JPH06129988A - 細胞内ａｔｐの測定装置 - Google Patents
細胞内ａｔｐの測定装置Info
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- JPH06129988A JPH06129988A JP30310792A JP30310792A JPH06129988A JP H06129988 A JPH06129988 A JP H06129988A JP 30310792 A JP30310792 A JP 30310792A JP 30310792 A JP30310792 A JP 30310792A JP H06129988 A JPH06129988 A JP H06129988A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
- C12M47/06—Hydrolysis; Cell lysis; Extraction of intracellular or cell wall material
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- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
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- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 測定試料についての前処理や抽出操作を測定
者の手作業によることなく自動的に行なわせて、その体
細胞と微生物細胞の両方のＡＴＰ量を測定者による誤差
を生じることなく、容易且つ短時間で測定することがで
きる細胞内ＡＴＰ測定装置を提供することである。 【構成】 全細胞用抽出セル２８、体細胞用抽出セル２
９と、これらセル２８、２９に細胞懸濁液５を供給する
手段と、供給される細胞懸濁液５に全細胞用抽出試薬
３、体細胞用抽出試薬４を注入する手段と、得られた全
細胞抽出液及び体細胞抽出液に発光試薬１を注入する手
段と、全細胞抽出液及び体細胞抽出液の発光光量を検出
する化学発光検出器３０と、コンピュータ３２とを備
え、コンピュータ３２で各部の操作を制御させた。 【効果】 測定者の手作業が不要になり、目的を達成す
ることができる。
者の手作業によることなく自動的に行なわせて、その体
細胞と微生物細胞の両方のＡＴＰ量を測定者による誤差
を生じることなく、容易且つ短時間で測定することがで
きる細胞内ＡＴＰ測定装置を提供することである。 【構成】 全細胞用抽出セル２８、体細胞用抽出セル２
９と、これらセル２８、２９に細胞懸濁液５を供給する
手段と、供給される細胞懸濁液５に全細胞用抽出試薬
３、体細胞用抽出試薬４を注入する手段と、得られた全
細胞抽出液及び体細胞抽出液に発光試薬１を注入する手
段と、全細胞抽出液及び体細胞抽出液の発光光量を検出
する化学発光検出器３０と、コンピュータ３２とを備
え、コンピュータ３２で各部の操作を制御させた。 【効果】 測定者の手作業が不要になり、目的を達成す
ることができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、細胞内のＡＴＰ量を生
物化学発光を利用して測定する測定装置に関し、詳しく
は測定試料の体細胞と微生物細胞の両方のＡＴＰ量を測
定できる測定装置に関する。
物化学発光を利用して測定する測定装置に関し、詳しく
は測定試料の体細胞と微生物細胞の両方のＡＴＰ量を測
定できる測定装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、食品などの雑菌による汚染を測定
する方法として、発光試薬にルシェフェラーゼ及びルシ
ェフェリンを用いた生物化学発光法による細胞内ＡＴＰ
の測定が行なわれるようになっている。この方法は、菌
体などの微生物の細胞に必ず含まれるＡＴＰ（アデノシ
ン三リン酸）を抽出試薬により細胞外に抽出し、生物化
学発光法によりＡＴＰ量を測定して、微生物量を求める
ものである。
する方法として、発光試薬にルシェフェラーゼ及びルシ
ェフェリンを用いた生物化学発光法による細胞内ＡＴＰ
の測定が行なわれるようになっている。この方法は、菌
体などの微生物の細胞に必ず含まれるＡＴＰ（アデノシ
ン三リン酸）を抽出試薬により細胞外に抽出し、生物化
学発光法によりＡＴＰ量を測定して、微生物量を求める
ものである。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】ところで、食肉や原乳
などの食品中には、微生物細胞以外に動物の体細胞や白
血球などの細胞が同時に存在し、そのままでは微生物由
来のＡＴＰだけを測定することができない。そこで、微
生物由来のＡＴＰだけやこれと体細胞のＡＴＰを別々に
測定する場合には、前処理や抽出操作を行なう必要があ
る。
などの食品中には、微生物細胞以外に動物の体細胞や白
血球などの細胞が同時に存在し、そのままでは微生物由
来のＡＴＰだけを測定することができない。そこで、微
生物由来のＡＴＰだけやこれと体細胞のＡＴＰを別々に
測定する場合には、前処理や抽出操作を行なう必要があ
る。
【０００４】即ち、測定試料の微生物細胞と体細胞のＡ
ＴＰを別々に測定する場合、測定試料から微生物細胞及
び体細胞からなる全細胞のＡＴＰを抽出して、全細胞の
ＡＴＰ量を測定する一方、測定試料から体細胞のＡＴＰ
のみを抽出して体細胞のＡＴＰ量を測定し、この両者の
差し引きにより微生物細胞のＡＴＰ量を求める。或いは
微生物細胞だけのＡＴＰを測定する場合は、測定試料か
ら全細胞のＡＴＰを抽出し、アピラーゼなどのＡＴＰ分
解酵素により体細胞のＡＴＰを分解して、微生物細胞由
来のＡＴＰだけを残し、そこから微生物細胞のＡＴＰを
抽出して、微生物細胞のＡＴＰ量を測定する方法があ
る。
ＴＰを別々に測定する場合、測定試料から微生物細胞及
び体細胞からなる全細胞のＡＴＰを抽出して、全細胞の
ＡＴＰ量を測定する一方、測定試料から体細胞のＡＴＰ
のみを抽出して体細胞のＡＴＰ量を測定し、この両者の
差し引きにより微生物細胞のＡＴＰ量を求める。或いは
微生物細胞だけのＡＴＰを測定する場合は、測定試料か
ら全細胞のＡＴＰを抽出し、アピラーゼなどのＡＴＰ分
解酵素により体細胞のＡＴＰを分解して、微生物細胞由
来のＡＴＰだけを残し、そこから微生物細胞のＡＴＰを
抽出して、微生物細胞のＡＴＰ量を測定する方法があ
る。
【０００５】しかしながら、従来は、これらの前処理や
抽出操作が手作業によっており、煩雑であるばかりでな
く、測定者による誤差も生じ易く、又測定に時間がかか
るなどの欠点があった。
抽出操作が手作業によっており、煩雑であるばかりでな
く、測定者による誤差も生じ易く、又測定に時間がかか
るなどの欠点があった。
【０００６】本発明の目的は、測定試料についての前処
理や抽出操作を測定者の手作業によることなく自動的に
行なわせて、その体細胞と微生物細胞の両方のＡＴＰ量
を測定者による誤差を生じることなく、容易且つ短時間
で測定することができる細胞内ＡＴＰ測定装置を提供す
ることである。
理や抽出操作を測定者の手作業によることなく自動的に
行なわせて、その体細胞と微生物細胞の両方のＡＴＰ量
を測定者による誤差を生じることなく、容易且つ短時間
で測定することができる細胞内ＡＴＰ測定装置を提供す
ることである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】上記目的は本発明に係る
測定装置にて達成される。要約すれば本発明は、体細胞
及び微生物細胞を含有した細胞懸濁液から前記体細胞及
び微生物細胞からなる全細胞のＡＴＰを全細胞用抽出試
薬により抽出する全細胞用抽出セルと、前記細胞懸濁液
から前記体細胞のＡＴＰを体細胞用抽出試薬により抽出
する体細胞用抽出セルと、前記細胞懸濁液を前記全細胞
用抽出セル及び体細胞用抽出セルに供給する細胞懸濁液
供給手段と、前記全細胞用抽出セル及び体細胞用抽出セ
ルに供給される細胞懸濁液に、それぞれ全細胞用抽出試
薬及び体細胞用抽出試薬を注入する試薬注入手段と、前
記抽出により得られた全細胞抽出液及び体細胞抽出液
に、それぞれ発光試薬を注入する発光試薬注入手段と、
前記発光試薬が注入された全細胞抽出液及び体細胞抽出
液の発光量から、それぞれ全細胞のＡＴＰ量及び体細胞
のＡＴＰ量を検出する化学発光検出器とを備えたことを
特徴とする細胞内ＡＴＰの測定装置である。
測定装置にて達成される。要約すれば本発明は、体細胞
及び微生物細胞を含有した細胞懸濁液から前記体細胞及
び微生物細胞からなる全細胞のＡＴＰを全細胞用抽出試
薬により抽出する全細胞用抽出セルと、前記細胞懸濁液
から前記体細胞のＡＴＰを体細胞用抽出試薬により抽出
する体細胞用抽出セルと、前記細胞懸濁液を前記全細胞
用抽出セル及び体細胞用抽出セルに供給する細胞懸濁液
供給手段と、前記全細胞用抽出セル及び体細胞用抽出セ
ルに供給される細胞懸濁液に、それぞれ全細胞用抽出試
薬及び体細胞用抽出試薬を注入する試薬注入手段と、前
記抽出により得られた全細胞抽出液及び体細胞抽出液
に、それぞれ発光試薬を注入する発光試薬注入手段と、
前記発光試薬が注入された全細胞抽出液及び体細胞抽出
液の発光量から、それぞれ全細胞のＡＴＰ量及び体細胞
のＡＴＰ量を検出する化学発光検出器とを備えたことを
特徴とする細胞内ＡＴＰの測定装置である。
【０００８】
【実施例】図１は、本発明の細胞内ＡＴＰの測定装置の
一実施例を示す構成図である。本発明の測定装置は、全
細胞用抽出セル２８、体細胞用抽出セル２９及び化学発
光検出器３０を備えている。
一実施例を示す構成図である。本発明の測定装置は、全
細胞用抽出セル２８、体細胞用抽出セル２９及び化学発
光検出器３０を備えている。
【０００９】全細胞用抽出セル２８には、ポンプ１２に
より全細胞用抽出試薬３を輸送する流路１９が接続さ
れ、体細胞用抽出セル２９には、ポンプ１３により体細
胞用抽出試薬４を輸送する流路２０が接続され、これら
の流路１９、２０には、試料容器５ａ内に収容された体
細胞及び微生物細胞を含有する細胞懸濁液５をポンプ１
１により輸送する流路２１が、これに直列に設けられた
インジェクタ２６、２７を介してそれぞれ接続されてい
る。
より全細胞用抽出試薬３を輸送する流路１９が接続さ
れ、体細胞用抽出セル２９には、ポンプ１３により体細
胞用抽出試薬４を輸送する流路２０が接続され、これら
の流路１９、２０には、試料容器５ａ内に収容された体
細胞及び微生物細胞を含有する細胞懸濁液５をポンプ１
１により輸送する流路２１が、これに直列に設けられた
インジェクタ２６、２７を介してそれぞれ接続されてい
る。
【００１０】化学発光検出器３０の試料導入側には短い
流路２２が接続され、この流路２２の他端に、ポンプ６
によりキャリア液２を輸送する流路１５と、ポンプ１０
により同じくキャリア液２を輸送する流路１６が接続さ
れている。流路１５と１６とは同長とされ、流路２２は
できるだけ短くされている。発光検出器３０の出力側に
は、増幅器３１を介してコンピュータ３２が接続されて
いる。コンピュータ３２は、発光検出器３０で検出され
た発光光量の検出信号に基づきＡＴＰ量を算出すると共
に、装置各部の操作を自動制御している。
流路２２が接続され、この流路２２の他端に、ポンプ６
によりキャリア液２を輸送する流路１５と、ポンプ１０
により同じくキャリア液２を輸送する流路１６が接続さ
れている。流路１５と１６とは同長とされ、流路２２は
できるだけ短くされている。発光検出器３０の出力側に
は、増幅器３１を介してコンピュータ３２が接続されて
いる。コンピュータ３２は、発光検出器３０で検出され
た発光光量の検出信号に基づきＡＴＰ量を算出すると共
に、装置各部の操作を自動制御している。
【００１１】この一方のキャリア液流路１５には、試薬
容器１ａ内に収容された発光試薬１をポンプ７により輸
送する流路７がインジェクタ２３を介して接続され、他
方のキャリア流路１６には、これに直列に設けられたイ
ンジェクタ２４、２５を介して、それぞれ全細胞抽出用
セル２８、体細胞抽出用セル２９からの流路１８、１９
が接続されている。これら流路１８、１９は、それぞれ
ポンプ９、８によりセル２８、２９の抽出液を輸送す
る。
容器１ａ内に収容された発光試薬１をポンプ７により輸
送する流路７がインジェクタ２３を介して接続され、他
方のキャリア流路１６には、これに直列に設けられたイ
ンジェクタ２４、２５を介して、それぞれ全細胞抽出用
セル２８、体細胞抽出用セル２９からの流路１８、１９
が接続されている。これら流路１８、１９は、それぞれ
ポンプ９、８によりセル２８、２９の抽出液を輸送す
る。
【００１２】発光試薬１には、１Ｕ／ｍｌの蛍光ルシェ
フェラーゼと、０．１ｍＭのルシェフェリンと、１０ｍ
Ｍの硫酸マグネシウムと、１ｍＭのＥＤＴＡを含んだＰ
Ｈ７．７５のＨＥＰＥＳ緩衝液を、キャリア液２には、
１５ｍＭの硫酸マグネシウムと、１ｍＭのＥＤＴＡを含
んだＰＨ７．７５のＨＥＰＥＳ緩衝液を、全細胞抽出用
試薬３には、０．１％のセチルトリメチルアンモニウム
クロライド（ＣＴＡＣ）と、１０ｍＭのＥＤＴＡを含ん
だＰＨ７．７５のＨＥＰＥＳ緩衝液を、体細胞抽出用試
薬４には、０．１％のトリトンＸ−１００（商標名。米
国ペンシルバニア州フィラデルフィアのロームアンドハ
ース社製）と、１０ｍＭのＥＤＴＡを含んだＰＨ７．７
５のＨＥＰＥＳ緩衝液を使用した。
フェラーゼと、０．１ｍＭのルシェフェリンと、１０ｍ
Ｍの硫酸マグネシウムと、１ｍＭのＥＤＴＡを含んだＰ
Ｈ７．７５のＨＥＰＥＳ緩衝液を、キャリア液２には、
１５ｍＭの硫酸マグネシウムと、１ｍＭのＥＤＴＡを含
んだＰＨ７．７５のＨＥＰＥＳ緩衝液を、全細胞抽出用
試薬３には、０．１％のセチルトリメチルアンモニウム
クロライド（ＣＴＡＣ）と、１０ｍＭのＥＤＴＡを含ん
だＰＨ７．７５のＨＥＰＥＳ緩衝液を、体細胞抽出用試
薬４には、０．１％のトリトンＸ−１００（商標名。米
国ペンシルバニア州フィラデルフィアのロームアンドハ
ース社製）と、１０ｍＭのＥＤＴＡを含んだＰＨ７．７
５のＨＥＰＥＳ緩衝液を使用した。
【００１３】尚、全細胞用抽出試薬３には、陽イオン性
界面活性剤又は両イオン性界面活性剤を使用することが
でき、体細胞用抽出試薬４には、非イオン性界面活性剤
を使用することができる。
界面活性剤又は両イオン性界面活性剤を使用することが
でき、体細胞用抽出試薬４には、非イオン性界面活性剤
を使用することができる。
【００１４】測定試料である体細胞及び微生物細胞を含
んだ細胞懸濁液５は、ポンプ１１により容器５ａから流
路２１を通って輸送して、インジェクタ２６、次いで２
７に導入され、それぞれのインジェクタ２６、２７によ
り細胞懸濁液５が５０μｌづつ流路１９、２０に注入さ
れる。同時にポンプ１２により全細胞用抽出試薬３を流
路１９を通って流し、流路１９に注入された上記の細胞
懸濁液５を輸送して、５０μｌの細胞懸濁液５を含んだ
抽出試薬３が４５０μｌ、全細胞抽出用セル２８に導入
される。更にこれと同時に同様にして、ポンプ１３によ
り体細胞用抽出試薬４を流路２０を通って流し、流路２
０に注入された上記の細胞懸濁液５を輸送して、５０μ
ｌの細胞懸濁液５を含んだ抽出試薬４が４５０μｌ、体
細胞抽出用セル２９に導入される。
んだ細胞懸濁液５は、ポンプ１１により容器５ａから流
路２１を通って輸送して、インジェクタ２６、次いで２
７に導入され、それぞれのインジェクタ２６、２７によ
り細胞懸濁液５が５０μｌづつ流路１９、２０に注入さ
れる。同時にポンプ１２により全細胞用抽出試薬３を流
路１９を通って流し、流路１９に注入された上記の細胞
懸濁液５を輸送して、５０μｌの細胞懸濁液５を含んだ
抽出試薬３が４５０μｌ、全細胞抽出用セル２８に導入
される。更にこれと同時に同様にして、ポンプ１３によ
り体細胞用抽出試薬４を流路２０を通って流し、流路２
０に注入された上記の細胞懸濁液５を輸送して、５０μ
ｌの細胞懸濁液５を含んだ抽出試薬４が４５０μｌ、体
細胞抽出用セル２９に導入される。
【００１５】全細胞用抽出セル２８に導入された細胞懸
濁液５及び全細胞用抽出試薬３は、セル２８に具備され
た撹拌子により６０秒間撹拌して、細胞懸濁液５中の体
細胞及び微生物細胞の両方の細胞である全細胞からＡＴ
Ｐが抽出される。同様に、体細胞抽出用セル２９に導入
された細胞懸濁液５及び体細胞用抽出試薬４は、セル２
９に具備された撹拌子により６０秒間撹拌して、細胞懸
濁液５中の体細胞だけからＡＴＰが抽出される。
濁液５及び全細胞用抽出試薬３は、セル２８に具備され
た撹拌子により６０秒間撹拌して、細胞懸濁液５中の体
細胞及び微生物細胞の両方の細胞である全細胞からＡＴ
Ｐが抽出される。同様に、体細胞抽出用セル２９に導入
された細胞懸濁液５及び体細胞用抽出試薬４は、セル２
９に具備された撹拌子により６０秒間撹拌して、細胞懸
濁液５中の体細胞だけからＡＴＰが抽出される。
【００１６】全細胞用抽出セル２８で全細胞のＡＴＰを
抽出した全細胞抽出液は、ポンプ９により流路１８を通
して輸送してインジェクタ２４に導入され、同時にポン
プ７により容器１ａ内の発光試薬１が流路１４を通って
輸送してインジェクタ２３に導入される。次いでポンプ
６、ポンプ１０によりキャリア液２をそれぞれの流路１
５、１６を通って０．５ｍｌ／分の流量で流し、インジ
ェクタ２３、２４の流路を切換えることにより、上記の
インジェクタ２３に導入された発光試薬１、インジェク
タ２４に導入された全細胞抽出液を、それぞれ流路１
５、１６のキャリア液２の流れ中に同時に５０μｌ注入
する。
抽出した全細胞抽出液は、ポンプ９により流路１８を通
して輸送してインジェクタ２４に導入され、同時にポン
プ７により容器１ａ内の発光試薬１が流路１４を通って
輸送してインジェクタ２３に導入される。次いでポンプ
６、ポンプ１０によりキャリア液２をそれぞれの流路１
５、１６を通って０．５ｍｌ／分の流量で流し、インジ
ェクタ２３、２４の流路を切換えることにより、上記の
インジェクタ２３に導入された発光試薬１、インジェク
タ２４に導入された全細胞抽出液を、それぞれ流路１
５、１６のキャリア液２の流れ中に同時に５０μｌ注入
する。
【００１７】これにより、発光試薬１はキャリア２の流
れにより輸送されて流路１５内を流れ、全細胞抽出液は
キャリア２の流れにより輸送されて流路１６内を流れて
流路２２に入り、流路２２内を流れる間に全細胞抽出液
と発光試薬１が混合して、全細胞抽出液が生物化学発光
反応により発光する。流路２２は上述したようにできる
だけ短くされており、発光した全細胞抽出液は、流路２
２を通って直ちに化学発光検出器３０に導入され、発光
検出器３０により発光光量が検出される。
れにより輸送されて流路１５内を流れ、全細胞抽出液は
キャリア２の流れにより輸送されて流路１６内を流れて
流路２２に入り、流路２２内を流れる間に全細胞抽出液
と発光試薬１が混合して、全細胞抽出液が生物化学発光
反応により発光する。流路２２は上述したようにできる
だけ短くされており、発光した全細胞抽出液は、流路２
２を通って直ちに化学発光検出器３０に導入され、発光
検出器３０により発光光量が検出される。
【００１８】この発光光量の検出信号は、生物化学発光
に関与したＡＴＰの量に対応しているので、その検出信
号のピーク高さ又は積分値を測定して、ＡＴＰ量既知の
標準試料について測定しておいた値と比較すれば、全細
胞抽出液のＡＴＰ量が求まる。そこで、検出された発光
光量の検知信号をアンプ３１により増幅した後、コンピ
ュータ３２に入力し、コンピュータ３２により上記の方
法に基づき全細胞抽出液のＡＴＰ量を算出して求める。
に関与したＡＴＰの量に対応しているので、その検出信
号のピーク高さ又は積分値を測定して、ＡＴＰ量既知の
標準試料について測定しておいた値と比較すれば、全細
胞抽出液のＡＴＰ量が求まる。そこで、検出された発光
光量の検知信号をアンプ３１により増幅した後、コンピ
ュータ３２に入力し、コンピュータ３２により上記の方
法に基づき全細胞抽出液のＡＴＰ量を算出して求める。
【００１９】体細胞抽出液のＡＴＰ量の測定もこれに準
じて行なわれ、体細胞用抽出セル２９で体細胞だけのＡ
ＴＰを抽出した体細胞抽出液を、ポンプ９により流路１
８を通して輸送してインジェクタ２５に導入し、同時に
ポンプ７により容器１ａ内の発光試薬１を流路１４を通
って輸送してインジェクタ２３に導入し、次いでポンプ
６、ポンプ１０によりキャリア液２をそれぞれの流路１
５、１６を通って０．５ｍｌ／分の流量で流し、インジ
ェクタ２３、２４の流路を切換えて、発光試薬１、体細
胞抽出液をそれぞれ流路１５、１６のキャリア液２の流
れ中に同時に５０μｌ注入する。
じて行なわれ、体細胞用抽出セル２９で体細胞だけのＡ
ＴＰを抽出した体細胞抽出液を、ポンプ９により流路１
８を通して輸送してインジェクタ２５に導入し、同時に
ポンプ７により容器１ａ内の発光試薬１を流路１４を通
って輸送してインジェクタ２３に導入し、次いでポンプ
６、ポンプ１０によりキャリア液２をそれぞれの流路１
５、１６を通って０．５ｍｌ／分の流量で流し、インジ
ェクタ２３、２４の流路を切換えて、発光試薬１、体細
胞抽出液をそれぞれ流路１５、１６のキャリア液２の流
れ中に同時に５０μｌ注入する。
【００２０】そしてキャリア２により発光試薬１、体細
胞抽出液をそれぞれ流路１５、１６内を輸送して流路２
２に入れ、流路２２内を流れる間に体細胞抽出液と発光
試薬１とを混合して生物化学発光反応により発光させ、
発光した体細胞抽出液を流路２２を通って化学発光検出
器３０に導入して発光光量を検出する。同様に、検出さ
れた発光光量の検知信号をアンプ３１により増幅した
後、コンピュータ３２に入力して、ＡＴＰ量既知の標準
試料について測定しておいた値と比較して、体細胞抽出
液のＡＴＰ量を算出する。
胞抽出液をそれぞれ流路１５、１６内を輸送して流路２
２に入れ、流路２２内を流れる間に体細胞抽出液と発光
試薬１とを混合して生物化学発光反応により発光させ、
発光した体細胞抽出液を流路２２を通って化学発光検出
器３０に導入して発光光量を検出する。同様に、検出さ
れた発光光量の検知信号をアンプ３１により増幅した
後、コンピュータ３２に入力して、ＡＴＰ量既知の標準
試料について測定しておいた値と比較して、体細胞抽出
液のＡＴＰ量を算出する。
【００２１】上記の体細胞抽出液には、体細胞由来のＡ
ＴＰしか抽出されていないので、この体細胞抽出液のＡ
ＴＰ量が体細胞のＡＴＰ量である。又全細胞抽出液に
は、体細胞と微生物細胞の両方のＡＴＰが抽出されてい
るので、先に測定された全細胞抽出液のＡＴＰ量が体細
胞と微生物細胞の両方のＡＴＰ量であり、この全細胞抽
出液のＡＴＰ量から体細胞抽出液のＡＴＰ量を差し引い
た値が、微生物細胞の由来のＡＴＰ量となる。これらの
計算は全てコンピュータ３２で行なわれる。
ＴＰしか抽出されていないので、この体細胞抽出液のＡ
ＴＰ量が体細胞のＡＴＰ量である。又全細胞抽出液に
は、体細胞と微生物細胞の両方のＡＴＰが抽出されてい
るので、先に測定された全細胞抽出液のＡＴＰ量が体細
胞と微生物細胞の両方のＡＴＰ量であり、この全細胞抽
出液のＡＴＰ量から体細胞抽出液のＡＴＰ量を差し引い
た値が、微生物細胞の由来のＡＴＰ量となる。これらの
計算は全てコンピュータ３２で行なわれる。
【００２２】以上のように、本発明の測定装置によれ
ば、１つの細胞懸濁液について体細胞と微生物細胞に由
来するＡＴＰ量を同時に測定することができる。又装置
各部の操作がコンピュータ３２により自動制御されてい
るので、測定者の手作業による煩雑な前処理や抽出操作
が不要になるばかりでなく、これら抽出操作等の測定操
作が非常に短時間ででき、測定試料の細胞懸濁液５の導
入から、２つの抽出試薬３、４による全細胞ＡＴＰ、体
細胞ＡＴＰの抽出、各抽出液の測定までに要する時間は
トータルで約３分で済む。更に測定者による誤差を生じ
ることなく、容易に正確に測定することができるのはい
うまでもない。
ば、１つの細胞懸濁液について体細胞と微生物細胞に由
来するＡＴＰ量を同時に測定することができる。又装置
各部の操作がコンピュータ３２により自動制御されてい
るので、測定者の手作業による煩雑な前処理や抽出操作
が不要になるばかりでなく、これら抽出操作等の測定操
作が非常に短時間ででき、測定試料の細胞懸濁液５の導
入から、２つの抽出試薬３、４による全細胞ＡＴＰ、体
細胞ＡＴＰの抽出、各抽出液の測定までに要する時間は
トータルで約３分で済む。更に測定者による誤差を生じ
ることなく、容易に正確に測定することができるのはい
うまでもない。
【００２３】本発明の測定装置による測定例について説
明する。
明する。
【００２４】実施例１ 体細胞としてマウスの肺細胞を、微生物細胞として酵母
菌を含有した細胞懸濁液について、図１の測定装置を用
いてその体細胞及び微生物細胞のＡＴＰ量を測定した。
細胞懸濁液の肺細胞の量は２．３×１０4 個／ｍｌと
し、酵母菌の量は０〜１．７×１０7 個／ｍｌの範囲で
変化させた。測定操作は上述した通りである。
菌を含有した細胞懸濁液について、図１の測定装置を用
いてその体細胞及び微生物細胞のＡＴＰ量を測定した。
細胞懸濁液の肺細胞の量は２．３×１０4 個／ｍｌと
し、酵母菌の量は０〜１．７×１０7 個／ｍｌの範囲で
変化させた。測定操作は上述した通りである。
【００２５】
【表１】
【００２６】表１に示されるように、体細胞抽出液のＡ
ＴＰ量（Ｂ）はほぼ一定値であり、試料に含まれる肺細
胞量が一定であることと良く一致している。又微生物細
胞のＡＴＰ量（（Ａ）−（Ｂ））は、試料の酵母菌量に
比例している。これから明らかなように、本発明による
図１の測定装置によれば、短時間に精度良く微生物細胞
である酵母菌のＡＴＰ量と体細胞である肺細胞のＡＴＰ
量とを、別々に測定できていることが分る。更に肺細胞
及び酵母菌の量とＡＴＰ量の関係を予め求めておけば、
ＡＴＰ量の測定によりそれらの細胞数を換算により求め
ることができるのが分る。
ＴＰ量（Ｂ）はほぼ一定値であり、試料に含まれる肺細
胞量が一定であることと良く一致している。又微生物細
胞のＡＴＰ量（（Ａ）−（Ｂ））は、試料の酵母菌量に
比例している。これから明らかなように、本発明による
図１の測定装置によれば、短時間に精度良く微生物細胞
である酵母菌のＡＴＰ量と体細胞である肺細胞のＡＴＰ
量とを、別々に測定できていることが分る。更に肺細胞
及び酵母菌の量とＡＴＰ量の関係を予め求めておけば、
ＡＴＰ量の測定によりそれらの細胞数を換算により求め
ることができるのが分る。
【００２７】実施例２ 体細胞としてマウスの肺細胞を、微生物細胞として大腸
菌を含有した細胞懸濁液について、図１の測定装置を用
いてその体細胞及び微生物細胞のＡＴＰ量を測定した。
細胞懸濁液の大腸菌の量は７．５×１０6 個／ｍｌと
し、肺細胞の量は０〜７．７×１０4 個／ｍｌの範囲で
変化させた。測定操作は上述した通りである。得られた
結果を表２に示す。
菌を含有した細胞懸濁液について、図１の測定装置を用
いてその体細胞及び微生物細胞のＡＴＰ量を測定した。
細胞懸濁液の大腸菌の量は７．５×１０6 個／ｍｌと
し、肺細胞の量は０〜７．７×１０4 個／ｍｌの範囲で
変化させた。測定操作は上述した通りである。得られた
結果を表２に示す。
【００２８】
【表２】
【００２９】表２に示すように、試料の肺細胞量と体細
胞抽出液のＡＴＰ量（Ｂ）は良好な比例関係にあり、肺
細胞のＡＴＰ量が定量的に測定できていることが分る。
又微生物細胞のＡＴＰ量（（Ａ）−（Ｂ））はほぼ一定
値であり、試料に含まれる大腸菌量が一定であることと
良く一致している。このように、本発明による図１の測
定装置によれば、短時間に精度良く微生物細胞である大
腸菌のＡＴＰ量と体細胞である肺細胞のＡＴＰ量とを、
別々に測定できていることが分る。更に肺細胞及び大腸
菌の量とＡＴＰ量の関係を予め求めておけば、ＡＴＰ量
の測定によりそれらの細胞数を換算により求めることが
できるのが分る。
胞抽出液のＡＴＰ量（Ｂ）は良好な比例関係にあり、肺
細胞のＡＴＰ量が定量的に測定できていることが分る。
又微生物細胞のＡＴＰ量（（Ａ）−（Ｂ））はほぼ一定
値であり、試料に含まれる大腸菌量が一定であることと
良く一致している。このように、本発明による図１の測
定装置によれば、短時間に精度良く微生物細胞である大
腸菌のＡＴＰ量と体細胞である肺細胞のＡＴＰ量とを、
別々に測定できていることが分る。更に肺細胞及び大腸
菌の量とＡＴＰ量の関係を予め求めておけば、ＡＴＰ量
の測定によりそれらの細胞数を換算により求めることが
できるのが分る。
【００３０】
【発明の効果】以上説明したように、本発明の細胞内Ａ
ＴＰの測定装置によれば、食肉、魚肉、原乳など微生物
細胞と体細胞が混在する試料について、測定者の手作業
による面倒な前処理や抽出操作を要することなく、短時
間に精度良く自動的に微生物細胞と体細胞のＡＴＰ量を
別々に測定することができる。従ってこれらの食品の雑
菌汚染の管理や原乳中の微生物量と白血球量の同時測定
などにも応用が可能である。
ＴＰの測定装置によれば、食肉、魚肉、原乳など微生物
細胞と体細胞が混在する試料について、測定者の手作業
による面倒な前処理や抽出操作を要することなく、短時
間に精度良く自動的に微生物細胞と体細胞のＡＴＰ量を
別々に測定することができる。従ってこれらの食品の雑
菌汚染の管理や原乳中の微生物量と白血球量の同時測定
などにも応用が可能である。
【図１】本発明の測定装置の一実施例を示す構成図であ
る。
る。
１ 発光試薬 ２ キャリア液 ３ 全細胞用抽出試薬 ４ 体細胞用抽出試薬 ５ 細胞懸濁液 ６〜１３ ポンプ １４〜２２ 流路 ２３〜２７ インジェクタ ２８ 全細胞用抽出セル ２９ 体細胞用抽出セル ３０ 化学発光検出器 ３１ アンプ ３２ コンピュータ
Claims (1)
- 【請求項１】 体細胞及び微生物細胞を含有した細胞懸
濁液から前記体細胞及び微生物細胞からなる全細胞のＡ
ＴＰを全細胞用抽出試薬により抽出する全細胞用抽出セ
ルと、前記細胞懸濁液から前記体細胞のＡＴＰを体細胞
用抽出試薬により抽出する体細胞用抽出セルと、前記細
胞懸濁液を前記全細胞用抽出セル及び体細胞用抽出セル
に供給する細胞懸濁液供給手段と、前記全細胞用抽出セ
ル及び体細胞用抽出セルに供給される細胞懸濁液に、そ
れぞれ全細胞用抽出試薬及び体細胞用抽出試薬を注入す
る試薬注入手段と、前記抽出により得られた全細胞抽出
液及び体細胞抽出液に、それぞれ発光試薬を注入する発
光試薬注入手段と、前記発光試薬が注入された全細胞抽
出液及び体細胞抽出液の発光量から、それぞれ全細胞の
ＡＴＰ量及び体細胞のＡＴＰ量を検出する化学発光検出
器とを備えたことを特徴とする細胞内ＡＴＰの測定装
置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30310792A JPH06129988A (ja) | 1992-10-15 | 1992-10-15 | 細胞内ａｔｐの測定装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30310792A JPH06129988A (ja) | 1992-10-15 | 1992-10-15 | 細胞内ａｔｐの測定装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06129988A true JPH06129988A (ja) | 1994-05-13 |
Family
ID=17916976
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30310792A Pending JPH06129988A (ja) | 1992-10-15 | 1992-10-15 | 細胞内ａｔｐの測定装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06129988A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7122333B2 (en) | 2001-11-21 | 2006-10-17 | Unitika Ltd. | Method and reagent for visually measuring ATP |
-
1992
- 1992-10-15 JP JP30310792A patent/JPH06129988A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7122333B2 (en) | 2001-11-21 | 2006-10-17 | Unitika Ltd. | Method and reagent for visually measuring ATP |
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