JPH06209736A - モノマークルクリンの製造方法及びモノマークルクリンを含有する味覚修飾剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 舌への吸着がよく味覚修飾活性や甘味活性が
強いモノマークルクリンの製造方法、並びに舌への吸着
がよく味覚修飾活性や甘味活性が強いモノマークルクリ
ンを含有する味覚修飾剤の提供。 【構成】 本発明のモノマークルクリンの製造方法は、
ダイマークルクリンをジスルフィド結合還元剤で処理す
ることを特徴とする。また、本発明の味覚修飾剤は、本
発明の製造方法により得られるモノマークルクリンを含
有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、味覚修飾活性及び甘味
活性（味覚修飾効果）の増強されたモノマークルクリン
の製造方法、及び該製造方法により得られるモノマーク
ルクリンを含有する味覚修飾剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】本出願人は先に、蛋白質クルクリンを、
クルクリゴ・ラチフォリア（Curculigo latifolia)の果
実又はその乾燥物から０．０１Ｍ以上の濃度の塩の水溶
液で抽出する方法を見い出している（特開平２−１０４
２６３号公報参照）。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、特開平
２−１０４２６３号公報に記載の方法により得られる蛋
白質クルクリンは、舌への吸着効果が劣るものであっ
た。

【０００４】また、本出願人は、クルクリン様物質から
なる味覚修飾物質を出願している（特願平３−２５３９
１４号）が、このクルクリン様物質は、鎖内結合及び鎖
間結合により二量体（ダイマー）を形成しているもので
ある。

【０００５】従って、本発明の第１の目的は、舌への吸
着がよく味覚修飾活性や甘味活性が強いモノマークルク
リンの製造方法を提供することにある。また、本発明の
第２の目的は、舌への吸着がよく味覚修飾活性や甘味活
性が強いモノマークルクリンを含有する味覚修飾剤を提
供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成すべくクルクリンについて鋭意研究した結果、ク
ルクリンはモノマーの状態でも活性が存在し、さらにモ
ノマークルクリンが果実中等の天然に存在するダイマー
クルクリンに比べて味覚修飾活性や甘味活性が強いこと
を知見した。

【０００７】本発明は、上記知見に基づきなされたもの
で、ダイマークルクリンをジスルフィド結合還元剤で処
理することを特徴とする味覚修飾効果の増強されたモノ
マークルクリンの製造方法を提供するものである。ま
た、本発明は、本発明の上記製造方法により得られるモ
ノマークルクリンを含有する味覚修飾剤を提供するもの
である。

【０００８】以下、先ず本発明のモノマークルクリンの
製造方法について詳述する。

【０００９】本発明において使用されるダイマークルク
リンとしては、クルクリゴ・ラチフォリアの果実又はそ
の処理物、並びにそれらから得られるダイマークルクリ
ン、さらにはクルクリン遺伝子を利用して生物学的手法
により得られたダイマークルクリンが挙げられる。

【００１０】上記果実又はその処理物としては、クルク
リゴ・ラチフォリアの果実の皮及び種にはダイマークル
クリンは含まれていないので、皮や種を除いたクルクリ
ゴ・ラチフォリアの生果実、乾燥もしくは凍結した果
実、又はこれらを粉砕もしくは破砕等の処理を行った処
理果実が挙げられる。

【００１１】果実の乾燥方法は、陰干し、低温乾燥、凍
結乾燥、真空乾燥等、比較的低温域での乾燥が好ましい
が、特に制限されるものではない。また、果実の凍結方
法は、緩慢凍結、急速凍結、自己凍結等でよく、特に制
限されるものではない。また、粉砕又は破壊の方法も特
に制限されるものではない。

【００１２】クルクリゴ・ラチフォリアの果実又はその
処理物から得られるダイマークルクリンとしては、該果
実又はその処理物から抽出されたクルクリン、例えば、
特開平２−１０４２６３号公報に記載された抽出方法に
より抽出されたクルクリン、即ち該果実又はその乾燥物
から０．０１Ｍ以上の濃度の塩の水溶液で抽出されたク
ルクリン、あるいは特願平４−３１７５３３号に記載さ
れた抽出方法により抽出されたクルクリン、即ち該果実
又はその処理物に酸水溶液を加えその混合物のｐＨを３
以下として抽出されたクルクリンが挙げられるが、クル
クリンの抽出方法はこれらに制限されるものではない。

【００１３】また、上記抽出方法により得られたダイマ
ークルクリンの精製程度は限定されないものである。即
ち、硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウム、リン酸カリウ
ム、硫酸マグネシウム、クエン酸ナトリウム、塩化ナト
リウム等による塩析、メタノール、エタノール、イソプ
ロパノール、アセトン等の極性溶媒による溶媒沈殿、Ｃ
Ｍ−セファロース、アンバーライト、ＩＲＣ−５０等の
イオン交換クロマトグラフィー、さらにはセファデック
スＧ−１００等の分子ふるいクロマトグラフィー等によ
るクロマトグラフィーによる公知の蛋白質精製方法によ
り精製されていてもよい。

【００１４】本発明においていう高純度ダイマークルク
リンとは、イオン交換クロマトグラフィー、分子ふるい
クロマトグラフィー及び塩析処理したものである。

【００１５】而して、本発明の製造方法は、ジスルフィ
ド結合を有する上記ダイマークルクリンを還元剤で処理
することにより、モノマークルクリンを製造するもので
ある。ここで、本発明の還元剤処理とは、還元剤をダイ
マークルクリン分子中のチオール基に反応させて、ジス
ルフィド結合を切断する処理をいう。

【００１６】本発明に使用されるジスルフィド結合還元
剤としては、チオール基との交換が可能な還元剤であれ
ばよく、具体的には、ジチオトレイトール、ジチオエリ
スリトール、メルカプトエタノール、還元型グルタチオ
ン、システイン等が挙げられるが、特に味覚及び安全性
の点から還元型グルタチオン、システインが好ましい。

【００１７】上記還元剤は、ダイマークルクリンがモノ
マーに還元されるのに必要な量添加すればよい。例え
ば、ダイマークルクリン（高純度ダイマークルクリン含
量１００μｇ／ml）に対して、還元型グルタチオンやシ
ステインでは、１ｍＭ以上、好ましくは１５ｍＭ以上、
更に好ましくは５０ｍＭ以上の濃度になるように添加す
ればよい。また、ジチオトレイトールでは、ダイマーク
ルクリン（高純度ダイマークルクリン含量１００μｇ／
ml）に対して、０．２５ｍＭ以上、好ましくは１ｍＭ以
上、更に好ましくは２ｍＭ以上の濃度になるように添加
すればよい。また、ジチオエリスリトール及びメルカプ
トエタノールでは、ジチオトレイトールと同様の量を添
加すればよい。

【００１８】但し、上記還元剤は、必ずしも好ましい味
覚を有するものではなく、また蛋白質の変成作用も持っ
ているので、使用する目的に応じて必要最低量使用する
のが好ましい。

【００１９】また、ジスルフィド結合還元剤で処理する
際の処理温度は、室温又はダイマークルクリンやモノマ
ークルクリンが変成しない程度に加熱する温度、具体的
には２０〜１００℃でよく、また上記還元剤で処理する
際の反応時間は、割合速やかに還元するため、６０℃以
上では１分間以内で充分であり、６０℃未満では１分間
程度は必要であるが、反応時間が必要以上に長くても構
わない。

【００２０】得られたモノマークルクリンは、味覚修飾
剤として、また甘味蛋白質として好適に用いることがで
き、該モノマークルクリンの味覚修飾活性及び甘味活性
は、従来のダイマークルクリンに比較すると、同じ味覚
修飾活性及び甘味活性を得るための使用量を約１／１．
５〜１／５とすることができる。さらに、モノマークル
クリンは、ダイマークルクリンに比較して甘味の持続時
間が約１．５〜３倍長くなるものである。

【００２１】次に、本発明の上記製造方法により得られ
るモノマークルクリンを含有する味覚修飾剤について説
明する。

【００２２】本発明の味覚修飾剤は、モノマークルクリ
ンを、高純度ダイマークルクリンに換算して、好ましく
は０．０２〜７００ｐｐｍ、より好ましくは０．２〜７
０ｐｐｍ含有する。

【００２３】また、本発明の味覚修飾剤が含有するモノ
マークルクリンは、モノマークルクリン中の遊離のチオ
ール基を修飾して得られる安定化したモノマークルクリ
ンであってもよいものである。この際のモノマークルク
リンのチオール基の修飾に用いられる修飾剤としては、
一般的に蛋白質のチオール基の修飾に用いられるものが
挙げられる。具体的には、モノヨード酢酸（カルボキシ
メチル化）、ヨードアセトアミド（カルボキサミドメチ
ル化）、エチレンイミン（アミノエチル化）、２−ブロ
ムエチルアミン（アミノエチル化）、４−ビニルピリジ
ン（ピリジルエチル化）、アクリロニトリル（シアノエ
チル化）等が挙げられ、好ましくはヨードアセトアミド
が挙げられる。

【００２４】また、モノマークルクリン中の遊離のチオ
ール基を修飾する方法としては、上記チオール基の修飾
剤をＳＨ基と反応させることにより行われる。

【００２５】本発明の製造方法により得られるモノマー
クルクリン及び該モノマークルクリンを含有する本発明
の味覚修飾剤は、そのまま摂取してもよいし、食品、飲
料又は薬剤等に適宜配合して用いてもよい。食品、飲料
又は薬剤等に配合して使用される場合には、モノマーク
ルクリンの味覚修飾活性や甘味活性を参考にして、目
的、用途に応じて定めることができるが、高純度ダイマ
ークルクリンに換算して、０．０２〜７００ｐｐｍ、特
に０．２〜７０ｐｐｍ含有させることが好ましい。

【００２６】また、本発明の製造方法により得られるモ
ノマークルクリン及び該モノマークルクリンを含有する
本発明の味覚修飾剤は、粉末状、溶液状、シート状、ス
プレー状又は乳化物状等に加工することができ、食品、
飲料又は薬剤等に配合して使用される場合には、それら
の性状に応じて加工すればよい。

【００２７】

【作用】本発明の製造方法により得られるモノマークル
クリン及び該モノマークルクリンを含有する本発明の味
覚修飾剤は、該モノマークルクリン若しくは該味覚修飾
剤を口中に含んだ後酸味物質若しくは水を食した場合、
又は該モノマークルクリン若しくは該味覚修飾剤を酸味
物質若しくは水と共に食した場合、舌の受容膜に作用し
て甘味を感じさせる効果を有している。また、上記モノ
マークルクリン又は上記味覚修飾剤を含む食品等を事前
に食しておけば、酸味物質又は水を食したときに甘味を
感じさせることもできる。

【００２８】

【実施例】次に、実施例を示し、本発明を具体的に説明
する。

【００２９】参考例１（ダイマークルクリンの調製） クルクリゴ・ラチフォリアの果肉３０ｇをとり、これに
４０mlの水を加えてホモジナイズし、遠心分離（１２，
５００ｒｐｍ、６０分間）した。この上清は褐色を示
し、味覚修飾活性はなかった。得られた沈渣に４０mlの
水を加えてホモジナイズし、遠心分離（１２，５００ｒ
ｐｍ、２０分間）した。この上清は無色で、味覚修飾活
性はなかった。

【００３０】次に、得られた沈渣に４０mlの０．５Ｍ塩
化ナトリウム溶液を加えてホモジナイズし、遠心分離
（３０，０００ｒｐｍ、６０分間）した。得られた上清
は無色で、味覚修飾活性を示す粗クルクリン（ダイマ
ー）抽出液が得られた。さらに、４０mlの０．５Ｍ塩化
ナトリウム溶液による抽出操作を２回繰り返し、これら
３回分の抽出液を合わせた。

【００３１】この粗クルクリン抽出液（３回分）に８０
％飽和になるように硫酸アンモニウムを添加して活性物
質を析出させた。遠心分離（３２，０００ｒｐｍ、６０
分間）して得た沈澱を、１０mlの水に溶解し、凍結乾燥
し、粗精製クルクリン（ダイマー）３０．５mgを得た。

【００３２】次に、粗精製クルクリンを１００mlの１０
ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）に溶解し、ＣＭ−セフ
ァロースＣＬ−６Ｂカラム（直径２．２cm×長さ１８c
m、６８ml、ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジー社
製）に流し吸着させた。続いて、０．０１Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ６．８）で素通り画分を洗浄した後、塩化ナト
リウム溶液０〜１．０Ｍの直線濃度勾配溶出法でクルク
リンを溶出させた（流速５ml／時間、１分画５ml、全溶
出液量５００ml）。溶出した蛋白質は２８０ｎｍの吸収
によりモニターした。その結果、塩化ナトリウム濃度
０．４Ｍ付近に味覚修飾物質クルクリンを含む画分が溶
出した。

【００３３】このクルクリンを含む画分を、８０％飽和
になるように硫酸アンモニウムを加え、活性物質を析出
させた。これを遠心分離（３２，０００ｒｐｍ、６０分
間）して得た沈殿を、１．５mlの０．０１Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ６．８）に溶解した。この濃縮液をセファデッ
クス（ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジー社製）Ｇ
−１００カラム（直径１．６cm×長さ５８cm、１６０m
l）を用い０．５Ｍ塩化ナトリウムを含む０．０１Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ６．８）により分離した（流速８．４
ml／時間、１分画２．８ml、全溶出量１８２ml）。蛋白
質は２８０ｎｍの吸収によりモニターした。その結果、
味覚修飾物質クルクリンのピークが溶出した。

【００３４】このピークの画分を、８０％飽和になるよ
うに硫酸アンモニウムを加え、活性物質を析出させた。
これを遠心分離（３２，０００ｒｐｍ、６０分間）して
得た沈殿を、１．５mlの２Ｍ酢酸アンモニウム溶液に溶
解した。この溶液を、２Ｍ酢酸アンモニウム溶液で平衡
化したセファデックスＧ−２５（９．１ml）カラムで処
理後、凍結乾燥することにより高純度ダイマークルクリ
ン８．６mgが得られた。

【００３５】続いて、得られた高純度ダイマークルクリ
ンの分子量を電気泳動により分析した。即ち、上記で得
られた高純度ダイマークルクリンを、０．１mg／ml濃度
の試料溶液として、電気泳動用試料溶液を調製した。こ
の電気泳動用試料溶液は、それぞれ１０μｌずつレムリ
の方法（Laemmli, U. K., Nature, 227, 680，1970)に
従って、ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った。電
気泳動の終わったゲルをクマシー・ブリリアント・ブル
ー Ｒ−２５０を用いて染色し、脱色後、マーカー蛋白
質と試料の移動度を比較することにより分子量を定量し
た。この結果、上記高純度ダイマークルクリンの分子量
は２３，８００であった。

【００３６】実施例１（還元型グルタチオンによる処
理） 参考例１で調製した高純度ダイマークルクリン２．５mg
を６２．５ｍＭ還元型グルタチオン溶液２．５mlに溶解
して室温で１０分間放置し、還元剤処理クルクリン溶液
を調製した。

【００３７】該還元剤処理クルクリン溶液中のクルクリ
ンがモノマークルクリンであることを確認するために、
この溶液３０μｌをミクロ遠心チューブ（１．５ml容）
にとり、これに２．５％ソディウムドデシルサルフェイ
ト、２５％グリセロール及び２５ｐｐｍブロムフェノー
ルブルーを含むトリス塩酸緩衝液（ｐＨ６．８）２０μ
ｌを加えて攪拌し電気泳動試料を調製した。この試料２
μｌについて、参考例１の方法と同様にして分析したと
ころ、分子量１３，８００の位置にバンドが確認され
た。

【００３８】また、上記還元剤処理クルクリン溶液２０
０μｌを５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）で３mlに
希釈し口中に含んで味覚修飾活性の測定を行ったとこ
ろ、甘味度は０．３４Ｍのショ糖溶液に相当する甘さで
あり、またこの甘さは約１時間半持続した。

【００３９】比較例１ 実施例１で用いた６２．５ｍＭ還元型グルタチオン溶液
２．５mlに替えて、リン酸水溶液（ｐＨ２．５）２．５
mlを用いる以外は実施例１と同様に行い、リン酸水溶液
処理クルクリン溶液を調製した。

【００４０】該リン酸水溶液処理クルクリン溶液中のク
ルクリンについて、分子量測定を実施例１と同様に行っ
たところ、分子量は２３，８００であり、モノマークル
クリンは得られていなかった。

【００４１】また、上記リン酸水溶液処理クルクリン溶
液について、実施例１と同様にして味覚修飾活性の測定
を行ったところ、甘味度は０．２７Ｍのショ糖溶液に相
当する甘さであり、またこの甘さは約３０分間持続し
た。

【００４２】試験例１（モノマークルクリンの味覚修飾
活性の測定方法） 実施例１により得られた還元剤処理クルクリン溶液（５
０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ６．０）３mlを３分間口に含
んだ後軽く口をすすいだ。次に、０．１Ｍクエン酸溶液
３mlを味わい、このとき感じた甘さをショ糖の甘さ（シ
ョ糖のモル濃度）に換算し、味覚修飾活性（甘味度）と
した。ただし、甘味活性の測定は個人差や測定のばらつ
きが認められるため、１０人のパネラーの平均値を甘味
度とした。その結果は下記〔表１〕に示した通りであ
る。比較例１により得られたリン酸水溶液処理クルクリ
ン溶液についても、同様のテストを行い、その結果を下
記〔表１〕に示した。下記〔表１〕に示す結果から明ら
かな通り、モノマークルクリンは、ダイマークルクリン
に比べて同じ甘味度となる場合の使用量が１／２以下で
あった。

【００４３】

【表１】

【００４４】実施例２（システインによる処理） 実施例１で用いた６２．５ｍＭ還元型グルタチオン溶液
２．５mlに替えて、６２．５ｍＭシステイン溶液２．５
mlを用いる以外は実施例１と同様に行い、還元剤処理ク
ルクリン溶液を調製した。

【００４５】この還元剤処理クルクリン溶液の分子量測
定を実施例１と同様に行ったところ、分子量は１３，８
００であった。即ち、該溶液中のクルクリンはモノマー
クルクリンであった。

【００４６】また、上記還元剤処理クルクリン溶液につ
いて、実施例１と同様にして味覚修飾活性の測定を行っ
たところ、甘味度は０．３３Ｍのショ糖溶液に相当する
甘さであり、またこの甘さは約１時間半持続した。

【００４７】実施例３（２−メルカプトエタノールによ
る処理） 実施例１で用いた６２．５ｍＭ還元型グルタチオン溶液
２．５mlに替えて、２ｍＭ２−メルカプトエタノール水
溶液２．５mlを用いる以外は実施例１と同様に行い、還
元剤処理クルクリン溶液を調製した。

【００４８】この還元剤処理クルクリン溶液の分子量測
定を実施例１と同様に行ったところ、分子量は１３，８
００であり、該溶液中のクルクリンはモノマークルクリ
ンであった。

【００４９】実施例４（ジチオトレイトールによる処
理） 実施例１で用いた６２．５ｍＭ還元型グルタチオン溶液
２．５mlに替えて、２ｍＭジチオトレイトール水溶液
２．５mlを用いる以外は実施例１と同様に行い、還元剤
処理クルクリン溶液を調製した。

【００５０】この還元剤処理クルクリン溶液の分子量測
定を実施例１と同様に行ったところ、分子量は１３，８
００であり、該溶液中のクルクリンはモノマークルクリ
ンであった。

【００５１】比較例２〜４（還元力のある有機酸による
反応） 実施例１で用いた６２．５ｍＭ還元型グルタチオン溶液
２．５mlに替えて、５００ｍＭのＬ−アスコルビン酸
２．５ml（比較例２）、５００ｍＭのＤＬ−乳酸２．５
ml（比較例３）、５００ｍＭのＤＬ−リンゴ酸２．５ml
（比較例４）を用いる以外は実施例１と同様に行い、還
元力のある有機酸処理クルクリン溶液を調製した。

【００５２】この還元力のある有機酸処理クルクリン溶
液の分子量測定を実施例１と同様に行ったところ、分子
量は２３，８００であり、この処理からはモノマークル
クリンは形成しなかった。

【００５３】実施例５（チオール基の修飾） 実施例２と同様の方法で調製したモノマークルクリン溶
液２．５mlに、ヨードアセトアミド４３mg（システイン
のモル数の１．５倍）を加えて室温で１０分間チオール
基のカルボキサミドメチル化反応させた後、０℃で１時
間静置し、さらにカルボキサミドメチル化反応を進め
た。静置後、セファデクスＧ−２５を用いて２Ｍ尿素及
び２ｍＭＥＤＴＡを含む重炭酸アンモニウム緩衝液（ｐ
Ｈ８．０）に溶媒を交換した。このチオール基修飾モノ
マークルクリン溶液の分子量測定を実施例１と同様に行
ったところ、分子量は１３，８００であった。

【００５４】続いて、得られたチオール基修飾モノマー
クルクリン溶液２mlを、０．５Ｍ塩化ナトリウムを含む
０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）２リットルに対
して一晩透析を行った。得られた透析液を、参考例１と
同様にして分子量を分析したところ、モノマークルクリ
ンの分子量である１３，８００にバンドが確認され、チ
オール基を修飾したクルクリンは安定であることが確認
された。

【００５５】実施例６（粗精製クルクリンのモノマー
化） 実施例１で使用した高純度ダイマークルクリン２．５mg
に替えて、参考例１で調製した粗精製クルクリン６．２
５mgを用いる以外は実施例１と同様に行なったところ、
分子量は１３，８００であり、モノマー粗精製クルクリ
ンが得られた。

【００５６】このモノマー粗精製クルクリンについて、
実施例１と同様にして味覚修飾活性の測定を行ったとこ
ろ、甘味度は０．３２Ｍのショ糖溶液に相当する甘さで
あり、またこの甘さは約１時間半持続した。

【００５７】比較例５ 比較例１で用いた高純度ダイマークルクリン２．５mgに
替えて、参考例１で用いた粗精製クルクリン６．２５mg
を用いる以外は比較例１と同様に行なったところ、分子
量は２３，８００であり、モノマー粗精製クルクリンが
得られなかった。

【００５８】このクルクリンについて、実施例１と同様
にして味覚修飾活性の測定を行ったところ、甘味度は
０．２６Ｍのショ糖溶液に相当する甘さであり、またこ
の甘さは約３０分間持続した。

【００５９】実施例７〜８及び比較例６〜７ レモン果汁７．５％、ゼラチン２％及び残部水からなる
配合のレモン果汁ゼリーを製造した。一方、７．５％レ
モン果汁に、実施例１（高純度クルクリン使用）及び実
施例６（粗精製クルクリン使用）で得られたモノマーク
ルクリン溶液（それぞれ実施例７、８）、比較例１（高
純度クルクリン使用）及び比較例５（粗精製クルクリン
使用）で得られたダイマークルクリン溶液（それぞれ比
較例６、７）をそれぞれ２％加え、クルクリン含有レモ
ン果汁をそれぞれ製造した。

【００６０】次に、それぞれのクルクリン含有レモン果
汁を食した後に、上記レモン果汁ゼリーを食したとこ
ろ、実施例７のクルクリン含有レモン果汁（モノマー高
純度クルクリン溶液を使用）を食したときの方が、比較
例６のクルクリン含有レモン果汁（ダイマー高純度クル
クリン溶液を使用）を食したときの方よりも、レモン果
汁ゼリーに強い甘さを感じた。また、同様に、実施例８
のクルクリン含有レモン果汁（モノマー粗精製クルクリ
ン溶液を使用）を食したときの方が、比較例７のクルク
リン含有レモン果汁（ダイマー粗精製クルクリン溶液を
使用）を食したときの方よりも、レモン果汁ゼリーに強
い甘さを感じた。

【００６１】実施例９ 参考例１の０．５Ｍ塩化ナトリウム溶液による１回目の
抽出操作により得られた粗クルクリン溶液１０mlに、３
２０μｌの２Ｍ還元型グルタチオン溶液を加える以外は
実施例１と同様に行って、還元剤処理クルクリン溶液を
調製した。

【００６２】この還元剤処理クルクリン溶液中のクルク
リンの分子量を確認するために、該還元剤処理クルクリ
ン溶液３０μｌをミクロ遠心チューブ（１．５ml容量）
にとり、これに２．５％ソディウムドデシルサルファイ
ト、２５％グリセロール及び２５ｐｐｍブロムフェノー
ルブルーを含むトリス塩酸緩衝液（ｐＨ６．８）２０μ
ｌを加えて攪拌後、参考例１と同様の方法により分析し
た。その結果、１３，８００にバンドが確認され、モノ
マー粗クルクリン溶液が得られた。

【００６３】次に、上記により得られたモノマー粗クル
クリン溶液３mlを、実施例１と同様にして味覚修飾活性
の測定を行ったところ、甘味度は０．３４Ｍのショ糖溶
液に相当する甘さであり、またこの甘さは約１時間半持
続した。

【００６４】

【発明の効果】本発明の製造方法によれば、舌への吸着
がよく味覚修飾活性や甘味活性が強く、味覚修飾剤又は
甘味蛋白質として好適に用いられるモノマークルクリン
が得られる。また、本発明の味覚修飾剤は、舌への吸着
が良いため、少量でも味覚修飾活性の強いものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 杉山 宏 東京都荒川区東尾久７丁目２番35号 旭電 化工業株式会社内 (72)発明者 河野 博繁 東京都荒川区東尾久７丁目２番35号 旭電 化工業株式会社内 (72)発明者 栗原 良枝 東京都世田谷区奥沢７−４−７

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ダイマークルクリンをジスルフィド結合
   還元剤で処理することを特徴とする味覚修飾効果の増強
   されたモノマークルクリンの製造方法。
2. 【請求項２】 請求項１記載の製造方法により得られる
   モノマークルクリンを含有する味覚修飾剤。