JPH06121669A - 新規スピロ化合物生産菌 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 新規スピロ化合物を生産する能力を有する未
同定のカビＮ９８３−４６。 【効果】 本カビは、ジャイレース阻害作用に基づく抗
菌活性と抗腫瘍活性を有する抗生物質、スピロ化合物を
生産する抗生物質を生産することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗菌活性を有する新規
スピロ化合物を生産する新しい菌、微工研条寄第３９９
３号（ＦＥＲＭ ＢＰ−３９９３）に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、バクテリア由来トポイソメラーゼ
II（ジャイレース）阻害物質が、抗生物質のターゲット
として注目されている。これは、現在広く使用されてい
るキノロン系合成抗菌剤の作用メカニズムが、主にジャ
イレース活性の阻害によるものとされていることに基づ
いている。キノロン系合成抗菌剤は広範囲な抗菌活性を
示すが、他の抗生物質と同様、次第に耐性菌の出現が問
題となっている。微生物の生産するジャイレース阻害物
質としてはノボビオシン、クママイシンＡ１等が知られ
ているが、これらの抗菌スペクトルは狭く、抗生剤とし
てキノロン系合成抗菌剤に及ぶものではない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、耐性菌の出
現しにくい優れた抗菌活性を有する新規スピロ化合物を
生産する菌を提供することを目的とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、新規なジ
ャイレース阻害物質を発見する目的で多数の微生物を検
索した結果、フィリピン国ルソン島（Luzon Island）で
採取した葉試料から分離された菌Ｎ９８３−４６が、抗
ジャイレース活性を有する新規スピロ化合物を生産する
ことを見い出した。

【０００５】本発明によれば、ここで新規スピロ化合物
は、N983-46 培養物から得られ、これはジャイレース阻
害活性を有する。

【０００６】すなわち本発明は、下記の式で示されるよ
うな、新規なスピロ化合物生産菌を提供する。

【０００７】 N983-46 の菌学的性質は次の通りである。

【０００８】Ｎ９８３−４６をバレイショ・ブドウ糖寒
天斜面培養から同定用寒天平板培地上に接種し、25℃で
１ないし５週間培養した。色はRobert RidgwayのColor
Standards and Color Nomenclature (1912) のカラーチ
ップと比較することにより判定した。菌株の同定に用い
た培地は次の通りである。

【０００９】1. コーンミール寒天（CM）：J. W. Carm
ichael, Mycologia, 49, 820-830, 1957。 2. ツァペック・ショ糖寒天（CZ）：K. B. Raper and
D. I. Fennell, The Genus Aspergillus, p. 36, 1965
。 3. 麦芽エキス寒天（MEA ）：同上、p. 38 。 4. ツァペック・酵母寒天（CYA ）：J. I. Pitt, Peni
cillium and Its Teleomorphic States Eupenicillium
and Talaromyces, p. 18, 1979。 5. 25% グリセリン・硝酸塩寒天（G25N）：同上。 6. オートミール寒天（OA）：ISP 培地 No. 3, ディフ
コ。 7. バレイショ・ブドウ糖寒天（PDA ）：ATCC培地 No.
336, ATCC Media Handbook, p. 17, 1984。 8. V-8 ジュース寒天 (V-8A)：ATCC培地 No. 343, 同
上。 9. ファイトン酵母エキス寒天（Phytone YEA ）：BBL
。 10. 酵母エキス・可溶性デンプン寒天（YPSS）：R. Eme
rson, Mycologia, 50, 589-621, 1958。

【００１０】1. 各培地における生育状態CMでは １４日間で直径3.8 cmに達する；白色ないし灰白
色（white to off-white, IV）であるが、中心部は灰赤
褐色（burnt umber, XXVIII）；薄く発育する、平滑、
疎らに羊毛状；裏面は中心部は灰赤褐色（burnt umber,
XXVIII）であるが、周縁部は無色；可溶性色素は産生
しないか明黄色（maize yellow, IV）。

【００１１】CZでは１４日間で直径6.9 cmに達する；白
色ないし灰白色（white to off-white, IV）、隆起は低
いないし中程度、平滑、羊毛状；裏面は無色ないし明黄
色（colorless to baryta yellow, IV）；可溶性色素は
明灰黄色（sulphur yellow, V）。

【００１２】MEAでは２４日間で直径2.5cmに達する；黄
灰色、明黄灰色ないし明黄褐色（drab-gray, light dra
b to drab, XLVI）、隆起は中程度、平滑だが周縁部で
はしわを形成、羊毛状ないしなわ状；裏面は灰赤褐色
（burnt umber, XXVIII）ないし黒色；可溶性色素は灰
赤橙色（vinaceous-pink, XXVIII）。

【００１３】OAでは１４日間で直径4.3 cmに達する；白
色、隆起、平滑、羊毛状ないしなわ状、透明な分泌液を
生ずる；裏面は深オリーブ色ないし暗オリーブ色（deep
oliveto dark olive, XL）；可溶性色素は深いピンク
色（geranium pink, I）ないし深い黄ピンク色（jasper
pink, XIII）。

【００１４】V-8Aでは１４日間で直径7.2 cmに達する；
白色、明黄色ないし明灰黄色（white,baryta yellow to
martius yellow, IV）、隆起は薄いないし中程度、平
滑、緻密に羊毛状ないしなわ状、透明な分泌液を生ず
る；裏面は橙黄色（antimony yellow, XV）；可溶性色
素は産生しない。

【００１５】Phytone YEAでは２４日間で直径5.0 cmに
達する；白色、淡黄ピンク色（seashell pink, XIV）、
淡黄色（maize yellow, IV）、明黄褐色（avellaneous
to woodbrown, XL）、隆起、平滑、緻密に羊毛状、明黄
褐色の菌糸が同心円をなす；裏面は灰赤褐色（burnt um
ber, XXVIII）ないし黒色；可溶性色素は褐橙色（tawn
y, XV）。

【００１６】PDAでは１４日間で直径4.2 cmに達する；
白色、淡黄味を帯びる、隆起は高い、平滑、羊毛状ない
しなわ状、透明な分泌液を生ずる；裏面は褐色（mars b
rown,XV）、暗赤褐色から赤褐色（carob brown to ches
tnut-brown, XIV）ないし褐黒色；可溶性色素は濃黄色
（apricot yellow, IV）ないし暗橙黄色（raw sienna,I
II）。

【００１７】2. 形態学的特性 形態学的特性は２、３週間および５週間培養後に観察し
た。菌糸は透明、褐色、暗褐色ないし黒色；分枝する、
隔壁あり、直径1.5 - 5.0 μm；供試した培地では５週
間培養後でも有性胞子または分生子を形成しなかった。
PDAとMEA培地上で栄養菌糸の中間、まれに先端または側
部に厚膜胞子を形成する、暗褐色、球形ないし亞球形、
楕円形ないし細長く、直径2 - 8 μmまたは2 - 7 x 3 -
5μm、通常１個のみを生ずるが、しばしば隣接、集合
し束状または不規則な塊状と なる。

【００１８】3. 生育温度 15℃で中程度の生育；20℃で良好ないし旺盛な生育；28
℃で良好な生育；37℃、45℃及び50℃で生育しない。

【００１９】以上菌学的性質を要約すると、N983-46は
白色、淡黄色ないし明黄褐色のコロニー表面；黄色、褐
色、暗褐色ないしは黒色のコロニー裏面；ピンク、黄
色、黄褐色ないし褐色の可溶性色素を特徴とする。PDA
とMEA培地上で暗褐色の種々の形状をした厚膜胞子を形
成する。菌糸は隔壁を有し分枝する、成熟すると暗褐色
になる。有性胞子または分生子は供試した培地では形成
しなかった。

【００２０】以上の諸性状からN983-46は特徴的な生殖
器官が認められないためカビの特定の属に同定できず、
したがって未同定のカビとみなされる。これは工業技術
院微生物工業技術研究所に未同定のカビN983-46（Unide
ntified fungus N983-46）の表示で微工研条寄第３９９
３号（FERM BP-３９９３）として、平成４年８月３１日
にブタペスト条約の条件下に寄託されている。

【００２１】〔菌の培養〕本発明における菌株の培養は
次の様に行うのが好ましい。小規模の培養を行うには、
まず適当量の栄養培地をフラスコの中に入れ、既知の方
法で滅菌した後、このフラスコにＮ９８３−４６の胞子
または栄養生育細胞を植菌し、約26℃の一定の室温でロ
ータリーシェーカー上約２ないし10日間培養を行う。大
規模の培養には、撹拌機、通気装置および滅菌装置を備
えた適当な大きさのタンク中で行うのが望ましい。栄養
培地をタンク中で調製、滅菌し、Ｎ９８３−４６の胞子
または栄養生育細胞を植菌する。培地の pH は 5から
9、好ましくは6 から8 が望ましい。培養は、約20ない
し35℃の範囲の温度で、栄養培地を撹拌および／または
通気しながら約２ないし10日間行う。通気の程度はいく
つかの因子（たとえば培養器の大きさ、撹拌速度等）に
応じて変える必要がある。一般的に撹拌は0 ないし2,00
0 rpm 、好ましくは100 から360 rpm で、また通気は培
地容量の0 ないし500%、好ましくは80から120%の空気を
毎分送りこむことによって行うのが望ましい。

【００２２】〔生産物の回収〕本発明のスピロ化合物、
(４S)-1,2,3,4-テトラヒドロ-４,５-ジヒドロキシスピ
ロ[ナフタレン−１,２’−ナフト[１,８−de][1,3]ジオ
キシン]（CJ-12,371）および(４S)-1,2,3,4-テトラヒド
ロ-４,５,8-トリヒドロキシスピロ[ナフタレン−１,
２’−ナフト[１,８−de][1,3]ジオキシン]（CJ-12,37
2）は、全培養液から得られ、溶媒抽出および各種のク
ロマトグラフィー技術 を用いて分離することができ
る。

【００２３】その存在は以下に述べる如く各種のクロマ
トグラフィー画分の抗菌活性および抗ジャイレース活性
を測定することによって決定することができる。

【００２４】〔活性の測定〕本発明のスピロ化合物のジ
ャイレース阻害活性の測定は、大腸菌由来ジャイレース
を用いた公知の方法 (K. Mizuuchi, M. H. O'dea and
M. Gellert, Proc.Natl. Acad. Sci. USA, 75, 5960-59
63, 1978)に従って行った。真核細胞由来トポイソメラ
ーゼIIに対する阻害活性の測定は、市販のショウジョウ
バエ由来トポイソメラーゼIIを用いて製造会社 (US Bio
chemical Corporation) の指示する方法に従って行っ
た。当該新規スピロ化合物（CJ-12,371 およびCJ-12,37
2）のジャイレースとトポイソメラーゼIIに対する阻害
活性(IC₅₀値) を表１に示す。これらの生物活性は、ス
ピロ化合物が抗菌剤のみならず、抗腫瘍剤としても有用
性をもっていることを示唆するものである。これは、現
在広く使用されている一部の抗腫瘍剤の作用メカニズム
がトポイソメラーゼII活性の阻害によることに基づいて
いる( 文献：H. D. Znang, P. D'Arpa and L. F. Liu,
Cancer Cells, 2, 23-26, 1990）。

【００２５】当該新規スピロ化合物の坑菌活性測定は、
標準法 (H. M. Ericsson and J. C.Scherris, Acta Pat
hol. Microbiol. Scand. Suppl. 217B, 64-68, 1971)
に従って、BHI 培地 (pH 7.4) を用いた寒天平板希釈法
で行った。各試験菌に対する実施例１で得た新規スピロ
化合物の最小発育阻止濃度を表２に示す。

【００２６】

【表１】_{----------------------------------------------------------------------} 阻害活性（IC₅₀, μg/ml） 化合物 ジャイレース ショウジョウバエ由来トポイソメラーゼII CJ-12,371 １００ １４４ CJ-12,372 ６．２５ ２５ _{----------------------------------------------------------------------}

【表２】_{----------------------------------------------------------------------} 最小発育阻止濃度 (μg/ml) 試験菌 CJ-12,371 CJ-12,372 スタフィロコッカス アウレウス 01A005 ２５ １００ (Staphylococcus aureus) スタフィロコッカス アウレウス 01A063 ２５ １００ (Staphylococcus aureus) # スタフィロコッカス エピデルミデス 01B087 ５０ ＞１００ (Staphylococcus epidermidis) エンテロコッカス フェカリス 02A006 ５０ ＞１００ (Enterococcus faecalis) ストレプトコッカス パイオゲネス 02C054 ２５ １００ (Streptococcus pyogenes) ストレプトコッカス アガラクチエ 02B006 ２５ ５０ (Streptococcus agalactiae) エシェリヒア コリ 51A266 ＞１００ ＞１００ (Escherichia coli) シュウドモナス エルギノーサ 52A104 ＞１００ ＞１００ (Pseudomonas aeruginosa) クレブジエラ ニュウモニエ 53A009 ＞１００ ＞１００ (Klebsiella pneumoniae) クレブジエラ オキシトカ 53D024 ＞１００ ＞１００ (Klebsiella oxytoca) パスツレラ マルトシダ 59A001 １００ ＞１００ (Pasturella multocida) セラチア マルセッセンス 63A017 ＞１００ ＞１００ (Serratia marcescens) エンテロバクター エロゲネス 67A040 ＞１００ ＞１００ (Enterobacter aerogenes) エンテロバクター クロアカエ 67B009 ＞１００ ＞１００ (Enterobacter cloacae) プロビデンシア スツアーチ 77A013 ＞１００ ＞１００ (Providencia stuartii) プロビデンシア レトゲリ 77C025 ＞１００ ＞１００ (Providencia rettgeri) モルガネラ モルガニ 97A001 ＞１００ ＞１００ (Morganella morganii) _{----------------------------------------------------------------------} # シプロフロキサシン耐性菌 新規スピロ化合物は、表２に示す菌を含む広範囲の病原
菌に起因するヒトおよび他の動物の病気を予防もしくは
治療するため、経口、非経口、局所その他の適当な経路
で投与することができる。一般にこれらの化合物の最も
望ましい投与量は、１日あたり約300 mgから約 3000 mg
の間であるが、患者の体重および症状や個々の投与経路
によって当然変動する。しかし、体重１kgにつき１日に
約 5mgから約50mgの投与量が最も望ましい。また動物に
投与する場合、治療する動物の種類およびその動物の前
記薬物に対する感受性の差異、さらに薬剤の処方の仕
方、投与期間および投与間隔によっても投与量に変動が
生じてくる。場合によっては前記範囲の下限より低い投
与量が適当なこともあるし、前記範囲より投与量を多く
してもそれを１日に何回にも分けて少量ずつ投与すれば
有害な副作用を生じない場合もある。

【００２７】本発明を抗腫瘍剤として用いる場合も、上
記と同様の投与経路、投与量が適用できる。

【００２８】本発明スピロ化合物は、前記３つの投与経
路のいずれをとっても単独または薬剤学的に許容される
担体または希釈剤と共に投与することができ、またその
投与は１回または数回に分けて行うことができる。より
具体的に述べると、本発明の新規な治療剤は様々な種類
の投与形態で投与することができ、たとえば各種の薬剤
学的に許容される不活性担体と併用して錠剤、カプセ
ル、薬用ドロップ、トローチ、硬質キャンディ、粉末
剤、噴霧剤、クリーム、膏薬、座薬、ゼリー、ジェル、
ペースト、ローション、軟膏、水性懸濁液、注射液、エ
リキシル、シロップ等の形態とすることができる。これ
らの担体には、固体希釈剤または賦形剤、無菌水性媒
体、各種の非毒性有機溶媒等が含まれる。

【００２９】また経口投与用の薬剤の場合適宜に甘味付
けおよび／または香味付けを行っても良い。一般に本発
明の治療上有効な化合物は、上記のような形態で約５重
量％から７０重量％の濃度範囲で投与される。

【００３０】経口投与の場合、微晶質セルロース、クエ
ン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、燐酸ジカリウム、グ
リシンのような種々の賦形剤を、澱粉、好適にはとうも
ろこし、じゃがいもまたはタピオカの澱粉、およびアル
ギン酸やある種のケイ酸複塩のような種々の崩壊剤、お
よびポリビニルピロリドン、蔗糖、ゼラチン、アラビア
ゴムのような顆粒形成結合剤と共に使用することができ
る。また、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナ
トリウム、タルク等の滑沢剤も錠剤形成に非常に有効で
あることが多い。同種の固体組成物をゼラチンカプセル
に充填して使用することもできる。これに関連して好適
な物質としてラクトースまたは乳糖の他、高分子量のポ
リエチレングリコールを挙げることができる。経口投与
用として水性懸濁液および／またはエリキシルにしたい
場合、活性成分を各種の甘味料または香味料、着色料ま
たは染料と併用する他、必要であれば乳化剤および／ま
たは懸濁化剤も併用し、水、エタノール、プロピレング
リコール、グリセリン等、およびそれらを組み合わせた
希釈剤と共に使用することができる。

【００３１】非経口投与の場合、本発明のスピロ化合物
をゴマ油または落花生油のいずれかに溶解するか、ある
いはプロピレングリコール水溶液に溶解した溶液を使用
することができる。水溶液は必要に応じて適宜に緩衝し
（好適にはｐＨ８以上）、液体希釈剤をまず等張にする
必要がある。このような水溶液は静脈内注射に適し、油
性溶液は関節内注射、筋肉注射および皮下注射に適す
る。これらすべての溶液を無菌状態で製造するには、当
業者に周知の標準的な製薬技術で容易に達成することが
できる。さらに、本発明の化合物は皮膚など局所的に投
与することも可能である。この場合は標準的な医薬慣行
によりクリーム、ゼリー、ペースト、軟膏の形で局所投
与するのが望ましい。

【００３２】

【実施例】以下、本発明を実施例を用いて説明するが、
本発明はこれらの実施例において細部にわたって特定さ
れた事項に限定されるものではない。実施例で用いられ
る融点はヤナコ製ミクロ融点測定器（未補正）、旋光度
は日本分光製 DIP-370デジタル旋光度計、紫外線吸収ス
ペクトルはメタノール溶液中、日本分光製分光光度計
（Ubest-30）により、赤外吸収スペクトルは島津製赤外
分光光度計（ IR-470）で測定した。また、¹Hおよび ¹³
C核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）は、特に指示がない
かぎり重クロロホルム（CDCl₃ ）の溶液で、日本電子製
核磁気共鳴装置（JNM −GX270 、 270 MHz）により測定
されたものである。また、ピーク位置はテトラメチルシ
ランからダウンフィールドへ１００万分の１単位（ppm
）で表現する。ピーク形状は次のように表す。ｓ：シ
ングレット、ｄ：ダブレット、ｔ：トリプレット、ｍ：
マルチプレット、ｂｒ：ブロード。低分解能ＥＩマスス
ペクトル（EI-MS）は日本電子製質量分析器（オートマ
ス １２０）により、高分解能ＥＩマススペクトル（HR
EI-MS）は日立製質量分析器（モデルM-80）により測定
した。

【００３３】実施例１ 培地１( グルコース 2% 、ポリペプトン0.5%、酵母エキ
ス 0.5% 、小麦胚芽 0.5%、肉エキス 0.3%、ブラッドミ
ール 0.3%、CaCO₃ 0.3%、 pH 7.0 ) を100 ml含む 500
ml 容三角フラスコに、Ｎ９８３−４６を植菌する。こ
のフラスコを直径７cmの円回転（220 rpm ）のロータリ
ーシェーカー上で26℃、4 日間培養し、第一の種培養液
とした。

【００３４】培地１を150 ml含む5 個の500 ml容三角フ
ラスコに第一の種培養液を7.5 mlずつ植菌する。このフ
ラスコを直径７cmの円回転（220 rpm ）のロータリーシ
ェーカー上で26℃、4 日間培養し、第二の種培養液とし
た。

【００３５】培地２ (グルコース 2%、デキストリン３
%、ポリペプトン0。5%、ポリペプトン−Ｓ1%、コーンス
ティープリカー１%、NaCl 0.3%、CaCO₃ 0.4 %、CoCl₂
・ 6H₂O 0.0001% 、pH 6.5) を3 L 入れた5 個の 6 L容
ガラス製のファーメンターに第二の種培養液を150 mlず
つ加える。このファーメンターを通気量毎分3 L 、回転
速度1,700 rpm、26℃にて72時間撹拌する。

【００３６】培養終了後１５Ｌの全培養液を凍結乾燥
し、得られた乾燥ブロスを5Lの70% アセトン水で抽出す
る。減圧下アセトンを除去後、2Lの酢酸エチルで２回抽
出して得られた酢酸エチル抽出液を無水硫酸ナトリウム
で脱水し、濃縮乾固した。11 gの当該新規スピロ化合物
を含む油状残渣を得る。この油状物質を175 g のシリカ
ゲルを詰めたカラム(メルク・キーゼルゲル 60, 70-230
メッシュ, 4.5 x 22cm)でクロマトグラフィーを行う。
カラムを各１Ｌのn-ヘキサン／酢酸エチル／メタノール
で順次溶出する。n-ヘキサン：酢酸エチル＝１：１溶出
画分を集めて濃縮し( 1.8 g )、メタノールで詰めたセ
ファデックス LH-20 カラムクロマトグラフィー（4.2
x 90 cm）に供する。ジャイレース阻害活性のある画分
を集めて濃縮乾固し、600 mgの粗粉末を得る。このう
ち、600 mgを逆相カラムクロマトグラフィー(草野 C.I.
G. カラム C-18, 20μ; MeOH:H₂O =７:１) で精製しCJ
-12,371 (363 mg)、CJ-12,372 (196 mg)を得た。それぞ
れの化合物は n-ヘキサン ／酢酸エチルから再結晶し、
白色板状晶を得た。

【００３７】CJ-12,371の物理化学的性質 分子式 : C₂₀H₁₆O₄ HREI-MS [m/z, M⁺]: 320.1053 ( 計算値: 320.1049)融点 [℃] : >265（分解）比旋光度 : [α]_D(24 ℃) -46.8°(c=0.23, MeOH)紫外部吸収スペクトル(ε): 227.2 (63,700), 288.6 (1
1,800), 301.0 (11,500), 314.2 (8,600), 328.4 (6,10
0) nmTLC (Rf) : 0.28 (CHCl₃:酢酸エチル=10:1, メルク・キ
ーゼルゲル 60 F254);0.41 (ヘキサン:酢酸エチル=1:1,
メルク・キーゼルゲル60 F-254); 0.53 (MeOH/H₂O, 1
0:1, メルク HPTLC RP-18 F-254S)IR (KBr): 3440, 3145, 3110, 3060, 1633, 1607, 158
6, 1504, 1474, 1462,1442, 1411, 1378, 1348, 1325,
1271, 1208, 1180, 1156, 1115, 1064, 1042,1023, 101
2, 955, 923, 885, 846, 821, 803, 793, 755, 663, 64
5, 627, 600,568, 547, 535, 509 cm^-1 EI-MS m/z : 320 (M⁺, 10.5 rel. int.), 302 (43.3), 2
85 (6.6), 284 (5.7), 273 (1.5), 255 (2.7), 189 (1.
9), 160 (8.0), 159 (7.3), 144 (7.7), 131(57.0), 11
5 (100.0), 114 (40.4), 113 (26.3), 103 (39.1), 102
(29.3), 89(22.2), 77 (51.8) , 55 (56.4) ¹H NMR (DMSO-d₆): 9.72 (1H, s), 7.55 (2H, br d, J=
8.4 Hz), 7.48(1H, t, J=7.4 Hz), 7.45(1H, t, J=7.4
Hz), 7.25 (1H, t, J=7.9 Hz), 7.18 (1H, dd, J=7.9,
1.5 Hz), 6.99 (1H, dd, J=7.4, 1.0 Hz), 6.95 (1H, d
d, J=7.4, 1.5Hz), 6.92 (1H, dd, J=7.4, 1.0 Hz), 5.
17 (1H, d, J=4.9 Hz), 5.01 (1H, dd, J=8.5, 4.0 H
z), 2.26 (1H, m), 1.99 (2H, m), 1.83 (1H, m) ¹³C NMR (DMSO-d₆): 155.4 (s), 147.8 (s), 147.5
(s), 135.5 (s), 133.7 (s), 128.5 (d), 127.6 (d), 1
27.6 (d), 126.4 (s), 120.2 (d), 120.2 (d), 117.5
(d), 116.1 (d), 113.0 (s), 109.1 (d), 109.1 (d), 1
00.0 (s), 61.0 (d), 27.7 (t), 25.4 (t)。

【００３８】CJ-12,372の物理化学的性質 分子式: C₂₀H₁₆O₅ HREI-MS [m/z, M⁺ ]: 336.1001 (計算値: 336.0998)融点 [℃] : >238（分解）比旋光度 : [α]_D(24 ℃) -82.0°(c=0.22, MeOH)紫外部吸収スペクトル(ε): 227.0 (65,400), 288 (s
h), 300.8 (20,400), 312.6 (17,200), 327.2 (7,600)
nmTLC (Rf) : 0.17 (CHCl₃:酢酸エチル=10:1, メルク・キ
ーゼルゲル 60 F254 );0.31 (ヘキサン: 酢酸エチル=1:
1, メルク・キーゼルゲル60 F-254 ); 0.70 (MeOH/H₂O,
10:1, メルク HPTLC RP-18 F-254S)IR (KBr) : 3455, 3205 (sh), 1634, 1608, 1585, 1471,
1442, 1412, 1380, 1345, 1302, 1266, 1221, 1177, 1
121, 1098, 1053, 1023, 999, 955, 915, 891,867, 82
1, 793, 767, 754, 737, 649, 624, 565, 549 cm^-1 EI-MS m/z: 336(M⁺, 16.8 rel. int.), 318 (48.9), 30
1 (4.2), 300 (5.1),289 (1.7), 273 (3.2), 271 (2.
4), 189 (2.6), 175 (9.8), 160 (35.2), 159 (13.6),
147 (17.0), 144 (15.8), 131 (58.2), 115 (100), 114
(46.0), 113 (28.1), 103 (45.6), 102 (31.1), 91 (3
7.7), 89 (24.9), 77 (60.4), 65 (32.7), 58 (34.6),
55 (48.3) ¹H NMR (DMSO-d₆) : 9.01 (1H, s), 8.37 (1H, s), 7.52
(2H, br d, J=7.4 Hz), 7.47 (1H, t, J=7.4 Hz), 7.4
5 (1H, t, J=7.4 Hz), 6.93 (1H, dd, J=7.4,1.0 Hz),
6.89 (1H, d, J=7.4, 1.0 Hz), 6.83 (1H, dd, J=8.4 H
z), 6.74 (1H,d, J=8.4 Hz), 5.11 (1H, d, J=4.9), 4.
97 (1H, d, J=8.4, 4.0 Hz), 2.30 (1H, m), 2.01 (1H,
m), 1.90 (1H, m), 1.79 (1H, m)。

【００３９】 ¹³C NMR (DMSO-d₆): 149.2 (s), 147.9
(s), 147.7 (s), 147.7 (s), 133.8 (s), 127.6 (d), 1
27.6 (d), 127.3 (s), 120.4 (s), 119.7 (d), 119.7
(d), 117.4 (d), 116.8 (d), 112.7 (s), 108.9 (d), 1
08.8 (d), 101.0 (s), 61.5 (d), 27.6 (t), 26.9
(t)。

【００４０】実施例２ 実施例１で得られた第一の種培養液を実施例１の培地２
（100 ml）を含む 500ml 容三角フラスコに５mlを植菌
する。このフラスコを直径７cmの円回転（220rpm ）の
ロータリーシェーカー上で26℃、３日間培養する。得ら
れた 100 ml の培養液は当該新規スピロ化合物を含んで
おり、抗ジャイレース活性がある。当該物質は実施例１
と同様の方法で単離することができる。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｒ 1:645）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】スピロ化合物を生産する微工研条寄第３９
   ９３号（ＦＥＲＭ ＢＰ−３９９３）として寄託されて
   いるカビＮ９８３−４６。