JPH06154316A - Ｃｄ４陽性細胞捕集材 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 血液の体外循環療法などに適用することに
より、何らかの原因でその割合が過剰になったＣＤ４陽
性細胞を捕集することが可能な、ＣＤ４陽性細胞との結
合性を有するペプチドまたは修飾ペプチドを不織布に固
定化したＣＤ４陽性細胞捕集材を提供する。 【構成】 カルボキシル基を有する平均繊維径１ない
し３０μｍの不織布に、ＣＤ４陽性細胞と結合性を有す
るペプチドまたは修飾ペプチドを固定化したＣＤ４陽性
細胞捕集材

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は特定のアミノ酸配列を有
するペプチドまたはそのペプチド領域を含む修飾ペプチ
ドを固定化した不織布を用いて、その充填カラムにより
血液の体外循環を行なうことにより、ＣＤ４抗原を細胞
表面に有するたとえばヘルパーＴ細胞の捕集を目的とす
るＣＤ４陽性（以下ＣＤ４＋と言う）細胞捕集材に関す
るものである。本発明は何らかの原因により免疫系のバ
ランスに支障が生ずることにより、ＣＤ４＋細胞の生体
内における割合が過大になり免疫反応が過剰に起こるよ
うな種々の自己免疫疾患などの治療において非常に有用
なものである。

【０００２】

【従来の技術】ＣＤ４分子はヘルパー細胞や一部の単
球，マクロファージの細胞膜表面に分布している分子量
約５５キロダルトンの糖タンパク質であり、胸腺細胞の
約５０％，末梢Ｔ細胞の約７０％に分布する。また成人
Ｔ細胞型白血病細胞や皮膚Ｔ細胞性リンパ腫などにも発
現されている。ヘルパー細胞上のＣＤ４抗原はＴ細胞が
細胞レセプターによりマクロファージから提示された抗
原に結合する際、マクロファージ上の主要組織適合抗原
（以下ＭＨＣと言う）と結合してＴ細胞，抗原，マクロ
ファージ間の会合を安定化する役割をもつ。Ｔ細胞のＣ
Ｄ４分子には非受容体型チロシンキナーゼ分子ｐ５６
^lck が連結し、ＣＤ４の情報伝達分子として機能してい
る。マクロファージ，単球の表面に分布するＣＤ４の生
理的役割に関しては明らかではない。

【０００３】免疫系においてヘルパー細胞は抗原が適切
に応答するのに不可欠であり、Ｂ細胞のほとんどの抗体
応答に必須のものである。ヘルパー細胞は主として抗原
提示細胞の表面に結合した非自己抗原を認識した場合自
身が活性化され、インターロイキン２を分泌してＴ細胞
の増殖を刺激してこれがＢ細胞の活性化を補助してお
り、さらには抗体の産生を促している。またリンパ球を
補助するだけでなくγインターフェロンを分泌すること
によりマクロファージを活性化するヘルパー細胞も存在
する。

【０００４】ヘルパーＴ細胞の他にＴ細胞の亜集団とし
て細胞障害性Ｔ細胞あるいはサプレッサーＴ細胞などが
存在し、その表面マーカーとしてＣＤ８という糖タンパ
ク質が存在する。細胞障害性Ｔ細胞はウイルスに感染し
た細胞を直接破壊し、サプレッサーＴ細胞は主にヘルパ
ーＴ細胞の応答を抑制している。免疫応答の調整に主と
して関与しているのはＣＤ４＋細胞であるヘルパーＴ細
胞とＣＤ８陽性細胞（以下ＣＤ８＋細胞と言う）である
サプレッサーＴ細胞の２つである。正常人ではこれらＣ
Ｄ４＋細胞とＣＤ８＋細胞の両者がバランスよく制御す
ることで、生体内における免疫反応が適当な状態に調節
されている。何らかの原因により両者の数の比率が大き
く変動することにより免疫系に異常が発生する。

【０００５】エイズ患者においてはレトロウイルスの一
種であるヒト免疫不全ウイルスによりヘルパーＴ細胞が
破壊され免疫系が働かなくなっている。したがって通常
であれば発症しないような微生物感染によっても発症し
てしまうものである。この場合にはＣＤ４＋／ＣＤ８＋
の値が正常人と比べて大きく低下している。

【０００６】逆にＣＤ４＋／ＣＤ８＋の値が大きくなる
ものとして、４型アレルギーに属する遅延型過敏症に関
わる疾患がある。遅延型過敏症を誘導するＴ細胞はヘル
パーＴ細胞とは別のものであるが、これもＣＤ４分子を
有している。これに関する疾患としては細胞内寄生性細
菌や真菌などの感染症や、植物，薬剤などによる皮膚炎
の他に、自己抗体が生ずる全身性エリテマトーデスやリ
ウマチ様関節炎などの種々の自己免疫疾患においてもこ
の種のアレルギー機序とＴ細胞により生体内の細胞が障
害され病変が惹起されていると考えられている。

【０００７】種々ある自己免疫疾患の治療に際してはそ
の症状の程度に応じて副腎皮質ホルモン剤の投与，脾臓
の摘出，免疫抑制剤の投与などが適用される。しかしこ
うした薬物療法や摘脾手術では効果的には回復しないよ
うな症例も多く存在している。自己免疫疾患の発生に関
するメカニズムはまだ十分には解明されておらず、こう
した患者に対する治療方法についても絶対的なものは確
立されていないのが現状であり対策が急がれている。

【０００８】自己免疫疾患の他の治療方法として、免疫
吸着カラムを用いた血液の体外循環による自己抗体の吸
着除去も種々試みられている。たとえば免疫グロブリン
と結合性を有するプロテインＡを担体に固定化したカラ
ムの適用も検討されている。しかしプロテインＡは高価
であり、吸着特異性の点で優れず、さらには副作用の問
題も有しておりあまり有用なものではない。また除去対
象物質に対する抗体の固定化カラムも種々検討されてい
るが、安全性，保存安定性の問題，抗体が有効に反応で
きるような固定化が困難なこと，滅菌方法が限定される
などの理由から医用機材として用いるには多くの課題が
ある。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明は血液細胞表面
に存在するのＣＤ４を認識して結合性を有するようなペ
プチドあるいはその修飾ペプチドを固定化した不織布を
用いて、血液の体外循環を行なうことにより、ＣＤ４＋
細胞を特異的に結合させ除去することにより生体内の免
疫系を制御して様々な疾患を治療しようとするものであ
る。

【００１０】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成した本発
明は抗ＣＤ４抗体の相補性決定領域となりうるアミノ酸
配列を含有しているペプチドあるいは修飾ペプチドを固
定化した不織布によるＣＤ４＋細胞の捕集を要旨とする
ものである。

【００１１】本発明は抗ＣＤ４抗体における可変領域を
構成している特定のアミノ酸配列を有するペプチド断片
を利用してＣＤ４＋細胞を捕集しようとするものであ
る。抗体分子の構成している重鎖，軽鎖ともにＮ末端よ
り約１１０個のアミノ酸残基より成る部分に可変領域と
呼ばれる領域が存在しており、抗体分子によりアミノ酸
配列が異なっている部分である。さらにこの可変領域の
中でも分子ごとにアミノ酸配列が比較的類似している部
分と、分子ごとにアミノ酸配列が大きく異なっている超
可変領域と呼ばれる部分とがある。抗原との結合特異性
は後者の部分により決定されている。

【００１２】超可変領域は重鎖および軽鎖ともに３ヵ所
ずつ存在し、２０ないし３０個のアミノ酸残基数から成
る。抗体が抗原と結合する部位である相補性決定領域と
呼ばれる部分はこの超可変領域と一致しており、この中
でも実際に結合に関与している部位は５ないし１０個の
アミノ酸残基から構成される。

【００１３】重鎖ではＮ端より３１ないし３５，５０な
いし６５，９５ないし１０２番目が、軽鎖ではＮ端より
２４ないし３４，５０ないし５６，８９ないし９７番目
が相補性決定領域に相当する断片である。これら合せて
６つの領域はそれぞれにループを形成しており、これら
が１ヵ所にまとまることにより抗原結合部位を形成して
いるものである。すなわち抗原結合部位の多様性はこれ
らの領域におけるループの長さとアミノ酸配列のわずか
な変化だけで生ずるものである。なおこれ以外の抗体の
機能を果たすのに必要な分子全体の高次構造は乱される
ことなく保たれている。

【００１４】抗ＣＤ４抗体としてはＯＫＴ４（オルソ
社），Ｌｅｕ３ａ（ベクトンディキンソン社），Ｔ４
（コールター社）などがある。ＣＤ４は白血球分化抗原
の中では比較的よく研究されており、可変領域の一次構
造が決定されて報告されているものもある。可変領域の
一次構造が既知であれば、これより上記の相補性決定領
域に相当する部位を含有するペプチドを合成することに
よりＣＤ４分子と結合させることが可能である。たとえ
ばＬｅｕ３ａ抗体に関する軽鎖における可変領域のアミ
ノ酸配列（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６６，１４６
１１，１９９１）を例にすると、Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｓｅ
ｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ
−Ｇｌｙ−Ａｓｐ，Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−
Ａｌａ−Ａｌａ−Ｓｅｒ，Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃ
ｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕの３つ
が相補性決定領域に相当する。

【００１５】上記に例示した領域はＣＤ４分子との結合
に最小限必要な領域であると考えられる。実際にこうし
たペプチドを用いてＣＤ４＋細胞を捕集する場合には、
血液中でのＣＤ４分子との反応様式に近い状態を再現す
る必要がある。また血液中に存在する場合の構造の安定
性や、あるいは担体に固定化する場合には水系溶媒に対
する溶解性を大きくしたりすることを考慮する必要があ
ることが多い。

【００１６】そこで上記に示したペプチド領域の一方の
末端または両末端の領域を各タンパク質のアミノ酸配列
に従って領域を延長したり、たとえばリジンのような水
溶性を大きくするようなアミノ酸を数個末端に結合させ
たり、システインのようなアミノ酸を末端に結合させて
担体に固定化しやすくするなどすることが好ましい。実
際に用いるペプチドまたは修飾ペプチドの全アミノ酸残
基数としては７０個以内であることが好ましいが、合成
の困難さやコスト，安定性などを考慮すると３０個以内
がより好ましい。さらに免疫原性を発現するのに要する
高次構造の形成しやすさなども考慮すると１０ないし２
５個が最適であると言える。

【００１７】また固定化反応や安定性などを考慮して、
たとえばＮ末端をアミド化したり、末端に適当な官能基
を導入したりして上記ペプチドを修飾した有機化合物を
用いることも好ましい。また複数のペプチドを−Ａ−
（ＣＨ₂ ）_n −Ｂ−（Ａ，ＢはＮＨまたはＣＯを示す）
で示されるような側鎖を用いて結合させたものもＣＤ４
＋細胞との結合性をより高めることが可能である。この
場合のｎの値は１ないし２０が好ましく３ないし１０が
より好ましい。

【００１８】ペプチドの合成の方法については特に限定
されないが、液相合成法よりも固相合成法を適用する方
が操作が簡単である。この場合有機溶媒に不溶性である
支持体に合成するペプチドのＣ末端に対応するアミノ酸
を結合させ、Ｎ末端方向にαカルボキシル基以外のαア
ミノ基などの官能基を保護した対応するアミノ酸を順に
縮合反応により結合させた後、結合した後その保護基を
脱離させる反応を交互に繰返すことによりペプチド鎖を
延長させる。

【００１９】目的とするペプチドを得た後、ペプチド鎖
を支持体から切断および脱保護基を行なう。これにはフ
ッ化水素がしばしば用いられるが、安全性，取扱いやす
さの点からトリフルオロメタンスルホン酸（以下ＴＦＭ
ＳＡと言う）を用いるのが適当である。チオアニソー
ル，１，２−エタンジチオールとＴＦＭＳＡ中で反応さ
せ脱保護基を行なった後、トリフルオロ酢酸（以下ＴＦ
Ａと言う）により支持体からの切断を行ないペプチドを
回収する。これを凍結乾燥することによりクルードペプ
チドが得られる。

【００２０】上記クルードペプチドは逆相系カラムを用
いた高速液体クロマトグラフィ（以下ＨＰＬＣと言う）
に供することにより分取，精製を行なう。ＨＰＬＣ条件
は通常タンパク質の精製に用いる系を基本として最適化
を行なうのがよい。得られたクロマトピークに相当する
画分を分取しこれを凍結乾燥する。得られた精製ペプチ
ド画分についてマススペクトル分析による分子量解析，
アミノ酸組成分析あるいはアミノ酸配列解析などにより
同定を行なう。

【００２１】上記ペプチドあるいは修飾ペプチドを固定
化する場合に用いる不織布の種類は特に限定されるもの
ではないが、血液浄化に用いる場合には血液中成分と接
触した際の補体系や凝固系などへの影響を考慮する必要
性があることから、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥ
Ｔ），ポリプロピレン（ＰＰ），ポリエチレン（Ｐ
Ｅ），ポリアミド，セルロース（綿）およびビスコース
などが挙げられるが、改質の容易さ、改質後の強度保持
性を考慮するとＰＥＴ，ＰＰ，ＰＥ，綿またはビスコー
スが好ましく、特にＰＥＴ，ＰＰ，綿が好ましい。また
血球成分の粘着性を抑えるためには、繊維径は１ないし
３０μｍが好ましく、３ないし２０μｍがより好まし
い。

【００２２】さらに補体活性，凝固因子活性の抑制およ
び血球粘着を抑制し、リガンドであるペプチド類の導入
を容易に行なうために、カルボキル基の導入された不織
布を担体とすることが好ましい。カルボキル基の含量は
０．０１ないし３ｍｅｑ／ｇが好ましく、０．１ないし
１．０ｍｅｑ／ｇがより好ましい。

【００２３】不織布にカルボキル基を導入する方法は種
々のものが挙げられるが、たとえばＰＰ，ＰＥの場合に
はアクリル酸（ＡＡ），メタクリル酸（ＭＡＡ）または
これらの誘導体を重合時に共重合させて不織布を製造す
る方法がある。またこれらの素材を電子線，紫外線また
はオゾンを照射することによりラジカルやイオンを発生
させ、ＡＡ，ＭＡＡまたはこれらの誘導体をグラフトさ
せる方法がある。この場合には他のビニルモノマーを共
存させることも可能である。

【００２４】綿やビスコースの場合には過ヨウ素酸によ
り酸化してそのグリコール部位を開裂させてアルデヒド
基を導入して、これを酸化してカルボキル基を導入して
もよいし、あるいはアルデヒド基にアンモニア，エチレ
ンジアミン，ヘキサメチレンジアミンのような少なくと
も一級のアミノ基を１個以上有する化合物を反応させて
シッフ塩基を形成し、これを還元してアミノ基を導入し
た後、このアミノ基とＡＡ，ＭＡＡ，およびこれらの誘
導体またはポリアクリル酸（ＰＡＡ），ポリメタクリル
酸（ＰＭＡＡ）およびこれらの誘導体ポリマーとを縮合
させてもよい。この時のＰＡＡ，ＰＭＡＡおよびそれら
の誘導体ポリマーの分子量は２００ないし２００００が
好ましく、５００ないし１００００がより好ましい。こ
こでいう誘導体ポリマーとはＡＡまたはＭＡＡのモノマ
ー単位を少なくとも１種類を１０ないし８０モル％以上
を含む他のビニルモノマーとの共重合体を意味するもの
である。

【００２５】さらに電子線照射によりカルボキル基を導
入する方法として、ＰＡＡ，ＰＭＡＡおよびそれらの誘
導体ポリマーとビニル基を１分子中に少なくとも２個以
上有する架橋性モノマーとの混合溶液を不織布にコーテ
ィングし乾燥させた後、電子線を照射してカルボキル基
を導入することができる。この場合のポリマーの分子量
は２００ないし２００００が好ましく、５００ないし１
００００がさらに好ましい。

【００２６】用いる架橋性モノマーとしてはメチレンビ
スアクリルアミド，トリメチロールプロパンジアクリレ
ート，トリメチロールプロパントリアクリレート，テト
ラメチロールメタンテトラアクリレート，トリアリルイ
ソシアヌレートのようなビニル基を複数個有するモノマ
ーの他に、化１の一般式で示される化合物が挙げられ
る。これらの架橋性化合物のうちで化１を用いた場合が
カルボキル基の導入率が最も良好で、カルボキル基濃度
も所望の値に制御することが可能である。化１における
Ｒ₁ ，Ｒ₂ ，Ｒ₃ はそれぞれ水素原子またはメチル基を
示す。ｎは１ないし１００の整数を示しているが、３な
いし７０の整数の場合が好ましく、５ないし６０の整数
がさらに好ましい。

【００２７】

【化１】

【００２８】コーティングする溶液の濃度は０．１ない
し２０％、好ましくは０．５ないし１０％であり、用い
る溶媒は架橋性化合物とＰＡＡ，ＰＭＡＡおよびそれら
の誘導体ポリマーの両方を溶解する溶媒であればすべて
使用できるが、水，メタノール，エタノール，塩化メチ
レン，クロロホルム，アセトン，ジオキサン，テトラヒ
ドロフランまたはこれらの混合溶媒を用いることができ
る。ＰＡＡ，ＰＭＡＡおよびそれらの誘導体ポリマーと
架橋性化合物との混合比は５０：１ないし１：５０、好
ましくは３０：１ないし１：３０である。コーティング
する混合物は不織布に対して０．５ないし３０ｗｔ％、
好ましくは１ないし２０ｗｔ％である。

【００２９】不織布へのカルボキル基の導入方法を種々
検討したところ、ＰＡＡ，ＰＭＡＡおよびそれらの誘導
体ポリマーと化１で示される化合物とを混合してコーテ
ィングした後、電子線照射により処理する方法が最も好
ましい。この場合に用いる素材としてはＰＥＴ，ＰＥお
よび綿が好ましく、特にＰＥＴが好ましい照射線量は１
ないし２０Ｍｒａｄ、好ましくは２ないし１０Ｍｒａｄ
である。このようにしてカルボキル基を導入した不織布
はカルボキル基とポリエチレングリコールとの相乗効果
により、血小板，白血球などの粘着がなく血液の補体活
性や凝固系因子の活性化も抑制されており、抗血小板抗
体の吸着，除去に際して血漿と血球成分とを分離した後
血漿から抗体を吸着して血漿と血球成分を再混合して患
者に返す必要がなく全血処理により一段階で抗体を吸着
することができる。

【００３０】カルボキル基の導入された不織布への抗血
小板抗体との結合性を有する上記のようなペプチド類の
固定化に関しても種々の方法がある。この場合リガンド
に用いるペプチドや修飾ペプチドは比較的安定で低分子
量の物質であり、たとえば酵素や抗体のような高分子量
のタンパク質を固定化する場合と比較してその固定化反
応条件は制約が少なくなることも有利な要因の一つであ
る。したがって固定化方法については特に限定されるも
のではないが、以下のような方法によるものが好まし
い。

【００３１】通常は立体障害を小さくすることにより抗
体の吸着効率，結合性の向上させ、また非特異的吸着を
抑えることを目的として、親水性スペーサーを導入し
て、その末端にペプチド類を固定化するのが好ましい。
親水性スペーサーとしては導入したカルボキル基を利用
するのが好ましく、両末端にアミノ基またはグリシジル
基を有するポリエチレングリコールを用いることが好ま
しい。この場合のポリエチレングリコールの分子量は１
００ないし２００００、好ましくは２００ないし１００
００、さらに好ましくは５００ないし５０００である。

【００３２】両末端にアミノ基を有するポリエチレング
リコール（以下ＰＥＯアミンと言う）を用いる場合、ま
ず不織布のカルボキシル基とカルボジイミドなどの縮合
剤を用いてアミド結合により結合させ、次にもう一方の
アミノ基とペプチドのカルボキシル基末端を縮合剤の存
在下に縮合させてアミド基を介した固定化を行なう。

【００３３】またグリシジル基を両末端に有するポリエ
チレングリコールを用いる場合には、まず片端のグリシ
ジル基と不織布のカルボキシル基との反応によりスペー
サーを導入し、次いでもう一方の末端のグリシジル基と
ペプチドのアミノ基とを反応させて固定化を行なう。

【００３４】しかしＰＡＡ，ＰＭＡＡおよびそれらの誘
導体ポリマーと化１を用いてカルボキシル基を導入した
場合においては、グラフトされたＰＡＡ，ＰＭＡＡおよ
びそれらの誘導体ポリマー自体が親水性スペーサーの役
割を果たしており、このことからも好ましいものであ
る。すなわちグラフトされたＰＡＡ，ＰＭＡＡおよびそ
れらの誘導体ポリマーのカルボキシル基とペプチドのア
ミノ基末端を上記の方法により縮合させることにより固
定化が他の方法と比較して有利である。

【００３５】

【実施例】本発明におけるペプチド類のカルボキシル基
を導入した不織布への導入方法は上記に述べたものを基
本とすれば特に限定されるものではない。以下に実施例
を用いて本発明を説明する。

【００３６】＜実施例１＞ Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−
Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｖ
ａｌ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅ
ｒ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｎの不織布への固定化 （１）ペプチドの合成 抗Ｌｅｕ３抗体の軽鎖の可変領域における２０ないし３
８番目までに相当する領域であるＴｈｒ−Ｉｌｅ−Ｓｅ
ｒ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ
−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−
Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｎの配列を有するペプチ
ドの合成をペプチドシンセサイザーＭｏｄｅｌ４３０Ａ
（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて固相合成
法により行なった。Ｃ末端のアスパラギンの結合した支
持体であるＰＡＭアスパラギン（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓ
ｎ）０．５ｍｍｏｌ（アプライドバイオシステムズ社
製）を用いて、Ｎ末端の方向に順に上記ペプチドシンセ
サイザーに掲載されている合成プログラムにより脱保護
基反応および縮合反応を繰返してペプチド鎖を延長し
た。すなわちＴＦＡおよびジクロロメタン（以下ＤＣＭ
と言う）により保護基であるｔ−ブトキシカルボニル基
の除去を行ない、ＤＣＭで洗浄し、ジイソプロピルエチ
ルアミンおよびＤＣＣで中和した後、ジメチルホルムア
ミド（以下ＤＭＦと言う）で洗浄し縮合反応を行ない、
ＤＣＭで洗浄する操作を繰返した。アミノ酸はｔ−Ｂｏ
ｃ−Ｌ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ・
１／２Ｈ₂Ｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ），ｔ
−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−
Ａｌａ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｖ
ａｌ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏ
ｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌ
ｙ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｍｅｔ（いずれもアプライドバイ
オシステムズ社製）の２．０ｍｍｏｌのカートリッジを
用いた。

【００３７】（２）脱保護基，ペプチド鎖の切断 上記の反応が終了した支持体１ｇにチオアニソール１ｍ
ｌ，１，２−エタンジチオール０．５ｍｌを加えて１０
分間攪拌した後、氷水で冷やしながらＴＦＡ１０ｍｌを
加えて１０分間攪拌した。さらにＴＦＭＳＡ１ｍｌを加
えて室温で３０分間攪拌した。これにあらかじめ冷やし
ておいたジエチルエーテルを沈殿が現れなくなるまで加
えて攪拌し、ミディアム孔のガラスフィルターを用いて
ジエチルエーテルで共洗いしながら濾過し、ＴＦＡを加
えてペプチドを溶解してエーテル中に捕集した。エーテ
ル中のペプチドをファイン孔のガラスフィルターで濾過
し、ガラスフィルター上のペプチドを２Ｎ酢酸に溶解し
て、凍結乾燥を行ないクルードペプチドを得た。

【００３８】（３）ペプチドの精製 上記クルードペプチドを再度２Ｎ酢酸に溶解して、０．
２μｍのメンブレンフィルターで濾過した溶液をＨＰＬ
Ｃに供した。ＨＰＬＣはＭｏｄｅｌ１３０Ａシステム
（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、カラムは
逆相系のＡｑｕａｐｏｒｅ Ｐｒｅｐ−１０，Ｃ８（ア
プライドバイオシステムズ社製）を用いた。移動相は
０．１％ＴＦＡを含む水をＡ液，０．１％ＴＦＡを含む
７０％アセトニトリル／水（ｖ／ｖ）をＢ液として、Ａ
液からＢ液への濃度直線勾配により溶出した。クロマト
ピークはほぼ単一なものが得られ、相当画分を分取し
た。分取を数回繰返し、これを凍結乾燥することにより
精製ペプチドを得た。得られたペプチドはＢＩＯＩＯＮ
２０マスアナライザー（アプライドバイオシステムズ社
製）により解析して目的ペプチドが得られていることを
確認した。

【００３９】（４）不織布の改質 化１においてＲ₁ ，Ｒ₂ ，Ｒ₃ が水素原子でありｎの値
が１４であるポリエチレンジアクリレート（ＣＨ₂ ＝Ｃ
Ｈ−ＣＯＯ−（ＣＨ₂ ＣＨ₂ Ｏ）₁₄−ＯＣ−ＣＨ₂ ＝Ｃ
Ｈ₂ ）２ｇおよび分子量１００００のＰＡＡ０．２ｇを
２００ｍｌのメタノールに溶解し、１５ｃｍ平方の大き
さに切断した繊維径３．５μｍのＰＥＴ製不織布をこの
溶液に浸した後、５Ｍｒａｄずつ合わせて１０Ｍｒａｄ
の電子線を不織布の両面に照射した。電子線照射の終了
した不織布を水およびメタノールで３回ずつ洗浄を行な
い風乾した。得られた不織布のカルボキシル基含量の定
量を水酸化ナトリウム溶液による滴定により行ない、
０．０８８ｍｅｑ／ｇであった。

【００４０】（５）ペプチドの不織布への導入 （３）で得た精製ペプチド２５ｍｇをｐＨ４．５のクエ
ン酸緩衝液に溶解した後氷冷を行ない、水溶性カルボジ
イミド試薬であるＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメ
チルアミノプロピル）カルボジイミド）１０ｍｇを加え
て氷冷しながら３０分間攪拌した。さらに上記の改質し
た不織布を加えて、室温で２４時間振盪して反応させ
た。反応の終了した不織布を水で３回洗浄して、目的で
ある捕集材を得た。ペプチドの固定化率は反応残液中の
窒素含量をマイクロケルダール法により定量して算出し
８５％が導入されていた。

【００４１】（６）ペプチド固定化捕集材の性能評価 上記捕集材のＣＤ４＋細胞との結合性をヒト血液を用い
て評価した。一辺７ｃｍの菱形のポリカーボネート製モ
ジュールケースの形状およびその大きさに切断した上記
吸着材を２０枚充填したカラムを組立て、１００Ｕ／ｍ
ｌのヘパリンを含む生理食塩水１００ｍｌ、次いで１Ｕ
／ｍｌのヘパリンを含む生理食塩水１００ｍｌでカラム
内および血液回路内を洗浄した。一方クエン酸を添加し
たヒト血液１００ｍｌをビーカーに取り、カラムを通し
て再びビーカーに戻すような血液回路を組み、この装置
を用いて血液流量３０ｍｌ／分で１時間連続して潅流実
験を行なった。

【００４２】本処理を行なう前後の血清中のＣＤ４＋細
胞およびＣＤ８＋細胞数の変化をフローサイトメトリー
法により定量した。細胞はＦｉｃｏｌｌ−Ｃｏｎｒａｙ
法により調製を行ない、フルオレセインイソチオシアネ
ートで標識したＬｅｕ３ａおよびＬｅｕ２ａ抗体を用い
て実施した。またフローサイトメトリーはＥＰＩＣＳ−
ＰＲＯＦＩＬＥ２（コールター社製）を用いた。結果は
表１に示す通りであり、本処理を行なう前と比較した各
細胞数の減少率［％］で示した。またアルブミンの非特
異的吸着に関しても、アルブミンＢーテストワコー（和
光純薬工業製）を用いて定量した。結果は表１に示す通
りであり吸着率［％］で示した。また血小板の粘着性に
ついても本処理を行なう前後の血小板数をコールターカ
ウンターＺＭ型（コールターエレクトロニクス社製）を
用いて定量することにより調べた。結果は表１に示す通
りであり血小板数の減少率［％］で示した。

【００４３】

【表１】

【００４４】＜実施例２＞ Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−
Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａ
ｌａ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒの不織
布への固定化 抗Ｌｅｕ３抗体の軽鎖の可変領域における４６ないし６
０番目までに相当する領域であるＧｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒ
ｏ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ
−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒの
配列を有するペプチドの合成に関してもＰＡＭセリン
（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ））（アプライドバ
イオシステムズ社製）およびｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ，
ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｃ
ｌ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ・Ｈ₂ Ｏ，ｔ−Ｂｏ
ｃ−Ｌ−Ｉｌｅ・１／２Ｈ₂ Ｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙ
ｒ（Ｂｒ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｌａ，ｔ−Ｂｏｃ
−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（Ｏ
Ｂｚｌ）（いずれもアプライドバイオシステムズ社製）
を用いて実施例１と同様にして実施した。合成の終了し
た支持体の脱保護基，ペプチド鎖の切断，逆相系ＨＰＬ
Ｃによる精製および同定についても実施例１と同様にし
て行なった。

【００４５】化１においてＲ₁ ，Ｒ₂ ，Ｒ₃ が水素原子
でありｎの値が９であるポリエチレンジアクリレート
（ＣＨ₂ ＝ＣＨ−ＣＯＯ−（ＣＨ₂ ＣＨ₂ Ｏ）₉ −ＯＣ
−ＣＨ ₂ ＝ＣＨ₂ ）１ｇおよび分子量４０００のＰＡＡ
１ｇを２００ｍｌのメタノールに溶解し、実施例１と同
様に１５ｃｍ平方の大きさに切断した繊維径３．５μｍ
のＰＥＴ製不織布をこの溶液に浸した後、５Ｍｒａｄず
つ合わせて１０Ｍｒａｄの電子線を不織布の両面に照射
した。電子線照射の終了した不織布を水およびメタノー
ルで３回ずつ洗浄を行ない風乾した。得られた不織布の
カルボキシル基含量の定量を水酸化ナトリウム溶液によ
る滴定により行ない、０．３５１ｍｅｑ／ｇであった。

【００４６】上記ペプチド５０ｍｇを実施例１と同様に
ｐＨ４．５のクエン酸緩衝液に溶解した後氷冷を行な
い、ＥＤＣ１０ｍｇを加えて氷冷しながら３０分間攪拌
した。さらに上記の改質した不織布を加えて、室温で２
４時間振盪して反応させた。反応の終了した不織布を水
で３回洗浄して、目的である捕集材を得た。ペプチドの
固定化率は実施例１と同様にして求め７６％が導入され
ていた。得られた捕集材の性能評価を実施例１と同様に
して、カラムを組立てた後ヒト血液を用いた潅流実験に
より行なった。処理後の血清中のＣＤ４＋細胞，ＣＤ８
＋細胞の量およびアルブミン量を実施例１と同様にして
定量した。結果を表１に減少率［％］で示した。血小板
粘着性についても実施例１と同様に検討した結果を表１
に血小板数の減少率［％］で示した。

【００４７】＜実施例３＞ Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−
Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇ
ｌｎ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｐｒ
ｏ−Ｔｈｒの不織布への固定化 抗Ｌｅｕ３抗体の軽鎖の可変領域における８５ないし１
０１番目までに相当する領域であるＧｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔ
ｈｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌ
ｎ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ
−Ｐｒｏ−Ｔｈｒの配列を有するペプチドの合成に関し
てもＰＡＭトレオニン（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ（Ｂｚ
ｌ））（アプライドバイオシステムズ社製）およびｔ−
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇ
ｌｙ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ
−Ｌ−Ａｌａ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ），
ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｃｙｓ（４ＣＨ₃Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏ
ｃ−Ｌ−Ｇｌｎ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ），
ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ
−Ｐｒｏ（いずれもアプライドバイオシステムズ社製）
を用いて実施例１と同様にして実施した。合成の終了し
た支持体の脱保護基，ペプチド鎖の切断，逆相系ＨＰＬ
Ｃによる精製および同定についても実施例１と同様にし
て行なった。

【００４８】分子量１０００のＰＥＯアミンを３０ｇを
ｐＨ４．５のクエン酸緩衝液５００ｍｌに溶解した後氷
冷し、ＥＤＣ１０ｍｇを加えて氷冷しながら３０分間攪
拌した。実施例１と同様にして得たカルボキシル基を導
入（０．０８８ｍｅｑ／ｇ）した改質不織布３０枚を、
上記ＰＥＯアミン溶液中で室温で振盪させることにより
２４時間反応させた。反応終了後不織布を水で３回洗浄
して、ＰＥＯアミンを導入した不織布を得た。アミノ基
含量はの定量は塩酸による電位差滴定をＣＯＭＴＩＴＥ
１０１（平沼産業製）を用いて行ない０．０３７ｍｅｑ
／ｇであった。

【００４９】上記ペプチド２５ｍｇを実施例１と同様に
ｐＨ４．５のクエン酸緩衝液に溶解した後氷冷を行な
い、ＥＤＣ１０ｍｇを加えて氷冷しながら３０分間攪拌
した。さらに上記のＰＥＯアミンの導入された不織布を
加えて、室温で２４時間振盪して反応させた。反応の終
了した不織布を水で３回洗浄して、目的である吸着材を
得た。ペプチドの固定化率を実施例１と同様にして求め
８３％が導入されていた。得られた吸着材の性能評価を
実施例１と同様にして、カラムを組立てた後ヒト血液を
用いた潅流実験により行なった。処理後の血清中のＣＤ
４＋細胞，ＣＤ８＋細胞の量およびアルブミン量を実施
例１と同様にして定量した。結果を表１に減少率［％］
で示した。血小板粘着性についても実施例１と同様に検
討した結果を表１に血小板数の減少率［％］で示した。

【００５０】＜実施例４＞ Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−
Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔ
ｈｒの不織布への固定化 抗Ｌｅｕ３抗体の重鎖の可変領域における９４ないし１
０３番目までに相当する領域であるＴｙｒ−Ｐｈｅ−Ｃ
ｙｓ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｇｌ
ｙ−Ｔｈｒの配列を有するペプチドの合成に関してもＰ
ＡＭトレオニン（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ））
（アプライドバイオシステムズ社製）およびｔ−Ｂｏｃ
−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｈｅ，
ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｃｙｓ（４ＣＨ₃ Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏ
ｃ−Ｌ−Ａｌａ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ），
ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｙ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｃ
ｌ−Ｚ），（いずれもアプライドバイオシステムズ社
製）を用いて実施例１と同様にして実施した。合成の終
了した支持体の脱保護基，ペプチド鎖の切断，逆相系Ｈ
ＰＬＣによる精製および同定についても実施例１と同様
にして行なった。

【００５１】分子量５０００のＰＥＯアミンを２０ｇを
ｐＨ４．５のクエン酸緩衝液５００ｍｌに溶解した後氷
冷し、ＥＤＣ１０ｍｇを加えて氷冷しながら３０分間攪
拌した。実施例２で得たカルボキシル基を導入（０．３
５５ｍｅｑ／ｇ）した改質不織布３０枚を、上記ＰＥＯ
アミン溶液中で室温で振盪させることにより２４時間反
応させた。反応終了後不織布を水で３回洗浄して、ＰＥ
Ｏアミンを導入した不織布を得た。アミノ基含量を実施
例３と同様にして定量し０．１４４ｍｅｑ／ｇであっ
た。

【００５２】上記ペプチド５０ｍｇを実施例１と同様に
ｐＨ４．５のクエン酸緩衝液に溶解した後氷冷を行な
い、ＥＤＣ１０ｍｇを加えて氷冷しながら３０分間攪拌
した。さらに上記のＰＥＯアミンの導入された不織布を
加えて、室温で２４時間振盪して反応させた。反応の終
了した不織布を水で３回洗浄して、目的である捕集材を
得た。ペプチドの固定化率を実施例１と同様にして求め
８２％が導入されていた。得られた捕集材の性能評価は
実施例１と同様のカラムを組立てた後ヒト血液を用いた
潅流実験により行なった。処理後の血清中のＣＤ４＋細
胞，ＣＤ８＋細胞の量およびアルブミン量を実施例１と
同様にして定量した。結果を表１に減少率［％］で示し
た。血小板粘着性についても実施例１と同様に検討した
結果を表１に血小板数の減少率［％］で示した。

【００５３】

【比較例】

＜比較例１＞ Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｌｙ
ｓ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ
−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−
Ｍｅｔ−Ａｓｎの不織布への固定化 実施例１で得たＴｈｒ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｌｙ
ｓ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ
−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−
Ｍｅｔ−Ａｓｎの綿不織布への導入を次のようにして実
施した。１５ｃｍ平方の大きさに切断した繊維径１２μ
ｍの綿不織布３０枚を、１ｗｔ％濃度の過ヨウ素酸ナト
リウムを１Ｎ硫酸に溶解した溶液５００ｍｌ中に加えて
振盪により２２時間反応させた。反応終了後不織布を水
で３回洗浄して、アルデヒド基の導入された不織布を得
た。アルデヒド含量はオキシム法により定量を行ない
０．５０ｍｅｑ／ｇであった。

【００５４】上記ペプチド２５ｍｇをｐＨ９．５の炭酸
緩衝液５００ｍｌに溶解して、上記アルデヒド基導入不
織布を加えて振盪により２４時間シッフ塩基反応を行な
った。反応終了後不織布を水で３回洗浄した。ペプチド
の固定化率を実施例１と同様にして求め８９％が導入さ
れていた。次に１ｇの水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢ
Ｈ₄ ）をｐＨ９．０の炭酸緩衝液５００ｍｌに溶解し
て、上記の不織布を加えて振盪により２０時間反応させ
た。反応終了後不織布を水で３回洗浄して目的の集材を
得た。得られた捕集材の性能評価を実施例１と同様にし
て、カラムを組立てた後ヒト血液を用いた潅流実験によ
り行なった。処理後の血清中のＣＤ４＋細胞，ＣＤ８＋
細胞の量およびアルブミン量を実施例１と同様にして定
量した。結果を表１に減少率［％］で示した。血小板粘
着性についても実施例１と同様に検討した結果を表１に
血小板数の減少率［％］で示した。

【００５５】＜比較例２＞ Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−
Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａ
ｌａ−Ｔｈｒの不織布への固定化 抗Ｌｅｕ３抗体の軽鎖の可変領域における１０ないし２
０番目までに相当する領域であるＳｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌ
ａ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ
−Ａｌａ−Ｔｈｒの配列を有するペプチドの合成に関し
て、ＰＡＭトレオニン（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ（Ｂｚ
ｌ））（アプライドバイオシステムズ社製）およびｔ−
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅ
ｕ・Ｈ₂Ｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｌａ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ
−Ｖａｌ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｙ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−
Ｇｌｎ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）（いずれも
アプライドバイオシステムズ社製）を用いて実施例１と
同様にして実施した。このペプチド領域も親水性の比較
的大きな領域である。合成の終了した支持体の脱保護
基，ペプチド鎖の切断，逆相系ＨＰＬＣによる精製およ
び同定についても実施例１と同様にして行なった。

【００５６】比較例１と同じ条件を用いてアルデヒド基
を導入（０．５２ｍｅｑ／ｇ）した綿不織布に、上記ペ
プチドの綿不織布への導入を比較例１と同じ反応条件に
より行なった。ペプチドの固定化率は実施例１と同様に
して求め８２％が導入されていた。得られた捕集材の性
能評価を実施例１と同様にして、カラムを組立てた後ヒ
ト血液を用いた潅流実験により行なった。処理後の血清
中のＣＤ４＋細胞，ＣＤ８＋細胞の量およびアルブミン
量を実施例１と同様にして定量した。結果を表１に減少
率［％］で示した。血小板粘着性についても実施例１と
同様に検討した結果を表１に血小板数の減少率［％］で
示した。

【００５７】

【発明の効果】本発明により血液中のＣＤ４＋細胞と効
果的に結合させることが可能であり、種々の自己免疫疾
患の治療への適用が可能である。本発明におけるＣＤ４
＋細胞捕集材を用いた血液浄化療法は副作用もなく安全
であり、保存による安定性の面でも優れている。不織布
を利用することにより従来のような血漿分離を必要とし
ない全血処理による体外循環が可能である。またカルボ
キシル基が存在することによりリガンドであるペプチド
類の導入も容易である。さらにオートクレーブ処理によ
る蒸気滅菌を行なってもリガンドとしての活性が低下す
ることがほとんどない点も医療機材として有利である。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成４年１２月２２日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２１

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２１】上記ペプチドあるいは修飾ペプチドを固定
化する場合に用いる不織布の種類は特に限定されるもの
ではないが、血液浄化に用いる場合には血液中成分と接
触した際の補体系や凝固系などへの影響を考慮する必要
性があることから、ポリエチレンテレフタレ−ト（ＰＥ
Ｔ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリエチレン（Ｐ
Ｅ）、ポリアミド、セルロ−ス（綿）およびレ−ヨンな
どが挙げられるが、改質の容易さ、改質後の強度保持性
を考慮するとＰＥＴ、ＰＥ、綿またはレ−ヨンが好まし
い。また血球成分の粘着性を抑えるためには、繊維径は
１ないし３０μｍが好ましく３ないし２０μｍがより好
ましい。これらの繊維から構成される不織布としては、
本発明の目的からして、不織布の密度（充填率）は、
０．６ｇ／ｃｍ ³ 以下、より好ましくは０．４ｇ／ｃｍ
³ 以下のものである。またその下限としては、接触効率
の点から０．０１ｇ／ｃｍ³ 以上、より好ましくは０．
０２ｇ／ｃｍ³ 以上である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 田中 昌和 滋賀県大津市堅田二丁目１番１号 東洋紡 績株式会社総合研究所内

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 カルボキシル基を含有する平均繊維径１
   ないし３０μｍの繊維からなる不織布に、抗ＣＤ４抗体
   における重鎖または軽鎖の可変領域を構成しているアミ
   ノ酸配列において相補性決定領域を形成しているペプチ
   ドまたはその修飾ペプチドを固定化したことを特徴とす
   るＣＤ４陽性細胞捕集材。
2. 【請求項２】 請求項第１項記載の修飾ペプチドが、抗
   ＣＤ４抗体の重鎖または軽鎖の可変領域を構成するアミ
   ノ酸配列において相補性決定領域を形成している領域の
   うちの少なくとも１つを含んでおり、その両端または片
   端がアミノ酸，ペプチドまたは−Ａ−（ＣＨ₂ ）_n −Ｂ
   −（Ａ，ＢはＮＨまたはＣＯ，ｎは１ないし２０の整
   数）で示されるもののいずれかがペプチド結合により結
   合しているもので、全アミノ酸残基数が７０個以内であ
   ることを特徴とするＣＤ４陽性細胞捕集材。