JPH06213889A - 免疫血清診断法 - Google Patents
免疫血清診断法Info
- Publication number
- JPH06213889A JPH06213889A JP497493A JP497493A JPH06213889A JP H06213889 A JPH06213889 A JP H06213889A JP 497493 A JP497493 A JP 497493A JP 497493 A JP497493 A JP 497493A JP H06213889 A JPH06213889 A JP H06213889A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- antigen
- serum
- agglutination
- reaction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】伝染性単核症疾患に特徴的な異好抗体の一つで
あるＰ−Ｂ抗体を迅速かつ特異的に検出する、免疫血清
診断方法である。 【構成】ＢＲＢＣから分離・精製されたＰ−Ｂ抗原を固
相化したウェル８に検体分注し、洗浄後、抗ヒトＩｇＧ
抗体感作粒子１１を反応させることにより、凝集パター
ンを得る。
あるＰ−Ｂ抗体を迅速かつ特異的に検出する、免疫血清
診断方法である。 【構成】ＢＲＢＣから分離・精製されたＰ−Ｂ抗原を固
相化したウェル８に検体分注し、洗浄後、抗ヒトＩｇＧ
抗体感作粒子１１を反応させることにより、凝集パター
ンを得る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は伝染性単核症（Ｉｎｆｅ
ｃｔｉｏｕｓ Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｓ以下ＩＭと
略す）疾患に特徴的な異好抗体の一つであるＰ−Ｂ（Ｐ
ａｕｌ−Ｂｕｎｅｌｌ）抗体を特異的に検出するシステ
ムである、粒子凝集法（ＰＡ法）と混合受身凝集法（Ｍ
ＰＨＡ法）と各々に必要な試薬に関するものである。
ｃｔｉｏｕｓ Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｓ以下ＩＭと
略す）疾患に特徴的な異好抗体の一つであるＰ−Ｂ（Ｐ
ａｕｌ−Ｂｕｎｅｌｌ）抗体を特異的に検出するシステ
ムである、粒子凝集法（ＰＡ法）と混合受身凝集法（Ｍ
ＰＨＡ法）と各々に必要な試薬に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ＩＭは主に欧米の白人の若年者（１５〜
２５才）に年間（５０／１０5 ）の高頻度で発生するリ
ンパ球増多症であり、発熱、リンパ腺や肝脾の腫張およ
び非定型リンパ球の流血中への一過性出現を主症状とす
る疾患である。この疾患の経過中特に発症二週間以内で
は、急性白血病ににた症状を呈すが、２ヶ月以内に何等
重篤な後遺症を残すことなく治癒するので良性または偽
白血病と呼ばれている。
２５才）に年間（５０／１０5 ）の高頻度で発生するリ
ンパ球増多症であり、発熱、リンパ腺や肝脾の腫張およ
び非定型リンパ球の流血中への一過性出現を主症状とす
る疾患である。この疾患の経過中特に発症二週間以内で
は、急性白血病ににた症状を呈すが、２ヶ月以内に何等
重篤な後遺症を残すことなく治癒するので良性または偽
白血病と呼ばれている。
【０００３】１９３２年偶然にＰａｕｌとＢｕｎｅｌｌ
によってＩＭに特異的なＰ−Ｂ抗体が発見された。この
抗体はＦｏｒｓｓｍａｎ（Ｆ）抗体やＨａｎｇａｕｔｚ
ｉｕ−Ｄｅｉｃｈｅｒ（Ｈ−Ｄ）抗体と同様に異種、例
えば羊、馬あるいは牛等の赤血球を凝集するので一括し
て異好抗体と呼ばれている。Ｐ−Ｂ抗体の検出は伝統的
に羊血球（ＳＲＢＣ）や馬血球（ＨＲＢＣ）を用いた試
験管内の凝集反応が行われてきた。しかし他の異好抗体
であるＦ抗体やＨ−Ｄ抗体から鑑別するために凝集反応
の前にＦ抗体とＨ−Ｄ抗体を除く操作（吸収試験）が必
要であった。
によってＩＭに特異的なＰ−Ｂ抗体が発見された。この
抗体はＦｏｒｓｓｍａｎ（Ｆ）抗体やＨａｎｇａｕｔｚ
ｉｕ−Ｄｅｉｃｈｅｒ（Ｈ−Ｄ）抗体と同様に異種、例
えば羊、馬あるいは牛等の赤血球を凝集するので一括し
て異好抗体と呼ばれている。Ｐ−Ｂ抗体の検出は伝統的
に羊血球（ＳＲＢＣ）や馬血球（ＨＲＢＣ）を用いた試
験管内の凝集反応が行われてきた。しかし他の異好抗体
であるＦ抗体やＨ−Ｄ抗体から鑑別するために凝集反応
の前にＦ抗体とＨ−Ｄ抗体を除く操作（吸収試験）が必
要であった。
【０００４】下の表１はヒト異好抗体（Ｐ−Ｂ、Ｈ−Ｄ
およびＦ抗体）の反応パターン、すなわち陽性（＋）は
対応する抗原の存在を示す。この反応パターンに基づき
Ｐ−Ｂ抗体の同定法が吸収試験と凝集反応の組み合わせ
によってＤａｖｉｄｓｏｎにより確立された。
およびＦ抗体）の反応パターン、すなわち陽性（＋）は
対応する抗原の存在を示す。この反応パターンに基づき
Ｐ−Ｂ抗体の同定法が吸収試験と凝集反応の組み合わせ
によってＤａｖｉｄｓｏｎにより確立された。
【０００５】
【表１】
【０００６】すなわちＳＲＢＣ（またはＨＲＢＣ）を凝
集反応の指示細胞とする場合、予め患者血清を二つに分
け、片方にＢＲＢＣ、他方にモルモット腎組織を加えて
遠沈しそれぞれの上清にＳＲＢＣを加えて凝集反応の有
無をみる。若しモルモット腎組織での吸収後その検体が
ＳＲＢＣを凝集しＢＲＢＣで吸収した血清では凝集しな
かった場合表１のパターンから検体中の異好抗体がＰ−
Ｂ抗体であると同定される。
集反応の指示細胞とする場合、予め患者血清を二つに分
け、片方にＢＲＢＣ、他方にモルモット腎組織を加えて
遠沈しそれぞれの上清にＳＲＢＣを加えて凝集反応の有
無をみる。若しモルモット腎組織での吸収後その検体が
ＳＲＢＣを凝集しＢＲＢＣで吸収した血清では凝集しな
かった場合表１のパターンから検体中の異好抗体がＰ−
Ｂ抗体であると同定される。
【０００７】例えば現在最も多く臨床的に用いられてい
る方法は１９６５年ＨｏｆｆとＢａｎｕｅｒによって考
案された図１のようにスライドガラス板１上での吸収試
験と凝集反応を組み合わせた方法である。患者血清を各
々のウェル２、３に適下し、第二ステップでは吸収剤と
してＢＲＢＣをウェル２に、モルモット腎組織をウェル
３にそれぞれ加え静置し、次のステップで指示細胞ＨＲ
ＢＣをウェル２、３に加えて凝集の有無を判定する。Ｂ
ＲＢＣ吸収で陰性像、モルモット腎組織吸収で陽性像を
示せばＰ−Ｂ抗体を有するＩＭ患者であると初めて診断
できる。若し両者で吸収され陰性（−）、陰性（−）と
なればＨ−Ｄ抗体であり、陽性（＋）、陰性（−）とな
ればＦ抗体である。しかし以上の結果はあくまでそれぞ
れの異好抗体が単独で患者血清中に存在した場合であ
る。二者または三者が様々の濃度で単一の患者血清中に
混在した場合、判定が難しい。
る方法は１９６５年ＨｏｆｆとＢａｎｕｅｒによって考
案された図１のようにスライドガラス板１上での吸収試
験と凝集反応を組み合わせた方法である。患者血清を各
々のウェル２、３に適下し、第二ステップでは吸収剤と
してＢＲＢＣをウェル２に、モルモット腎組織をウェル
３にそれぞれ加え静置し、次のステップで指示細胞ＨＲ
ＢＣをウェル２、３に加えて凝集の有無を判定する。Ｂ
ＲＢＣ吸収で陰性像、モルモット腎組織吸収で陽性像を
示せばＰ−Ｂ抗体を有するＩＭ患者であると初めて診断
できる。若し両者で吸収され陰性（−）、陰性（−）と
なればＨ−Ｄ抗体であり、陽性（＋）、陰性（−）とな
ればＦ抗体である。しかし以上の結果はあくまでそれぞ
れの異好抗体が単独で患者血清中に存在した場合であ
る。二者または三者が様々の濃度で単一の患者血清中に
混在した場合、判定が難しい。
【０００８】発明者らの研究によればＰ−Ｂ抗体は単一
ではなく二つの特異性の違ったＢＲＢＣとＳＲＢＣ（Ｈ
ＲＢＣ）に共通な抗原に反応するもの（ＢＳ抗体）とＢ
ＲＢＣと反応するがＳＲＢＣ（ＨＲＢＣ）とは反応しな
いもの（Ｂ抗体）に分かれる。約５％の患者ではＢ抗体
のみ検出され、ＢＳ抗体が検出されない例がある（Ｃｌ
ｉｎ．Ｉｍｍｕｎ． ＆ Ｉｍｍ．Ｐａｔｈｏｌ． ２
７、２９６−２９９，１９８３）。
ではなく二つの特異性の違ったＢＲＢＣとＳＲＢＣ（Ｈ
ＲＢＣ）に共通な抗原に反応するもの（ＢＳ抗体）とＢ
ＲＢＣと反応するがＳＲＢＣ（ＨＲＢＣ）とは反応しな
いもの（Ｂ抗体）に分かれる。約５％の患者ではＢ抗体
のみ検出され、ＢＳ抗体が検出されない例がある（Ｃｌ
ｉｎ．Ｉｍｍｕｎ． ＆ Ｉｍｍ．Ｐａｔｈｏｌ． ２
７、２９６−２９９，１９８３）。
【０００９】従ってＳＲＢＣ（ＨＲＢＣ）を指示細胞と
したテストではＩＭ患者血清のあるものは偽陰性を示す
可能性がある。
したテストではＩＭ患者血清のあるものは偽陰性を示す
可能性がある。
【００１０】
【発明が解決しようとする問題点】本発明者らは上記従
来の検査法に内在する次の問題点の解決を試みた。
来の検査法に内在する次の問題点の解決を試みた。
【００１１】従来の方法では二種類の抗原物質による吸
収試験とその後で凝集反応を行う二ステップからなる煩
雑な方法で臨床の現場で要求される迅速、確実な方法と
は言い難い。
収試験とその後で凝集反応を行う二ステップからなる煩
雑な方法で臨床の現場で要求される迅速、確実な方法と
は言い難い。
【００１２】判定が陰性（−）、陽性（＋）のパターン
に依存し、判定困難な検体のでる可能性がある。
に依存し、判定困難な検体のでる可能性がある。
【００１３】ＳＲＢＣ（ＨＲＢＣ）を指示細胞とするた
め少数のＢＳ抗体陰性ＩＭ患者（偽陰性）を見逃す可能
性がある。
め少数のＢＳ抗体陰性ＩＭ患者（偽陰性）を見逃す可能
性がある。
【００１４】
【問題を解決する手段及び作用】上記従来の問題点を解
決するために発明者らが先に確立した方法（Ｊ．ｏｆＳ
ｕｐｒａｍｏｌ．Ｓｔｒ．６、２７５−２９０）によっ
てＢＲＢＣから抽出したＰ−Ｂ抗原を標的抗原として使
用する。このＰ−Ｂ抗原は次の血清学的性能を持つ。尚
マウスＴ細胞白血病株；Ｌ５１７８Ｙ，ＥＬ４やＬ＃２
細胞から上の変法（Ｊ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １２
７，５−８，１９８１）によって得られるＰ−Ｂ抗原を
使用してもよい。
決するために発明者らが先に確立した方法（Ｊ．ｏｆＳ
ｕｐｒａｍｏｌ．Ｓｔｒ．６、２７５−２９０）によっ
てＢＲＢＣから抽出したＰ−Ｂ抗原を標的抗原として使
用する。このＰ−Ｂ抗原は次の血清学的性能を持つ。尚
マウスＴ細胞白血病株；Ｌ５１７８Ｙ，ＥＬ４やＬ＃２
細胞から上の変法（Ｊ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １２
７，５−８，１９８１）によって得られるＰ−Ｂ抗原を
使用してもよい。
【００１５】分子量約２６Ｋの糖蛋白質で６２％が蛋白
であり主なアミノ酸はグルタミン酸、プロリン、グリシ
ン、イソロイシン、ロイシンおよびスレオニンであり、
糖含量は９．２％でその主なものはシアル酸、ガラクト
サミンおよびガラクトースである。
であり主なアミノ酸はグルタミン酸、プロリン、グリシ
ン、イソロイシン、ロイシンおよびスレオニンであり、
糖含量は９．２％でその主なものはシアル酸、ガラクト
サミンおよびガラクトースである。
【００１６】このＰ−Ｂ抗原は図２に示したようなディ
スク内のウェル４、５、６、７にそれぞれＰ−Ｂ抗原、
非吸収のＩＭ血清、モルモット腎組織による吸収処理後
のＩＭ血清、ＳＲＢＣによる吸収処理（ＢＳ抗体除去の
ための）後のＩＭ血清を分注したディスク上に、１０〜
１００ｎｇ／ｍｌの濃度で十分なＰ−Ｂ抗体を含むＩＭ
血清を反応させることによって、ゲル内二重拡散法に基
く二本または一本の沈降線１５を形成する。この沈降反
応ではＩＭ血清をモルモット腎組織ホモジネートで予め
吸収して影響を受けることはない。またこの抗原濃度で
Ｈ−Ｄ抗体との反応は認められない。
スク内のウェル４、５、６、７にそれぞれＰ−Ｂ抗原、
非吸収のＩＭ血清、モルモット腎組織による吸収処理後
のＩＭ血清、ＳＲＢＣによる吸収処理（ＢＳ抗体除去の
ための）後のＩＭ血清を分注したディスク上に、１０〜
１００ｎｇ／ｍｌの濃度で十分なＰ−Ｂ抗体を含むＩＭ
血清を反応させることによって、ゲル内二重拡散法に基
く二本または一本の沈降線１５を形成する。この沈降反
応ではＩＭ血清をモルモット腎組織ホモジネートで予め
吸収して影響を受けることはない。またこの抗原濃度で
Ｈ−Ｄ抗体との反応は認められない。
【００１７】このＰ−Ｂ抗原は４単位のＳＲＢＣ凝集Ｐ
−Ｂ抗体を含むＩＭ血清希釈液の抗体活性を同量の１〜
１０ｎｇ／ｍｌの濃度で完全に抑制し、この条件下でＨ
−Ｄ抗体に対する抑制効果は全く認められない。
−Ｂ抗体を含むＩＭ血清希釈液の抗体活性を同量の１〜
１０ｎｇ／ｍｌの濃度で完全に抑制し、この条件下でＨ
−Ｄ抗体に対する抑制効果は全く認められない。
【００１８】以上のＰ−Ｂ抗原の特異性は酵素抗体法に
よる試験でも同様に証明される。すなわちこのＰ−Ｂ抗
原は当然のことながら他の異好抗体であるＦ抗体とは全
く反応することなく、また上記濃度でＨ−Ｄ抗体とも反
応せず、Ｐ−Ｂ抗体のみに反応する特異的抗原物質であ
る。
よる試験でも同様に証明される。すなわちこのＰ−Ｂ抗
原は当然のことながら他の異好抗体であるＦ抗体とは全
く反応することなく、また上記濃度でＨ−Ｄ抗体とも反
応せず、Ｐ−Ｂ抗体のみに反応する特異的抗原物質であ
る。
【００１９】＜粒子凝集検査法（ＰＡ法）＞以上のＰ−
Ｂ抗原を各種担体粒子表面に吸着させた感作粒子はｐＨ
７．２〜７．４リン酸緩衝液にて１〜５％（ｖ／ｖ）浮
遊液（ＰＡ試薬）とする。用いる担体粒子は粒径０．０
５μｍ〜２０μｍの各種材質のものが利用可能で、例え
ば、ポリスチレン等から合成されるラテックス、ゼラチ
ンと水溶性多糖類から形成するゼラチン粒子、アクリル
アミド粒子、シリカ、活性炭、カオリン等、有機、無機
材質からなる人工粒子、さらにヒト赤血球、酵素処理に
よりＨ−Ｄ抗原、Ｆ抗原を減少させた動物赤血球があげ
られるが、中でもラテックス、ゼラチン粒子等の人工粒
子が好ましい。
Ｂ抗原を各種担体粒子表面に吸着させた感作粒子はｐＨ
７．２〜７．４リン酸緩衝液にて１〜５％（ｖ／ｖ）浮
遊液（ＰＡ試薬）とする。用いる担体粒子は粒径０．０
５μｍ〜２０μｍの各種材質のものが利用可能で、例え
ば、ポリスチレン等から合成されるラテックス、ゼラチ
ンと水溶性多糖類から形成するゼラチン粒子、アクリル
アミド粒子、シリカ、活性炭、カオリン等、有機、無機
材質からなる人工粒子、さらにヒト赤血球、酵素処理に
よりＨ−Ｄ抗原、Ｆ抗原を減少させた動物赤血球があげ
られるが、中でもラテックス、ゼラチン粒子等の人工粒
子が好ましい。
【００２０】粒子への抗原感作方法は、物理吸着の他、
タンニン酸、アルデヒド類、カルボジイミド等の化学的
架橋剤の使用が可能である。感作粒子はＩＭ血清とスラ
イド上で混合し、粒子の凝集の程度を見ても良いし、マ
イクロプレート等ＵまたはＶ底の反応容器に添加し、混
合受身凝集反応のように凝集・非凝集パターンから判定
しても良い。
タンニン酸、アルデヒド類、カルボジイミド等の化学的
架橋剤の使用が可能である。感作粒子はＩＭ血清とスラ
イド上で混合し、粒子の凝集の程度を見ても良いし、マ
イクロプレート等ＵまたはＶ底の反応容器に添加し、混
合受身凝集反応のように凝集・非凝集パターンから判定
しても良い。
【００２１】上記ＰＡ試薬とＩＭ血清をガラススライド
上で混合すると、５〜３０分で凝集反応が肉眼で観察さ
れ、ＦまたはＨ−Ｄ抗体を含むヒト血清及び正常ヒト血
清と反応することはない。このＰＡ試薬による凝集反応
では診療所や病院等の臨床現場における少数検体の検査
に適した方法であり、従来法の煩雑な吸収操作の知識を
持たない検査技師等でも容易にまちがいなく判定するこ
とが出来る。ＩＭ血清のＰＡスライド法による抗体価は
１６０〜５１２０であり正常対照及びＩＭ以外の各種患
者血清のそれは１０以下である。
上で混合すると、５〜３０分で凝集反応が肉眼で観察さ
れ、ＦまたはＨ−Ｄ抗体を含むヒト血清及び正常ヒト血
清と反応することはない。このＰＡ試薬による凝集反応
では診療所や病院等の臨床現場における少数検体の検査
に適した方法であり、従来法の煩雑な吸収操作の知識を
持たない検査技師等でも容易にまちがいなく判定するこ
とが出来る。ＩＭ血清のＰＡスライド法による抗体価は
１６０〜５１２０であり正常対照及びＩＭ以外の各種患
者血清のそれは１０以下である。
【００２２】＜混合受身凝集検査法＞ＩＭは大学寄宿舎
等で流行のピークには数百人以上の患者が発生する。し
たがって多数検体の処理能力を持つ検査システムが必要
となる。発明者らはこのニーズに対応すべく、先に血小
板や赤血球同種抗体の多数検体のスクリーニングの目的
で開発した混合受身凝集反応法（Ｍｉｘｅｄ Ｐａｓｓ
ｉｖｅ Ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ、ＭＰＨＡ法）の
原理をＰ−Ｂ抗体の検出に応用することに成功した。図
３に示すように、ポリスチレン、ポリ塩化ビニール、ポ
リメチルメタアクリレートなどのプラスチックの各ウェ
ル８に前出のＰ−Ｂ抗原９を含む緩衝溶液（１００ｎｇ
〜１μｇ/ ｍｌ）の２００μｌを加え４℃で１６時間吸
着させた後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩
衝液（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０）ｐＨ７．２で３回洗浄
したものを抗原プレートとする。抗原プレートの各ウェ
ルにＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０溶液で段階希釈したＩＭ血
清を２００μｌづつ加え室温で２時間静置後ＰＢＳ−Ｔ
ｗｅｅｎ２０で３回洗浄する。Ｐ−Ｂ抗体１０の結合の
有無は抗ヒトＩｇＧ感作磁性粒子１１のウェル底面に現
れた陽性パターン像１２と陰性パターン像１３により判
定する。
等で流行のピークには数百人以上の患者が発生する。し
たがって多数検体の処理能力を持つ検査システムが必要
となる。発明者らはこのニーズに対応すべく、先に血小
板や赤血球同種抗体の多数検体のスクリーニングの目的
で開発した混合受身凝集反応法（Ｍｉｘｅｄ Ｐａｓｓ
ｉｖｅ Ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ、ＭＰＨＡ法）の
原理をＰ−Ｂ抗体の検出に応用することに成功した。図
３に示すように、ポリスチレン、ポリ塩化ビニール、ポ
リメチルメタアクリレートなどのプラスチックの各ウェ
ル８に前出のＰ−Ｂ抗原９を含む緩衝溶液（１００ｎｇ
〜１μｇ/ ｍｌ）の２００μｌを加え４℃で１６時間吸
着させた後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩
衝液（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０）ｐＨ７．２で３回洗浄
したものを抗原プレートとする。抗原プレートの各ウェ
ルにＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０溶液で段階希釈したＩＭ血
清を２００μｌづつ加え室温で２時間静置後ＰＢＳ−Ｔ
ｗｅｅｎ２０で３回洗浄する。Ｐ−Ｂ抗体１０の結合の
有無は抗ヒトＩｇＧ感作磁性粒子１１のウェル底面に現
れた陽性パターン像１２と陰性パターン像１３により判
定する。
【００２３】抗体感作磁性粒子は、ラテックス粒子、ゼ
ラチン粒子等の中に磁性粒子を封入したものが利用でき
るが、特にゼラチン粒子が好ましい。抗ヒトＩｇＧ及び
抗ヒトＩｇＭは混合感作してもよいし、別々に感作し、
ヒトＩｇＧ、ヒトＩｇＭ各々に特性をもたせてもよい。
このことにより、特異抗体のスクリーニング、抗体のク
ラス分けが可能になる。また感作粒子への抗ヒトＩｇＧ
またはＩｇＭでなくＰ−Ｂ抗原を感作し、特にＩｇＭ性
の抗体を優先的に検出するようにし、ＩＭ血清との反応
後の洗浄を不要としても良い。
ラチン粒子等の中に磁性粒子を封入したものが利用でき
るが、特にゼラチン粒子が好ましい。抗ヒトＩｇＧ及び
抗ヒトＩｇＭは混合感作してもよいし、別々に感作し、
ヒトＩｇＧ、ヒトＩｇＭ各々に特性をもたせてもよい。
このことにより、特異抗体のスクリーニング、抗体のク
ラス分けが可能になる。また感作粒子への抗ヒトＩｇＧ
またはＩｇＭでなくＰ−Ｂ抗原を感作し、特にＩｇＭ性
の抗体を優先的に検出するようにし、ＩＭ血清との反応
後の洗浄を不要としても良い。
【００２４】図４にみるように、陽性反応に於いては指
示細胞はウェル底面全体に広がるパターンを示し、陰性
の場合は指示細胞は中心に点上に集まるパターンを示
す。このＭＰＨＡ法のＩＭ血清のＰ−Ｂ抗体価は３２０
〜２０７２０、正常対照のそれは１０以下の値である。
ＩＭ以外の患者血清（Ｆ，Ｈ−Ｄ抗体を含む）の抗体価
は１０以下であり稀に２０のものもあった。
示細胞はウェル底面全体に広がるパターンを示し、陰性
の場合は指示細胞は中心に点上に集まるパターンを示
す。このＭＰＨＡ法のＩＭ血清のＰ−Ｂ抗体価は３２０
〜２０７２０、正常対照のそれは１０以下の値である。
ＩＭ以外の患者血清（Ｆ，Ｈ−Ｄ抗体を含む）の抗体価
は１０以下であり稀に２０のものもあった。
【００２５】本発明に於いてＦ陰性種由来のＢＲＣおよ
びマウスＴ細胞白血病株から分離・精製した抗原物質を
標的とした検査システムの構築は殆ど全てのヒト血清中
に含まれるＦ抗体の関与を予め反応系から除外すること
が出来た。次に精製のプロセスでＨ−Ｄ抗原の混在を検
出感度（１〜１０ｎｇ/ ｍｌ）以下に抑えＨ−Ｄ抗体に
よる疑陽性の可能性を排除し検査システムの陽性が即Ｐ
−Ｂ抗体の同定の結果となる。このことはＩＭ血清の５
０％以上が高力価のＨ−Ｄ抗体を含み、さらにＩＭ類似
の症状を呈する急性白血病、各種肝疾患等に於いてＨ−
Ｄ抗体が検出されることから考えて、ＩＭの免疫血清診
断に極めて重要である。
びマウスＴ細胞白血病株から分離・精製した抗原物質を
標的とした検査システムの構築は殆ど全てのヒト血清中
に含まれるＦ抗体の関与を予め反応系から除外すること
が出来た。次に精製のプロセスでＨ−Ｄ抗原の混在を検
出感度（１〜１０ｎｇ/ ｍｌ）以下に抑えＨ−Ｄ抗体に
よる疑陽性の可能性を排除し検査システムの陽性が即Ｐ
−Ｂ抗体の同定の結果となる。このことはＩＭ血清の５
０％以上が高力価のＨ−Ｄ抗体を含み、さらにＩＭ類似
の症状を呈する急性白血病、各種肝疾患等に於いてＨ−
Ｄ抗体が検出されることから考えて、ＩＭの免疫血清診
断に極めて重要である。
【００２６】次に本発明の検査システムでは、従来法で
必須なステップであった吸収操作を除くことによりＩＭ
の免疫検査を簡便化した。さらに吸収後のＩＭ血清の異
種血球の凝集反応では、その結果の解釈に異好抗体に関
する十分な知識を必要とし、操作の複雑さと相まってと
きにエラーの原因となった。本発明の検査システムでは
上記のように陽性反応が即Ｐ−Ｂ抗体の存在証明となる
ため非専門家でも簡単にＩＭの免疫血清診断を行えるこ
とのメリットは大である。
必須なステップであった吸収操作を除くことによりＩＭ
の免疫検査を簡便化した。さらに吸収後のＩＭ血清の異
種血球の凝集反応では、その結果の解釈に異好抗体に関
する十分な知識を必要とし、操作の複雑さと相まってと
きにエラーの原因となった。本発明の検査システムでは
上記のように陽性反応が即Ｐ−Ｂ抗体の存在証明となる
ため非専門家でも簡単にＩＭの免疫血清診断を行えるこ
とのメリットは大である。
【００２７】本発明のＰＡ法、ＭＰＨＡ法の両者共に、
従来法の検査に要する時間を大幅に短縮することが出来
た。両者共に吸収操作に要する時間が短縮され、ＰＡ法
では５〜３０分多くは５分で反応が終わる。多数検体用
のＭＰＨＡ法では磁性粒子の利用により９６検体の検査
に要する時間はわずか３０分である。
従来法の検査に要する時間を大幅に短縮することが出来
た。両者共に吸収操作に要する時間が短縮され、ＰＡ法
では５〜３０分多くは５分で反応が終わる。多数検体用
のＭＰＨＡ法では磁性粒子の利用により９６検体の検査
に要する時間はわずか３０分である。
【００２８】
【実施例１】 ＜ＰＡ法によるＰ−Ｂ抗体の同定＞ＢＲＢＣ基質から分
離・精製したＰ−Ｂ抗原感作ＰＡ試薬を用いて、ＩＭ患
者血清その他の患者血清及び正常若年者（１５〜２５
才）血清を検査した。ＩＭ血清は発病後１〜４週間の期
間に採血したものである。これらの血清は１０倍と１０
０倍希釈について検討した。表２の結果にみるように１
４７例のＩＭ血清中１４５例が陽性で陽性率は９８．４
％であった。これはＢ抗体のみのＩＭ血清をミスする従
来法の９６％より高率であった。尚陰性の二検体はいづ
れも発病後１週間目に採血したもので、同じ患者の２週
間後の検体は両者共に陽性であった。尚、表２中で＊印
は発病後１週間に採血した検体をあらわし、＊＊印は白
血病、リンパ腫、固形癌、肝炎、レプラ、リウマチ患者
血清を含む検体をあらわす。
離・精製したＰ−Ｂ抗原感作ＰＡ試薬を用いて、ＩＭ患
者血清その他の患者血清及び正常若年者（１５〜２５
才）血清を検査した。ＩＭ血清は発病後１〜４週間の期
間に採血したものである。これらの血清は１０倍と１０
０倍希釈について検討した。表２の結果にみるように１
４７例のＩＭ血清中１４５例が陽性で陽性率は９８．４
％であった。これはＢ抗体のみのＩＭ血清をミスする従
来法の９６％より高率であった。尚陰性の二検体はいづ
れも発病後１週間目に採血したもので、同じ患者の２週
間後の検体は両者共に陽性であった。尚、表２中で＊印
は発病後１週間に採血した検体をあらわし、＊＊印は白
血病、リンパ腫、固形癌、肝炎、レプラ、リウマチ患者
血清を含む検体をあらわす。
【００２９】
【表２】
【００３０】
【実施例２】 ＜ＰＡ法によるＢＳ抗体とＢ抗体の検出＞図２に示すよ
うにＰ−Ｂ抗体は通常ＢＲＢＣとＳＲＢＣに共通な抗原
に対するＢＳ抗体とＢＲＢＣのみに存在する抗原に対す
るＢ抗体の二種類がＩＭ血清中に混在している。発明者
らは同時にＩＭを発症した姉Ａと妹Ｂの二人の患者の経
時的に採取した血清のＢＳ抗体とＢ抗体の力価を調べ
た。図４にみるように妹Ｂは発病後ＢＳ抗体（点線黒
丸）とＢ抗体（点線白丸）のＰ−Ｂ抗体を産生したが、
姉ＡはＢ抗体（実線白丸）のみを産生し、一方、全観察
期間を通してＢＳ抗体（実線黒丸）は検出されなかっ
た。
うにＰ−Ｂ抗体は通常ＢＲＢＣとＳＲＢＣに共通な抗原
に対するＢＳ抗体とＢＲＢＣのみに存在する抗原に対す
るＢ抗体の二種類がＩＭ血清中に混在している。発明者
らは同時にＩＭを発症した姉Ａと妹Ｂの二人の患者の経
時的に採取した血清のＢＳ抗体とＢ抗体の力価を調べ
た。図４にみるように妹Ｂは発病後ＢＳ抗体（点線黒
丸）とＢ抗体（点線白丸）のＰ−Ｂ抗体を産生したが、
姉ＡはＢ抗体（実線白丸）のみを産生し、一方、全観察
期間を通してＢＳ抗体（実線黒丸）は検出されなかっ
た。
【００３１】同様にして、ランダムなＩＭ患者血清１０
０例について同様の検索を行った結果、５例が図４の姉
ＡのようにＢＳ抗体を欠きＢ抗体のみが検出された。し
かしながら、従来のＤａｖｉｄｓｏｎの方法ではＳＲＢ
Ｃ凝集反応に依存する少数（５〜６％）の偽陰性例を生
じた。従って本発明によればこのような少数の偽陰性例
をも見逃すことのないことが明らかになった。
０例について同様の検索を行った結果、５例が図４の姉
ＡのようにＢＳ抗体を欠きＢ抗体のみが検出された。し
かしながら、従来のＤａｖｉｄｓｏｎの方法ではＳＲＢ
Ｃ凝集反応に依存する少数（５〜６％）の偽陰性例を生
じた。従って本発明によればこのような少数の偽陰性例
をも見逃すことのないことが明らかになった。
【００３２】
【実施例３】 ＜ＭＰＨＡ法によるＰ−Ｂ抗体の検査＞ランダムに採血
した４７例のＩＭ患者血清と正常人血清８０例につい
て、ＭＰＨＡ法によるＰ−Ｂ抗体価の測定を行った。Ｉ
Ｍ血清は４４例が８０倍以上の抗体価をしめし、平均１
２８０倍であった。これに反して正常血清は全例１０倍
以下であり、この結果から本発明の方法が多数検体のＰ
−Ｂ抗体の同定に十分役立つことが明らかになった。
尚、残り３例については経時的に採血した検体が入手で
きず、未判定である。ただし、ＳＲＢＣを指示細胞とし
た従来法では上記４４例のＩＭ患者血清に１例の陰性例
が見いだされた。この１例はＢ抗体のみでＢＳ抗体を欠
く例であることがわかった。
した４７例のＩＭ患者血清と正常人血清８０例につい
て、ＭＰＨＡ法によるＰ−Ｂ抗体価の測定を行った。Ｉ
Ｍ血清は４４例が８０倍以上の抗体価をしめし、平均１
２８０倍であった。これに反して正常血清は全例１０倍
以下であり、この結果から本発明の方法が多数検体のＰ
−Ｂ抗体の同定に十分役立つことが明らかになった。
尚、残り３例については経時的に採血した検体が入手で
きず、未判定である。ただし、ＳＲＢＣを指示細胞とし
た従来法では上記４４例のＩＭ患者血清に１例の陰性例
が見いだされた。この１例はＢ抗体のみでＢＳ抗体を欠
く例であることがわかった。
【００３３】
【発明の効果】本発明によれば、Ｈ−Ｄ抗体及びＦ抗体
の吸収操作を不要としたＰ−Ｂ抗体の特異的検出を可能
とし、さらに、ＢＲＢＣから抽出したＰ−Ｂ抗原と人工
粒子を用いた粒子凝集反応、混合受身凝集反応とするこ
とで、ＢＳ抗体陰性ＩＭ患者も確実に検出可能となる。
の吸収操作を不要としたＰ−Ｂ抗体の特異的検出を可能
とし、さらに、ＢＲＢＣから抽出したＰ−Ｂ抗原と人工
粒子を用いた粒子凝集反応、混合受身凝集反応とするこ
とで、ＢＳ抗体陰性ＩＭ患者も確実に検出可能となる。
【００３４】また、凝集結果の陰性（−）、陽性（＋）
の組み合わせからの判定ではなく、凝集の有無から直接
判定でき人為的なミスを軽減できる。
の組み合わせからの判定ではなく、凝集の有無から直接
判定でき人為的なミスを軽減できる。
【００３５】さらに、粒子凝集反応及び混合受身凝集反
応にて検査することによって、特殊かつ高価な装置を必
要とせず、迅速かつ多数検体検査が可能となる。
応にて検査することによって、特殊かつ高価な装置を必
要とせず、迅速かつ多数検体検査が可能となる。
【図１】図１は、Ｏｒｔｈｏｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社
モノスポットテストの例を示す図、
モノスポットテストの例を示す図、
【図２】図２は、ゲル内二重拡散法によるＰ−Ｂ抗体を
検出する例を示す図、
検出する例を示す図、
【図３】図３は、Ｐ−Ｂ抗原を固相化したマイクロプレ
ートを用いた混合受身凝集法を説明する図、
ートを用いた混合受身凝集法を説明する図、
【図４】図４は、姉Ａ、妹Ｂの二人のＩＭ患者の経時的
ＢＳ及びＢ抗体の推移を示す図、
ＢＳ及びＢ抗体の推移を示す図、
１ スライドガラス ２、３ ウェル ４、５、６、７ ウェル １５ 沈降線 ８ ウェル ９ Ｐ−Ｂ抗原 １０ Ｐ−Ｂ抗体 １１ 感作粒子 １２ 陽性パターン像 １３ 陰性パターン像
Claims (3)
- 【請求項１】牛赤血球（ＢＲＢＣ）基質およびマウスＴ
細胞白血病細胞株から分離・精製されたＰ−Ｂ抗原を抗
原として用い、Ｈ−Ｄ抗体及びＦ抗体の吸収操作を必要
としないでＰ−Ｂ抗体を特異的に検出することを特徴と
する検査方法。 - 【請求項２】上記Ｐ−Ｂ抗体の特異的検出を凝集反応結
果の陽性（＋）、陰性（−）の組み合わせからの判定で
はなく、凝集の有無によって直接的に判定できることを
特徴とする検査方法。 - 【請求項３】上記凝集反応を粒子凝集反応法および混合
受身凝集反応法にて行うことを特徴とする検査方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP497493A JPH06213889A (ja) | 1993-01-14 | 1993-01-14 | 免疫血清診断法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP497493A JPH06213889A (ja) | 1993-01-14 | 1993-01-14 | 免疫血清診断法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06213889A true JPH06213889A (ja) | 1994-08-05 |
Family
ID=11598575
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP497493A Pending JPH06213889A (ja) | 1993-01-14 | 1993-01-14 | 免疫血清診断法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06213889A (ja) |
-
1993
- 1993-01-14 JP JP497493A patent/JPH06213889A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5187065A (en) | Method and materials for detecting lyme disease | |
| SE443660B (sv) | Forfarande och reagens for immunanalys med rf eller clq adsorberat till fast berare | |
| JP2636331B2 (ja) | 抗原特異的な抗体の一段階測定法およびそれに適する試薬 | |
| JPH03504412A (ja) | カンピロバクター・ピロリの高分子型細胞関連蛋白の調製法とカンピロバクター・ピロリ感染の血清学的検出のための用法 | |
| DK174032B1 (da) | Sæt samt fremgangsmåde til immunometrisk dosering, der kan anvendes på hele celler | |
| CN108680756A (zh) | 一种不完全抗体检测试剂盒及检测方法 | |
| JPS6270764A (ja) | 血清中の免疫抗体測定方法 | |
| CN113156143B (zh) | 血型不规则抗体特异性鉴定方法及其试剂 | |
| JP4268358B2 (ja) | 抗体および免疫学的測定方法 | |
| JP2824794B2 (ja) | 固相法により赤血球抗体を探索し、同定する方法 | |
| JPS6327658B2 (ja) | ||
| CN101680894B (zh) | 检测待测物的试剂及其方法 | |
| EP0217845B1 (fr) | Procede de determination immunologique d'une substance biologique dans un echantillon | |
| CN1098460C (zh) | 抗体生产的检测 | |
| JPS5871457A (ja) | 梅毒検査用試薬の製造法 | |
| Ravi et al. | A reverse passive haemagglutination test for detection of Japanese encephalitis virus antigens in cerebrospinal fluid | |
| Coombs | Assays utilizing red cells as markers | |
| JPS60177265A (ja) | 抗体の免疫グロブリンのクラス別検出法 | |
| RU2376604C2 (ru) | Способ выявления антигена или антитела в иммуноферментном анализе | |
| Braun et al. | Comparison of different methods for the detection of rubella‐specific IGM antibodies | |
| EP4288778A1 (en) | Methods and materials for improved immunoassays using synthetic antigens | |
| JP2010078374A (ja) | 抗赤血球抗体の検出方法 | |
| CN112379100A (zh) | 血小板抗人球蛋白实验免疫区带分布检测方法 | |
| JP2684425B2 (ja) | ラテックス試薬 | |
| Sato et al. | Treponema pallidum specific IgM haemagglutination test for serodiagnosis of syphilis. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20020416 |