JPH058784B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

［発明の分野］ 本発明は、全血試料の分析用具に関するもので
ある。さらに詳しくは本発明は、全血試料を分析
する際に、全血中のヘマクリツト値の変動に影響
を受けることなく、その血漿部分に含まれるアナ
ライトを定量することを可能にする分析用具に関
するものである。 ［発明の背景］ 従来、血液の生化学検査は試料として患者から
採取した血液をそのまま用いることはできず、分
離操作を経て全血から血漿（あるいは血清、以下
においては、特に断わらない限り、これらを総称
して血漿という）を分取して、これを試料とする
方法が利用されてきた。また、血漿中のアナライ
トを分析するには、試験管と液体試薬類を用いる
通常の湿式の比色化学分析法を利用するのが一般
的であつた。 従来の生化学検査は、上記の「血漿の分離」お
よび「湿式化学分析」が必須の工程であるので、
準備と操作が煩雑であり、かつ時間と熟練を要す
るものである。このため従来の生化学検査法は、
患者と対面中に検査結果を即時的に診断に利用し
たいという医師の要求等を満足させることは困難
である。 生化学検査の簡易化と即時化のためにいくつか
の方法が既に提案されている。それらの方法の大
部分は、準備段階としての「血漿分離」を行うこ
となく全血を直接に試料とすること、および「湿
式化学分析」の代りに試薬や血球濾過機能等を予
め組込んだ乾式のシート状分析用具（たとえば、
一体型多層分析要素）を用いることを特徴として
いる。 以上の点から提案された全血を試料とする乾式
の検査法の例としては、特開昭49−11395号公報
記載の方法および分析器具を挙げることができ
る。この方法は、分析用具として、上から順に、
二枚の多孔性グラスフイルター、薄膜フイルター
及び検出試薬含有酢酸セルロースシートの四層を
積み重ねた円盤状の器具で、その上に全血を滴下
すると、グラスフイルターにより白血球や赤血球
その他の有形成分は除去され、血漿は試薬と混合
されて酢酸セルロースシート上で発色反応が行わ
れるようにしたものである。 また、他の例としては特開昭57−53661号公報
記載の全血から血漿を分離する器具及び方法があ
る。この方法は、特殊なガラス繊維層を血球フイ
ルターとして用いるものであり、このフイルター
を全血分析用具に用いるに際しては、通常の多層
診断材、すなわち単に試薬を含浸させた試験紙型
（たとえば、特開昭54−151096号公報記載）の乾
式診断材の上に重ねた形式のものとすることが開
示されている。 しかし、これらの方法及び器具は血球などの有
形成分の分離のためには有効であるが、全血中の
血球部分の容積、すなわちヘマトクリツト値（以
下Hct値と記す）の変動に対する考慮がなされて
いないので、分析試薬と反応する血漿量が試料ご
とに変化するとの問題がある。すなわち、全血は
血球部分と血漿部分とからなるものであるが、そ
のHct値がヒトによつて、およそ20〜70％の間で
変動し、一定していない。たとえば、Hct値がそ
れぞれ30％と50％の全血を試料にして、これらの
分析用具に100μを滴下したときには、試薬と
反応する血漿量は前者は70μ、後者は50μと
相違するため、定量分析の原理から逸脱してしま
うことになる。さらに検査対象のアナライトの種
類によつて、その存在量が血漿部分と血球部分と
では大幅に違うものが多く、この点も定量分析の
障害となる。 従つて、全血を直接検査試料とした場合には、
これまでに開示されている分析用具では検査値に
関して大きな問題点が生じる。 一方、特公昭53−21667号および特開昭55−
90859号の各公報には、全血試料を点着したとき、
これを展延する作用、即ち液体試料計量作用があ
る多孔性展開層（以下、展開層と記す）を備えた
一体型多層分析要素が開示されている。液体試料
計量作用をもつ展開層とは、液滴をその上に点着
させたとき、液の広がりの面積がほぼ液量に比例
するように液を広げ、ついでその液を、下側に配
置された層に供給する機能を示す層である。たと
えば点着液量が5μのときの液の広がりが0.5cm²、
10μでは1.0cm²、15μでは1.5cm²のごとく、液を
広げる作用であり、これを計量作用、あるいは展
延、展開と呼んでいる。この計量作用によつて、
この種の展開層を有する多層分析要素は、その展
開層の表面に異なる量の試料液が点着されても、
単位面積当りの展開層自身が含む液量及びその下
層の試薬層等に供給される液量は常に一定に平準
化されることが大きな特徴である。 しかし上記発明の展開層の液体試料計量作用は
全血試料全体の量に対して機能するものであり、
やはりHct値についての考慮がなく、また血球な
どの有形成分は試薬層に浸透しにくいため、得ら
れる分析値の定量性は充分でない。 全血を直接試料とした分析が乾式の多層分析要
素を用いて可能であるというためには、その乾式
分析法が従来の湿式分析法で試料として血漿を用
いる分析法と同じ検査値が出せるものでなければ
ならない。すなわち、全血中の血漿部分における
アナライト量を高い精度で定量できる方法でなけ
ればならない。 特開昭55−164356号公報の多層分析要素は、そ
の上に点着された全血を展開させ、かつ血球部分
を完全に濾過するために織物とゼラチン層とを組
合せて利用するものである。このため血漿量につ
いて液体試料計量作用が生じるようにされてい
る。しかし、分析対象アナライトが高分子のもの
である場合には、その移動拡散に対して全血中の
血球部分による阻害が生じ、アナライトを試薬層
まで到達させることが難しいとの問題があり、精
度が充分でないとの問題がある。 ［発明の目的および要旨］ 本発明は、全血試料を用いながら、そのヘマト
クリツト値の変動にかかわらず、高い精度にてア
ナライトの定量を可能にする乾式の分析用具を提
供することを目的とする。 また本発明は、全血試料を用いながら、そのヘ
マトクリツト値の変動にかかわらず、高い精度に
て高分子量のアナライトの定量を可能にする乾式
の分析用具を提供することを目的とする。 本発明は、ガラス繊維フイルターからなる血球
濾過層、織布、編布もしくはメンブランフイルタ
ーからなる液体試料計量作用のある展開層、少な
くとも一層の試薬層を含む検出機能層、および光
透過性水不透過性支持体がこの順に積層されてな
る全血試料分析用具を提供するものである。 また本発明は、ガラス繊維フイルターからなる
血球濾過層、分析試薬を含有する織布、編布もし
くはメンブランフイルターからなる液体試料計量
作用のある展開層、および光透過性水不透過性支
持体がこの順に積層されてなる全血試料分析用具
をも提供する。 ［発明の効果］ 本発明の全血試料分析用具は、全血を直接試料
とし、その中のアナライト量を乾式にて定量する
ことを可能にする分析用具である。従つて、本発
明の分析用具は、血漿分離の煩雑な操作を必要と
せず、分析操作が事実上、全血試料の一滴を用具
上に点着するだけでアナライトを高い精度にて定
量分析できるとの優れた特徴を有している。 本発明の全血試料分析用具では、液体試料計量
作用のある展開層の表面に、血球濾過層が密着載
置されているので、展開層における液体試料計量
作用が働く以前に血球の濾過が行なわれる。従つ
て、血漿についてのみ液体試料計量作用が働き、
全血を試料としていながら、その検査値は血漿部
分のアナライト量となる。また展開層におけるア
ナライトの移動拡散に対する全血中の血球部分に
よる阻害が生じないため、アナライトが高分子量
のもの、あるいはアナライトが高分子物と結合し
ているようなものであつても、全血を直接試料に
して定量できる。 本発明の全血試料分析用具では、織布、編布も
しくはメンブランフイルターからなる展開層の上
にガラス繊維フイルターからなる血球濾過層のあ
る多孔材を載置し、それを通して展開層に液体試
料を供給しても、展開層の液体試料計量作用が全
く損なわれることがなく、かえつてそのような構
成にて分析用具を形成することにより、全血試料
の血漿中のアナライトの分析が高い精度でできる
との機能を示す。従つて、そのような目的に従来
利用されてきた血漿分離と湿式分析量の組合わせ
からなる分析方法に比較して、本発明の分析用具
を用いることにより、分析操作の簡易化および即
時化が実現され、患者と対面中に検査結果をすぐ
に診断に利用したいという医師の要求を満たすこ
とができる。 ［発明の構成］ 本発明に用いられる液体試料計量作用のある展
開層は、織布、編布もしくはメンブランフイルタ
ーから選ばれる。 しかし、以下に述べるように、展開層と血球濾
過層を一体成型する場合は、織布または編布から
なる展開層を用いることが好ましい。 上記展開層に用いることができる織物生地（織
布）としては、特開昭55−164356号、特開昭57−
66359号等の各公報に開示の広範囲の種類の織物
生地があげられる。織物生地のうちではたて
（経）糸とよこ（緯）糸とで織つた平織物が好ま
しく、平織物のうちでは細布生地、金巾生地、ブ
ロード生地、ポプリン生地等が好ましい。織物生
地を構成する糸としては、後述する編物生地を構
成する糸と同様の素材からなる糸があげられ、糸
の形態としてはフイラメント糸、紡績糸（加捻
糸）のいずれをも用いることができ、これらのう
ちでは紡績糸が好ましい。織物生地の糸の太さ
は、綿紡績糸番手で表わして一般に約20Sから約
150S、好ましくは約40Sから約120S相当の範囲、
または絹糸デニールで表わして一般に約35Dから
約300D、好ましくは約45Dから約130D相当の範
囲である。また、織物生地の厚さは、一般に約
100μｍから約500μｍ、好ましくは約120μｍから
約350μｍの範囲である。織物生地の有する空隙
率は、一般に約40％から約90％、好ましくは約50
％から約85％の範囲である。 上記展開層に用いることのできる編物生地（編
布、すなわち編んだ布状物）としては、広範囲の
種類の編物生地があげられ、それらのうちではた
て（経）メリヤスおよびよこ（緯）メリヤスが好
ましい。たてメリヤスとしては、一重アトラス編
生地、トリコツト編生地、ダブルトリコツト編生
地、、ミラニーズ編生地、ラツシエル編生地等を
用いることができ、よこメリヤスとしては、平編
生地、パール編生地、ゴム編生地、両面編生地等
を用いることができる。編物生地を編成する糸と
しては、綿、絹、羊毛等の天然繊維の糸、ビスコ
ースレーヨン、キユプラ等の再生セルロース、セ
ルロースジアセテート、セルローストリアセテー
ト等の半合成有機ポリマー、ポリアミド（各種の
ナイロン類）、アセタール化ポリビニルアルコー
ル（ビニロン等）、ポリアクリロニトリル、ポリ
エチレンテレフタレート、ポリエチレン、ポリプ
ロピレン、ポリウレタン等の合成有機ポリマーの
細繊維からなる糸または単繊維からなる糸、天然
繊維と再生セルロース、半合成または合成有機ポ
リマー繊維との混合繊維からなる糸があげられ
る。糸の形態としては、フイラメント糸、紡績糸
（加捻糸）のいずれをも用いることができ、これ
らのうちでは紡績糸が好ましい。編物生地の糸の
太さは、綿紡績糸番手で表わして一般に約40Sか
ら約150S、好ましくは約60Sから約120S相当の範
囲、または絹糸デニールで表わして一般に約35D
から約130D、好ましくは約45Dから約90D相当の
範囲である。編物生地の編成工程時のゲージ数と
しては、一般に約20から約50の範囲、編物生地の
厚さは一般に約100μｍから約600μｍ、好ましく
は約150μｍから約400μｍの範囲、編物生地の有
する空隙率は一般に約40％から約90％、好ましく
は約50％から約85％の範囲である。たてメリヤス
のうちでは、縦方向の伸縮が少なく、また編物展
開層のラミネーシヨン工程における操作が容易で
ある点、また裁断時に編目がほどけない等の点で
トリコツト編生地、ラツセル編生地、ミラニーズ
編生地、ダブルトリコツト編生地が好ましい。 なお、本発明の全血試料分析用具に用いられる
展開層は、液体試料計量作用に有する展開機能以
外にも、試薬等を含有させることにより数々の機
能を有することができる。たとえば、展開層に検
出試薬を含ませ、そこで分析反応が行なわれるよ
うにすることもでき、このような態様も本発明に
含まれる。 一体型多層分析要素の基本構成の例としては、
第１図に示したような、最上層（最外層）として
展開層１１、最下層に光透過性（透明）・水不透
過性１３があつて、そ間に、必要に応じて検出機
能層１２を組込んだ層構成のものがあげられる。
検出機能層は少なくとも一層の試薬層を含む層で
ある。ただし、展開層に試薬を含ませることによ
つて、展開層と検出機能層とを一層にてまかなう
ようにすることもできる。検出機能層としては、
試薬層以外に、反応層、反応検出層、濾過層、半
透膜機能層、バリヤ層、光遮蔽層、光反射層、吸
水層など多くの種類のものがある。検出機能層の
数も、一層から多数の層に至るまで特に制限はな
い。この検出機能層は一層一機能の場合と、たと
えば反応層に光反射性の光遮蔽物質を含ませ、反
射測光時における白色反射濃度の安定性を高める
役割をさせるなど一層に数々の機能をもたせる場
合とがある。 織布、編布もしくはメンブランフイルターから
なる液体試料計量作用のある展開層をもつ一体型
多層分析要素は、血液の分析対象アナライト別に
それぞれスライドの形態とした多くの製品が知ら
れている。本発明の分析用具の調製に際しては、
これらのものをそのまま、または変形、修飾など
を施して利用することができる。あるいは、液体
試料計量作用のある展開層をもつ一体型多層分析
要素を、各種の文献を参考にして、アナライトや
分析条件等に応じて作成することもできる。 本発明の全血試料分析用具は展開層の上に血球
濾過層が配置されてなる分析用具であり、第２図
に例示されているように、展開層２１、検出機能
層２２、および光透過性（透明）・水不透過性支
持体２３からなる多層分析要素の展開層２１の上
に血球濾過層２４が配置されてなる構成からなる
分析用具である。これらの展開層２１、検出機能
層２２、および光透過性（透明）・水不透過性支
持体２３は、それぞれ第１図に示した一体型多層
分析要素の基本構成における展開層１１、検出機
能層１２、および光透過性（透明）・水不透過性
支持体１３に対応するものである。また第２図の
２１，２２および２３からなる積層体も、第１図
における１１，１２および１３を積層した一体型
多層分析要素に対応するものである。 本発明に用いられる血球濾過層の材料はガラス
繊維フイルターである。 このガラス繊維フイルターは既に種々のメーカ
ーから市販されており、これらの市販品から各繊
維の長さと直径、空隙率や吸収量等を指標にして
血球濾過能のよいものを選んで用いることができ
る。また、公知技術に基づいてガラス繊維フイル
ターを調製することができることは勿論である。
ガラス繊維フイルターの実例としては、特開昭57
−53661号公報に挙げてあるもの、東洋濾紙(株)よ
り市販されているGA−100（厚さ約450μｍ）、GA
−200（厚さ約750μｍ）及びGB−100R（厚さ約
400μｍ）などがある。 この血球濾過層は、全血濾過後そこに留る赤血
球の色が、透明支持体側からの反射測光のときに
見えないようにすることが必要である。そのため
測光時に濾過層を取除くことも一つの方法ではあ
るが、血球濾過層の全部または底部に、染料、顔
料などの光遮蔽物質を含ませて、血球濾過層の全
部または一部に光遮蔽層の機能を持たせることが
望ましい。たとえば、二酸化チタンあるいは硫酸
バリウム等の白色顔料を血球濾過層の底部に充填
すれば、これら充填物が赤血球の色を遮蔽し、か
つ反射測光時の反射層の役割をすることができ
る。 また、血漿が血球から汚染等の影響を受けるの
を防止するために溶血防止剤あるいは抗凝固剤を
血球濾過層に含ませてもよい。そのほか、必要に
応じて凝固促進剤等の薬剤を加えてもよい。 血球濾過層の厚さは、血球濾過機能が充分に作
用し、かつ分析操作が適切な時間内に終了するよ
うな範囲内から選択する。具体的な厚さとして
は、好ましくは100μｍから2000μｍまでの範囲
内、より好ましくは150μｍから1000μｍの範囲内
の厚さのものから選択する。また血球濾過層の大
きさは、展開層全面を覆う大きさのものでもよ
く、あるいは展開層の一部のみを覆う大きさのも
の（すなわち、いわゆるパツチ）でもよい。ただ
し、血球濾過層が小さいと血球濾過層の側面より
血球が漏出する恐れがあるので、その場合には、
パツチの側面を疎水性材料でシールる必要があ
る。また、血球濾過層が展開層全面を覆う大きさ
を有する場合には、血球濾過層の表面を、点着部
を残して疎水性インクでスクリーン印刷被覆して
もよい。 展開層上に設置する血球濾過層は、その両層の
境界面を液が円滑に通過し、かつ液切れ部分が形
成されないように展開層上に均一な密着状態にて
配置されることが必要である。この密着状態を形
成する方法としては、静電的な付着力を利用した
り、あるいは血球濾過層の外縁を適当な方法で展
開層表面上に押圧し、液流を妨げない状態で接着
する等の方法がある。また展開層の素材によつて
は展開層と血球濾過層とを一体成型してもよい。 展開層と血球濾過層を一体成型するには、いく
つかの方法が考えられ、その例としては、予め形
成された展開層上に血球濾過層を抄紙成型する方
法があげられる。具体的にはまず初めに展開層の
素材を選択し比較的密な展開層を形成する。次い
で血球濾過層の素材を選択し抄紙方法により、展
開層より密度の粗ないわゆるかさ高性のある血球
濾過層を展開層に重ねて一体成型するのが簡便で
ある。たとえば、ブロード生地を展開層として選
んだ場合、ブロード生地を構成する糸を構成する
繊維と同質またはより太いあるいはより長い繊維
を分散したスラリーを上記ブロード生地上に抄紙
成型することにより血球濾過層を容易に得ること
ができる。 本発明の血球濾過層を含む一体型多層分析要素
を用いて全血中のアナライトを定量するには、ま
ず血球濾過層の上に一定量の全血を点着し、所定
時間インキユーベーシヨンした後、フイルム中の
発色濃度を透明支持体側から反射測光によつて測
定し、あらかじめ作成してある検量線から、全血
中の血漿部分のアナライト量を算出する方法が一
般的に利用される。 血球濾過層に点着する全血の量は、その層によ
り濾過されて下の展開層に到達する血漿量が数μ
から数10μの間に入るよう、Hct値の変動の
巾を考慮して決めることが好ましい。 たとえば点着全血量を30μと定めた時、試料
のHct値が30〜60％の間に分布すると仮定する
と、計算上は21μ〜12μの血漿部分が存在す
るので、このうち血球濾過層の留る分を差引いた
血漿が展開層に到達することになる。 血漿量を展開層に充分に供給するためには、ガ
ラス繊維フイルターを用いた場合、血球濾過層に
吸収される血漿量に対して50％を越える血漿量が
濾過されて展開層に到達するように全血試料の点
着量を決めるか、あるいは一定の点着量に対して
上記の血漿量を濾過するように血球濾過層を構成
する事が好ましい。 本発明の全血試料分析用具の分析対象となるア
ナライトには特に制限はなく、本発明の分析用具
は全血中の任意のアナライトの定量分析に利用す
ることができる。ただし、本発明の全血試料分析
用具は、糖類、蛋白質、酵素などの高分子量のア
ナライト、特にビリルビンなどの難拡散性のアナ
ライトなどを全血試料を用いて分析する場合に有
利である。アナライトの種類に応じた分析試薬お
よび多層分析要素の構成などについては既に種々
知られており、所望の分析目的の全血試料分析用
具の調製に際してそれらの公知技術を利用するこ
とができることは前述のとおりである。 次に本発明の実施例を示す。 ［実施例 １］ 特公昭57−28227号公報および特開昭59−54962
号公報に記載された実施例に準じて、ポリエチレ
ンテレフタレート製透明支持体（（厚さ：180μ
ｍ）の上に、試薬層（厚さ：20μｍ）およびTiO₂
を含む反射層（厚さ：7μｍ）を積層形成し、そ
の上に液体試料計量作用を有するメンブランフイ
ルター（富士写真フイルム(株)製FM−300）（厚
さ：150μｍ、最小孔径：3μｍ、空隙率：平均85
％）を圧着ラミネートして展開層としてグルコー
ス定量用の一体型多層分析要素を製造した。な
お、上記の試薬層と反射層の塗布液はそれぞれ以
下の組成からなるものである。 試薬層塗布液： 脱イオンゼラチン 200ｇ グルコースオキシダーゼ 15000IU ペルオキシダーゼ 25000IU ４−アミノアンチピリン 12ｇ １，７−ジヒドロキシナフタレン ５ｇ ポリオキシエチレン ノニルフエニルエーテル ２ｇ 反射層塗布液： 脱イオンゼラチン 10ｇ TiO₂微粒子 80ｇ ポリオキシエチレン ノニルフエニルエーテル ２ｇ 上記の多層分析要素の展開層の上に、東洋濾紙
(株)製ガラス繊維フイルターGA−200（厚さ：約
750μｍ、空隙率：約90％）を全面に密着載置し
て本発明の全血試料分析用具として次の実験を行
つた。 試料としてHct値35％、血漿中のグルコース濃
度が122mg／dlの全血を用い、全血試料分析用具
への全血の点着量を変動させたときの試薬層への
液の広がりの面積を測定し、また発色濃度を反射
測光（測定波長：510nm）により測定した。測定
結果を第１表に示す。

【表】 上記の結果により、展開層の上に血球濾過層を
設置し、それを通して展開層に試料液を供給して
も、展開層の液体試料計量作用が全く損なわれる
ことがないことがわかつた。 ［実施例 ２］ 全ビリルビン定量用一体型多層分析要素を次の
ごとく製造した。 ポリエチレンテレフタレート透明支持体（厚
さ：180μｍ）の上に吸水層−１（乾燥膜厚：15μ
ｍ）および吸水層−２（乾燥膜厚：10μｍ）を順
次塗布形成し、その上にブロード織り100双の界
面活性剤処理された綿布を上記の吸水層上に湿式
ラミネートして多孔性試薬層のマトリツクスとし
た。さらに上記多孔性試薬層のマトリツクスに試
薬層塗布液および試薬層塗布液を順次塗布含
浸させ全ビリルビン定量用一体型多層分析要素を
製造した。なお、吸水層−１と吸水層−２の塗布
液、試薬層塗布液および試薬層塗布液の組成
はそれぞれ以下の通りである。 吸水層−１塗布液： 鹸化度88％（20℃における ４％水溶液の粘度5cps） ポリビニルアルコール 100ｇ 50％ポリ（２−ヒドロキシ− ３−オキシプロピレン）−ｎ− ノニルフエニルエーテル水溶液 ５ｇ 水 895ml 吸水層−２塗布液： 鹸化度99％（20℃における ４％水溶液の粘度30cps） ポリビニルアルコール 80ｇ 50％ポリ（２−ヒドロキシ− ３−オキシプロピレン）−ｎ− ノニルフエニルエーテル水溶液 ５ｇ 水 915ml 試薬層塗布層： ７−（２，３−ジヒドロキシプロピル） テオフイリン ［479−18−５］ 150ｇ スルホサルチル酸 30ｇ ヒドロキシプロピルメタクリレート・ Ｎ−（α−スルホメチル−α −メチルエチル）アクリルアミド ６：４共重合体（1.5％水溶液） 1000ｇ ２，４−ジクロロベンゼン ジアゾニウム・スルホサルチレート 1.9ｇ 試薬層塗布液： 酸化チタン微紛末 55ｇ ７−（２，３−ジヒドロキシプロピル） テオフイリン ［479−18−５］ 150ｇ 50％ポリ（２−ヒドロキシ− ３−オキシプロピレン）−ｎ− ノニルフエニルエーテル水溶液 10ｇ 水 1000ml 以上の操作で製造された全ビリルビン定量用一
体型多層分析要素の展開層の上に、東洋濾紙(株)製
ガラス繊維フイルターGB−100R（厚さ：約400μ
ｍ、空隙率：約90％）の直径６mm円形のものを枠
で押えて密着載置して血球濾過層とし、本発明に
おける全血試料分析用具を作成した。 この分析用具の血球濾過層の上にHct値の異な
る全血試料を30μ点着し、１分後に血球濾過層
を引きはがし、37℃で６分間インキユベートし、
透明支持体側より反射濃度（OD、測定波長
540nm）を測定した。測定結果を第２表に示す。

【表】 第２表において、BIL濃度とはビリルビン濃
度、定量値とは上記の全血試料分析用具を用いて
測定した反射濃度（OD）から換算したBIL濃度
であり、基準値とは公知の血漿を試料とする湿式
分析法（Ｊ−Ｇ法）による定量値である。 上記の結果から、本発明の全血試料分析用具を
用いた場合に、Hct値の変動には無関係に同一レ
ベルのビリルビン濃度の全血に対しては、ほぼ同
一の吸光度と定量値を示すことが判明した。更に
上記の定量値は、全血を濾過して得た血漿を用い
る湿式法によつてビリルビンを定量した値とも優
れた一致を示し、本発明の分析用具が全血試料分
析用具として有用であることが判明した。 ［実施例 ３］ 実施例２で作成した全血試料分析用具における
展開層の液体試料計量作用をテストしたところ、
８〜12μの間で低濃度検体においては、全く同
一の定量値1.0mg／dlを与えることが観察された。
また中濃度検体において8μでは5.6mg／dl、9μ
では5.7mg／dl、10μでは5.8mg／dl、11μで
は5.6mg／dl、そして12μで5.6mg／dlの値を与
えた。よつて、本発明の全血試料分析用具の液体
試料計量作用が優れていることが確認された。 ［実施例 ４］ 特開昭59−12355号公報に記載の実施例６に準
じて、ポリエチレンテレフタレート透明支持体
（厚さ：180μｍ）の上に指示薬含有層（乾燥膜
厚：8μｍ）を塗布形成し、その上に液体遮断層
を圧着ラミネートし、更に基質分解性物質含有層
（乾燥膜厚：10μｍ）、光反射層（乾燥膜厚：6μ
ｍ）、および接着層（乾燥膜厚：2μｍ）を順に塗
布形成し、最後にブロード織り綿布からなる展開
層を圧着ラミネートして、BUN（尿素窒素）分析
用の一体型多層分析要素を作成した。なお、指示
薬含有層、液体遮断層、基質分解性物質含有層、
光反射層、および接着層の塗布液の組成および製
造法はそれぞれ以下の通りである。 指示薬含有層塗布液： ブロモクレゾールグリーン 8.1ｇ 酢酸ビニル・アクリル酸エステル 共重合体ラテツクス （セビアンＡ−5821、 ダイセル(株)製） 510ｇ クエン酸 4.5ｇ 水 550ml 液体遮断層： ２％シリコーン（東レシリコーン SH−8011、
東レ(株)製）ヘキサン溶液に、セルロース・ジおよ
びトリアセテートより製造されたメンブランフイ
ルター（富士写真(株)製FM−300）（厚さ：140μ
ｍ、空隙率：約85％、最小孔径：3μｍ）を浸漬
後、乾燥して製造した。 基質分解性物質含有層塗布液： 脱イオンゼラチン 9.0ｇ／m² ｐ−ノニルフエノキシ ポリグリシドール 0.2ｇ／m² エチレンジアミンテトラ酢酸 四ナトリウム 3.45ｇ／m² Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン− N′−３−プロパンスルホン酸 （EPPS）ナトリウム塩 3.45ｇ／m² 燐酸水素二ナトリウム 0.115ｇ／m² １，４−ジチオスレイトール ［3483−12−３］ 0.9ｇ／m² ウレアーゼ 36000U／m² ビスビニルスルホニル メチルエーテル 54mg／m² 以上をPH8.0に緩衝させる。 光反射層塗布液： 二酸化チタン微粒子 40ｇ ゼラチン 40ｇ ｐ−ノニルフエノキシ ポリグリシドール 1.5ｇ 水 400mg 接着層塗布液： ゼラチン 25ｇ 水 500mg ｐ−ノニルフエノキシ ポリグリシドール 1.5ｇ 上記の分析要素の上に、東洋濾紙(株)製のガラス
繊維フイルターGB−100R（直径７mmの円盤状）
をα−シアノアクリレート系の接着剤を用い、グ
ラスフアイバー円盤の周囲二箇所で軽く接着して
血球濾過層を形成し、本発明に従う全血試料分析
用具とした。この分析用具を用いて次の実験を行
つた。 試料としてヘパリン処理をした全血25μを血
球濾過層上に点着したところ、点着後１分以内に
血漿量9.5μが展開層に拡散した。赤血球の流出
及び溶血は全く観察されなかつた。 さらに、上記展開した試料を前記特開昭59−
12355号公報に記載の実施例６の測定方法に従つ
て分析操作し、別に、同一の全血試料を遠心法で
分離した血漿を9.5μ、ガラス繊維フイルターを
有さない前記BUN分析用多層分析要素に点着し
て分析したところ、両者はほぼ同様の値を与え
た。 ［実施例 ５］ 各種ガラス繊維フイルターによる全血試料の血
球・血漿分離性能の評価を行なつた。 東洋濾紙(株)製の各種ガラス繊維フイルター（第
３表に示す）を円盤状に打ち抜き、液体試料計量
作用のあるセルロース薄層クロマトグラフイー用
板（DC−Plastikfolten Cellulose Art.5577
Merck社製）上に置き、その上にヘパリン処理
した全血を点着した。約１分後にグラスフアイバ
ー濾紙を除去し、血漿のみがクロマト板上に拡散
した円形を面積計にて定量した。

【表】 一方、同一のクロマトグラフイー板に遠心法に
て分離した血清３，５，７，９，11，13，15μ
をそれぞれ点着して形成された展開部分の面積を
同様に測定した結果、それぞれ、0.50，0.88，
1.19，1.57，1.83，2.23，2.57cm²であることが判明
した。この結果から上記クロマトグラフイー板の
液体試料展開作用が確認され、検量線（血漿量＝
5.83×展開面積）が得られた。この検量線を用い
て、上記展開面積から血漿の展開量を算出した。
結果を第４表に示す。

【表】 ［実施例 ６］ 全血試料のヘマクリツト値と血球濾過層の関係
を調べた。 東洋濾紙(株)製ガラス繊維フイルターGB−100R
（直径７mm、吸収量［Vb］＝13.6）を用い、全血
試料の点着量を25μとして、実施例５と同様に
実験を行なつた。測定結果を第５表に示す。

【表】 【図面の簡単な説明】

第１図は一般的な多層分析要素の構成を示す層
構成模式図であり、第２図は本発明の全血分析用
具の標準的な構成を示す層構成模式図である。 １１，２１……展開層、１２，２２……検出機
能層、１３，２３……光透過性（透明）・水不透
過性支持体、２４……血球濾過層。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ガラス繊維フイルターからなる血球濾過層、
   織布、編布もしくはメンブランフイルターからな
   る液体試料計量作用のある展開層、少なくとも一
   層の試薬層を含む検出機能層、および光透過性水
   不透過性支持体がこの順に積層されてなる全血試
   料分析用具。 ２ 上記血球濾過層が光遮蔽物質を含む特許請求
   の範囲第１項記載の全血試料分析用具。 ３ 上記血球濾過層が厚さ100〜2000μｍの範囲
   にある特許請求の範囲第１項記載の全血試料分析
   用具。 ４ ガラス繊維フイルターからなる血球濾過層、
   分析試薬を含有する織布、編布もしくはメンブラ
   ンフイルターからなる液体試料計量作用のある展
   開層、および光透過性水不透過性支持体がこの順
   に積層されてなる全血試料分析用具。 ５ 上記血球濾過層が光遮蔽物質を含む特許請求
   の範囲第４項記載の全血試料分析用具。 ６ 上記血球濾過層が厚さ100〜2000μｍの範囲
   にある特許請求の範囲第４項記載の全血試料分析
   用具。