JPH06180285A - 自動分析装置の吸光光度分析法 - Google Patents

自動分析装置の吸光光度分析法

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JPH06180285A
JPH06180285A JP10204492A JP10204492A JPH06180285A JP H06180285 A JPH06180285 A JP H06180285A JP 10204492 A JP10204492 A JP 10204492A JP 10204492 A JP10204492 A JP 10204492A JP H06180285 A JPH06180285 A JP H06180285A
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JP
Japan
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reaction
wavelength
reagent
absorbance
concentration
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Pending
Application number
JP10204492A
Other languages
English (en)
Inventor
Kiyokazu Nakano
清和 中野
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Shimadzu Corp
Original Assignee
Shimadzu Corp
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Publication date
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Abstract

(57)【要約】 (修正有) 【目的】 自己検体ブランク法により求る濃度が正確で
あるか否かを判定する。 【構成】 試薬ブランク測定での反応誘起試薬R2添加
前、後の主波長λsと副波長λrでの吸光度をAs
1,Arb1,Asb2,Arb2とする。検体測定時の
2添加前、後の吸光度をAs1,Ar1,As2,Ar2
とする。分析目的成分の濃度をCとする。 C={(As2−Asb2)−(As1−Asb1)・Vc)}K ={(As2−As1・Vc)−(Asb2−Asb1・Vc)}
K 濃度Cが正確であるか否かの判定は、次式が満たされか
否かにより行なう。 (Ar2−Arb2)=(Ar1−Arb1)・Vc±Val {(Ar2-Arb2)-(Ar1-Arb1)・Vc}/{(As2-As1・Vc)-(Asb2-As
b1・Vc)}=±Vr

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は臨床用自動化学分析装置
になどの自動分析装置において血清や尿などの生体液試
料に含まれる目的成分を吸光度から定量する測定方法に
関し、特に自己検体ブランク法と称される方法に関する
ものである。
【0002】
【従来の技術】生体液試料中のビリルビン、グルコー
ス、クレアチニンなどの成分を自動分析装置により分析
する場合、自己検体ブランク法と称される方法がよく用
いられる。この方法は、従来の検体ブランク法に比べて
分析設備、試料及び試薬の量などを半量にできる特徴を
もっているため、検体ブランク値(試料中の呈色物質又
は混濁物質が分析目的成分の測定波長で示す吸光度)を
補正できる自動分析方法として広く普及している。
【0003】自己検体ブランク法では試料に目的とする
反応に必要な分析試薬成分のうち、少なくとも1つを欠
いている反応補助試薬(R1)を添加した後、分析目的
成分を検出するための分析試薬(反応誘起試薬;R2
を添加する前の測定吸光度Afと反応誘起試薬添加後で
検出反応終了後の測定吸光度Aaから分析目的成分濃度
Cを算出する(特公昭64−9571号公報参照)。
【0004】濃度Cを算出する式は C=(Aa−Af・Vc)K ……(1) である。ただし、Kは濃度換算係数、Vcは液量補正係
数であり、2種類の分析試薬(反応補助試薬R1と反応
誘起試薬R2)を使用する場合はVcは次の式で表わさ
れる。 Vc=(Vs+V1)/(Vs+V1+V2) ……(2) ここで、V1,V2はそれぞれR1,R2の試薬量、Vsは
試料量である。
【0005】
【発明が解決しようとする課題】自己検体ブランク法で
目的成分濃度を求める場合、Aa,Afは測定液の性
質、例えばpHや界面活性剤濃度など、又は測定時間の
相違などにより、検体ブランク値の補正が正しく行なえ
ない場合がある。すなわち、分析目的成分C=0である
にもかかわらず、 Aa≠Af・Vc ……(3) となることがある。そこで、本発明は自己検体ブランク
法により目的成分濃度を求めるとともに、その求められ
た濃度が正確であるか否かを判定する方法も含む吸光光
度分析方法を提供することを目的とするものである。
【0006】
【課題を解決するための手段】本発明では自己検体ブラ
ンク法に従って、目的とする反応に必要な分析試薬成分
のうち少なくとも1つを欠いている反応補助試薬と試料
との混合液を調製し、次いでこれに反応補助試薬に含ま
れていなかった目的とする反応に必要な反応誘起試薬を
添加して反応液を調製する。これらの混合液と反応液に
ついて分析目的成分を検出する主波長及び検出しない副
波長で吸光度を測定し、両液の主波長での測定値又は主
波長での測定値及び副波長での測定値から分析目的成分
の濃度を求め、副波長での両液の測定値の差が許容値内
であるか否かにより求められた濃度の正確さを判定す
る。
【0007】
【作用】分析目的成分を検出する測定波長(主波長)λ
s及び検出しない非吸収波長λr(副波長)を用いて、
反応誘起試薬R2を添加する前と反応終了後のそれぞれ
の吸光度を測定する。 主波長λsでの吸光度……Asf(前),Asa(後) 副波長λrでの吸光度……Arf(前),Ara(後) であるとする。副波長λrでの吸光度Ara,Arfを
用いて、 Ara=Arf・Vc±Val ……(4) が成立するか否かを判定する。ただし、Valは許容値
である。許容値は一定値としてもよく、(Ara−Ar
f・Vc)に対応する相対値としてもよい。
【0008】分析目的成分濃度Cについては、従来通り
(1)式から C=(Asa−Asf・Vc)K ……(5) により算出し、判定式(4)が成立しない場合は算出さ
れた目的成分濃度Cに、例えば「検体ブランク値異常」
のコメントをつけて正しい分析値Cが得られなかったこ
とを表示し、警告する。ここで、反応誘起試薬R2を添
加する前の測定値として主波長λsでの吸光度Asfの
代わりに副波長λrでの吸光度との差A(s/r)f(=A
sf−Arf)を、同じく、Asaの代わりに副波長λ
rでの吸光度との差A(s/r)a(=Asa−Ara)を
使用する2波長法を用いてもよい。このときの分析目的
成分濃度Cは次のようになる。 C=(A(s/r)a−A(s/r)f・Vc)K ……(6)
【0009】
【実施例】図1に測定方法を示す。試薬ブランク測定を
行なうときは、測定セルを兼ねる反応容器に純水を入
れ、その後反応補助試薬R1を入れる。反応誘起試薬R2
を添加する直前に主波長λsと副波長λrでそれぞれ吸
光度を測定する。各測定値をAsb1とArb1とする。
反応誘起試薬R2を添加し所定の反応時間経過後、再び
主波長λsと副波長λrで吸光度を測定する。各測定値
をAsb2とArb2とする。反応誘起試薬R2を添加す
る前に検体ブランク測定を行なうため、反応補助試薬R
1としては通常は分析目的成分には作用しない緩衝成分
のみを含む試薬を用いる。
【0010】検体分析を行なうときは反応容器に検体試
料を入れる。その後試薬ブランク測定の場合と同様に反
応補助試薬R1を添加し、反応誘起試薬R2を添加する直
前に主波長λsと副波長λrでそれぞれ吸光度を測定
し、各測定値をAs1とAr1とする。反応誘起試薬R2
を添加し、所定の反応時間経過後再び主波長λsと副波
長λrでそれぞれ吸光度を測定して、各測定値をAs2
とAr2とする。
【0011】分析目的成分の濃度Cは主波長λsでの吸
光度から次の式により算出することができる。 C={(As2−Asb2)−(As1−Asb1)・Vc)}K ={(As2−As1・Vc)−(Asb2−Asb1・Vc)}K ……(7) 主波長λsと副波長λrの測定値を使用する2波長法を
採用する場合は、(7)式中のAs2はA(s/r)2、As
2はA(s/r)b2、As1はA(s/r)1、Asb1はA(s/r)
1となる。
【0012】算出された濃度Cが正確であるか否かの判
定は、副波長λrでの吸光度から次の式(8)又は
(9)により判定することができる。(8)式又は
(9)式が満たされるときは、算出された濃度Cは正確
なものと判断できる。 (Ar2−Arb2)=(Ar1−Arb1)・Vc±Val ……(8) {(Ar2-Arb2)-(Ar1-Arb1)・Vc}/{(As2-As1・Vc)-(Asb2-Asb1・Vc)}=±Vr ……(9) ここで、Val,Vrはともに許容値であり、Valは
固定値、Vrは検体ごとに異なる相対値である。
【0013】実施例では分析目的成分よっては反応補助
試薬R1又は反応誘起試薬R2が主波長λsと副波長λr
において吸収をもつ場合があることを考慮して一般化し
て説明している。作用の欄で示した記号との対応関係を
示すと次のようになる。 Aa=Asa=As2−Asb2 Ara=Ar2−Arb2 Af=Asf=As1−Asb1 Arf=Ar1−Arb1 実施例は吸光度のエンドポイント測定法により目的成分
の濃度を求める例を説明しているが、他の方法としてレ
ート法(カイネティックス法)により定量する分析方法
も一般に用いられており、本発明はいずれの分析方法を
適用してもよい。
【0014】具体例として、図2に直接ビリルビンをビ
リルビン酸化酵素法試薬を用いて分析した反応タイムコ
ースの例を示す。主波長λsは450nm、副波長λr
は550nmに設定する。試料量は20μl、反応補助
試薬量は400μl、反応誘起試薬量は100μlであ
る。反応誘起試薬R2を添加すると主波長での吸光度も
副波長での吸光度も低下する。直接ビリルビンの測定波
長には血清中の検体ブランク成分が存在し、それ等の吸
収スペクトルは図3に示されるものである。実際の検体
にはこのような成分が0に近い濃度から分析値に影響を
与える濃度までさまざまな割合で含まれている。
【0015】図2の測定結果によれば、副波長λr(=
550nm)での反応誘起試薬R2添加後の吸光度変化
は下方の実線で示されるようになり、これを反応誘起試
薬R2添加前の吸光度Ar1から液量補正係数Vcにより
推定される破線の推定値と比較すると差があることがわ
かる。この差は溶血血清の溶血に基づく吸光度変化の影
響である。このとき、主波長λsにおける実測値の吸光
度変化には直接ビリルビンに相当する吸光度変化と溶血
による吸光度変化が含まれている。副波長λrにおける
実測値と推定値との差が許容値以上であれば、主波長λ
sによる吸光度変化から求められる直接ビリルビン濃度
が正確でないと判断することができる。
【0016】
【発明の効果】本発明では目的成分濃度を求める主波長
のほかに目的成分を検出しない副波長での吸光度変化を
用いて自己検体ブランク法により分析された濃度が理論
通りに検体ブランクの影響を補正して得られた値である
か否かを判定することができるので、分析値の正確さの
信頼度の向上を図ることができるようになる。シングル
ラインマルチアナリシス自動分析装置において、分析試
薬の相互汚染(クロスコンタミネーション)により副反
応が生じたり、検体により濁りを生じる可能性がある。
これらについても分析目的成分の非測定波長における反
応誘起試薬の添加前と添加後の両吸光度の差から判断す
ることができ、分析目的成分への干渉の有無を判定する
ことができるようになる。
【図面の簡単な説明】
【図1】本発明の動作を示す図である。
【図2】本発明を直接ビリルビン分析に適用した場合の
反応タイムコースを示す図である。
【図3】直接ビリルビンに影響を及ぼす血清中の検体ブ
ランク成分の吸収スペクトルを示す図である。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 分析目的成分を含む試料に分析試薬を加
    え、それによって生じる化学反応を吸光度の変化により
    定量する吸光光度分析法において、目的とする反応に必
    要な分析試薬成分のうち、少なくとも1つを欠いている
    反応補助試薬と試料との混合液を調製し、次いでこれに
    前記反応補助試薬に含まれていなかった目的とする反応
    に必要な反応誘起試薬を添加して反応液を調製し、前記
    混合液及び反応液について分析目的成分を検出する主波
    長及び検出しない副波長で吸光度を測定し、両液の主波
    長での測定値又は主波長での測定値及び副波長での測定
    値から分析目的成分の濃度を求め、副波長での両液の測
    定値の差が許容値内であるか否かにより前記の求められ
    た濃度の正確さを判定することを特徴とする自動分析装
    置の吸光光度分析法。
JP10204492A 1992-03-27 1992-03-27 自動分析装置の吸光光度分析法 Pending JPH06180285A (ja)

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JP (1) JPH06180285A (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007248276A (ja) * 2006-03-16 2007-09-27 Sysmex Corp 試料分析方法および試料分析装置
JP2017198623A (ja) * 2016-04-28 2017-11-02 シャープライフサイエンス株式会社 測定装置及び測定方法

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