JPH06113876A - 発酵法によるヌクレオシドの製造法 - Google Patents

発酵法によるヌクレオシドの製造法

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JPH06113876A
JPH06113876A JP26485492A JP26485492A JPH06113876A JP H06113876 A JPH06113876 A JP H06113876A JP 26485492 A JP26485492 A JP 26485492A JP 26485492 A JP26485492 A JP 26485492A JP H06113876 A JPH06113876 A JP H06113876A
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JP
Japan
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nucleoside
methionine
ferm
microorganism
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JP26485492A
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Akitaka Yamamoto
晃隆 山本
Tadatoshi Ichiumi
忠俊 一海
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Ajinomoto Co Inc
Original Assignee
Ajinomoto Co Inc
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Abstract

(57)【要約】 【構成】 L体、D体或はDL体のメチオニンを50m
g/l以上添加した液体培地に、ヌクレオシド生産能を
有する微生物を培養し、培養液中にヌクレオシドを生成
蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする発酵法に
よるヌクレオシドの製造法。 【効果】 本発明の方法により、従来法より工業的に安
定的且つ有利にヌクレオシドを製造することができる。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は医薬品原料、医薬品、調
味料等に広く利用されているアデノシン、イノシン、グ
アノシン等のヌクレオシドの製造法に関するものであ
る。
【0002】
【従来の技術】従来、発酵法によるヌクレオシドの製造
方法に使用される微生物としては、通常の炭素源や窒素
源から直接ヌクレオシドを生産する方法として、ヌクレ
オシドを生産する為に必要であり又はヌクレオシドの生
産能を高めるのに効果が有る事が知られている性質、例
えばアデニン及び/又はキサンチン要求性、8−アザグ
アニン、8−アザアデニン耐性等のプリンアナログ耐
性、アミノ酸要求性、GMPレダクタ−ゼ欠損、サルフ
ァ剤耐性、メチオニンスルホキシド耐性等の性質のいく
つかを有していて、即ちアデノシン、イノシン、グアノ
シン生産能を有する人工変異株が使用されている。
【0003】培養条件としては、マグネシュ−ム塩を高
濃度に含有した培地で培養する事により、ヌクレオシド
生産量を増大させる方法が知られている。
【0004】しかしながら、これらの製造法はいずれも
単位時間当りのヌクレオシド生産量が低く、工業生産に
おいてより有利なヌクレオシドの製造方法の開発が望ま
れていた。
【0005】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、単位
時間当りのヌクレオシド生産量を増大し、工業的に有利
な発酵法によるヌクレオシドの製造法を提供することで
ある。
【0006】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、従来法よ
り安価かつ効率的な発酵法によるヌクレオシドの製造法
を開発するために鋭意研究を重ねた結果、ヌクレオシド
生産能を有する微生物を液体培地に培養し、培養液中に
ヌクレオシドを生成蓄積させる際に当該液体培地にL
体、D体或はDL体のメチオニンを添加して培養する
と、単位時間当りのヌクレオシド生産量が飛躍的に向上
する事を見いだし、本発明を完成するに至った。
【0007】すなわち、本発明は、L体、D体或はDL
体のメチオニンを50mg/l以上、好ましくは100
〜200mg/l添加した液体培地に、ヌクレオシド生
産能を有する微生物を培養し、培養液中にヌクレオシド
を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする発
酵法によるヌクレオシドの製造法を提供するものであ
る。
【0008】本発明において添加されるメチオニンは、
L体、D体或はDL体の混合物のいずれを用いてもよ
い。本発明において添加されるメチオニンとは、液体培
地に有機窒素源として添加されるもの由来のメチオニン
とは別に添加されるものである。添加される量は50m
g/l以上、好ましくは100〜200mg/lであ
る。従来の方法では通常、ヌクレオシド生産用の発酵培
地に、有機窒素源として添加されるもの由来のメチオニ
ンとは別に、L体、D体或はDL体のメチオニンをさら
に添加することはない。この意味において本願発明は全
く新規なものである。
【0009】本発明におけるヌクレオシドはアデノシ
ン、グアノシン、あるいはイノシンである。従って本発
明において用いられる微生物は、アデノシン、イノシ
ン、グアノシン生産能を有する菌株で有れば何れでも使
用する事が出来る。具体的に例示すると以下のような菌
株が挙げられる。
【0010】1)アデノシン生産菌 バチルス・ズブチリス AJ12707(FERM P
−12951) バチルス・ズブチリス AJ12708(FERM P
−12952) バチルス・ズブチリス AJ12050(FERM P
−7149) バチルス・ズブチリス AJ12518(FERM P
−11473) バチルス・ズブチリス AJ12519(FERM P
−11474)
【0011】2)イノシン生産菌 バチルス・ズブチリス AJ11044(FERM P
−3588) バチルス・ズブチリス AJ11370(FERM P
−5022) バチルス・ズブチリス AJ11372(FERM P
−5024) バチルス・ズブチリス AJ11374(FERM P
−5026)
【0012】3)グアノシン生産菌 バチルス・ズブチリス AJ11313(FERM P
−4824) バチルス・ズブチリス AJ11315(FERM P
−4826) バチルス・ズブチリス AJ11317(FERM P
−4828) バチルス・プミルス AJ11318(FERM P
−4829) バチルス・プミルス AJ11320(FERM P
−4831) 等が使用される。
【0013】本発明で使用する液体培地は、L体、D体
或はDL体のメチオニンを50mg/l以上添加する以
外は、炭素源、窒素源、無機塩類、グアニン及び/又は
アデニン、その他必要に応じてアミノ酸、ビタミン、核
酸等の有機微量栄養素を含有する通常の栄養培地であ
る。
【0014】炭素源としては、使用する変異株が利用可
能なものであればよく、グルコース、シュクロース、フ
ラクトース、マルトース等の糖類、これら糖類を含有す
る澱粉糖化液、甘藷糖蜜、甜菜糖蜜、ハイテストモラセ
ス等が使用され、更には酢酸等の有機酸類、エタノー
ル、グリセリン等のアルコール類も使用される。
【0015】窒素源としては、アンモニアガス、アンモ
ニア水、アンモニウム塩類、尿素、硝酸塩類等が使用さ
れ、その他補助的に使用される有機窒素源として、油粕
類、大豆加水分解液、コーンスティープリカー、酵母エ
キス、ペプトン等が挙げられる。
【0016】無機塩類としては、リン酸塩、マグネシウ
ム塩、カルシウム塩、鉄塩、マンガン塩等が適宜使用さ
れる。
【0017】又、栄養要求物質としてのグアニンは、グ
アニン、グアニン鉱酸塩、グアノシン、グアニル酸、リ
ボ核酸等のいずれを使用してもかまわない。栄養要求物
質としてのアデニンは、アデニン、アデニン鉱酸塩、ア
デノシン、アデニル酸、リボ核酸等のいずれをも使用で
きる。
【0018】また本発明に使用する微生物がアミノ酸等
の要求性を有する場合には、その要求物質を補添するこ
とが必要である。
【0019】微生物の培養は通常pH5ないし9、温度
20ないし40℃の範囲で好気的条件下で行われるのが
望ましい。培養液のpH調整は、無機あるいは有機の
酸、アルカリ性物質、更には尿素、炭酸カルシウム、ア
ンモニアガスなどによって行う。かくして2ないし5日
間培養することにより、培養液中に著量のヌクレオシド
が生成蓄積される。
【0020】培養液からヌクレオシドを採取する方法は
公知の方法に従って行えばよく、例えば菌体を分離除去
し、イオン交換樹脂処理法あるいは濃縮冷却晶析法、膜
分離法、その他の方法を組み合わせることにより行なわ
れる。不純物を除くためには常法の活性炭吸着法及び再
結法を用いて精製してもよい。
【0021】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
する。
【0022】実施例1 表1に示す組成のシ−ド培地50mlを、500ml溶
振とうフラスコに分注し蒸気加圧殺菌後、バチルス・ズ
ブチリスAJ12518 FERM P−11473を
1白金耳接種し、34℃にて16時間培養した。この培
養液15mlを、表1に示す組成の主発酵培地300m
lを分注した1.0L容のジャ−ファ−メンタ−に添加
し、34℃で培地中のグルコ−スが完全に消費される迄
通気攪拌培養した。
【0023】
【表1】
【0024】培養は、通気量1/2VVmとし、攪拌数
は、培養液中の溶存酸素分圧を酸素測定用隔膜電極にて
測定し、溶存酸素分圧0以上を保つ様変化させ、また培
養液のpHはアンモニアガスを用いて6.0〜7.5の
範囲に調節しつつ行なった。
【0025】その時のメチオニン添加による、単位時間
当りのアデノシン生成量向上効果を表2に示す。
【0026】
【表2】
【0027】メチオニンの添加により、対糖収率を低下
させる事なく、単位時間当りのアデノシン生産量が向上
する事を確認した。その時のメチオニンの添加量は50
mg/l以上、好ましくは100〜200mg/lで効
果が認められた。
【0028】又添加メチオニンはL体、D体、DL体共
同様の効果が認められた。
【0029】実施例2 表3に示す組成のシ−ド培地50mlを、500ml溶
振とうフラスコに分注し蒸気加圧殺菌後、バチルス・ズ
ブチリスAJ11372 FERM P−5024を1
白金耳接種し、34℃にて16時間培養した。この培養
液15mlを、表3に示す組成の主発酵培地300ml
を分注した1.0L容のジャ−ファ−メンタ−に添加
し、34℃で培地中のグルコ−スが完全に消費される迄
通気攪拌培養した。
【0030】
【表3】
【0031】培養は、通気量1/2VVmとし、攪拌数
は、培養液中の溶存酸素分圧を酸素測定用隔膜電極にて
測定し、溶存酸素分圧0以上を保つ様変化させ、また培
養液のpHはアンモニアガスを用いて6.0〜7.5の
範囲に調節しつつ行なった。
【0032】その時のメチオニン添加による、単位時間
当りのイノシン生成量向上効果を表4に示す。
【0033】
【表4】
【0034】メチオニンの添加により、対糖収率を低下
させる事なく、単位時間当りのイノシン生産量が向上す
る事を確認した。
【0035】実施例3 表5に示す組成のシ−ド培地50mlを、500ml溶
振とうフラスコに分注し蒸気加圧殺菌後、バチルス・ズ
ブチリスAJ11315 FERM P−4826を1
白金耳接種し、34℃にて16時間培養した。この培養
液15mlを、表3に示す組成の主発酵培地300ml
を分注した1.0L容のジャ−ファ−メンタ−に添加
し、34℃で培地中のグルコ−スが完全に消費される迄
通気攪拌培養した。
【0036】
【表5】
【0037】培養は、通気量1/2VVmとし、攪拌数
は、培養液中の溶存酸素分圧を酸素測定用隔膜電極にて
測定し、溶存酸素分圧0以上を保つ様変化させ、また培
養液のpHはアンモニアガスを用いて6.0〜7.5の
範囲に調節しつつ行なった。
【0038】その時のメチオニン添加による、単位時間
当りのグアノシン生成量向上効果を表6に示す。
【0039】
【表6】
【0040】メチオニンの添加により、対糖収率を低下
させる事なく、単位時間当りのグアノシン生産量が向上
する事を確認した。
【0041】
【発明の効果】本発明の方法により、対糖収率を低下さ
せる事なく、単位時間当りのヌクレオシド生産量が向上
する。従来法より工業的に安定的且つ有利にヌクレオシ
ドを製造することができる。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成4年10月21日
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】0019
【補正方法】変更
【補正内容】
【0019】微生物の培養は通常pH5ないし9、温度
20ないし40℃の範囲で好気的条件下で行われるのが
望ましい。培養液のpH調整は、無機あるいは有機の
酸、アルカリ性物質、更には尿素、炭酸カルシウム、ア
ンモニアガスなどによって行う。かくして2ないし
間培養することにより、培養液中に著量のヌクレオシド
が生成蓄積される。

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 L体、D体或はDL体のメチオニンを5
    0mg/l以上添加した液体培地に、ヌクレオシド生産
    能を有する微生物を培養し、培養液中にヌクレオシドを
    生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする発酵
    法によるヌクレオシドの製造法。
  2. 【請求項2】 L体、D体或はDL体のメチオニンを1
    00〜200mg/l添加した液体培地に、ヌクレオシ
    ド生産能を有する微生物を培養し、培養液中にヌクレオ
    シドを生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とす
    る特許請求の範囲第1項記載の製造法。
  3. 【請求項3】 ヌクレオシドがアデノシン、グアノシ
    ン、あるいはイノシンである特許請求の範囲第1項ある
    いは第2項記載の製造法。
JP26485492A 1992-10-02 1992-10-02 発酵法によるヌクレオシドの製造法 Pending JPH06113876A (ja)

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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9012182B2 (en) 2004-03-31 2015-04-21 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing purine nucleosides and nucleotides by fermentation using bacterium belonging to the genus Bacillus or Escherichia
WO2020071538A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing target substance by bacterial fermentation

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9012182B2 (en) 2004-03-31 2015-04-21 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing purine nucleosides and nucleotides by fermentation using bacterium belonging to the genus Bacillus or Escherichia
WO2020071538A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing target substance by bacterial fermentation

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