JPH0581561B2 - - Google Patents
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- JPH0581561B2 JPH0581561B2 JP31152187A JP31152187A JPH0581561B2 JP H0581561 B2 JPH0581561 B2 JP H0581561B2 JP 31152187 A JP31152187 A JP 31152187A JP 31152187 A JP31152187 A JP 31152187A JP H0581561 B2 JPH0581561 B2 JP H0581561B2
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Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Description
産業上の利用分野
この発明はマリーゴールドに含まれるα−ター
チエニルを主たる有効成分とする殺線虫剤の製造
法に関するものである。 従来の技術 殺線虫剤として一般的に使用されているもの
は、合成された薬剤であり、残留毒性による環境
汚染や人畜に対する悪影響が指摘され、また薬効
の持続性が乏しいなどの問題点があつて、満足し
うるものは見当たらない。 キク科の植物であるマリーゴールドには、殺線
虫力を備えた下式
チエニルを主たる有効成分とする殺線虫剤の製造
法に関するものである。 従来の技術 殺線虫剤として一般的に使用されているもの
は、合成された薬剤であり、残留毒性による環境
汚染や人畜に対する悪影響が指摘され、また薬効
の持続性が乏しいなどの問題点があつて、満足し
うるものは見当たらない。 キク科の植物であるマリーゴールドには、殺線
虫力を備えた下式
【化】
で示されるα−ターチエニル及びその類縁物質を
含有することが知られている。〔例えばレキユレ
エ デス トラバツクス キミーク デス ペイ
ズ−バス〔Recueille des Traveaux Chimique
des Pays−Bas）第77巻 1004頁ないし1009頁
（1958）及び同第79巻 382頁ないし390頁
（1959）〕 マリーゴールドを直かに田畑に植えて土壌中の
線虫密度を低減させる方法は広く知られており、
化学薬品に較べて残留毒性の心配がなく且つ効果
が長時間持続するなどのメリツトを備えている
が、反面マリーゴールドを植えた田畑では同時に
野菜類を栽培し難いので、その間休耕あるいは減
産を余儀なくされていた。 またα−ターチエニルを化学的に合成する方法
も研究されているが（例えば特開昭52−118462号
公報）、未だ実用化されるには至つていない。 問題点を解決するための手段 本発明者等は、このような事情に鑑みマリーゴ
ールドを組織培養によつて量産する方法につい
て、種々の試験研究を重ねた結果、組織培養にお
いてマリーゴールドをオーキシンあるいはオーキ
シンとサイトカイニンを含有するカルス化培地で
カルス誘導したのち、オーキシンを0.01mg／な
いし１mg／の低い濃度に規制した増殖培地を用
いて増殖することによつて、特に強い殺線虫力を
示す培養物が出来ることを知見し、これをｎ−ヘ
キサン、アセトン、アセトニトリル等の有機溶媒
によつて抽出して、根腐れ線虫に対しても有効な
優れた殺虫性能を有する殺線虫剤を見い出した。 本発明方法の実施に適する代表的なマリーゴー
ルド（Tagetes属）は、フレンチマリーゴールド
（Tagetes patula）、アフリカンマリーゴールド
（Tagetes erecta）等であり、本発明において
は、これらマリーゴールドの葉、茎、根、蕾など
から採取された組織片を常法により殺菌処理した
のち、植物ホルモンとしてオーキシンあるいはオ
ーキシンとサイトカイニンを含有するカルス化培
地においてカルス化誘導を行う。 なお、本発明の実施に適する代表的なオーキシ
ンは、インドール酢酸、ナフタレン酢酸、２，４
−ジクロロフエノキシ酢酸等であり、サイトカイ
ニンの代表的なものは、カイネチン、ベンジルア
デニン、ゼアチン等である。 カルス化培地としては、ムラシゲ・スクーグの
培地、リンスマイヤー・スクーグの培地、ガンボ
ルグの培地、ニツチエの培地などの基本培地に、
前記植物ホルモンの他にショ糖、ぶどう糖等の炭
素源などを適当量添加したものが好適であり、例
えばムラジゲ・スクーグの基本培地にシヨ糖を１
〜５重量％、寒天を0.5〜1.0重量％、オーキシン
としてナフタレン酢酸を0.01〜20mg／、サイト
カイニンとしてベンジルアデニンを０〜20mg／
の範囲で加えた培地にあつては、２〜３週間の培
養によつて良好なカルス形成が認められる。カル
ス化培養の条件としては、通常の植物組織培養と
同じであり、温度は15〜35℃、好ましくは20〜30
℃、PHは４〜８、好ましくは５〜６の範囲が夫々
適当である。 カルス誘導されたマリーゴールドは、引き続き
前記と同じオーキシンあるいはオーキシンとサイ
トカイニンを他の添加物と共に含む増殖培地にお
いて増殖されるが、本発明の実施においては、特
に強い殺線虫力を有する培養物を得るために、増
殖培地におけるオーキシンの添加量を0.01mg／
ないし１mg／の低濃度とし、且つサイトカイニ
ンについても不存在若しくは３mg／以下の低濃
度とすべきである。 増殖培地におけるオーキシンの添加量及びサイ
トカイニンの添加量が所定量より多くなると、培
養物を抽出して得られる殺線虫剤の効力が著しく
低下する。 なお、増殖培養の方法としては、寒天を含んだ
固定培地による静置培養、寒天を除いた液体培地
による振盪培養のいずれでも可能である。 培養されたマリーゴールドの抽出工程は、乾燥
したのは、ｎ−ヘキサン、アセトン、アセトニト
リル等の有機溶媒を用いて抽出する。 例えば乾燥した培養物を軽く粉砕し、これを10
〜100倍量のｎ−ヘキサンに浸漬し、30分ないし
数時間攪拌を行い、固形物を濾別すれば良い。 本発明殺線虫剤の使用に当つては、散布時に有
機溶媒を気化逸散させても良いが、予め抽出液か
ら有機溶媒を除去し、これに公知の増量剤を加え
て固形剤とし、あるいは水、乳化剤等を加えて水
溶液ないし乳濁液とすることができる。 本発明殺線虫剤を高速液体クロマドグラフ法に
よる分析の結果、培養に用いたマリーゴールドの
根の抽出液と酷似しており、α−ターチエニルと
その類縁物質を含むものであつた。 以下本発明方法の実施例及び効果について試験
例に基づいて具体的に説明する。 なお、これら試験例における殺線虫試験法は、
20〜50μの抽出液をスライドグラス上に落と
し、溶媒を風乾除去したのち、その上に脱イオン
水中あるいは線虫培養培地中の同一種の線虫を20
〜100匹置き、これを湿室したシヤーレ中に写し、
25℃の温度に保つた照明付インキユベーター中に
静置し、一定時間毎に顕微鏡観察して、線虫の生
存状態を判定したものである。 実施例１及び比較例１ フレンチマリーゴールド（品種名：ボレロ）の
発芽後２週間経過した無菌苗の子葉を概略５mm角
の大きさに切り、これをムラシゲ・スクーグの基
本培地にシヨ糖３重量％、寒天0.8重量％、ナフ
タレン酢酸0.1mg／、ベンジルアデニン0.1mg／
を加え、常法により滅菌したカルス化培地に置
床した。この状態で25℃の温度に保ち連続照明下
でカルト誘導を行い、１ケ月後に前記培養物をカ
ルス化培地からベンジルアデニンを除いた組成の
増殖培地に継代し、同じ条件で再び１ケ月培養
し、増殖を行つた。その後１ケ月間隔で２回継代
して増殖させた。 このようにして得られた培養物は、濃緑色の非
常に固いカルスであり、１回当りの増殖によつて
生産量比で約15倍の増加が認められた。 次いで、この培養物を常温、無菌下で乾燥し、
軽く砕き、乾燥した培養物1g当たりｎ−ヘキサ
ンを50mlの割合に混合し30分間抽出を行い、固形
物を濾別して抽出液を得た。 このようにして得られた抽出液を用いて殺線虫
試験を実施した。 殺線虫試験にはキタネグサレ線虫
（Pratylenchus penetrans）及びセノルハブデイ
テス エレガンス（Caenorhabditis elegans以下
C.elegansと略記する）を用いた。 キタネグサレ線虫（Pratylenchus penetrans）
を用いた試験は以下の通りである。すなわち、抽
出液及びその希釈液並びにコントロールとして純
ｎ−ヘキサンを夫々50μずつ別のスライドグラ
ス上に落として風乾させ、その上にルーサンカル
スにて培養したキタネグサレ線虫
（Pratylenchus penetrans）をベルマン法で脱イ
オン水中に集めた液を各々50μ（この中に線虫
は20〜40匹いる。）落とし、そのスライドグラス
を、湿室にしたシヤーレの中に置き、25℃の照明
付インキユベーター中８時間静置した後、顕微鏡
観察を行い、線虫の生死を判定した。 C.elegansを用いた試験も概略同様であり、抽
出物及びその希釈液並びにコントロールとして純
ｎ−ヘキサンを各々20μずつ別のスライドグラ
ス上に落として風乾し、その上に、NG培地にて
大腸菌を餌として培養したC.elegansを20〜100匹
移し、この上にNG培地を30μ加え、そのスラ
イドグラスを湿室にしたシヤーレの中に置き、25
℃の照明付インキユベーター中で８時間静置した
のち、顕微鏡観察を行い、線虫の生死を判定し
た。 なお、比較例として、天然栽培法によるフレン
チマリーゴールド（品種名：ボレロ）の根を乾燥
し、前記と同様の抽出処理を行つて得た抽出液及
びその希釈液について、C.elegansを用いた殺線
虫試験を行つた。 これらの試験結果は第１表に示したとおりであ
り、本発明方法によつて得られた抽出液は天然栽
培の根から得られた抽出液に匹敵する強い殺線虫
力が認められた。
含有することが知られている。〔例えばレキユレ
エ デス トラバツクス キミーク デス ペイ
ズ−バス〔Recueille des Traveaux Chimique
des Pays−Bas）第77巻 1004頁ないし1009頁
（1958）及び同第79巻 382頁ないし390頁
（1959）〕 マリーゴールドを直かに田畑に植えて土壌中の
線虫密度を低減させる方法は広く知られており、
化学薬品に較べて残留毒性の心配がなく且つ効果
が長時間持続するなどのメリツトを備えている
が、反面マリーゴールドを植えた田畑では同時に
野菜類を栽培し難いので、その間休耕あるいは減
産を余儀なくされていた。 またα−ターチエニルを化学的に合成する方法
も研究されているが（例えば特開昭52−118462号
公報）、未だ実用化されるには至つていない。 問題点を解決するための手段 本発明者等は、このような事情に鑑みマリーゴ
ールドを組織培養によつて量産する方法につい
て、種々の試験研究を重ねた結果、組織培養にお
いてマリーゴールドをオーキシンあるいはオーキ
シンとサイトカイニンを含有するカルス化培地で
カルス誘導したのち、オーキシンを0.01mg／な
いし１mg／の低い濃度に規制した増殖培地を用
いて増殖することによつて、特に強い殺線虫力を
示す培養物が出来ることを知見し、これをｎ−ヘ
キサン、アセトン、アセトニトリル等の有機溶媒
によつて抽出して、根腐れ線虫に対しても有効な
優れた殺虫性能を有する殺線虫剤を見い出した。 本発明方法の実施に適する代表的なマリーゴー
ルド（Tagetes属）は、フレンチマリーゴールド
（Tagetes patula）、アフリカンマリーゴールド
（Tagetes erecta）等であり、本発明において
は、これらマリーゴールドの葉、茎、根、蕾など
から採取された組織片を常法により殺菌処理した
のち、植物ホルモンとしてオーキシンあるいはオ
ーキシンとサイトカイニンを含有するカルス化培
地においてカルス化誘導を行う。 なお、本発明の実施に適する代表的なオーキシ
ンは、インドール酢酸、ナフタレン酢酸、２，４
−ジクロロフエノキシ酢酸等であり、サイトカイ
ニンの代表的なものは、カイネチン、ベンジルア
デニン、ゼアチン等である。 カルス化培地としては、ムラシゲ・スクーグの
培地、リンスマイヤー・スクーグの培地、ガンボ
ルグの培地、ニツチエの培地などの基本培地に、
前記植物ホルモンの他にショ糖、ぶどう糖等の炭
素源などを適当量添加したものが好適であり、例
えばムラジゲ・スクーグの基本培地にシヨ糖を１
〜５重量％、寒天を0.5〜1.0重量％、オーキシン
としてナフタレン酢酸を0.01〜20mg／、サイト
カイニンとしてベンジルアデニンを０〜20mg／
の範囲で加えた培地にあつては、２〜３週間の培
養によつて良好なカルス形成が認められる。カル
ス化培養の条件としては、通常の植物組織培養と
同じであり、温度は15〜35℃、好ましくは20〜30
℃、PHは４〜８、好ましくは５〜６の範囲が夫々
適当である。 カルス誘導されたマリーゴールドは、引き続き
前記と同じオーキシンあるいはオーキシンとサイ
トカイニンを他の添加物と共に含む増殖培地にお
いて増殖されるが、本発明の実施においては、特
に強い殺線虫力を有する培養物を得るために、増
殖培地におけるオーキシンの添加量を0.01mg／
ないし１mg／の低濃度とし、且つサイトカイニ
ンについても不存在若しくは３mg／以下の低濃
度とすべきである。 増殖培地におけるオーキシンの添加量及びサイ
トカイニンの添加量が所定量より多くなると、培
養物を抽出して得られる殺線虫剤の効力が著しく
低下する。 なお、増殖培養の方法としては、寒天を含んだ
固定培地による静置培養、寒天を除いた液体培地
による振盪培養のいずれでも可能である。 培養されたマリーゴールドの抽出工程は、乾燥
したのは、ｎ−ヘキサン、アセトン、アセトニト
リル等の有機溶媒を用いて抽出する。 例えば乾燥した培養物を軽く粉砕し、これを10
〜100倍量のｎ−ヘキサンに浸漬し、30分ないし
数時間攪拌を行い、固形物を濾別すれば良い。 本発明殺線虫剤の使用に当つては、散布時に有
機溶媒を気化逸散させても良いが、予め抽出液か
ら有機溶媒を除去し、これに公知の増量剤を加え
て固形剤とし、あるいは水、乳化剤等を加えて水
溶液ないし乳濁液とすることができる。 本発明殺線虫剤を高速液体クロマドグラフ法に
よる分析の結果、培養に用いたマリーゴールドの
根の抽出液と酷似しており、α−ターチエニルと
その類縁物質を含むものであつた。 以下本発明方法の実施例及び効果について試験
例に基づいて具体的に説明する。 なお、これら試験例における殺線虫試験法は、
20〜50μの抽出液をスライドグラス上に落と
し、溶媒を風乾除去したのち、その上に脱イオン
水中あるいは線虫培養培地中の同一種の線虫を20
〜100匹置き、これを湿室したシヤーレ中に写し、
25℃の温度に保つた照明付インキユベーター中に
静置し、一定時間毎に顕微鏡観察して、線虫の生
存状態を判定したものである。 実施例１及び比較例１ フレンチマリーゴールド（品種名：ボレロ）の
発芽後２週間経過した無菌苗の子葉を概略５mm角
の大きさに切り、これをムラシゲ・スクーグの基
本培地にシヨ糖３重量％、寒天0.8重量％、ナフ
タレン酢酸0.1mg／、ベンジルアデニン0.1mg／
を加え、常法により滅菌したカルス化培地に置
床した。この状態で25℃の温度に保ち連続照明下
でカルト誘導を行い、１ケ月後に前記培養物をカ
ルス化培地からベンジルアデニンを除いた組成の
増殖培地に継代し、同じ条件で再び１ケ月培養
し、増殖を行つた。その後１ケ月間隔で２回継代
して増殖させた。 このようにして得られた培養物は、濃緑色の非
常に固いカルスであり、１回当りの増殖によつて
生産量比で約15倍の増加が認められた。 次いで、この培養物を常温、無菌下で乾燥し、
軽く砕き、乾燥した培養物1g当たりｎ−ヘキサ
ンを50mlの割合に混合し30分間抽出を行い、固形
物を濾別して抽出液を得た。 このようにして得られた抽出液を用いて殺線虫
試験を実施した。 殺線虫試験にはキタネグサレ線虫
（Pratylenchus penetrans）及びセノルハブデイ
テス エレガンス（Caenorhabditis elegans以下
C.elegansと略記する）を用いた。 キタネグサレ線虫（Pratylenchus penetrans）
を用いた試験は以下の通りである。すなわち、抽
出液及びその希釈液並びにコントロールとして純
ｎ−ヘキサンを夫々50μずつ別のスライドグラ
ス上に落として風乾させ、その上にルーサンカル
スにて培養したキタネグサレ線虫
（Pratylenchus penetrans）をベルマン法で脱イ
オン水中に集めた液を各々50μ（この中に線虫
は20〜40匹いる。）落とし、そのスライドグラス
を、湿室にしたシヤーレの中に置き、25℃の照明
付インキユベーター中８時間静置した後、顕微鏡
観察を行い、線虫の生死を判定した。 C.elegansを用いた試験も概略同様であり、抽
出物及びその希釈液並びにコントロールとして純
ｎ−ヘキサンを各々20μずつ別のスライドグラ
ス上に落として風乾し、その上に、NG培地にて
大腸菌を餌として培養したC.elegansを20〜100匹
移し、この上にNG培地を30μ加え、そのスラ
イドグラスを湿室にしたシヤーレの中に置き、25
℃の照明付インキユベーター中で８時間静置した
のち、顕微鏡観察を行い、線虫の生死を判定し
た。 なお、比較例として、天然栽培法によるフレン
チマリーゴールド（品種名：ボレロ）の根を乾燥
し、前記と同様の抽出処理を行つて得た抽出液及
びその希釈液について、C.elegansを用いた殺線
虫試験を行つた。 これらの試験結果は第１表に示したとおりであ
り、本発明方法によつて得られた抽出液は天然栽
培の根から得られた抽出液に匹敵する強い殺線虫
力が認められた。
【表】
また本実施例及び比較例の抽出液を夫々高速液
体クロマトグラフ法によりFluka社製のα−ター
チエニルを用いて分析した結果、本実施例の抽出
液は0.5μg／mlの割合でα−ターチエニルを含有
し、比較例の抽出液には0.4μg／mlのα−ターチ
エニルが含まれていた。 比較例２及び３ 実施例１においてフレンチマリーゴールドの子
葉を、ムラシゲ・スクーグの基本培地にシヨ糖３
重量％、寒天0.8重量％、ナフタレン酢酸３mg／
、ベンジルアデニン３mg／を加えたカルス化
培地でカルス誘導を行い、カルス培地と成分及び
濃度が同じである増殖培地を用いて同様の培養処
理を行い、その培養物前記と同じように抽出処理
してキタネグサレ線虫に対する殺線虫試験を行つ
た。（比較例２） また、カルス化培地及び増殖培地におけるナフ
タレン酢酸を３mg／、ベンジルアデニンを10
mg／にして同様の培養を行い、このようにして
得た培養物の抽出液についてC.elegansに対する
殺線虫試験を行つた。（比較例３） これらの試験結果は第２表に示したとおりであ
り、オーキシン濃度が高い増殖培地で組織培養し
たマリーゴールドから得られる抽出液の殺線虫力
は極めて弱いものであつた。
体クロマトグラフ法によりFluka社製のα−ター
チエニルを用いて分析した結果、本実施例の抽出
液は0.5μg／mlの割合でα−ターチエニルを含有
し、比較例の抽出液には0.4μg／mlのα−ターチ
エニルが含まれていた。 比較例２及び３ 実施例１においてフレンチマリーゴールドの子
葉を、ムラシゲ・スクーグの基本培地にシヨ糖３
重量％、寒天0.8重量％、ナフタレン酢酸３mg／
、ベンジルアデニン３mg／を加えたカルス化
培地でカルス誘導を行い、カルス培地と成分及び
濃度が同じである増殖培地を用いて同様の培養処
理を行い、その培養物前記と同じように抽出処理
してキタネグサレ線虫に対する殺線虫試験を行つ
た。（比較例２） また、カルス化培地及び増殖培地におけるナフ
タレン酢酸を３mg／、ベンジルアデニンを10
mg／にして同様の培養を行い、このようにして
得た培養物の抽出液についてC.elegansに対する
殺線虫試験を行つた。（比較例３） これらの試験結果は第２表に示したとおりであ
り、オーキシン濃度が高い増殖培地で組織培養し
たマリーゴールドから得られる抽出液の殺線虫力
は極めて弱いものであつた。
【表】
実施例２ないし４及び比較例４
フレンチマリーゴールド（品種名：ボレロ）の
発芽後２週間経過した子葉（実施例２）を採取
し、常法に従い70％エタノール及びアンチホルミ
ン液で殺菌後、よく滅菌精製水で水洗し、これを
ムラシゲ・スクーグの基本培地に、シヨ糖３重量
％、寒天0.8重量％、ナフタレン酢酸１mg／を
加え、常法により滅菌したカルス化培地に置床し
てカルスを誘導し、また、同じく前記マリーゴー
ルドの根（実施例３）及び蕾（実施例４）につい
ても同様の条件によつてカルスを誘導した。 培養はいずれも25℃の温度で連続照明下にて行
い、１ケ月後に培養物を前記と同組成の増殖培地
に継代し、さらに同一培養条件下で１ケ月間増殖
を行い、さらに１ヵ月間隔で２回継代して増殖さ
せ、このようにして得た増殖物は、いずれも黄緑
色から褐色のカルスに多数の短い根の分化を起こ
したものであつたが、これを常温、無菌下で乾燥
し、軽く砕き、1g当たり50mlのｎ−ヘキサンを
加えて30分間抽出を行い、固形物を濾別して抽出
液を得た。 高速液体クロマトグラフ法による分析の結果、
いずれの実施例における抽出液も0.04μg／mlのα
−ターチエニルを含有していた。 従つて、比較例４として合成されたα−ターチ
エニル（Fluka社製）をｎ−ヘキサン溶液に
0.04μg／mlの割合で加えた試料をつくり、前記各
抽出液と共に殺線虫試験を行つた。 これらの試験結果は第３表に示したとおりであ
り、マリーゴールドはいずれの組織部位から組織
培養したものも同じように殺線虫性を有してお
り、且つα−ターチエニルの濃度が同じであつて
も、マリーゴールド培養物からの抽出液は合成α
−ターチエニルを含むものに較べて明らかに強い
殺線虫を有していることがわかつた。
発芽後２週間経過した子葉（実施例２）を採取
し、常法に従い70％エタノール及びアンチホルミ
ン液で殺菌後、よく滅菌精製水で水洗し、これを
ムラシゲ・スクーグの基本培地に、シヨ糖３重量
％、寒天0.8重量％、ナフタレン酢酸１mg／を
加え、常法により滅菌したカルス化培地に置床し
てカルスを誘導し、また、同じく前記マリーゴー
ルドの根（実施例３）及び蕾（実施例４）につい
ても同様の条件によつてカルスを誘導した。 培養はいずれも25℃の温度で連続照明下にて行
い、１ケ月後に培養物を前記と同組成の増殖培地
に継代し、さらに同一培養条件下で１ケ月間増殖
を行い、さらに１ヵ月間隔で２回継代して増殖さ
せ、このようにして得た増殖物は、いずれも黄緑
色から褐色のカルスに多数の短い根の分化を起こ
したものであつたが、これを常温、無菌下で乾燥
し、軽く砕き、1g当たり50mlのｎ−ヘキサンを
加えて30分間抽出を行い、固形物を濾別して抽出
液を得た。 高速液体クロマトグラフ法による分析の結果、
いずれの実施例における抽出液も0.04μg／mlのα
−ターチエニルを含有していた。 従つて、比較例４として合成されたα−ターチ
エニル（Fluka社製）をｎ−ヘキサン溶液に
0.04μg／mlの割合で加えた試料をつくり、前記各
抽出液と共に殺線虫試験を行つた。 これらの試験結果は第３表に示したとおりであ
り、マリーゴールドはいずれの組織部位から組織
培養したものも同じように殺線虫性を有してお
り、且つα−ターチエニルの濃度が同じであつて
も、マリーゴールド培養物からの抽出液は合成α
−ターチエニルを含むものに較べて明らかに強い
殺線虫を有していることがわかつた。
【表】
実施例５及び６
フレンチマリーゴールド〔品種名：ボレロ（実
施例５）〕及びアフリカンマリーゴールド〔品種
名：オレンジハワイ（実施例６）〕の発芽後２週
間経過した子葉を採取し、エタノール及びアンチ
ホルミン液で殺菌したのち滅菌精製水で水洗し、
これらをムラシゲ・スクーグの基本培地にシヨ糖
３重量％、寒天0.8重量％、ナフタレン酢酸１
mg／、ベンジルアデニン３mg／を加え、常法
により滅菌したカルス化培地に置床してカルスを
誘導した。カルス化培養はどちらも25℃の温度で
連続照明を行い、１ケ月後に得られた培養物を前
記と同一組成の増殖培地に継代し、さらに同一培
養条件で１ケ月間増殖を行つた。その後さらにも
う一度同一組成の培地及び同一条件で１ケ月間増
殖を行つた。 このようにして得られた培養物は、いずれも黄
緑色のカルスであり、また１回当りの増殖によつ
て生産量比で約20倍の増加があつた。 前記培養物を常温、無菌下で乾燥し、軽く砕い
たのち、1g当たり50mlの割合のｎ−ヘキサンと
混合し、30分間抽出を行い、固形物を濾別して抽
出液を得た。 このようにして得られた抽出液及びその希釈液
を用いて前記実施例と同様にして殺線虫試験を行
つた。 試験の結果は第４表に示したとおりであり、フ
レンチマリーゴールド及びアフリカンマリーのい
ずれもその培養物から得られた抽出液は優れた殺
線虫性を示すものであつた。
施例５）〕及びアフリカンマリーゴールド〔品種
名：オレンジハワイ（実施例６）〕の発芽後２週
間経過した子葉を採取し、エタノール及びアンチ
ホルミン液で殺菌したのち滅菌精製水で水洗し、
これらをムラシゲ・スクーグの基本培地にシヨ糖
３重量％、寒天0.8重量％、ナフタレン酢酸１
mg／、ベンジルアデニン３mg／を加え、常法
により滅菌したカルス化培地に置床してカルスを
誘導した。カルス化培養はどちらも25℃の温度で
連続照明を行い、１ケ月後に得られた培養物を前
記と同一組成の増殖培地に継代し、さらに同一培
養条件で１ケ月間増殖を行つた。その後さらにも
う一度同一組成の培地及び同一条件で１ケ月間増
殖を行つた。 このようにして得られた培養物は、いずれも黄
緑色のカルスであり、また１回当りの増殖によつ
て生産量比で約20倍の増加があつた。 前記培養物を常温、無菌下で乾燥し、軽く砕い
たのち、1g当たり50mlの割合のｎ−ヘキサンと
混合し、30分間抽出を行い、固形物を濾別して抽
出液を得た。 このようにして得られた抽出液及びその希釈液
を用いて前記実施例と同様にして殺線虫試験を行
つた。 試験の結果は第４表に示したとおりであり、フ
レンチマリーゴールド及びアフリカンマリーのい
ずれもその培養物から得られた抽出液は優れた殺
線虫性を示すものであつた。
【表】
【表】
実施例７及び８
フレンチマリーゴールド（品種名：ボレロ）の
発芽後２週間目の子葉を採取し、常法に従つて70
％エタノール及びアンチホルミン液で殺菌し、よ
く滅菌精製水で水洗し、これをムラシゲ・スクー
グの基本培地にシヨ糖３重量％、寒天0.8重量％、
インドール酢酸１mg／、ベンジルアデニン１
mg／を加え常法により滅菌した培地（実施例
７）及びムラシゲ・スクーグの基本培地にシヨ糖
３重量％、寒天0.8重量％、ナフタレン酢酸１
mg／、カイネチン１mg／を加え常法により滅
菌した培地（実施例８）に置床し、カルスを誘導
した。 培養はどちらも25℃の温度で連続照明を行い、
１ケ月後に得られた培養物をそれぞれ前記と同じ
組成の培地に継代し、同一培養条件でさらに１ケ
月間増殖を行い、その後１ケ月間隔で２回継代し
て増殖させた。 このようにして得られた培養物は、どちらも黄
緑色のカルスであり、これを常温、無菌下で乾燥
し、軽く砕いたのち、1g当たり50mlのｎ−ヘキ
サンを加えて30分間抽出を行い、固形物を濾別し
て抽出液を得た。前記抽出液及びその希釈液を用
いて実施例１に示したと同じ方法で殺線虫試験を
行つた。 試験結果は第５表に示したとおりであり、オー
キシン及びサイトカイニンの種類に関係なく、こ
れらの培養物の抽出液には優れた殺線虫性が認め
られた。
発芽後２週間目の子葉を採取し、常法に従つて70
％エタノール及びアンチホルミン液で殺菌し、よ
く滅菌精製水で水洗し、これをムラシゲ・スクー
グの基本培地にシヨ糖３重量％、寒天0.8重量％、
インドール酢酸１mg／、ベンジルアデニン１
mg／を加え常法により滅菌した培地（実施例
７）及びムラシゲ・スクーグの基本培地にシヨ糖
３重量％、寒天0.8重量％、ナフタレン酢酸１
mg／、カイネチン１mg／を加え常法により滅
菌した培地（実施例８）に置床し、カルスを誘導
した。 培養はどちらも25℃の温度で連続照明を行い、
１ケ月後に得られた培養物をそれぞれ前記と同じ
組成の培地に継代し、同一培養条件でさらに１ケ
月間増殖を行い、その後１ケ月間隔で２回継代し
て増殖させた。 このようにして得られた培養物は、どちらも黄
緑色のカルスであり、これを常温、無菌下で乾燥
し、軽く砕いたのち、1g当たり50mlのｎ−ヘキ
サンを加えて30分間抽出を行い、固形物を濾別し
て抽出液を得た。前記抽出液及びその希釈液を用
いて実施例１に示したと同じ方法で殺線虫試験を
行つた。 試験結果は第５表に示したとおりであり、オー
キシン及びサイトカイニンの種類に関係なく、こ
れらの培養物の抽出液には優れた殺線虫性が認め
られた。
【表】
【表】
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ マリーゴールドをオーキシンあるいはオーキ
シンとサイトカイニンを含有するカルス化培地で
カルス誘導したのち、オーキシンを0.01mg／な
いし１mg／の低い濃度に規制した増殖培地を用
いて組織培養し、前記処理によつて得た培養物を
有機溶媒によつて抽出することを特徴とする殺線
虫剤の製造法。 ２ マリーゴールドの種類がフレンチマリーゴー
ルドである特許請求の範囲１に記載の方法。 ３ マリーゴールドの種類がアフリカンマリーゴ
ールドである特許請求の範囲１に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31152187A JPH01151504A (ja) | 1987-12-08 | 1987-12-08 | 殺線虫剤の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31152187A JPH01151504A (ja) | 1987-12-08 | 1987-12-08 | 殺線虫剤の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01151504A JPH01151504A (ja) | 1989-06-14 |
| JPH0581561B2 true JPH0581561B2 (ja) | 1993-11-15 |
Family
ID=18018241
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP31152187A Granted JPH01151504A (ja) | 1987-12-08 | 1987-12-08 | 殺線虫剤の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01151504A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2311009B (en) * | 1996-03-06 | 2000-01-26 | Mohd Taufiq Khan | Pharmaceutical compositions containing tagetes plants |
| JP6729563B2 (ja) | 2015-04-28 | 2020-07-22 | 東レ株式会社 | 複合中空糸膜およびその製造方法 |
-
1987
- 1987-12-08 JP JP31152187A patent/JPH01151504A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01151504A (ja) | 1989-06-14 |
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