JPH06165689A - 組換えアデノウイルスワクチン - Google Patents
組換えアデノウイルスワクチンInfo
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- JPH06165689A JPH06165689A JP5193410A JP19341093A JPH06165689A JP H06165689 A JPH06165689 A JP H06165689A JP 5193410 A JP5193410 A JP 5193410A JP 19341093 A JP19341093 A JP 19341093A JP H06165689 A JPH06165689 A JP H06165689A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 温血哺乳類のための組換えアデノウイルスワ
クチンを提供すること。 【構成】 ビリオン構造蛋白が組換えアデノウイルスを
生産する天然アデノウイルスのビリオン構造蛋白から変
化せず、かつ、抗体に対応するかまたは細胞性免疫を誘
発する抗原をコードする遺伝子を含有する生の組換えア
デノウイルスを温血哺乳類に鼻腔内投与、筋肉内投与ま
たは皮下投与することからなる、温血哺乳類における感
染性微生物に対する抗体または細胞性免疫の生産方法。
クチンを提供すること。 【構成】 ビリオン構造蛋白が組換えアデノウイルスを
生産する天然アデノウイルスのビリオン構造蛋白から変
化せず、かつ、抗体に対応するかまたは細胞性免疫を誘
発する抗原をコードする遺伝子を含有する生の組換えア
デノウイルスを温血哺乳類に鼻腔内投与、筋肉内投与ま
たは皮下投与することからなる、温血哺乳類における感
染性微生物に対する抗体または細胞性免疫の生産方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、温血哺乳類のための組
換えアデノウイルスワクチンに関するものである。
換えアデノウイルスワクチンに関するものである。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】生物
医学的研究の主な目標は、免疫化を介してウイルス性疾
患に対する保護を提供することである。ある研究は、死
菌ワクチンを使用することであった。しかしながら、充
分な抗原塊を保持するためには死菌ワクチンに対して多
量の物質を必要とする。さらに、死菌はしばしばその調
製の間に望ましくない生成物で汚染される。自体ワクチ
ンである適当に操作されたアデノウイルスを使用する異
種生菌ワクチンは優れた免疫原であると思われる[チャ
ノック・アール(Ｃhanock Ｒ.)、ＪＡＭＡ、１９５、１
５１(１９６７)]。本発明は、ベクターとしてアデノウ
イルスを使用するワクチンに関する。
医学的研究の主な目標は、免疫化を介してウイルス性疾
患に対する保護を提供することである。ある研究は、死
菌ワクチンを使用することであった。しかしながら、充
分な抗原塊を保持するためには死菌ワクチンに対して多
量の物質を必要とする。さらに、死菌はしばしばその調
製の間に望ましくない生成物で汚染される。自体ワクチ
ンである適当に操作されたアデノウイルスを使用する異
種生菌ワクチンは優れた免疫原であると思われる[チャ
ノック・アール(Ｃhanock Ｒ.)、ＪＡＭＡ、１９５、１
５１(１９６７)]。本発明は、ベクターとしてアデノウ
イルスを使用するワクチンに関する。
【０００３】現在市販されているアデノワクチンは、腸
溶性投与形態の生の感染性アデノウイルスからなる。ワ
クチン接種されるべき患者への投与によって、該ウイル
スは上気道系(ここで疾患を引き起こす感染が生じると
思われる)を通過し、腸内に放出される。腸内では、該
ウイルスは腸壁で増殖するが、ここでは、アデウイルス
性疾患を引き起こすことはできず、それにもかかわら
ず、アデノウイルス抗体の形成を誘発し、その結果とし
てアデノウイルス性疾患に対する免疫を与える。本発明
では、生の感染性アデノウイルスは、他の疾患誘発性微
生物によって生産された抗原をコードする遺伝子を含有
するように操作された。放出によって、該ウイルスは増
殖し、アデノウイルス性抗原および病原抗原を共に別々
に発現し、これによって、アデノウイルスおよび他の疾
患誘発性微生物の両方に対する抗体の形成を誘発するか
または細胞性免疫を誘発する。「死」ウイルスと対比し
て、「生のウイルス」なる語は、同一子孫を生産するこ
とができるウイルスそれ自体、またはさらなる遺伝物質
と一緒になっているウイルスを意味する。「感染性の」
なる語は、ウイルスゲノムを細胞中に送達する能力を有
することを意味する。
溶性投与形態の生の感染性アデノウイルスからなる。ワ
クチン接種されるべき患者への投与によって、該ウイル
スは上気道系(ここで疾患を引き起こす感染が生じると
思われる)を通過し、腸内に放出される。腸内では、該
ウイルスは腸壁で増殖するが、ここでは、アデウイルス
性疾患を引き起こすことはできず、それにもかかわら
ず、アデノウイルス抗体の形成を誘発し、その結果とし
てアデノウイルス性疾患に対する免疫を与える。本発明
では、生の感染性アデノウイルスは、他の疾患誘発性微
生物によって生産された抗原をコードする遺伝子を含有
するように操作された。放出によって、該ウイルスは増
殖し、アデノウイルス性抗原および病原抗原を共に別々
に発現し、これによって、アデノウイルスおよび他の疾
患誘発性微生物の両方に対する抗体の形成を誘発するか
または細胞性免疫を誘発する。「死」ウイルスと対比し
て、「生のウイルス」なる語は、同一子孫を生産するこ
とができるウイルスそれ自体、またはさらなる遺伝物質
と一緒になっているウイルスを意味する。「感染性の」
なる語は、ウイルスゲノムを細胞中に送達する能力を有
することを意味する。
【０００４】欧州特許出願公開第８０,８０６号(１９８
３)においてロイ(Ｒoy)は、免疫を与える第２の微生物
の抗原を発現する異種遺伝子を含有する微生物の投与に
よる微生物性疾患に対する免疫の生産方法を提案した。
彼は、好ましい経口調製物は腸溶性であると述べてい
る。ダベルコ(Ｄubelcco)は、アデノウイルスの表面蛋
白がその構造中に動物への投与に対する所望の生物学的
応答を生じる異種蛋白の断片を含有するように修飾され
ている組換えアデノウイルスワクチンを提案した。[Ｐ
ＣＴ国際公開ＷＯ ８３／０２３９３(１９８３)]。デイ
ビス(Ｄavis)は、組換えアデノウイルスから誘導された
経口ワクチンを開示している[英国特許ＧＢ２１６６３
４９ Ｂ]。
３)においてロイ(Ｒoy)は、免疫を与える第２の微生物
の抗原を発現する異種遺伝子を含有する微生物の投与に
よる微生物性疾患に対する免疫の生産方法を提案した。
彼は、好ましい経口調製物は腸溶性であると述べてい
る。ダベルコ(Ｄubelcco)は、アデノウイルスの表面蛋
白がその構造中に動物への投与に対する所望の生物学的
応答を生じる異種蛋白の断片を含有するように修飾され
ている組換えアデノウイルスワクチンを提案した。[Ｐ
ＣＴ国際公開ＷＯ ８３／０２３９３(１９８３)]。デイ
ビス(Ｄavis)は、組換えアデノウイルスから誘導された
経口ワクチンを開示している[英国特許ＧＢ２１６６３
４９ Ｂ]。
【０００５】１型ヒト免疫不全ウイルス(ＨＩＶ−１)
は、後天性免疫不全症候群(ＡＩＤＳ)および関連疾患と
病因学的に関連していた。[バレー−シノウジィ,エフ
(Ｂarre−Ｓinoussi,Ｆ.)、サイエンス(Ｓcience)２２
０：８６８(１９８３)；ガロ,アール(Ｇallo,Ｒ.)、サ
イエンス(Ｓcience)２２４：５００（１９８４)；ポポ
ビック,エム（Ｐopovic,Ｍ.)、サイエンス(Ｓcience)２
２４：４９７(１９８４)；サーンガドハラン,エム(Ｓar
ngadharan,Ｍ.)、サイエンス(Ｓcience)２２４：５０６
(１９８４)]。ＡＩＤＳは、現在、世界的に流行してお
り、これに対するワクチンや治療法はない。ワクチン開
発についての試みのほとんどは、防御免疫を与え得る抗
原としてのエンベロープ(ｅｎｖ)糖蛋白に集中してい
た。精製したｇｐ１２０に対して調製された抗血清は、
in virtoでＨＩＶ−１を中和することができる[クロウ
ル,アール(Ｃrowl,Ｒ.)、セル(Ｃell)４１：９７９(１
９８５)；プットニィ,エス(Ｐutney,Ｓ.)、サイエンス
(Ｓcience)２３４：１３９２(１９８６)；ホ,ディ(Ｈo,
Ｄ.)、ジャーナル・オブ・バイロロジー(Ｊ.Ｖirol.)６
１：２０２４(１９８７)；ナラ,ピー(Ｎara,Ｐ.)、プロ
シーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ
・サイエンシズ・ユー・エス・エイ(Ｐroc.Ｎatl.Ａca
d.Ｓci.ＵＳＡ)８４：３７９７(１９８７)]。ＨＩＶ−
１エンベロープ抗原は、エシェリキア・コリ(Ｅscheric
hia coli)[クロウル,アール(Ｃrowl,Ｒ.)、セル(Ｃell)
４１：９７９(１９８５)；チャン,ティ(Ｃhang,Ｔ.)、
バイオ／テクノロジー(Ｂio／Ｔechnology)、３：９０
５(１９８５)；ドーソン,ジー(Ｄawson,Ｇ.)、ジャーナ
ル・オブ・インフェクシャス・ディジージス(Ｊ.Ｉnfec
t.Ｄis.)、１５７：１４９(１９８８)]および哺乳類[チ
ャクラバルチ,エス(Ｃhakrabarti,Ｓ.)、ネイチャー(Ｎ
ature)、３２０：５３５(１９８６)；デウォー,アール
(Ｄewar,Ｒ.)、ジャーナル・オブ・バイロロジー(Ｊ.Ｖ
irol.)、６３：１２９(１９８９)；リコッシュ,ディ(Ｒ
ekosh,Ｄ.)、プロシーディングス・オブ・ナショナル・
アカデミー・オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エイ
(Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ)８５：３３４(１９８
８)；ウィーリー,エム(Ｗhealy,Ｍ.)、ジャーナル・オ
ブ・バイロロジー(Ｊ.Ｖirol.)６２：４１８５(１９８
８)]、酵母[バー,ピー(Ｂarr,Ｐ.)、バクシーン(Ｖacin
ne)、５：９０(１９８７)］および昆虫細胞[フ,エス(Ｈ
u,Ｓ.)、ネイチャー(Ｎature)３２８：７２１(１９７
８)；ラッシェ,ジェイ(Ｒusche,Ｊ.)、プロシーディン
グス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエン
シズ・ユー・エス・エイ(Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳ
Ａ)８４：６２９４(１９８７)]を含む種々の発現系にお
いて生産された。
は、後天性免疫不全症候群(ＡＩＤＳ)および関連疾患と
病因学的に関連していた。[バレー−シノウジィ,エフ
(Ｂarre−Ｓinoussi,Ｆ.)、サイエンス(Ｓcience)２２
０：８６８(１９８３)；ガロ,アール(Ｇallo,Ｒ.)、サ
イエンス(Ｓcience)２２４：５００（１９８４)；ポポ
ビック,エム（Ｐopovic,Ｍ.)、サイエンス(Ｓcience)２
２４：４９７(１９８４)；サーンガドハラン,エム(Ｓar
ngadharan,Ｍ.)、サイエンス(Ｓcience)２２４：５０６
(１９８４)]。ＡＩＤＳは、現在、世界的に流行してお
り、これに対するワクチンや治療法はない。ワクチン開
発についての試みのほとんどは、防御免疫を与え得る抗
原としてのエンベロープ(ｅｎｖ)糖蛋白に集中してい
た。精製したｇｐ１２０に対して調製された抗血清は、
in virtoでＨＩＶ−１を中和することができる[クロウ
ル,アール(Ｃrowl,Ｒ.)、セル(Ｃell)４１：９７９(１
９８５)；プットニィ,エス(Ｐutney,Ｓ.)、サイエンス
(Ｓcience)２３４：１３９２(１９８６)；ホ,ディ(Ｈo,
Ｄ.)、ジャーナル・オブ・バイロロジー(Ｊ.Ｖirol.)６
１：２０２４(１９８７)；ナラ,ピー(Ｎara,Ｐ.)、プロ
シーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ
・サイエンシズ・ユー・エス・エイ(Ｐroc.Ｎatl.Ａca
d.Ｓci.ＵＳＡ)８４：３７９７(１９８７)]。ＨＩＶ−
１エンベロープ抗原は、エシェリキア・コリ(Ｅscheric
hia coli)[クロウル,アール(Ｃrowl,Ｒ.)、セル(Ｃell)
４１：９７９(１９８５)；チャン,ティ(Ｃhang,Ｔ.)、
バイオ／テクノロジー(Ｂio／Ｔechnology)、３：９０
５(１９８５)；ドーソン,ジー(Ｄawson,Ｇ.)、ジャーナ
ル・オブ・インフェクシャス・ディジージス(Ｊ.Ｉnfec
t.Ｄis.)、１５７：１４９(１９８８)]および哺乳類[チ
ャクラバルチ,エス(Ｃhakrabarti,Ｓ.)、ネイチャー(Ｎ
ature)、３２０：５３５(１９８６)；デウォー,アール
(Ｄewar,Ｒ.)、ジャーナル・オブ・バイロロジー(Ｊ.Ｖ
irol.)、６３：１２９(１９８９)；リコッシュ,ディ(Ｒ
ekosh,Ｄ.)、プロシーディングス・オブ・ナショナル・
アカデミー・オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エイ
(Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ)８５：３３４(１９８
８)；ウィーリー,エム(Ｗhealy,Ｍ.)、ジャーナル・オ
ブ・バイロロジー(Ｊ.Ｖirol.)６２：４１８５(１９８
８)]、酵母[バー,ピー(Ｂarr,Ｐ.)、バクシーン(Ｖacin
ne)、５：９０(１９８７)］および昆虫細胞[フ,エス(Ｈ
u,Ｓ.)、ネイチャー(Ｎature)３２８：７２１(１９７
８)；ラッシェ,ジェイ(Ｒusche,Ｊ.)、プロシーディン
グス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエン
シズ・ユー・エス・エイ(Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳ
Ａ)８４：６２９４(１９８７)]を含む種々の発現系にお
いて生産された。
【０００６】無傷のＨＩＶ−１ｅｎｖ糖蛋白[フ,エス
(Ｈu,Ｓ.)、ジャーナル・オブ・バイロロジー(Ｊ.Ｖiro
l.)６１：３６１７(１９８７)]または精製した組換えｇ
ｐ１２０ｅｎｖ糖蛋白[バーマン,ピー(Ｂerman,Ｐ.)、
プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・
オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エイ(Ｐroc.Ｎatl.
Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ)、８５：５２００(１９８８)]を発
現する生の組換えワクシニアウイルスを、ワクチン候補
としてチンパンジーにおいて評価した。これらのワクチ
ンによる活性免疫化は良好な細胞性免疫応答およびｅｎ
ｖ抗原に対する細胞毒性Ｔ−細胞活性を誘発した[ザー
リング,ジェイ(Ｚarling,Ｊ.)、ジャーナル・オブ・イ
ムノロジー(Ｊ.Ｉmmunol.)１３９：９８８(１９８
７)]。すべての実験動物は、ＥＬＩＳＡ法およびウェス
タンブロッティング法によってアッセイされるように血
清変換(seroconvert)された。しかしながら、免疫化チ
ンパンジーは、ＨＩＶ−１に対する中和抗体の力価を全
く発現しないかまたは非常に低い力価を発現した。生ウ
イルスによる攻撃誘発は、これらのワクチンに対してチ
ンパンジーを保護しなかった。型特異性ＨＩＶ−１中和
抗体は、ｇｐ１２０のＣ−末端半分内で可変性ドメイン
(Ｖ３)に対して感染の初期のチンパンジーにおいて見い
だされた[ゴウズミット,ジェイ(Ｇoudsmit,Ｊ.)、プロ
シーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ
・サイエンシズ・ユー・エス・エイ(Ｐroc.Ｎatl.Ａca
d.Ｓci.ＵＳＡ)８５：４４７８(１９８８)]。昆虫細胞
中で作製された組換えｇｐ１２０は、ヤギにおける体液
性免疫応答を誘発することも示された[ルッシェ,ジェイ
(Ｒusche,Ｊ.)、プロシーディングス・オブ・ナショナ
ル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エ
イ(Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ)８４：６２９４(１
９８７)]。ザガリー(Ｚagury)[ネイチャー(Ｎature)３
３２：７２８(１９８８)]は、ｇｐ１６０を発現するワ
クチンウイルス組換え体を使用してヒトにおける既往の
体液性および細胞性免疫応答の両方を示した。[チャク
ラバルチ,エス(Ｃhakrabarti,Ｓ.)、ネイチャー(Ｎatur
e)３２０：５３５(１９８６)；ハーン,ビー(Ｈahn,
Ｂ.)、プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エイ(Ｐroc.
Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ)８２：４８１３(１９８
５)]。感染Ｔ４細胞に対する基特異性細胞性免疫および
細胞性細胞毒性が共に見られた。これらの結果は、ヒト
において、組換えｅｎｖベースのワクチンを使用してＨ
ＩＶ−１に対する免疫状態が得られることを示す。最
近、デスロジャーズ(Ｄesrosiers)は、不活化全サル免
疫不全ウイルス(ＳＩＶ)によるワクチン接種が生ＳＩＶ
による攻撃誘発に対してマカクを保護できることを示し
た。[プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エイ(Ｐroc.
Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ)８６：６３５３(１９８
９)]。これらのデータは、ヒトＡＩＤＳウイルス、ＨＩ
Ｖ−１感染に対するワクチン保護が可能であるという希
望を与える。
(Ｈu,Ｓ.)、ジャーナル・オブ・バイロロジー(Ｊ.Ｖiro
l.)６１：３６１７(１９８７)]または精製した組換えｇ
ｐ１２０ｅｎｖ糖蛋白[バーマン,ピー(Ｂerman,Ｐ.)、
プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・
オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エイ(Ｐroc.Ｎatl.
Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ)、８５：５２００(１９８８)]を発
現する生の組換えワクシニアウイルスを、ワクチン候補
としてチンパンジーにおいて評価した。これらのワクチ
ンによる活性免疫化は良好な細胞性免疫応答およびｅｎ
ｖ抗原に対する細胞毒性Ｔ−細胞活性を誘発した[ザー
リング,ジェイ(Ｚarling,Ｊ.)、ジャーナル・オブ・イ
ムノロジー(Ｊ.Ｉmmunol.)１３９：９８８(１９８
７)]。すべての実験動物は、ＥＬＩＳＡ法およびウェス
タンブロッティング法によってアッセイされるように血
清変換(seroconvert)された。しかしながら、免疫化チ
ンパンジーは、ＨＩＶ−１に対する中和抗体の力価を全
く発現しないかまたは非常に低い力価を発現した。生ウ
イルスによる攻撃誘発は、これらのワクチンに対してチ
ンパンジーを保護しなかった。型特異性ＨＩＶ−１中和
抗体は、ｇｐ１２０のＣ−末端半分内で可変性ドメイン
(Ｖ３)に対して感染の初期のチンパンジーにおいて見い
だされた[ゴウズミット,ジェイ(Ｇoudsmit,Ｊ.)、プロ
シーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ
・サイエンシズ・ユー・エス・エイ(Ｐroc.Ｎatl.Ａca
d.Ｓci.ＵＳＡ)８５：４４７８(１９８８)]。昆虫細胞
中で作製された組換えｇｐ１２０は、ヤギにおける体液
性免疫応答を誘発することも示された[ルッシェ,ジェイ
(Ｒusche,Ｊ.)、プロシーディングス・オブ・ナショナ
ル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エ
イ(Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ)８４：６２９４(１
９８７)]。ザガリー(Ｚagury)[ネイチャー(Ｎature)３
３２：７２８(１９８８)]は、ｇｐ１６０を発現するワ
クチンウイルス組換え体を使用してヒトにおける既往の
体液性および細胞性免疫応答の両方を示した。[チャク
ラバルチ,エス(Ｃhakrabarti,Ｓ.)、ネイチャー(Ｎatur
e)３２０：５３５(１９８６)；ハーン,ビー(Ｈahn,
Ｂ.)、プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エイ(Ｐroc.
Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ)８２：４８１３(１９８
５)]。感染Ｔ４細胞に対する基特異性細胞性免疫および
細胞性細胞毒性が共に見られた。これらの結果は、ヒト
において、組換えｅｎｖベースのワクチンを使用してＨ
ＩＶ−１に対する免疫状態が得られることを示す。最
近、デスロジャーズ(Ｄesrosiers)は、不活化全サル免
疫不全ウイルス(ＳＩＶ)によるワクチン接種が生ＳＩＶ
による攻撃誘発に対してマカクを保護できることを示し
た。[プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エイ(Ｐroc.
Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ)８６：６３５３(１９８
９)]。これらのデータは、ヒトＡＩＤＳウイルス、ＨＩ
Ｖ−１感染に対するワクチン保護が可能であるという希
望を与える。
【０００７】チャンダ(Ｃhanda)は、ヘルパー独立性７
型アデノウイルス組換え体を使用するｒｅｖ遺伝子の存
在下におけるＨＩＶ−１のエンベロープ糖蛋白の高レベ
ルの発現を開示している。[バイロロジー(Ｖirology)１
７５：５３５(１９９０)]。バーノン(Ｖernon)は、組換
えアデノウイルスベクター系中に組み込まれたＨＩＶ−
ｇａｇ含有粒子の超微構造的特性付けを開示している
[ジャーナル・オブ・ジェネラル・バイロロジー(Ｊ.Ｇe
n.Ｖirology)７２：１２４３(１９９１)]。バーノン(Ｖ
ernon)は、また、ＨＩＶ−１組換えアデノウイルスＡｄ
７−ｒｅｖ−ｇａｇおよびＡｄ４−ｒｅｖ−ｇａｇの調
製を開示している。
型アデノウイルス組換え体を使用するｒｅｖ遺伝子の存
在下におけるＨＩＶ−１のエンベロープ糖蛋白の高レベ
ルの発現を開示している。[バイロロジー(Ｖirology)１
７５：５３５(１９９０)]。バーノン(Ｖernon)は、組換
えアデノウイルスベクター系中に組み込まれたＨＩＶ−
ｇａｇ含有粒子の超微構造的特性付けを開示している
[ジャーナル・オブ・ジェネラル・バイロロジー(Ｊ.Ｇe
n.Ｖirology)７２：１２４３(１９９１)]。バーノン(Ｖ
ernon)は、また、ＨＩＶ−１組換えアデノウイルスＡｄ
７−ｒｅｖ−ｇａｇおよびＡｄ４−ｒｅｖ−ｇａｇの調
製を開示している。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明は、ビリオン構造
蛋白が組換えアデノウイルスを生産する天然アデノウイ
ルスにおけるビリオン構造蛋白から変化せず、かつ、抗
体に対応するかまたは細胞性免疫を誘発する抗原をコー
ドする遺伝子を含有する生の組換えアデノウイルスを温
血哺乳類に鼻腔内投与、筋肉内投与または皮下投与する
ことからなる、温血哺乳類における感染性微生物に対す
る抗体または細胞性免疫の生産方法を提供するものであ
る。
蛋白が組換えアデノウイルスを生産する天然アデノウイ
ルスにおけるビリオン構造蛋白から変化せず、かつ、抗
体に対応するかまたは細胞性免疫を誘発する抗原をコー
ドする遺伝子を含有する生の組換えアデノウイルスを温
血哺乳類に鼻腔内投与、筋肉内投与または皮下投与する
ことからなる、温血哺乳類における感染性微生物に対す
る抗体または細胞性免疫の生産方法を提供するものであ
る。
【０００９】好ましい具体例では、本発明は、ビリオン
構造蛋白が組換えアデノウイルスを生産する天然アデノ
ウイルスにおけるビリオン構造蛋白から変化せず、か
つ、各々、ヒト免疫不全ウイルス、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝
炎、ヒト乳頭腫ウイルス、ＲＳウイルス(respiratory s
yncytial virus)、ロタウイルスまたはパラインフルエ
ンザウイルスをコードする遺伝子を含有する生の組換え
アデノウイルスを温血哺乳類に鼻腔内投与、筋肉内投与
または皮下投与することからなる、温血哺乳類における
ヒト免疫不全ウイルス(ＨＩＶ−１)、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝
炎、ヒト乳頭腫ウイルス、ＲＳウイルス、ロタウイルス
またはパラインフルエンザウイルスに対する抗体の生産
方法を提供するものである。
構造蛋白が組換えアデノウイルスを生産する天然アデノ
ウイルスにおけるビリオン構造蛋白から変化せず、か
つ、各々、ヒト免疫不全ウイルス、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝
炎、ヒト乳頭腫ウイルス、ＲＳウイルス(respiratory s
yncytial virus)、ロタウイルスまたはパラインフルエ
ンザウイルスをコードする遺伝子を含有する生の組換え
アデノウイルスを温血哺乳類に鼻腔内投与、筋肉内投与
または皮下投与することからなる、温血哺乳類における
ヒト免疫不全ウイルス(ＨＩＶ−１)、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝
炎、ヒト乳頭腫ウイルス、ＲＳウイルス、ロタウイルス
またはパラインフルエンザウイルスに対する抗体の生産
方法を提供するものである。
【００１０】本発明は、ビリオン構造蛋白が組換えアデ
ノウイルスを生産する天然アデノウイルスにおけるビリ
オン構造蛋白から変化せず、かつ抗体に対応するかまた
は細胞性免疫を誘発する抗原をコードする遺伝子を含有
する生の組換えアデノウイルスからなり、鼻腔内投与形
態、筋肉内投与形態または皮下投与形態に製剤化され
た、温血哺乳類における感染性微生物に対する抗体また
は細胞性免疫の生産用組成物を提供するものでもある。
ノウイルスを生産する天然アデノウイルスにおけるビリ
オン構造蛋白から変化せず、かつ抗体に対応するかまた
は細胞性免疫を誘発する抗原をコードする遺伝子を含有
する生の組換えアデノウイルスからなり、鼻腔内投与形
態、筋肉内投与形態または皮下投与形態に製剤化され
た、温血哺乳類における感染性微生物に対する抗体また
は細胞性免疫の生産用組成物を提供するものでもある。
【００１１】本明細書は特に４型、５型または７型のア
デノウイルスに関するものであるが、本発明ではいずれ
の型の生の感染性アデノウイルスも使用することができ
る。さらに、本発明は詳細には初期領域３(Ｅ３)欠失を
有するアデノウイルスに関するが、弱毒化されており、
温度感受性損傷またはＥ１欠失を有するアデノウイルス
をベクターとして使用してもよい。同様に、ＨＩＶ、Ｂ
型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒト乳頭腫ウイルス、ＲＳウイル
ス、ロタウイルスまたはパラインフルエンザウイルスに
対する抗体を生産するワクチンについて特に言及されて
きたが、本発明は、温血動物が抗体または細胞性免疫を
生産し、かつ、約３０００までの塩基対からなる遺伝子
によってコードされる抗原を含有するいずれの病原菌に
も対する経口ワクチンを提供するものである。かくし
て、例えば、インフルエンザ、Ａ型肝炎、コレラ、イー
・コリ(Ｅ.coli)、百日咳、ジフテリア、破傷風、細菌
性赤痢、淋病、マイコプラズマ肺炎などの疾患に対する
免疫化も本発明の範囲内に含まれる。
デノウイルスに関するものであるが、本発明ではいずれ
の型の生の感染性アデノウイルスも使用することができ
る。さらに、本発明は詳細には初期領域３(Ｅ３)欠失を
有するアデノウイルスに関するが、弱毒化されており、
温度感受性損傷またはＥ１欠失を有するアデノウイルス
をベクターとして使用してもよい。同様に、ＨＩＶ、Ｂ
型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒト乳頭腫ウイルス、ＲＳウイル
ス、ロタウイルスまたはパラインフルエンザウイルスに
対する抗体を生産するワクチンについて特に言及されて
きたが、本発明は、温血動物が抗体または細胞性免疫を
生産し、かつ、約３０００までの塩基対からなる遺伝子
によってコードされる抗原を含有するいずれの病原菌に
も対する経口ワクチンを提供するものである。かくし
て、例えば、インフルエンザ、Ａ型肝炎、コレラ、イー
・コリ(Ｅ.coli)、百日咳、ジフテリア、破傷風、細菌
性赤痢、淋病、マイコプラズマ肺炎などの疾患に対する
免疫化も本発明の範囲内に含まれる。
【００１２】好ましい具体例では、当該治療方法は、Ｈ
ＩＶ−１罹病性哺乳類に予防学的に、および該哺乳類に
おいてＨＩＶの検出後の免疫療法として、組換えアデノ
ウイルスを投与することを含む。以下の組換えアデノウ
イルスを含む療法を使用して抗ＨＩＶ応答を生産する。
ＩＶ−１罹病性哺乳類に予防学的に、および該哺乳類に
おいてＨＩＶの検出後の免疫療法として、組換えアデノ
ウイルスを投与することを含む。以下の組換えアデノウ
イルスを含む療法を使用して抗ＨＩＶ応答を生産する。
【００１３】
【表１】
【００１４】前記「表１」に関して、Ａｄ４、Ａｄ５お
よびＡｄ７は、各々、Ｅ３領域が欠失した４型、５型、
および７型ヒトアデノウイルスを表す。ｅｎｖは、ＨＩ
Ｖエンベロープ糖蛋白(ｇｐ１６０)遺伝子を表す。ｇａ
ｇは、ＨＩＶｇａｇ／ｐｒｏ遺伝子を表す。ｒｅｖは、
ＨＩＶ調節遺伝子を表す。Ｈｒｅｖは、しばしばヒト遺
伝子中で使用されたコドンを使用してアミノ酸配列を変
化させずにヌクレオチド配列を変化させたｒｅｖ遺伝子
の変形バージョンを表す。ｔｐｌは、組換え遺伝子の前
にある第１および第２リーダー間に介在配列を有する上
流のアデノウイルス３分節系リーダー配列を表す。
よびＡｄ７は、各々、Ｅ３領域が欠失した４型、５型、
および７型ヒトアデノウイルスを表す。ｅｎｖは、ＨＩ
Ｖエンベロープ糖蛋白(ｇｐ１６０)遺伝子を表す。ｇａ
ｇは、ＨＩＶｇａｇ／ｐｒｏ遺伝子を表す。ｒｅｖは、
ＨＩＶ調節遺伝子を表す。Ｈｒｅｖは、しばしばヒト遺
伝子中で使用されたコドンを使用してアミノ酸配列を変
化させずにヌクレオチド配列を変化させたｒｅｖ遺伝子
の変形バージョンを表す。ｔｐｌは、組換え遺伝子の前
にある第１および第２リーダー間に介在配列を有する上
流のアデノウイルス３分節系リーダー配列を表す。
【００１５】以下に詳述するとおり、ナイーブチンパン
ジーへのＡｄ−ＨＩＶ組換えウイルスの鼻腔内投与によ
って、ＨＩＶ組換え抗原に向けられた体液性免疫応答お
よび細胞性免疫応答を初回免疫および追加免疫した。チ
ンパンジーに投与した組換えアデノウイルスは、ＨＩＶ
のｅｎｖおよびｇａｇ蛋白に対する抗体を生産すること
を示した。ＨＩＶに対して特異的なＩｇＧ抗体は、組換
えアデノウイルスの投与後の鼻分泌物、唾液分泌物およ
び膣分泌物中で観察され、ＨＩＶに対して特異的なＩｇ
Ａ抗体は、鼻分泌物および唾液分泌物中で観察された。
第１組目の組換えウイルス(Ａｄ７)は、最も長い時間放
出され、最良の抗Ａｄ抗体応答を誘発すると思われる。
この結果は、鼻腔内経路によるＡｄ−ＨＩＶワクチンの
投与が経口経路による腸溶性組換えウイルスの投与より
も優れていることも示した。
ジーへのＡｄ−ＨＩＶ組換えウイルスの鼻腔内投与によ
って、ＨＩＶ組換え抗原に向けられた体液性免疫応答お
よび細胞性免疫応答を初回免疫および追加免疫した。チ
ンパンジーに投与した組換えアデノウイルスは、ＨＩＶ
のｅｎｖおよびｇａｇ蛋白に対する抗体を生産すること
を示した。ＨＩＶに対して特異的なＩｇＧ抗体は、組換
えアデノウイルスの投与後の鼻分泌物、唾液分泌物およ
び膣分泌物中で観察され、ＨＩＶに対して特異的なＩｇ
Ａ抗体は、鼻分泌物および唾液分泌物中で観察された。
第１組目の組換えウイルス(Ａｄ７)は、最も長い時間放
出され、最良の抗Ａｄ抗体応答を誘発すると思われる。
この結果は、鼻腔内経路によるＡｄ−ＨＩＶワクチンの
投与が経口経路による腸溶性組換えウイルスの投与より
も優れていることも示した。
【００１６】ＨＩＶ抗原に向けられた最適な免疫応答
は、強い抗ＨＩＶ結合抗体を惹起するために異型組換え
Ａｄ−ＨＩＶによる一次感染一ブースター免疫化を必要
とした。該Ａｄ−ＨＩＶウイルスの鼻腔内投与はチンパ
ンジーを有効に初回免疫して、次なるＨＩＶ−１サブユ
ニット蛋白ブースター免疫化の後でＨＩＶ−１に対する
高力価の中和抗体と応答した。
は、強い抗ＨＩＶ結合抗体を惹起するために異型組換え
Ａｄ−ＨＩＶによる一次感染一ブースター免疫化を必要
とした。該Ａｄ−ＨＩＶウイルスの鼻腔内投与はチンパ
ンジーを有効に初回免疫して、次なるＨＩＶ−１サブユ
ニット蛋白ブースター免疫化の後でＨＩＶ−１に対する
高力価の中和抗体と応答した。
【００１７】
代表的な組換えアデノウイルスの調製 以下の実施例は、本発明の代表的な組換えアデノウイル
スの構築を示す。当該組換えウイルスは、Ａ５４９細胞
上で増殖させ、次いで、Ａ５４９細胞上で力価測定し
た。
スの構築を示す。当該組換えウイルスは、Ａ５４９細胞
上で増殖させ、次いで、Ａ５４９細胞上で力価測定し
た。
【００１８】実施例１ Ａｄ７−ｇａｇ−１ ＨＩＶエンベロープ蛋白に関する遺伝子を含有する組換
えアデノウイルスの構築は開示されており[チャンダ,ピ
ー(Ｃhanda,Ｐ.)、バイロロジー(Ｖirology)１７５：５
３５(１９９０)]；同様の方法を使用してｇａｇおよび
ｐｒｏを取り込んだ[バーノン,エス(Ｖernon,Ｓ.)、ジ
ャーナル・オブ・ゼネラル・バイロロジー(Ｊ.Ｇen.Ｖi
rology)７２：１２４３(１９９１)]。すなわち、ウイル
スのｒｅｖ応答素子(ｒｒｅ；ｂｐ７１７８〜７６９８)
の挿入のために、ＨＩＶ−１菌株ＬＡＶ[ワイン−ホブ
ソン,エス(Ｗain−Ｈobson,Ｓ.)、セル(Ｃell)４０：９
(１９８５)]の全ｇａｇおよびｐｒｏコード化領域(ｂｐ
３３５〜２１６５)を含むＤＮＡ断片をｇａｇ遺伝子の
ＡＵＧコドンの前の固有のＳａ／Ｉ部位およびｂｐ２１
６５のＸｂａＩ部位とともに構築した。チャンダ(Ｃhan
da）[バイロロジー(Ｖirology)、１７５：５３５(１９
９０)]に開示されている７型アデノウイルス(Ａｄ７)、
主要後期プロモーター(ＭＬＰ)、第１および第２リーダ
ー間に介在配列を有する３分節系リーダー(ＴＰＬ)なら
びにヘキソンポリアデノシンリン酸化部位(ｐｏｌｙ
Ａ)を含む発現カセットのＳaＩ部位に３つのＨＩＶ−１
配列を含む２.３７ｋｂのＳaＩ断片を挿入した。このカ
セットを、欠失した[７９.５〜８８.４マップ単位(ｍ.
ｕ.)]Ｅ３領域においてＨＩＶ−１ｒｅｖ遺伝子[ファイ
ンバーグ,エム(Ｆeinberg,Ｍ.)、セル(Ｃell)４６：８
０７(１９８６)；ソドロスキー,ジェイ(Ｓodroski,
Ｊ.)、ネイチャー(Ｎature)３２１：４１２(１９８６)]
を含有するＡｄ７ゲノム[スーセンバッハ(Ｓussenbac
h)、ジ・アデノバイラシズ(Ｔhe Ａdenoviruses)、ギン
スバーク(Ｇinsberg)編、プレナム・プレス(ＰlenumＰr
ess)、第３４〜１２４頁(１９８４)]の右端から１５９
ｂｐに挿入した。
えアデノウイルスの構築は開示されており[チャンダ,ピ
ー(Ｃhanda,Ｐ.)、バイロロジー(Ｖirology)１７５：５
３５(１９９０)]；同様の方法を使用してｇａｇおよび
ｐｒｏを取り込んだ[バーノン,エス(Ｖernon,Ｓ.)、ジ
ャーナル・オブ・ゼネラル・バイロロジー(Ｊ.Ｇen.Ｖi
rology)７２：１２４３(１９９１)]。すなわち、ウイル
スのｒｅｖ応答素子(ｒｒｅ；ｂｐ７１７８〜７６９８)
の挿入のために、ＨＩＶ−１菌株ＬＡＶ[ワイン−ホブ
ソン,エス(Ｗain−Ｈobson,Ｓ.)、セル(Ｃell)４０：９
(１９８５)]の全ｇａｇおよびｐｒｏコード化領域(ｂｐ
３３５〜２１６５)を含むＤＮＡ断片をｇａｇ遺伝子の
ＡＵＧコドンの前の固有のＳａ／Ｉ部位およびｂｐ２１
６５のＸｂａＩ部位とともに構築した。チャンダ(Ｃhan
da）[バイロロジー(Ｖirology)、１７５：５３５(１９
９０)]に開示されている７型アデノウイルス(Ａｄ７)、
主要後期プロモーター(ＭＬＰ)、第１および第２リーダ
ー間に介在配列を有する３分節系リーダー(ＴＰＬ)なら
びにヘキソンポリアデノシンリン酸化部位(ｐｏｌｙ
Ａ)を含む発現カセットのＳaＩ部位に３つのＨＩＶ−１
配列を含む２.３７ｋｂのＳaＩ断片を挿入した。このカ
セットを、欠失した[７９.５〜８８.４マップ単位(ｍ.
ｕ.)]Ｅ３領域においてＨＩＶ−１ｒｅｖ遺伝子[ファイ
ンバーグ,エム(Ｆeinberg,Ｍ.)、セル(Ｃell)４６：８
０７(１９８６)；ソドロスキー,ジェイ(Ｓodroski,
Ｊ.)、ネイチャー(Ｎature)３２１：４１２(１９８６)]
を含有するＡｄ７ゲノム[スーセンバッハ(Ｓussenbac
h)、ジ・アデノバイラシズ(Ｔhe Ａdenoviruses)、ギン
スバーク(Ｇinsberg)編、プレナム・プレス(ＰlenumＰr
ess)、第３４〜１２４頁(１９８４)]の右端から１５９
ｂｐに挿入した。
【００１９】実施例２ Ａｄ４−ｇａｇ−１ 実施例１におけるＡｄ７−ｇａｇ−１組換えアデノウイ
ルスの構築方法に従って、類似のＡｄ４配列を含む同様
の発現カセットおよび３つのＨＩＶコード化領域を、７
６〜８６ｍ.ｕ.間のＥ３欠失においてＨＩＶ−１ ｒｅ
ｖを含むＡｄ４ゲノムの右端から部位１３９ｂｐに挿入
した。
ルスの構築方法に従って、類似のＡｄ４配列を含む同様
の発現カセットおよび３つのＨＩＶコード化領域を、７
６〜８６ｍ.ｕ.間のＥ３欠失においてＨＩＶ−１ ｒｅ
ｖを含むＡｄ４ゲノムの右端から部位１３９ｂｐに挿入
した。
【００２０】実施例３ Ａｄ５−ｅｎｖ Ａｄ５−ｔｐｌｅｎｖ−ｔｐｌＨｒｅｖはＨＩＶ−１
(ＬＡＶ菌株)ｇｐ１６０の全暗号配列およびｒｅｖ遺伝
子の修飾バージョン、いわゆるＨｒｅｖを含む。このｅ
ｎｖおよびｒｅｖの両遺伝子の前にＡｄ５の３分節系リ
ーダー(Ａｄ５−ｔｐｌ)の合成複写を行った。Ａｄ５−
ｔｐｌを化学的に合成し、ｐＴＺベクター中でクローン
化した。次いで、Ａｄ５−ｔｐｌの後ろにｇｐ１６０
ＤＮＡ配列を挿入してＡｄ５−ｔｐｌｅｎｖ／ＰＴＺ１
８Ｒクローンを生じさせた。Ｈｒｅｖ(〜３６０ｂｐ)も
また化学的に合成した。ここで、コドン使用法の助けを
借りて、アミノ酸配列を変化させずにヌクレオチド配列
を変化させた。これは、いくつかの同一配列がｅｎｖお
よびｒｅｖ間に存在する場合の同種組換えを回避するた
めに行った。Ａｄ５−ｔｐｌｅｎｖ構築のような類似の
方法において、ｐＴＺ１８Ｒベクターにおいてｔｐｌの
後ろにＨｒｅｖ遺伝子を挿入してプラスミド、Ａｄ５−
ｔｐｌＨｒｅｖを生じさせた。Ａｄ５−ｔｐｌＨｒｅｖ
を含有する全配列を切除し、次いで、Ａｄ５−ｔｐｌｅ
ｎｖの後ろに挿入してプラスミド、Ａｄ５−ｔｐｌｅｎ
ｖ−ｔｐｌＨｒｅｖを生じさせた。次いで、７８.８ｍ
ｕでＡｄ５マリエッタ(Ｍarietta)菌株の欠失Ｅ３領域
(７８.８−８５.７ｍｕ欠失)においてこのプラスミドを
挿入した。このプラスミドをＢｇｌI酵素で直線化し、
次いで、野生型の純粋なＡｄ５ウイルスから誘導した０
−８７ｍｕ ＳｎａＢ１断片と混合した。Ａ５４９細胞
をＤＮＡ混合物でトランスフェクトした後、組換えウイ
ルスプラークを選び、プラークを３回精製し、ハート
(Ｈirt)の方法[ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイ
オロジー(Ｊ.Ｍol.Ｂio.)、２６：３６５(１９６７)]に
よって感染細胞から抽出したＤＮＡの制限エンドヌクレ
アーゼ部位分析によってそれらのゲノム構造を確認し
た。
(ＬＡＶ菌株)ｇｐ１６０の全暗号配列およびｒｅｖ遺伝
子の修飾バージョン、いわゆるＨｒｅｖを含む。このｅ
ｎｖおよびｒｅｖの両遺伝子の前にＡｄ５の３分節系リ
ーダー(Ａｄ５−ｔｐｌ)の合成複写を行った。Ａｄ５−
ｔｐｌを化学的に合成し、ｐＴＺベクター中でクローン
化した。次いで、Ａｄ５−ｔｐｌの後ろにｇｐ１６０
ＤＮＡ配列を挿入してＡｄ５−ｔｐｌｅｎｖ／ＰＴＺ１
８Ｒクローンを生じさせた。Ｈｒｅｖ(〜３６０ｂｐ)も
また化学的に合成した。ここで、コドン使用法の助けを
借りて、アミノ酸配列を変化させずにヌクレオチド配列
を変化させた。これは、いくつかの同一配列がｅｎｖお
よびｒｅｖ間に存在する場合の同種組換えを回避するた
めに行った。Ａｄ５−ｔｐｌｅｎｖ構築のような類似の
方法において、ｐＴＺ１８Ｒベクターにおいてｔｐｌの
後ろにＨｒｅｖ遺伝子を挿入してプラスミド、Ａｄ５−
ｔｐｌＨｒｅｖを生じさせた。Ａｄ５−ｔｐｌＨｒｅｖ
を含有する全配列を切除し、次いで、Ａｄ５−ｔｐｌｅ
ｎｖの後ろに挿入してプラスミド、Ａｄ５−ｔｐｌｅｎ
ｖ−ｔｐｌＨｒｅｖを生じさせた。次いで、７８.８ｍ
ｕでＡｄ５マリエッタ(Ｍarietta)菌株の欠失Ｅ３領域
(７８.８−８５.７ｍｕ欠失)においてこのプラスミドを
挿入した。このプラスミドをＢｇｌI酵素で直線化し、
次いで、野生型の純粋なＡｄ５ウイルスから誘導した０
−８７ｍｕ ＳｎａＢ１断片と混合した。Ａ５４９細胞
をＤＮＡ混合物でトランスフェクトした後、組換えウイ
ルスプラークを選び、プラークを３回精製し、ハート
(Ｈirt)の方法[ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイ
オロジー(Ｊ.Ｍol.Ｂio.)、２６：３６５(１９６７)]に
よって感染細胞から抽出したＤＮＡの制限エンドヌクレ
アーゼ部位分析によってそれらのゲノム構造を確認し
た。
【００２１】実施例４ Ａｄ５−ｇａｇ Ａｄ５−ｔｐｌｇａｇ−ｔｐｌＨｒｅｖは全ｇａｇおよ
びｐｒｏ領域ならびに修飾ｒｅｖ遺伝子、Ｈｒｅｖを含
有する。ｇａｇおよびＨｒｅｖ遺伝子の前にＡｄ５合成
３文節系リーダーの一複写物を置いた。ｇａｇ遺伝子の
ＡＵＧコドンの前で固有のＳａｌI部位およびウイルス
ｒｅｖ応答素子(ｒｒｅ；ｂｐ７１７８−７６９８)の挿
入のためのｂｐ２１６５のｘｂａ部位と一緒に全ｇａｇ
およびｐｒｏ領域を含有するＤＮＡ断片(ＨＩＶ−１の
ＬＡＶ菌株のｂｐ３３５〜２１６５)を構築した。Ａｄ
５−ｔｐｌｅｎｖ−ｔｐｌＨｒｅｖについて記載したと
同様の方法で、２つの別々のプラスミド、Ａｄ５−ｔｐ
ｌｇａｇおよびＡｄ５−ｔｐｌＨｒｅｖを構築した。次
いで、Ａｄ５−ｔｐｌｇａｇの後ろにＡｄ５−ｔｐｌＨ
ｒｅｖ断片を挿入してプラスミドＡｄ５−ｔｐｌｇａｇ
−ｔｐｌＨｒｅｖを生じさせた。次いで、Ｅ３欠失(７
８.８−８５.７ｍｕ Ｅ３欠失)を有するＡｄ５マリエッ
タ菌株の遺伝子位置７８.８の固有のＸｂａI部位で断片
Ａｄ５−ｔｐｌｇａｇ−ｔｐｌＨｒｅｖを挿入した。次
いで、Ａｄ５配列を含有する最終プラスミドを直線化
し、次いで、トランスフェクションのために０−８７ｍ
ｕ ＳｎａＢ１ウイルス断片と混合する。組換えプラー
クを選択し、プラークを３回精製し、感染細胞から抽出
したＤＮＡのハート分析によって検査した。
びｐｒｏ領域ならびに修飾ｒｅｖ遺伝子、Ｈｒｅｖを含
有する。ｇａｇおよびＨｒｅｖ遺伝子の前にＡｄ５合成
３文節系リーダーの一複写物を置いた。ｇａｇ遺伝子の
ＡＵＧコドンの前で固有のＳａｌI部位およびウイルス
ｒｅｖ応答素子(ｒｒｅ；ｂｐ７１７８−７６９８)の挿
入のためのｂｐ２１６５のｘｂａ部位と一緒に全ｇａｇ
およびｐｒｏ領域を含有するＤＮＡ断片(ＨＩＶ−１の
ＬＡＶ菌株のｂｐ３３５〜２１６５)を構築した。Ａｄ
５−ｔｐｌｅｎｖ−ｔｐｌＨｒｅｖについて記載したと
同様の方法で、２つの別々のプラスミド、Ａｄ５−ｔｐ
ｌｇａｇおよびＡｄ５−ｔｐｌＨｒｅｖを構築した。次
いで、Ａｄ５−ｔｐｌｇａｇの後ろにＡｄ５−ｔｐｌＨ
ｒｅｖ断片を挿入してプラスミドＡｄ５−ｔｐｌｇａｇ
−ｔｐｌＨｒｅｖを生じさせた。次いで、Ｅ３欠失(７
８.８−８５.７ｍｕ Ｅ３欠失)を有するＡｄ５マリエッ
タ菌株の遺伝子位置７８.８の固有のＸｂａI部位で断片
Ａｄ５−ｔｐｌｇａｇ−ｔｐｌＨｒｅｖを挿入した。次
いで、Ａｄ５配列を含有する最終プラスミドを直線化
し、次いで、トランスフェクションのために０−８７ｍ
ｕ ＳｎａＢ１ウイルス断片と混合する。組換えプラー
クを選択し、プラークを３回精製し、感染細胞から抽出
したＤＮＡのハート分析によって検査した。
【００２２】実施例５ 腸溶性カプセル Ａ５４９細胞中で組換えアデノウイルスを増殖し、３回
冷凍−解凍した後に収穫した。清澄化された感染細胞溶
解物を凍結乾燥し、除湿条件下で１ミリリットルの注射
器プランジャを使用して＃２ゼラチンカプセル中に６０
〜１００mgを充填した。該カプセルをアセトン／１００
％エタノール(１：１)中１０％フタル酸酢酸セルロース
で、浸漬の間に風乾しつつ、６回手動で浸漬することに
よってコーティングした。これらの条件下でフタル酸酢
酸セルロース６９〜７７mgのコーティングを形成した。
ファンケル・ディスインテグレーション・テスター装置
(ＶanＫel Ｄisintegration Ｔestor apparatus)を使用
して３７℃で１時間、試料カプセルを、疑似胃液(０.３
２％ペプシン、０.２％ＮaＣl pＨ１.２)に対する耐性
について試験した。当該カプセルを穴または亀裂につい
て検査し、疑似腸液(１.０％パンクレアチン、０.０５
Ｍ第一リン酸カリウム pＨ７.５)１０ミリリットルを含
有する１５ミリリットルのチューブに移し、３７℃で旋
回させた。試験した全てのカプセルは、撹拌しつつ３７
℃で１時間、疑似胃液に対して耐性であり、疑似腸液中
では１５分以内に溶解し始めた。プラークアッセイおよ
びハート分析によって確認されたウイルスＤＮＡ安定性
によって、集密性Ａ５４９細胞単層上でウイルスの量を
滴定した。
冷凍−解凍した後に収穫した。清澄化された感染細胞溶
解物を凍結乾燥し、除湿条件下で１ミリリットルの注射
器プランジャを使用して＃２ゼラチンカプセル中に６０
〜１００mgを充填した。該カプセルをアセトン／１００
％エタノール(１：１)中１０％フタル酸酢酸セルロース
で、浸漬の間に風乾しつつ、６回手動で浸漬することに
よってコーティングした。これらの条件下でフタル酸酢
酸セルロース６９〜７７mgのコーティングを形成した。
ファンケル・ディスインテグレーション・テスター装置
(ＶanＫel Ｄisintegration Ｔestor apparatus)を使用
して３７℃で１時間、試料カプセルを、疑似胃液(０.３
２％ペプシン、０.２％ＮaＣl pＨ１.２)に対する耐性
について試験した。当該カプセルを穴または亀裂につい
て検査し、疑似腸液(１.０％パンクレアチン、０.０５
Ｍ第一リン酸カリウム pＨ７.５)１０ミリリットルを含
有する１５ミリリットルのチューブに移し、３７℃で旋
回させた。試験した全てのカプセルは、撹拌しつつ３７
℃で１時間、疑似胃液に対して耐性であり、疑似腸液中
では１５分以内に溶解し始めた。プラークアッセイおよ
びハート分析によって確認されたウイルスＤＮＡ安定性
によって、集密性Ａ５４９細胞単層上でウイルスの量を
滴定した。
【００２３】処置療法 ３つの処置法の下、チンパンジーにおいてＨＩＶに対す
る組換えアデノウイルスの免疫原性を評価した。第１の
処置法は、０、７および２６週目に腸溶性カプル(実施
例５)を介して経口的に組換えアデノウイルスを、次い
で、アジュバントとしてミョウバンを使用するｅｎｖ＋
ｇａｇサブユニット蛋白ブースターを投与することから
なっていた。第２の処置法は、処置法１を受けたチンパ
ンジーを、さらに、４６および５８週目に、鼻腔内投与
された組換えアデノウイルスのさらなるブースターで、
処置することからなる。第３の処置法は、０、２４およ
び５２週目にナイーブチンパンジーに鼻腔内で組換えア
デノウイルスを、次いで、７２週目にｅｎｖサブユニッ
トブースターを投与することからなる。
る組換えアデノウイルスの免疫原性を評価した。第１の
処置法は、０、７および２６週目に腸溶性カプル(実施
例５)を介して経口的に組換えアデノウイルスを、次い
で、アジュバントとしてミョウバンを使用するｅｎｖ＋
ｇａｇサブユニット蛋白ブースターを投与することから
なっていた。第２の処置法は、処置法１を受けたチンパ
ンジーを、さらに、４６および５８週目に、鼻腔内投与
された組換えアデノウイルスのさらなるブースターで、
処置することからなる。第３の処置法は、０、２４およ
び５２週目にナイーブチンパンジーに鼻腔内で組換えア
デノウイルスを、次いで、７２週目にｅｎｖサブユニッ
トブースターを投与することからなる。
【００２４】下記「表２」に処置法１および２を概略記
載する。
載する。
【００２５】
【表２】
【００２６】下記「表３」に処置法３を概略記載する。
【００２７】
【表３】
【００２８】免疫原性の測定：処置法１ チンパンジー接種法 処置法１を使用して、４型および７型ヒトアデウイルス
に対する中和抗体の存在についてネガティブにスクリー
ニングされた３匹のチンパンジー(オス２匹およびメス
１匹)を評価した。３日連続麻酔下、胃管を使用して組
換えアデノウイルスを含有する腸溶性カプセルを投与し
た。２匹のチンパンジー(１および２)にｅｎｖおよびｇ
ａｇ組換えウイルスの両方を投与し、一方、第３のチン
パンジー(３)にはｅｎｖ組換えウイルスだけを投与し
た。
に対する中和抗体の存在についてネガティブにスクリー
ニングされた３匹のチンパンジー(オス２匹およびメス
１匹)を評価した。３日連続麻酔下、胃管を使用して組
換えアデノウイルスを含有する腸溶性カプセルを投与し
た。２匹のチンパンジー(１および２)にｅｎｖおよびｇ
ａｇ組換えウイルスの両方を投与し、一方、第３のチン
パンジー(３)にはｅｎｖ組換えウイルスだけを投与し
た。
【００２９】ｅｎｖまたはｇａｇ遺伝子生産物を含有す
るアデノウイルス誘導サブユニット調製物を感染Ａ５４
９細胞培養物から精製した[バーノン,エス(Ｖernon,
Ｓ.)、ジャー ナル・オブ・ジェネティック・バイロロ
ジー(Ｊ.Ｇen.Ｖirology)、７２：１２４３(１９９１)
およびナトゥク,アール(Ｎatuk,Ｒ.)、プロシーディン
グス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエン
シズ・ユー・エス・エイ(Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳ
Ａ)、８９：７７７７(１９９２)を参照]。組換え抗原を
ミョウバンアジュバントと一緒に製剤化し、ｅｎｖ粒子
２００μg／用量およびｇａｇ粒子５００μg／用量を筋
肉内投与した。
るアデノウイルス誘導サブユニット調製物を感染Ａ５４
９細胞培養物から精製した[バーノン,エス(Ｖernon,
Ｓ.)、ジャー ナル・オブ・ジェネティック・バイロロ
ジー(Ｊ.Ｇen.Ｖirology)、７２：１２４３(１９９１)
およびナトゥク,アール(Ｎatuk,Ｒ.)、プロシーディン
グス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエン
シズ・ユー・エス・エイ(Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳ
Ａ)、８９：７７７７(１９９２)を参照]。組換え抗原を
ミョウバンアジュバントと一緒に製剤化し、ｅｎｖ粒子
２００μg／用量およびｇａｇ粒子５００μg／用量を筋
肉内投与した。
【００３０】実験の間、さまざまな時点で全血、血清、
および便試料を収集した。全血を処理して、(ＨＩＶ−
ｅｎｖ、ＨＩＶ−ｇａｇまたはｌａｃ遺伝子生産物を発
現する組換えワクチニアウイルスを使用して)ＦＡＣ
Ｓ、ＨＩＶ ＣＴＬのために、および精製したＨＩＶ組
換えｇｐ１６０、ｇｐ１２０およびｐ２４についてのリ
ンパ増殖性アッセイのために白血球個体群を得た。血清
および便標本は使用まで−７０℃で貯蔵した。
および便試料を収集した。全血を処理して、(ＨＩＶ−
ｅｎｖ、ＨＩＶ−ｇａｇまたはｌａｃ遺伝子生産物を発
現する組換えワクチニアウイルスを使用して)ＦＡＣ
Ｓ、ＨＩＶ ＣＴＬのために、および精製したＨＩＶ組
換えｇｐ１６０、ｇｐ１２０およびｐ２４についてのリ
ンパ増殖性アッセイのために白血球個体群を得た。血清
および便標本は使用まで−７０℃で貯蔵した。
【００３１】便標本における組換えアデノウイルスの検
出 チンパンジーの便標本を解凍し、１０％(Ｖ／Ｖ)懸濁液
を抗生物質含有ＤＭＥＭにした。清澄化した便の懸濁液
を使用して６０mmの組織培養皿中で集密性Ａ５４９細胞
単層に感染させた。１時間の吸着期間の後、未結合物質
を洗い落とし、単層を０.５％寒天オーバーレイ培地で
覆った。プラークを７−１０日間増殖させ、プラークを
ニュートラルレッド染色によって可視化し、計数し、細
胞単層を侵害しないように注意して寒天オーバーレイを
徐々に除去した。細胞シートをニトロセルロースフィル
ター膜(ミリポア・タイプＨＡ(Ｍillipore Ｔype Ｈ
Ａ)、０.４５μm)に移し、２０Ｘ ＳＳＣ中で予備洗浄
し、細胞層上に置き、細胞単層と２〜４分間接触させ
た。フィルターを剥がし、風乾し、真空オーブン中、８
０℃で２時間焼いた。ニトロセルロースフィルターを室
温で３Ｘ ＳＳｃ／０.１％ＳＤＳ中で２回洗浄し、標準
的な方法に従って予備ハイブリダイスおよびハイブリダ
イスした[ポンセット,ディ(Ｐoncet,Ｄ.)、ジャーナル
・オブ・バイロロジカル・メソッズ(Ｊ.Ｖirol.Ｍethod
s)、２６：２７(１９８９)]。ハイブリダイゼーション
緩衝液(１×１０6ＣＰＭ)に32Ｐ標識オリゴ−プローブ
を添加し、４２℃で一晩インキュベートした。Ａｄ４繊
維、Ａｄ５繊維、Ａｄ７繊維、ＨＩＶ−ｅｎｖまたはＨ
ＩＶ−ｇａｇ特異的配列を検出することができるＤＮＡ
プローブを調製した。[ワイン−ホブソン(Ｗain−Ｈobs
on)、セル(Ｃell)、４０：９(１９８５)]。フィルター
を洗浄し、オートラジオグフィーに付して、ハイブリダ
イゼーションシグナルを計数した。
出 チンパンジーの便標本を解凍し、１０％(Ｖ／Ｖ)懸濁液
を抗生物質含有ＤＭＥＭにした。清澄化した便の懸濁液
を使用して６０mmの組織培養皿中で集密性Ａ５４９細胞
単層に感染させた。１時間の吸着期間の後、未結合物質
を洗い落とし、単層を０.５％寒天オーバーレイ培地で
覆った。プラークを７−１０日間増殖させ、プラークを
ニュートラルレッド染色によって可視化し、計数し、細
胞単層を侵害しないように注意して寒天オーバーレイを
徐々に除去した。細胞シートをニトロセルロースフィル
ター膜(ミリポア・タイプＨＡ(Ｍillipore Ｔype Ｈ
Ａ)、０.４５μm)に移し、２０Ｘ ＳＳＣ中で予備洗浄
し、細胞層上に置き、細胞単層と２〜４分間接触させ
た。フィルターを剥がし、風乾し、真空オーブン中、８
０℃で２時間焼いた。ニトロセルロースフィルターを室
温で３Ｘ ＳＳｃ／０.１％ＳＤＳ中で２回洗浄し、標準
的な方法に従って予備ハイブリダイスおよびハイブリダ
イスした[ポンセット,ディ(Ｐoncet,Ｄ.)、ジャーナル
・オブ・バイロロジカル・メソッズ(Ｊ.Ｖirol.Ｍethod
s)、２６：２７(１９８９)]。ハイブリダイゼーション
緩衝液(１×１０6ＣＰＭ)に32Ｐ標識オリゴ−プローブ
を添加し、４２℃で一晩インキュベートした。Ａｄ４繊
維、Ａｄ５繊維、Ａｄ７繊維、ＨＩＶ−ｅｎｖまたはＨ
ＩＶ−ｇａｇ特異的配列を検出することができるＤＮＡ
プローブを調製した。[ワイン−ホブソン(Ｗain−Ｈobs
on)、セル(Ｃell)、４０：９(１９８５)]。フィルター
を洗浄し、オートラジオグフィーに付して、ハイブリダ
イゼーションシグナルを計数した。
【００３２】アデノウイルス中和試験法 熱不活性化された(５６℃で３０分間)イヌの血清の連続
２倍希釈液(１：４で開始)を９６ウエル微量滴定プレー
トにおいて作製し(０.０５ミリリットル／ウエル)、３
７℃で１時間、３０−１００ ＴＣＩＤ50ウイルスを含
有する０.０５ミリリットル培地と混合した。各ウエル
に２×１０4 Ａ５４９細胞を含有する培地０.０５ミリ
リットルを添加し、プレートを３７℃、５％ＣＯ2で７
〜１０日間インキュベートした。全ての試料を２重に作
製した。試験血清における最終点を決定するために各ア
ッセイにおいてウイルスおよび非感染細胞対照を含ん
だ。力価は、５０％細胞変性効果が観察された最も低い
希釈の逆数として表した。
２倍希釈液(１：４で開始)を９６ウエル微量滴定プレー
トにおいて作製し(０.０５ミリリットル／ウエル)、３
７℃で１時間、３０−１００ ＴＣＩＤ50ウイルスを含
有する０.０５ミリリットル培地と混合した。各ウエル
に２×１０4 Ａ５４９細胞を含有する培地０.０５ミリ
リットルを添加し、プレートを３７℃、５％ＣＯ2で７
〜１０日間インキュベートした。全ての試料を２重に作
製した。試験血清における最終点を決定するために各ア
ッセイにおいてウイルスおよび非感染細胞対照を含ん
だ。力価は、５０％細胞変性効果が観察された最も低い
希釈の逆数として表した。
【００３３】ＥＬＩＳＡおよびウェスタンブロッティン
グによる抗ＨＩＶ抗体の検出 抗ＨＩＶ抗体の検出：ＨＩＶ−１抗原に対するチンパン
ジー抗体応答を、製造者(ドイツ国ウィルミントンのデ
ュポン(ＤuＰont))による指示に従って、市販のＥＬＩ
ＳＡおよびウェスタンブロットキットによって種々の希
釈液を試験することによって測定した。
グによる抗ＨＩＶ抗体の検出 抗ＨＩＶ抗体の検出：ＨＩＶ−１抗原に対するチンパン
ジー抗体応答を、製造者(ドイツ国ウィルミントンのデ
ュポン(ＤuＰont))による指示に従って、市販のＥＬＩ
ＳＡおよびウェスタンブロットキットによって種々の希
釈液を試験することによって測定した。
【００３４】結果 ウイルス接種の前後に各チンパンジーから便を収集し、
−７０℃で貯蔵した。各試料から１０％懸濁液を調製
し、これを使用して集密性Ａ５４９細胞単層に感染させ
た。７〜１０日後、ウイルスプラークをニュートラルレ
ッド染色によって同定し、細胞単層をニトロセルロース
膜に移した。代表的な試料を種々の標識オリゴ−プロー
ブと一緒にハイブリダイズしてＡｄ４、Ａｄ５、Ａｄ
７、ＨＩＶ−ｒｅｖまたはＨＩＶ−ｇａｇ遺伝子に対し
て特異的な配列を検出した。特異的な組換えＡｄ−ＨＩ
Ｖウイルスの同定は、このプラークハイブリダイゼーシ
ョン法によって測定され得る。組換えウイルスは、接種
後７日間を越える期間、便中に全く放出されなかった。
ピーク力価は、常に、１〜３日目試料に関連しており、
おそらく非吸着ウイルス接種物を表すのであろう。Ａｄ
−ＨＢｓＡｇ組換え体を使用する前記チンパンジー研究
によって、Ａｄ−ＨＢｓＡｇ組換え体が接種後３０〜４
０日間検出されることが判明した。腸用カプセル投与形
態について、これらの組換えウイルスはin vivoであま
り複製しなかったと思われる。
−７０℃で貯蔵した。各試料から１０％懸濁液を調製
し、これを使用して集密性Ａ５４９細胞単層に感染させ
た。７〜１０日後、ウイルスプラークをニュートラルレ
ッド染色によって同定し、細胞単層をニトロセルロース
膜に移した。代表的な試料を種々の標識オリゴ−プロー
ブと一緒にハイブリダイズしてＡｄ４、Ａｄ５、Ａｄ
７、ＨＩＶ−ｒｅｖまたはＨＩＶ−ｇａｇ遺伝子に対し
て特異的な配列を検出した。特異的な組換えＡｄ−ＨＩ
Ｖウイルスの同定は、このプラークハイブリダイゼーシ
ョン法によって測定され得る。組換えウイルスは、接種
後７日間を越える期間、便中に全く放出されなかった。
ピーク力価は、常に、１〜３日目試料に関連しており、
おそらく非吸着ウイルス接種物を表すのであろう。Ａｄ
−ＨＢｓＡｇ組換え体を使用する前記チンパンジー研究
によって、Ａｄ−ＨＢｓＡｇ組換え体が接種後３０〜４
０日間検出されることが判明した。腸用カプセル投与形
態について、これらの組換えウイルスはin vivoであま
り複製しなかったと思われる。
【００３５】使用したアデノウイルスベクターの血清型
へのセロコンバージョンを中和試験法によって決定し
た。チンパンジーの各々において使用した３つの血清型
全てについて非常に低いものから適度なものまで抗アデ
ノウイルス血清力価を測定した。
へのセロコンバージョンを中和試験法によって決定し
た。チンパンジーの各々において使用した３つの血清型
全てについて非常に低いものから適度なものまで抗アデ
ノウイルス血清力価を測定した。
【００３６】ＥＬＩＳＡまたはウェスタンブロッティン
グ法によって組換えＨＩＶ遺伝子生産物へのセロコンバ
ージョンを測定した。Ａｄ５−ｅｎｖ組換え体による第
２ブースター接種前にはいずれのチンパンジーにおいて
もＥＬＩＳＡ応答は検出されなかった。Ａｄ５−ｅｎｖ
接種の２週間後、該動物３匹のうち２匹において抗ｅｎ
ｖ応答が測定された。ｇａｇおよび／またはｅｎｖ調製
物の筋肉内注射は、該動物３匹のうち１匹においてわず
かな追加免疫化効果を有した。ウェスタンブロット分析
法は、ＥＬＩＳＡよりも非常に感度が高いと思われ、ｅ
ｎｖおよび／またはｇａｇ遺伝子生産物が免疫原性であ
ると認識されている同定のさらなる長所を有していた。
初回免疫Ａｄ７組換え体およびＡｄ４組換えウイルスを
含有する第１ブースターの後に、低い血清抗体力価が測
定された。Ａｄ５−ｅｎｖ組換え体による第２ブースタ
ー免疫化の後に、ｅｎｖ遺伝子生産物に対する血清力価
の有意な増加が観察された。サブユニット調製物の注射
の後に、ｇａｇ遺伝子生産物を投与した動物２匹におい
て有意な増加が観察された。比較的良好なＨＩＶ抗原に
対するウェスタンブロット力価を除いて、動物３匹のう
ち１匹だけが、血清中和抗体と応答した。チンパンジー
２におけるこの応答は非常に低かった(力価１０〜２
０)。
グ法によって組換えＨＩＶ遺伝子生産物へのセロコンバ
ージョンを測定した。Ａｄ５−ｅｎｖ組換え体による第
２ブースター接種前にはいずれのチンパンジーにおいて
もＥＬＩＳＡ応答は検出されなかった。Ａｄ５−ｅｎｖ
接種の２週間後、該動物３匹のうち２匹において抗ｅｎ
ｖ応答が測定された。ｇａｇおよび／またはｅｎｖ調製
物の筋肉内注射は、該動物３匹のうち１匹においてわず
かな追加免疫化効果を有した。ウェスタンブロット分析
法は、ＥＬＩＳＡよりも非常に感度が高いと思われ、ｅ
ｎｖおよび／またはｇａｇ遺伝子生産物が免疫原性であ
ると認識されている同定のさらなる長所を有していた。
初回免疫Ａｄ７組換え体およびＡｄ４組換えウイルスを
含有する第１ブースターの後に、低い血清抗体力価が測
定された。Ａｄ５−ｅｎｖ組換え体による第２ブースタ
ー免疫化の後に、ｅｎｖ遺伝子生産物に対する血清力価
の有意な増加が観察された。サブユニット調製物の注射
の後に、ｇａｇ遺伝子生産物を投与した動物２匹におい
て有意な増加が観察された。比較的良好なＨＩＶ抗原に
対するウェスタンブロット力価を除いて、動物３匹のう
ち１匹だけが、血清中和抗体と応答した。チンパンジー
２におけるこの応答は非常に低かった(力価１０〜２
０)。
【００３７】これらの結果を下記「表４」に概略記載し
た。
た。
【表４】
【００３８】チンパンジーから得られた末梢血液単核細
胞固体群において細胞性免疫を測定した。ＨＩＶ−ｅｎ
ｖ遺伝子生産物、ＨＩＶ−ｇａｇ遺伝子生産物またはｌ
ａｃ遺伝子生産物(非特異的細胞毒性に関する対照)を発
現するワクチニアウイルス組換え体に感染した同系標的
細胞の溶解を測定することによって、ＨＩＶ特異的ＣＴ
Ｌ活性を測定した。この方法で微量のＨＩＶ特異性ＣＴ
Ｌ様活性を測定した。
胞固体群において細胞性免疫を測定した。ＨＩＶ−ｅｎ
ｖ遺伝子生産物、ＨＩＶ−ｇａｇ遺伝子生産物またはｌ
ａｃ遺伝子生産物(非特異的細胞毒性に関する対照)を発
現するワクチニアウイルス組換え体に感染した同系標的
細胞の溶解を測定することによって、ＨＩＶ特異的ＣＴ
Ｌ活性を測定した。この方法で微量のＨＩＶ特異性ＣＴ
Ｌ様活性を測定した。
【００３９】精製した組換えｅｎｖ(ｇｐ１６０、ｇｐ
１２０)またはｇａｇ(ｐ２４)調製物が幼若化を刺激す
ることができるか否かを決定するために、リンパ増殖性
アッセイを行った。初回接種物の後に増殖性は測定され
ず、該動物３匹のうち１匹だけがＡｄ４組換えウイルス
を有する第１ブーストの投与後にリンパ増殖性応答を示
す。動物３匹全ては、第２ブースター(Ａｄ５−ｅｎｖ)
および第３ブースト(サブユニット調製物)後に増殖性応
答で応じた。
１２０)またはｇａｇ(ｐ２４)調製物が幼若化を刺激す
ることができるか否かを決定するために、リンパ増殖性
アッセイを行った。初回接種物の後に増殖性は測定され
ず、該動物３匹のうち１匹だけがＡｄ４組換えウイルス
を有する第１ブーストの投与後にリンパ増殖性応答を示
す。動物３匹全ては、第２ブースター(Ａｄ５−ｅｎｖ)
および第３ブースト(サブユニット調製物)後に増殖性応
答で応じた。
【００４０】免疫原性の測定：処置法２ チンパンジー接種およびデータ収集 予め腸溶性カプセル中のＡｄ−ＨＩＶ組換えウイルスを
接種し、アデノウイルス誘導ｇａｇおよび／またはｅｎ
ｖサブユニットでブーストしたチンパンジー３匹(オス
２匹およびメス１匹)(処置法１)を、Ａｄ７−ＨＩＶウ
イルス(４６週目)で、および１２週後(５８週目)にＡｄ
４−ＨＩＶウイルスで鼻腔内感染させた。麻酔下、チン
パンジーの鼻孔中に、リン酸塩食塩緩衝液を滴下して希
釈した組織培養培地中の組換えアデノウイルスを投与し
た。チンパンジー２匹(番号１および２)にｅｎｖおよび
ｇａｇ組換えウイルスの両方を投与し、一方、第３のチ
ンパンジー(番号３)にｅｎｖ組換えウイルスだけを投与
した。
接種し、アデノウイルス誘導ｇａｇおよび／またはｅｎ
ｖサブユニットでブーストしたチンパンジー３匹(オス
２匹およびメス１匹)(処置法１)を、Ａｄ７−ＨＩＶウ
イルス(４６週目)で、および１２週後(５８週目)にＡｄ
４−ＨＩＶウイルスで鼻腔内感染させた。麻酔下、チン
パンジーの鼻孔中に、リン酸塩食塩緩衝液を滴下して希
釈した組織培養培地中の組換えアデノウイルスを投与し
た。チンパンジー２匹(番号１および２)にｅｎｖおよび
ｇａｇ組換えウイルスの両方を投与し、一方、第３のチ
ンパンジー(番号３)にｅｎｖ組換えウイルスだけを投与
した。
【００４１】全血、血清、および便の試料を実験の間の
様々な時点で収集し、処置法１の記載と同様に処理し
た。処置法１に記載の方法に従って、便試料または鼻の
綿棒におけるアデノウイルス検出、アデノウイルス中和
試験法、および抗ＨＩＶ抗体の検出を行った。
様々な時点で収集し、処置法１の記載と同様に処理し
た。処置法１に記載の方法に従って、便試料または鼻の
綿棒におけるアデノウイルス検出、アデノウイルス中和
試験法、および抗ＨＩＶ抗体の検出を行った。
【００４２】結果 １×１０8pfu／チンパンジーの一用量でＡｄ７組換え体
を有する第１鼻腔内ブースターを投与した。ウイルス投
与時にチンパンジー３、１および２は、前記経口投与か
ら、各々、＜４、８および６４の血清抗Ａｄ７中和力価
を有した。プラークハイブリダイゼーション法によっ
て、放出された組換えウイルスの存在について鼻の綿棒
および便の試料を試験した。動物のうち２匹では、接種
後７日間まで、鼻の綿棒中で組換えＡｄ７−ｅｎｖが検
出された。組換えＡｄ７−ｅｎｖおよびＡｄ７−ｇａｇ
は、接種後５〜１２日間、便の試料中に存在することが
判明した。Ａｄ７に対する血清力価および鼻の綿棒およ
び便の試料中の組換えウイルスの検出能の間に関係があ
った。限界抗ＨＩＶ抗体応答を表示する２匹の動物は鼻
腔内ブーストによって非常に強化された。より少量で第
３の動物をブーストした。今、３匹の動物においてＨＩ
Ｖで指向された低い力価の中和抗体を検出することがで
きた。抗ｇａｇおよび／またはｅｎｖ結合抗体を含有す
る鼻の綿棒試料中で分泌抗体を検出した。Ａｄ７組換え
ウイルスの鼻腔内投与の結果、これらの動物において呼
吸疾患の徴候または症候は観察されなかった。
を有する第１鼻腔内ブースターを投与した。ウイルス投
与時にチンパンジー３、１および２は、前記経口投与か
ら、各々、＜４、８および６４の血清抗Ａｄ７中和力価
を有した。プラークハイブリダイゼーション法によっ
て、放出された組換えウイルスの存在について鼻の綿棒
および便の試料を試験した。動物のうち２匹では、接種
後７日間まで、鼻の綿棒中で組換えＡｄ７−ｅｎｖが検
出された。組換えＡｄ７−ｅｎｖおよびＡｄ７−ｇａｇ
は、接種後５〜１２日間、便の試料中に存在することが
判明した。Ａｄ７に対する血清力価および鼻の綿棒およ
び便の試料中の組換えウイルスの検出能の間に関係があ
った。限界抗ＨＩＶ抗体応答を表示する２匹の動物は鼻
腔内ブーストによって非常に強化された。より少量で第
３の動物をブーストした。今、３匹の動物においてＨＩ
Ｖで指向された低い力価の中和抗体を検出することがで
きた。抗ｇａｇおよび／またはｅｎｖ結合抗体を含有す
る鼻の綿棒試料中で分泌抗体を検出した。Ａｄ７組換え
ウイルスの鼻腔内投与の結果、これらの動物において呼
吸疾患の徴候または症候は観察されなかった。
【００４３】３カ月後、これらのチンパンジーを１×１
０8pfu／チンパンジー／ウイルスの一回用量のＡｄ４組
換え体で免疫化した。これらの動物は、鼻腔内攻撃時誘
発時に前記経口免疫化により１２８〜２５６の間の血清
抗Ａｄ４中和力価を有した。感染の３日後、動物のうち
の２匹(２および３)は、少し咳がでた。第３の動物(番
号１)は、細菌性肺炎から５日目に死んだ(ストレプトコ
ッカス・ニューモニエ(Ｓtreptococcus pneumoniae)が
単離された)。他の２匹の動物からは、聴診法によって
耳障りな音が得られ、両方のチンパンジーからエス・ニ
ューモニエ(Ｓ.pneumonia)が単離された。抗生物質治療
を開始し、両方のチンパンジーを再生した。
０8pfu／チンパンジー／ウイルスの一回用量のＡｄ４組
換え体で免疫化した。これらの動物は、鼻腔内攻撃時誘
発時に前記経口免疫化により１２８〜２５６の間の血清
抗Ａｄ４中和力価を有した。感染の３日後、動物のうち
の２匹(２および３)は、少し咳がでた。第３の動物(番
号１)は、細菌性肺炎から５日目に死んだ(ストレプトコ
ッカス・ニューモニエ(Ｓtreptococcus pneumoniae)が
単離された)。他の２匹の動物からは、聴診法によって
耳障りな音が得られ、両方のチンパンジーからエス・ニ
ューモニエ(Ｓ.pneumonia)が単離された。抗生物質治療
を開始し、両方のチンパンジーを再生した。
【００４４】この条件の既往実験の後、いくつかの観察
を行った。鼻腔内投与時、チンパンジー番号１は、すで
に、発熱および異常完全血球算定を経験していた。不均
衡数の多形核細胞が存在し、５％レベルの杆状球(未成
熟多形核細胞)が一緒に存在しており、この情報によ
り、ウイルス接種前に有意な細菌感染を生じていたこと
が判明した。肺、肝臓、脾臓および血清から採取した剖
検試料を全て、罹病性Ａ５４９細胞単層上で３つのブラ
インドパッセージを使用して組織培養によって感染アデ
ノウイルスの存在についての陰性を試験した。プラーク
ハイブリダイゼーション法によって同様の発見が得られ
た。肺および肝臓パラフィン包埋試料は、アデノウイル
ス抗原に関する市販の免疫蛍光キットを使用してアデノ
ウイルス抗原の存在についての陰性を試験した。Ｈ＆Ｅ
染色した肺切片中で封入体が観察された。これらの封入
体がアデノウイルスによって生じたか否かについて専門
家による不一致があった。数週間後、同一の霊長類セン
ターで別のチンパンジーが同様の運命を経験し、死ん
だ。組換えアデノウイルスの投与は小さい役割を持った
に過ぎないと思われたが、いずれの場合も、チンパンジ
ー番号１の死を引き起こす際に、チンパンジーへのアデ
ノウイルス組換え体のさらなる鼻腔内投与の前後に予防
学的に抗生物質を投与することが賢明であると考えられ
た。
を行った。鼻腔内投与時、チンパンジー番号１は、すで
に、発熱および異常完全血球算定を経験していた。不均
衡数の多形核細胞が存在し、５％レベルの杆状球(未成
熟多形核細胞)が一緒に存在しており、この情報によ
り、ウイルス接種前に有意な細菌感染を生じていたこと
が判明した。肺、肝臓、脾臓および血清から採取した剖
検試料を全て、罹病性Ａ５４９細胞単層上で３つのブラ
インドパッセージを使用して組織培養によって感染アデ
ノウイルスの存在についての陰性を試験した。プラーク
ハイブリダイゼーション法によって同様の発見が得られ
た。肺および肝臓パラフィン包埋試料は、アデノウイル
ス抗原に関する市販の免疫蛍光キットを使用してアデノ
ウイルス抗原の存在についての陰性を試験した。Ｈ＆Ｅ
染色した肺切片中で封入体が観察された。これらの封入
体がアデノウイルスによって生じたか否かについて専門
家による不一致があった。数週間後、同一の霊長類セン
ターで別のチンパンジーが同様の運命を経験し、死ん
だ。組換えアデノウイルスの投与は小さい役割を持った
に過ぎないと思われたが、いずれの場合も、チンパンジ
ー番号１の死を引き起こす際に、チンパンジーへのアデ
ノウイルス組換え体のさらなる鼻腔内投与の前後に予防
学的に抗生物質を投与することが賢明であると考えられ
た。
【００４５】下記「表５」は、処置法１および処置法２
におけるＡｄ７−組換え体を使用して得られた結果を示
す。
におけるＡｄ７−組換え体を使用して得られた結果を示
す。
【００４６】
【表５】
【００４７】免疫原性の測定：処置法３ チンパンジー接種およびデータ収集 ４型、５型および７型ヒトアデノウイルスに対する中和
抗体の存在についてネガティブにスクリーニングされた
３匹のチンパンジー(オス２匹およびメス１匹）を処置
法３を使用して評価した。２匹のチンパンジー（番号４
および５)にｅｎｖおよびｇａｇ組換えウイルスを投与
し、一方、第３のチンパンジー(番号６)にｅｎｖ組換え
ウイルスだけを投与した。該チンパンジーに予防的に抗
生物質を投与し、呼吸疾患は観察されなかった。
抗体の存在についてネガティブにスクリーニングされた
３匹のチンパンジー(オス２匹およびメス１匹）を処置
法３を使用して評価した。２匹のチンパンジー（番号４
および５)にｅｎｖおよびｇａｇ組換えウイルスを投与
し、一方、第３のチンパンジー(番号６)にｅｎｖ組換え
ウイルスだけを投与した。該チンパンジーに予防的に抗
生物質を投与し、呼吸疾患は観察されなかった。
【００４８】実験の間の様々な時点で全血、血清、およ
び便の試料を収集し、処置法１の記載と同様に処理し
た。処置法１に記載の方法に従って、便の試料および鼻
の綿棒中のアデノウイルスの検出、アデノウイルス中和
アッセイ、および抗ＨＩＶ抗体の検出を行った。
び便の試料を収集し、処置法１の記載と同様に処理し
た。処置法１に記載の方法に従って、便の試料および鼻
の綿棒中のアデノウイルスの検出、アデノウイルス中和
アッセイ、および抗ＨＩＶ抗体の検出を行った。
【００４９】結果 Ａｄ７組換え体による第１免疫化 感染後２２〜３４日間、便中に組換えウイルスが放出さ
れた。感染後２週間目に採取した鼻分泌物中には組換え
ウイルスは検出されなかった。中和アッセイによって使
用したアデノウイルスベクターの血清型へのセロコンバ
ージョンを測定した。チンパンジーの各々において使用
されたＡｄ７血清型について、３匹のチンパンジー全て
において優れた抗アデノウイルス血清力価を測定した。
ウェスタンブロッティングによって組換えＨＩＶ遺伝子
生産物へのセロコンバージョンを測定した。Ａｄ７−組
換え抗ｅｎｖおよび抗ｇａｇによる初回免疫化の４週間
後に３匹のチンパンジーのうち２匹において応答が測定
された。感染後２０週間まで、３匹の動物の全てがＨＩ
Ｖ抗原に対する測定可能な抗体を有していた。初回免疫
化後の最初の４週間以内では、分泌抗体は鼻の綿棒中に
は見られなかった。３匹のチンパンジー全てが検出可能
な抗ＨＩＶ中和抗体応答を増大させなかった。
れた。感染後２週間目に採取した鼻分泌物中には組換え
ウイルスは検出されなかった。中和アッセイによって使
用したアデノウイルスベクターの血清型へのセロコンバ
ージョンを測定した。チンパンジーの各々において使用
されたＡｄ７血清型について、３匹のチンパンジー全て
において優れた抗アデノウイルス血清力価を測定した。
ウェスタンブロッティングによって組換えＨＩＶ遺伝子
生産物へのセロコンバージョンを測定した。Ａｄ７−組
換え抗ｅｎｖおよび抗ｇａｇによる初回免疫化の４週間
後に３匹のチンパンジーのうち２匹において応答が測定
された。感染後２０週間まで、３匹の動物の全てがＨＩ
Ｖ抗原に対する測定可能な抗体を有していた。初回免疫
化後の最初の４週間以内では、分泌抗体は鼻の綿棒中に
は見られなかった。３匹のチンパンジー全てが検出可能
な抗ＨＩＶ中和抗体応答を増大させなかった。
【００５０】Ａｄ４−組換え体による第１ブースター免
疫化 感染後１４〜２８日間、便中に組換えＡｄ４ウイルスが
放出された。鼻の綿棒の実験によって、組換えＡｄ４ウ
イルスが感染後少なくとも７日間３匹のチンパンジーの
全てにおいて検出されることが判明した。有意な抗Ａｄ
４応答は鼻腔内投与の後にＡｄ４血清型に対して増大し
た。程度は、Ａｄ７組換えウイルスに対して測定された
ものよりもわずかに低かった。ｇａｇおよび／またはｅ
ｎｖ抗原に対する優れたブースター応答は、３匹の動物
の全てにおいて測定された。低い力価の(１：２)抗ｇａ
ｇおよび／または抗ｅｎｖ応答は、チンパンジー４およ
び５からの鼻の綿棒中で測定された。いずれの動物にお
いても、抗ＨＩＶ中和抗体はまだ測定されなかった。
疫化 感染後１４〜２８日間、便中に組換えＡｄ４ウイルスが
放出された。鼻の綿棒の実験によって、組換えＡｄ４ウ
イルスが感染後少なくとも７日間３匹のチンパンジーの
全てにおいて検出されることが判明した。有意な抗Ａｄ
４応答は鼻腔内投与の後にＡｄ４血清型に対して増大し
た。程度は、Ａｄ７組換えウイルスに対して測定された
ものよりもわずかに低かった。ｇａｇおよび／またはｅ
ｎｖ抗原に対する優れたブースター応答は、３匹の動物
の全てにおいて測定された。低い力価の(１：２)抗ｇａ
ｇおよび／または抗ｅｎｖ応答は、チンパンジー４およ
び５からの鼻の綿棒中で測定された。いずれの動物にお
いても、抗ＨＩＶ中和抗体はまだ測定されなかった。
【００５１】Ａｄ５組換え体による第２ブースター免疫
化 感染後８日間、便中に組換えＡｄ５ウイルスが放出され
た。感染後０、１または２週間目に、鼻の綿棒中に組換
えウイルスを検出することができなかった。３匹の動物
の全てから採取した鼻の綿棒中で分泌型ＩｇＧおよびＩ
ｇＡを測定することができた。３匹の動物の全てから採
取した唾液中で、および１匹のメスのチンパンジーから
採取した膣の綿棒から分泌型抗体が検出された。３匹の
動物の全てにおいて抗ＨＩＶ型特異性中和抗体が検出さ
れた。
化 感染後８日間、便中に組換えＡｄ５ウイルスが放出され
た。感染後０、１または２週間目に、鼻の綿棒中に組換
えウイルスを検出することができなかった。３匹の動物
の全てから採取した鼻の綿棒中で分泌型ＩｇＧおよびＩ
ｇＡを測定することができた。３匹の動物の全てから採
取した唾液中で、および１匹のメスのチンパンジーから
採取した膣の綿棒から分泌型抗体が検出された。３匹の
動物の全てにおいて抗ＨＩＶ型特異性中和抗体が検出さ
れた。
【００５２】下記「表６」は処置法３を使用して得られ
た結果を示す。
た結果を示す。
【００５３】
【表６】
【００５４】下記「表７」において、Ａｄ５−ＨＩＶ組
換え体による鼻腔内ブースター免疫化の後にチンパンジ
ー分泌物中で検出された抗ＨＩＶ応答を概略記載した。
換え体による鼻腔内ブースター免疫化の後にチンパンジ
ー分泌物中で検出された抗ＨＩＶ応答を概略記載した。
【００５５】
【表７】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:92） (72)発明者 ポール・ポーウェン・ハング アメリカ合衆国19010ペンシルベニア州ブ ライン・マウル、ランブルウッド・ドライ ブ506番 (72)発明者 マイケル・デイビッド・ルベック アメリカ合衆国19343ペンシルベニア州グ レンムーア、クアイル・ラン・レイン20番 (72)発明者 ロバート・ジェイムズ・ナタック アメリカ合衆国18976ペンシルベニア州ウ ォーリントン、オーチャード・ヒル・サー クル2299番 (72)発明者 プラナブ・クマール・チャンダ アメリカ合衆国19087ペンシルベニア州ウ ェイン、セントリー・レイン332番 (72)発明者 シュリダラ・チカトゥール・シャンカラナ ラヤナ・マーシー アメリカ合衆国19406ペンシルベニア州キ ング・オブ・プルシア、バリー・ウィッ ク・ドライブ511番 (72)発明者 シャウ−グァン・リン・リー アメリカ合衆国19085ペンシルベニア州ビ ラノバ、サウス・スプリング・ミル・ロー ド155番
Claims (28)
- 【請求項１】 ビリオン構造蛋白が組換えアデノウイル
スを生産する天然アデノウイルスのビリオン構造蛋白か
ら変化せず、かつ、抗体に対応するかまたは細胞性免疫
を誘発する抗原をコードする遺伝子を含有する生の組換
えアデノウイルスを温血哺乳類に鼻腔内投与、筋肉内投
与または皮下投与することからなる、温血哺乳類におけ
る感染性微生物に対する抗体または細胞性免疫の生産方
法。 - 【請求項２】 感染性微生物が１型ヒト免疫不全ウイル
スである請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 感染性微生物が１型ヒト免疫不全ウイル
スであり、遺伝子が１型ヒト免疫不全ウイルス抗原をコ
ードする請求項１記載の方法。 - 【請求項４】 生の組換えアデノウイルスが４型アデウ
イルス、５型アデウイルスおよび７型アデウイルスから
なる群から選択される１種類以上のアデノウイルスであ
り、初期領域３における遺伝子がアデノウイルスにおい
て欠失している請求項３記載の方法。 - 【請求項５】 １型ヒト免疫不全ウイルスをコードする
遺伝子がｅｎｖ遺伝子、ｇａｇ／ｐｒｏ遺伝子、ｒｅｖ
遺伝子および修飾Ｈｒｅｖ遺伝子からなる群から選択さ
れる１種類以上の遺伝子である請求項４記載の方法。 - 【請求項６】 組換えアデノウイルスがＡｄ７−ｔｐｌ
ｅｎｖ−ｔｐｌＨｒｅｖ、Ａｄ７−ｔｐｌｇａｇ−ｔｐ
ｌＨｒｅｖ、Ａｄ７−ｒｅｖ−ｇａｇ、Ａｄ４−ｔｐｌ
ｅｎｖ−ｔｐｌＨｒｅｖ、Ａｄ４−ｔｐｌｇａｇ−ｔｐ
ｌＨｒｅｖ、Ａｄ４−ｒｅｖ−ｇａｇ、Ａｄ５−ｔｐｌ
ｅｎｖ−ｔｐｌＨｒｅｖ、およびＡｄ５−ｔｐｌｇａｇ
−ｔｐｌＨｒｅｖからなる群から選択される１種類以上
のアデノウイルスである請求項５記載の方法。 - 【請求項７】 さらに１種類以上の１型ヒト免疫不全サ
ブユニット蛋白を投与することからなる請求項３記載の
方法。 - 【請求項８】 サブユニット蛋白がｅｎｖまたはｇａｇ
である請求項７記載の方法。 - 【請求項９】 さらに１種類以上の１型ヒト免疫不全サ
ブユニット蛋白を投与することからなる請求項６記載の
方法。 - 【請求項１０】 サブユニット蛋白がｅｎｖまたはｇａ
ｇである請求項９記載の方法。 - 【請求項１１】 ビリオン構造蛋白が組換えアデノウイ
ルスを生産する天然アデノウイルスにおけるビリオン構
造蛋白から変化せず、かつ、抗体に対応するかまたは細
胞性免疫を誘発する抗原をコードする遺伝子を含有する
生の組換えアデノウイルスからなり、鼻腔内投与形態、
筋肉内投与形態または皮下投与形態で製剤化される、温
血哺乳類における感染性微生物に対する抗体または細胞
性免疫生産用ワクチン。 - 【請求項１２】 感染性微生物が１型ヒト免疫不全ウイ
ルスである請求項１１記載のワクチン。 - 【請求項１３】 感染性微生物が１型ヒト免疫不全ウイ
ルスであり、遺伝子が１型ヒト免疫不全ウイルス抗原を
コードする請求項１１記載のワクチン。 - 【請求項１４】 生の組換えアデノウイルスが４型アデ
ウイルス、５型アデウイルスおよび７型アデウイルスか
らなる群から選択される１種類以上のアデノウイルスで
あり、初期領域３における遺伝子がアデノウイルスにお
いて欠失している請求項１３記載のワクチン。 - 【請求項１５】 １型ヒト免疫不全ウイルスをコードす
る遺伝子がｅｎｖ遺伝子、ｇａｇ／ｐｒｏ遺伝子、ｒｅ
ｖ遺伝子、および修飾Ｈｒｅｖ遺伝子からなる群から選
択される１種類以上の遺伝子である請求項１４記載のワ
クチン。 - 【請求項１６】 組換えアデノウイルスがＡｄ７−ｔｐ
ｌｅｎｖ−ｔｐｌＨｒｅｖ、Ａｄ７−ｔｐｌｇａｇ−ｔ
ｐｌＨｒｅｖ、Ａｄ７−ｒｅｖ−ｇａｇ、Ａｄ４−ｔｐ
ｌｅｎｖ−ｔｐｌＨｒｅｖ、Ａｄ４−ｔｐｌｇａｇ−ｔ
ｐｌＨｒｅｖ、Ａｄ４−ｒｅｖ−ｇａｇ、Ａｄ５−ｔｐ
ｌｅｎｖ−ｔｐｌＨｒｅｖ、およびＡｄ５−ｔｐｌｇａ
ｇ−ｔｐｌＨｒｅｖからなる群から選択される１種類以
上のアデノウイルスである請求項１５記載のワクチン。 - 【請求項１７】 さらに１種類以上の１型ヒト免疫不全
サブユニット蛋白を投与することからなる請求項１３記
載のワクチン。 - 【請求項１８】 サブユニット蛋白がｅｎｖまたはｇａ
ｇである請求項１７記載のワクチン。 - 【請求項１９】 さらに１種類以上の１型ヒト免疫不全
サブユニット蛋白を投与することからなる請求項１６記
載のワクチン。 - 【請求項２０】 サブユニット蛋白がｅｎｖまたはｇａ
ｇである請求項１９記載のワクチン。 - 【請求項２１】 ビリオン構造蛋白が組換えアデノウイ
ルスを生産する天然アデノウイルスにおけるビリオン構
造蛋白から変化せず、かつ抗体に対応するかまたは細胞
性免疫を誘発する１型ヒト免疫不全ウイルスをコードす
る遺伝子を含有する生の組換えアデノウイルスを１回以
上温血哺乳類に鼻腔内投与し、さらに、少なくとも１つ
の１型ヒト免疫不全サブユニット蛋白を該哺乳類に投与
することからなる、温血哺乳類における１型ヒト免疫不
全ウイルスに対する抗体または細胞性免疫の生産方法。 - 【請求項２２】 ＸがＡｄ４、Ａｄ５またはＡｄ７であ
り、ＹがｅｎｖまたはｇａｇであるＸ−ｔｐｌＹ−ｔｐ
ｌＨｒｅｖである組換えアデノウイルス。 - 【請求項２３】 Ａｄ４−ｔｐｌｅｎｖ−ｔｐｌＨｒｅ
ｖである請求項２２記載の組換えアデノウイルス。 - 【請求項２４】 Ａｄ５−ｔｐｌｅｎｖ−ｔｐｌＨｒｅ
ｖである請求項２２記載の組換えアデノウイルス。 - 【請求項２５】 Ａｄ７−ｔｐｌｅｎｖ−ｔｐｌＨｒｅ
ｖである請求項２２記載の組換えアデノウイルス。 - 【請求項２６】 Ａｄ４−ｔｐｌｇａｇ−ｔｐｌＨｒｅ
ｖである請求項２２記載の組換えアデノウイルス。 - 【請求項２７】 Ａｄ５−ｔｐｌｇａｇ−ｔｐｌＨｒｅ
ｖである請求項２２記載の組換えアデノウイルス。 - 【請求項２８】 Ａｄ７−ｔｐｌｇａｇ−ｔｐｌＨｒｅ
ｖである請求項２２記載の組換えアデノウイルス。
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|---|---|---|---|
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|---|---|
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|---|---|---|---|
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| JP (1) | JP4093597B2 (ja) |
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