JPH06113876A - 発酵法によるヌクレオシドの製造法 - Google Patents
発酵法によるヌクレオシドの製造法Info
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- JPH06113876A JPH06113876A JP26485492A JP26485492A JPH06113876A JP H06113876 A JPH06113876 A JP H06113876A JP 26485492 A JP26485492 A JP 26485492A JP 26485492 A JP26485492 A JP 26485492A JP H06113876 A JPH06113876 A JP H06113876A
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 L体、D体或はDL体のメチオニンを50m
g/l以上添加した液体培地に、ヌクレオシド生産能を
有する微生物を培養し、培養液中にヌクレオシドを生成
蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする発酵法に
よるヌクレオシドの製造法。 【効果】 本発明の方法により、従来法より工業的に安
定的且つ有利にヌクレオシドを製造することができる。
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有する微生物を培養し、培養液中にヌクレオシドを生成
蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする発酵法に
よるヌクレオシドの製造法。 【効果】 本発明の方法により、従来法より工業的に安
定的且つ有利にヌクレオシドを製造することができる。
Description
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は医薬品原料、医薬品、調
味料等に広く利用されているアデノシン、イノシン、グ
アノシン等のヌクレオシドの製造法に関するものであ
る。
味料等に広く利用されているアデノシン、イノシン、グ
アノシン等のヌクレオシドの製造法に関するものであ
る。
【0002】
【従来の技術】従来、発酵法によるヌクレオシドの製造
方法に使用される微生物としては、通常の炭素源や窒素
源から直接ヌクレオシドを生産する方法として、ヌクレ
オシドを生産する為に必要であり又はヌクレオシドの生
産能を高めるのに効果が有る事が知られている性質、例
えばアデニン及び/又はキサンチン要求性、8−アザグ
アニン、8−アザアデニン耐性等のプリンアナログ耐
性、アミノ酸要求性、GMPレダクタ−ゼ欠損、サルフ
ァ剤耐性、メチオニンスルホキシド耐性等の性質のいく
つかを有していて、即ちアデノシン、イノシン、グアノ
シン生産能を有する人工変異株が使用されている。
方法に使用される微生物としては、通常の炭素源や窒素
源から直接ヌクレオシドを生産する方法として、ヌクレ
オシドを生産する為に必要であり又はヌクレオシドの生
産能を高めるのに効果が有る事が知られている性質、例
えばアデニン及び/又はキサンチン要求性、8−アザグ
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性、アミノ酸要求性、GMPレダクタ−ゼ欠損、サルフ
ァ剤耐性、メチオニンスルホキシド耐性等の性質のいく
つかを有していて、即ちアデノシン、イノシン、グアノ
シン生産能を有する人工変異株が使用されている。
【0003】培養条件としては、マグネシュ−ム塩を高
濃度に含有した培地で培養する事により、ヌクレオシド
生産量を増大させる方法が知られている。
濃度に含有した培地で培養する事により、ヌクレオシド
生産量を増大させる方法が知られている。
【0004】しかしながら、これらの製造法はいずれも
単位時間当りのヌクレオシド生産量が低く、工業生産に
おいてより有利なヌクレオシドの製造方法の開発が望ま
れていた。
単位時間当りのヌクレオシド生産量が低く、工業生産に
おいてより有利なヌクレオシドの製造方法の開発が望ま
れていた。
【0005】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、単位
時間当りのヌクレオシド生産量を増大し、工業的に有利
な発酵法によるヌクレオシドの製造法を提供することで
ある。
時間当りのヌクレオシド生産量を増大し、工業的に有利
な発酵法によるヌクレオシドの製造法を提供することで
ある。
【0006】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、従来法よ
り安価かつ効率的な発酵法によるヌクレオシドの製造法
を開発するために鋭意研究を重ねた結果、ヌクレオシド
生産能を有する微生物を液体培地に培養し、培養液中に
ヌクレオシドを生成蓄積させる際に当該液体培地にL
体、D体或はDL体のメチオニンを添加して培養する
と、単位時間当りのヌクレオシド生産量が飛躍的に向上
する事を見いだし、本発明を完成するに至った。
り安価かつ効率的な発酵法によるヌクレオシドの製造法
を開発するために鋭意研究を重ねた結果、ヌクレオシド
生産能を有する微生物を液体培地に培養し、培養液中に
ヌクレオシドを生成蓄積させる際に当該液体培地にL
体、D体或はDL体のメチオニンを添加して培養する
と、単位時間当りのヌクレオシド生産量が飛躍的に向上
する事を見いだし、本発明を完成するに至った。
【0007】すなわち、本発明は、L体、D体或はDL
体のメチオニンを50mg/l以上、好ましくは100
〜200mg/l添加した液体培地に、ヌクレオシド生
産能を有する微生物を培養し、培養液中にヌクレオシド
を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする発
酵法によるヌクレオシドの製造法を提供するものであ
る。
体のメチオニンを50mg/l以上、好ましくは100
〜200mg/l添加した液体培地に、ヌクレオシド生
産能を有する微生物を培養し、培養液中にヌクレオシド
を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする発
酵法によるヌクレオシドの製造法を提供するものであ
る。
【0008】本発明において添加されるメチオニンは、
L体、D体或はDL体の混合物のいずれを用いてもよ
い。本発明において添加されるメチオニンとは、液体培
地に有機窒素源として添加されるもの由来のメチオニン
とは別に添加されるものである。添加される量は50m
g/l以上、好ましくは100〜200mg/lであ
る。従来の方法では通常、ヌクレオシド生産用の発酵培
地に、有機窒素源として添加されるもの由来のメチオニ
ンとは別に、L体、D体或はDL体のメチオニンをさら
に添加することはない。この意味において本願発明は全
く新規なものである。
L体、D体或はDL体の混合物のいずれを用いてもよ
い。本発明において添加されるメチオニンとは、液体培
地に有機窒素源として添加されるもの由来のメチオニン
とは別に添加されるものである。添加される量は50m
g/l以上、好ましくは100〜200mg/lであ
る。従来の方法では通常、ヌクレオシド生産用の発酵培
地に、有機窒素源として添加されるもの由来のメチオニ
ンとは別に、L体、D体或はDL体のメチオニンをさら
に添加することはない。この意味において本願発明は全
く新規なものである。
【0009】本発明におけるヌクレオシドはアデノシ
ン、グアノシン、あるいはイノシンである。従って本発
明において用いられる微生物は、アデノシン、イノシ
ン、グアノシン生産能を有する菌株で有れば何れでも使
用する事が出来る。具体的に例示すると以下のような菌
株が挙げられる。
ン、グアノシン、あるいはイノシンである。従って本発
明において用いられる微生物は、アデノシン、イノシ
ン、グアノシン生産能を有する菌株で有れば何れでも使
用する事が出来る。具体的に例示すると以下のような菌
株が挙げられる。
【0010】1)アデノシン生産菌 バチルス・ズブチリス AJ12707(FERM P
−12951) バチルス・ズブチリス AJ12708(FERM P
−12952) バチルス・ズブチリス AJ12050(FERM P
−7149) バチルス・ズブチリス AJ12518(FERM P
−11473) バチルス・ズブチリス AJ12519(FERM P
−11474)
−12951) バチルス・ズブチリス AJ12708(FERM P
−12952) バチルス・ズブチリス AJ12050(FERM P
−7149) バチルス・ズブチリス AJ12518(FERM P
−11473) バチルス・ズブチリス AJ12519(FERM P
−11474)
【0011】2)イノシン生産菌 バチルス・ズブチリス AJ11044(FERM P
−3588) バチルス・ズブチリス AJ11370(FERM P
−5022) バチルス・ズブチリス AJ11372(FERM P
−5024) バチルス・ズブチリス AJ11374(FERM P
−5026)
−3588) バチルス・ズブチリス AJ11370(FERM P
−5022) バチルス・ズブチリス AJ11372(FERM P
−5024) バチルス・ズブチリス AJ11374(FERM P
−5026)
【0012】3)グアノシン生産菌 バチルス・ズブチリス AJ11313(FERM P
−4824) バチルス・ズブチリス AJ11315(FERM P
−4826) バチルス・ズブチリス AJ11317(FERM P
−4828) バチルス・プミルス AJ11318(FERM P
−4829) バチルス・プミルス AJ11320(FERM P
−4831) 等が使用される。
−4824) バチルス・ズブチリス AJ11315(FERM P
−4826) バチルス・ズブチリス AJ11317(FERM P
−4828) バチルス・プミルス AJ11318(FERM P
−4829) バチルス・プミルス AJ11320(FERM P
−4831) 等が使用される。
【0013】本発明で使用する液体培地は、L体、D体
或はDL体のメチオニンを50mg/l以上添加する以
外は、炭素源、窒素源、無機塩類、グアニン及び/又は
アデニン、その他必要に応じてアミノ酸、ビタミン、核
酸等の有機微量栄養素を含有する通常の栄養培地であ
る。
或はDL体のメチオニンを50mg/l以上添加する以
外は、炭素源、窒素源、無機塩類、グアニン及び/又は
アデニン、その他必要に応じてアミノ酸、ビタミン、核
酸等の有機微量栄養素を含有する通常の栄養培地であ
る。
【0014】炭素源としては、使用する変異株が利用可
能なものであればよく、グルコース、シュクロース、フ
ラクトース、マルトース等の糖類、これら糖類を含有す
る澱粉糖化液、甘藷糖蜜、甜菜糖蜜、ハイテストモラセ
ス等が使用され、更には酢酸等の有機酸類、エタノー
ル、グリセリン等のアルコール類も使用される。
能なものであればよく、グルコース、シュクロース、フ
ラクトース、マルトース等の糖類、これら糖類を含有す
る澱粉糖化液、甘藷糖蜜、甜菜糖蜜、ハイテストモラセ
ス等が使用され、更には酢酸等の有機酸類、エタノー
ル、グリセリン等のアルコール類も使用される。
【0015】窒素源としては、アンモニアガス、アンモ
ニア水、アンモニウム塩類、尿素、硝酸塩類等が使用さ
れ、その他補助的に使用される有機窒素源として、油粕
類、大豆加水分解液、コーンスティープリカー、酵母エ
キス、ペプトン等が挙げられる。
ニア水、アンモニウム塩類、尿素、硝酸塩類等が使用さ
れ、その他補助的に使用される有機窒素源として、油粕
類、大豆加水分解液、コーンスティープリカー、酵母エ
キス、ペプトン等が挙げられる。
【0016】無機塩類としては、リン酸塩、マグネシウ
ム塩、カルシウム塩、鉄塩、マンガン塩等が適宜使用さ
れる。
ム塩、カルシウム塩、鉄塩、マンガン塩等が適宜使用さ
れる。
【0017】又、栄養要求物質としてのグアニンは、グ
アニン、グアニン鉱酸塩、グアノシン、グアニル酸、リ
ボ核酸等のいずれを使用してもかまわない。栄養要求物
質としてのアデニンは、アデニン、アデニン鉱酸塩、ア
デノシン、アデニル酸、リボ核酸等のいずれをも使用で
きる。
アニン、グアニン鉱酸塩、グアノシン、グアニル酸、リ
ボ核酸等のいずれを使用してもかまわない。栄養要求物
質としてのアデニンは、アデニン、アデニン鉱酸塩、ア
デノシン、アデニル酸、リボ核酸等のいずれをも使用で
きる。
【0018】また本発明に使用する微生物がアミノ酸等
の要求性を有する場合には、その要求物質を補添するこ
とが必要である。
の要求性を有する場合には、その要求物質を補添するこ
とが必要である。
【0019】微生物の培養は通常pH5ないし9、温度
20ないし40℃の範囲で好気的条件下で行われるのが
望ましい。培養液のpH調整は、無機あるいは有機の
酸、アルカリ性物質、更には尿素、炭酸カルシウム、ア
ンモニアガスなどによって行う。かくして2ないし5日
間培養することにより、培養液中に著量のヌクレオシド
が生成蓄積される。
20ないし40℃の範囲で好気的条件下で行われるのが
望ましい。培養液のpH調整は、無機あるいは有機の
酸、アルカリ性物質、更には尿素、炭酸カルシウム、ア
ンモニアガスなどによって行う。かくして2ないし5日
間培養することにより、培養液中に著量のヌクレオシド
が生成蓄積される。
【0020】培養液からヌクレオシドを採取する方法は
公知の方法に従って行えばよく、例えば菌体を分離除去
し、イオン交換樹脂処理法あるいは濃縮冷却晶析法、膜
分離法、その他の方法を組み合わせることにより行なわ
れる。不純物を除くためには常法の活性炭吸着法及び再
結法を用いて精製してもよい。
公知の方法に従って行えばよく、例えば菌体を分離除去
し、イオン交換樹脂処理法あるいは濃縮冷却晶析法、膜
分離法、その他の方法を組み合わせることにより行なわ
れる。不純物を除くためには常法の活性炭吸着法及び再
結法を用いて精製してもよい。
【0021】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
する。
する。
【0022】実施例1 表1に示す組成のシ−ド培地50mlを、500ml溶
振とうフラスコに分注し蒸気加圧殺菌後、バチルス・ズ
ブチリスAJ12518 FERM P−11473を
1白金耳接種し、34℃にて16時間培養した。この培
養液15mlを、表1に示す組成の主発酵培地300m
lを分注した1.0L容のジャ−ファ−メンタ−に添加
し、34℃で培地中のグルコ−スが完全に消費される迄
通気攪拌培養した。
振とうフラスコに分注し蒸気加圧殺菌後、バチルス・ズ
ブチリスAJ12518 FERM P−11473を
1白金耳接種し、34℃にて16時間培養した。この培
養液15mlを、表1に示す組成の主発酵培地300m
lを分注した1.0L容のジャ−ファ−メンタ−に添加
し、34℃で培地中のグルコ−スが完全に消費される迄
通気攪拌培養した。
【0023】
【表1】
【0024】培養は、通気量1/2VVmとし、攪拌数
は、培養液中の溶存酸素分圧を酸素測定用隔膜電極にて
測定し、溶存酸素分圧0以上を保つ様変化させ、また培
養液のpHはアンモニアガスを用いて6.0〜7.5の
範囲に調節しつつ行なった。
は、培養液中の溶存酸素分圧を酸素測定用隔膜電極にて
測定し、溶存酸素分圧0以上を保つ様変化させ、また培
養液のpHはアンモニアガスを用いて6.0〜7.5の
範囲に調節しつつ行なった。
【0025】その時のメチオニン添加による、単位時間
当りのアデノシン生成量向上効果を表2に示す。
当りのアデノシン生成量向上効果を表2に示す。
【0026】
【表2】
【0027】メチオニンの添加により、対糖収率を低下
させる事なく、単位時間当りのアデノシン生産量が向上
する事を確認した。その時のメチオニンの添加量は50
mg/l以上、好ましくは100〜200mg/lで効
果が認められた。
させる事なく、単位時間当りのアデノシン生産量が向上
する事を確認した。その時のメチオニンの添加量は50
mg/l以上、好ましくは100〜200mg/lで効
果が認められた。
【0028】又添加メチオニンはL体、D体、DL体共
同様の効果が認められた。
同様の効果が認められた。
【0029】実施例2 表3に示す組成のシ−ド培地50mlを、500ml溶
振とうフラスコに分注し蒸気加圧殺菌後、バチルス・ズ
ブチリスAJ11372 FERM P−5024を1
白金耳接種し、34℃にて16時間培養した。この培養
液15mlを、表3に示す組成の主発酵培地300ml
を分注した1.0L容のジャ−ファ−メンタ−に添加
し、34℃で培地中のグルコ−スが完全に消費される迄
通気攪拌培養した。
振とうフラスコに分注し蒸気加圧殺菌後、バチルス・ズ
ブチリスAJ11372 FERM P−5024を1
白金耳接種し、34℃にて16時間培養した。この培養
液15mlを、表3に示す組成の主発酵培地300ml
を分注した1.0L容のジャ−ファ−メンタ−に添加
し、34℃で培地中のグルコ−スが完全に消費される迄
通気攪拌培養した。
【0030】
【表3】
【0031】培養は、通気量1/2VVmとし、攪拌数
は、培養液中の溶存酸素分圧を酸素測定用隔膜電極にて
測定し、溶存酸素分圧0以上を保つ様変化させ、また培
養液のpHはアンモニアガスを用いて6.0〜7.5の
範囲に調節しつつ行なった。
は、培養液中の溶存酸素分圧を酸素測定用隔膜電極にて
測定し、溶存酸素分圧0以上を保つ様変化させ、また培
養液のpHはアンモニアガスを用いて6.0〜7.5の
範囲に調節しつつ行なった。
【0032】その時のメチオニン添加による、単位時間
当りのイノシン生成量向上効果を表4に示す。
当りのイノシン生成量向上効果を表4に示す。
【0033】
【表4】
【0034】メチオニンの添加により、対糖収率を低下
させる事なく、単位時間当りのイノシン生産量が向上す
る事を確認した。
させる事なく、単位時間当りのイノシン生産量が向上す
る事を確認した。
【0035】実施例3 表5に示す組成のシ−ド培地50mlを、500ml溶
振とうフラスコに分注し蒸気加圧殺菌後、バチルス・ズ
ブチリスAJ11315 FERM P−4826を1
白金耳接種し、34℃にて16時間培養した。この培養
液15mlを、表3に示す組成の主発酵培地300ml
を分注した1.0L容のジャ−ファ−メンタ−に添加
し、34℃で培地中のグルコ−スが完全に消費される迄
通気攪拌培養した。
振とうフラスコに分注し蒸気加圧殺菌後、バチルス・ズ
ブチリスAJ11315 FERM P−4826を1
白金耳接種し、34℃にて16時間培養した。この培養
液15mlを、表3に示す組成の主発酵培地300ml
を分注した1.0L容のジャ−ファ−メンタ−に添加
し、34℃で培地中のグルコ−スが完全に消費される迄
通気攪拌培養した。
【0036】
【表5】
【0037】培養は、通気量1/2VVmとし、攪拌数
は、培養液中の溶存酸素分圧を酸素測定用隔膜電極にて
測定し、溶存酸素分圧0以上を保つ様変化させ、また培
養液のpHはアンモニアガスを用いて6.0〜7.5の
範囲に調節しつつ行なった。
は、培養液中の溶存酸素分圧を酸素測定用隔膜電極にて
測定し、溶存酸素分圧0以上を保つ様変化させ、また培
養液のpHはアンモニアガスを用いて6.0〜7.5の
範囲に調節しつつ行なった。
【0038】その時のメチオニン添加による、単位時間
当りのグアノシン生成量向上効果を表6に示す。
当りのグアノシン生成量向上効果を表6に示す。
【0039】
【表6】
【0040】メチオニンの添加により、対糖収率を低下
させる事なく、単位時間当りのグアノシン生産量が向上
する事を確認した。
させる事なく、単位時間当りのグアノシン生産量が向上
する事を確認した。
【0041】
【発明の効果】本発明の方法により、対糖収率を低下さ
せる事なく、単位時間当りのヌクレオシド生産量が向上
する。従来法より工業的に安定的且つ有利にヌクレオシ
ドを製造することができる。
せる事なく、単位時間当りのヌクレオシド生産量が向上
する。従来法より工業的に安定的且つ有利にヌクレオシ
ドを製造することができる。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成4年10月21日
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】0019
【補正方法】変更
【補正内容】
【0019】微生物の培養は通常pH5ないし9、温度
20ないし40℃の範囲で好気的条件下で行われるのが
望ましい。培養液のpH調整は、無機あるいは有機の
酸、アルカリ性物質、更には尿素、炭酸カルシウム、ア
ンモニアガスなどによって行う。かくして2ないし7日
間培養することにより、培養液中に著量のヌクレオシド
が生成蓄積される。
20ないし40℃の範囲で好気的条件下で行われるのが
望ましい。培養液のpH調整は、無機あるいは有機の
酸、アルカリ性物質、更には尿素、炭酸カルシウム、ア
ンモニアガスなどによって行う。かくして2ないし7日
間培養することにより、培養液中に著量のヌクレオシド
が生成蓄積される。
Claims (3)
- 【請求項1】 L体、D体或はDL体のメチオニンを5
0mg/l以上添加した液体培地に、ヌクレオシド生産
能を有する微生物を培養し、培養液中にヌクレオシドを
生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする発酵
法によるヌクレオシドの製造法。 - 【請求項2】 L体、D体或はDL体のメチオニンを1
00〜200mg/l添加した液体培地に、ヌクレオシ
ド生産能を有する微生物を培養し、培養液中にヌクレオ
シドを生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とす
る特許請求の範囲第1項記載の製造法。 - 【請求項3】 ヌクレオシドがアデノシン、グアノシ
ン、あるいはイノシンである特許請求の範囲第1項ある
いは第2項記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26485492A JPH06113876A (ja) | 1992-10-02 | 1992-10-02 | 発酵法によるヌクレオシドの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26485492A JPH06113876A (ja) | 1992-10-02 | 1992-10-02 | 発酵法によるヌクレオシドの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06113876A true JPH06113876A (ja) | 1994-04-26 |
Family
ID=17409146
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26485492A Pending JPH06113876A (ja) | 1992-10-02 | 1992-10-02 | 発酵法によるヌクレオシドの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06113876A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9012182B2 (en) | 2004-03-31 | 2015-04-21 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing purine nucleosides and nucleotides by fermentation using bacterium belonging to the genus Bacillus or Escherichia |
| WO2020071538A1 (en) | 2018-10-05 | 2020-04-09 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing target substance by bacterial fermentation |
-
1992
- 1992-10-02 JP JP26485492A patent/JPH06113876A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9012182B2 (en) | 2004-03-31 | 2015-04-21 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing purine nucleosides and nucleotides by fermentation using bacterium belonging to the genus Bacillus or Escherichia |
| WO2020071538A1 (en) | 2018-10-05 | 2020-04-09 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing target substance by bacterial fermentation |
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