JPH06186230A - 安定な抗体溶液及び抗体の安定化方法 - Google Patents

安定な抗体溶液及び抗体の安定化方法

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JPH06186230A JP4337478A JP33747892A JPH06186230A JP H06186230 A JPH06186230 A JP H06186230A JP 4337478 A JP4337478 A JP 4337478A JP 33747892 A JP33747892 A JP 33747892A JP H06186230 A JPH06186230 A JP H06186230A
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Abstract

(57)【要約】 【構成】 （１）抗体又は標識抗体、（２）アルブミン
及び（３）構造中にナフタレンスルホン酸を含むアゾ系
色素を含有する抗体溶液、及び抗体又は標識抗体の溶液
に、アルブミン及び構造中にナフタレンスルホン酸を含
むアゾ色素を添加することを特徴とする抗体又は標識抗
体の安定化方法。 【効果】 本発明の抗体溶液及び抗体の安定化方法によ
れば、抗体を利用に便利な溶液の状態で安定に保存する
ことができる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、抗体又は標識抗体を含
む安定な溶液、及び抗体又は標識抗体の安定化方法に関
するものである。
【０００２】
【従来の技術】近年、抗体、標識抗体を用いた診断薬は
多数開発されており、特にモノクローナル抗体は優れた
特異反応性をもつことから、診断薬や治療薬の分野等で
広く利用されつつある。しかしながら、抗体、とりわけ
モノクローナル抗体は単一のタンパク質から構成される
ために特異な性質を持つものが多く、この溶液の安定化
は困難であった。このため、これを一般の酵素タンパク
質と同様に、凍結保存、凍結乾燥又は硫安沈澱の懸濁液
として保存する方法が試みられてきた。しかし、これら
の方法は簡便に実施できず煩雑であり、更に溶液にもど
す手間もかかり、有利な方法とは言えないものであっ
た。
【０００３】従って、抗体を溶液の状態で保存する方法
が検討され、例えば、アルブミンを添加する方法（ＷＯ
９２／０１８０８）、加水分解された卵アルブミンを
添加する方法（特開昭６１−７６４２３号公報）等が開
示されている。しかし、これらの方法によっても抗体溶
液の安定化は、必ずしも満足の行くものではなかった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的
は、更に安定な抗体溶液及び抗体の安定化方法を提供す
ることにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】斯かる実状に鑑み、本発
明者らは、鋭意研究を行った結果、アルブミンを含有す
る抗体溶液に、単独では安定化作用を持たない特定のア
ゾ系色素を加えると、意外にも安定性が顕著に向上する
ことを見出し、本発明を完成した。
【０００６】すなわち本発明は、（１）抗体又は標識抗
体、（２）アルブミン及び（３）構造中にナフタレンス
ルホン酸を含むアゾ系色素を含有する抗体溶液の第一の
発明、及び抗体又は標識抗体の溶液に、アルブミン及び
構造中にナフタレンスルホン酸を含むアゾ色素を添加す
ることを特徴とする抗体又は標識抗体の安定化方法の第
二の発明を提供するものである。
【０００７】本発明に用いられる抗体は、特に限定され
ないが、その使用の目的に応じて種類、濃度等を適宜選
択、決定すればよい。また、必要により抗体をフルオレ
ッセイン等で標識した標識抗体を用いてもよい。
【０００８】本発明に用いられるアルブミンとしては、
牛血清アルブミン、ヒトアルブミン、オボアルブミン、
ラクトアルブミン等が挙げられるが、抗体がモノクロー
ナル抗体である場合は、抗血清から得られるポリクロー
ナル抗体とは異なり、単一のタンパク質から構成される
ために、特異な性質を持つものが多く、安定性も様々で
あるので、抗体の種類によりアルブミンの種類を適宜選
択して少なくとも１種類を利用することが好ましい。ま
たアルブミンの溶液中の濃度も抗体により決定される
が、通常１〜２０mg／mlとすることが好ましい。
【０００９】また、構造中にナフタレンスルホン酸を含
むアゾ系色素としては、例えばダイレクトグリーン１、
ダイレクトグリーン６、ダイレクトグリーン５９、ダイ
レクトブラック４、ダイレクトブラック２２、ダイレク
トブラック３８、ダイレクトブルー１、ダイレクトブル
ー６、ダイレクトブルー５３（エバンスブルー）、ダイ
レクトレッド２、ダイレクトレッド２８（コンゴーレッ
ド）、ダイレクトレッド７９等が挙げられる。
【００１０】このものは、単独では抗体の安定化に寄与
しないものであるが、アルブミン等と組み合わせること
により高い安定化作用を呈する。この色素の配合量は、
用いる抗体等により適宜決定されるが、通常、本発明溶
液中１〜１００μg ／mlとすることが好ましい。通常１
種類を用いればよいが、必要に応じ２種類以上を適当な
比率で併用してもよい。
【００１１】本発明の抗体溶液には、上記必須成分の
他、必要によりアジ化ナトリウム等の防腐剤や保存剤等
を添加することもできる。
【００１２】本発明の抗体溶液を製造するには、常法に
より上記（１）、（２）及び（３）を混合すればよく、
例えば、抗体をアルブミン１〜２０mg／mlを含有する溶
液に溶解し、アゾ系色素を１〜１００μg ／ml加えるこ
とにより製造される。また抗体溶液を調製し、その他の
成分の溶液を調製し、この２者を混合する方法でもよ
い。すなわち、（１）、（２）及び（３）成分の添加、
混合の順序は問わない。この後、必要により防腐剤や保
存剤を加え、溶液中の溶存酸素を除去し、更に、遮光容
器に充填すれば、安定な抗体溶液の製品とすることがで
きる。
【００１３】
【発明の効果】本発明の抗体溶液及び抗体の安定化方法
によれば、抗体を利用に便利な溶液の状態で安定に保存
することができる。
【００１４】
【実施例】以下、実施例を挙げて、本発明を更に詳細に
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。なお、実施例中で用いたモノクローナル抗体、Ｇ１
−Ｅ６は、特開昭６３−１８４０６４号公報に示されて
いるものであ。Ｃ２Ｈ５−Ｃ１０、３−１９−１１は、
同じ特開昭６３−１８４０６４号公報に示された方法と
同様な方法で別途分離されたモノクローナル抗体であ
る。また、抗カンジダ・アルビカンスプロテアーゼモノ
クローナル抗体（ＩｇＧ）は、病原性酵母Ｃａｎｄｉｄ
ａ ａｌｂｉｃａｎｓの酸性プロテアーゼ（Ｆ．Ｍａｃ
ｄｎａｌｄ ａｎｄ Ｆ．Ｃ．Ｏｄｄｓ、Ｊ．Ｍｅｄ．
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、１３、４２３−４３５、１９８
０）を、フロイント完全アジュバントと共にマウス（Ｂ
ａｌｂ／ｃ、メス）に免疫し、追加免疫後、脾臓細胞と
ミエローマ細胞（Ｘ６３−Ａｇ８．６．５．３）をポリ
エチレングリコールを用いて特開昭６３−１８４０６４
号公報に示された方法と同様な方法で融合させ、得られ
たモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを培養して採
取された抗体である。
【００１５】実施例１ ５０mMリン酸緩衝液（pH７．０）に溶解したフルオレッ
セイン（ＦＩＴＣ）標識抗マイコプラズマ・ニューモニ
エモノクローナル抗体（ＧＩ−Ｅ６）の溶液（１mg／m
l）８mlと、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）５００mg、塩
化ナトリウム８５０mg、エバンスブルー４mg、及びアジ
化ナトリウム５０mgを溶かした５０mMリン酸緩衝液（pH
７．０）９２mlを混合し、全量を１００mlにした。この
溶液を褐色ガラス瓶に１mlずつ分注した。
【００１６】比較例１ ５０mMリン酸緩衝液（pH７．０）に溶解した実施例１と
同じＦＩＴＣ標識抗マイコプラズマ・ニューモニエモノ
クローナル抗体溶液（１mg／ml）８mlと、ＢＳＡ５００
mg、塩化ナトリウム８５０mg、及びアジ化ナトリウム５
０mgを溶かした５０mMリン酸緩衝液（pH７．０）９２ml
を混合し、全量を１００mlにした。この溶液を褐色ガラ
ス瓶に１mlずつ分注した。
【００１７】試験例１ 実施例１、比較例１の方法で製造した蛍光標識抗マイコ
プラズマ・ニューモニエモノクローナル抗体によるマイ
コプラズマ・ニューモニエ診断薬中のモノクローナル抗
体の活性を経時的にＥＬＩＳＡ法（酵素標識免疫吸着ア
ッセイ）で測定し、安定性を比較した。結果を表１に示
す。
【００１８】
【表１】
【００１９】実施例２ 以下の４種類の溶液を調製し、苛酷な条件下におけるモ
ノクローナル抗体の安定化作用を検討した。
【００２０】
【表２】溶液Ａ：１／１５Ｍリン酸緩衝生理食塩液（pH
７．２）に溶解した抗マイコプラズマ・ニューモニエモ
ノクローナル抗体（Ｃ２Ｈ５−Ｃ１０、ＩｇＧ）溶液
（０．１mg／ml）。 溶液Ｂ：溶液Ａに５mg／mlの濃度にＢＳＡを溶解させた
溶液。 溶液Ｃ：溶液Ｂに０．００４mg／mlの濃度にコンゴーレ
ッドを溶解させた溶液。 溶液Ｄ：溶液Ｂに０．０４mg／mlの濃度にコンゴーレッ
ドを溶解させた溶液。
【００２１】以上の４種類の溶液を褐色のガラス瓶に分
注し、密栓したのち、５０℃の条件下に７日間放置し、
残存抗体活性をＥＬＩＳＡ法で測定した。結果を表３に
示した。
【００２２】
【表３】
【００２３】実施例３ 以下の４種類の溶液を調製し、苛酷な条件下におけるモ
ノクローナル抗体の安定化作用を検討した。
【００２４】
【表４】 溶液Ａ：１／１５Ｍリン酸緩衝生理食塩液（pH７．２）
に溶解した抗マイコプラズマ・ニューモニエモノクロー
ナル抗体（３−１９−１１、ＩｇＭ）溶液（０．１mg／
ml）。 溶液Ｂ：溶液Ａに５mg／mlの濃度にＢＳＡを溶解させた
溶液。 溶液Ｃ：溶液Ｂに０．００４mg／mlの濃度にエバンスブ
ルーを溶解させた溶液。 溶液Ｄ：溶液Ｂに０．０４mg／mlの濃度にエバンスブル
ーを溶解させた溶液。
【００２５】以上の４種類の溶液を褐色のガラス瓶に分
注し、密栓したのち、５０℃の条件下に７日間放置し、
残存抗体活性をＥＬＩＳＡ法で測定した。結果を表５に
示した。
【００２６】
【表５】
【００２７】実施例４ 以下の４種類の溶液を調製し、苛酷な条件下におけるモ
ノクローナル抗体の安定化作用を検討した。
【００２８】
【表６】 溶液Ａ：１／１５Ｍリン酸緩衝生理食塩液（pH７．２）
に溶解した抗カンジダ・アルビカンスプロテアーゼモノ
クローナル抗体（ＩｇＧ）溶液（０．１mg／ml）。 溶液Ｂ：溶液Ａに５mg／mlの濃度にＢＳＡを溶解させた
溶液。 溶液Ｃ：溶液Ｂに０．００４mg／mlの濃度にエバンスブ
ルーを溶解させた溶液。 溶液Ｄ：溶液Ｂに０．０４mg／mlの濃度にエバンスブル
ーを溶解させた溶液。
【００２９】以上の４種類の溶液を褐色のガラス瓶に分
注し、密栓したのち、５０℃の条件下に３日間放置し、
残存抗体活性をＥＬＩＳＡ法で測定した。結果を表７に
示した。
【００３０】
【表７】
【００３１】

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 （１）抗体又は標識抗体、（２）アルブ
    ミン及び（３）構造中にナフタレンスルホン酸を含むア
    ゾ系色素を含有する抗体溶液。
  2. 【請求項２】 抗体又は標識抗体の溶液に、アルブミン
    及び構造中にナフタレンスルホン酸を含むアゾ色素を添
    加することを特徴とする抗体又は標識抗体の安定化方
    法。
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