JPH06183992A - 抗アレルギー作用を有する物質とその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 副作用の少ない新規な抗アレルギー作用を有
する物質を提供することを目的とする。 【構成】 帽菌目イボタケ科の食用キノコの菌糸体また
は子実体またはその培地から、熱水またはアルカリ水に
よる抽出処理、酸添加による沈澱形成処理、アルカリに
よる可溶化処理、塩析処理のうち、少なくとも１つの処
理を経たとき、加水分解すれば、１６種類以上のアミノ
酸、Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノースが得られる、分子
量約１００万の新規な、副作用の極めて少ない抗アレル
ギー作用を有する複合糖質を提供するものである。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、帽菌目イボタケ科のキ
ノコの子実体または菌糸体またはその培地から得られた
抗アレルギー作用を有する物質に関する。

【０００２】

【従来の技術】自巳の生体内に出現した異常細胞や、侵
入してきた病原微生物等を速やかに認識し、排除する生
体の恒常性を維持する基本的な役割を、免疫は担ってい
る。しかし、免疫機構が生体にとってマイナスに働くこ
とがあり、それがアレルギー反応である。

【０００３】一般によく知られている花粉症、気管支瑞
息、じんましん、アレルギー性鼻炎、枯草熱などのアレ
ルギーは、アナフィラキシー型アレルギーと呼ばれ、血
中にヒスタミン、セロトニン、ブラジキニン、プロスタ
グランジン、ＳＲＳ−Ａ等が増加し、これらにより毛細
血管の透過性亢進、平滑筋収縮、線分泌亢進等が起こり
アレルギー症状が現れるものである。

【０００４】従来、この様なアレルギーの治療には、一
般に広く抗ヒスタミン剤、ステロイド剤が用いられてい
る。しかし、前者には、眠気および倦怠感の惹起、後者
には、浮腫、ムーンフェイスおよび副腎機能の低下等の
重篤な副作用が知られており、それらの副作用の少ない
薬剤の創造が望まれていた。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明者等は、天然物
由来の副作用の少ない抗アレルギー剤を開発する目的で
検討した結果、帽菌目イボタケ科に属する食用のキノコ
の中に、アレルギー症状に効果を奏する成分があること
を知った。

【０００６】これら帽菌目イボタケ科の食用のキノコの
例としては、傘の中央がくぼんだ漏斗状で表面に鱗被が
あり、裏にはトゲ状の突起が密生していて、乾燥すると
特有の香気を出すコウタケや、その他シシタケ等が挙げ
られる。これらのキノコは、例えば信州地方で、古くか
ら食用キノコとして食され続けられているものであっ
て、その安全性は歴史的にも確認されている。

【０００７】本発明者等は、これら食用キノコにつき、
研究を重ねた結果、子実体または菌糸体またはその培地
から、抗アレルギー成分を単離し、その製造方法の確立
を行うことが出来た。

【０００８】すなわち、帽菌目イボタケ科の食用キノコ
の子実体または菌糸体またはその培地中の抗アレルギー
作用を有する有効成分が、アルカリ抽出、熱水抽出した
場合または低濃度の電解質溶液による塩析処理、たとえ
ば０．２Ｍの塩化ナトリウム溶液で塩析処理した場合
は、液画分中に抗アレルギー作用を有する有効成分が存
在または移行し、また、冷却した場合または酸を添加し
た場合または高濃度の電解質溶液による塩折処理、例え
ば６０％の硫酸アンモニウム溶液で塩析処理した場合
は、沈澱画分中に、抗アレルギー作用を有する有効成分
が存在または移行することに着目し、これらの処理のう
ち少なくとも１つの処理を経て、セルロースアセテート
膜電気泳動で単一バンドとなり、かつ液体クロマトグラ
フ法で単一ピークとなる、分子量１００万の副作用が極
めて低い優れた抗アレルギー作用を持つ複合糖質及びそ
の製造方法を提供する。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明では、帽菌目イボ
タケ科の食用キノコを研究の対象とし、長野県産の当該
キノコの子実体またはその子実体組織から人工培養によ
って得られた菌糸体またはその培地を原料に用いた。

【００１０】処理に前後し、キノコに含まれる低分子化
合物、例えば単糖類、脂肪等を取り除くため、メタノー
ル、エタノール、ｎ−プロパノール等の低級アルコー
ル、またはピリジン、アセトン等の極性有機溶媒、また
はベンゼン、トルエン、キシレン、ｎ−ヘキサン、クロ
ロホルム、四塩化炭素、酢酸エチル等の非極性有機溶
媒、または常温の水、更にはこれらの組み合わせによる
低分子除去処理を加えることが好ましい。

【００１１】熱水またはアルカリで、有効成分を抽出ま
たは可溶化する処理において、有効成分抽出のためのア
ルカリはより好ましくは３％程度の水酸化ナトリウム溶
液または１Ｎ＼２Ｎ程度のアンモニア等である。また、
アルカリ抽出処理は、熱水による抽出処理より、少ない
抽出液の量または回数で、多くの有効成分を抽出でき、
多量の有効成分を得る場合または産業的には、アルカリ
抽出処理のほうがより有利である。

【００１２】冷却、酸の添加または塩析によって有効性
成分を沈澱または保持させる処理において、沈殿を生じ
させるｐＨは２．０以下が好ましく、添加する酸は有機
酸または無機酸が使用可能であるが、塩酸等を用いるこ
とがより好ましく、塩析には、０．２Ｍの塩化ナナトリ
ウム溶液から６０％前後の硫酸アンモニウム溶液によっ
て分画される画分をとることが好ましい。

【００１３】また、必要に応じて、これらの処理に前後
して、透析処理、濃縮処理または乾燥処理等も用い、沈
澱と上清の分取は遠心分離等の一般的な分取の手法によ
って楽に行うことができ、透析処理には通常のセルロー
ス膜または電気透析器を用いることができ、濃縮操作に
はロータリーエバポレーター等を用い減圧加熱する操作
が適している。

【００１４】得られた物質は、減圧加熱または凍結乾燥
により乾燥し、得られた乾燥固形物は、室温で保存可能
であり、必要ならば粉砕し、常法に従って散剤、細粒
剤、錠剤、カプセル剤、シロップ剤を製することが可能
である。コウタケの二次菌糸組織培養液の組成の例を参
考例１、継代培養液の組成の例を参考例２、大量培養用
培養液の組成の例を参考例３に示す。

【００１５】

【参考例１】 ポテト抽出液 ２０％ ブドウ糖 ２０％ 寒天 ２％ 抗生物質（クロラムフェニコール） ０．０２％

【参考例２】 ポテト抽出液 ２０％ ブドウ糖 ２０％ 寒天 ２％

【参考例３】 ポテト抽出液 ２０％ ブドウ糖 ２０％

【００１６】

【実施例１】参考例３の培養液で培養したコウタケの菌
糸体（４５ｇ）をワーリングブレンダーで破砕し、コウ
タケに含まれる単糖類、脂肪等の低分子化合物の除去の
ため、７０℃以上で８０％メタノールを用いて還流を行
う、この８０％メタノール加熱還流処理を３回繰り返し
た後、水を約１１加え、９０℃以上の温度で約１時間還
流抽出する。この水による加熱還流抽出処理を４回繰り
返し、熱水抽出液を合わせ、この液に塩酸を加えてｐＨ
２．０に調整して沈澱を形成させ、５０００ｒ．ｐ．
ｍ、２０分間の遠心分離を行い、沈澱画分を分取する。

【００１７】次にこの沈澱画分に２Ｎのアンモニア水１
０ｍｌを加え、有効成分の可溶化処理を行い、得られた
溶液をセルロース膜にて透析した後、ロータリーエバポ
レーター等にて濃縮、乾固する。

【００１８】次に、乾固物に０．２Ｍの塩化ナトリウム
溶液１００ｍｌを加えて塩析処理を行い、５０００ｒ．
ｐ．ｍ、２０分間の遠心分離にて沈澱物を除去し、上清
画分をセルロース膜にて透析する 透析後、ロータリー
エバポレーター等にて濃縮し、６０％の硫酸アンモニウ
ム溶液を加えて１０分間攪拌した後、溶解しない沈澱画
分を５０００ｒ．ｐ．ｍ、２０分間の遠心分離にて分取
し、透折にて硫酸アンモニウムを除去した後、ロータリ
ーエバポレーター等にて濃縮、乾固し、目的物質である
抗アレルギー作用を有する、セルロースアセテート膜電
気泳動（プレート：ヘレナラブラトリー製ＴＩＴＡＮＩ
ＩＩ（６０×７６ｍｍ）、電流：２ｍＡ／ｃｍ、緩衝
液：０．０２Ｍ酢酸カルシウム溶液、染色液：０．５％
アクリジンオレンジ３％酢酸溶液）で単一バンドとな
り、かつ液体クロマトグラフ法にて単一ピークとなる分
子量１００万の複合糖質５．６ｍｇを得る。

【００１９】ｉ）液体クロマトグラフ法 操作条件 検出器 紫外吸光光度計（測定波長：２００ｎｍ） カラム アサヒパックＧＳ−５１０（７．６×５００
ｃｍ） 移動相 蒸留水 流速 １．０ｍｌ／ｍｉｎ． 保持時間 ６．９１２ｍｉｎ． ｉｉ）ＩＲスペクトル 波数２９００、２８５０、１６５０、１５３０、１３８
０、１０９０ｃｍ^−１付近に特有の吸収を示す。 ｉｉｉ）定性反応 ビューレット反応 ：陽注 キサントプロテイン反応：陽性 フェーリング反応 ：陽性 アントローン反応 ：陽性 ｉＶ）目的物質の複合糖質の加水分解物には、Ｄ−グル
コース、Ｄ−マンノース及びアミノ酸、Ａｓｐ．Ｔｈ
ｒ．Ｓｅｒ．Ｇｌｙ．Ｇｌｕ．Ａｌａ，Ｃｙｓ．Ｖａ
ｌ．Ｍｅｔ．Ｉｌｅ．Ｌｅｕ．Ｔｙｒ．Ｐｈｅ．Ｌｙ
ｓ．Ｈｉｓ．Ａｒｇ、が含まれる。

【００２０】

【実施例２】参考例３の培養液で培養したコウタケの菌
糸体（４５ｇ）をワーリングブレンダーで破砕し、コウ
タケに含まれる単糖類、脂肪等の低分子化合物の除去の
ため、７０℃以上で８０％メタノールを用いて還流を行
う。この８０％メタノール加熱還流処理を３回繰り返し
た後、水を約１ｌ加え、９０℃以上の温度て約１時間還
流抽出する。その俊、ろ過し、得られた残渣を３％水酸
化ナトリウム溶液で抽出し、得られた抽出液を濃縮、乾
固する。

【００２１】次にこの濃縮、乾固物に１Ｎのアンモニア
水１０ｍｌを加え、有効成分の可溶化処理を行い、遠心
分離で沈澱物を取リ除き、得られた溶液をセルロース膜
にて透析した後、濃縮し、塩酸でｐＨ２に調整した後、
沈澱を分取する。

【００２２】更に、乾固物に０．２Ｍの塩化ナトリウム
溶液を加えて塩折処理を行い、遠心分離にて沈澱物を除
去し、上清画分をセルロース膜にて透折する、透析後、
ロータリーエバポレーター等にて濃縮し、６０％の硫酸
アンモニウム溶液を加えて、溶解しない沈殿画分を遠心
分離にて分取し、透析にて硫酸アンモニウムを除去した
後、ロータリーエバポレーター等にて濃縮、乾固し、目
的物質である抗アレルギー作用を有する、セルロースア
セテート膜電気泳動（プレート：ヘレナラブラトリー製
ＴＩＴＡＮＩＩＩ（６０×７６ｍｍ）、電流：２ｍＡ／
ｃｍ、緩衝液：０．０２Ｍ酢酸カルシウム溶液、染色
液：０．５％アクリジンオレンジ３％酢酸溶液）で単一
バンドとなり、かつ液体クロマトグラフ法にて単一ピー
クとなる分子量１００万の複台糖質２１．４ｍｇを得
る。

【００２３】

【実施例３】実施例１に用いたキノコの培養液をろ過
し、ろ液に塩酸を加えてｐＨ２．０に調整して、沈澱を
生成させ、５０００ｒ．ｐ．ｍ、２０分の遠心分離にて
沈澱画分を分取し、透析、濃縮を行い１３５ｍｇの乾燥
固形物を得る、この乾燥固形物に２Ｎのアンモニア水を
加え、有効成分の可溶化処理を行い、得られた溶液をセ
ルロース膜にて透析した後、ロータリーエバポレーター
等にて濃縮乾燥して、沈澱画分である固形物を得る。

【００２４】以下、実施例１と同様に処理して目的物質
である抗アレルギー作用を有するセルロースアセテート
膜電気泳動（プレート：ヘレナラブラトリー製ＴＩＴＡ
ＮＩＩＩ（６０×７６ｍｍ）、電流：２ｍＡ／ｃｍ、緩
衝液：０．０２Ｍ酢酸カルシウム溶液、染色液：０．５
％アクリジンオレンジ３％酢酸溶液）で単一バンドとな
り、かつ液体クロマトグラフ法にて単一ピークとなる分
子量１００万の複合糖質７．０ｍｇを得た。

【００２５】

【実施例４】コウタケ子実体２００ｇをワーリングブレ
ンダーにて粉砕し、熱水にて抽出し、その熱水抽出液に
ＨＣｌを加え、ｐＨを２．０とし、塩酸添加により生じ
た沈澱を５０００ｒ．ｐ．ｍ、２０分の遠心分離にて沈
澱画分を分取する。その｛｛取した沈澱画分を１，５Ｎ
のアンモニア水に溶解し、その溶解液を透析にてアンモ
ニアを除去した後、濃縮、乾固する。得られた固形物に
０．２Ｍの塩化ナトリウム溶液を加えて、上清画分を５
０００ｒ．ｐ．ｍ、２０分の遠心分離にて分取し、透折
後濃縮、乾固する，その乾固物に６０％の硫酸アンモニ
ウム溶液を加えて１０分間攪拌した後、同様に遠心分離
を行い、沈澱画分を分取し、透析後、濃縮、乾固し、抗
アレルギー作用を有する分子量１００万の目的とする複
合糖質３．０ｍｇを得た。

【００２６】

【発明の効果】我々は、帽菌目イボタケ科の食用キノコ
の菌糸体、子実体またはその培地から単離した抗アレル
ギー作用を示す複合糖質を既知の代表的な抗アレルギー
剤である塩酸ジフェンヒドラミンを対照薬として、その
抗アレルギー作用の効力を、次に示す方法により試験を
行った。

【００２７】その結果代表的な抗アレルギー剤である塩
酸ジフェンヒドラミンより、約１０倍以上の高い抗アレ
ルギー作用を示した。

【００２８】

【表１】

【００２９】抗アレルギー作用試験；モルモットｈｅｔ
ｅｒｏｌｏｇｏｕｓ （４ｈｒ）ＰＣＡ反応抑制試験を
準用し、生理食塩水で１０２４倍希釈（ｖ／ｖ）したウ
サギ抗β−ラクトグロブリン抗血清と、コウタケから得
られた試料または抗ヒスタミン剤の塩酸ジフェンヒドラ
ミンを含む（０．１＼１．０ｍｇ／ｍｌ）生理食塩水を
等量づつ混合し、３７℃で３０分間インキュベートした
後、モルモット背部皮内に肩甲骨上と腸骨上は避けて背
中線を境にサンプル血清とコントロール血清がとなり合
うように、片側に３点ずつの計６点、各々０．１ｍｌず
つを注射し、皮内感作から４時間後に抗原液β−ラクト
グロブリン溶液０．５ｍｌをサフェナ静脈より注射し、
３０分後に撲殺放血致死させ、背部皮膚を剥離し、皮膚
裏側より色素漏出の長径及び短径を計測し、コントロー
ル抗血清感作部のものと比較して、そのＰＣＡ反応抑制
率を求める。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１の液クロチャート

【図２】実施例１のＩＲ

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 藤本 導大郎 大阪府松原市西大塚１丁目３番40号 藤本 製薬株式会社内 (72)発明者 島津 誠一郎 大阪府松原市西大塚１丁目３番40号 藤本 製薬株式会社内 (72)発明者 立川 奈津恵 大阪府松原市西大塚１丁目３番40号 藤本 製薬株式会社内

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 帽菌目イボタケ科のキノコの子実体また
   は菌糸体またはその培地から、熱水、アルカリによる処
   理、また、冷却、酸または塩祈による処理、のうち、少
   なくとも１つの処理を経たとき、１６種類以上のアミノ
   酸、Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノースから構成され、次
   の性質を有する ｉ） 液体クロマトグラフ法操作条件 検出器 紫外吸光光度計（測定波長：２００ｎｍ） カラム アサヒパック ＧＳ−５１０（７．６×５００
   ｃｍ） 移動相 蒸留水 流速 １．０ｍｌ ｍｉｎ． の液体クロマトグラフ法にて保持時間６．９ｍｉｎ付近
   にピークとして現れ、 ｉｉ）赤外吸収スペクトルにて 波数 ２９００、２８５０、１６５０、１５３０、１３
   ８０、１０９０ｃｍ^−１付近に特有の吸収を示す。分子
   量１００万の抗アレルギー作用を有する複合糖質。
2. 【請求項２】 帽菌目イボタケ科のキノコの菌糸体また
   は子実体またはその培地から、熱水、アルカリによる処
   理、また、冷却、酸または塩析による処理、のうち、少
   なくとも１つの処理を経て、１６種類以上のアミノ酸、
   Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノースから構成され、分子量
   約１００万の抗アレルギー作用を有する請求項１記載の
   複合糖質を製造する方法。
3. 【請求項３】 抽出操作がアルカリを用いた抽出処理で
   あることを特徴とする請求項２記載の複合糖質の製造方
   法。
4. 【請求項４】 アルカリによる抽出処理において、用い
   るアルカリが３％の水酸化ナトリウム溶液であることを
   特徴とする請求項３記載の複合糖質の製造方法。
5. 【請求項５】 塩析処理において、０．２Ｍの塩化ナト
   リウム溶液ないし６０％の硫酸アンモニウム溶液により
   分画される画分を分取することを特徴とする請求項２記
   載の複合糖質の製造方法。
6. 【請求項６】 酸添加によりｐＨを２．０以下に調整す
   る沈澱化処理を特徴とする請求項２記載の複合糖質の製
   造方法。