JPH06189761A - グルタリル−７−アミノセファロスポラン酸の製造法 - Google Patents
グルタリル−７−アミノセファロスポラン酸の製造法Info
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Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
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Landscapes
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- Cephalosporin Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 セファロスポリンＣからＤ−アミノ酸オキシ
ダーゼを用いてグルタリル−７−アミノセファロスポラ
ン酸に酵素変換する方法において、該酵素と共存するエ
ステラーゼ酵素を不活性する方法を提供する。 【構成】 セファロスポリンＣからＤ−アミノ酸オキシ
ダーゼを用いてグルタリル−７−アミノセファロスポラ
ン酸を製造する方法において、１０〜２０００ppm のＣ
ｕ化合物と接触させたオキシダーゼおよびエステラーゼ
含有酵素群を用いる方法。
ダーゼを用いてグルタリル−７−アミノセファロスポラ
ン酸に酵素変換する方法において、該酵素と共存するエ
ステラーゼ酵素を不活性する方法を提供する。 【構成】 セファロスポリンＣからＤ−アミノ酸オキシ
ダーゼを用いてグルタリル−７−アミノセファロスポラ
ン酸を製造する方法において、１０〜２０００ppm のＣ
ｕ化合物と接触させたオキシダーゼおよびエステラーゼ
含有酵素群を用いる方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、セファロスポリンＣか
らＤ−アミノ酸オキシダーゼを用いてグルタリル−７−
アミノセファロスポラン酸に酵素変換する方法の改良
法、さらに詳しくは、該酵素と共存するエステラーゼ酵
素を不活性化またはエステラーゼ酵素反応を阻害する方
法に関する。
らＤ−アミノ酸オキシダーゼを用いてグルタリル−７−
アミノセファロスポラン酸に酵素変換する方法の改良
法、さらに詳しくは、該酵素と共存するエステラーゼ酵
素を不活性化またはエステラーゼ酵素反応を阻害する方
法に関する。
【０００２】
【従来の技術】トリゴノプシス バリアビリスのＤ−ア
ミノ酸オキシダーゼを利用して、セファロスポリンＣ
（以下、ＣＰＣと略す）からグルタリル−７−アミノセ
ファロスポラン酸（以下、ＧＬ−７ＡＣＡと略す）への
酵素的に変換することは、従来から知られていた。例え
ば、特公昭５５−３５１１８号公報には、膜透過性にし
たトリゴノプシス バリアビリスの細胞、またはこの細
胞を音波処理することによって得られる細胞不含の抽出
液によって酵素酸化を行ってＧＬ−７ＡＣＡを得る方法
が述べられている。
ミノ酸オキシダーゼを利用して、セファロスポリンＣ
（以下、ＣＰＣと略す）からグルタリル−７−アミノセ
ファロスポラン酸（以下、ＧＬ−７ＡＣＡと略す）への
酵素的に変換することは、従来から知られていた。例え
ば、特公昭５５−３５１１８号公報には、膜透過性にし
たトリゴノプシス バリアビリスの細胞、またはこの細
胞を音波処理することによって得られる細胞不含の抽出
液によって酵素酸化を行ってＧＬ−７ＡＣＡを得る方法
が述べられている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、前記の酵素反
応を工業スケールで経済的に実施するには、いくつかの
問題を含んでいた。それらの課題の１つに、トリゴノプ
シス バリアビリスに由来するエステラーゼの存在があ
る。
応を工業スケールで経済的に実施するには、いくつかの
問題を含んでいた。それらの課題の１つに、トリゴノプ
シス バリアビリスに由来するエステラーゼの存在があ
る。
【０００４】エステラーゼは、ＣＰＣからＧＬ−７ＡＣ
Ａへの酸化反応中に、そこに生成する、反応中間体であ
るα−ケト−アジポイル−７−アミノセファロスポラン
酸（以下、ＫＥＴＯ−ＣＰＣと略す）や、ＣＰＣおよび
ＧＬ−７ＡＣＡを脱アセチル化し、ＧＬ−７ＡＣＡの収
量を減少させることが知られている。したがって、ＣＰ
ＣからＧＬ−７ＡＣＡを得る場合、収率を向上させるた
めに、該エステラーゼの不活性化あるいはエステラーゼ
反応を阻害することは有効な手段である。
Ａへの酸化反応中に、そこに生成する、反応中間体であ
るα−ケト−アジポイル−７−アミノセファロスポラン
酸（以下、ＫＥＴＯ−ＣＰＣと略す）や、ＣＰＣおよび
ＧＬ−７ＡＣＡを脱アセチル化し、ＧＬ−７ＡＣＡの収
量を減少させることが知られている。したがって、ＣＰ
ＣからＧＬ−７ＡＣＡを得る場合、収率を向上させるた
めに、該エステラーゼの不活性化あるいはエステラーゼ
反応を阻害することは有効な手段である。
【０００５】そこで、エステラーゼの不活性化を図る方
法として、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ生産菌を９０〜５
０％の水／アセトン（２：１、ｖ：ｖ）混合液で処理す
ることによってエステラーゼを除去する方法（特開平３
−５３８７９号公報）などが知られているが、処理が複
雑であり、さらに、簡易かつ効率的なエステラーゼの不
活性化法の確率が望まれていた。
法として、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ生産菌を９０〜５
０％の水／アセトン（２：１、ｖ：ｖ）混合液で処理す
ることによってエステラーゼを除去する方法（特開平３
−５３８７９号公報）などが知られているが、処理が複
雑であり、さらに、簡易かつ効率的なエステラーゼの不
活性化法の確率が望まれていた。
【０００６】
【課題を解決するための手段】以上の点に鑑みて本発明
者らは鋭意研究を重ねた結果、トリゴノプシス バリア
ビリスの細胞、またはその膜透過性にした細胞または前
記細胞から抽出された酵素群にＣｕ化合物、例えば、Ｃ
ｕＳＯ4 を接触させることによって、Ｄ−アミノ酸オキ
シダーゼの酵素活性存在下でエステラーゼを不活性化す
ることができることを見いだし、本発明に至った。
者らは鋭意研究を重ねた結果、トリゴノプシス バリア
ビリスの細胞、またはその膜透過性にした細胞または前
記細胞から抽出された酵素群にＣｕ化合物、例えば、Ｃ
ｕＳＯ4 を接触させることによって、Ｄ−アミノ酸オキ
シダーゼの酵素活性存在下でエステラーゼを不活性化す
ることができることを見いだし、本発明に至った。
【０００７】すなわち、本発明は、Ｄ−アミノ酸オキシ
ダーゼの存在下でエステラーゼを不活性化させる方法で
あって、該酵素混合物にＣｕ化合物を接触させることを
特徴とするエステラーゼの不活性化方法であり、また、
本発明は、セファロスポリンＣからＤ−アミノ酸オキシ
ダーゼを用いてグルタリル−７−アミノセファロスポラ
ン酸を製造する方法において、１０〜２０００ppm のＣ
ｕ化合物と接触させた、オキシダーゼおよびエステラー
ゼ含有酵素群を用いることを特徴とするグルタリル−７
−アミノセファロスポラン酸の製造方法である。
ダーゼの存在下でエステラーゼを不活性化させる方法で
あって、該酵素混合物にＣｕ化合物を接触させることを
特徴とするエステラーゼの不活性化方法であり、また、
本発明は、セファロスポリンＣからＤ−アミノ酸オキシ
ダーゼを用いてグルタリル−７−アミノセファロスポラ
ン酸を製造する方法において、１０〜２０００ppm のＣ
ｕ化合物と接触させた、オキシダーゼおよびエステラー
ゼ含有酵素群を用いることを特徴とするグルタリル−７
−アミノセファロスポラン酸の製造方法である。
【０００８】上記エステラーゼの不活性化方法は、Ｄ−
アミノ酸オキシダーゼおよびエステラーゼが、トリゴノ
プシス バリアビリスの細胞中、またはトリゴノプシス
バリアビリスを膜透過性にした細胞中または細胞不含
の抽出物中に存在している場合のエステラーゼの不活性
化に適用される。
アミノ酸オキシダーゼおよびエステラーゼが、トリゴノ
プシス バリアビリスの細胞中、またはトリゴノプシス
バリアビリスを膜透過性にした細胞中または細胞不含
の抽出物中に存在している場合のエステラーゼの不活性
化に適用される。
【０００９】本発明において酸化反応に用いるＣＰＣ溶
液は、ＣＰＣ粉末を水に溶解させたもの、あるいはアク
レモニウム・クリソゲナムを適当な培地、例えば、シュ
ークロース２％、炭酸カルシウム０．５％、硫酸カルシ
ウム１．２５％、酢酸アンモニウム０．８％、コーンス
ターチ３％、ビートモラセス５％、脱脂大豆６％、メチ
ルオレート３％を含む培地によって培養された培養液等
を用いることができるが、アクレモニウム・クリソゲナ
ムの培養液を用いた方が好ましい。
液は、ＣＰＣ粉末を水に溶解させたもの、あるいはアク
レモニウム・クリソゲナムを適当な培地、例えば、シュ
ークロース２％、炭酸カルシウム０．５％、硫酸カルシ
ウム１．２５％、酢酸アンモニウム０．８％、コーンス
ターチ３％、ビートモラセス５％、脱脂大豆６％、メチ
ルオレート３％を含む培地によって培養された培養液等
を用いることができるが、アクレモニウム・クリソゲナ
ムの培養液を用いた方が好ましい。
【００１０】トリゴノプシス バリアビリスの培養菌体
懸濁液、またはトルエン処理等の従来技術によってＣＰ
Ｃの膜透過性を付した前記のトリゴノプシス バリアビ
リスの細胞懸濁液、または細胞不含の抽出物に、１０〜
２０００ppm 濃度のＣｕ化合物を溶解させ、５〜２５℃
で２〜２４時間放置すればよい。この処理によってエス
テラーゼ活性の９０％以上を取り除くことができる。さ
らに、前記処理においてＣｕ濃度を１０〜４００ppm と
すれば、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼの活性に全く影響な
しにエステラーゼを不活性化できるので好ましい。
懸濁液、またはトルエン処理等の従来技術によってＣＰ
Ｃの膜透過性を付した前記のトリゴノプシス バリアビ
リスの細胞懸濁液、または細胞不含の抽出物に、１０〜
２０００ppm 濃度のＣｕ化合物を溶解させ、５〜２５℃
で２〜２４時間放置すればよい。この処理によってエス
テラーゼ活性の９０％以上を取り除くことができる。さ
らに、前記処理においてＣｕ濃度を１０〜４００ppm と
すれば、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼの活性に全く影響な
しにエステラーゼを不活性化できるので好ましい。
【００１１】本発明において用いるトリゴノプシス バ
リアビリスの細胞または該菌体を膜透過性にしたものの
細胞中または該細胞中からＤ−アミノ酸オキシダーゼ等
の酵素群等を抽出した細胞不含の抽出物は、従来の公知
の方法を用いて得ることができる。また、使用するトリ
ゴノプシス バリアビリスは、カタラーゼを欠損した菌
株であるトリゴノプシス バリアビリス、例えばＫＣ−
１０３株（受託番号：微工研菌寄第１３０７４号）など
であると好ましい。
リアビリスの細胞または該菌体を膜透過性にしたものの
細胞中または該細胞中からＤ−アミノ酸オキシダーゼ等
の酵素群等を抽出した細胞不含の抽出物は、従来の公知
の方法を用いて得ることができる。また、使用するトリ
ゴノプシス バリアビリスは、カタラーゼを欠損した菌
株であるトリゴノプシス バリアビリス、例えばＫＣ−
１０３株（受託番号：微工研菌寄第１３０７４号）など
であると好ましい。
【００１２】エステラーゼの活性は、適量の酵素サンプ
ルを、０．２mol ／リットルのリン酸カリウムバッファ
ー（ｐＨ７．５）に溶解した２ｇ／リットルのＧＬ−７
ＡＣＡ溶液に添加し、２５℃で３０分間反応させた後、
等量のメタノールを加えることによって反応を停止さ
せ、生成したデアセチルＧＬ−７ＡＣＡの量をＨＰＬＣ
で定量することにより求めた。
ルを、０．２mol ／リットルのリン酸カリウムバッファ
ー（ｐＨ７．５）に溶解した２ｇ／リットルのＧＬ−７
ＡＣＡ溶液に添加し、２５℃で３０分間反応させた後、
等量のメタノールを加えることによって反応を停止さ
せ、生成したデアセチルＧＬ−７ＡＣＡの量をＨＰＬＣ
で定量することにより求めた。
【００１３】
【実施例】以下に本発明について実施例を挙げてさらに
詳しく説明するが、本発明は、これらの実施例によりな
んら限定されるものではない。 実施例１ トリゴノプシス バリアビリス ＫＣ−１０３株をグル
コース２％、コーンスチープリカー２％およびＤＬ−メ
チオニン０．２％を含む培地によって培養し、得られた
培養液６０ml（湿菌体６ｇを含む）にトルエン０．３ml
を加え、２５℃で２時間攪拌して膜透過性を付与した。
詳しく説明するが、本発明は、これらの実施例によりな
んら限定されるものではない。 実施例１ トリゴノプシス バリアビリス ＫＣ−１０３株をグル
コース２％、コーンスチープリカー２％およびＤＬ−メ
チオニン０．２％を含む培地によって培養し、得られた
培養液６０ml（湿菌体６ｇを含む）にトルエン０．３ml
を加え、２５℃で２時間攪拌して膜透過性を付与した。
【００１４】該トルエン含有培養液に、２３．６mgのＣ
ｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏを溶解し、室温で２時間放置した。
前記培養液から適量の酵素サンプルを取り出し、これを
０．２mol ／リットルのリン酸カリウムバッファー（ｐ
Ｈ７．５）に溶解した２ｇ／リットルのＧＬ−７ＡＣＡ
溶液に添加し、２５℃で３０分間反応させた後、等量の
メタノールを加えることによって反応を停止させ、生成
したデアセチルＧＬ−７ＡＣＡの量をＨＰＬＣで定量し
ようとしたところ、デアセチルＧＬ−７ＡＣＡは定量で
きず、該酵素サンプル中のエステラーゼは十分に不活性
化されていることがわかった。
ｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏを溶解し、室温で２時間放置した。
前記培養液から適量の酵素サンプルを取り出し、これを
０．２mol ／リットルのリン酸カリウムバッファー（ｐ
Ｈ７．５）に溶解した２ｇ／リットルのＧＬ−７ＡＣＡ
溶液に添加し、２５℃で３０分間反応させた後、等量の
メタノールを加えることによって反応を停止させ、生成
したデアセチルＧＬ−７ＡＣＡの量をＨＰＬＣで定量し
ようとしたところ、デアセチルＧＬ−７ＡＣＡは定量で
きず、該酵素サンプル中のエステラーゼは十分に不活性
化されていることがわかった。
【００１５】次いで、１０ｇのＣＰＣ粉末を溶解し、こ
れをｐＨ７．５に調節したＣＰＣ溶液１０００mlを、前
記のＣｕ含有培養液に混合し、該混合物中に酸素を吹き
込みながら２０℃で約１８０分反応させた。反応液中か
らＧＬ−７ＡＣＡを回収したところ、９３．２％の収率
でＧＬ−７ＡＣＡが得られた。
れをｐＨ７．５に調節したＣＰＣ溶液１０００mlを、前
記のＣｕ含有培養液に混合し、該混合物中に酸素を吹き
込みながら２０℃で約１８０分反応させた。反応液中か
らＧＬ−７ＡＣＡを回収したところ、９３．２％の収率
でＧＬ−７ＡＣＡが得られた。
【００１６】実施例２ 実施例１と同様の方法によって、膜透過性を付与し、か
つ、エステラーゼを不活性化させたトリゴノプシス バ
リアビリス ＫＣ−１０３株のトルエン−Ｃｕ含有培養
液６０mlに、８．５ｇ／リットル濃度のＣＰＣを含むア
クレモニウム・クリソゲナムの培養液をｐＨ２．５で除
菌した後、ｐＨ７．５に調節したＣＰＣ培養液１２００
mlを混合した。前記混合培養液から適量の酵素サンプル
を取り出し、実施例１と同様の方法でエステラーゼの残
存活性を調べたところ、エステラーゼは十分に不活性化
されていることがわかった。
つ、エステラーゼを不活性化させたトリゴノプシス バ
リアビリス ＫＣ−１０３株のトルエン−Ｃｕ含有培養
液６０mlに、８．５ｇ／リットル濃度のＣＰＣを含むア
クレモニウム・クリソゲナムの培養液をｐＨ２．５で除
菌した後、ｐＨ７．５に調節したＣＰＣ培養液１２００
mlを混合した。前記混合培養液から適量の酵素サンプル
を取り出し、実施例１と同様の方法でエステラーゼの残
存活性を調べたところ、エステラーゼは十分に不活性化
されていることがわかった。
【００１７】次いで、前記混合培養液に酸素を吹き込
み、かつ、３．５％濃度の過酸化水素２３．９mlを連続
的に添加しながら２０℃で約２４０分反応させた。反応
液中からＧＬ−７ＡＣＡを回収したところ、９２．８％
の収率でＧＬ−７ＡＣＡが得られた。
み、かつ、３．５％濃度の過酸化水素２３．９mlを連続
的に添加しながら２０℃で約２４０分反応させた。反応
液中からＧＬ−７ＡＣＡを回収したところ、９２．８％
の収率でＧＬ−７ＡＣＡが得られた。
【００１８】実施例３ 実施例１と同様の方法によって、膜透過性を付与したト
リゴノプシス バリアビリス ＫＣ−１０３株のトルエ
ン含有培養液を得た。次いで、１０ｇのＣＰＣ粉末を溶
解し、これをｐＨ７．５に調節したＣＰＣ溶液１０００
mlと前記トルエン含有培養液６０mlを混合し、実施例１
と同様の方法でエステラーゼの残存活性を調べた。その
結果エステラーゼは十分に不活性化されていることがわ
かった。該混合液に、０．５ｇのＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ
を添加溶解させ、酸素を吹き込みながら２０℃で約１８
０分反応させた。反応液中からＧＬ−７ＡＣＡを回収し
たところ、９２．２％の収率でＧＬ−７ＡＣＡが得られ
た。
リゴノプシス バリアビリス ＫＣ−１０３株のトルエ
ン含有培養液を得た。次いで、１０ｇのＣＰＣ粉末を溶
解し、これをｐＨ７．５に調節したＣＰＣ溶液１０００
mlと前記トルエン含有培養液６０mlを混合し、実施例１
と同様の方法でエステラーゼの残存活性を調べた。その
結果エステラーゼは十分に不活性化されていることがわ
かった。該混合液に、０．５ｇのＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ
を添加溶解させ、酸素を吹き込みながら２０℃で約１８
０分反応させた。反応液中からＧＬ−７ＡＣＡを回収し
たところ、９２．２％の収率でＧＬ−７ＡＣＡが得られ
た。
【００１９】実施例４ 実施例１と同様の方法によって、膜透過性を付与したト
リゴノプシス バリアビリス ＫＣ−１０３株のトルエ
ン含有培養液と、実施例２と同様の方法によって得られ
たＣＰＣ培養液１２００mlとを混合した。前記混合培養
液中のエステラーゼの残存活性を実施例２と同様の方法
で調べた。その結果、エステラーゼは十分に不活性化さ
れていることがわかった。
リゴノプシス バリアビリス ＫＣ−１０３株のトルエ
ン含有培養液と、実施例２と同様の方法によって得られ
たＣＰＣ培養液１２００mlとを混合した。前記混合培養
液中のエステラーゼの残存活性を実施例２と同様の方法
で調べた。その結果、エステラーゼは十分に不活性化さ
れていることがわかった。
【００２０】次いで、前記混合培養液に０．５ｇのＣｕ
ＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏを添加溶解し、酸素を吹き込みながら
２０℃で約１８０分反応させた。反応液中からＧＬ−７
ＡＣＡを回収したところ、９２．０％の収率でＧＬ−７
ＡＣＡが得られた。
ＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏを添加溶解し、酸素を吹き込みながら
２０℃で約１８０分反応させた。反応液中からＧＬ−７
ＡＣＡを回収したところ、９２．０％の収率でＧＬ−７
ＡＣＡが得られた。
【００２１】
【発明の効果】本発明の方法によれば、Ｄ−アミノ酸オ
キシダーゼと共存するエステラーゼを、Ｄ−アミノ酸オ
キシダーゼの活性存在下で不活性化あるいは該エステラ
ーゼ反応の阻害化を図ることができる。よって、ＣＰＣ
からＧＬ−７ＡＣＡを簡易な方法によって、高回収率で
得ることができる。
キシダーゼと共存するエステラーゼを、Ｄ−アミノ酸オ
キシダーゼの活性存在下で不活性化あるいは該エステラ
ーゼ反応の阻害化を図ることができる。よって、ＣＰＣ
からＧＬ−７ＡＣＡを簡易な方法によって、高回収率で
得ることができる。
Claims (4)
- 【請求項１】 Ｄ−アミノ酸オキシダーゼの存在下でエ
ステラーゼを不活性化させる方法であって、該酵素混合
物にＣｕ化合物を接触させることを特徴とするエステラ
ーゼの不活性化方法。 - 【請求項２】 Ｃｕ化合物の濃度が１０〜２０００ppm
である請求項１記載のエステラーゼの不活性化方法。 - 【請求項３】 Ｄ−アミノ酸オキシダーゼおよびエステ
ラーゼが、トリゴノプシス バリアビリスの細胞中、ま
たは膜透過性の付与された前記細胞中または前記細胞か
ら抽出された酵素群中に存在している請求項１記載のエ
ステラーゼの不活性化方法。 - 【請求項４】 セファロスポリンＣからＤ−アミノ酸オ
キシダーゼを用いてグルタリル−７−アミノセファロス
ポラン酸を製造する方法において、１０〜２０００ppm
のＣｕ化合物と接触させた、オキシダーゼおよびエステ
ラーゼ含有酵素群を用いることを特徴とするグルタリル
−７−アミノセファロスポラン酸の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4357976A JPH06189761A (ja) | 1992-12-25 | 1992-12-25 | グルタリル−７−アミノセファロスポラン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4357976A JPH06189761A (ja) | 1992-12-25 | 1992-12-25 | グルタリル−７−アミノセファロスポラン酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06189761A true JPH06189761A (ja) | 1994-07-12 |
Family
ID=18456920
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4357976A Withdrawn JPH06189761A (ja) | 1992-12-25 | 1992-12-25 | グルタリル−７−アミノセファロスポラン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06189761A (ja) |
-
1992
- 1992-12-25 JP JP4357976A patent/JPH06189761A/ja not_active Withdrawn
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20000307 |