８４３ １．７３
【００１６】(比較例２) トゥイーン２０ 発光量(カウント) 増感率(倍) ０％(無添加) ４４１４２ − ０．１％ ４２８３８ ０．９７ １％ ４９１１６ １．１１ ５％ ６７４０２ １．５２
【００１７】ＣＬＩＡシステムでの増感効果の比較(２) (増強剤は０．０５ＮＮａＯＨに添加） (実施例１) 臭化セチルトリｎ−ブチルホスホニウム 発光量(カウント) 増感率(倍) ０％ (無添加） ２９５９２ − ０．１％ １５３５７０ ５．１ １％ １９６９５０ ６．６ ５％ ２０１３２２ ６．８
【００１８】(比較例１) 塩化セチルトリメチルアンモニウム 発光量(カウント) 増感率(倍) ０％(無添加) ２５２３２ − ０．１％ １４５７７４ ５．７ １％ １４５９２９ ５．７ ５％ １７２４２０ ６．８
【００１９】(比較例２) トゥイーン２０ 発光量(カウント) 増感率(倍) ０％(無添加) ２９５９２ − ０．１％ ３１２９６ １．０５ １％ ５４７０４ １．８４ ５％ ６６４５７ ２．２
【００２０】実施例２ 溶液系での発光量の測定方法 モノクローナル抗体ＭＡＫ３３(ベーリンガー・マン
ハイム社)１モル当たり、アクリジニウムＩ (同仁化学
製）を５モルの割合で、０．１Ｍリン酸バッファ(ｐＨ
８．０)中で反応させることにより結合させて、アクリ
ジニウムＩ標識抗体を調製した。このアクリジニウムＩ
標識抗体(１０μｇ／ｍl)を０．１Ｍクエン酸リン酸バ
ッファ(ｐＨ５．０)で５００倍に希釈した。これを４０
０μl発光測定用のキュベットに入れて、０．３％過酸
化水素を含む１ＮＮaＯＨ水溶液１００μlを添加して、
発光検出器ＴＤ−４０００(ラボ・サイエンス社)により
発光量を測定した。ここで、後記発光増強剤を、０．１
Ｍクエン酸リン酸バッファ(ｐＨ５．０)または０．３％
過酸化水素含有１ＮＮａＯＨ水溶液のいずれかに加え
て、増強効果を比較した。添加濃度は０．５重量％であ
る。結果を以下に示す。
ハイム社)１モル当たり、アクリジニウムＩ (同仁化学
製）を５モルの割合で、０．１Ｍリン酸バッファ(ｐＨ
８．０)中で反応させることにより結合させて、アクリ
ジニウムＩ標識抗体を調製した。このアクリジニウムＩ
標識抗体(１０μｇ／ｍl)を０．１Ｍクエン酸リン酸バ
ッファ(ｐＨ５．０)で５００倍に希釈した。これを４０
０μl発光測定用のキュベットに入れて、０．３％過酸
化水素を含む１ＮＮaＯＨ水溶液１００μlを添加して、
発光検出器ＴＤ−４０００(ラボ・サイエンス社)により
発光量を測定した。ここで、後記発光増強剤を、０．１
Ｍクエン酸リン酸バッファ(ｐＨ５．０)または０．３％
過酸化水素含有１ＮＮａＯＨ水溶液のいずれかに加え
て、増強効果を比較した。添加濃度は０．５重量％であ
る。結果を以下に示す。
【００２１】溶液系での増感効果の比較(１) (増強剤は、濃度０．５％で０．０１Ｍクエン酸リン酸
バッファに添加）増強剤 発光量(rlu) 増感率(倍) 無添加 １５０ − 臭化セチルトリｎ−ブチルホスホニウム ３０３ ２．０ トゥイーン２０ ４５６ ３．０ 塩化セチルトリメチルアンモニウム ３０３ ２．０ ラウリルベンゼンスルホン酸ナトリウム ９５４ ６．３
バッファに添加）増強剤 発光量(rlu) 増感率(倍) 無添加 １５０ − 臭化セチルトリｎ−ブチルホスホニウム ３０３ ２．０ トゥイーン２０ ４５６ ３．０ 塩化セチルトリメチルアンモニウム ３０３ ２．０ ラウリルベンゼンスルホン酸ナトリウム ９５４ ６．３
【００２２】溶液系での増感効果の比較(２) (増強剤は、濃度０．５または０．２％で０．３％過酸
化水素含有１ＮＮaＯＨに添加） 発光量(rlu) 増強剤濃度 0.5％ 2％ 0.5％ 2％ 0.5％ 2％ 無添加 270 270 200 200 198 198 臭化セチルトリ 624 634 n−ブチルホスホニウム (2.3) (2.3) トゥイーン２０ 240 234 (1.2) (1.17) 塩化セチルトリ 461 453 メチルアンモニウム (2.3) (2.2) ラウリルベンゼン 不 溶 不 溶 不 溶 スルホン酸ナトリウム (注: 括弧内の数値は増感率(倍)である。）
化水素含有１ＮＮaＯＨに添加） 発光量(rlu) 増強剤濃度 0.5％ 2％ 0.5％ 2％ 0.5％ 2％ 無添加 270 270 200 200 198 198 臭化セチルトリ 624 634 n−ブチルホスホニウム (2.3) (2.3) トゥイーン２０ 240 234 (1.2) (1.17) 塩化セチルトリ 461 453 メチルアンモニウム (2.3) (2.2) ラウリルベンゼン 不 溶 不 溶 不 溶 スルホン酸ナトリウム (注: 括弧内の数値は増感率(倍)である。）
Claims (2)
- 【請求項１】 式: 【化１】 [式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4の内１つは炭素数８〜
２０のアルキルまたはアルケニル基であり、他の３つ
は、同一または異なって、炭素数１〜８のアルキルまた
はアルケニル基を表し、Ｘ-はハロゲンイオンを表す。]
で示される第４級ホスホニウム塩からなる化学発光増強
剤。 - 【請求項２】 アクリジニウムエステルの酸化による化
学発光を、式: 【化２】 [式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4の内１つは炭素数８〜
２０のアルキルまたはアルケニル基であり、他の３つ
は、同一または異なって、炭素数１〜８のアルキルまた
はアルケニル基を表し、Ｘ-はハロゲンイオンを表す。]
で示される第４級ホスホニウム塩により増強する方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24325391A JPH0579985A (ja) | 1991-09-24 | 1991-09-24 | 化学発光増強剤及び増強方法 |
| EP92116235A EP0534380A1 (en) | 1991-09-24 | 1992-09-23 | Agent and method for enhancing chemiluminescence |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24325391A JPH0579985A (ja) | 1991-09-24 | 1991-09-24 | 化学発光増強剤及び増強方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0579985A true JPH0579985A (ja) | 1993-03-30 |
Family
ID=17101123
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24325391A Pending JPH0579985A (ja) | 1991-09-24 | 1991-09-24 | 化学発光増強剤及び増強方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0534380A1 (ja) |
| JP (1) | JPH0579985A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1510822A2 (en) | 2003-08-28 | 2005-03-02 | Tosoh Corporation | Chemiluminescence method using a 1,2-dioxetane derivative, and composition for chemiluminescence comprising it |
Families Citing this family (7)
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|---|---|---|---|---|
| US5451347A (en) * | 1993-06-24 | 1995-09-19 | Lumigen, Inc. | Methods and compositions providing enhanced chemiluminescence from chemiluminescent compounds using dicationic surfactants |
| US5665606A (en) * | 1994-04-11 | 1997-09-09 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for assaying a substance using a polyacridinium compound |
| JPH08233820A (ja) * | 1995-02-23 | 1996-09-13 | Kdk Corp | 化学発光測定法 |
| US5853974A (en) | 1995-06-07 | 1998-12-29 | Chiron Corporation | Enhancement of alkaline phosphatase with SDS in chemiluminescent substrates |
| US5731148A (en) * | 1995-06-07 | 1998-03-24 | Gen-Probe Incorporated | Adduct protection assay |
| CN106483293A (zh) * | 2016-10-13 | 2017-03-08 | 广州华弘生物科技有限公司 | He4a 临床免疫检测试剂盒及其制备方法 |
| CN111579765B (zh) * | 2019-02-19 | 2023-05-23 | 北京北方生物技术研究所有限公司 | 一种提高吖啶酯发光信噪比的激发液系统 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4927769A (en) * | 1987-07-08 | 1990-05-22 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Method for enhancement of chemiluminescence |
| GB2233451B (en) * | 1989-06-27 | 1993-09-15 | Tropix Inc | Chemiluminescence enhancement |
| EP0554331A1 (en) * | 1990-10-04 | 1993-08-11 | The Scripps Research Institute | Self-assembling fluorescent diagnostic agents |
-
1991
- 1991-09-24 JP JP24325391A patent/JPH0579985A/ja active Pending
-
1992
- 1992-09-23 EP EP92116235A patent/EP0534380A1/en not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1510822A2 (en) | 2003-08-28 | 2005-03-02 | Tosoh Corporation | Chemiluminescence method using a 1,2-dioxetane derivative, and composition for chemiluminescence comprising it |
| US7091051B2 (en) | 2003-08-28 | 2006-08-15 | Tosoh Corporation | Chemiluminescence method of 1,2-dioxetane and composition for chemiluminescence |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0534380A1 (en) | 1993-03-31 |
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