JPS6041489A - 新規生理活性物質ｋ―２５２ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な生理活性物質およびその製造法に関する
。

本発明者らは、有用な医薬品またはその中間体となり得
る新規生理活性物質を提供するという目的のもとに、天
然界より入手した数多くの微生物の生産物について研究
を行った。その結果、放線菌に属する微生物の培養物中
に抗ヒスタミン遊＾１【作用を有し、抗アレルギー作用
を有する生理活性物質が生産される事実を見い出した。

ついで、該培養物から該物質を単離、精製し、その理化
学的性質を間べたところ新規生理活性物質であることが
判明した。以下核物質をに−２５２と称し、その物性な
らびに製造法について記述する。

本発明の生理活性物質の生産には、放線菌に属する微生
物が用いられる。具体的に好適な一例として本発明者ら
が東京都町田市旭町より型部１したＫ　−２５２株があ
げられる。

Ｋ−２５２菌株の形態的特徴および生理的性質を観察、
試験した結果は次の通りである。

■　形態的特徴 本菌株は、一般に使用されている合成および天然培地上
で中程度の生育をする。気中菌糸は中程度に形成され、
その色調は白であるが、グルコース、アスパラギン寒天
培地では比較的豊富に形成される。胞子は、気中菌糸か
ら単純分岐した先端に１”０１１Ｍもしくはそれ以上が
連鎖をなし屈曲状である。胞子の形態は楕円〜押型で多
きさは０．４〜０．７μ×１．０〜１．５μであり、電
子顕微鏡観察による胞子表面は平滑であり、鞭毛は認め
られない。

また胞子のうも見い出されない。長生菌糸は淡黄色で、
多くの分岐と分断が観察され、菌糸の先端あるいは途中
に膨潤した箇所も認められる。

■　各種培地上での生育状態 本菌株を各種培地上で生育さゼたときの生育。

「ムなどについて以下に示す。色の表示はＧｏｌｏｒｌ
ｌａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ　（ｃｏｎｔａｉｎｅｒ
　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆＡｍｅｒｉｃａ）によ
る色の分類に従ったものである。

（１）　シュクロース・硝酸塩寒天培地生育＝Ｗ通 気中菌糸：な　し 長生菌糸の色：クリーム（１％ｃａ　）可溶性色素：な
　し く２）　グルコース・アスパラギン寒天培地体　育：良
　好 気中菌糸：豊富、白色（ａ） 長生菌糸の色ニライト・アイポリ−（２ｃａ）可溶性色
素：な　し く３）　グルセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ＃
５培地、ディフコ） 生育：普通 気中菌糸：普通、白色（ａ） 暴生菌糸の色；クリーム（１％ｃａ） 可溶性色素：な　し く４）　スターチ寒天培地（ＩＳＰｔｔ４培地、ディフ
コ） 生　育：貧弱〜普通 気中菌糸：貧弱、白色（ａ） 長生菌糸の色：パーチメント（Ｉｃｂ）可溶性色素：な
　し く５）　チロシン寒天培地（ＩＳＰ＃７培地、ディフコ
） 生　育：貧弱〜普通 気中菌糸：普通、白色（ａ） 長生菌糸の色：クリーム（１！４ｃａ）可溶性色素；な
　し く（ｉｌ　栄養寒天培地 生Ｙ￥：普通 気中菌糸：首通、白色（ａ） 長生菌糸の色ニライト・アイポリ−（２ｃａ）〜ライト
・ウィート　（２ｅ　ａ） 可溶性色素：な　し ＋７１　４−ｙ、　ｌ・−麦芽寒天培地（ｌＳＰ＃２培
地。

ディフコ） 生育：良好 気中菌糸：普通、白色（ａ） 長生菌糸の色：バンブー（２６ｃ）〜ゴールド（２ｊ！
　ｃ）可溶性色素：スヮンユ・イエロー（２ｉａ）のご
く薄い色 （８）　オートミール寒天培地 ４ｉ　育：貧　弱 気中菌糸：貧弱、白色（ａ） 長生菌糸の色ニライト・アイポリ−（２ｃ　ａ）可溶性
色素：な　し く９）　ペプトン・イースト欽寒天培地生　育：普通 気中菌糸：な　し 長生菌糸の色：コロニアル・イエロー（２ｇａ）〜クリ
ーム　（１％ｃ１１＞ 可溶１１色素：な　し ＩＩ＋　生理的性質 に−２５２菌株の生理的諸性質を以下に示す。

温度ならびにミルク、繊維素に対する作用以外のものに
ついては２８℃で３週間後の観察結果を示し、温度は２
日後、ミルクおよび繊維素に対する作用については２８
°Ｃで１力月後の結果を示す。

ｆｉ＋　炭素源の資化性：Ｄ−グルコース、イノシトー
ル、Ｌ−ラムノースを資化するが、Ｌ−アラビノース、
Ｄ−キシロース、Ｄ−フラジＩ・−ス。

シュクロース、ラフィノース、Ｉ）−マンニットは資化
しない。

（２）ゲラチンの液化作用：な　し く３）脱脂牛乳の凝固、ペプトン化：凝固作用ないが、
ペプトン化する。

（４）繊維素の分解作用；な　し く５）　スターチの加水分解作用：あ　リ（６）生育温
度範囲二１０〜３８℃、至通は２２〜３３℃ （７）　メラニン様色素の生成：な　しＫ　−２５２菌
株は、長い気中菌糸に胞子鎖を形成し、基中菌糸に分断
の認められる中温菌であり、細胞壁の分析により、メソ
−ジアミノピメリン酸を含有し、また菌体の糖の分析に
よりアラビノースおよびマジュロースを含まないことが
ら、放線菌のノカルディオプシス属に属する菌株である
。

、１、っ”ζ該Ｉく　２５２菌株をノカルディオプシス
・Ｓ　ｌ）・Ｋ　−２５２と命名した。該菌株は米国Ａ
ＲＳカルチャーコレクションにＮ　ＲＲＩ−１５５３２
として寄託されている。

本発明のに一２５２生産菌株の培養においては通常の放
線菌の培養法が一般に用いられる。　゛炭°素源として
はグルコース、デン粉、マンノース、フラクトース、シ
ュクロース、糖蜜などが単独または組合せて用いられる
。さらに菌の資化性によっては炭化水素、アルコール類
、有機酸なども用い得る。

窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、
尿素、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウムなどの含窒素
化合物が、またペプトン、肉エキス。

Ｍ〜エキス、乾燥酵母、クーンスチープリカー。

大豆粉、カザミノ酸、ソリｊプル・ベジタブル・プロテ
ィンなどの窒素含有天然物が単独または組合わゼ“ζ用
いられる。そのほか、必要に応じ゛ζ食ｊＪＡ　、塩化
カリ、炭酸カルシウム、燐酸塩などの無機塩類を加える
ほか、本菌株のη二育やに−２５２の生産を促進する有
機物や無機物を適宜添加することができる。

培養法としては、液体培養、とくに深部攪拌培養法が最
も適している。培＃濃度は２５〜４０゛Ｃ１ｐ　Ｈは中
性付近で培養することが望ましい。液体培養で通常６日
ないし７日培養を行うと、Ｋ−２５２が培養液中に生成
蓄積される。培養液中の蓄積量が最大に達したときに培
養を停止し菌体を濾別して得られる培養濾液および菌体
中より目的物質を単離、精製する。

培養濾液および菌体からのに−２５２の単ｌ１ｌｌｌ。

精製には、微生物代謝産物を単ア１［するために通常用
いられる方法が利用される。Ｋ−２５２は後述するよう
に脂溶性物質であるので、これらの性質を利用した精製
法が用いられる。ずなわら、活性炭、ダイヤイオンＨＰ
−１０（吸着樹脂、三菱化成）などによる吸脱着、シリ
カゲルカラムクロマトグラフィー、シラナイズドシリカ
ゲル力うムクロマトグラフィー、セファデックスＬＨ−
２０（イオン交ＩＡ　体、ファーマシア・ファインケミ
カルズ）カラムクロマトグラフィーなどの方法を適当に
組み合わせあるいは繰り返すことによって純粋に採取す
ることができる。次にその一例を示す。

培養濾液をｐ　Ｈ無調整のままダイヤイオンＨＰ−１０
を充填したカラムに通塔する。Ｋ　−２５２を樹脂に吸
着さゼた後、水洗を行い、更に３０％アセトン水溶液で
十分に洗浄し１００％アセトンで溶出する。Ｋ−２５２
を含む両分を集め減圧下でアセトンを留去した後、酢酸
エチルで抽出を行い、酢酸エチル層を減圧下で濃縮をす
る。

さらに、この内容物を少量のクロロホルムに溶解し、ク
ロロポルムを用いて充填したシリカゲルカラムの上端に
のゼシリカゲルに吸着させる。り１：Ｉ　ＩＪホルムで
充分に洗浄後、クロロホルム：メタ／−ル＝９８　：　
２　（Ｖ／Ｖ　）　テ溶出する。Ｋ　−２５２を含む両
分を集め、減圧下で溶媒を留去した後乾固さセる。内容
物を少量のクロロポルムに溶解した後メタノールを加え
５℃で放置すると淡黄色柱状結晶が得られる。

菌体中からのＫ　−２５２の単離、＄ｎ製に当たっＣは
、メタノール水溶液、アセトン水溶液などの含水溶媒に
よって抽出され、無水溶媒でさらに収率よく抽出される
。例えば菌体からメタノールを用いて抽出したに一２５
２溶液は濃縮し、減圧下でメタノールを留去した後、酢
酸エチル抽出を行う。以後培養濾液からに−２５２を単
離する場合に用いた精製法と同じ操作を用いることによ
り純粋にに、−２５２を単離することができる。

」二記精製工程中のに−２５２の検出はケイ光剤入りシ
リカゲルを用いた薄層クロマトグラフィーを行い、つい
でヨウ素反応又は２５３７人の紫外線照射法により行っ
た。

かくして得られたに−２５２の理化学的性質は以下に示
す通りである。

Ｋ−２５２の理化学的性質 性　状：淡黄色柱状結晶 融　点：２６２〜２７３℃（分解） 比旋光度：　〔α）”＝−２３，２°　（Ｃ＝０．５゜
ＣＩ　Ｃ１２３） 溶解性：クロロポルム、アセトニトリル、アセ］・ン、
ジＡキサン、テトラヒトＩ＋フラン、ピリジンに易溶、
エタノール、メ タノール、１−プロパツール、酢酸エ チル、ｎ−ブタノールに可溶、アルカ リ性水、酸性水、２−プロパツールな どに不溶解。

呈色反応：ヨウ素およびニンヒドリンの各反応に陽性、
塩化第二鉄およびライドンス ミスの各反応に陰性。

紫外部吸収スペクトル（エタノール）：第１図赤外部吸
収スペクトル（ＫＢｒ）：第２図マススペクトル二本物
質のマススペクトルは、次のような分子イオンおよびフ
ラグメ ントイオンを与える。

４Ｇ７．　４２４．　４０６．　３ｔ３４．　３３７゜
　２１ 元素分ｔｌｉ’：１１４．４７．Ｃ６９，０８，Ｎ８．
７９％（実測値）、ＣｚｔＨｚ＋Ｎｓ　Ｏｓ　としてＩ
＋４．５２．　Ｃ（ｉ９．３７．　ＮＯ，９８％　（旧
　算イ直）ＰＭＲスヘク１．ル（ＣＩ）Ｃ７！：＋　）
　：　６　（Ｉ）　ｐＨ１）２．１６（３１１，ｓ）、
２．８１（Ｉｌｌ、ｄｄ、、１−４．９．　１４．２）
。

３．４４（ＩＩＩ、ｄｄ、Ｊ−７，１，］、４．２）、
　４．０８（３１１，Ｓ）。

４、（ｉｌ（ＩＩＩ、ｄ、、Ｉ−］７．０）、４．６９
（Ｉｌｌ、ｄ、Ｊ−１７，０）。

５．４６（ＩＩＩ、ｂｒｓ）、６．７９（ＩＩＩ、ｄｄ
、Ｊ−・４．９．　７．１）。

７．０　〜７．６　（６１１，ｍ）　、７．７　〜１１
．０　（２１１，ｍ）。

８．８７（Ｉｌｌ、ｄ、Ｊ＝７．８） ｃ　Ｎ＋　Ｒスペクトル（ＣＤ（１３）：δ（ｐ　ｐｍ
　）２２．８．４２．４，４５．９．５３．３，８４．
９，８５．７゜９９．５，１０７．２，１１４．２．　
１１４．７．　１１６．４゜１１７．８．　１１９．３
．　１２０．５．　１２０．７．　１２２．１゜１２３
．９，１２４．９，１２５．０．　＋２５．５，１２５
．１１゜＋２９．０，１３２．３，１３６．８．　１４
０．３．　１７２．５゜１７３．５ 以」二のデーターよりに−２５２は新規化合物でＪ）る
ことが判明した。

次に各種展開溶剤によるＫ　−２５２の薄層クロマトグ
ラフィーのＲｆ値を第１表に示す。検出は２５３７人の
紫外線照射により行った。

第１表 に−２５２のシリカゲル薄層クロマトグラフィー展　開
　溶　剤　Ｒｆ値 １　クロロポルム　０．０５ ２　酢酸エチル　０．３５ ３　クロロポルム：メタノール　０．６＝９−１　（ν
／Ｖ） ４　メタノール　０．７ 薄層：キーゼルゲル６０Ｆｚｓ４　（メルク社）展開：
室温、上昇法、１．５時間 次にに−２５２の抗アレルギー、抗ヒスタミン遊離作用
を実験例により説明する。

実験例１゜ ラットの４８時時間積属受月皮ＩＦＦアナフィラートシ
ー（ｂｏｍｏｌｏＢｏｕｓ　ＰＣＡ）に対する作用■）
抗卵白アルブミンラット血ｌｎのＩＩＭＳＬｏｔｌａｎ
ｄおよび５ｈａｒｅの方法（Ｃａｎａｄ、　Ｊ。

Ｐｌ＋ｙｓｉｏｌ／　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　５２．１
１１４　（１９７４）　）によって抗卵白アルブミンラ
ット血清を間装した。

すなわち、１■の卵白アルブミンを水酸化アルミニウム
ゲル２０ａｗ及び百日咳ジフテリア破傷風混合ワクチン
０．５ｍｌと混和し、体重１８０〜２２０　ｇのラット
の足砿皮内に４分割して投与した。１４日後、頚動脈か
ら採血し、血清を分離し一ζ−８０℃で凍結保存した。

この抗血清の４８時間同種属受身皮膚アナフィラキシ−
の力価は１：３２であった。

２）４８時時間積属受Ｉ皮膚アナフィラキシ一体ｆｆｘ
１４０〜１６０ｇのラットＩＹ部皮内に、生理食塩液で
８倍に希釈した卵白アルブミンラじ１血清０．０５ｍ１
を注射し゛ζ受動的に感作した。

４８時間後、抗原卵白アルブミン２■を含む１％工ヴア
ンス・ブルー液０．５ｍｌを尾静脈内投すした。３０分
後、動物を放血致死させ、皮屑を剥離して青染部の漏出
色素量をＫａＬａｙａｍａ　らの方法［Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　２２．８９．　（１９７Ｂ
）　）にしたがい測定した。ずなわら、青染部をＩＮＫ
　Ｏ１１中で３７℃、２４時間イン４−ユベー１−　シ
、ついで０．６Ｎリン酸−アセトン混液で抽出９分光）
℃度剖により波長６２０μｍにおける吸光度を測定し、
予め作成した検量線より定量した。

３）実験成績 第２表 た。

（〕）：対照ｊＹの平均値に対する各個体の漏出色ｉ１
￥量から算出した。

第２表ニ示すヨうＣ＝に−２５２１，１０ｍｇ／ｋｇ経
口投与した場合、対照群に比べ漏出色素量の減少が認め
られた。

実験例２゜ ジノ１腹腔浸出細胞からのヒスタミン遊離に及ぼず影響 １）ラット腹腔細胞浮Ｍｎ液の調製とヒスタミン遊離 体重１５０〜１８０ｇのラットを乾エーテル麻酔下に放
血致死せしめ、５ｕｌｌｉｖａｎらの方法（Ｊ、　Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ、　＋１４．１４７３．　（１９７５））に
準じて作製した肥満細胞用培液（ｍａｓｔ　ｃｅｌｌ　
ｍｅｄｉｕｍ　）（ＭＣＭと略記２組成：　１５（１ｍ
Ｍ　Ｎａ（、ｊ！。

３、”ＩｍＭ　ＫＣｌ、３ｍＭ　Ｎａｚ　ＩＩＰＯａ　
。

３．５ｍＭ　ＫＨｚ　ＰＯａ　、１ｍＭ　ＣａＣｆｆ。

５、５　ｍ　Ｍグルコース、０．１％牛血ｌｒ１アルブ
ミン。

１０Ｕ／ｍｌヘパリン）　、６ｍｌ／ａｎｉｍａｌを腹
腔内に注入した。腹部を２分間マツサージした後、開腹
し腹腔内浸出液を採取した。６匹より望めた浸出液を４
℃、１１００Ｘで５分間遠心分ｇｌｌ後、沈渣に適量の
水冷ＭＣＭを加えて３皿洗ｉ？＋し、最終的には肥満細
胞数が約３Ｘ１０’ｃｅｌｌｓ　／ｍｌとなるように細
胞７２Ｍ液（ｐｅｒ　ｉ　Ｌｏｎｅａ　Ｉｔｖｕｄａｔ
ｅ　ｃｅｌｌｓ、Ｐ　Ｅ　Ｃと略記）を調製した。

なお、肥’ＩＱＷＭ胞の同定は０．０５％トルイジンブ
ルーで細胞内顆粒を染色することにより行った。

このようにして得たＰＥＣ１ｍ１を３７℃、１０分間プ
レインキュベートシた後、種々の濃度の被検薬液Ｑ、１
ｍｌを加えて１０分間インキュベートし、フォスファチ
ジルーし一セリン１００　ｐ　ｇ／ｍｌ及びコンカナバ
リンＡ１０００＃ｇ／ｍ！それぞれ０．１ｍｌを加えて
さらに１５分間インキュベートした。氷冷した生理食塩
水３ｍｌを加えて反応を停止後、４℃、１ｌ１００Ｘで
１０分間遠心分課して上清と沈渣を得た。上清及び沈渣
のヒスタミン量は小松の方法〔アレルギー舒。

６７（１９７Ｂ））に従い螢光法で測定した。

ヒスタミン遊離率は細胞の総ヒスタミン量に対する上清
のヒスタミン量の百分率として表わした。また次式によ
り被４４に薬液のヒスタミン遊離抑制率を算出した。

００ ２）実験成績 第　３　表 第３表に示すようにに−２５２は濃度依存的にヒスタミ
ン遊離を抑制した。

以下に実施例を示す。

実施例１゜ 種菌としてノカルディオプシス・ＳＰ／に−２５２（Ｎ
ＲＲＬ　１５５３２　号）を用い、第１種培地として、
グルコース０．５ｇ／ｄ１．溶出デンプン３ｇ／ｄ１１
　ソイビーンミール３ｇ／ｄｔ、クーシスチープリ力−
０，５［／ｄ！、酵母エキス０．５ｇ７ｄｌ、炭酸カル
シウム０．３ｇ／ｄｌ（殺菌前ｐ　１１７．２〜７．４
）の培地を用いる。種菌ｌ白菌耳を５０ｍ１人型試験管
に入れた上記種培地１４ｍ１に１ケ１菌し、３０℃で３
１’１間振盪培養する。

この種培ａ液４ｍｌを３００ｍ１容エルレンマイヤーソ
ラスコに入った４０ｍ１の第２種培地に４１６菌する。

第２種培地の組成は第１種培地の組成と同しである。第
２種培養は３０°Ｃで、３日間行う。この第２種培養液
４０ｍ１を２ｊ！容バッフル付きエルレンマイヤーフラ
スコ入った３００ｍ１の第３種培地に植菌する。第３種
培地の組成は第１種培地の組成と同じである。第３種培
養は３０°Ｃで４日間行う。この第３種培養液９００ｍ
１を３０ｆｆｉ容のステンレス製ジャーファーメンタ−
中の主発酵培地１８７！に植菌する。主発酵培地組成は
ｆｆ１１種培地の組成と同しである。この主発酵培養は
３０゛ｃで７日間通気攪拌方式（回転数３０　（Ｌｒ　
ｐ　ｍ、通気量１８＃／ｍ１ｎ）により行う。

かくして得られる発酵終了液１８１を連続遠心分離四５
０００ｒｐｍ）する。上澄液１８ｆｆｉをタイヤイ、ｔ
ｙＨＰ−１０２βを詰めたカラムに通塔する。Ｋ　−２
５２を樹脂に吸着さゼた抜水６ｐおよび３０％アセトン
水溶液６βで’／３’ｃ　１１’　シ、アセトン４βで
溶出する。

溶出成金てを集めて’Ａ’５１ｉｉシて５３［１ｍｌと
し、酢酸エチル１．６７！で抽出する。酢酸エヂル層を
無水硫酸ナトリウムで脱水後、ｆＡ縮乾固すると濃黄色
の油状物誓約４．９ｇが得られる。この油状物を１０ｍ
１のクロロポルムに溶解し、クロロポルムを用いて充Ｊ
ｉした１５０ｍ１のシリカゲルカラム（ソクーゲル：和
光純薬社製）の上端にの一ロシリカゲルに吸着さセる。

クロロホルム］、　２４！　で？３Ｆ　ｌ＋　４１、ク
ロロボルム：メタノール−９Ｂ：２（Ｖ／Ｖ）で溶出す
る。溶出画分を１５ｇずつ分取するとフラクション番号
８１から１５１にに−２５２が溶出される。この両分を
某め減圧下で濃縮乾固すると約１．４ｇの粗粉末が得ら
れる。このオ■粉末を３．５ｍｌのクロロホルムに溶解
し、３５ｍ１のメタノールを加えて５℃で放置すると約
２日間で８４０１にの淡黄色柱状結晶が得られる。

次に菌体からの分離について述べる。

連続遠心で分別した菌体９００ｇに４１２のメタノール
を加えて攪拌後、２４時間室温に放置する。

菌体を濾別して得られるメタノール抽出成約４βを減圧
濃縮して約２４０ｍ１にし、酢酸エチル１．１βで抽出
する。酢酸エヂル層を無水硫酸ナトリウムで脱水後、濃
縮乾固すると濃黄色の油状物誓約２．０ｇが得られる。

この油状物を５ｍｌのクロｔｒ　；Ｉ・ルムに溶解し、
クロロホルムを用いて充填したＩＯＱｍｌのシリカゲル
カラム（ソクーゲル、和光純薬社裂）の上端にの一〇シ
リカゲルに吸着さゼる。りＩノロボルム６００ｍ１で洗
浄後、クロロボルム：メタノール−９８：２　（Ｖ／Ｖ
）で溶出する。

溶ＩＪｉ　ｉｔ＋ｊ分を１５ｇずつ分取するとソラクシ
ョン番す４１から７３１てに−２５２が溶出される。こ
の両分を集め減圧下で濃縮乾固すると約４２０■の第１
口５１末が（）１られる。この粗粉末を１．１ｍｌのク
ロロホルムに溶解し、１１ｍ１のメタノールを加えて５
℃で放置すると約２日間で約２５０■の淡黄色柱状結晶
が得られる。なお上記ｌｖ製工程中Ｋ　−２５２の検出
はケイ光剤入りシリカゲル（−トーゼルゲル５０　Ｆｚ
ｓａ　、メルク社）を用いた薄層クロマトグラフィーで
行ない、ついでヨウ素反応又は２５３７人の紫外線照射
法により行った。

【図面の簡単な説明】

第１図は、Ｋ−２５２の紫外部吸収スペクトル（エタノ
ール中で測定）である。 第２図は、Ｋ−２５２の赤外部吸収スペクトル（ＫＩ３
ｒ）である。 特８１ｒ出願人（１０２）　協和醗酵工業株式会社＼ｌ
：、５１ノ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）下記理化学的性質を有する新規生理活性物質に−
   ２５２ 性状：淡黄色柱状結晶 融点＝２６２〜２７３℃（分解） 比旋光度：　〔α）”＝−２３，２℃（Ｃ＝０．５゜Ｃ
   ＨＣβ３） 溶解性：クロロホルム、アセＩ・ニトリル、アセトン、
   ジオキサン、テトラヒドロフラ ン、ピリジンに易溶、エタノール、メ タノール、ｌ−プロパツール、酢酸エ ヂル、ｎ−ブタノールに可溶、アルカ リ性水、酸性水、２−プロパツールな どに不溶。 呈色反応：ヨウ素およびニンヒドリンの各反応に陽性、
   塩化第二鉄およびライドンス ミスの各反応に陰性。 紫外部吸収スペクトル（エタノール）　：ｆｆ１ｌＷ赤
   外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）：第２．図マススペクト
   ル二本物質のマススペクトルは、次のような分子イオグ
   およびフラグメ ントイオンを与える。４６７．４２４゜４０６．３６’
   ４，３３７，３２１ 元素分析１（４，４７，Ｃ６９，０Ｂ、Ｈ８，７９％（
   実測値）、ＣｚｑＨｚ＋Ｎ３０ｓ　としてＨ４，５２，
   Ｃ６９，３７，Ｈ８，９８％（計算値） ｒ；　Ｍ　Ｒスペクトル（ＣＤ（１３）：δ（ｐｐｍ）
   ２．１６（３１１，ｓ）、　２．８Ｈ１１１，ｄｄ、　
   Ｊ＝４．９．１４．２）。 ３．４４（ＩＩＩ、ｄｄ、Ｊ＝７．１．１４．２）、　
   ４．０８（３１１，ｓ）。 ４．６１（ＩＩＩ、ｄ、　Ｊ＝１７．０）、　４．６９
   （Ｉｌｌ、ｄ、Ｊ＝１７．０）。 ５．４６（ＩＩＩ、　ｂｒｓ）、　６．７９（ＩＩＩ、
   ｄｄ、　Ｊ＝４．９．７．１）。 ７．０〜７．６　（６１Ｌ　ｍ）、　７．７〜８．０　
   （２１１，ｍＬ８．８７（ＩＩＩ、ｄ、　Ｊ＝７．８）
   ＣＭＲスペクトル（ＣＤＣρ３）：δ（ｐ　ｐ　ｍ）２
   ２．８．４２．４．４５．９．５３．３．８４．９．８
   ５．７．９９．５゜１０７．２．１１４．２．１１４．
   ７．１１６．４．１１７．８．１１９．３゜１２０．５
   ．１２０．７．１２２．１．１２３．９．１２４．９．
   １２５．０゜１２５．５．１２５．８．１２９．０．１
   ３２．３．１３６．８．１４０．３゜１７２．５．１７
   ３．５ （２）　ノカルディオプシス属に属し、Ｋ−２５２生産
   能を有する微生物を培地に培養し、培養物中に１（−２
   ５２を生成蓄積せしめ、該培養物からに−２５２を採取
   することを特徴とする特許理活性物質に−２５２の製造
   法。 （３）該微生物がノカルディオプシス・ＳＰ−に−２５
   ２であることを特徴とする特許請求の範囲第２項記載の
   製造法。